WWW.KONF.X-PDF.RU
БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА - Авторефераты, диссертации, конференции
 


Pages:     | 1 || 3 | 4 |

«Микробиологические и экологические особенности штаммов иерсиний, циркулирующих на территории Якутии ...»

-- [ Страница 2 ] --

По данным статистики ежегодно в Российской Федерации этой инфекцией переболевает более 3 тыс. человек, средне-многолетние показатели колеблются от 1,38 до 2,75%000, составляя в среднем 2,15%000. Дети в возрасте до 14 лет составляют большую долю заболевших – 53,8% (6,01%000). Кишечный иерсиниоз выявляют в виде спорадических заболеваний с незначительным весенним и выраженным осенне-зимним подъемами. Доля заболевших в эти периоды составляет 40-50%. Высокие показатели заболеваемости кишечным иерсиниозом, превышающие общероссийский уровень в два и более раз, отмечаются на СевероЗападе (Архангельская, Мурманская области, г.

Санкт-Петербург), в Западной и Восточной Сибири (Забайкальский край, Республика Хакасия, Тюменская, Томская, Кемеровская, Новосибирская области и Ханты-Мансийский АО). По статистическим данным на СФО приходится 27% случаев кишечного иерсиниоза (2,8%000) от общего числа заболевших в стране. За 2011 – 2012 г.г. в СФО зарегистрирован 1401 случай кишечного иерсиниоза; среди заболевших преобладали городские жители и дети до 14 лет. Доля заболеваний с лабораторным подтверждением диагноза «кишечный иерсиниоз», составила 82 – 97%. К территориям с наиболее высоким уровнем заболеваемости кишечным иерсиниозом относятся Томская (8,85%000), Кемеровская (6,25%000) и Новосибирская (5,45%000) области. На Дальнем Востоке - Еврейский автономный округ, Амурская область, Сахалинская область.

Кишечный иерсиниоз в Якутии встречается повсеместно, чаще в крупных районах республики. В равных количествах болеют как сельское, так и городское население. В многолетней динамике показано, что на территории Якутии заболеваемость кишечным иерсиниозом имеет различную интенсивность проявления. Так, вспышечные заболевания возникали в 1981 г. в Якутске, в детской туберкулезной больнице; 1985 г. – в Ленском районе п. Разведчик;

г. – в Ленске, в 1993, 1997 г.г. в Заполярье – Среднеколымском районе; 1998г. – в Вилюйске в психоневрологическом доме - интернате престарелых (ПНДИ). В 90 х годах была доказана роль иерсиний при острой хирургической патологии органов брюшной полости (выделение культур из удаленных аппендиксов), при вспышечных заболеваниях, в Среднеколымском районе Якутской АССР, вызванных Y.enterocolitica О:9 (биотип 2), с одной плазмидой 47 МДа и с положительными результатами исследования образцов сывороток больных. При этом, заболеваемость детей в возрасте от 3 до 16 лет составляла 60,1%.

Заболевания иерсиниозной этиологии были подтверждены клиникоэпидемиологическими данными, а также обнаружением специфических антител у заболевших.

В материалах Симпозиума Yersinia 11, проходившего в июне 2013 г. в Китае, указано на распространенность кишечного иерсиниоза в Германии, где ежегодно заболевает 6000 человек [83]. В Польше наблюдается быстрое распространение тяжелого кишечного иерсиниоза, с выделением культур Y.

enterocolitica биотипа 1В, серотипа О:8, считающихся высоко патогенными. До 2000 года культуры указанного серо - биотипа выделяли только в США и Японии. В 2003 г. они были выделены в Германии, с 2004 г. идет увеличение частоты выделения культур в Польше. В настоящее время источник и факторы передачи этих возбудителей неизвестны [80].

Иерсиниозы могут быть вызваны и другими видами бактерий рода Yersinia.

В 90-х годах в Среднеколымском районе Якутской АССР при групповых заболеваниях кишечным иерсиниозом, от людей (испражнения) одновременно в двух случаях были выделены Y. кristensenii. Эпидемиологически доказано, что эти заболевания связаны с пищевым (молоко и молочные продукты местного производства) путем передачи инфекции.

До недавнего времени этот вид не рассматривался в качестве этиологического агента, в связи с тем, что основное внимание исследователями уделялось другим видам иерсиний – известным возбудителям заболеваний человека. Лишь в последнее десятилетие, при широком использовании молекулярно-генетических методов, произошло лавинообразное накопление принципиально важных данных о разнообразии микроорганизмов – возбудителей инфекционных заболеваний. Стало очевидным, что патогенные для человека микроорганизмы – это лишь часть существующих в природе микроорганизмов, той таксономической группы, к которой они принадлежат [26].

В литературе имеются отдельные сообщения о выделении из клинического материала культур непатогенных иерсиний, которые, тем не менее, могут обладать некоторыми факторами патогенности, например, продуцировать энтеротоксин, вызывающий симптомы пищевого отравления. Не существует единого мнения о роли Y. intermedia, Y. kristensenii, Y. frederiksenii в возникновении инфекционной патологии человека, однако микроорганизмы этой группы не редко выделяются из материала от больных [42, 70].

В настоящее время род включает обширную группу Yersinia микроорганизмов семейства Enterobacteriaceae, состоящую из 17 видов. Их дифференциальная диагностика затруднена из-за отсутствия стандартных биохимических тест-систем. В настоящее время для дифференциации отдельных видов бактерий рода не отличающихся по общепризнанным Yersinia, биохимическим тестам, стали использовать метод времяпролетной масс – спектрометрии с матрично-опосредованной системой ионизации методом лазерной десорбции (MALDI-TOF MS) [4].

Использование многопраймерной ПЦР явилось перспективным направлением детекции нескольких видов бактерий рода Yersinia. Обнаружение генетического материала непатогенных - Y. kristensenii, Y. frederiksenii, Y.

intermedia, Y. bercovieri, Y. mollaretii, Y. rohdei, Y. ruckeri, Y. aldovae и Y. aleksiciae в биологических образцах человека может свидетельствовать о том, что клинические проявления инфекционного заболевания могут быть вызваны видами иерсиний, считавшимися ранее непатогенными. В этой связи использование многопраймерной ПЦР позволит пересмотреть искусственное разделение видов иерсиний на патогенные и непатогенные для человека и перевести некоторые «непатогенные» виды в категорию условно-патогенных или патогенных видов иерсиний [43, 90].

Отмечено, что в ряде стран, в частности в Северной Испании, у людей регистрируются микст – инфекции. Методом ПЦР определены энтеропатогенный возбудитель Y. enterocolitica и «непатогенные» Y. kristensenii и Y. rohdei [62]. В России также выделяют представителей условно патогенных иерсиний, в том числе и от больных (Y. kristensenii, Y. intermedia, Y. frederiksenii) [34]. Вместе с тем на ряде территорий России, в том числе на Северных территориях, информация о распространенности различных видов иерсиний к началу нашей работы отсутствовала.

Источники и факторы распространения иерсиний 1.2.

Основным естественным резервуаром Y. pseudotuberculosis являются мелкие млекопитающие – дикие и синантропные. Источниками инфекции могут быть также зайцы, кролики, свиньи, овцы, птицы, кошки, крупный рогатый скот, дикие животные в питомниках. Наличие животных – носителей иерсиний, а также условий, способствующих их персистенции, приводит к формированию природных очагов, где осуществляется естественная циркуляция бактерий по цепи животное – окружающая среда – животное. В этих очагах могут быть обсеменены почва, вода небольших водоемов. В связи с интенсивным развитием сельского хозяйства, животноводческих комплексов формируются антропогенные сельские очаги. В каждом из них складываются свои биоцентры и экологические особенности [19].

Патогенные для человека иерсинии способны проникать в ткани растений и колонизировать их, сохраняя свою вирулентность, что указывает на возможный риск заболевания при употреблении зараженных овощей и фруктов. Заболевания, передающиеся от растений к человеку, получили термин «фитонозы». Для поддержания жизнедеятельности и численности популяции во внешней среде Y.

pseudotuberculosis используют растения как питательный субстрат. Они проникают в межклеточное пространство, адгезируются к поверхности клеток растений [46, 75]. Большую роль в заражении человека иерсиниями имеют также загрязненные почвой овощи при их длительном хранении. При этом факторами передачи при псевдотуберкулезе являются салаты из сырых овощей (морковь, свекла, капуста и т.д.) [20, 40].

Известно, что иерсинии циркулируют в водных и почвенных экосистемах.

Доказано, что бактерии при неблагоприятных условиях длительное время могут существовать со сниженной метаболической активностью, то есть находиться в некультивируемом состоянии (НС). Циркуляция возбудителя по цепочке почва – растения – животные вполне реальна в природных экологических системах.

Такие микроорганизмы отнесены к полупаразитам или факультативным паразитам, для которых резервуар возбудителя в природе является комплексным, сочетающим организм теплокровных животных и внешнюю среду, где они способны размножаться. Эти свойства и обеспечивают микробу высокую экологическую пластичность, его двойственную (сапрофитную и паразитическую) природу [17, 30, 31]. Эпидемическую опасность при кишечном иерсиниозе представляют инфицированные пищевые продукты, в основном, мясные (свинина) на разных стадиях технологического процесса. В готовых к употреблению продуктах в вакуумных упаковках, даже при незначительной контаминации наблюдается бурное размножение микроорганизмов. Уже в течение первых двух суток мясные (свинина) изделия могут содержать жизнеспособные бактериальные клетки и продукты метаболизма в опасных для человека концентрациях [14, 73].

В Южной и Западной Бразилии с конца 80-х годов регистрируются сезонные вспышечные заболевания среди телят (фатальная диарея быков), при этом выделяются культуры Y. pseudotuberculosis и Y. enterocolitica серотипа О3 [61]. Источником инфекции Y. enterocolitica при зоонозах в европейских странах (Германия, Испания) являются свиньи, дикие кабаны (боровы); от них выделены культуры Y. enterocolitica, серотипа О:3, колонизирующие кишечный тракт [62, 83].

Групповые заболевания зарегистрированы в апреле 1999 г. в Акташынском районе Республики Татарстан. Заболели школьники, участвовавшие в переборке картофеля в овощехранилище. Четыре школьника были госпитализированы по поводу «острого аппендицита», в последующем была лабораторно подтверждена иерсиниозная природа поражения аппедикулярного отростка при заболевании кишечным иерсиниозом [58].

В г. Тула в 2011 г. среди учащихся и сотрудников специализированной школы-интерната было зарегистрировано 11 случаев ОКИ, с лабораторным подтверждением диагноза кишечный иерсиниоз, факторами передачи при этом были овощные салаты [12].

В 2007 г. было зарегистрировано групповое заболевание псевдотуберкулезом среди школьного коллектива в Ямало-Ненецком автономном круге, фактором передачи явились овощи. Диагноз подтвержден молекулярногенетическим методом и выделением культур Y. pseudotuberculosis, у которых определены основные детерминанты патогенности и генетическая неоднородность выделенных штаммов [7].

Освоение Севера сопровождается антропогенными трансформациями.

Первостепенное значение при этом приобретает взаимодействие природы и человека, когда по типу обратной связи, здоровье становится чутким барометром экологической ситуации при горнопромышленном, гидроэнергетическом, сельскохозяйственном, лесохозяйственном типах воздействия.

В северных широтах источником возбудителей инфекции наиболее часто являются типичные для Севера дикие и домашние животные. Из представителей дикой фауны ведущая роль принадлежит фоновым видам млекопитающих – леммингам, песцам, северным оленям, к которым адаптированы многие виды иерсиний. В связи с завозом фуража, продуктов питания и сырья животного происхождения формируются синантропные очаги и псевдоочаги зоонозов со своим набором патогенов. Длительная транспортировка и хранение продуктов питания, особенно овощей, характерны для северных районов и имеют большое значение в эпидемиологии сапронозов. Обозначен круг психрофильных микроорганизмов, для которых источником инфекции в условиях Севера могут быть вода и почва [16].

Установлено, что в Якутии на территориях наблюдения резервуарами иерсиний в очагах, в значительной степени, являются мелкие млекопитающие, преимущественно дикие мышевидные грызуны, серые крысы. В Заполярной МГЗ фоновый вид – сибирский лемминг, узкочерепная полевка, к которым адаптивны возбудители псевдотуберкулеза и других иерсиниозов. Культуры псевдотуберкулезного микроба выделены от массовых видов мышевидных грызунов и насекомоядных (обитающих в природных биотопах, а также в складах, пищеблоках, жилых помещениях), которые стали хранителями и переносчиками инфекций.

В настоящее время факторами и источниками заражения возбудителем псевдотуберкулеза являются не только завозимые из-за пределов Якутии продукты, но и фауна местных экосистем, ареалы которых расширяются к северу из-за изменений климата [16]. В основном при транспортировке комбикормов, овощей, корнеплодов, зерна и хранении их в больших штабелях грызуны находят хорошие кормовые, защитные и микроклиматические условия для формирования жизнеспособных популяций.

Овощи, фрукты и корнеплоды в республику доставляются преимущественно рефрижераторными вагонами, автотранспортом, теплоходами по реке, самолетами. До 90-х годов большие партии овощей и корнеплодов проходили через овощные базы и складские помещения. Инфицирование овощей и корнеплодов происходило во время их длительной многоэтапной транспортировки при температуре +6 - +7 °С внутри республики, в том числе, в отдаленные северные районы. Инфицирование происходило также при кратковременном хранении овощей в заведомо «зараженных» овощехранилищах, при отсутствии или при наличии грызунов, а также при завозе уже инфицированных овощей и корнеплодов из других регионов страны. Факторами передачи возбудителей иерсиниозов в весенний период служили в основном овощи зимнего хранения (капуста, морковь), в летний период – ранние тепличные огурцы (Оймяконский район). При осенних вспышках в качестве ведущих факторов передачи иерсиний служили овощи нового урожая, которые, как правило, употреблялись в виде овощных салатов [56].

Вспышки псевдотуберкулеза и кишечного иерсиниоза в Якутии возникали в организованных детских коллективах и среди взрослого населения в селах и в рабочих поселках в весенне-летний и зимне-осенний периоды года. Все вспышки были пищевого происхождения и связаны с употреблением салатов из «свежих овощей» (капуста, морковь, огурцы) и винигрета. В Заполярье (Среднеколымский район, 1997 г.) фактором передачи при кишечном иерсиниозе послужило молоко и молочные продукты местного производства. В сельскохозяйственном районе (Вилюйский район, 1998 г.) имел место контактно-бытовой путь передачи возбудителя кишечного иерсиниоза, связанный с антисанитарными условиями проживания и отдыха (одно озеро для купания, водопоя крупного рогатого скота и свиней), больных психоневрологического дома интерната (ПНДИ).

Установлены корреляционные связи высокой и средней силы между заболеваемостью населения г. Якутска дизентерией, сальмонеллезом, острыми кишечными инфекциями неустановленной этиологии и качеством питьевой воды, пищевых продуктов, санитарно-гигиеническим состоянием жилых помещений и почвы [57].

Особенности полиморфизма клинических проявлений иерсиниозов 1.3.

Полиморфизм клинических проявлений обусловлен особенностью биологических свойств возбудителей. Трудность диагностики и дифференциации иерсиниозов с другими инфекционными и соматическими заболеваниями требует постоянного мониторинга за инфекцией [52]. В настоящее время доказана этиологическая роль Y. enterocolitica при возникновении илеита, энтерита, гастроэнтерита, мезентериального лимфаденита, заболеваний печени и мочевыводящих путей, аппендицита. Иерсиниозы остаются также актуальной проблемой в связи с возникновением затяжных хронических форм, с поражением органов и тканей, в том числе, опорно-двигательного аппарата, нередко приводящего к инвалидизации. Причины затяжного, хронического течения могут быть обусловлены генетическими особенностями возбудителей. Иерсинии играют важную роль в развитии аутоиммунных заболеваний, таких как реактивный артрит, узловатая эритема и гипертиреоз. Эти заболевания сопровождаются аутоиммунными нарушениями, которые, возможно, обусловлены молекулярной мимикрией бактериальных антигенов и аутоантигенов организма больного [44, 60, 85].

Рядом исследователей показано, что Y. pseudotuberculosis, продуцирующие суперантиген, вызывают тяжелые системные клинические проявления у больных

– сыпь, артралгии, нефрит, коронарный васкулит [53].

Установлены клинические различия инфекции, вызванной различными патотипами: системные поражения, как правило, обусловлены штаммами патотипа I, гастроинтестинальные – патотипа III. Полученные данные важны для дифференциальной диагностики и мониторинга за возбудителем псевдотуберкулеза [23]. Н.Ф. Тимченко на основании изучения факторов патогенности псевдотуберкулезного микроба (токсины) делает вывод, что полиморфизм клинических проявлений, возникающий вследствие поражения желудочно-кишечного тракта, печени, суставов, сердечно-сосудистой, мочеполовой и нервной систем, в основном, обусловлен действием комплекса токсинов возбудителя [41]. Энтериоинвазивные иерсинии, попадая в желудок человека с зараженной пищей, быстро проходят через эпителиальный барьер, вызывая поражение других органов и систем.

Важной эпидемиологической особенностью возбудителей является изменение пейзажа циркулирующих иерсиний, уменьшение доли ранее доминировавших серотипов, а также появление новых серо-биотипов Y.

ранее считавшихся непатогенными. Патогенные иерсинии enterocolitica, способны вызывать глубокие изменения иммунитета, приводящие к затяжному течению болезней, осложнениям [52, 60].

Таким образом, перечисленное разнообразие факторов и источников распространения иерсиний свидетельствует о необходимости комплексных мониторинговых исследований для установления их эпидемиологической значимости для территорий наблюдения. В Республике Саха (Якутия) такие исследования ранее носили фрагментарный характер.

1.4. Характеристика биологических свойств бактерий рода Yersinia Род Yersinia объединяет 17 видов, 3 из которых – Y. pestis, Y.

pseudotuberculosis и Y. enterocolitica биотипов 1В и 2-5 – являются патогенными для человека и животных. Другие виды (Y. aldovae, Y. bercovieri, Y. frederiksenii, Y. intermedia, Y. kristensenii, Y. mollaretii, Y. rohdei, Y. аleksiciae, Y. massiliensis, Y.

similis, Y. nurmii, Y. pekkanenii, Y..entomophaga) в отдельных случаях вызывают оппортунистические инфекции у человека [37]. Четыре вида (Y. aldovae, Y.

bercovieri, Y. kristensenii, Y. mollaretii) выделены из гетерогенного по фенотипическим признакам вида Y. enterocolitica. На основании определения последовательностей гена 16S rRNA, а также ряда биохимических тестов охарактеризован новый вид – Y. аleksiciae, представляющий штаммы, ранее определенные как Y. kristensenii [87]. В 2008 г. на основании фенотипических и молекулярных данных был выделен новый вид иерсиний- Y. similis [88]. В этом же году французскими учеными был выделен еще один новый вид - Y.

massiliensis. При сравнении генов «домашнего хозяйства» оказалось, что Y.

имеет высокую степень гомологии нуклеотидных massiliensis последовательностей с генами Y. frederiksenii, а также Y. massiliensis имеет потенциал патогенности (адгезивности и инвазивности) - гены ail, inv, характерный для патогенных иерсиний [86]. Бактерии Y. ruckeri вызывают болезнь «красный рот» у рыб. В 2002 г., по предложению H. Neubauer, внутри вида Y. enterocolitica выделено два подвида enterocolitica и palearctica, включающие, соответственно, американские и европейские изоляты [10].

Иерсинии – грамотрицательные, не образующие спор палочковидные (кокки или овоиды) бактерии, обладающие перитрихиальными жгутиками.

Являясь гетеротрофными факультативно-анаэробными микроорганизмами, с психрофильными и олиготрофными свойствами, они весьма неприхотливы к питательным веществам и поэтому растут не только на обычных питательных средах, но и на средах с обедненным составом (пептонная вода) или «голодных»

синтетических средах. Для вирулентных иерсиний характерен ряд дополнительных культуральных особенностей: способность к аутоаглютинации и кальцийзависимому росту (бактериостаз при отсутствии ионов кальция) и температурозависимая морфология колоний при +37 oС [39].

Изучение патогенных микроорганизмов развивалось в основном в плане исследования взаимоотношений микробных популяций с теплокровным организмом.

Экологическим взаимоотношениям возбудителей иерсиниозов с внешней средой уделялось значительно меньшее внимание, поскольку считалось, что патогенные организмы не могут размножаться во внешней среде, а лишь сохраняются в ней. Вопреки установившемуся мнению, что температурный оптимум для размножения патогенных микробов находится в пределах 37 °С, и они являются мезофилами, полученные данные на модели (Y. pseudotuberculosis, Y. еnterocolitica) позволили обосновать новую концепцию в экологии этих микробов. Установлено, что иерсинии обладают психрофильными свойствами, позволяющими размножаться при температуре +4-+8 °С. Культивирование Y.

pseudotuberculosis при +8 °С в условиях низкой аэрации увеличивает их адгезивную и инвазивную активность, а также повышает устойчивость бактерий к тепловому стрессу. Бактерии в абиотической среде находятся под воздействием множества физических и химических факторов, способных активировать экспрессию детерминант вирулентности, необходимых на начальном этапе инфекции, которые включают колонизацию клеток эпителия кишечника и проникновение в них. Повышение температуры, происходящее при попадании бактерий в организм млекопитающих (например, до +37 oС), приводит к утрате перитрихиальных жгутиков. Для энтеропатогенных иерсиний характерен ряд температурозависимых признаков, которые по-разному проявляются при o С и ниже +30 0С. Считают, что эти свойства могут быть температуре +37 следствием адаптации микроорганизма к разным местам обитания: организму теплокровного животного и объектам внешней среды. Иерсинии в почве могут существовать до 4-х месяцев и более, в воде открытых водоемов – до 1 месяца [1, 3, 50, 51].

Адаптивное формирование биологических особенностей микроорганизмов направлено, прежде всего, на обеспечение их существования в естественной среде обитания, в том числе, в почвенных или водных экосистемах. Между патогенными и потенциально патогенными бактериями и другими сочленами этих экосистем могут формироваться разные варианты симбиотических отношений, включая паразитизм. В результате таких биоценотических процессов на популяционном уровне преадаптивно соотбираются (и во многих случаях закрепляются как видовые) генетически детерминированные признаки и свойства, позволяющие микроорганизмам существовать также в организме теплокровных животных [30]. Достаточно долго иерсинии выживают на различных продуктах питания и даже могут на них размножаться (например, на овощах, особенно приготовленных в виде салатов). В молоке сохраняются до 18 суток, в сливочном масле – до 145 суток, в твороге – до 7 дней, кондитерских изделиях – от 16 до 24 суток. Патогенные иерсинии, прикрепляясь к поверхности мяса и образуя биопленку, колонизируют продукты и размножаются в мясных волокнах [14]. В 80-х годах Колесникова В.В. опытным путем доказала жизнеспособность возбудителя псевдотуберкулеза до 7 дней в квашеной капусте [30]. В мясных продуктах (свинина) при низких температурных условиях технологического процесса (забой свиней, переработка, упаковка, хранение) Y. enterocolitica способны к длительному существованию и накоплению [64]. Иерсинии o чувствительны к высокой температуре: при +100 С погибают в течение нескольких секунд, однако при температуре +50-+60 oС способны выживать до 20-30 минут, переносят большие (до 10 %) концентрации раствора хлорида натрия, особенно при низких температурах хранения. Во влажной среде и при невысокой температуре (+14-+18 oС) выживают длительно. Кислотность среды (при уровнях рН 3,6-4,0) также губительна для иерсиний. В дезинфицирующих растворах в стандартных разведениях бактерии погибают в течение 5-10 минут.

Способность к формированию биопленки у возбудителя кишечного иерсиниоза – Y. еnterocolitica практически не изучена. Биопленка Y. enterocolitica способствует выживанию этого возбудителя во внешней среде, что подтверждает его способность к длительному сохранению в почве и воде. Образование биопленки клетками Y. enterocolitica зависит от наличия жгутиков, поскольку мутанты, лишенные жгутиков, дефектны по образованию биопленки из-за не способности, осуществлять адгезию к поверхности [27]. При культивировании Y.enterocolitica в Lb – бульоне при +28 °С образуется биопленка, которая созревает через двое суток. Биопленка потенциирует адгезивные свойства Y.

enterocolitica и способствует повышению интенсивности размножения бактерий [14].

В настоящее время известен 21 серотип (по О-антигену) Y.

pseudotuberculosis, различающихся по степени патогенности [74]. На территории России циркулируют Y. рseudotuberculosis, преимущественно серотипа О:1b, реже О:1а, О:3, О:4а, О:4b, О:5.

Y. enterocolitica подразделяется на 31 серотип по липополисахаридному комплексу (всего известно около 70 серотипов, относящиеся к сапрофитным микроорганизмам), из них 9 наиболее часто ассоциируются с заболеваниями человека: О:3; О:4; О:5,2; О:9; О:8; О:13; О:18; О:20; О:21. Вид Y. enterocolitica подразделяется на 6 биотипов по биохимическим признакам. Биотип 1 разделен на 2 подгруппы, при этом штаммы биотипа 1А отнесены к непатогенным, биотип 1В («американский» вариант) и 2 – 5 («европейский» вариант) – к патогенным.

Выявлено значительное сходство в антигенной структуре Y. pseudotuberculosis серотипа О:1 и Y. enterocolitica «американских» серотипов 0:8; 0:18 и 0:21 [38, 49, 51]. Большинство иерсиниозов в Европе и Северной Америке вызваны Y.

enterocolitica подвид palearctica серотип O:3, у которых экспрессия высокой инвазивности возникает при +37 °С, за счет уникальной структуры ЛПС, включающей О – антиген [94]. Вместе с тем имеются данные о выделении культур Y.enterocolitica биогруппы 1А и Y. kristensenii от больных с явлениями гастроэнтерита и ОКИ. Важной особенностью возбудителей иерсиниозов является изменение их биологических свойств, а также пейзажа циркулирующих представителей Yersinia, снижение доли ранее доминирующих серотипов и выявление новых серо-биотипов, ранее считавшихся непатогенными [52]. На основании комплексного изучения бактерий установлены существенные отличия возбудителей иерсиниоза и псевдотуберкулеза.

Важной особенностью биологических свойств иерсиний является изменчивость – «диссоциация» (расслоение популяции микроорганизмов), однородной по своим свойствам (внешний вид культуры, структура колоний, морфологические, биохимические и др. признаки) на два и более типов, отличающихся от исходного, но сохранивших все признаки, позволяющие по прежнему относить их к одному виду. Доказано, что диссоциация возникает в результате мутаций, рекомбинантного процесса, модификаций, приобретения внехромосомных подвижных генетических элементов, и связана с возникновением в культурах вариантов, характеризующихся нарушением синтеза антигенных комплексов в поверхностных структурах бактериальной клетки.

Температурный фактор и среда обитания определяют выбор альтернативных путей обмена, регулирующего синтез ферментов, и характер биохимических реакций, приводя к адаптивному изменению состава популяции.

Возбудитель псевдотуберкулеза имеет психрофильные свойства и может быть отнесен к факультативным психрофилам, поскольку способен размножаться в температурном диапазоне от 0 до +45°С. Низкая температура сохраняет и повышает вирулентность микроба. В эксперименте на животных показано, что выращенные при низкой температуре бактерии псевдотуберкулеза в пределах 10минут проникают через эпителий и ткани слизистых оболочек в кровь и органы, определяя развитие генерализованного инфекционного процесса. При низкой температуре иерсинии интенсивнее продуцируют токсины, которые при попадании в макроорганизм, на первые часы вызывают патологические проявления. Y. pseudotuberculosis при низкой температуре роста длительно (более 3,5 лет) сохраняет плазмиду вирулентности (pYV 45-48 MD). При +37°С утрачивает плазмиду: после 10-15 пассажей микробные клетки лишаются плазмид. Низкая температура среды обитания играет существенную роль в экологии псевдотуберкулезного микроба и эпидемиологии вызываемой им инфекционной болезни и способствует развитию эпидемического процесса [41].

При низкой температуре микробы приобретают высокую степень патогенности, определяющую возможность возникновения массовых заболеваний.

В современной систематике бактерий рода Yersinia отражены различные подходы морфологический, биохимический, генетический, но мало учитываются факторы, отражающие адаптационный характер эволюции микроорганизмов при постепенном приспособлении к различным условиям существования в освоенной среде обитания [82].

Между тем сведения о распространении ведущих серо-биотипов и их биологических характеристиках по отдельным географическим зонам России представлены не полностью.

1.5. Молекулярно-генетическая характериcтика бактерий рода Yersinia Адгезия бактерий опосредована специализированными органеллами бактериальной клетки, так называемыми филаментозными структурами (пили, фимбрии, филаменты, фибриллы), отходящими от поверхности бактериальной клетки, тоньше и многочисленнее жгутиков. Компоненты наружной мембраны липополисахаридно-белковый комплекс и липополисахарид усиливают адгезию и инвазию бактерий. содержит фибриллярную структуру, Y. enterocolitica образующую фимбрии, закодированную в хромосомном гене myfA [63]. Наличие энтеротоксина и фибриллярных структур у бактерий данного вида ассоциировано с диареей. Показано, что ряд серотипов Y. enterocolitica (О:1,2,3; О:3; О:5,27; О:8;

О:9; О:13) обладают генотипом типичных возбудителей иерсиниоза. Этот генотип включает хромосомные и плазмидные детерминанты, кодирующие образование адгезинов, инвазинов, токсинов и других факторов патогенности, экспрессия которых обусловливает специфические особенности патогенеза иерсиниоза как самостоятельной нозологической формы. Это позволило выделить перечисленные серотипы в генетически обособленную группу 1В патогенных иерсиний [60, 71].

«Непатогенные» иерсинии имеют антиген MyfA, специфичный только для Y.

enterocolitica [63]. Некоторые штаммы Y. enterocolitica биотипа 1 А содержат две криптические плазмиды [82].

Установлено, что Y. massiliensis имеет потенциал адгезивности и инвазивности (гены ail, inv), характерный для патогенных иерсиний [86].

Патогенные имеют детерминанты вирулентности, Y. enterocolitica обеспечивающие им адгезивные и инвазивные свойства. Различают хромосомный ген inv, кодирующий инвазин с молекулярной массой 92 kDa, и хромосомный ген ail, кодирующий белок адгезии/инвазии 17 kDa.

Энтеротоксигенность Y. еnterocolitica биотипов 1В и 2-5 связана с экспрессией хромосомного гена ystА. У Y. enterocolitica 1А нет классических факторов патогенности: плазмиды (pYV), гена адгезии (ail), энтеротоксина ystА.

Однако, у «непатогенных» представителей биотипа 1А обнаружен ген ystВ, кодирующий термостабильный энтеротоксин В, который может играть роль в патогенезе диарей [21]. Энтеротоксин может кодироваться двумя хромосомными генами – ystА и ystВ. Между генами ystА и ystВ имеется 73,5% гомологии нуклеотидной последовательности. Ген ystB, кодирующий термостабильный энтеротоксин YST В, впервые был выделен из Y. enterocolitica серотипа О:5 биотипа 1А. Все штаммы, содержащие ген ystВ, относятся к биотипу 1А и большей частью к так называемым «непатогенным» серотипам О:4,32; О:5;

О:6,30; О:6,31; О:7,8; О:13,7 и О:10. Содержащие ystВ Y. enterocolitica, выделенные от больных, вызывали диарейные проявления у мышей, что свидетельствует о вероятном участии ystВ в патогенезе. Таким образом, так называемые «непатогенные» штаммы могут быть вирулентными для человека [60]. Известно, что не редко ген энтеротоксина находится в «молчащем»

состоянии. На его экспрессию оказывают сильнейшее влияние физикохимические параметры окружающей среды. Транскрипция ystВ может индуцироваться не только при +30 °С, но и при +37 °С, при увеличении осмолярности и рН до значений, которые обычно имеют эти показатели в просвете кишечника. Это еще раз подтверждает значение гена ystB у Y.

кодирующего энтеротоксин В, в качестве фактора enterocolitica, YST патогенности [63, 76]. Показано, что токсичный эффект YST В в несколько раз сильнее, чем у YST А; минимальная эффективная доза (МЭД) очищенного YST В составляет 0,4 пМ, в то время как YST А – 7,8 пМ [22]. Рядом исследователей показано, что транскрипция генов yst in vitro (при использовании обычных питательных сред происходит только при температуре ниже +30 °С) может быть индуцирована при температуре +37 °С (температура тела человека) в результате изменения физико-химических параметров среды – увеличения осмолярности и рН, что также дает основание рассматривать энтеротоксин YST В как фактор вирулентности [22, 67, 84].

Плазмидой вирулентности иерсиний pYV 42-48 МDа обладают все штаммы Y._pseudotuberculosis, а также представители Y._enterocolitica, принадлежащие к биотипам 1В, 2-5 и серотипам О:1,2,3; О:2а,2b; О:3 (биотип 4); О:5,27 (биотип 2 и 3); О:8 (биотип 1В); О:9 (биотип 2), чаще всего вызывающие заболевания [51, 65, 78]. С присутствием в штаммах иерсиний плазмиды вирулентности связывают способность бактерий ингибировать фагоцитоз макрофагами и размножаться в этих клетках [55]. Плазмида вирулентности кодирует белок наружной мембраны Yad A, являющийся ведущим адгезином иерсиний.

Штаммы, имеющие плазмиду pVM с молекулярной массой 82 MDa серотипа), вызывают более тяжелое течение (Y._pseudotuberculosis I псевдотуберкулеза. Установлено, что штаммы Y. pestis, Y._pseudotuberculosis, Y._enterocolitica О:8, содержащие указанную плазмиду, вызывают летальность мышей, поверхностную агглютинацию и клеточную адгезию, синтез и высвобождение белков в среду культивирования [60].

В связи со способностью размножаться при различных температурах и в различных местах обитания иерсинии выработали два механизма, контролирующих экспрессию генов. Один механизм реагирует на изменение температуры окружающей среды, другой - на концентрацию Са+. Попадая во внутрь фагоцитирующей клетки богатой Са+, иерсинии активно размножаются.

По мере понижения концентрации Са+ прекращается размножение микроба и идет переключение на наработку факторов патогенности [41].

Важную роль во взаимоотношениях микроба с организмом хозяина играют порообразующие белки. При постепенном заселении микроорганизмами новых ниш в среде обитания, они проявляют высокую генетическую гетерогенность.

Неспецифические порообразующие белки (порины) являются основными белками НМ, подобными грамотрицательных бактерий, Omp F предназначенными для диффузии низкомолекулярных соединений. Порины частично экспонированы на поверхности НМ и подвергаются разнообразным воздействиям окружающей среды. Как известно, OmpF и OmpC – порины играют огромную роль в адаптации бактерий к условиям существования, например, к температуре, осмотическому давлению, рН среды. Уровень экспрессии OmpFпорина повышается при низкой температуре, пониженном осмотическом давлении и низком содержании питательных веществ в окружающей среде.

Петли поринов являются потенциальными мишенями для адгезии других клеток и связывания бактерицидных соединений с поверхностью грамотрицательных бактерий. Наружные петли поринов взаимодействуют с антителами, фагами и колицинами, бактериоцинами. Вариацию структуры «внешних» петель и связанную с этим модуляцию свойств поринов можно рассматривать как один из механизмов, используемых бактериями для адаптации к внешним условиям и противостояния иммунной системе хозяина [11, 44, 45]. Порообразующие белки НМ обеспечивают жизнедеятельность микробной клетки, образуя водонаполненные каналы для трансмембранного транспорта питательных веществ и продуктов метаболизма. Кроме того, порины, являясь поверхностными антигенами, играют заметную роль в патогенезе инфекции: способствуют адгезии и инвазии бактерий, участвующих в формировании иммунного ответа к поверхностным структурам бактериальной клетки [8].

Хромосомный сегмент, ответственный за биосинтез и регуляцию системы утилизации железа, содержит гены иерсиниабактина, называется «островом высокой патогенности» (High Pathogenicity Islаnd, HPI). HPI расположен на хромосоме, присутствует у представителей штаммов Y.pseudotuberculosis; у Y.

enterocolitica определен только среди штаммов высокопатогенного биотипа 1В [68, 72, 77].

Важным фактором патогенности Y._pseudotuberculosis является синтез суперантигена (Yersinia pseudotuberculosis-derived mitogen - YPM), ответственного за поликлональную активацию Т-лимфоцитов и гиперпродукцию провоспалительных цитокинов. Клинически это выражается развитием синдрома токсического шока. У 98% штаммов, выделенных от больных на Дальнем Востоке России, в Японии, Корее, содержится суперантиген, но отсутствует НРI. На исследованных территориях России преобладают высоковирулентные штаммы возбудителя псевдотуберкулеза, содержащие суперантиген (YPM), вызывающие генерализованную инфекцию с характерными клиническими симптомами.

Получены новые знания о тяжести течения псевдотуберкулеза, обусловленного штаммами Y. pseudotuberculosis генотипов 3а, 3b, 3c [7, 24, 25, 74].

Таким образом, на ряде территорий России, в том числе, на Северных территориях, информация о распространенности ведущих серо-биотипов иерсиний и их биологических характеристиках к началу нашей работы отсутствовала. Многие микробиологические и экологические аспекты, связанные с иерсиниями в условиях Севера, оставались неизученными, а официальная статистика не отражает их истинного распространения. Практически не изучалась распространенность иерсиний среди диких и сельскохозяйственных животных.

Мало данных о степени обсемененности объектов окружающей среды. Не проводилось изучение генетических детерминант вирулентности выделенных штаммов и молекулярно-генетических особенностей популяций иерсиний.

Собственные исследования Глава 2. Характеристика заболеваемости иерсиниозами на территории Якутии Суровый климат Крайнего Севера, долгая холодная зима ( -45; -67 °С), как стрессовый фактор, резкие перепады температуры, создают достаточно благоприятные условия для сохранения и накопления возбудителей псевдотуберкулеза и кишечного иерсиниоза в окружающей среде на территории республики, за счет психрофильных и других адаптационных свойств возбудителей. Изменение климата, в сторону потепления и повышения влажности (от 20% до 75%) приводит к изменению экологии микроорганизмов.

Это способствует появлению новых подвидов микроорганизмов с измененными биологическими и генетическими свойствами, находящихся в «молчащем»

состоянии, так как на экспрессию их вирулентных свойств значительное влияние оказывают физико-химические параметры окружающей среды.

Распространение природно-очаговых инфекций, эпидемиологическая значимость их очагов в разных районах Якутии неодинакова, что обусловлено природными условиями и видовым составом млекопитающих, присущим отдельным территориям зоны. В связи с этим выделены 5 медико-географических зон (МГЗ); Заполярная МГЗ– I; Приполярная МГЗ – II; Вилюйская МГЗ – III;

Центральная МГЗ – IV; Южная МГЗ – V. В отношении иерсиниозов эпидемиологически значимы два района (ЭР): Алданский ЭР (Алданский, Нерюнгринский районы) и Лено-Олекминский (Ленский, Олекминский, Мирнинский районы). В них зарегистрированы случаи групповых и спорадических заболеваний псевдотуберкулезом и кишечным иерсиниозом, связанные с завозом продуктов питания, в том числе, овощей и фруктов:

Алданский и Нерюнгринский районы из Дальневосточного региона (Приморский, Хабаровский край, Китай, Корея); Ленский, Олекминский и Мирнинский из Западно – Сибирского региона (Иркутская, Новосибирская, Томская области).

Также в природных очагах в Лено-Олекминском ЭР распространена популяция водяной полевки – основного резервуара иерсиний.

Реализация «мегапроектов» в будущем изменит социально-экономический облик и превратит Якутию в крупный промышленный регион с развитой инфраструктурой, промышленным и энергетическим потенциалом.

Технический прогресс в Якутии обусловит в будущем увеличение миграционного потока, объема грузов, количества терминалов, хранилищ, что потребует целенаправленных профилактических мероприятий в отношении ряда инфекций, в том числе, иерсиниозов, так как источниками инфекции в основном являются мышевидные грызуны, которые могут контаминировать разные грузы, в том числе, продовольственного характера. В этой связи организация и проведение микробиологических мониторинговых исследований на территории Якутии приобретает важное значение. Однако, целенаправленные комплексные исследования в этом направлении не проводились.

Первичные регистрационные данные по заболеваемости в Якутии были представлены в 1974 г. В период с 1974 по 1998 гг. было зарегистрировано 13 вспышек псевдотуберкулеза и кишечного иерсиниоза. Заболевания возникали в детских учреждениях и в рабочих поселках в весенне-осенний периоды года. Все вспышки носили пищевой характер и были связаны с употреблением салатов из «свежих» овощей. Иерсиниозная этиология заболеваний обоснована клиникоэпидемиологическими данными, выделением культур иерсиний и обнаружением специфических антител (Таблица 3).

В течении 11 – ти последних лет на территории Якутии официально регистрировали единичные случаи заболеваний иерсиниозами (Рисунки 2 и 3). В 2009-2010 гг. имеется тенденция к подъему заболеваемости кишечным иерсиниозом.

Ретроспективный анализ заболеваемости псевдотуберкулеза и кишечного иерсиниоза показал, что иерсиниозы в Якутии встречаются повсеместно.

–  –  –

0,11 0,108 0,106 0,104 0,102 0,1 0,1 0,1 0,1 0,1 0,1 0,098 0,096 0,094

–  –  –

Рисунок 3. Динамика заболеваемости кишечным иерсиниозом в Якутии в 2002-2013 гг.

Заболеваемость населения региона кишечным иерсиниозм во все годы была ниже среднероссийского уровня в 2-4,5 раза. За последние 10 лет официально зарегистрировано 27 случаев ОКИ, вызванных возбудителями кишечного иерсиниоза. Из числа заболевших иерсиниозами дети составляли 55,6%.

Заболеваемость регистрировали как среди детей дошкольного, так и школьного возраста (Рисунок 4).

Рисунок 4. Заболеваемость детей кишечным иерсиниозом в районах Якутиив 2002 - 2013 гг.

Однако, наблюдается неравномерное распределение инфекций по территории республики – их чаще регистрируют в крупных городах (Нерюнгри, Мирный, Якутск), а также в сельскохозяйственном центральном районе (Горный район). В г. Якутске зарегистрировано 12 случаев кишечного иерсиниоза. Кроме г. Якутска, по 1 случаю зарегистрировано в Горном, Мирнинском, Нерюнгринском районах. За аналогичный период зарегистрировано 6 случаев псевдотуберкулеза, в том числе среди детей до 14 лет 4 случая, из них по 1 случаю в Булунском, Горном, Нерюнгринском, районах и г. Якутске.

Заболеваемость кишечным иерсиниозом и псевдотуберкулезом регистрируется в одних и тех же районах республики, что свидетельствует о постоянной циркуляции возбудителей в объектах окружающей среды (Рисунки 4, 5).

Рисунок 5. Заболеваемость детей псевдотуберкулезом в районах Якутии в 2002 - 2013 гг.

В феврале 2014 г были выделены из испражнений двух больных детей 7-8 лет с острым аппендицитом 2 культуры Y. kristensenii.

Установлено, что наиболее характерными клининическими проявлениями при псевдотуберкулезе на территории Якутии являются поражение печени (гепатомегалия), длительная лихорадка, васкулит, эритема. Был выделен возбудитель псевдотуберкулеза от больного с желтушным вариантом острого гепатита. Клиническая картина при кишечном иерсиниозе разнообразна: острый живот, острая кишечная инфекция, кратковременный диарейный синдром, клиника гастроэнтеритов, колитов легкой степени. Была доказана роль иерсиний при острой хирургической патологии органов брюшной полости (выделены культуры из удаленных аппендиксов) при вспышечных заболеваниях в

Арктическом районе (Среднеколымский район), вызваны Y.enterocolitica О:9

(биотип 2). Одновременно в двух случаях от людей с ОКИ были выделены Y.

kristensenii, связанные с пищевым (молоко и молочные продукты местного производства) путем передачи инфекции, выделенные культуры были исследованы в Иркутском НИПЧИ. Изоляция таких штаммов от больных, при отсутствии других возбудителей, позволяет сделать заключение об их потенциальной роли в качестве этиологических агентов кишечного иерсиниоза человека. В этой связи практическим врачам было рекомендовано обследование больных с диагнозом «острая кишечная инфекция», «гастоэнтероколиты» на иерсиниозы. Однако, целенаправленные обследования больных на иерсиниозы проводились эпизодически, официальная статистика заболеваний, обусловленных иерсиниями, была представлена не многочисленными случаями. При подозрении на ОКИ, чаще врачами-клиницистами, больные направлялись на обследование только на сальмонеллезы, шигеллезы, эшерихиозы.

Учитывая выше сказанное, можно предполагать, что истинная распространенность иерсиниозов значительно выше регистрируемой, поскольку в большом проценте случаев ОКИ, с которыми иерсиниоз имеет общие симптомы, этиологический агент не был выявлен, а исследований на иерсиниозы не проводилось. Во многом это объяснялось отсутствием адекватных методов диагностики этих инфекций, а также недостаточной информированностью врачей клиницистов. В этой связи проведение микробиологического мониторинга за иерсиниозами в Якутии оказалось важным и адекватным направлением в расшифровке заболеваний иерсиниозами.

Глава 3. Особенности распространения иерсиний на территории Якутии

3.1. Распространение иерсиний в объектах окружающей среды С целью определения широты контаминации объектов окружающей среды иерсиниями разных видов за 10-летний период бактериологически исследовано 44709 проб, в том числе 40940 смывов с объектов окружающей среды и овощей, 3058 проб из органов мелких млекопитающих, а также 711 проб других объектов (вода открытых водоемов, почва, помет и гнезда грызунов, погадки хищных птиц, фекалии свиней и крупного рогатого скота) (Таблица 4).

Таблица 4. Результаты выделения бактерий рода Yersinia из объектов окружающей среды в 2002-2012 гг.

–  –  –

Бактериологическим методом выделено 237 культур, в том числе, 4 культуры Y. рseudotuberculosis, 122 культуры Y. enterocolitica биотипов 1А, 2, 4.

Выделены также 111 культур других видов иерсиний (Y. kristensenii, Y. intermedia, Y. frederiksenii), в том числе, бактерии рода Yersinia, не идентифицированные до вида, общепризнанными биохимическими тестами, используемыми в России.

При бактериологическом исследовании смывов из объектов окружающей среды (инвентарь общепита, оборудование для хранения, переработки и торговли овощами-фруктами), овощей, фруктов наибольшую частоту выделения составили Y. enterocolitica биотипа 1А - 95%, Y. enterocolitica биотипов 2, 4 - 5% от общего числа выделенных культур.

Из органов мелких млекопитающих выделено - 23 культуры, в том числе, из органов серых крыс на сельскохозяйственных объектах и объектах птицеводства - 4 культуры Y. рseudotuberculosis; из органов полевки экономки, домовой мыши, красно-серой полевки, красной полевки, бурозубки - 14 культур Y. enterocolitica биотипов 1А и 5 культур биотипов 2, 4. Выделено из органов полевки экономки, красно-серой полевки, красной полевки, леммингов - 79 культур Y. kristensenii; из органов серой крысы, полевки-экономки - 2 культуры Y.

frederikseni; а также 20 культур бактерий рода Yersinia, которые не представилось возможным идентифицировать до вида общепризнанными биохимическими тестами, используемыми в России (Таблица 4).

Начиная с 2006 г., в Якутии для идентификации иерсиний в ходе мониторинговых исследований объектов окружающей среды используется метод ПЦР. Его применение позволило существенно чаще обнаруживать иерсинии.

Доля положительных результатов, полученных этим методом (детекция ДНК рseudotuberculosis, составила 72% от всех Y. Y. enterocolitica) положительных находок в исследовании.

Учитывая вышеизложенное, в Якутии впервые проведены скрининговые микробиологические исследования с целью выявления циркуляции иерсиний и определения широты контаминации объектов окружающей среды иерсиниями разных видов.

–  –  –

2002 151 0 0 0 0,0-24,1 0 0 0 0 0 0 0,0 2003 106 0 0 0 0,0-3,4 0 0 0 0 0 0 0,0 2004 261 0 0 0 0,0-1,4 0 0 0 0 0 0 0,0 2005 325 0 0 0 0,0-1,1 0 0 0 0 0 0 0,0 2006 221 0 5 5 0,7-5,2 12 0 4 4 3 9,9-65,1 2,3 2007 256 0 2 2 0,1-2,8 357 0 0 0 0 0,0-1,0 0,8,, 2008 259 0 3 3 0,2-3,4 26 0 7 7 2 11,6-47,8 1,2 2009 279 4 7 11 2,0-6,9 334 4 60 64 1 15,1-23,8 3,9, 2010 359 0 1 1 0,0-1,5 366 0 35 35 9 6,8-13,1 0,3,, 2011 427 0 0 0 0,0-0,9 566 0 61 61 1 8,3-13,6 0,0 2012 414 0 1 1 0,0-1,3 774 0 130 130 1 14,2-19,6 0,2,

–  –  –

, Сравнение эффективности бактериологического метода и метода ПЦР при установлении инфицированности Y. рseudotuberculosis и Y. enterocolitica у млекопитающих в 2002-2012 гг. проводили при помощи критерия хи - квадрат, (Таблица 6).



Pages:     | 1 || 3 | 4 |

Похожие работы:

«ДОРОНИН Игорь Владимирович Cистематика, филогения и распространение скальных ящериц надвидовых комплексов Darevskia (praticola), Darevskia (caucasica) и Darevskia (saxicola) 03.02.04 – зоология Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: доктор биологических наук, заслуженный эколог РФ Б.С. Туниев Санкт-Петербург Оглавление Стр....»

«Трубилин Александр Владимирович СРАВНИТЕЛЬНАЯ КЛИНИКО-МОРФОЛОГИЧЕСКАЯ ОЦЕНКА КАПСУЛОРЕКСИСА ПРИ ПРОВЕДЕНИИ ФАКОЭМУЛЬСИФИКАЦИИ КАТАРАКТЫ НА ОСНОВЕ ФЕМТОЛАЗЕРНОЙ И МЕХАНИЧЕСКИХ ТЕХНОЛОГИЙ 14.01.07 – глазные болезни Диссертация на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Научный...»

«КОПИЙ ВЕРА ГЕОРГИЕВНА УДК 574.587 (252.5) СООБЩЕСТВА МАКРОЗООБЕНТОСА ПЕСЧАНОЙ ПСЕВДОЛИТОРАЛИ У ЧЕРНОМОРСКИХ БЕРЕГОВ КРЫМА Специальность 03.02.10 – гидробиология Диссертация на соискание учёной степени кандидата биологических наук Научный руководитель Заика Виктор Евгеньевич член-корреспондент НАН Украины, доктор биологических наук, профессор Севастополь 2014 СОДЕРЖАНИЕ ВВЕДЕНИЕ..4 РАЗДЕЛ 1. СОСТОЯНИЕ ИЗУЧЕННОСТИ...»

«ПОИСК ГЕНЕТИЧЕСКИХ ПОЛИМОРФИЗМОВ, АССОЦИИРОВАННЫХ С БИОЛОГИЧЕСКОЙ УСТОЙЧИВОСТЬЮ ОРГАНИЗМА К РАДИАЦИОННОМУ ВОЗДЕЙСТВИЮ Специальность «03.03.03 иммунология» Диссертация на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Научные руководители: член-корреспондент РАМН, профессор Алексеев Л.П. к.б.н. Кофиади И.А. Москва 2012 год СОДЕРЖАНИЕ СПИСОК...»

«КУРБАТОВА Ольга Леонидовна ДЕМОГРАФИЧЕСКАЯ ГЕНЕТИКА ГОРОДСКОГО НАСЕЛЕНИЯ 03.02.07 – генетика 03.03.02 – антропология ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени доктора биологических наук МОСКВА – 2014 ОГЛАВЛЕНИЕ ВВЕДЕНИЕ ГЛАВА 1. Материалы и методы ГЛАВА 2. Влияние процессов миграции на генофонды городских популяций 2.1. Теоретические предпосылки 12 2.2....»

«Шершнева Анна Михайловна ПОЛИМЕРНЫЕ МИКРОЧАСТИЦЫ НА ОСНОВЕ ПОЛИГИДРОКСИАЛКАНОАТОВ: ПОЛУЧЕНИЕ, ХАРАКТЕРИСТИКА, ПРИМЕНЕНИЕ Специальность 03.01.06 – Биотехнология (в т.ч. бионанотехнологии) ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: доктор биологических наук, Шишацкая Екатерина Игоревна...»

«ЗУБАРЕВА Кристина Эдуардовна Особенности распределения штамма мезенхимальных стволовых клеток в условиях опухолевого роста после сингенной трансплантации мышам линии C57BL/6 03.01.06 – биотехнология (в том числе бионанотехнологии) ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени кандидата...»

«СОКУР Светлана Александровна ОПТИМИЗАЦИЯ ИСХОДОВ ПРОГРАММ ВСПОМОГАТЕЛЬНЫХ РЕПРОДУКТИВНЫХ ТЕХНОЛОГИЙ У СУПРУЖЕСКИХ ПАР С ПОВЫШЕННЫМ УРОВНЕМ АНЕУПЛОИДИИ В СПЕРМАТОЗОИДАХ 14.01.01акушерство и гинекология Диссертация на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Научные руководители:...»

«ВУДС ЕКАТЕРИНА АНАТОЛЬЕВНА Фармакогенетические аспекты антиангиогенной терапии экссудативной формы возрастной макулярной дегенерации» 14.01.07 – Глазные болезни ДИССЕРТАЦИЯ на соискание учёной степени кандидата медицинских наук Научные руководители: доктор медицинских наук Будзинская Мария Викторовна кандидат биологических наук Погода Татьяна Викторовна Москва – 2015...»

«ФЕДЕРАЛЬНОЕ ГОСУДАРСТВЕННОЕ БЮДЖЕТНОЕ ОБРАЗОВАТЕЛЬНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ ВЫСШЕГО ОБРАЗОВАНИЯ «БАШКИРСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ АГРАРНЫЙ УНИВЕРСИТЕТ» НА ПРАВАХ РУКОПИСИ НИКУЛИНА НЕЛЯ ШАМИЛЕВНА ПРОДУКТИВНЫЕ КАЧЕСТВА И БИОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ КОРОВ ЧЕРНО-ПЕСТРОЙ ПОРОДЫ ПРИ ИСПОЛЬЗОВАНИИ ПРОБИОТИЧЕСКОЙ ДОБАВКИ «БИОГУМИТЕЛЬ-Г» 06.02.10 – частная зоотехния, технология производства продуктов животноводства Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: доктор...»

«Серёгин Сергей Викторович Оптимизация конструкций рекомбинантных ДНК для получения иммунобиологических препаратов 03.01.03 – молекулярная биология Диссертация на соискание ученой степени доктора биологических наук Научный консультант: доктор биологических наук Бажан Сергей Иванович...»

«Попцов Александр Леонидович ЗНАЧЕНИЕ ИНДИКАЦИИ ДНК ПАРВОВИРУСА В19 В ОБЕСПЕЧЕНИИ ИНФЕКЦИОННОЙ БЕЗОПАСНОСТИ ПЛАЗМЫ ДЛЯ ФРАКЦИОНИРОВАНИЯ 14.01.21 – Гематология и переливание крови ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Научный руководитель кандидат медицинских наук И.В....»

«САМБУУ Анна Доржуевна СУКЦЕССИИ РАСТИТЕЛЬНЫХ СООБЩЕСТВ В ТРАВЯНЫХ ЭКОСИСТЕМАХ ТУВЫ 03.02.01 – «Ботаника» 03.02.08 – «Экология» Диссертация на соискание ученой степени доктора биологических наук Научный консультант – доктор биологических наук, профессор А.А. Титлянова Кызыл – 2014 СОДЕРЖАНИЕ Введение... Глава 1....»

«Леонов Вячеслав Сергеевич Разработка технологии производства субстанций терапевтических вакцин против заболеваний, ассоциированных с вирусом папилломычеловека 6/11 и 16/18 типов 03.01.06 Биотехнология (в том числе бионанотехнология) Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель:...»

«Смешливая Наталья Владимировна ЭКОЛОГО-ФИЗИОЛОГИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ РЕПРОДУКТИВНОЙ ФУНКЦИИ СИГОВЫХ РЫБ ОБЬ-ИРТЫШСКОГО БАССЕЙНА 03.02.06 Ихтиология Диссертация на соискание учёной степени кандидата биологических наук Научный руководитель кандидат биологических наук, доцент Семенченко С.М. Тюмень – 2015 ОГЛАВЛЕНИЕ...»

«ФЕДЕРАЛЬНОЕ ГОСУДАРСТВЕННОЕ БЮДЖЕТНОЕ ОБРАЗОВАТЕЛЬНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ ВЫСШЕГО ПРОФЕССИОНАЛЬНОГО ОБРАЗОВАНИЯ «БАШКИРСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ АГРАРНЫЙ УНИВЕРСИТЕТ» УДК 637.54.087.73 НА ПРАВАХ РУКОПИСИ ШАРИПОВА АЛЬФИЯ ФАРИТОВНА БИОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ И МЯСНЫЕ КАЧЕСТВА ЦЫПЛЯТ-БРОЙЛЕРОВ ПРИ ИСПОЛЬЗОВАНИИ ПРОБИОТИЧЕСКОЙ КОРМОВОЙ ДОБАВКИ «ВЕТОСПОРИН-АКТИВ» 06.02.10 – частная зоотехния, технология производства продуктов животноводства Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук...»

«СЕРГЕЕВА ЛЮДМИЛА ВАСИЛЬЕВНА ПРИМЕНЕНИЕ БАКТЕРИАЛЬНЫХ ЗАКВАСОК ДЛЯ ОПТИМИЗАЦИИ ФУНКЦИОНАЛЬНО-ТЕХНОЛОГИЧЕСКИХ СВОЙСТВ МЯСНОГО СЫРЬЯ И УЛУЧШЕНИЯ КАЧЕСТВА ПОЛУЧАЕМОЙ ПРОДУКЦИИ Специальность 03.01.06 – биотехнология ( в том числе бионанотехнологии) Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель Доктор биологических наук, профессор Кадималиев Д.А. САРАНСК 2014 ОГЛАВЛЕНИЕ ВВЕДЕНИЕ.....»

«Проскурякова Лариса Александровна НАУЧНОЕ ОБОСНОВАНИЕ СИСТЕМЫ СОХРАНЕНИЯ ЗДОРОВЬЯ...»

«АРУТЮНЯН ЛУСИНЕ ЛЕВОНОВНА МНОГОУРОВНЕВЫЙ АНАЛИЗ СОСТОЯНИЯ КОРНЕОСКЛЕРАЛЬНОЙ ОБОЛОЧКИ ГЛАЗА В РЕАЛИЗАЦИИ НОВЫХ ПОДХОДОВ К ДИАГНОСТИКЕ И ЛЕЧЕНИЮ ПЕРВИЧНОЙ ОТКРЫТОУГОЛЬНОЙ ГЛАУКОМЫ 14. 01. 07 глазные болезни Диссертацияна соискание ученой степени доктора медицинских наук Научные консультанты:...»

«ДЕНИСЕНКО ВАДИМ СЕРГЕЕВИЧ ОПЕРЕЖАЮЩАЯ ФИЗИЧЕСКАЯ ПОДГОТОВКА СТУДЕНТОВ УЧЕБНЫХ ЗАВЕДЕНИЙ СФЕРЫ ФИЗИЧЕСКОЙ КУЛЬТУРЫ В КОНТЕКСТЕ ОБЕСПЕЧЕНИЯ НЕПРЕРЫВНОСТИ ПРОФЕССИОНАЛЬНОГО ОБРАЗОВАНИЯ 13.00.04 – Теория и методика физического воспитания, спортивной тренировки, оздоровительной и адаптивной физической культуры ДИССЕРТАЦИЯ на соискание...»







 
2016 www.konf.x-pdf.ru - «Бесплатная электронная библиотека - Авторефераты, диссертации, конференции»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.