WWW.KONF.X-PDF.RU
БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА - Авторефераты, диссертации, конференции
 


Pages:     | 1 |   ...   | 2 | 3 || 5 | 6 |   ...   | 9 |

«РАЗРАБОТКА НОВЫХ СРЕДСТВ СПЕЦИФИЧЕСКОЙ ПРОФИЛАКТИКИ И ЛЕЧЕНИЯ ЭШЕРИХИОЗОВ ТЕЛЯТ И ПОРОСЯТ ...»

-- [ Страница 4 ] --

Результаты параллельных модельных скрининговых исследований по оценке терапевтической активности тканевых препаратов – гистоглобулинов, полученных от выживших после экспериментального заражения возбудителем эшерихиоза животных – реконвалесцентов, показали, что по степени иммунозащитной активности препараты гистоглобулинов обладают достаточно высоким иммунотерапевтическим потенциалом, обеспечивая выживаемость пораженных энтеротоксином E. coli лимфоцитов до 79,3%, что незначительно (в 1,03-1,07 раза, Р0,05) уступает активности сывороточных глобулинов, полученных по I и IV вариантам опытов.

Кроме того следует отметить, что из испытанных 7 вариантов тканевых глобулинов (гистоглобулинов), наиболее активными оказались глобулины, полученные из печени, почек, лимфатических узлов, костного мозга и скелетных мышц, обеспечивая выживаемость пораженных энтеротоксином E. coli лимфоцитов в 79,3% (печень), 78,6 (почки), 77,9 (костный мозг), 75,5 (лимфатические узлы), 74,8% (скелетные мышцы) случаев соответственно.

Таким образом, в результате проведенных скрининговых исследований установлено, что из испытанных 20 потенциальных иммунотерапевтических препаратов (сывороточных и тканевых глобулинов), в модельной in vitro тест-системе обладали наиболее высоким иммунотерапевтическим потенциалом три препарата: 1) антисыворотка, полученная от переболевших и выживших после экспериментального заражения возбудителем эшерихиоза животных – реконвалесцентов; 2) антисыворотка, полученная от 1-кратно иммунизированных 4-пили антигеном (субъединичной 4-пили вакциной) животных и 3) гистоглобулины, полученные из элюатов печени (или почек, селезенки, лимфатических узлов, костного мозга, скелетных мышц) выживших после экспериментального эшерихиоза животных – реконвалесцентов.

В целом препараты при совместном постинкубационном культивировании лимфоцитов обеспечивали 79,3-85,9%-ную выживаемость пораженных энтеротоксином E. coli иммуноцитов. Поэтому указанные глобулины были отобраны в качестве основных компонентов для конструирования антиэшерихиозных лечебных препаратов.

3.4.3 Изучение возможности повышения иммунотерапевтического потенциала глобулинов при сочетании их с веществами зоогенного, фитогенного, микробного и минерального происхождения Исследованиями последних лет в области иммунопатологии установлено, что для коррекции нарушений иммунной системы, вызванных воздействием на организм агентов биологической природы (микробы, вирусы, токсины) эффективными являются методы и средства не только иммунной терапии из классов иммунотропных (-глобулины, гистоглобулины), но и витамины (А, В, С, Е), микроэлементы (Zn, Co, Mg, Cu, цеолиты, бентониты), продукты растительного (экстракты радиолы, рябины, калины, чаги, душицы, люцерны, укропа), пчеловодства (обножка, пыльца, перга, прополис, пчелиный яд, мед) и пробиотического (бифидогенные, колициогенные факторы, субтилин) происхождения [261].

В ФГБУ «ФЦТРБ-ВНИВИ» А.В. Ивановым и др. сконструирована натуральная биологически активная кормовая добавка «Вита-Форце М», содержащая прополис, пергу, обножку, пчелиный подмор, трутневый расплод, кровяную, хвойную муку и бентонит [108].

С учетом литературных данных о том, что композиционные формы лечебно-профилактических препаратов на основе продуктов пчеловодства (мед, цветочная пыльца, прополис) оказывают существенное влияние на Т- и В-системы иммунитета и колонизационную резистентность кишечника больных диареей молодняка животных с активизацией функций и количественного содержания бифидо- и лактобактерий кишечного биоценоза с одновременным подавлением размножения стафилококков, патогенных эшерихий, клостридий и грибов рода Candida, мы сочли возможным и необходимым не только включать в состав композиционного препарата продукта метаболизма бифидобактерий, но и включать в метаболизм B.

bifidum продукты пчеловодства, в виде экстракта препарата «Вита-Форце М», а также хитозан, полученный из подмора пчел – апизан.

Для получения продуктов метаболизма бифидобактерий, исходную культуру штамма B. bifidum высевали на казеиново-дрожжевую среду Блаурокка и выращивали в анаэробных условиях при 37 оС в течение 96 ч.

При достижении максимальной концентрации микробных клеток (1,510 9 КОЕ/мл) и содержания сухого вещества (267 мг/мл) в культуральной жидкости, последнюю с содержащимися в ней микробными клетками высушивали и использовали в качестве источника бифидогенных факторов потенциального противоэшерихиозного композиционного препарата.

Для стимуляции синтеза продуктов метаболизма B. bifidum, в засеянную тест-микробом питательную среду Блаурокка вносили 0,1%-ные растворы этанолового экстракта натуральной биологически активной кормовой добавки «Вита-Форце М» в концентрациях от 10 до 100 мг/мл по сухому веществу в объеме по 10 мл / 100 мл среды и клетки культивировали в вышеуказанных условиях. По истечении указанной экспозиции в растущей культуре определяли концентрацию бифидобактерий и по максимальному выходу биомассы определяли оптимальную метаболизмстимулирующую концентрацию используемого стимулятора метаболизма. При отборе оптимальных концентраций стимулятора роста и индукции синтеза продуктов метаболизма тест-микроба в качестве критерия оценки – основного контролирующего условия получения продуктов метаболизма пробиотического микроорганизма, использовали количество образовавшейся биомассы.

Результаты микробиологических исследований показали, что добавление в культуральную среду с засеянными в нее микробами B. bifidum испытуемого стимулятора метаболизма – экстракта порошка «Вита-Форце М» в концентрации 25 мг/см3 среды обеспечивает максимальный выход биомассы (2,7109 м.к./см3), содержание сухого вещества (295 мг/мл) в культуральной жидкости (КЖ).

Полученную вышеописанным способом культуральную жидкость B.

bifidum подвергали лиофилизации и в виде порошка использовали в качестве одного из компонентов экспериментального образца потенциального многокомпонентного противоэшерихиозного лечебно-профилактического препарата на основе полиглобулинов и апипродуктов.

В качестве второго потенциального стимулятора метаболизма B.

bifidum использовали апизан, любезно предоставленный нам профессором Низамовым Р.Н.

Результаты микробиологических исследований показали, что добавление в культуральную среду с засеянными в нее микробами B. bifidum апизана в концентрации 12,5 мг/см3 среды обеспечивает максимальный выход биомассы (2,81109 КОЕ/см3) с содержанием сухого вещества (301 мг/см3) в культуральной жидкости.

Полученные вышеописанными методами продукты метаболизма B.

bifidum, продукты пчеловодства («Вита-Форце М»), хитозан на основе подмора пчел (апизан), природный адсорбент – высококодисперсная фракция бентонита – монтмориллонит были использованы в качестве усилителей основного компонента при конструировании потенциального композиционного противоэшерихиозного лечебного препарата – полиглобулинов.

Для определения оптимального количества и соотношения компонентов – усилителей в экспериментальном образце композиционного фармакотерапевтического препарата, были составлены различные соотношения основных компонентов и потенциальных усилителей из класса веществ аписогенного, микробного и минерального происхождения.

Ранее нами было установлено, что наиболее высокой биологической активностью по отношению к эшерихиозному энтеротоксину в скрининговой тест-системе оказалась антисыворотка (АС) 1-кратно in vitro иммунизированных 4-пили антигенами кроликов, взятая на 30 сут после иммунизации, антисыворотка переболевших и выживших после экспериментального заражения животных возбудителем эшерихиоза кроликов, взятая на 30 сут после заражения и глобулины из элюатов печени животных – реконвалесцентов после экспериментального эшерихиоза, полученные на 30 сут после заражения, которые обеспечивали выживаемость 82,1, 85,9 и 79,3% пораженных эшерихиозным энтеротоксином лимфоцитов в in vitro тест-системе.

Учитывая, что выход целевого продукта при применении каждого в отдельности перечисленных технологий получения глобулинов является незначительным и малопроизводительным, изучали возможность увеличения выхода технологического сырья и уменьшения расхода отдельных компонентов (глобулинов) при сохранении их антиэшерихиозной активности.

С учетом изложенного нами на базе иммунной антисыворотки против 4-пили полиантигена (АСГ), антисыворотки реконвалесцентов (АСР) и гистоглобулина из элюатов печени реконвалесцентов (ЭПР) было составлено 35 композиций полиглобулинов, которые были испытаны на биопротекторную активность в in vitro тест-системе (на клеточной культуре – инкубируемых лимфоцитов) с моделированием эшерихиозной энтеротоксемии.

Результаты тестирования полученных 35 вариантов глобулинов в in vitro тест-системе показали, что наиболее активной оказалась композиция полиглобулинов на основе АСГ, АСР и ЭПР в соотношении компонентов 0,6:0,3:0,1, которая при постинкубации пораженных эшерихиозным энтеротоксином культуры клеток (лимфоцитов) обеспечивала 84,7%-ную выживаемость.

Таким образом, композиция, составленная на основе глобулинов антисыворотки (АСГ) иммунизированного 4-пили полиантигеном – 0,6 объема препарата с добавлением к ней 0,3 объема антисыворотки реконвалесцентов (АСР) и 0,1 объема печеночного гистоглобулина (гепатоглобулина ЭПР) приводило не только к сохранению антиэшерихиозной активности и ее повышению, но и к уменьшению расхода глобулина в 1,66 раза (на 40%) по сравнению с исходным препаратом.

Учитывая результаты предыдущих исследований по изучению возможности уменьшения расхода дорогостоящего препарата – иммунной антисыворотки против 4-пили антигена, а также с учетом литературных данных о возможности усиления фармакологической активности глобулиновых препаратов при сочетании их с апипрепаратом «Вита-Форце», были продолжены опыты по уменьшению расхода иммуноглобулинов и возможные усиления фармакотерапевтического действия полученных полиглобулинов.

Для определения оптимальных соотношений компонентов полиглобулиновой композиции на основе иммунной антисыворотки (АСГ), нами были составлены следующие объемные соотношения первого (АСГ + АСР + ЭПР) и второго (4%-ный раствор этанолового экстракта «Вита-Форце М» (ЭВФМ) компонентов: 0,9:0,1; 0,8:0,2; 0,7:0,3; 0,6:0,4; 0,5:0,5; 0,4:0,6;

0,3:0,7; 0,2:0,8; 0,1:0,9 соответственно.

Результаты совместного культивирования пораженных эшерихиозным энтеротоксином лимфоцитов с последующим внесением в инкубационные среды композиционного препарата с различными объемными соотношениями компонентов I (полиглобулины) и II (экстракт «Вита-Форце М») и последующего цитометрирования мазков лимфоцитов показали, что наиболее оптимальной является композиция, состоящая из 0,7 объема смеси полиглобулинов (АСГ + АСР + ЭПР) и 0,3 объема этанолового экстракта «Вита-Форце М» (ЭВФМ), которая обеспечивала 86,1%-ную выживаемость пораженных энтеротоксином E. coli лимфоцитов.

Следовательно, добавление к 0,7 объему полиглобулина на основе иммунной антисыворотки (АСГ), содержащему 30% глобулинов сыворотки реконвалесцентов (АСР) и 10% гистоглобулина (ЭПР) этанолового экстракта «Вита-Форце М» в объеме 0,3 приводило не только к сокращению расхода полиглобулинов на 30%, но и последовало незначительное (в 1,02 раза) повышение антиэшерихиозной активности полиглобулинов.

С учетом литературных данных о повышении фармакологической активности иммунотропных препаратов (глобулинов) при сочетании их с сорбентом токсикантов и возможность получения лечебнопрофилактических препаратов нового поколения - металлокомплексов с более широким спектром иммунофармакологического действия [10], нами были продолжены опыты по изучению возможности усиления иммунофармакологического действия композиции на основе полиглобулинов и апипрепарата «Вита-Форце М» при сочетании ее с природными минералами – бентонитом (БТ).

Исходя из имеющихся в литературе данных по применению бентонитов и цеолитов в составе пищевых и кормовых добавок и других фармакологически активных препаратов, к композиции полиглобулинов и экстракта «Вита-Форце М» добавляли различные количества высокодисперсной суспензиеобразующей фракции монтмориллонита. При этом количество добавляемого сорбента (монтмориллонита) колебалось в пределах от 0,1 до 2,4% к общему объему полиглобулинов, с шагом между концентрациями 0,1%.

В результате проведенных исследований в этой серии опытов нами было приготовлено 24 варианта полиглобулиновых композиций (металлоглобулинов) с содержанием 0,1; 0,2; 0,3; 0,4; 0,5; 0,6; 0,7; 0,8; 0,9;

1,0; 1,1; 1,2; 1.3; 1,4; 1,5; 1,6; 1,7; 1,8; 1,9; 2,0; 2,1; 2,2; 2,3 и 2,4% монтмориллонита.

Приготовленные по вышеописанному способу композиции металлоглобулинов, в следующей серии опытов были испытаны на антиэшерихиозную активность в in vitro тест-системе – культуре клеток (лимфоцитов), подвергнутых токсическому воздействию эшерихиозного эндотоксина.

Результаты совместного культивирования пораженных эшерихиозным энтеротоксином лимфоцитов с внесенными в культуральную среду испытуемых образцов металлоглобулинов на основе полиглобулинов, препарата «Вита-Форце М» и высокодисперсной фракции природного минерала показали, что из испытанных 24 вариантов металлоглобулинов, наиболее активной оказалась композиция, состоящая из 0,7 частей смеси полиглобулинов, 0,3 частей аписогена («Вита-Форце М») и содержащая 2% к объему монтмориллонита, которая обеспечивала 87,9%-ную выживаемость пораженных эшерихиозным энтеротоксином лимфоцитов.

Продолжая исследования по изучению возможности усиления иммунофармакологического действия полиглобулинов, в следующей серии опытов изучали влияние продуктов метаболизма пробиотического микроба – на биологическую активность композиции на основе B. bifidum полиглобулинов, апипрепарата «Вита-Форце М» и природного минерального сорбента – монтмориллонита.

Для этой цели, полученный на предыдущем этапе работы, порошок из культуральной жидкости бифидобактерий, выращенных в присутствии апизана в концентрации 12,5 мг/см3, вносили в полиглобулины порошки из культуральной жидкости B. bifidum в количествах от 1 до 100 мг/мл с шагом 10 мг/мл количества вводимого потенциального усилителя – бифидогена. С использованием 3 варианта потенциального усилителя – бифидогена нами были приготовлены 15 вариантов композиций полиглобулинов с содержанием 1, 2, 3, 4, 5, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90 и 100 мг/мл продуктов метаболизма бифидобактерий (ПМББ).

Приготовленные композиции на основе полиглобулинов, апипрепарата «Вита-Форце М», минерального иммуносорбента и продуктов метаболизма B. bifidum, были испытаны на антиэшерихиозную активность в in vitro тестсистеме – на пораженных эшерихиозным эндотоксином лимфоцитах в постинкубационном варианте культивирования (модель лечебного применения испытуемых препаратов).

Результаты биотестирования испытуемых вариантов приготовленных композиций в модельной тест-системе показали, что из испытанных 15 вариантов препаратов оптимальной является композиция, состоящая из полиглобулинов (0,7 объема), аписогена (0,3 объема), высокодисперсной фракции алюмосиликатов (2,0% от общего объема), к которой добавляли порошок из продуктов метаболизма B. bifidum из расчета 2 мг/мл препарата.

Полученная по указанному способу композиция обеспечивала 98,3%-ную выживаемость пораженных эшерихиозным энтеротоксином лимфоцитов.

Таким образом, при стандартизации полученной по вышеуказанной схеме композиции, для приготовления 100 мл препарата брали 70 мл 10%ного раствора полиглобулинов, 30 мл 4%-ного раствора этанолового экстракта порошка натуральной биологически активнойкормовой добавки «Вита-Форце М», 0,2 г порошка из продуктов метаболизма B. bifidum и 2 г высушенной очищенной высокодисперсной фракции монтмориллонита.

Следовательно, в 100 мл полученной композиции содержится 7 г (7000 мг) полиглобулинов, 1,2 г (1200 мг) препарата «Вита-Форце М», 0,2 г (200 мг) продуктов метаболизма B. bifidum и 2 г (2000 мг) высокодисперсной фракции монтмориллонита. Содержание сухого вещества в препарате составляет 10,4 г биологически активных веществ, т.е. препарат представляет собой 10,4%ный раствор полиглобулинов, продуктов пчеловодства, бифидобактерий и природного иммуносорбента.

Для получения 1 л (1000 мл) композиционного препарата, в стеклянную посуду емкостью 1,5-2,0 л, помещали 20 г порошка высокодисперсной фракции бентонита, 2,0 г продуктов метаболизма B.

и до метки 1,0 л заливали смесью 10%-ных растворов bifidum полиглобулинов и 4%-ного раствора экстракта препарата «Вита-Форце М» в соотношении 7:3, смесь тщательно перемешивали до образования гомогенной массы, подвергали холодной стерилизации – путем облучения смеси на гамма-установке «Исследователь» в дозе 3103 Гр и использовали в качестве антиэшерихиозного лечебного препарата. Опыты проводились совместно с профессором Низамовым Р.Н.

В следующей серии опытов в качестве потенциального усилителя фармакологической активности полиглобулинов, экстракта «Вита-Форце М», бифидогена и минерального сорбента (высокодисперсной фракции монтмориллонита) препарата «Пабисорб», использовали продукт из подмора пчел – хитозана (апизана). Препарат апизан был предоставлен профессором Низамовым Р.Н.

Для опытов готовили различные объемные соотношения компонентов (глобулинов : апизана). При этом эти соотношения компонентов составляли (глобулин : апизан, Г:А) 0,9:0,1; 0,8:0,2; 0,7:0,3; 0,6:0,4; 0,5:0,5; 0,4:0,6;

0,3:0,7; 0,2:0,8; 0,1:0,9 соответственно.

На основе указанных компонентов (глобулинов и апизана) нами были составлены 9 композиций. В абсолютном выражении содержание действующего начала в глобулиновых препаратах составляло 100 мг/мл сухого вещества по белку и 1 мг/мл биополимера N-ацетил-2-амино-2диокси-Д-глюкозамина. Содержание действующих веществ в 1 мл композиции полиглобулины + апизан при объемном соотношении 0,9+0,1 в весовом выражении составляет 90 мг + 1 мг/мл; при соотношении Г:А 0,8:0,2 = 80 мг + 0,2 мг/мл; Г:А 0,7:0,3 = 70 мг + 0,3 мг/мл; Г:А 0,6:0,4 = 60 мг + 0,4 мг/мл; Г:А 0,5:0,5 = 50 мг + 0,5 мг/мл; Г:А 0,4:0,6 = 40 мг + 0,6 мг/мл; Г:А 0,3:0,7 = 30 мг + 0,7 мг/мл; Г:А 0,2:0,8 = 20 мг + 0,8 мг/мл; Г:А 0,1:0,9 = 10 мг + 0,9 мг/мл.

Приготовленные по вышеописанной схеме глобулиново-хитозановые композиции были испытаны в in vitro тест-системе с целью выявления усиления антиэшерихиозной активности полиглобулинов в сочетании с биополимером из подмора пчел – апизаном. Условия биотестирования испытуемых композиций на основе глобулинов и апизана на пораженных эшерихиозным энтеротоксином культуре клеток – лимфоцитах были аналогичны таковым, описанным выше.

Результаты микроцитометрического анализа мазков клеток – иммуноцитов из инкубационной среды показали, что из испытанных 9 вариантов композиций наиболее высокой протективной активностью обладала композиция, составленная при объемном соотношении компонентов глобулин : апизан = 0,5:0,5, которая обеспечивала 84,7%-ную выживаемость пораженных эшерихиозным энтеротоксином иммуноцитов.

Исходя из изложенного, нами был приготовлен другой вариант композиционного противоэшерихиозного лечебного препарата «Пабисорб 1», который готовили путем смешивания 10%-ного раствора полиглобулинов и 0,1%-ного раствора апизана в соотношении 1:1, добавляли к смеси 2% высокодисперсной фракции алюмосиликата (монтмориллонита) и продуктов метаболизма B. bifidum из расчета 0,2% к общему объему смеси.

3.4.4 Конструирование экспериментальных образцов унифицированного противоэшерихиозного лечебного композиционного препарата В результате проведенных на предыдущих сериях исследований нами сконструировано 2 экспериментальных образца композиционного противоэшерихиозного лечебного препарата: 1) на основе комплекса глобулинов, этанолового экстракта натуральной биологически активной кормовой добавки «Вита-Форце М», метаболитов и B. bifidum высокодисперсной фракции монтмориллонита («Пабисорб») и 2) на основе тех же компонентов, но лишь с той разницей, что в препарате в качестве усилителя фармакологической активности глобулинов вместо апипрепарата «Вита-Форце М» использован биополимер – адъювант хитозан (апизан) с сохранением количественных соотношений компонентов («Пабисорб 1»).

Полученные по вышеописанной схеме экспериментальные серии композиционных препаратов, в модельных опытах оказались достаточно высокоэффективными, обеспечивая высокую степень выживаемости пораженных эшерихиозным энтеротоксином культур клеток – лимфоцитов в in vitro тест-системе.

Эти препараты в ограниченных (локальных) опытах могли бы быть испытаны в качестве лечебных препаратов при колибактериозах животных. Однако в широких производственных опытах применение их в больших объемах для лечения сельскохозяйственных животных (бычков, подсвинков) нереально, поскольку использованные в опытах продуценты сывороток – кролики не в состоянии обеспечить получение от них в достаточном объеме технологического сырья, ибо прижизненно от 1 кролика получают не более 50-100 мл сывороток, а количество выделяемых глобулинов не превышает 550-1100 мг от одного животного.

Поэтому, с целью получения достаточного количества (объема) сывороток, необходимо использовать крупных сельскохозяйственных животных (телят, поросят).

Для получения иммунных антисывороток в достаточных количествах в качестве продуцентов использовали бычков (3 головы) и боровов массой 85кг (3 головы), которых однократно иммунизировали субъединичной 0,6%ной 4 – пили вакциной в дозе по 5 мл подкожно.

Через 30 дней после иммунизации у животных брали кровь из яремной вены (у бычков) и из хвостовой вены (у боровов), получали сыворотки и выделяли глобулины путем высаливания насыщенным раствором сульфата аммония. Полученные глобулины стандартизировали по белку до 10%, хранили при температуре 4±2оС и использовали по назначению.

Для приготовления второго компонента полиглобулинов – сыворотки реконвалесцентов, в опытах использовали больных колибактериозом телят в СПК «Пошатовский» и поросят в СТФ ООО «Авангард» по 10 животных для каждого вида. Больных колибактериозом животных лечили «Поливалентной сывороткой против колибактериоза телят, ягнят, овец и птиц» в сочетании с антибиотиками (хлортетрациклин) в соответствии с рекомендациями по применению препаратов.

Через 30 дней после проведения соответствующих лечебных мероприятий у переболевших и выживших животных – реконвалесцентов брали пробы крови, получали сыворотки и выделяли глобулины методом высаливания сульфатом аммония. Полученные глобулины стандартизировали путем разведения осадка глобулинов стерильным физиологическим раствором до 10%-ной концентрации, хранили при 4±2оС и использовали в качестве второго компонента полиглобулинов.

Для получения третьего компонента полиглобулинов – тканевых гистоглобулинов, выживших после проведения лечебных мероприятий больных колибактериозом телят и поросят с согласия владельцев хозяйств обескравливали тотально, брали кровь и извлекали внутренние органы (печень, почки, легкие, селезенку, лимфатические узлы). Органы гомогенизировали из полученных элюатов выделяли глобулины по методике, описанной Р.Р. Гайзатуллиным [45]. Полученные тканевые глобулины (гистоглобулины) стандартизировали путем разведения осадков глобулинов до 10%-ной концентрации и в последующем использовали в качестве одного из компонентов полиглобулинового комплекса.

Таким образом, в результате проведенных работ нами получены полиглобулины на основе антисыворотки от 1-кратно иммунизированных 4 – пили вакциной бычков и боровов, сыворотки крови и элюатов органов животных – реконвалесцентов, выживших после лечения общепринятыми средствами при колибактериозе телят и поросят. При этом полученный полиглобулиновый препарат представляет собой комплекс иммуноглобулинов сывороток крови и элюатов из органов и тканей бычков, боровов, телят и поросят, составленных по схеме: 0,6 объема смеси иммуноглобулинов (1:1) бычков и боровов, 0,3 объема смеси глобулинов (1:1) крови указанных животных и 0,1 объема смеси гистоглобулинов (1:1) из печени указанных животных.

Полученный по вышеуказанной схеме полиглобулиновый комплекс был использован в дальнейшем в качестве одного из основных (базовых) компонентов при конструировании композиционного противоэшерихиозного лечебно-профилактического препарата (компонент I).

Для получения композиционного лечебно-профилактического противоэшерихиозного препарата, в соответствии с ранее разработанной в модельных опытах методикой составления композиции экспериментальной серии, брали 7 объемов полиглобулина (компонент I), 3 объема 4%-ного раствора экстракта порошка биологически активной кормовой добавки «Вита-Форце М» (компонент II), к полученной смеси полиглобулинов и экстракта апипрепарата, добавляли порошок продуктов метаболизма B.

bifidum из расчета 0,2% от общего объема смеси (компонент III) и порошок из высокодисперсионной фракции природного минерального сорбента (монтмориллонита) из расчета 2% от общего объема смеси (компонент IV).

Полученную смесь после тщательного перемешивания (гомогенизации) и полного растворения добавленных к смеси компонентов – усилителей, полученный готовый препарат «Пабисорб», разлитый во флаконы емкостью 250-500 см3, закупоренные пробками и закатанные металлическими колпачками, размещали в стерилизационные камеры гамма-установки «Исследователь» с источником излучения Со при мощности экспозиционной дозы 0,63 кГр/г и подвергали гамма-облучению в дозе 20 кГр (2000000 Р) в отделе радиобиологии ФГБУ «ФЦТРБ-ВНИВИ». Готовый препарат хранили в условиях холодильника и в дальнейшем использовали по назначению.

Параллельно готовили композиционный препарат «Пабисорб 1» на основе полиглобулинов и хитозана вместо этанолового экстракта биологически активной кормовой добавки «Вита-Форце М» в препарате «Пабисорб».

В целом в 1 л (1000 мл) композиции, состоящей из смеси компонентов [I] + [II] + [III] + [IV], содержится 104,0 г (10,4%-ный раствор) биологически активных веществ (БАВ), из которых 70 г составляют сывороточные и тканевые глобулины, 12 г сухих экстрактивных веществ фитозоопрепарата «Вита-Форце М», 2 г – продуктов метаболизма B. bifidum и 20 г – высокодисперсной фракции природного минерального сорбента – монтмориллонита.

Как видно из вышеизложенного, нами была приготовлена жидкая (инъекционная) форма композиционного препарата «Пабисорб» для парентерального применения в виде сывороточных (глобулиновых) препаратов.

Учитывая, что в зависимости от формы, характера, напряженности и длительности течения колибактериоза, возникает необходимость длительного перорального применения антибактериальных лекарственных средств, параллельно готовили порошковую (пероральную) форму препарата.

Для получения порошковой (пероральной) формы препарата, использовали натуральную кормовую добавку «Вита-Форце-М», изготовленную в отделе радиобиологии ФГБУ «ФЦТРБ-ВНИВИ».

Для составления композиции «Пабисорб», в расчете на 1 кг (масс.%), брали 630 г порошка препарата «Вита-Форце М», 150 г хвойной муки, 100 г кровяной муки, 100 г бентонита и 20 г метаболита B. bifidum.

После внесения соответствующих компонентов, смесь тщательно перемешивали до образования гомогенной массы, полученную массу фасовали в полиэтиленовые пакеты, вкладывали их в бумажные мешки и хранили в сухом, темном месте при температуре окружающей среды не выше 20оС и относительной влажности воздуха не более 70%.

Изготовленные в результате проведенных работ экспериментальные серии противоэшерихиозных лечебно-профилактических композиционных препаратов («Пабисорб», «Пабисорб 1»), изготовленных как в жидкой (инъекционной), так и порошковой (пероральной) формах, на следующем этапе работы были испытаны на иммунотерапевтическую активность на больных колибактериозом телятах и поросятах в личных подворьях граждан и сельхозпредприятиях Краснооктябрьского и Сеченовского районов Нижегородской области.

3.4.4.1 Изучение токсичности и безвредности препарата «Пабисорб» на организм Перед началом основной части опытов по оценке антиэшерихиозной активности разработанных экспериментальных серий лечебнопрофилактических препаратов «Пабисорб» и «Пабисорб 1», в соответствии с требованиями Фармакологического комитета МЗ РФ, проводили изучение токсичности и безвредности препаратов на лабораторных животных (белые мыши, крысы, морские свинки) путем фармакологических и токсикологических исследований с целью выявления возможного развития и характера побочных явлений, связанных со скармливанием препарата, и установления соотношения между дозами, дающими терапевтический эффект и вызывающими токсические явления.

Для изучения острой токсичности использовали 10,4%-ный раствор инъекционной формы препарата, содержащего 104,0 мг/мл активно действующего вещества (АДВ). Исследования проводились в условиях областной ветеринарной лаборатории (г.Н.Новгород).

Эксперименты проводили на 10 группах белых мышей по 10 животных в каждой – итого 100 мышей обоего пола с массой тела 18-20 г. В первой группе мышам испытуемый препарат задавали перорально в дозе 500 мг/кг, 2-й – 1000, 3-й – 1500, 4-й – 2000, 5-й – 2500, 6-й – 3000, 7-й -3500, 8-й – 4000, 9-й – 4500 мг/кг, животные 10-й группы явились контролем. Опыты показали, что среди мышей, которые получали 2500 мг/кг препарата, произошла гибель двух из десяти подопытных животных. Расчеты ЛД50, проведенные по Г.Н.Першину (1971) при этом показали, что этот показатель при пероральном введении составил 3047 мг/кг.

В другом варианте опытов изучали токсичность препарата при парентеральном (подкожном) введении его белым мышам (100 животных) с использованием тех же доз испытуемого препарата. Установлено, что при однократном подкожном применении препарата ЛД50 для белых мышей составила 2635 мг/кг. Данные результаты говорят о низкой токсичности препарата «Пабисорб» и согласно ГОСТу 12.1.007-76 соответствует IV классу опасности.

Поскольку порошковая форма препарата предполагает длительное использование его в виде кормовой добавки, в следующей серии опытов изучали влияние препарата «Пабисорб» при длительном пероральном поступлении в организм. Для этой цели в опытах использовали 20 крысят – отъемышей, с начальной живой массой 43±2 г и разделенных на 2 группы по 10 животных в каждой. Крысятам 1-й группы давали препарат «Пабисорб» из расчета 100 мг/кг корма, животные 2-й группы получали обычный рацион без кормовой добавки. Препарат скармливали в течение 30 суток.

Динамические наблюдения за животными показали, что крысята в опытной группе охотно принимали корм с добавкой, проявляли

–  –  –

Результаты параллельных гематологических исследований крысят, получавших в составе рациона испытуемый препарат, показали, что длительное скармливание (в течение 30 сут) крысятам глобулиноапифитопрепарата гематоксического действия на систему гемопоэза не оказывало (табл. 13).

Таблица 13 – Влияние препарата «Пабисорб» на систему крови крысят при длительном (30 сут) поступлении его в организм в составе рациона Группа крысят Показатель контрольная опытная

–  –  –

Из данных табл. 15 видно, что композиционный противоэшерихиозный полиглобулиново-апипрепарат не предотвращал гибели животных от гистаминового шока и не ускорял ее по сравнению с контрольной группой.

Полученные данные говорят о том, что композиционное средство не обладает аллергизирующими свойствами.

Для изучения раздражающих свойств испытуемого препарата, последний втирали в кожу кроликов (3 головы) в течение 2-х недель из расчета 25 мг/см2 площади выстриженного участка (7х8 см). Установлено, что в течение всего опыта толщина кожной складки при втирании препарата не изменялась – кожа оставалась безболезненной, гладкой, сохранила эластичность и подвижность. К концу опыта полностью восстанавился шерстный покров, общее состояние животного оставалось удовлетворительным, что свидетельствует об отсутствии у испытуемого препарата раздражающего действия.

Таким образом, результаты изучения влияния экспериментального образца многокомпонентного композиционного препарата «Пабисорб» на организм интактных (здоровых) лабораторных животных показали, что он является малотоксичным (IV класс опасности), не обладает кумулятивным и раздражающим действием на кожу и слизистую оболочку желудка.

Исходя из изложенного были продолжены исследования по изучению его терапевтических свойств.

3.5 Оценка терапевтической эффективности противоэшерихиозного композиционного препарата «Пабисорб» на лабораторных и сельскохозяйственных животных 3.5.1 Изучение лечебного действия препарата «Пабисорб» на зараженных возбудителем эшерихиоза лабораторных животных В качестве in vivo биологической модели эшерихиозного поражения организма использовали белых мышей, а в качестве поражающего агента – референтный штамм возбудителя эшерихиоза поросят – E. coli «КВ-1», синтезирующий адгезиный антиген К99.

Для моделирования эшерихиозной инфекции использовали 100 белых мышей обоего пола живой массой 17-20 г, разделенных на 5 групп по 20 животных в каждой. Животные 1-й группы спустя 24 ч после заражения однократно подкожно получали инъекционную форму препарата «Пабисорб»

в дозе 25 мг/кг по сухому веществу, в объеме 0,1 мл (0,5 мг/мышь);

животным 2-й группы в тех же дозах и аналогичных условиях получали препарат «Пабисорб 1»; животные 3-й группы через 24 ч после заражения в тех же условиях и дозах получали регламентированную при колибактериозе лечебно-профилактическую иммунную сыворотку внутримышечно в 2-3 приема с интервалом 3-4 ч, зараженные животные 4-й группы препараты не получали и они служили контролем заражения; животных 5-й группы не заражали и препараты не вводили и они выступали в качестве биологического контроля.

Экспериментальный эшерихиозный инфекционный процесс у белых мышей 1-4 групп вызывали путем внутрибрюшинного введения им вирулентного штамма возбудителя эшерихиоза E. coli «КВ-1», в дозе 5108 м.к./животное.

Животных контрольных и опытных (зараженных и леченных) групп содержали в идентичных условиях. За животными вели клиническое наблюдение, регистрируя число павших и выживших в соответствующих группах.

Результаты наблюдения за животными показали, что уже через 3-4 ч после заражения у животных появились клинические признаки заболевания:

животные забивались в угол, скучивались, отказывались от корма и воды, не реагировали на внешние раздражители, развивалась адинамия. Первый случай падежа был зарегистрирован через 16 ч, второй – через 19 ч и третий

– через 26 ч после заражения. В течение первых суток после заражения пали 2 белые мыши, на 2-е сут – 6, на 3-е сут – 4 и на 4-е сут – 3 животных. Часть животных была убита и у них тотально брали пробы крови и получали сыворотку для проведения иммуногематологических исследований с определением содержания лейкоцитов, моноцитов, лимфоцитов (общего количества, Т- и В-клеток, а также их субпопуляций Т-хелперов, Тсупрессоров), иммуноглобулинов класса G, фагоцитарной активности нейтрофилов, лизоцимной и бактерицидной активности сыворотки крови.

На вскрытии павших и убитых животных установлено, что патологоанатомические изменения локализовались преимущественно в тонком отделе кишечника и характеризовались анемичностью слизистой оболочки, гиперемией слизистой желудка со студенистым инфильтратом;

катарально-геморрагическим воспалением слизистой тонкого кишечника.

Регионарные лимфатические узлы увеличены, гиперемированы.

Лимфатический аппарат прямой кишки (пейеровы бляшки, солитарные фолликулы) гиперплазирован и гиперемирован. Селезенка имеет темносерую окраску, слегка увеличена в объеме, бугристая, плотная. Печень и почки анемичны, сосуды головного мозга инъецированы кровью, ткань отечна.

Для подтверждения диагноза на эшерихиоз проведены бактериологические исследования материала (фекалий, пробы из органов и тканей) от больных, павших и убитых с диагностической целью животных.

Культуры, полученные из органов зараженных возбудителем эшерихиоза белых мышей, подвергали дальнейшему исследованию с целью определения патогенности выделенных изолятов. Для определения патогенности, белых мышей (по 3 животные) живой массой 16-18 г заражали внутрибрюшинно смесью суспензий агаровых культур, выделенных из 2-х внутренних органов, в дозе 500 млн. микробных клеток. Культуру считали «патогенной» в случае гибели одной или более мышей в течение 2-х сут после заражения.

Результаты динамического наблюдения за контрольными, зараженными и леченными изучаемыми препаратами животными, а также результаты гематологических, иммунологических показателей и микробиологических исследований показали, что при однократном подкожном введении инъекционной формы препаратов «Пабисорб» и «Пабисорб 1» проявлялось их модифицирующее действие, как на течение эшерихиозной инфекции, так и на указанные показатели инфекционного процесса (табл. 16).

–  –  –

Зараженная и леченная препаратом 8,4±0,1 2,80±0,05 0,81±0,06 1,70±0,08 0,80±0,05 «Пабисорб»

Зараженная и леченная препаратом 8,3±0,07 2,75±0,03 0,80±0,01 1,69±0,09 0,79±0,07 «Пабисорб 1»

Зараженная и леченная антиэшерихиозной 8,2±0,1 1,63±0,03 0,5±0,01 1,1±0,03 0,61±0,06 лечебнопрофилактической сывороткой Зараженная 8,2±0,3 1,05±0,1* 0,3±0,01 0,8±0,3* 0,5±0,01* E. coli «КВ-1»

Контрольная 8,6±0,1 3,0±0,3 1,0±0,07 1,9±0,3 0,9±0,1 Из данных таблицы видно, что поражение организма белых мышей возбудителем эшерихиоза сопровождалось развитием лейкопении (уменьшение содержания лейкоцитов в 2,81 раза Р0,01), нейтропении (снижение количества нейтрофилов в 4,5 раза, Р0,001), лимфопении (снижение количества лимфоцитов в 2,57 раза, Р0,01) и моноцитопении (снижение количества моноцитов в 1,83 раза, Р0,01).

Кроме того, результаты проведенных работ показали, что течение эшерихиозной инфекции в зараженном вирулентным штаммом E. coli «КВ-1»

организме сопровождалось существенными отклонениями в системе клеточного и гуморального иммунитета. При этом на момент опытных животных от эшерихиозной интоксикации наступило почти двукратное (в 1,96 раза, Р0,05) снижение содержания В-лимфоцитов при одновременном увеличении (в 1,16 раза, Р0,05) численности Т-лимфоцитов. Повышение содержания Т-лимфоцитов происходило за счет уменьшения Т-хелперов при одновременном увеличении содержания Т-супрессоров.

Снижение количества Т-хелперов при одновременном увеличении количества Т-супрессоров сопровождалось ингибированием синтеза иммуноглобулинов - у пораженных эшерихиозом животных последовало резкое (в 1,86 раза, Р0,01) снижение содержания иммуноглобулинов класса G (IgG) по сравнению с контрольным уровнем, а также снижение бласттрансформирующей активности лимфоцитов (в 1,99 раза, Р0,01).

Принимая во внимание то, что состояние аутомикрофлоры является одним из наиболее свойственных показателей изменения иммунобиологической реактивности организма под действием разнообразных стрессогенов, и для выявления лечебного действия испытуемого препарата представлялось необходимым изучить особенности развития аутоинфекции у животных после заражения возбудителем эшерихиоза и лечения препаратами «Пабисорб» и «Пабисорб 1».

Для отслеживания наиболее характерных изменений аутомикрофлоры при заражении и применении испытуемых лечебных средств, мы ограничились определением частоты высевов и содержания E. coli и Enterobacter на 1 грамм ткани, выросших на среде Эндо. Для этого у павших и убитых в агональной стадии эшерихиозного поражения животных, отбирали пробы материала из тонкого (тощая и подвздошная) отдела кишечника, готовили навески органов по 1 г, гомогенизировали, готовили различные разведения (1:100-1:1000) гомогенатов и по 0,1 мл засевали на дифференциальную среду Эндо. Жидкость вносили на поверхность среды пастеровской петлей и тем же инструментом проводили посев на вторую чашку Петри. Через 1, 2, 3 сут после заражения и лечения животных испытуемыми препаратами, определяли частоту положительных высевов E.

coli и Enterobacter – один из наиболее частых причинных факторов летальных инфекционных осложнений; определяли также количество микроорганизмов на 1 г ткани.

Было установлено, что однократная подкожная инъекция испытуемых средств уже на 3-и сут вызывала значительное снижение частоты высевов E.

coli и Enterobacter из проб тощей и подвздошной кишок, а также достоверное снижение численности микробов на 1 грамм ткани, предотвращая заселение тонкого кишечника условно патогенными грамотрицательными микробами. Таким образом, изучение влияния препаратов на течение и исход экспериментального эшерихиоза показало, что последующее за заражением введение композиционных препаратов «Пабисорб» и «Пабисорб 1» оказывало модифицирующее действие на инфекционный процесс, увеличивая выживаемость зараженных вирулентным штаммом возбудителя эшерихиоза животных.

Результаты изучения влияния препаратов «Пабисорб» и «Пабисорб 1»

на течение и исход экспериментально вызванного эшерихиозного процесса у белых мышей в зависимости от условий и схемы применения испытуемых средств, которые были описаны ранее, представлены в табл. 17.

Таблица 17 – Терапевтическая эффективность препаратов «Пабисорб»

и «Пабисорб 1» на зараженных возбудителем эшерихиоза белых мышей n=20

–  –  –

Числитель – количество выживших животных; знаменатель - % выживаемости.

Из анализа данных таблицы видно, что однократное подкожное введение препаратов «Пабисорб» и «Пабисорб 1» в 5 вариантах опытов оказывало выраженный лечебный эффект, обеспечивая выживаемость 80% зараженных возбудителем эшерихиоза белых мышей в летальной дозе (вариант I) и 75% (вариант II) случаев при гибели 100% животных в контрольной (вариант IV) группе. Применение регламентированных при эшерихиозе средств терапии оказывало менее выраженный лечебнопрофилактический эффект, защищая 55% животных при профилактическом (вариант III).

Таким образом, однократное подкожное введение белым мышам препаратов «Пабисорб» и «Пабисорб 1» после (через 24 ч) заражения вирулентным штаммом возбудителя эшерихиоза, оказывало модифицирующее действие на течение эшерихиозной инфекции и ее исход, обеспечивая выживаемость 75-80% зараженных животных.

3.5.2 Определение оптимальной лечебной дозы препарата «Пабисорб» на поросятах и телятах Перед проведением производственных испытаний по оценке терапевтической эффективности экспериментального образца препарата «Пабисорб», предварительно проводили определение его оптимальной лечебной дозы.

Эксперименты проводили в условиях СТФ ООО «Авангард», стационарно неблагополучном по эшерихиозной диарее поросят. Для определения оптимальной лечебной дозы испытуемого препарата на основе полиглобулинов, экстракта апифитопрепарата, продуктов метаболизма B.bifidum и природного минерального сорбента, было сформировано 6 групп новорожденных поросят живой массой 1,0-1,2 кг по 12 голов в каждой.

Животным опытных групп однократно подкожно вводили композиционный препарат в дозах 1,0; 3,0; 5,0; 7,0 и 10 см3. При этом животные 1-й группы получали испытуемый препарат 10 мг/кг, 2-й – 15 мг/кг, 3-й – 25 мг/кг, 4-й – 35 мг/кг и 5-й – 50 мг/кг. Животным 6-й группы в качестве лечебного средства применяли противоэшерихиозную сыворотку.

Установлено, что однократное применение препарата «Пабисорб» в дозах 5 и 7 см3 (25 и 35 мг/кг) оказывало выраженное лечебное действие при колибактериозе поросят, обеспечивая 75-83,3%-ную выживаемость больных животных. Применение регламентированной при колибактериозе поросят противоэшерихиозной сыворотки позволило защитить лишь 58,3% больных эшерихиозом поросят, что в 1,57 раза ниже, чем в 4-й группе, получавшей подкожно испытуемый препарат «Пабисорб» в дозе 35 мг/кг.

Полученные данные по титрации оптимальной лечебной дозы испытуемого препарата послужили основанием для продолжения опытов по определению оптимальной лечебной дозы препарата «Пабисорб» на другом виде сельскохозяйственных животных – телятах.

Эксперименты проводили в СПК им. 1 Мая Нижегородской области, стационарно неблагополучном по эшерихиозной диарее телят.

Для экспериментов было сформировано 5 групп (по 5 голов в каждой) телят черно-пестрой породы массой тела 20-25 кг 5-10-дневного возраста.

Животным 1-й группы однократно подкожно вводили 10,4%-ный раствор препарата «Пабисорб» в дозе 0,5 см3 (50 мг на 1 голову, 16,6 мг/кг), телятам второй группы – 1,0 см3 (100 мг или 33,2 мг/кг), третьей – 1,5 см3 (150 мг или 55,5 мг/кг), четвертой – 2,0 см3 (200 мг на 1 голову или 66,4 мг/кг). Телятам 5-й группы внутримышечно вводили поливалентную противоэшерихиозную сыворотку в дозе 15 см3 (750 мг на 1 голову или 50 мг/кг). Наблюдение за животными вели в течение 14 сут, учитывая заболеваемость, день начала болезни, длительность болезни, количество павших и выживших, а также среднесуточный прирост живой массы телят за 1-й месяц.

Результаты представлены в табл. 18.

–  –  –

Из представленных в таблице материалов видно, что однократное введение препарата «Пабисорб» в дозах 1,0-1,5 см3 (33,2-55,5, средняя – 44,3 мг/кг) оказывало выраженное профилактическое действие при колибактериозе телят, обеспечивая выживаемость 60-80% телят. Применение регламентированной при колибактериозе поливалентной противоэшерихиозной сыворотки в дозе 15 мл (750 мг на 1 голову) позволило защитить лишь 40% больных эшерихиозом телят, что в 1,5-2 раза ниже, чем во 2-й и 3-й группах соответственно, получавших препарат «Пабисорб» в дозах 1,0-1,5 см3.

Применение препарата в дозе 66,4 мг/кг (2,0 см3) также обеспечивало 80%-ную защиту телят от эшерихиоза, однако увеличение дозы до 66,4 мг/кг невыгодно и нецелесообразно, поскольку при этом эффективность препарата не повышается. Следовательно, оптимальной лечебной дозой препарата «Пабисорб» для новорожденных телят является 1-1,5 см3 (в среднем 44,3 мг/кг живой массы).

Таким образом, результаты проведенных работ показали, что оптимальной защитной дозой препарата «Пабисорб» при эшерихиозе поросят и телят является 35-40 мг/кг живой массы при объеме вводимого препарата 0,7-1,5 см3 соответственно.

3.5.2.1 Испытание лечебной эффективности препарата «Пабисорб»

в условиях хозяйств, неблагополучных по колибактериозу поросят Производственное испытание экспериментальных серий полиглобулино-аписогенного препарата проводили в личных подсобных хозяйствах граждан 3-х населенных пунктов Нижегородской области (с.

Маресево, д. Ждановка, с. Красное), неблагополучных по эшерихиозной диарее поросят.

При этом эшерихиоз протекал в трех формах: энтеритной (с.

Маресево), энтеротоксемической (отечной) (д. Ждановка) и септической (с.

Красное).

При энтеритной форме регистрировали профузный понос, лихорадку, вялость, угнетение. Больные отказывались сосать, быстро худели, усиливалась жажда. Щетина имела матовый цвет и была взъерошенной.

Септическая форма болезни протекала в острой форме, сопровождалась повышением температуры тела и высокой смертностью.

Отмечали отсутствие аппетита, угнетение общего состояния, нарушение координации движения. Иногда наблюдали диарею. Из крови и органов выделяли E. coli.

В одном из обследованных хозяйств (д. Ждановка), эшерихиоз протекал в энтеротоксемической форме с наличием токсических явлений и отеков у поросят-отъемышей. Заболевание начиналось с легких расстройств координации движения, наблюдали отказ от корма, скоропроходящий понос, иногда наблюдалась рвота, походка становилась шаткой, животные зарывались в подстилку, взвизгивали. На этом фоне появлялись симптомы поражения центральной нервной системы - повышение возбудимости на внешние раздражители, мышечная дрожь, значительные нарушения координации движений (плавательные движения ногами при лежании на боку, движения по кругу), парезы и параличи конечностей. Наиболее ранними и характерными симптомами болезни выступали отеки в подкожной клетчатке, особенно в области век, лба, в подгрудке и подчелюстном пространстве. У больных наблюдали изменение голоса – он становился хриплым, лающим. Со стороны сердца устанавливали тахикардию, учащение пульса до 200 ударов в минуту. Дыхание становилось учащенным и затрудненным, появлялась одышка. На коже живота, подгрудка, ушей и конечностей выступала сыпь. Болезнь длилась несколько часов (3-15), а у некоторых – до 2-3 суток, оканчивалась чаще гибелью животных от асфиксии.

С учетом указанных форм болезни, поросята в обследованных хозяйствах были разделены на 7 групп по 20 голов в 1-6-й и 10 – в 7-й группе с характерными признаками эшерихиозной диареи.

Поросятам-сосунам 1-й и 2-й групп, больных энтеритной и септической формой эшерихиозной диареи соответственно, однократно подкожно вводили композиционный полиглобулино-аписогенный препарат «Пабисорб» в дозе 40 мг/кг в объеме 1,0 см3. Поросятам 3 группы внутримышечно вводили поливалентную противоэшерихиозную сыворотку в дозе 50 мг/кг по сухому веществу в объеме 10 см3 (контроль). При этом суточную дозу сыворотки вводили дробно с интервалом в 5-6 часов.

Поросятам-отъемышам 4-й группы однократно подкожно вводили препарат «Пабисорб» в дозе 50 мг/кг в объеме 1,5 см3. Поросят-отъемышей 5-й группы в течение 20 дней кормили рационом, содержащим 20 г порошка натуральной биологически активной кормовой добавки «Вита-Форце М».

Животных 6-й группы, больных энтеротоксемической формой эшерихиоза (отечная болезнь) подвергали комбинированному пероральнопарентеральному лечению путем 1-кратного подкожного введения препарата «Пабисорб» в дозе 40 мг/кг в объеме 1,0 см3 и добавления в корм порошка «Вита-Форце М» из расчета 20 г в день на 1 голову в течение 20 дней.



Pages:     | 1 |   ...   | 2 | 3 || 5 | 6 |   ...   | 9 |

Похожие работы:

«Мухаммед Тауфик Ахмед Каид ХАРАКТЕРИСТИКА ГЕНОТИПОВ С ХОРОШИМ КАЧЕСТВОМ КЛЕЙКОВИНЫ, ОТОБРАННЫХ ИЗ ГИБРИДНЫХ ПОПУЛЯЦИЙ АЛЛОЦИТОПЛАЗМАТИЧЕСКОЙ ЯРОВОЙ ПШЕНИЦЫ МЯГКОЙ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ДНК-МАРКЕРОВ Специальность 06.01.05 – селекция и семеноводство сельскохозяйственных растений Диссертация на соискание ученой степени кандидата сельскохозяйственных наук Научный...»

«АБДУЛЛАЕВ Ренат Абдуллаевич ГЕНЕТИЧЕСКОЕ РАЗНООБРАЗИЕ МЕСТНЫХ ФОРМ ЯЧМЕНЯ ИЗ ДАГЕСТАНА ПО АДАПТИВНО ВАЖНЫМ ПРИЗНАКАМ Шифр и наименование специальности 03.02.07 – генетика 06.01.05 – селекция и семеноводство сельскохозяйственных растений ДИССЕРТАЦИЯ на соискание учёной степени кандидата...»

«Вафула Арнольд Мамати РАЗРАБОТКА ЭЛЕМЕНТОВ ТЕХНОЛОГИИ ВЫРАЩИВАНИЯ ПАПАЙИ ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ ЗДОРОВОГО ПОСАДОЧНОГО МАТЕРИАЛА И ЭКСТРАКТОВ С БИОПЕСТИЦИДНЫМИ СВОЙСТВАМИ ДЛЯ ЗАЩИТЫ ЕЕ ОТ ВРЕДНЫХ ОРГАНИЗМОВ Специальности: 06.01.07 – защита растений 06.01.01 – общее земледелие и растениеводство Диссертация на соискание ученой степени кандидата сельскохозяйственных...»

«БРИТАНОВ Николай Григорьевич ГИГИЕНИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ ПЕРЕПРОФИЛИРОВАНИЯ ИЛИ ЛИКВИДАЦИИ ОБЪЕКТОВ ПО ХРАНЕНИЮ И УНИЧТОЖЕНИЮ ХИМИЧЕСКОГО ОРУЖИЯ 14.02.01 Гигиена Диссертация на соискание ученой степени доктора медицинских наук Научный консультант: доктор медицинских наук, профессор...»

«Цвиркун Ольга Валентиновна ЭПИДЕМИЧЕСКИЙ ПРОЦЕСС КОРИ В РАЗЛИЧНЫЕ ПЕРИОДЫ ВАКЦИНОПРОФИЛАКТИКИ. 14.02.02 – эпидемиология ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени доктора медицинских наук Научный консультант: заслуженный деятель науки РФ, лауреат Государственной премии СССР профессор, доктор медицинских наук Ющенко Галина Васильевна Москва – 20 Содержание...»

«Сухарьков Андрей Юрьевич РАЗРАБОТКА МЕТОДОВ ОЦЕНКИ ОРАЛЬНОЙ АНТИРАБИЧЕСКОЙ ВАКЦИНАЦИИ ЖИВОТНЫХ 03.02.02 «Вирусология» Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: кандидат ветеринарных наук, Метлин Артем Евгеньевич Владимир 2014 ОГЛАВЛЕНИЕ 1 ВВЕДЕНИЕ 2 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 2.1 Характеристика возбудителя бешенства 2.2 Эпизоотологические...»

«Доронин Максим Игоревич ЭКСПРЕСС-МЕТОДЫ ВЫЯВЛЕНИЯ ВИРУСА ИНФЕКЦИОННОГО НЕКРОЗА ГЕМОПОЭТИЧЕСКОЙ ТКАНИ ЛОСОСЕВЫХ РЫБ 03.02.02 «Вирусология» Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: доктор биологических наук, Мудрак Наталья Станиславовна Владимир 2015 ОГЛАВЛЕНИЕ 1 ВВЕДЕНИЕ 2 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 2.1 Характеристика возбудителя инфекционного...»

«Карачевцев Захар Юрьевич ОЦЕНКА ПИЩЕВЫХ (АКАРИЦИДНЫХ) СВОЙСТВ РЯДА СУБТРОПИЧЕСКИХ И ТРОПИЧЕСКИХ РАСТЕНИЙ В ОТНОШЕНИИ ПАУТИННОГО КЛЕЩА TETRANYCHUS ATLANTICUS MСGREGOR Специальность: 06.01.07 – защита растений Диссертация на соискание учёной степени кандидата биологических наук Научный руководитель: Попов Сергей...»

«СЕРГЕЕВА ЛЮДМИЛА ВАСИЛЬЕВНА ПРИМЕНЕНИЕ БАКТЕРИАЛЬНЫХ ЗАКВАСОК ДЛЯ ОПТИМИЗАЦИИ ФУНКЦИОНАЛЬНО-ТЕХНОЛОГИЧЕСКИХ СВОЙСТВ МЯСНОГО СЫРЬЯ И УЛУЧШЕНИЯ КАЧЕСТВА ПОЛУЧАЕМОЙ ПРОДУКЦИИ Специальность 03.01.06 – биотехнология ( в том числе бионанотехнологии) Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель Доктор биологических наук, профессор Кадималиев Д.А. САРАНСК 2014 ОГЛАВЛЕНИЕ ВВЕДЕНИЕ.....»

«Моторыкина Татьяна Николаевна ЛАПЧАТКИ (РОД POTENTILLA L., ROSACEAE) ФЛОРЫ ПРИАМУРЬЯ И ПРИМОРЬЯ 03.02.01 – Ботаника Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: доктор биологических наук, старший научный сотрудник Н.С. Пробатова Хабаровск Содержание Введение... Глава 1. Природные...»

«Куяров Артём Александрович РОЛЬ НОРМАЛЬНОЙ МИКРОФЛОРЫ И ЛИЗОЦИМА В ВЫБОРЕ ПРОБИОТИЧЕСКИХ ШТАММОВ ДЛЯ ПРОФИЛАКТИКИ АЛЛЕРГИЧЕСКИХ ЗАБОЛЕВАНИЙ У СТУДЕНЧЕСКОЙ МОЛОДЕЖИ СЕВЕРА 03.02.03 – микробиология 03.01.06 – биотехнология (в том числе бионанотехнологии) Диссертация на соискание учёной степени кандидата...»







 
2016 www.konf.x-pdf.ru - «Бесплатная электронная библиотека - Авторефераты, диссертации, конференции»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.