WWW.KONF.X-PDF.RU
БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА - Авторефераты, диссертации, конференции
 


Pages:     | 1 | 2 || 4 |

«Микробиологические и экологические особенности штаммов иерсиний, циркулирующих на территории Якутии ...»

-- [ Страница 3 ] --

Проведенный анализ показал, что эффективность метода ПЦР значимо выше, чем эффективность бактериологического метода: 12,4% (95% ДИ по методу Клоппера-Пирсона 11,1% 8-13,7%) и 0,8% ( 95% ДИ по методу Клоппера – Пирсона 0,5%-1,1), соответственно, р 0,00001 ( критерий хи –квадрат).

–  –  –

также 10 штаммов других видов иерсиний (Таблица 7).

Культуры Y. enterocolitica биотипа 1А изолированы из проб овощей (картофель, капуста, свекла, морковь, лук репчатый) местного хозяйства и привозных (Благовещенск, Омск, Новосибирск, КНР), а также выделены из смывов с объектов окружающей среды (тара для овощей, стеллажи, поддон, доска для разделки овощей, посуда для салатов, овощерезка); по 1 культуре выделено из воды открытых водоемов, почвы и из погадок хищных птиц.

10 культур иерсиний принадлежали другим видам: 1 культура Y. kristensenii выделена из смыва со стеллажа, 2 культуры из картофеля, из пробы воды открытых водоемов (озеро) выделена 1 культура, из проб погадок хищных птиц выделено 2 культуры; 1 культура Y. frederiksenii выделена из смыва с тары для хранения привозного картофеля; 2 культуры Y. intermedia выделены из местного картофеля и смыва с тары для хранения овощей; 1 культура Yesinia, не идентифицированная до вида, из привозного картофеля (Омск).

Сравнение эффективности бактериологического метода и метода ПЦР при обнаружении Y. enterocolitica из материала с объектов окружающей среды (смывы, овощи, вода открытых водоемов, почва, прочие) проводили при помощи критерия хи-квадрат (Таблица 8).

Проведенный анализ показал, что эффективность метода ПЦР значимо выше, чем эффективность бактериологического метода: 6,4 % (95% ДИ по методу Клоппера-Пирсона 4,1;-9,4%), и 0,3 % (95% ДИ по методу Клоппера-Пирсона 0,2%-0,3%), соответственно, р0,00001 (критерий хи-квадрат).

При исследовании смывов методом ПЦР из различных объектов окружающей среды частота находок ДНК Y. enterocolitica составило 6,4 % от общего числа исследованных смывов (Таблица 8). При этом ДНК генов ail, yscQ в смывах не были обнаружены.

Таким образом, полученные данные свидетельствуют об интенсивности циркуляции в объектах окружающей среды Y. enterocolitica, а также других видов иерсиний, ранее не обнаруженных на территории изучения.

Таблица 8. Частота обнаружения Y.

enterocolitica из материала с объектов окружающей среды (смывы, овощи, ) бактериологическим методом и ПЦР в 2002-2012 гг.

–  –  –

0,1-0,4 0 0 0 2002 4289 8 0,2 0,0-0,3 0 0 0 0 2003 3439 4 0,1 0,1-0,3 0 0 0 0 2004 3518 5 0,1

–  –  –

3.2. Микробиологический мониторинг объектов окружающей среды в осваиваемых промышленных районах Якутии На территории Якутии строится 1300 километровый участок магистрального нефтепровода «Восточная Сибирь – Тихий океан» (ВСТО), расположенный на территории Ленского, Олекминского, Алданского и Нерюнгринского районов. Регион, к которому привязан обозначенный мегапроект- нефтепровода ВСТО, отнесен к 5-й, Южной медико-географической зоне (МГЗ) Якутии с населением 125 тыс. 353 человек, в том числе, его составляет 87,8% приезжих и 12,2% коренных жителей и включает Нерюнгринский, Алданский, Олекминский, Ленский районы.

В 2002-2012 гг. в этих районах на участках строительства Талакан-Витимнефтегазового комплекса ВСТО нефтепровода (Нагорный, Намныр, Таежный районы) были отловлены мелкие млекопитающие (Таблицы 9, 10).

Бактериологическим методом, ИФА и ПЦР было исследовано 382 пробы органов мелких млекопитающих (грызунов), выделена 1 культура Y.enterocolitica биотипа 2 серотипа О:9, 2 культуры Y. kristensenii. Методом ИФА из 40 исследованных проб грызунов в 5 пробах был обнаружен антиген Y. pseudotuberculosis серотипа О:1 (12,5%). Методом ПЦР исследовано 52 грызуна, у них определены ДНК Y.

enterocolitica в 11 пробах, что составило (21,1%). Бактериологическим методом исследованы 4 пробы воды из открытых водоемов (озера) и 3814 смывов с овощей в Ленском, Олекминском районах, иерсинии не обнаружены.

Таким образом, при изучении распространения иерсиний на территории ВСТО нефтепровода и Талакан-Витим - нефтегазового комплекса различными методами иерсинии были обнаружены только в пробах от грызунов.

Таблица 9. Результаты бактериологического исследования проб из объектов окружающей среды на участках освоений промышленных территорий Якутии в 2002-2012 гг.

–  –  –

Скрининговые микробиологические исследования с целью установления циркуляции иерсиний впервые проведены в зонах строительства Накынского алмазодобывающего комплекса в Нюрбинском районе, в Арктической зонеприиска Алмазы – Анабара в Анабарском районе, Верхнемунском алмазном месторождении в Оленекском районе. Пробы были отобраны из объектов окружающей среды, всего 4563 пробы, изолировано 64 культуры иерсиний, что составило 1,4% от общего числа исследованных проб. Из 729 проб органов мелких млекопитающих, выделено 60 культур иерсиний, что составило 8,2% от общего числа исследованных проб органов, в том числе, 9 культур Y.

enterocolitica (3 штамма биотипа 4), 51 культура Y. kristensenii. Из отобранных 19 проб воды открытых водоемов, выделена 1 культура Y. kristensenii; из 53 проб почвы - 1 культура Y.enterocolitica биотипа 1А; из 6 проб погадок хищных птиц культуры Y. kristensenii. Из 3732 смывов и материала из гнезд грызунов и других объектов иерсинии не выделены (Таблица 9, 11).

–  –  –

На территориях указанных районов впервые исследована 231 проба из объектов окружающей среды: почвы, грызунов, воды с помощью метода ПЦР.

Таблица 12. Частота обнаружения ДНК иерсиний методом ПЦР в зонах алмазодобывающего комплекса в Арктических районах Якутии (Нюрбинский, Анабарский, Оленекский район) в 2002-2012 гг.

–  –  –

Видно, что ДНК Y. pseudotuberculosis определена в 1 пробе воды, а также ДНК Y.enterocolitica в 82 пробах (почва, грызуны, вода, прочие), частота обнаружения ДНК иерсиний составила 0,4% и 35,4%, соответственно (Таблица 12).

Таким образом, в зоне алмазодобывающего комплекса иерсинии выделены, главным образом, в пробах от грызунов, а также из погадок хищных птиц, воды открытых водоемов и почвы.

Строительство участка железной дороги Беркакит – Томмот – Кэрдэм – Нижний Бестях с протяженностью 1239 км, проходит через населенные пункты Нерюнгринского, Алданского, Мегино-Кангаласского, Хангаласского районов.

На участке Томмот – Кэрдэм – Нижний – Бестях и г. Якутск, с протяженностью 436 км.

Для исследования были отловлены 239 особей мелких млекопитающих. Из органов мелких млекопитающих изолировано 4 культуры Y. pseudotuberculosis, 3 культуры Y. enterocolitica 1А (Таблица 13).

Таблица 13. Частота выделения иерсиний из объектов окружающей среды на участках прохождения железной дороги Беркакит – Томмот – Кэрдэм Нижний Бестях в 2002-2012 гг.

№ Объект Всего Виды иерсиний исследования выделено Биотип Y. pseudotuberculosis Всего проб

–  –  –

Были исследованы 11836 смывов с объектов окружающей среды, овощей и фруктов, выделено 105 культур иерсиний, что составило 0,9% от общего числа исследованных проб. 100 культур Y. enterocolitica принадлежали серотипам О:6,31; О:7,8; О:5 биотипу 1А, серотипам О:3; О:9 биотипам 2, 4, соответственно, что составило 95,2% от общего числа выделенных культур иерсиний; выделено также 3 культуры Y. kristensenii, 1 культура Y.intermedia, 1 культура Y.

frederiksenia.

На участках прохождения железной дороги впервые методом ПЦР исследована 350 проба из объектов окружающей среды (почва, грызуны, вода, прочие). В результате определена ДНК Y. pseudotuberculosis в 4 пробах от мелких млекопитающих, а также ДНК Y. enterocolitica в 162 пробах (почва, грызуны, вода, прочие). Частота обнаружения ДНК Y. pseudotuberculosis составила 1,1%;

Y. enterocolitica - 46,2% от числа исследованных проб (Таблица 14).

Таблица 14. Частота обнаружения иерсиний методом ПЦР на участках прохождения железной дороги Беркакит – Томмот – Кэрдэм – Нижний Бестях в 2002-2012 гг.

–  –  –

Из таблицы 15 видно, что бактериологическим методом наиболее часто иерсинии выделяли из проб, собранных в Амгинском и Нерюнгринском районах, что составило 1,7% и 1,4%, соответственно. В этих районах выделяли Y.

enterocolitica биотипа 1А.

–  –  –

Таким образом, на участках прохождения железной дороги Беркакит – Томмот – Кэрдэм – Нижний Бестях иерсинии выделены от грызунов и из других объектов внешней среды.

В сельскохозяйственных и непромышленных районах (Вилюйская группа районов (Сунтарский, Вилюйский, Верхневилюйский); Центральные (Намский, Горный, Усть-Алданский, Таттинский, Чурапчинский); Приполярные Жиганский, Кобяйский, Томпонский); Заполярные (Верхнеколымский, (Абыйский, Булунский, Верхоянский, Среднеколымский, Нижнеколымский, Оймяконский районы); Южный (Усть-Майский ) исследована 23871 проба, в том числе, от мелких млекопитающих – 2100 проб. При этом выделено 8 культур Y.

enterocolitica биотипа 1А. Исследовано также 20 проб воды открытых водоемов, 10 проб почвы, 47 проб погадок хищных птиц, помет, смывы и пробы овощей, всего 21694, выделено 4 культуры Y. enterocolitica биотипа 1А (Таблица 16).

–  –  –

В параллельных исследованиях 2177 проб методом ПЦР обнаружена ДНК Y. enterocolitica в 64 (2,9%) пробах из органов мелких млекопитающих. Y.

рseudotuberculosis при исследованиях не обнаружена. Из таблицы видно, что иерсинии были выделены от мелких грызунов, а также из смывов с объектов окружающей среды.

Таким образом, анализируя результаты скрининговых микробиологических исследований образцов из окружающей среды, установлено, что в районах промышленного освоения территорий Якутии: строительства нефтепровода «ВСТО», в зонах алмазодобывающего комплекса в Арктических районах, на участках прохождения железной дороги - иерсинии обнаруживали значительно чаще по сравнению с сельскохозяйственными районами бактериологическим методом: 0,86±0,06% и 0,03±0,01%, соответственно, а также методом ПЦР:

41±1,96% и 2,9±0,36%, соответственно. Наибольшее число штаммов иерсиний изолировано в Амгинском и Неюнгринском районах (железнодорожный транспортный узел) в г. Якутске и его окрестностях. Установление источников и факторов распространения иерсиний на территориях промышленного освоения Якутии позволяет сделать заключение о циркуляции на указанных территориях не только Y. enterocolitica патогенных биотипов, но и Y. kristensenii, патогенность которых в данном исследовании установить не удалось.

Высокая частота обнаружения иерсиний при проведении лабораторного контроля объектов окружающей среды и мелких млекопитающих методом ПЦР, надо полагать, обусловлена не только большей чувствительностью молекулярногенетических методов, но и экологическими особенностями персистенции иерсиний в условиях пониженных температур Крайнего Севера и других условий сохранения психрофильных микроорганизмов этих видов. Комплексный подход, сочетающий молекулярно-генетический и бактериологический методы исследования, существенно повышает эффективность лабораторной диагностики, равно как и мониторинговых исследований за циркуляцией иерсиний. В то же время, положительные результаты ПЦР могут служить сигнальными показателями для дальнейших целенаправленных бактериологических исследований, а также дальнейшего углубленного изучения культур иерсиний.

Выделение бактерий рода Yersinia в объектах окружающей среды свидетельствует о наличии благоприятных условий для циркуляции патогенных и потенциально патогенных иерсиний на исследованных территориях. Объекты, из которых были выделены иерсинии (грызуны, вода, почва, овощи, фрукты), могут обуславливать возникновение заболеваний иерсиниозной этиологии у людей, проживающих на территории республики. Однако, отсутствие современной клинико-лабораторной диагностики в первичном звене ЛПО не позволяет достоверно выявлять и регистрировать эти заболевания, которые, возможно, регистрируются как ОКИНЭ.

Все вышесказанное определило необходимость проведения ретроспективных серологических обследований населения в промышленных районах с целью установления истинной заболеваемости иерсиниозами.

–  –  –

При определении вирулентности штаммов в РА на стекле со СВИ положительные результаты получены со всеми 3-мя исследуемыми штаммами Y.

pseudotuberculosis и 10-ю штаммами Y. enterocolitica из 99 исследуемых штаммов, что составляет 12,7%.

4.2. Применение молекулярно-генетических методов для определения патогенных свойств иерсиний Данных, посвященных изучению непатогенных, потенциально-патогенных или «редких» видов иерсиний и их возможной роли в патогенезе заболеваний человека и животных, недостаточно, чтобы на данном этапе оценить их истинное этиологическое значение. Остаются неясными многие механизмы функционирования отдельных генетических детерминант иерсиний, ответственных за экспрессию факторов вирулентности. Существуют также различия в проявлении патогенных свойств не только в пределах видов иерсиний, но также внутри отдельных серологических вариантов у отдельных представителей от выраженной степени до их отсутствия. В этой связи аргументация этиологической значимости изолированных иерсиний является обязательной. В то же время, углубленное исследование непатогенных видов иерсиний с применением молекулярно-генетических методов открывает новые возможности для установления их этиологической значимости в развитии оппортунистических инфекций и разработке более специфичных и чувствительных методов диагностики инфекций.

Результаты изучения фенотипических и молекулярно-генетических особенностей иерсиний, циркулирующих в условиях Крайнего Севера, вносят существенный вклад в фундаментальные представления о циркуляции природных популяций микроорганизмов, их патогенном потенциале и структурной организации, обусловленной экологической средой обитания в регионе. В настоящее время значительное место отведено методам генетического типирования иерсиний, интерес к которым в последние годы заметно возрастает.

Эти методы используются для изучения генетического разнообразия иерсиний, сходства и различий популяций, циркулирующих в разных странах мира, в том числе, в регионах России.

–  –  –

Из 164 смывов из объектов торговли и овощей ДНК Y. enterocolitica обнаружена в 47 пробах (28,6%); из 199 проб мелких млекопитающих - в 45 пробах (22,6%); из 15 проб воды открытых водоемов - в 9 пробах (60%); из 28 образцов фекалий крупного рогатого скота - в 4 пробах (14,2%); из 23 образцов органов свиней - в 14 образцах (60,8%); при исследовании проб помета инкубаторских кур - результаты были отрицательны.

В 2011-2012 гг. метод ПЦР был внедрен в клиническую практику. В результате обследования 203 больных, в том числе 32 детей с состоянием дисбиоза (амбулаторные пациенты) и 171 стационарных больных из кишечного отделения Якутской городской инфекционной клинической больницы с диагнозами ОКИ, ОГЭК. Частота обнаружения ДНК Y. enterocolitica у больных составила 6,4%, в том числе, у взрослых - 5,8%, у детей - 9,3% (Таблица 20).

Таблица 20. Частота обнаружения ДНК Y. еnterocolitica в материале от больных Контингент Всего проб Обнаружена ДНК Y. enterocolitica

–  –  –

4.2.2. Молекулярно-генетическая характеристика штаммов по наличию некоторых генетических детерминант вирулентности Учитывая особенность иерсиний, различаться по признаку патогенности, все изолированные культуры изучены на наличие некоторых генетических детерминант вирулентности.

В Референс – центре по мониторингу за иерсиниозами НИИ эпидемиологии и микробиологии имени Пастера (г. Санкт – Петербург) совместно проведена основная работа по изучению генетических характеристик бактерий рода Yersinia, выделенных на территории Якутии, в том числе, в Арктических районах.

Впервые изучена генетическая характеристика штаммов, выделенных на территории Якутии, по плазмидным и хромосомным генетическим детерминантам вирулентности: аil, ystА, ystB, ypm А/С, irp2, yscQ (рYV), ykst.

С целью выявления генов, локализованных на плазмиде вирулентности и хромосомных генов, исследован 171 штамм, в том числе, Y. pseudotuberculosis - 3 штамма, Y. enterocolitica – 99, Y. kristensenii - 50, Y. intermedia – 2, Y. frederiksenii – 2, не идентифицированные до вида Yersinia –15 штаммов.

Результаты исследования показали, что у 3 штаммов Y. рseudotuberculosis выявлен хромосомный ген, кодирующий суперантиген (ypm А/С), а также ген, локализованный на плазмиде вирулентности иерсиний pYV 42-48 МДа (yscQ). У 4 штаммов Y. kristensenii определен ген ykst. У 10 штаммов Y. еnterocolitica биотипов 2, 4 были обнаружены генетические детерминанты вирулентности:

локус прикрепления и инвазии - ген аil, ген термостабильного энтеротоксина ystА. У 71 штаммов Y. еnterocolitica биотипа 1А при анализе генома выявлено наличие хромосомного гена с которым связывают продукцию ystВ, термостабильного энтеротоксина, играющего важную роль в патогенезе диарей.

Это свидетельствует о том, что изолированные культуры иерсиний обладают детерминантами патогенности.

4.2.3. Изучение генетических характеристик штаммов, обусловленных генами gyrB и ompF Отдельные исследования по изучению бактерий рода Yersinia проведены совместно с к.м.н. Исаевой М.П. в Тихоокеанском институте биоорганической химии ДВО РАН, г. Владивосток. Изучены 68 штаммов, выделенные из объектов окружающей среды и от больных, в том числе, 6 – Y. pseudotuberculosis, 45 – Y.

enterocolitica 1А, 2,4 биотипов; 2 – Y. kristensenii, 15- Y. spp.

Существуют факторы, отражающие адаптационный характер в эволюции микроорганизмов, при постепенном приспособлении к различным условиям существования в освоенной среде обитания, одними из них являются порины.

Порины частично экспонированы на поверхности НМ и подвергаются разнообразным воздействиям окружающей среды. Идентификацию патогенных видов рода Yersinia осуществляли методом многопраймерной ПЦР на основе выявления гена ompF, кодирующего неспецифический порин OmpF.

Для быстрой детекции бактерий рода Yersinia и дифференциации патогенных видов Y. pestis, Y. pseudotuberculosis и Y. enterocolitica штаммы были разделены на четыре группы: Y. spp. (один ПЦР-фрагмент длиной 450 п.н.), Y.

pseudotuberculosis (два ПЦР-фрагмента - 426 и 756 п.н.), Y. enterocolitica (два ПЦР-фрагмента - 465 и 663 п.н.) и Y. enterocolitica subsp. palearctica (три ПЦРфрагмента - 465, 663 и 270 п.н.). Распределение по группам было следующим: в группе Y. spp - 22 штамма, из них 17 были ранее определены как Y. enterocolitica 1A, 2 штамма - Y. kristensenii и 3 штамма - Y. spp. В группе Y. pseudotuberculosis – 6 штаммов Y. pseudotuberculosis. В группе Y. enterocolitica - 11 штаммов Y.

enterocolitica и в группе Y. enterocolitica subsp. palearctica - 20 штаммов Y.

enterocolitica. Была найдена группа, которая включала 9 штаммов Y. enterocolitica, дающих два ПЦР-фрагментами длиной 465 и 270 п.н.

Известно, что является гетерогенным видом по Y. enterocolitica биохимическим, серологическим и генетическим характеристикам, в соответствии с которыми выделены два подвида (Y. enterocolitica subsp.

palearctica и Y. enterocolitica subsp. enterocolitica), шесть биотипов и более 50 серотипов. В связи с этим, проведен углубленный анализ исследуемых штаммов Y. enterocolitica для точной видовой идентификации и молекулярно-генетической характеристики. Известно, что определение нуклеотидных последовательностей маркерных генов способствует проведению более глубокого эволюционного, таксономического и филогенетического анализа.

Рисунок 6. Филогенетическое дерево иерсиний, построенное методом ближайших соседей на основе гена gyrB1.

Символом показаны штаммы исследуемых иерсиний, последовательности остальных 1 штаммов иерсиний представлены в базе данных GeneBank.

–  –  –

*Представлены штаммы, для которых выполнено секвенирование гена gyrB.

2 ** N – количество исследованных штаммов, n – количество ystB-положительных штаммов.

подтверждает гетерогенную структуру GyrB-генотипирование Y.

enterocolitica биотипа 1А.

Более глубокий анализ генетической структуры популяции Y. enterocolitica был выполнен в формате простой ПЦР, отдельно с каждой парой праймеров, направленных на наиболее вариабельные участки гена ompF Y. enterocolitica. Как видно из таблицы 21, наибольшее число штаммов представлено Y11-подобным (Y. enterocolitica) вариантом порина.

Вторую по численности группу составили штаммы с IP2222-подобным вариантом порина, именно эти штаммы в многопраймерном ПЦР-анализе попадали в группу Yersinia spp. Полученные данные еще раз подтверждают сложную генетическую структуру популяции Y. enterocolitica, циркулирующей на территории Якутии.

Таким образом, установлена циркуляция различных видов Yersinia в условиях вечной мерзлоты. Установлено генетическое разнообразие штаммов, обусловленное гетерогенностью генов gyrB и Впервые изучены ompF.

генетические особенности родственных связей между штаммами и популяциями иерсиний на основе gyrB-генотипирования, циркулирующих на территории Якутии. В результате проведенного анализа выявлено, что на общем филогенетическом дереве иерсиний Y. enterocolitica группируются со штаммами биотипа 1А, формируя собственную ветвь в подвиде Y. enterocolitica. Кроме того, gyrB некоторых штаммов Y. kristensenii и Y. intermedia демонстрируют высокий показатель дивергенции, и надо полагать, что это может указывать на принадлежность к новым вариантам иерсиний, формирующихся под влиянием местных экологических условий.

Глава Серологический скрининг антител к возбудителям 5.

псевдотуберкулеза и кишечного иерсиниоза в сельскохозяйственных и промышленных улусах (районах) Якутии В 2002-2012 гг. обследовано 1687 больных и здоровых лиц серологическими методами с диагностической целью и ретроспективно в целях мониторинга заболеваемости иерсиниозами (в районах промышленного освоения и в сельскохозяйственных населенных пунктах). С помощью РНГА обследовано 1687 ОСК, обнаружены антитела к возбудителю псевдотуберкулеза – в 93 ОСК (5,5%), к возбудителю кишечного иерсиниоза О:3 – в 337 ОСК (19,9%), О:9 – в 14 ОСК (0,8%) (Рисунок 7).

Рисунок 7. Результаты определения антител к возбудителям иерсиниозов методом РНГА (%) в ОСК больных и здоровых лиц Методом ИФА с использованием тест- систем производства ООО «Омникс»

и ЗАО «Вектор-Бест» исследовано 140 ОСК (из числа ОСК, указанных выше);

IgM обнаружены в 14 ОСК (10%), IgG- в 5 (3,5%). 30 ОСК от больных также исследованы с использованием тест- системы, разработанной ТИБОХ ДВО РАН, антитела к возбудителю псевдотуберкулеза обнаружены в 11 ОСК (36,6%), к возбудителю кишечного иерсиниоза в 12 (40%) (Таблица 22).

–  –  –

Из таблицы видно, что в ОСК, полученных от здорового населения из сельскохозяйственных и промышленных районов, методом РНГА, обнаружено практически одинаковое количество ОСК, содержащих противоиерсиниозные антитела – 22,7% и 25,1%, соответственно. ОСК, полученные от больных людей с различной патологией, чаще содержали противоиерсиниозные антитела по сравнению с ОСК, полученных от здоровых людей – 33%±2,31 и 24,1%±1,2 (р0,05), соответственно.

–  –  –

ОСК от пациентов были исследованы с помощью РНГА. Установлено, что антитела к Y. pseudotuberculosis обнаружены в 29 ОСК, к Y. еnterocolitica О:3 в 108 ОСК, что составило 6,9% и 26%, соответственно. Видно, что антитела к возбудителям иерсиниозов обнаружены среди всех групп больных.

В 2011-2012 гг. методом ИФА исследовано 96 ОСК от больных, в том числе от 52 больных из инфекционного отделения с диагнозами ОГЭК, ОКИ.

Обнаружены IgM в 9 ОСК (9,3%), IgG в 2 ОСК (2%), в том числе, в 3 ОСК, полученных от больных с ОКИ.

ОСК 30 больных были исследованы методом ИФА, с использованием тестсистем, разработанных в Тихоокеанском институте биоорганической химии ДВО РАН на основе видо- и родоспецифических белков–поринов наружной мембраны Y. рseudotuberculosis и еnterocolitica. Исследование проводилось Y.

ретроспективно. В 11 сыворотках больных выявлены антитела к порину Y.

еnterocolitica, что составило 36,6%, и в 12 сыворотках больных обнаружены антитела к порину Y. рseudotuberculosis, что составило 40% (Рисунок 8).

Таким образом, в результате проведенных исследований установлено, что у больных с перечисленными выше диагнозами методом РНГА определяли антитела к возбудителю кишечного иерсиниоза в – 26% случаев;

псевдотуберкулеза в 6,9%. Результаты исследований указывают на частый контакт населения с возбудителями иерсиниозов и свидетельствуют о гиподиагностике данной патологии на территориях наблюдения.

Рисунок 8. Результаты исследования ОСК от больных людей методом ИФА (тест- система ТИБОХ), % Поэтому внедрение современных серологических методов при эпидемиологическом обследовании очагов и оперативное проведение противоэпидемических мероприятий будет способствовать совершенствованию лабораторного обеспечения эпиднадзора за иерсиниозной инфекцией.

5.2. Серологический скрининг иерсиниозов у здорового населения Для изучения содержания специфических антител к Y. enterocolitica и Y.

впервые проведено ретроспективное серологическое pseudotuberculosis исследование сывороток крови местного населения на участках строительства нефтегазопровода, алмазодобычи, строительства железной дороги; п. Витим, п.

Накын, Анабарский район, п. Томмот, Нерюнгринский район, Кэрдэмский участок; с. Хаптагай, с. Жемкон, НПС 14 Олекминский, Амгинский районы.

Всего обследовано 719 человек с помощью РНГА с использованием коммерческих эритроцитарных диагностикумов. Антитела к возбудителю псевдотуберкулеза выявлены у 38 человек, к возбудителю кишечного иерсиниоза серовара О:3 - у 139 человек; О:9 - у 4 человек, что составило 5,2%, 19,3% и 0,5%, соответственно (Рисунок 9).

Рисунок 9. Результаты определения антител у здоровых людей микрометодом РНГА,%

–  –  –

Всего обследовано методом РНГА 553 человека, обнаружены антитела к возбудителю псевдотуберкулеза у 26 человек (4,7%), к возбудителю кишечного иерсиниоза серовара О:3 - 90 человек (16,2%), к возбудителю кишечного иерсиниоза серовара О:9 - 10 человек (1,8%) (Таблица 22).

Методом ИФА обследовано 44 практически здоровых человека в сельскохозяйственных районах (Горный, Намский, Кобяйский). Обнаружены IgM у пяти человек, IgG у трех человек, что составило 11,3% и 6,8%, соответственно (Таблица 22).

Полученные данные свидетельствуют об инфицировании обследованных лиц иерсиниями. Ранее сведения о наличии антител к иерсиниям у населения на указанных территориях отсутствовали.

5.3. Серологический скрининг иерсиниозов у сельскохозяйственных животных Проведено ретроспективное исследование фонового содержания противоиерсиниозных антител с помощью РНГА в ОСК сельскохозяйственных животных (крупный рогатый скот, лошади) центральных районов: Амгинский, Якутский; из Арктических районов - Оймяконский.

Исследовано 125 ОСК сельскохозяйственных животных (крупный рогатый скот – 88 ОСК, лошади частных фермеров – 37). В результате обнаружены антитела к Y. рseudotuberculosis серотипа О:1 в 11 ОСК от общего количества ОСК (8,8%), в том числе, от крупного рогатого скота - 9, от лошадей - 2 и к Y.

enterocolitica серотипа О:3 в 48 ОСК (38,4%), в том числе, крупного рогатого скота – в 40 ОСК, лошадей -18; к Y. enterocolitica серотипа О:9 в 23 ОСК (18,4%), в том числе, крупного рогатого скота - 17, лошадей – 6 (Рисунок 10).

n=125 8,8 % 34,4%

–  –  –

18,4 Рисунок 10. Частота обнаружения антител к возбудителям иерсиниозов у сельскохозяйственных животных, %.

Таким образом, ретроспективное серологическое исследование ОСК населения в Якутии, впервые проведенное на территориях народнохозяйственного освоения, позволило выявить антитела к Y.

рseudotuberculosis у 5% лиц; к Y. еnterocolitica – у 20%. Полученные данные свидетельствуют об инфицировании обследованных лиц иерсиниями. Ранее заболевания иерсиниозами на этой территории не регистрировали. Высокие показатели содержания специфических антител к возбудителям иерсиниозов у сельскохозяйственных животных свидетельствуют о перенесенных заболеваниях, вызванных иерсиниями, и циркуляции иерсиний на территории хозяйств.

Глава 6. Разработка системы микробиологического мониторинга за циркуляцией иерсиний в условиях Якутии Одной из важных задач эпидемиологического надзора за инфекциями, вызываемыми иерсиниями, является микробиологический мониторинг за их циркуляцией в объектах окружающей человека среды, среди людей и сельскохозяйственных животных.

Особое значение также имеет циркуляция иерсиний среди мелких млекопитающих в природных и антропургических очагах.

Ежегодно в России ОКИ заболевает 600-700 тыс. человек, всего за 10 лет (2002-2011г.г.) ими переболело более 6 млн. человек. Отрицательная роль данных инфекций усиливается еще и тем, что в эпидемический процесс вовлекаются главным образом дети, доля которых в возрастной структуре заболеваемости ОКИ составляет не менее 60%. Однако, в подавляющем большинстве случаев больные ОКИ, целенаправленно, на иерсиниозы не обследуются. Это необходимо учитывать при обследовании больных с диагнозом «острая кишечная инфекция неустановленной этиологии» и проводить адекватные исследования на кишечный иерсиниоз.

По данным официальной статистики показатели заболеваемости кишечным иерсиниозом, превышающие среднероссийский уровень более чем в два раза, отмечаются в ряде регионов Северо-Западного, Сибирского, Дальневосточного федеральных округов.

Наряду со спорадической заболеваемостью иерсиниозными инфекциями, особенно остро стоит проблема ОКИНЭ. Сибирский и Дальневосточный регионы относятся к территориям риска в отношении распространения инфекций с фекально-оральным механизмом передачи. Установлено, что эпидемиологическая ситуация в Якутии характеризуется большей напряженностью, по сравнению с другими регионами РФ. В период 2002-2011 гг. в структуре всех ОКИ, как среди взрослого, так и детского населения доминировали ОКИНЭ, которые составили 77,8 ±1,6 и 66,5 ±2,3%, соответственно. В сравнении с 2002 г., в 2011 г. уровень ОКИНЭ возрос с 32,5 до 44,7%.

В последние годы на территории Якутии отмечена тенденция увеличения численности мелких млекопитающих в природных очагах и в населенных пунктах за счет благоприятных условий зимовки при нарушениях санитарных норм в эксплуатации объектов, что определяет их воспроизводство. При этом в антропургических очагах относительная численность грызунов составляет до 60 на 100 ловушко/суток, в естественных биотопах - до 40. Загрязняя окружающую среду, грызуны в антропургических очагах способствуют заражению восприимчивых домашних и сельскохозяйственных животных через воду и корма, контаминированные бактериями рода Yersinia.

В Якутии зарегистрирована вспышечная заболеваемость; так в 1974-1998 гг., было зарегистрировано 13 вспышек псевдотуберкулеза и кишечного иерсиниоза. Групповые заболевания псевдотуберкулезом и кишечным иерсиниозом, которые возникали в детских учреждениях и в поселенческих территориях в весенне-летний и зимне-осенний периоды года, носили пищевой характер и были связаны с употреблением салатов из привозных овощей зимнего хранения. Иерсиниозная этиология заболеваний была обоснована клиникоэпидемиологическими данными, выделением культур и обнаружением специфических антител. В приполярном районе был установлен пищевой путь передачи кишечного иерсиниоза (молочные продукты), не исключалась возможность участия водного пути передачи, так как для питья и хозяйственных целей в отдельных населенных пунктах непосредственно использовалась вода из открытых водоемов. Была доказана этиологическая роль Y. enterocolitica при острой хирургической патологии органов брюшной полости у больных приполярного района, с диагнозом острый аппендицит, когда из аппендикулярных отростков были выделены культуры Y. enterocolitica серотипа О:9 (биотип 2), из испражнений больных ОКИ выделяли культуры Y. kristensenii.

Выделение таких штаммов от больных, при отсутствии других возбудителей, позволяет сделать предположение об их потенциальной роли в качестве этиологических агентов кишечного иерсиниоза человека.

Наблюдение за циркуляцией возбудителей иерсиниозов рекомендуется проводить с профилактической целью в плановом порядке и по эпидемическим показаниям с учетом климатических условий и медико- географических зон территории Якутии (Рисунок 11).

–  –  –

Исследования проб от людей и из объектов окружающей среды При контрольно-надзорных По программе производственного По ведомственной целевой мероприятиях,осуществляемых контроля, осуществляются программе «Стоп инфекция»

по предписанию УРПН Р(С)Я предприятиями производства, проводят специалисты хранения и реализации ЦГиЭ в Р(С)Я растительной продукции

–  –  –

Рисунок 11. Алгоритм микробиологического мониторинга Планово (профилактически) обследуют животноводческие и пищевые объекты, жилые, промышленные, детские и лечебные учреждения с целью:

а) определить степень заселенности объектов грызунами и проводить их отлов для лабораторных исследований;

б) определить частоту и динамику инфицированности грызунов;

в) определить частоту и динамику инфицирования хранящейся на объектах продукции (овощи-фрукты, молоко, мясо), объектов окружающей среды (тара для хранения, отсеки, емкости, оборудование, инвентарь и т.д.). Исследования проводят лаборатории, имеющие разрешение на работу с возбудителями инфекционных заболеваний 3-4 групп патогенности, на местах.

В закрытых объектах мониторинг осуществляется круглый год по плану контрольно-надзорных мероприятий (КНМ) в I-XII месяцы – в сезоны подъема заболеваемости иерсиниозами и ОКИ.

Исследовать бактериологическим методом на иерсиниозы рекомендуется пробы, взятые на объектах общественного питания, в образовательных учреждениях (ОУ), ЛПО (цельное молоко, творог, мясо, из цехов обработки овощей), овощехранилищах, продуктовых складах, птицефабриках и теплицах (урожай).

Отбор проб и исследование овощей, фруктов, смывов инвентаря, тары, оборудования проводится специалистами ФБУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии в Республике Саха (Якутия)» по плану контрольно-надзорных мероприятий за соблюдением санитарного законодательства в соответствующих организациях (1 раз в 3 года), утвержденных Управлением Роспотребнадзора по Республике Саха (Якутия), согласованных Прокуратурой по Республике Саха (Якутия).

В плановом порядке бактериологические исследования также проводятся с учетом Программы производственного контроля (СП 1.1.1058-01), ответственными за эту работу являются руководители соответствующих организаций, независимо от организационно-правовой формы (объекты общественного питания, образовательных учреждений, ЛПУ, цеха обработки овощей, овощехранилища, продуктовые склады, птицефабрика и теплицы:

- отлов мелких млекопитающих (грызунов) проводится зоологом эпид.отдела, исследование проводится лабораторией ООИ ФБУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии в Республике Саха (Якутия)» в I-II, IX-XI месяцы;

- отбор проб овощей, фруктов, смывов инвентаря, тары, оборудования с объектов, мясной и молочной продукции, яиц, тушек кур по плану КНМ и по программе производственного контроля проводят специалисты эпидемиологического отдела или работники предприятий по принципу самодоставки проб. Исследования проводят бактериологические лаборатории в районах (филиалах и структурных подразделениях ФБУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии в Республике Саха (Якутия)» и головного ЦГи Э в РС(Я), не реже 1 раза в квартал, и в теплицах – в период сбора урожая.

- отбор проб и исследование почвы в теплицах производится VII-IX месяцы.

Рекомендуется планово проводить исследования грызунов, отловленных в природных очагах или в окрестностях населенных пунктов, городов и в зонах отдыха. Параллельно на этих территориях осуществляется отбор пробы воды из разных водоисточников и отбор проб почвы, погадок хищных птиц и др. Эти исследования организуют и проводят специалисты лаборатории ООИ, как правило, в основном в VI-X месяцы ежегодно, в соответствии ведомственной целевой программы (ВЦП) «Стоп инфекция».

С профилактической целью рекомендуется выборочно проводить серологический скрининг сельскохозяйственных животных и групп профессионального риска (животноводов, работников предприятий, перерабатывающих сельхозпродукцию, овощехранилищ, общественного питания и торговли).

По нашим данным, целесообразно проводить мониторинговые исследования в населенных пунктах по пути прохождения железной дороги (Нерюнгринский, Алданский, Томмот, Кэрдэм, Нижний Бестях, Якутск) и в районах, где проводится освоение новых территорий (ВСТО-нефть-газ), это Ленский, Олекминский, Алданский, Нерюнгринский районы. В качестве проб рекомендуем отбирать органы мелких млекопитающих, насекомых, членистоногих, воду открытых водоемов, почву, погадки хищных птиц, помет, содержимое гнезд и так далее. При этом, в состав экспедиции кроме зоолога, должен быть включен энтомолог головного учреждения ФБУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии в Республике Саха (Якутия)» в соответствии ВЦП «Стоп инфекция» или по договору с крупными промышленными организациями. Для определения фонового показателя параллельно обследуется местное население.

По эпидемическим показаниям рекомендуем обследовать детей и взрослых из очагов инфекции в случае установления или подозрения их связи с факторами передачи иерсиний и/или контакта с инфицированным сырьем. Лабораторному исследованию подлежит готовая продукция (яйца, тушки птиц, пастеризованное молоко, мясные продукты, салаты и др.), отбор и исследования проводится специалистами ФБУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии в Республике Саха (Якутия )» на местах. Также рекомендуем проводить лабораторное исследование материала из объектов окружающей среды (смывы с овощей, фруктов, оборудования, тары и др.); исследования проводят лаборатории, имеющие разрешение на работу с возбудителями инфекционных заболеваний 3-4 групп патогенности, на местах. Материал от грызунов (гомогенаты органов, кишечник, экскременты), как правило, исследуют в специализированных лабораториях (лаборатория ООИ) и в лабораториях профильных учреждений – региональных и референс центрах (приказ №88 от 17.03.2008г.).

По эпидемическим показаниям также проводятся лабораторные исследования (бактериологические исследования, ПЦР) в случае возникновения эпидемического очага иерсиниоза и ОКИНЭ среди населения; при заболеваемости, значительно превышающей среднемноголетний уровень.

Основанием являются распоряжения Главного государственного санитарного врача по РС(Я) и его заместителей. Выполняются распоряжения специалистами ФБУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии в Республике Саха (Якутия)» на местах.

Исследования проводят на обнаружение иерсиний в готовых молочных, мясных блюдах, яиц, тушек птиц, салатах, овощах, фруктах, инвентаре, таре, оборудовании в овощехранилищах (складах) и пищеблоках. Обследуются все больные с диагнозами ОКИНЭ и ГЭК. Также производится отлов грызунов и их исследование на иерсинии в лаборатории ООИ.

В пищеблоках организаций исследованию подлежат:

овощи, не подвергающиеся термической обработке, фрукты, остатки подозреваемых пищевых продуктов (салат, винигрет, соки, морсы собственного приготовления, фляжное молоко, творог собственного приготовления, сырое свиное мясо, яйца, мясо кур и т.д.);

- смывы в пищеблоке; смывы из бытового холодильника, смывы с разделочных досок, кухонного стола, ножей, смывы с места хранения овощей (пол, плинтусы, стены, тара, отсеки, стеллажи, ведро для мусора и др.);

- смывы в подполье, подвале, кладовой и т.д. (овощи, пол, тара, отсеки, стеллажи);

- экскременты грызунов, животных, смывы с их подстилки.

В случае возникновения массовых заболеваний кишечным иерсиниозом (подозрении на кишечный иерсиниоз) среди населения городов и поселков целесообразно исследовать на наличие иерсиний воду питьевую (из децентрализованных источников водопользования, из открытых водоемов).

При возникновении эпидемического неблагополучия и для определения перечня и объемов необходимых исследований, объектами, имеющими особое эпидемиологическое значение при иерсиниозных инфекциях, являются:

организации пищевого производства (в том числе, мясокомбинаты, молокозаводы, птицефабрики, предприятия по переработке сельхозпродукции);

- организации, осуществляющие хранение, оптовую и розничную торговлю продовольственными товарами (склады, оптовые базы);

- организации общественного питания;

- оздоровительные организации для детей (городские и загородные), лагеря, дома отдыха, пансионаты, гостиницы и т.д.;

образовательные организации для детей и подростков (дошкольные, общеобразовательные учреждения, специализированные для детей, для сирот, интернаты и др.);

организации, занимающиеся содержанием и разведением животных зоомагазины, зоопарки, питомники);

- объекты коммунального бытового водоснабжения (очистные сооружения);

организации, занимающиеся внешним благоустройством: организацией санитарной очистки и уборки городов и поселков городского типа, озеленением городов и поселков городского типа (зеленые зоны отдыха);

- таможенные терминалы, вокзалы авто- и железнодорожные, речные, аэропорты;

- суда морские, речные, воздушные, предназначенные для перевозки пассажиров и грузов.

Выделенные культуры для дальнейшей идентификации направляются в лабораторию ООИ ФБУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии в РС(Я)", затем культуры передаются в референс-центр (приказ №88 от 17.03.2008г., СП 1.2.036Из представленных методических рекомендаций следует, что серологический мониторинг населения, кроме групп «риска», определяется сроками сезонного подъема заболеваемости. В то же время, сроки подъема заболеваемости определяются периодом наивысшего инфицирования иерсиниями объектов окружающей среды и работников, проживающих на территории наблюдения.

Текущий эпидемиологический надзор направлен на предупреждение контаминации иерсиниями овощей, фруктов при хранении или транспортировке, переработке и разделке овощей.

Объем, сроки и кратность микробиологических исследований на иерсинии на объектах «риска» определяется с учетом сезонных подъемов заболеваемости населения. А также методы и средства проведения микробиологического мониторинга представлены во внедренных Республиканских методических рекомендациях 2013г.

Таким образом, на основании полученных данных и первичной индикации и идентификации иерсиний с применением современных средств и экспрессных методов представлены элементы эпидемиологического мониторинга за иерсиниозами на территории Якутии. С учетом вышеизложенного рекомендуется проведение адекватных противоэпидемических мероприятий.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Проведен анализ многолетней заболеваемости населения Якутии инфекциями, обусловленными иерсиниями; с 1992 г. введена раздельная регистрация 2-х нозологических форм: кишечный иерсиниоз и псевдотуберкулез.

Ретроспективный анализ заболеваемости и лабораторное подтверждение случаев иерсиниозов показало, что иерсиниозы в Якутии встречаются повсеместно, хотя и неравномерно распределены по территории. Чаще их регистрируют в крупных городах (Нерюнгри, Мирный, Якутск) и отдельных сельскохозяйственных районах (Горный район). В Якутии зарегистрирована вспышечная заболеваемость: с 1974 по 1998 гг. было зарегистрировано 13 вспышек псевдотуберкулеза и кишечного иерсиниоза. Групповые заболевания возникали в детских учреждениях и поселенческих территориях в весенне-летний и зимнеосенний периоды года, имели пищевой путь передачи и были связаны с употреблением салатов из привозных овощей.

Заболеваемость населения региона кишечным иерсиниозом все года была ниже среднефедерального уровня в 2-4,5 раза. За последние 10 лет зарегистрировано 27 случаев ОКИ, обусловленных возбудителем кишечного иерсиниоза. За аналогичный период зарегистрировано 6 случаев псевдотуберкулеза. Заболеваемость детей и взрослых одинакова. Среди детей до 14 лет чаще болеют дети в возрасте 1-2 года.

Характерными клиническими проявлениями при псевдотуберкулезе на территории Якутии являются поражение печени (гепатомегалия), длительная лихорадка, васкулит, эритема. Клиническая картина при кишечном иерсиниозе также разнообразна: «острый живот», диарейный синдром, гастроэнтерит, колит.

В двух случаях от людей с ОКИ были выделены Y. kristensenii, связанные с пищевым (молоко и молочные продукты местного производства) путем передачи инфекции, также выделены 2 культуры Y. kristensenii от больных детей с острым аппендицитом. Изоляция таких штаммов от больных, при отсутствии других возбудителей, позволяет сделать заключение об их потенциальной роли в качестве этиологических агентов кишечного иерсиниоза человека.

Однако, целенаправленные обследования больных на иерсиниозы проводились эпизодически из-за недостаточной информированности врачей ЛПО, слабым внедрением современных методов диагностики в КДЛ и, как следствие, имела место гиподиагностика иерсиниозов. В этой связи организация и проведение микробиологического мониторинга за иерсиниозами в Якутии явились важным и адекватным направлением в расшифровке заболеваний иерсиниозами.

Скрининговые исследования больных и здоровых лиц серологическими методами (РНГА, ИФА) с диагностической целью и ретроспективно позволили обнаружить антитела к иерсиниям у 26,2% лиц (к возбудителю псевдотуберкулеза

- 5,5%, к возбудителю кишечного иерсиниоза О:3 – 19,9%, О:9 – 0,8%).

Наиболее высокий показатель инфицированности (33%) выявлен у больных в ЛПО, страдающих различными заболеваниями: с ОКИ, гастроэнтеритами, аллергическими заболеваниями, длительно лихорадящие.

Результаты исследования свидетельствуют о гиподиагностике иерсиниозов на территории изучения и частом контакте населения с источниками и факторами распространения возбудителей иериниозов.

Ретроспективное серологическое исследование ОСК населения в Якутии, впервые проведенное на территориях народно-хозяйственного освоения, позволило выявить антитела к Y. рseudotuberculosis у 5% лиц; к Y. еnterocolitica – у 20%. Ранее заболевания иерсиниозами на этой территории не регистрировали.

Антитела к иерсиниям обнаружены у основных видов сельскохозяйственных животных (крупный рогатый скот, лошади). В результате определены антитела к Y. рseudotuberculosis серотипа О:1 в 8,8% ОСК, к Y.

enterocolitica серотипа О:3 в 38,4%, к Y. enterocolitica серотипа О:9 в 18,4%.

Высокие показатели антител в крови сельскохозяйственных животных свидетельствует об интенсивной циркуляции иерсиний на территории животноводческих хозяйств.

С помощью бактериологического метода исследования в последнее десятилетие установлена широкая циркуляция Y. enterocolitica различных биотипов в объектах окружающей среды. Y. enterocolitica битипа 1А обнаружена в 47,2% случаев из всех выделенных штаммов (112 культур), биотипа 2,4 - 4,2% (10 культур). Выделено 4 штамма Y. pseudotuberculosis, что составило 1,6%;

изолировано также 111культур иерсиний других видов (Y. kristensenii - 85, Y. intermedia – 2, Y. frederiksenii - 3 и неидентифицированные до вида Yersinia – 21 штамм). Доля штаммов иерсиний других видов составила 46,8% из 237 изолированных культур за этот период.

Бактериологическим методом также установлена циркуляция иерсиний у 6 видов мелких млекопитающих, среди которых по численности преобладают серая крыса, красная полевка, домовая мышь, бурозубка, полевка-экономка, красно-серая полевка. Из органов перечисленных грызунов выявлено 124 культуры различных видов иерсиний: Y. рseudotuberculosis - 3,2%; Y.

enterocolitica - 15,3%; Y. kristensenii - 63,7%; Y. frederiksenii - 1,6%; Yersinia, неидентифицированные до вида, соответственно. Значительно

- 16,1%, преобладали Y. kristensenii.



Pages:     | 1 | 2 || 4 |

Похожие работы:

«Забелина Ольга Николаевна Оценка экологического состояния почвы городских рекреационных территорий на основании показателей биологической активности (на примере г. Владимира) 03.02.08 – экология (биология) Диссертация на соискание ученой степени кандидата...»

«УДК 5 КАРАПЕТЯН Марина Кареновна АНТРОПОЛОГИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ МОРФОЛОГИЧЕСКОЙ ИЗМЕНЧИВОСТИ КОСТНОГО ПОЗВОНОЧНИКА (ПО МЕТРИЧЕСКИМ И ОСТЕОСКОПИЧЕСКИМ ДАННЫМ) 03.03.02 «антропология» по биологическим наукам ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени кандидата биологических наук НАУЧНЫЙ РУКОВОДИТЕЛЬ: доктор исторических наук, чл.-корр. РАН А.П. БУЖИЛОВА...»

«ТОМОШЕВИЧ Мария Анатольевна ФОРМИРОВАНИЕ ПАТОКОМПЛЕКСОВ ДРЕВЕСНЫХ РАСТЕНИЙ ПРИ ИНТРОДУКЦИИ В СИБИРИ 03.02.01 – «Ботаника» 03.02.08 – «Экология» Диссертация на соискание ученой степени доктора биологических наук Научный консультант: д.б.н., академик РАН Коропачинский И.Ю. Новосибирск – 2015 ОГЛАВЛЕНИЕ: ВВЕДЕНИЕ.. 4 ГЛАВА 1. АНАЛИЗ...»

«НЕСТЕРЕНКО СТАНИСЛАВ ВЛАДИМИРОВИЧ ЭКОЛОГО-ФАУНИСТИЧЕСКИЙ ОБЗОР МУХ-ЛЬВИНОК (DIPTERA, STRATIOMYIDAE) СЕВЕРО-ЗАПАДНОГО КАВКАЗА И КРЫМА Специальность 03.02.05 – энтомология Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: кандидат...»

«Петухов Илья Николаевич РОЛЬ МАССОВЫХ ВЕТРОВАЛОВ В ФОРМИРОВАНИИ ЛЕСНОГО ПОКРОВА В ПОДЗОНЕ ЮЖНОЙ ТАЙГИ (КОСТРОМСКАЯ ОБЛАСТЬ) Специальность: 03.02.08 экология (биологические науки) Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: доктор биологических наук, профессор В.В. Шутов...»

«ШАЙКЕВИЧ Елена Владимировна ГЕНЕТИЧЕСКАЯ ИДЕНТИФИКАЦИЯ БЛИЗКОРОДСТВЕННЫХ ВИДОВ НАСЕКОМЫХ И РОЛЬ СИМБИОНТОВ В ИХ ЭВОЛЮЦИИ (НА ПРИМЕРЕ КОМПЛЕКСА ВИДОВ Culex pipiens И Adalia spp). 03.02.07 – генетика ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени доктора биологических наук Научный консультант член-корр. РАН, доктор биологических наук, профессор Захаров-Гезехус Илья...»

«Брит Владислав Иванович «Эффективность методов вакцинации против ньюкаслской болезни в промышленном птицеводстве» Специальность: 06.02.02 ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени кандидат ветеринарных наук Научный руководитель:...»

«ШАРАВИН Дмитрий Юрьевич IN SITU / EX SITU ИДЕНТИФИКАЦИЯ МИКРООРГАНИЗМОВ ФИЛЬТРАЦИОННЫХ ВОД ПОЛИГОНА ТВЁРДЫХ БЫТОВЫХ ОТХОДОВ 03.02.03 Микробиология Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: доктор биологических наук, профессор А.И. Саралов Пермь – 2015 ОГЛАВЛЕНИЕ СТР. ВВЕДЕНИЕ.. 4...»

«Регузова Алёна Юрьевна Исследование специфической активности полиэпитопных Т-клеточных ВИЧ-1 иммуногенов, полученных с использованием различных стратегий проектирования 03.01.03 – «молекулярная биология» Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научные...»

«Минаева Наталья Викторовна Отдаленные последствия высокодозной химиотерапии и аутологичной трансплантации гемопоэтических стволовых клеток у больных гемобластозами 14.01.21 – гематология и переливание крови ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Научный руководитель...»

«УШАКОВА ЯНА ВЛАДИМИРОВНА ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ТЕХНОЛОГИЙ ДНК-МАРКИРОВАНИЯ В СЕЛЕКЦИОННО-ГЕНЕТИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЯХ ЯБЛОНИ Специальность 06.01.05. – селекция и семеноводство сельскохозяйственных растений ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: кандидат биологических...»

«РОМАНЕНКО НИКОЛАЙ АЛЕКСАНДРОВИЧ АНЕМИЯ У БОЛЬНЫХ ОНКОГЕМАТОЛОГИЧЕСКИМИ ЗАБОЛЕВАНИЯМИ: ОСОБЕННОСТИ ПАТОГЕНЕЗА, МЕТОДЫ КОРРЕКЦИИ, КАЧЕСТВО ЖИЗНИ 14.01.21. – гематология и переливание крови Диссертация на соискание ученой степени доктора медицинских наук Научный консультант – доктор медицинских наук, профессор...»

«Рагимов Александр Олегович ЭКОЛОГО-ФУНКЦИОНАЛЬНАЯ РОЛЬ ПОЧВ В ФОРМИРОВАНИИ УРОВНЯ БЛАГОПОЛУЧИЯ НАСЕЛЕНИЯ ВЛАДИМИРСКОЙ ОБЛАСТИ 03.02.08 – экология (биология) Диссертация на соискание ученой степени кандидата...»

«Воробьева Дарья Николаевна ОЦЕНКА ПОТЕНЦИАЛЬНОГО ПЛОДОРОДИЯ СУБСТРАТОВ ИЗ ТВЕРДЫХ ОТХОДОВ ЦЕЛЛЮЛОЗНО-БУМАЖНОЙ ПРОМЫШЛЕННОСТИ ДЛЯ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ В ЛЕСОВЫРАЩИВАНИИ 03.02.08 Экология Диссертация на соискание учёной степени кандидата биологических наук Научный руководитель: доктор биологических наук, профессор Лукина Н.В. кандидат сельскохозяйственных...»

«ДАНИЛЕНКО Дарья Михайловна АНАЛИЗ ЭВОЛЮЦИОННОЙ ИЗМЕНЧИВОСТИ И БИОЛОГИЧЕСКИХ СВОЙСТВ ВИРУСОВ ПАНДЕМИЧЕСКОГО ГРИППА A(H1N1) pdm09, ЦИРКУЛИРОВАВШИХ В РОССИИ В ПЕРИОД С 2009 ПО 2013 ГГ. 03.02.02 – вирусология ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель доктор биологических наук М.Ю. Еропкин САНКТ-ПЕТЕРБУРГ ОГЛАВЛЕНИЕ СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ..5...»

«ТИТОВА СВЕТЛАНА АНАТОЛЬЕВНА Влияние фитопатогенных микроорганизмов на энзиматическую активность растения-хозяина Glycine max (L.) Merr. и Glycine soja Sieb. et Zucc. 03.02.08 ЭКОЛОГИЯ Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: к.б.н., доцент Семенова Е.А. БЛАГОВЕЩЕНСК –...»

«Шершнева Анна Михайловна ПОЛИМЕРНЫЕ МИКРОЧАСТИЦЫ НА ОСНОВЕ ПОЛИГИДРОКСИАЛКАНОАТОВ: ПОЛУЧЕНИЕ, ХАРАКТЕРИСТИКА, ПРИМЕНЕНИЕ Специальность 03.01.06 – Биотехнология (в т.ч. бионанотехнологии) ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: доктор биологических наук, Шишацкая Екатерина Игоревна...»

«Гуляева Анна Федоровна ТРАВЯНЫЕ МЕЛКОЛИСТВЕННЫЕ ЛЕСА КУЗНЕЦКОЙ КОТЛОВИНЫ: СИНТАКСОНОМИЯ, ЭКОЛОГИЯ, ГЕОГРАФИЯ 03.02.01 – «Ботаника» ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель д.б.н., ст.н.с. Н.Н. Лащинский Новосибирск 2014 СОДЕРЖАНИЕ ВВЕДЕНИЕ..4 Глава 1. ИСТОРИЯ ИЗУЧЕНИЯ РАСТИТЕЛЬНОСТИ...»

«ЕРОШЕНКО Дарья Владимировна ВЛИЯНИЕ ФАКТОРОВ ВНЕШНЕЙ СРЕДЫ НА ПЕРВЫЕ ЭТАПЫ ОБРАЗОВАНИЯ БИОПЛЕНОК БАКТЕРИЯМИ STAPHYLOCOCCUS EPIDERMIDIS 03.02.03 Микробиология Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: кандидат медицинских наук, доцент Коробов В. П. Пермь – 2015 СТР. СОДЕРЖАНИЕ ВВЕДЕНИЕ...»

«Ульянова Онега Владимировна МЕТОДОЛОГИЯ ПОВЫШЕНИЯ БЕЗОПАСНОСТИ БАКТЕРИАЛЬНЫХ ВАКЦИН НА МОДЕЛИ ВАКЦИННЫХ ШТАММОВ BRUCELLA ABORTUS 19 BA, FRANCISELLA TULARENSIS 15 НИИЭГ, YERSINIA PESTIS EV НИИЭГ 03.02.03 – микробиология Диссертация на соискание ученой степени доктора биологических наук Научный консультант:...»







 
2016 www.konf.x-pdf.ru - «Бесплатная электронная библиотека - Авторефераты, диссертации, конференции»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.