WWW.KONF.X-PDF.RU
БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА - Авторефераты, диссертации, конференции
 


Pages:     | 1 |   ...   | 3 | 4 || 6 | 7 |   ...   | 9 |

«РАЗРАБОТКА НОВЫХ СРЕДСТВ СПЕЦИФИЧЕСКОЙ ПРОФИЛАКТИКИ И ЛЕЧЕНИЯ ЭШЕРИХИОЗОВ ТЕЛЯТ И ПОРОСЯТ ...»

-- [ Страница 5 ] --

Больные поросята (10 голов) 7-й группы препарат не получали и они служили контролем.Наблюдение за животными вели в течение 30 дней, учитывая заболеваемость, длительность болезни, количество павших и выживших, а также среднесуточный прирост живой массы поросят за 1-й месяц.

Результаты исследований показали, что после однократного введения препарата «Пабисорб» заметное улучшение общего состояния поросят 1-й и 2-й групп, пораженных энтеритной и септической формой эшерихиоза, наблюдалось на 3 сут после лечения: животные проявляли интерес к еде, стали подвижными, активно сосать, при дефекации каловые массы имели кашицеобразную консистенцию, клинико-гематологические показатели восстановились на 10 сут лечения.

У поросят-отъемышей 4-й, 5-й и 6-й групп, пораженных энтеротоксемической формой болезни, заметное улучшение общего состояния наблюдалось на 7, 10 и 15 сут лечения соответственно. При этом отмечали, что наиболее быстрое улучшение общего состояния у поросят-отъемышей, больных отечной формой эшерихиозной диареи, наблюдалось в 6-й группе, получавших в течение 20 дней препарат «Вита-Форце М» по 20 г в день в составе рациона и однократно подкожно препарат «Пабисорб» в дозе 40 мг/кг (1 см 3).

Изолированное парентеральное (подкожное) применение препарата «Пабисорб» и пероральное применение аписогенного препарата «ВитаФорце М» также обеспечивали достаточно высокий лечебный эффект – заметное улучшение общего состояния больных наступало на 7 и 10 сут лечения препаратами.

После однократного введения регламентированного при колибактериозе препарата – поливалентной противоэшерихиозной сыворотки заметного улучшения в общем состоянии поросят не наблюдали.

На 3 сут после начала лечения пали 4 поросенка из 20. После второй инъекции препарата признаки диареи незначительно ослабевали, дефекации стали реже, каловые массы жидкой консистенции. Однако падеж поросят продолжался. На 4 сут пал 1, на 5 сут – 2 и на 6 сут пал 1 поросенок.

Заметное улучшение общего состояния животных наблюдалось на 7 сут лечения после третьего введения препарата. К этому сроку из 3-й группы пал еще 1 поросенок. На 8 сут после начала лечения у выживших животных признаки диареи ослабевали, акты дефекации становились менее регулярными, проявлялся аппетит, животные становились подвижными, при дефекации фекалии имели кашицеобразную консистенцию. На 14 сут происходило восстановление клинических показателей поросят.

Установлено, что однократное подкожное введение полиглобулиноаписогенного препарата «Пабисорб» при всех трех формах течения эшерихиозной диареи (энтеритная, септическая и энтеротоксемическая – отечная) оказывало высокий лечебный эффект, обеспечивая выживаемость 80-85% животных в очаге болезни. Следует отметить, что высоким лечебным эффектом при эшерихиозной диарее поросят с энтеротоксемической (отечной) формой болезни обладал препарат – «Вита-Форце М», который при ежедневной даче поросятам-отъемышам из расчета 20 г в день в течение 20 дней обеспечивал выживаемость 18 поросят из 20, что составляет 90% больных животных. Сочетанное перорально-парентеральное применение полиглобулинового препарата «Пабисорб» в дозе 40 мг/кг (1 см 3) и аписогенного препарата «Вита-Форце М» из расчета 20 г в день на одну голову в течение 20 дней, обеспечивало максимальную (95%-ную) защиту больных эшерихиозом животных от гибели.

В настоящее время научный интерес представляет изучение бактерийпробионтов, являющихся представителями кишечной микроэкологии. Это фундаментальное научное направление обосновывает практическую необходимость принудительного заселения кишечника конкурентноспособными штаммами бактерий-пробионтов, которые осуществляют неспецифический контроль над численностью условно-патогенной микрофлоры. Вследствие этого изучаются механизмы влияния пробиотиков на диарейный синдром и иммунодефициты с учетом особенностей иммунного ответа новорожденных животных и реализации иммунного ответа на слизистых, механизмы участия нормофлоры и становления клеточного и гуморального иммунитета и др.

Учитывая, что композиционные формы препаратов с продуктами пчеловодства способствуют повышению активности и увеличению в кишечнике содержания бифидо- и лактофлоры (при ингибировании размножения условно-патогенных микроорганизмов) и наличие в разработанном нами композиционном препарате как апипродуктов, так и продуктов метаболизма бифидобактерий (бифидогенных факторов), были проведены опыты по изучению влияния препарата «Пабисорб» на микробиоценоз кишечника больных эшерихиозом поросят-отъемышей.

Качественное исследование микрофлоры кишечника контрольных, больных эшерихиозом и леченных препаратом «Пабисорб» и биологически активной кормовой добавкой «Вита-Форце М» поросят проводили по методике, разработанной НИИ им. Г.Н. Габричевского. Отбор проб фекалий из прямой кишки проводили в стерильную посуду с 9-10 мл изотонического раствора хлорида натрия с глицерином, тщательно перемешивали и оставляли на 10-15 мин при комнатной температуре. Посев 1-2 капель суспензии фекалий проводили на ряд элективных и дифференциальных сред.

Было показано, что поражение организма возбудителем эшерихиоза сопровождалось не только усиленным размножением E.coli, но и условно патогенной микрофлоры (стафилококков, клостридий и микробов рода резко изменяя, таким образом, кишечный микробиоценоз Candida), кишечника. При этом отмечено, что на фоне усиленного размножения микробов патогенной и условно-патогенной микрофлоры происходило резкое торможение конкурентноспособной и полезной для оптимального баланса кишечного биоценоза бифидобактерий и лактобацилл. Установлено, что на фоне развития эшерихиозной диареи поросят, количество микробов E.coli в кишечнике увеличилось в 1,55 раза (Р0,01), стафилококков – в 1,36 (Р0,05), клостридий – в 1,32 (Р0,05) и микрогрибов рода Candida – в 1,24 раза (Р0,05), при одновременном угнетении размножения бифидобактерий в 9,44 (Р0,001) и лактобацилл – в 13,2 раза (Р0,001). Применение на этом фоне композиционного полиглобулино-апипрепарата «Пабисорб» оказывало стабилизирующее действие на кишечный микробиоценоз, повышая содержание бифидобактерий и лактобацилл почти до контрольного уровня (7,9 lg КОЕ/г бифидобактерий при 8,5 lg КОЕ/г в контроле и 5,87 lg КОЕ/г лактобацилл при 6,60 lg КОЕ/г в контроле). При этом наступило торможение роста патогенной и условно-патогенной микрофлоры, снижая содержание микробов E.coli в 2,13 раза (Р0,01), стафилококков – в 1,61 (Р0,05), клостридий – в 1,46 (Р0,05) и микрогрибов рода Candida – в 1,21 раза (Р0,05) соответственно.

Таким образом, изученный композиционный препарат на основе полиглобулинов и апипродуктов способствует коррекции дисбаланса естественного микробиоценоза кишечника при эшерихиозе поросят, оказывая, тем самым, иммунокорригирующий эффект и повышая иммунологическую реактивность организма при иммунодефицитном состоянии и дисбактериозе кишечника. Наши данные согласуются с результатами исследований других авторов по этой проблеме [98, 147, 235].

Кроме того применение композиционного полиглобулиноаписогенного препарата с лечебной целью препятствовало снижению показателей неспецифической резистентности организма больных эшерихиозом поросят – значения исследованных показателей у больных и леченных испытуемым препаратом животных во все сроки исследования недостоверно отличались от таковых контрольных (здоровых) животных, уступая последним не более чем в 1,01-1,08 раза (Р0,05).

Таким образом, однократное подкожное введение больным эшерихиозной диареей новорожденным и поросятам-отъемышам композиционного полиглобулино-аписогенного препарата «Пабисорб» с лечебной целью из расчета 40,0 мг/кг живой массы оказывало модифицирующее действие на течение и исход эшерихиозного инфекционного процесса, обеспечивая выживаемость 85-90% заболевших животных. Механизм формирования антиинфекционного (антиэшерихиозного) эффекта изучаемого препарата реализовался путем торможения усиленного размножения возбудителя инфекции в организме, снижения бактериальной обсемененности органов и тканей, а также блокирования прохождения E. coli из кишечника во внутренние органы (антибактериальный эффект) и путем стимуляции факторов неспецифической (бактерицидной, лизоцимной активности сыворотки, функциональной активности макрофагов и микрофагов) резистентности организма. Все перечисленные эффекты, индуцированные композиционным полиглобулино-аписогенным препаратом, действуя синергически, в совокупности формировали устойчивость организма к патогенному агенту, повышая выживаемость больных эшерихиозом животных.

3.5.2.2 Испытание лечебной эффективности препарата «Пабисорб» в условиях хозяйств, неблагополучных по колибактериозу телят Производственное испытание экспериментальных серий полиглобулино-аписогенного препарата «Пабисорб» проводили в 3 животноводческих хозяйствах Нижегородской области (СПК им. 1 Мая, ООО «Трехозерское» и СПК «Пошатовский»), неблагополучных по эшерихиозной диарее телят.

Результаты анализа эпизоотической обстановки в обследуемых хозяйствах показали, что хозяйства стационарно неблагополучны по колибактериозной диарее телят. Эшерихиозом были поражены преимущественно новорожденные телята 1-5 дней, часто с повторами на 6е сутки. Инкубационный период при этом продолжался от нескольких часов до 1-2 дней.

В обследованных неблагополучных по эшерихиозу хозяйствах заболевали практически все родившиеся телята, тяжесть течения болезни зависела от сезона года – в весеннее и летнее время болезнь протекала более злокачественно.

Большинство телят в хозяйствах, в основном, болели энтеротоксической формой эшерихиоза, которая характеризовалась потерей аппетита, профузным поносом, учащенной дефекацией, прогрессирующей слабостью, депрессией и интоксикацией организма. При длительно, тяжелом течении болезни наблюдали сильное обезвоживание организма, западение глазных яблок, серозно-гнойное истечение из носовых отверстий, иногда воспаления суставов.

Развитие болезни сопровождалось отказом от корма, снижением подвижности, повышением температуры тела в начальной стадии заболевания на 1-2оС. С появлением поноса и по мере его нарастания, 36оС, температура тела понижалась до испражнения становились водянистыми с примесью пузырьков газа и не переваренных хлопьев казеина молока, зловонного запаха, цвет их менялся от желтого и серо-белого к зеленому, вокруг ануса появлялось раздражение. Пульс частый, нитевидный, наблюдалась тахикардия, животные больше лежали. У заболевших телят быстро развивалась дегидратация организма, глазные яблоки западали в орбиты, наступала общая депрессия с последующей гибелью через 3-4 дня после развития указанны клинических признаков.

Результаты клинико-гематологических исследований показали, что у больных энтеротоксической формой эшерихиоза устанавливали пониженное содержание молозивных иммуноглобулинов в крови, брадикардию и аритмию. В сыворотке крови больных телят регистрировали увеличение содержания гемоглобина в 1,36-1,39 раза по сравнению со здоровыми. Так, если содержание гемоглобина по Сали у здоровых не превышало 43-55%, то у больных энтеротоксической формой эшерихиоза телят этот показатель достигал 60-75%.

Анализ морфологического состава периферической крови больных эшерихиозом телят показал, что интоксикация организма энтеротоксинами сопровождалась гематоксическим эффектом, проявляющимся в лейкоцитозе (12,5103/мкл против 8,9103/мл у здоровых). При этом отмечено, что лейкоцитоз сопровождался сдвигом ядра нейтрофилов влево (нейтрофиния) с одновременным увеличением содержания юных и палочкоядерных нейтрофилов.

С учетом указанной формы болезни и с целью испытания лечебной эффективности препарата «Пабисорб» и способов (схем) его применения было сформировано 9 групп телят в возрасте 1-10 дней в количестве 101 головы в указанных выше хозяйствах. Группы формировали по принципу аналогов: 5 групп опытных и 4 – контрольные (контроль препарата I, контроль препарата II, больные эшерихиозом - контроль III и здоровые контроль IV), по 12 голов в 1-8 группах и 5 – в группе биологического контроля.

Животных 1-й группы подвергали лечению путем однократного подкожного введения препарата «Пабисорб» в дозе 40 мг/кг (5 см3).

Телятам 2-й группы выпаивали по 15 см3 смеси препарата «Пабисорб»

+ молозиво (1:1) в течение 10 дней.

Телятам 3-й группы выпаивали по 15 см3 смеси молозиво + экстракт препарата «Вита-Форце М» (1:1) в течение 10 дней.

Телятам 4-й группы однократно подкожно вводили препарат «Пабисорб» в дозе 20 мг/кг (2,5 см3) и в течение 10 дней выпаивали смесь «Пабисорб» + молозиво (1:1) по 15 см3.

Телятам 5-й группы однократно подкожно вводили препарат «Пабисорб» в дозе 20 мг/кг (2,5 см3) и в течение 10 дней выпаивали смесь молозиво + экстракт препарата «Вита-Форце М» (1:1) по 15 см3.

Телятам 6-й группы двукратно (через 1-3 дня) внутримышечно вводили «Сыворотку антиадгезивную и антитоксическую против эшерихиоза сельскохозяйственных животных» в дозе 10-15 см3 и они служили контролем регламентированного препарата (контроль I).

Телятам 7-й группы выпаивали смесь молозиво + «Сыворотка антиадгезивная…» (1:1) в дозе 10-15 см3 в течение 10 дней (контроль II).

Больным телятам 8-й группы лечебные препараты не вводили и они служили контролем заражения (контроль III).

–  –  –

контроль) (контроль IV) п/к – подкожное, в/м – внутримышечное введение.

Из приведенных в таблице материалов видно, что однократное подкожное введение полиглобулин-аписоген-бифидогенного препарата «Пабисорб» в дозе 40 мг/кг (5 см3) больным энтеротоксической формой эшерихиозной диареи телят вызывало достаточно высокий лечебный эффект, обеспечивая выживаемость 66,6% больных животных. Выпаивание смеси молозиво + «Пабисорб» (1:1) в течение 10 дней по 15 см3 оказывало более высокий лечебный эффект, обеспечивая выживаемость 75% больных эшерихиозом животных. Выпаивание больным эшерихиозом телятам смеси молозиво + экстракт «Вита-Форце М» (1:1) в течение 10 дней по 15 см3 значительно повышало выживаемость больных телят, которая в 3-й группе составляла 83,3%, что в 1,25 раза выше, чем в 1-й и в 1,11 раза выше, чем во 2-й группе животных соответственно.

Сочетанное парентеральное (подкожное) и пероральное применение препаратов «Пабисорб» и «Вита-Форце М» приводило к существенному повышению лечебного эффекта. При этом однократное подкожное введение препарата «Пабисорб» в дозе 20 мг/кг (2,5 см3) и выпаивание в течение 10 дней смеси молозиво + «Пабисорб» (1:1) по 15 см3 обеспечивало максимальную (91,6%-ную) выживаемость больных энтеротоксической формой эшерихиоза телят 4-й группы.

Аналогичный лечебный эффект наблюдался в группе телят (5-я), подвергнутых лечению по схеме: однократное подкожное введение препарата «Пабисорб» в дозе 20 мг/кг (2,5 см3) и выпаивание смеси молозиво + экстракт «Вита-Форце М» (1:1) по 15 см3 в течение 10 дней.

Параллельное как парентеральное (внутримышечное), так пероральное применение регламентированного при колибактериозе телят препарата «Сыворотка антиадгезивная, антитоксическая против колибактериоза сельскохозяйственных животных» оказалось менее эффективным – выживаемость больных и леченных указанным препаратом животных составляла 50,0% (пероральное введение) – 58,3% (парентеральное – внутримышечное введение), что уступает в 1,57 и 1,82 раза соответственно препаратам «Пабисорб» и «Вита-Форце М».

Таким образом, изолированное однократное парентеральное применение препарата «Пабисорб» в дозе 20 мг/кг (2,5 см3) и сочетанное (перорально-парентеральное) применение его в смеси с молозивом (1:1) в течение 10 дней в дозе 15 см3 обеспечивает максимальную выживаемость (91,6%) больных эшерихиозом телят. Аналогичная же степень защиты телят от энтеротоксической формы эшерихиоза достигается при сочетанном парентерально-пероральном применении смеси молозиво + экстракт «ВитаФорце М».

Таким образом, повышение выживаемости больных эшерихиозом телят и поросят на фоне применения разработанного нами полиглобулин-аписогенбифидогенного препарата «Пабисорб» была обусловлена гемопротекторным, иммуностимулирующим, иммунопротекторным, антибактериальным действием препарата.

3.5.2.3 Изучение лечебно-профилактического действия препарата «Пабисорб» при колибактериозе и внешнем -облучении животных Одним из основных направлений, призванных решать проблемы повышения сопротивляемости организма животных к различным физическим, биологическим и химическим стресс-факторам следует рассматривать использование многокомпонентных фармакологических препаратов с содержанием веществ зоогенного, бактериального, растительного и минерального происхождения.

Особой лечебной и профилактической активностью при воздействии на организм негативных факторов окружающей среды обладают яды насекомых и змей, витаминные и гормональные препараты, продукты пчеловодства (прополис, воск, пыльца, пчелиный яд и др.), экстракты из растений, которые повышают как неспецифическую резистентность организма (НРО), так и эндогенный фактор радиорезистентности (ЭФР).

Несмотря на то, что стрессогенные факторы (химические, биологические, физические) весьма многообразны и различны, им присуще одно основное объединяющее свойство – иммунотоксичность, которое реализуясь через систему гипофиз-надпочечники, вызывает автоматическое включение высокоспецифической защитной системы иммунитета от того или иного патогена посредством синтеза антитоксических, антиинфекционных или антирадиотоксических антител.

Учитывая, что иммунотоксическое действие многофакторных техногенных агентов имеет различные механизмы, на современном этапе имеются средства и методы экстраиммунной иммунной терапии в условиях экологического неблагополучия, направленных на снижение нагрузки на иммунную систему организма, нейтрализацию аллергенов, токсинов, макромолекул оксидативной направленности и их выведение, десенсибилизацию организма, а также восстановление баланса витаминов путем применения веществ растительного (фиточаи, настои трав), животного (глобулины, тканевые глобулины, элюаты из органов и тканей), минерального (бентониты, цеолиты, монтмориллониты) и микробного происхождения (пробиотики и продукты их метаболизма, анатоксины).

Эффективным средством для защиты организма человека и животных от инфекции служит иммунолечение с применением гипериммунных сывороток и глобулиновых препаратов, как например применение при колибактериозе противоколибактериозной антитоксической сыворотки. Хотя эти препараты и имеют определенную эффективность в борьбе с инфекциями, их использование не всегда дает желаемого результата, так как течение эшерихиоза как и многих инфекционных заболеваний осложняется влиянием на организм различных физических (радиация), химических (экотоксиканты) и биологических (вирусы, бактерии, грибы и др.) факторов. Все выше изложенное говорит о необходимости совершенствования имеющихся и создания новых, более действенных лечебно-профилактических препаратов.

В радиационной фармакологии имеется положение, которое гласит о том, что многокомпонентные лечебно-профилактические средства являются более эффективными по сравнению с монокомпонентными. С учетом этого положения нами был создан композиционный препарат «Пабисорб» с применением комплекса глобулинов, апифитопрепарата «Вита-Форрце М», метаболитов B.bifidum и высокодисперсной фракции природного сорбента – монтмориллонита.

С учетом состава и многофункциональности созданного препарата провели работы по определению иммунофармакологической эффективности данного средства на фоне комбинированного двухфакторного (радиационнобиологического) поражающего воздействия на организм.

В качестве биологического поражающего фактора использовали вирулентный штамм «КВ-1» возбудитель эшерихиоза, E.coli синтезирующий антиген адгезии К99. Для выработки оксидативных макромолекул оказывали воздействие -лучами Cs. При этом для моделирования эшерихиозной инфекции на белых мышах, последним внутрибрюшинно вводили тест-штамм E.coli «КВ-1» в дозе 2106 м.к./голову.

Для создания биологически-радиационного поражения вслед за заражением опытных животных, осуществляли их облучение гамма-лучами в дозе 6.0 Гр.

Для радиационного воздействия использовали гамма-установку «Пума». Для защиты организма белых мышей от выше описанного двухфакторного поражения испытывали композиционный лечебный препарат «Пабисорб» на основе комплекса глобулинов, продуктов пчеловодства, метаболитов B.bifidum.

Контроль за развитием эшерихиозной инфекции на фоне радиационного воздействия и модификации ее под влиянием испытуемого многокомпонентного препарата проводили по микробиологическим, иммунологическим, биохимическим, клинико-гематологическим и патоморфологическим показателям. Степень воздействия на организм белых мышей эшерихий оценивали по уровню содержания иммуноглобулинов, лейкопении, нейтропении, величине хелперно-супрессорного соотношения (иммунорегуляторный индекс), постинфекционного антителообразования по общепринятым в иммунологии методам. Для оценки противорадиационной и антиинфекционной защиты организма при применении изучаемого композиционного средства за опытными животными вели клинические наблюдения в течение 30 суток, учитывая выживаемость животных на фоне воздействия на них комбинированного радиационно-биологического поражения [267].

Сравнительный анализ результатов клинических наблюдений за зараженными возбудителем эшерихиоза и облученными (т.е. подвергнутыми комбинированному биолого-радиационному воздействию) белыми мышами, показал, что из двух использованных патологических факторов (эшерихиозный и радиационный) основная роль в развитии патологических изменений в организме принадлежит инфекционному агенту – возбудителю эшерихиоза. Об этом говорит и тот факт, уже спустя 15 часов после многофакторного воздействия на организм произошел первый случай гибели мышей и падеж всех опытных животных происходил в течение 1-5 суток после радиационно-биологического поражения организма.

При этом гематологические исследования показали, что комбинированное эшерихиозное поражение животных на фоне действия гамма излучения сопровождается проявлением гемотоксического эффекта, что выражалось в уменьшении содержания лейкоцитов в 2,79 раза (Р1,001), снижении количества нейтрофилов в 4,6 раза (Р0,001), снижении количества лимфоцитов в 2,61 раза (Р0,01) и снижении численности моноцитов в 1,79 раза (Р0,01).

Суммарное иммунотоксическое действие патологических факторов сопровождалось существенными нарушениями в системе клеточного и гуморального иммунитета – на момент падежа белых мышей от комбинированного поражения наступало двукратное уменьшение количества В-лимфоцитов, тогда как количество Т-лимфоцитов увеличивалось. Увеличение количества Т-лимфоцитов происходило за счет повышения количества Т-супрессоров, при одновременном снижении количества Т-хелперов. Такое нарушение баланса субпопуляционного состава Т-клеток под воздействием двухфакторного поражающего агента говорит о том, что в организме развивается реакция гиперчувствительности замедленного типа, вызванная радиосенсибилизатором – радиотоксином.

Значит, повышение хелперно-супрессорного индекса при эшерихиозной инфекции на фоне воздействия радиоиммунного стресса, говорит о проявлении в организме аллергического (иммунотоксического) процесса, вызванного образованием и накоплением в организме животного как токсических метаболитов кишечной палочки, так и усилением процесса образования оксидативных макромолекул, обладающих аллергизирующими свойствами.

Снижение численности Т-хелперов и В-лимфоцитов при двухфакторном поражении вызвало торможение продукции иммуноглобулинов. Так количество иммуноглобулинов G в сыворотке крови зараженных возбудителем эшерихиоза и подвергнутых гамма-облучению животных было в 1,75 раза ниже, чем у животных контрольной группы (Р0,01). При этом понижение количества иммуноглобулинов в сыворотке крови животных, подвергнутых воздействию радиационно-биологических факторов, вызвано не только понижением количества Т-хелперов и Влимфоцитов, но и значительными отклонениями в функциональной активности иммунокомпетентных клеток – бласттрансформирующая активность В-лимфоцитов у мышей опытной группы была подавлена почти в 2,0 раза по сравнению с таковой у животных контрольной группы (значение РБТЛ составило 27,1 % против 54,9 в контрольной группе) (Р0,01).

Гемотоксический эффект, вызванный комбинированным радиационнобиологическим воздействием на организм, был реализован усилением процессов свободнорадикального окисления с повышением количества токсических продуктов липопероксидации – малоиддиальдегида, вызывающего повышенную гибель стволовых клеток костного мозга, лимфоидных клеток селезенки, тимуса и лимфоузлов по типу радиоиндуцированного апоптоза.

При этом развитие септической формы инфекции бактериальной и радиогенной природы с сопутствующей бактериемией сопровождалось как нарастанием заселения тонкого кишечника эшерихиями, так и прохождением кишечной палочки из кишечника во внутренние органы вызывая бактериемию.

При проведении параллельных лабораторных исследований на присутствие антигена адгезии К99 и эшерихиозного эндотоксина было установлено, что заселение тонкого отдела кишечника, крови и внутренних органов сопровождалось их энотоксинемией и антигенемией. Значит, в течение первых дней после заражения кишечной палочкой на фоне радиогенного воздействия увеличивается нагрузка на макрофаги, что в свою очередь приводит к усилению их воспалительной активности с увеличением продукции и выделения медиаторов воспаления: интерлейкин 1, термонекротический фактор (ТНФ-). Усиленное накопление медиаторов воспаления у животных, находившихся под воздействием радиационного и биологического факторов, способствовало развитию септического шока, вызывало наступление смертельных исходов и нарушение тканевой перфузии.

Заражение лабораторных животных эшерихиозным возбудителем на фоне радиогенного стресс-фактора вызывало прогрессирующее подавление факторов неспецифической резистентности организма, что сопровождалось значительным снижением бакткрицидной активности (в 2,98 раза, Р0,001), лизоцимной активности (в 2,05 раза, Р0,01), а также фагоцитарного индекса в 2,79 раза (Р0,01).

Применение лечебного композиционного средства «Пабисорб» при одновременном двухфакторном воздействии на организм патогенами инфекционной и радиогенной природы оказывало стабилизирующее действие на течение и исход сочетанного поражения организма. При этом как дача порошковой формы препарата в виде добавки в дозе по 0,1 г/кг корма 15 суток подряд до и после двухфакторного воздействия, так и подкожное введение инъекционной формы композиционного средства за 24 и спустя 24 ч после сочетанного воздействия, позволили сохранить 75-80 % зараженных эшерихиозным возбудителем и летально облученных животных.

Антиэшерихиозная и противолучеая эффективность препарата реализовалась посредством гемопротекторного (подавление апоптоза клеток лимфоидных органов и костного мозга), антиоксидантного (нейтрализация радиотоксинов), антибактериального (блокирование прохождения эшерихий из кишечника во внутренние органы и снижение микробной обсемененности внутренних органов), усиления факторов специфической и неспецифической резистентности организма (восстановление численности В-лимфоцитов, Тхелперов, уровня продукции иммуноглобулинов, бласттрансформирующей активности сыворотки, функциональной активности макро- и микрофагов и хелперно-супрессорного индекса), что вызывало повышение сохранности среди, подвергнутых радиационно-биологическому воздействию, животных.

Результаты, проведенных на этом этапе работ, позволяют сделать заключение о том, что развитие эшерихиозного инфекционного процесса на фоне воздействия радиогенного стресс-фактора выражается в осложнении инфекционного процесса, из-за суммарного действия (аддитивный эффект) поражающих факторов (биологических и радиогенных) путем гемотоксического, прооксидантного действия, гибели гемопоэтических и иммунокомпетентных клеток а также недостаточностью системы антиоксидантной защиты, что вызывает высокую смертность, подверженных двухфакторному (радиационно-биологическому) воздействию, животных.

Пероральное и парентеральное введение животным на этом фоне многокомпонентного лечебного препарата «Пабисорб» на основе комплекса глобулинов, продуктов пчеловодства, продуктов метаболизма B.bifidum и высокодисперсной фракции монтмориллонита способствовало модификации биолого-радиационного поражения с увеличением сохранности животных, зараженных эшерихиозом на фоне воздействия гамма излучения посредством торможения прооксидантного, гемотоксического, апоптотического и иммунотоксического действия патологических агентов.

3.6 Изучение иммуногенной активности комплексных субъединичных 4–пили вакцин на зараженных возбудителем эшерихиоза лабораторных и сельскохозяйственных животных Как было изложено выше, в результате проведенных исследований нами было сконструировано 5 экспериментальных серий субъединичных противоэшерихиозных 4–пили вакцин (СП4ПВ).

Изучение иммуногенных свойств комплексных субъединичных противоэшерихиозных 4-пили вакцин (СП4ПВ) проводили путем определения уровня специфических антител в сыворотке крови иммунизированных лабораторных и сельскохозяйственных животных.

Для этих целей нами были разработаны методы иммуноферментного анализа (ИФА) и антигенного варианта эритроцитарного и бентонитового диагностикумов для оценки поствакцинального гуморального иммунитета при эшерихиозе.

3.6.1 Разработка метода иммуноферментного анализа для обнаружения специфических антител к E.coli в сыворотке крови телят и поросят Целью настоящего раздела явилась разработка непрямого варианта иммуноферментного анализа (ИФА) для обнаружения специфических антител к E.coli в сыворотке крови животных.

Метод основан на взаимодействии, иммобилизованного на поверхности планшета антигена бактерий E. coli, со специфическими антителами из исследуемой сыворотки с последующим выявлением полученного комплекса конъюгатом (меченными пероксидазой хрена специфическими антителами к Ig G быка). Связанная пероксидаза вызывает разложение находящейся в субстратном растворе хромогена путем окисления его перекисью водорода. При этом интенсивность развивающейся в лунках окраски, прямо пропорциональна содержанию антител в исследуемой пробе. Антивидовой конъюгат приобретали в НИИ эпидемиологии и микробиологии им. Н.Ф. Гамалеи (г. Москва). Учет результатов ИФА проводили на вертикально сканирующем спектрофотометре производства Швейцарии - Titertek multiskan.

В качестве антигена для сенсибилизации планшет впервые были использованы пилезные антигены К88, К99, 987Р и F41, полученные нами из четырех энтеротоксигенных штаммов E. coli.

Вариант непрямого иммуноферментного анализа для обнаружения антител в сыворотке крови состоит из, проходящих в несколько этапов, процессов взаимодействия разных компонентов реакции и для получения высокочувствительного метода большое значение отводилось определению базовых параметров постановки реакции. При этом изучали условия адсорбции на твердофазный носитель специфического антигена и искомого антитела, взаимодействие антивидового конъюгата и иммунной сыворотки.

Для этого проводили специальные опыты по определению наиболее оптимальных условий постановки самой реакции – устанавливали основные параметры иммобилизации антител и антигена на полистироловый планшет;

влияние температуры, рН буфера, времени инкубации и другие факторы.

Определение оптимальных параметров рН буферного раствора.

Влияние рН буфера на адсорбцию пилезного антигена E. coli изучали при рН в диапазоне 7,2…10,0, используя 0,01М фосфатную и карбонатнобикарбонатную буферные смеси. Адсорбция проводилась в течение 18 часов при температуре +40С. При этом использовали специфическую сыворотку крови коровы в разведении 1:1000, а антиген взяли к концентрации 50 мкг/мл.

При анализе экспериментально полученных данных выяснили, что в опытах по использованию 0,01М карбонатно-бикарбонатного буфера (рН 9,6) (КББ) для сенсибилизации полистирола антигеном наблюдалась наивысшая чувствительность реакции при наименьшем фоне в лунках планшета с контрольными отрицательным антигеном и сывороткой (Ксп1=4,69; Ксп2=4,63). Использование 0,01М фосфатно-буферного раствора с рН 7,2-7,4 дало фоновое окрашивание отрицательных контролей со снижением коэффициента специфичности. Исходя из этого, далее в опытах для сенсибилизации полистирола специфическим антигеном применяли 0,01М КББ с рН 9,6.

Влияние температурного режима и времени инкубации на адсорбцию антигена на твердофазный носитель. Влияние значения температуры на иммобилизацию специфического антигена в лунки полистиролового планшета изучали в пределах от +4 до +370С. При этом в границах от 1 до 18 часов определяли оптимальное время адсорбции антигена в лунках полистирола. Адсорбцию же проводили в 0,01М карбонатно-бикарбонатном буфере с рН 9,6 используя разведение сывороток от 1:100 до 1:5000 и антиген в концентрации 50 мкг/мл. Результаты опытов обобщены в таблице 20.

–  –  –

Анализ данных таблицы 20, позволяют сделать вывод, что существенная адсорбция специфического антигена происходит при температуре +40С в течение 3 ч (титр антител в гипериммунной сыворотке коровы составил 1:500000 при Ксп1=2,38; Ксп2=2,38). Повышение температуры или времени адсорбции давало в конечном итоге повышение интенсивности окрашивания фона в отрицательных контролях, а уменьшение продолжительности адсорбции антигена приводило к более слабому окрашиванию фона, что говорило о его неполной адсорбции.

Следовательно, адсорбция пилезного антигена в течение 3 ч является наиболее оптимальной при постановке ИФА, и это условие в дальнейшем учитывали при установлении сенсибилизирующей дозы специфического антигена.

Установление сенсибилизирующей дозы пилезного антигена. Влияние содержания антигена на показатели экстинкции ИФА исследовали при концентрации его 50, 25, 10, 5, 1, 0,1 мкг/мл. Титрование антигена и его иммобилизацию в лунки полистирола в 0,01М карбонатно-бикарбонатном буфере (КББ), рН 9,6 при +40С в течение 3 часов. Результаты исследования показывают, что наивысший показатель коэффициента специфичности отмечается при иммобилизации специфического антигена в концентрации 25 мкг/мл. Дальнейшее увеличение или уменьшение его содержания приводило к снижению значения коэффициента специфичности.

На следующем этапе наших исследований по разработке непрямого варианта ИФА проводили поиск оптимальных условий адсорбции иммунной сыворотки на сенсибилизированном антигеном твердофазном носителе. В первую очередь изучали показатели реакции в зависимости от экспозиции взаимодействия антител с иммобилизованным антигеном. С этой целью в сенсибилизированные пилезным антигеном лунки полистирола вносили специфические антитела в разных разведениях (1:100…1:200000) и инкубировали в течение от 30 мин до 6 часов при +37 0С. Разведение компонентов проводили в 0,01М фосфатно-буферном растворе (рН 7,3), содержащем 0,05%-ный раствор сорбиталь С 20 (табл. 21).

Таблица 21 - Чувствительность ИФА в зависимости от продолжительности взаимодействия антиген-антитело Продолжительность Титр антител Ксп1 Ксп2 взаимодействия (обрат.знач.) М±m М±m антиген-антитело, ч 2,69±0,013 2,62±0,015 0,5 10000 2,37±0,016 2,40±0,013 2,44±0,014 2,37±0,015 3,61±0,019 3,37±0,014 2,22±0,013 2,25±0,016

–  –  –

Анализ данных в таблицы 21 показывает, что оптимальной экспозицией инкубации пилезных антител с иммобилизованным на планшет антигеном является 2 ч при температуре +370С - достигается максимальная чувствительность реакции (титр антител в ИФА составил 1:100000 при Ксп1=2,44±0,014; Ксп2=2,37±0,015). При уменьшении срока инкубации полного связывания антигена с сыворотками не происходило, а инкубация в течение более продолжительного срока не только увеличивало время постановки реакции, но и вызывало появление фонового окрашивания (титр антител при 6-часовой инкубации антиген-антитело составил в ИФА 1:5000 при Ксп1=2,22±0,013; Ксп2=2,25±0,016).

На следующем этапе наших работ определяли чувствительность реакции иммуноферментного анализа в зависимости от времени инкубации и концентрации антивидового иммунопероксидазного конъюгата с комплексом антиген-антитело.

Кинетика взаимодействия антивидового иммунопероксидазного конъюгата с комплексом антиген-антитело. При определении оптимальной продолжительности взаимодействия антивидового иммунопероксидазного конъюгата сенсибилизированные антигеном иммунологические планшеты обрабатывали иммунной и отрицательной сыворотками. Полученный комплекс антиген-антитело выявляли антивидовым конъюгатом, разведенным в 0,01М ФБР (рН 7,3), содержащим 0,05%-ный сорбиталь С20, до концентрации 1:200 – 1:6400, и инкубировали при температуре +370С от 1 до 3 часов.

Результаты опытов показали, что наивысшая чувствительность ИФА достигается при взаимодействии конъюгата с иммунной сывороткой в течение 1 часа. При дальнейшем увеличении времени инкубации повышения чувствительности ИФА не наступало из-за возрастания фоновых реакций.

Определение оптимальной концентрации антивидового конъюгата.

Для этой цели лунки планшетов сенсибилизировали комплексным пилезным антигеном E. coli после чего их обрабатывали иммунной и контрольной сывороткой в разведении 1:200…1:12800. Комплекс антиген-антитело выявляли конъюгатом, разведенным в 0,01М ФБР (рН 7,3), содержащим 0,05%-ный сорбиталь С20, от 1:400 до 1:3200 (табл. 22). При анализе результатов исследования, представленных в таблице 22 видно, что оптимальной концентрацией антивидового конъюгата является разведение

–  –  –

2,17±0,12 2,21±0,15 2,56±0,17 2,63±0,18 2,11±0,12 2,15±0,16

–  –  –

Как явствует из таблицы 23, непрямой вариант ИФА – высокочувствителен и специфичен.

На основании собственных исследований разработана и утверждена Инструкция по применению «набора препаратов для выявления антител к бактериям Echerichia coli методом иммуноферментного анализа».

3.6.2 Получение антигенного варианта антиэшерихиозных эритроцитарного и бентонитового диагностикумов для оценки поствакцинального гуморального иммунитета на фоне применения вакцины СП4ПВ Учитывая, что для изучения поствакцинальных серологических реакций при эшерихиозе используют реакцию агглютинации (РА) с адгезивным антигеном К99 и антисыворотки к нему, что исключает возможность регистрации анти К88, 987Р и F41 – антител в организме иммунизированных животных, мы, с целью повышения чувствительности и унификации серологических тест-систем, проводили исследования по конструированию антигенных вариантов эритроцитарного (АГЭД) и бентонитового (АГБД) диагностикумов. Опыты по получению антигенного варианта эшерихиозного эритроцитарного диагностикума (АГЭД) проводили в соответствии с известными методическими рекомендациями.

Для формалинизации полученных эритроцитов использовали 6,5%ный нейтрализованнй формалин. Далее инкубировали смесь эритроцитов барана и формалина в условиях термостата при 37оС на магнитной мешалке в течение 18-20 часов. По истечении срока инкубации проводили трехкратное отмывание эритроцитов от избытка формалина фосфатнобуферным раствором (рН 7,2), путем центрифугирования при 2000 об/мин в течение 15 минут. Полученный при этом осадок эритроцитов ресуспендировали до исходного объема тем же буферным раствором и отстаивали в холодильнике при температуре 4оС в течение 1-2 суток. Из полученной суспензии эритроцитов готовили 3%-ную взвесь определением их первоначальной исходной и последующим разведением ФБР с рН 7,2.

Полученный на этом этапе работ эритроцитарный препарат, проверяли на самоагглютинацию на микропанелях с U-образными лунками. Далее проводили танизацию формалинизированных эритроцитов смешиванием эритроцитов с равным количеством рабочего раствора танина и инкубированием смеси в условиях водяной бани при температуре 37 оС в течение 20 минут. По истечении указанного срока проводили трехкратное отмывание избытка танина ФБР, рН 7,2 и ресуспендировали осадок эритроцитов до первоначального объема ФБР, рН 6,6. После этого проводили реакцию на спонтанную гемагглютинацию танизированных эритроцитов на микропанелях в физиологическом растворе.

На завершающем этапе приготовления эритроцитарного диагностикума проводили сенсибилизацию иммуносорбента (эритроцитов). С целью подготовки эритроцитов к сенсибилизации проводили их 3-кратное отмывание их от формалина ФБР, рН 7,2 и ресуспендировали до исходного объема ацетатно-буферным раствором (АБР), рН 6,3. Сенсибилизацию же эритроцитов проводили при смешивании с равным объемом рабочего раствора комплексного антигена в ацетатном буфере, рН 6,3 (рабочий раствор полиантигена готовили разведением антигена 1:50 ацетатным буферным раствором, рН 6,3). Далее смесь инкубировали в условиях термостата с шейкером при 37оС в течение 2-3 часов. После чего проводили трехкратное отмывание эритроцитов от лишнего антигена фосфатнобуферным раствором (ФБР) с рН 7,2 с 0,5%-ной лошадиной сывороткой с дальнейшим ресуспендированием эритроцитов в том же буферном растворе.

Далее проводили стабилизацию сенсибилизированных эритроцитов, для чего использовали раствор формальдегида путем добавления стабилизатора в концентрации 1,5% от объема препарата. Для проверки специфичности и активности проводили постановку реакции непрямой гемагглютинации (РНГА) с положительной (поливалентной колибактериозной) и отрицательной (нормальной) сыворотками, определяя при этом максимальные титры антител с положительной и отрицательной сыворотками, и полученный препарат использовали в дальнейшем для определения поствакцинальных антител в исследуемых пробах (сыворотках).

Активность, полученных на первом этапе работ иммунохимических компонентов (антигенный эритроцитарный диагностикум, стандартная анти К99-сыворотка) испытали в РНГА-тест-системе. Для этого сперва определяли титр анти К88, К99, 987Р и F41 – сывороток, полученных от иммунизированных 4-пили комплексным антигеном кроликов, взятых на 30й день после иммунизации. Исходный раствор антител в объеме 100 мкл вносили в первую лунку иммунологического планшета и делали двукратные разведения до конечного титра (1:4096). Затем в каждую лунку раскапывали по одной капле (30 мкл) АГЭД (сенсибилизированные 4-пили антигенами формалинизированные и танизированные эритроциты барана), содержимое перемешивали и ставили в термостат на 2 часа. По истечении указанной экспозиции проводили визуальную читку реакции и по степени гемагглютинации эритроцитов определяли титр антител испытуемой сыворотки.

Результаты иммунохимического анализа активности контрольной антипили – сыворотки показали, что она вступала в реакцию с гомологичным 4пили антигеном в разведении 1:256 (8 log2).

Полученный антигенный эритроцитарный диагностикум (АГЭД) в дальнейшем использовали в РНГА тест-системе для изучения агглютиногенных свойств 4-пили вакцины, т.е. для регистрации поствакцинальных антител в организме привитых испытуемыми вариантами вакцин животных.

Одновременно проводили исследования по получению антигенного варианта бентонитового диагностикума (АГБД) по методике, описанной Гайзатуллиным Р.Р. [45]. Опыты проводились совместно с профессором Низамовым Р.Н.

При проведении настоящих исследований мы исходили из того, что в производственных условиях РНГА тест-система с использованием эритроцитарного диагностикума является более приемлемой и удобной.

Однако воспроизводимость данной реакции зависит от высокой чувствительности эритроцитов к колебаниям факторов внешней среды (температура, рН, присутствие химикатов и др.), приводящих к снижению автивности эритроцитарного препарата. Для устранения указанных технологических проблем, рядом ученых были испытаны различные химические сорбенты, в частности, бентониты, которые в реакции бентонитовой флокуляции (РБФ) значительно превосходят по активности свой известный аналог – РНГА с использованием сенсибилизированных эритроцитов по наиболее важным характеристикам, таким как чувствительность, стабильность и время исследования.

С учетом того, что поиск средств и методов повышения эффективности иммунологических тест-систем для индикации антигенов и регистрации поствакцинальных и постинфекционных антител в организме животных является одной из важнейших задач иммунохимии, нами были проведены настоящие работы.

Целью настоящих исследований явилась разработка технологии приготовления антигенного бентонитового диагностикума (АГБД), с использованием полученных образцов бентонитов, подвергнутых фракционированию и технологической активации для проведения реакции агглютинации на бентоните (реакция бентонитовой флокуляции – РБФ). Для чего отобрали 3 образца бентонитов Тарн-Варского, Биклянского и Березовского месторождений, подвергнутых термохимической активации.

Процесс изготовления АГБД происходила в два последовательных этапа. На первом этапе проводили сенсибилизацию (нагрузку) микрочастиц бентонита серологически активным веществом (сенситином), на втором – агглютинацию предварительно сенсибилизированных частиц бентонита. При этом чувствительность РБФ, а следовательно, и сопоставимость полученных результатов, в большей степени зависела от условий сесибилизации микрочастиц бентонитового сырья. Стандартизация реакции бентонитовой флокуляции а также достижение наивысшей чувствительности реакции предусматривало как выяснение способов достижения наибольшей эффективности активации сырья, так и наиболее оптимальных условий для взаимодействия с сенситином. Для достижения этой цели требовалось решение следующих задач – подбор оптимальных параметров соотношения сенситина и бентонита, экспозиция и режим температуры в процессе сенсибилизации, совместное действие которых обеспечивало бы наивысшее иммунохимическое взаимодействие бентонита и антигена. Исходя из этого, перед проведением сенсибилизации бентонита готовили из него водную суспензию с разными концентрациями (0,14; 0,16; 0,18; 0,20; 0,22; 0,24;

0,26%). Выяснили, что при 0,2%-ной концентрации бентонита оседание частиц сорбента наблюдалось в виде плотных точек, удовлетворительно обнаруживаемых при глазомерной оценке характера оседания адсорбента.

Следовательно, для сенсибилизации мы применяли бентонитовую суспензию, приготовленную путем суспендирования 200 мг бентонита в 100 мл дистиллированной воды, в следствие чего получали наиболее эффективную суспензию иммуносорбента. В качестве сенситина использовали субъединичный 4-пили полиантиген, полученный согласно схеме, изложенной нами в разделе 3.4 диссертации. С целью определения оптимального соотношения бентонитовой суспензии и сенситинанами было составлено и испытано 9 различных соотношений бентонитовой суспензии и полиантигенного компонента. Сенсибилизацию приготовленных образцов проводили при заданных постоянных параметрах времени (25 минут) и температуры (22оС). Далее смеси центрифугировали в течение 10 минут при 3000 об/мин. Полученные осадки двукратно отмывали в дистиллированной воде путем центрифугирования. После процесса центрифугирования надосадочную жидкость удаляли, а осадки ресуспендировали в дистиллированной воде до 0,5%-ной концентрации. Полученные на этом этапе образцы использовали для постановки реакции бентонитовой флокуляции. Для определения титра эшерихиозных сывороток, в полистироловых пластинах готовили последовательные двукратные разведения антител в дистиллированной воде в объеме 0,1 мл. далее в каждую лунку добавляли по 0,1 мл полученных после сенсибилизации комплексов «бентонитовая суспензия – сенситин». Смеси тщательно встряхивали и выдерживали в течение 1,5-2 часов при комнатной температуре. При этом нужно отметить, что реакцию сопровождали праллелной постановкой контроля для исключения присутствия спонтанной агглютинации суспензии. Титр поли 4-пили антител служил индикатором оценкистепени эффективности составления оптимального соотношения бентонитовой суспензии и антигена в РБФ. Учет результатов реакции проводили визуально спустя 1,5-2 часа. Реакцию считали положительной, если частицы сорбента располагались на дне лунки в виде «зонтика» (также как и при обычной реакции непрямой гемагглютинации), с выраженными фистончатыми краями и полным просветлением надосадочной жидкости.

Если же частицы бентонита равномерно выстилали все дно лунки в виде пятна (точки), то результаты реакции считались отрицательными.

Результаты определения оптимальных параметров соотношения иммуносорбента (микрочастиц бентонита) и сенситина (4-пили полиантигена) в реакции бентонитовой флокуляции (РБФ) представлены в табл. 24, в которой приведены данные только по одному образцу бентонитового сырья – Тарн-Варского месторождения глины Татарстанской зоны, поскольку остальные образцы бентонитов оказались менее активными в изучаемой тест-системе.

–  –  –

Данные таблицы 24 показывают, что наиболее оптимальным соотношением компонентов для изготовления бентонитового диагностикума является 0,3:0,7 (вариант VII). При таком соотношении компонентов обеспечивается наивысшая чувствительность реакции бентонитовой флокуляции, что говорит о наиболее полном взаимодействии сенситина с бентонитом, что в свою очередь, при постановке реакции способствует наиболее интенсивному процессу агглютинации комплекса бентонитсенситин с анти 4-пили сывороткой.

Аналогично же были проведены исследования с использованием бентонитового сырья, подвергнутого фракционированию. Для этого, как мы уже отмечали ранее, в работе были использованы первые фракции технологического сырья. Результаты исследований обобщены в табл. 25.



Pages:     | 1 |   ...   | 3 | 4 || 6 | 7 |   ...   | 9 |

Похожие работы:

«БРИТАНОВ Николай Григорьевич ГИГИЕНИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ ПЕРЕПРОФИЛИРОВАНИЯ ИЛИ ЛИКВИДАЦИИ ОБЪЕКТОВ ПО ХРАНЕНИЮ И УНИЧТОЖЕНИЮ ХИМИЧЕСКОГО ОРУЖИЯ 14.02.01 Гигиена Диссертация на соискание ученой степени доктора медицинских наук Научный консультант: доктор медицинских наук, профессор...»

«Мухаммед Тауфик Ахмед Каид ХАРАКТЕРИСТИКА ГЕНОТИПОВ С ХОРОШИМ КАЧЕСТВОМ КЛЕЙКОВИНЫ, ОТОБРАННЫХ ИЗ ГИБРИДНЫХ ПОПУЛЯЦИЙ АЛЛОЦИТОПЛАЗМАТИЧЕСКОЙ ЯРОВОЙ ПШЕНИЦЫ МЯГКОЙ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ДНК-МАРКЕРОВ Специальность 06.01.05 – селекция и семеноводство сельскохозяйственных растений Диссертация на соискание ученой степени кандидата сельскохозяйственных наук Научный...»

«Ульянова Онега Владимировна МЕТОДОЛОГИЯ ПОВЫШЕНИЯ БЕЗОПАСНОСТИ БАКТЕРИАЛЬНЫХ ВАКЦИН НА МОДЕЛИ ВАКЦИННЫХ ШТАММОВ BRUCELLA ABORTUS 19 BA, FRANCISELLA TULARENSIS 15 НИИЭГ, YERSINIA PESTIS EV НИИЭГ 03.02.03 – микробиология Диссертация на соискание ученой степени доктора биологических наук Научный консультант:...»

«СЕРГЕЕВА ЛЮДМИЛА ВАСИЛЬЕВНА ПРИМЕНЕНИЕ БАКТЕРИАЛЬНЫХ ЗАКВАСОК ДЛЯ ОПТИМИЗАЦИИ ФУНКЦИОНАЛЬНО-ТЕХНОЛОГИЧЕСКИХ СВОЙСТВ МЯСНОГО СЫРЬЯ И УЛУЧШЕНИЯ КАЧЕСТВА ПОЛУЧАЕМОЙ ПРОДУКЦИИ Специальность 03.01.06 – биотехнология ( в том числе бионанотехнологии) Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель Доктор биологических наук, профессор Кадималиев Д.А. САРАНСК 2014 ОГЛАВЛЕНИЕ ВВЕДЕНИЕ.....»

«Вафула Арнольд Мамати РАЗРАБОТКА ЭЛЕМЕНТОВ ТЕХНОЛОГИИ ВЫРАЩИВАНИЯ ПАПАЙИ ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ ЗДОРОВОГО ПОСАДОЧНОГО МАТЕРИАЛА И ЭКСТРАКТОВ С БИОПЕСТИЦИДНЫМИ СВОЙСТВАМИ ДЛЯ ЗАЩИТЫ ЕЕ ОТ ВРЕДНЫХ ОРГАНИЗМОВ Специальности: 06.01.07 – защита растений 06.01.01 – общее земледелие и растениеводство Диссертация на соискание ученой степени кандидата сельскохозяйственных...»

«Палаткин Илья Владимирович Подготовка студентов вуза к здоровьесберегающей деятельности 13.00.01 общая педагогика, история педагогики и образования Диссертация на соискание ученой степени кандидата педагогических наук Научные руководители: доктор биологических наук, профессор,...»

«АБДУЛЛАЕВ Ренат Абдуллаевич ГЕНЕТИЧЕСКОЕ РАЗНООБРАЗИЕ МЕСТНЫХ ФОРМ ЯЧМЕНЯ ИЗ ДАГЕСТАНА ПО АДАПТИВНО ВАЖНЫМ ПРИЗНАКАМ Шифр и наименование специальности 03.02.07 – генетика 06.01.05 – селекция и семеноводство сельскохозяйственных растений ДИССЕРТАЦИЯ на соискание учёной степени кандидата...»

«Карачевцев Захар Юрьевич ОЦЕНКА ПИЩЕВЫХ (АКАРИЦИДНЫХ) СВОЙСТВ РЯДА СУБТРОПИЧЕСКИХ И ТРОПИЧЕСКИХ РАСТЕНИЙ В ОТНОШЕНИИ ПАУТИННОГО КЛЕЩА TETRANYCHUS ATLANTICUS MСGREGOR Специальность: 06.01.07 – защита растений Диссертация на соискание учёной степени кандидата биологических наук Научный руководитель: Попов Сергей...»

«Сухарьков Андрей Юрьевич РАЗРАБОТКА МЕТОДОВ ОЦЕНКИ ОРАЛЬНОЙ АНТИРАБИЧЕСКОЙ ВАКЦИНАЦИИ ЖИВОТНЫХ 03.02.02 «Вирусология» Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: кандидат ветеринарных наук, Метлин Артем Евгеньевич Владимир 2014 ОГЛАВЛЕНИЕ 1 ВВЕДЕНИЕ 2 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 2.1 Характеристика возбудителя бешенства 2.2 Эпизоотологические...»

«Петренко Дмитрий Владимирович Влияние производства фосфорных удобрений на содержание стронция в ландшафтах Специальность 03.02.08 экология Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: доктор биологических наук, профессор Белюченко Иван Степанович Москва – 2014 г. Содержание Введение Глава 1.Состояние изученности вопроса и цель работы 1.1 Экологическая...»

«Цвиркун Ольга Валентиновна ЭПИДЕМИЧЕСКИЙ ПРОЦЕСС КОРИ В РАЗЛИЧНЫЕ ПЕРИОДЫ ВАКЦИНОПРОФИЛАКТИКИ. 14.02.02 – эпидемиология ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени доктора медицинских наук Научный консультант: заслуженный деятель науки РФ, лауреат Государственной премии СССР профессор, доктор медицинских наук Ющенко Галина Васильевна Москва – 20 Содержание...»

«Брит Владислав Иванович «Эффективность методов вакцинации против ньюкаслской болезни в промышленном птицеводстве» Специальность: 06.02.02 ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени кандидат ветеринарных наук Научный руководитель:...»







 
2016 www.konf.x-pdf.ru - «Бесплатная электронная библиотека - Авторефераты, диссертации, конференции»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.