WWW.KONF.X-PDF.RU
БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА - Авторефераты, диссертации, конференции
 


Pages:     | 1 | 2 || 4 |

«Флавоноиды растений Fagopyrum sagittatum Gilib. (гречихи посевной) и серпухи венценосной (Serratula coronata L.) (методы выделения, идентификация веществ, перспективы использования) ...»

-- [ Страница 3 ] --

Гречиха посевная – Fagopyrum sagittatum Gilib. богата биологически активными соединениями [Christa, Soral, 2008], в частности флавоноидами среди которых преобладают рутин, кверцетин, ориентин, изоориентин, витексин и изовитексин [Dietrych – Szostak, 2004; Dietrych – Szostak, Burda, Podolska, 2005;

Rutin and flavonoid contents..., 2007; Determination of optimised..., 2008; Comparison of phenolic...., 2008].

Сведения о составе и содержаний флавоноидов и других биологически активных соединений в отходах производства гречихи посевной (шелухе), произрастающей в РФ, в зависимости от сорта и места культивирования, в литературе малочисленны. Имеются сведения о составе флавоноидов в шелухе гречихи, выращиваемой в Сибири область), среди которых (Томская идентифицированы: гиперозид, рутин, лютеолин, кверцетин, кемпферол и апигенин [Туева, 2006].

Однако для шелухи гречихи посевной – Fagopyrum sagittatum Gilib., произрастающей на территории Приморского края Дальнего Востока России, исследований содержания биологически активных соединений, в частности флавоноидов, не проводилось.

Методами колоночной хроматографии по предложенной нами схеме из экстракта шелухи гречихи выделено два соединения. При элюировании смесью растворителей четыреххлористый углерод : этиловый спирт в соотношении 80 :

20 (об./об.) выделили и идентифицировали биологически активное соединение, относящиеся классу фитостеролов– –ситостерол–3–О––D–глюкопиранозид (ситостеролин). Это соединение не относится классу флавоноидов, но обладает ценными физиологическими свойствами. Основное действие соединения основано на снижение сорбции холестерина на стенках кровеносных сосудов, помимо этого ситостеролин обладает иммуномодулирующим действием [Pegel, 1997].

При элюировании смесью растворителей четыреххлористый углерод:

этиловый спирт в соотношении 40 : 60 (об./об.) выделили соединение класса флавоноидов– апигенин –6–С––D–глюкопиранозид (витексин).

–  –  –

В области 60 – 80 м.д. присутствуют 4 резонансных сигнала углеводного фрагмента молекулы. Cигнал пятого аномерного атома углерода имеет химический сдвиг 101,4 м.д., что свидетельствует о наличии полуацетальной связи углеводного фрагмента и –ситостерола. Совокупность химических сдвигов этих атомов указывает на наличие в молекуле исследуемого соединения глюкопиранозы.

Рисунок 11– ЯМР– 13С–спектр ситостеролина Для установления конфигурации гликозидной связи измеряли константу спин-спинового взаимодействия (J), используя данные ЯМР–1Н–спектра (рисунок 12). Измеренная константа спин–спинового взаимодействия аномерного протона при м.д.(д), составила что подтверждает наличие –D– 4,19 8,0 Hz, глюкопиранозного фрагмента в молекуле –ситостерола.

Также в ЯМР–1H–спектре соединения имеется сигнал 1H при 5,33 м.д., характерный для протона связанным с ненасыщенным атомам углерода при С–6 фрагмента в молекуле –ситостерола. Также в спектре соединения в сильнопольном поле имеются по 2 сигнала – синглета 0,64; 0,94 м.д. и дуплета – 0,79 (J=7,3 Hz); 0,88 (J=6,4 Hz), характерны для протонов –CH3 групп при С–18, С–19, С–21 и С–29 атомов углерода в молекуле фитостерола. Наличие сигналов в спектре в виде мультиплета при 2,99 – 3,00 м.д., характерны для 2H при С–3’ и С– 4’ фрагмента молекулы углевода.

Рисунок 12– ЯМР– 1H–спектр ситостеролина По данным масс–спектрометрического анализа в режиме электронной ионизации, при ионизирующем напряжении 70 В, молекулярный ион при m/z 576,79, отвечает брутто–формуле С35H60O6. Масса фрагментных ионов в спектре:

414,41 [M – C6H11O5]+ (5%); 396,53 [M – C6H11O6 (глюкоза)]+ (100%); 255,15 [M – C16H32O6]+ (15%) соответствует литературным данным для –ситостерола–3–O–– D–глюкопиранозида [Phytochemical investigation...., 2010] (приложение Б19).

Сравнивая полученные экспериментальные данные с литературными, установили, что выделенное соединение является –ситостерол–3–О––D– глюкопиранозидом (ситостеролином) [Isik, Sabudak, Oksuz, 2007; Study of steroidal saponins in Dioscorea Zingberensis, 2009; Phytochemical investigation...., 2010].

Ранее это соединение было выделено из лещины древовидной (орешка древовидного) – Corylus colurna и клевера персидского – Trifolium resupinatum var. microcephalum [Isik, Sabudak, Oksuz, 2007; Phytochemical investigation..., 2010].

Из шелухи гречихи посевной Fagopyrum sagittatum Gilib. ситостеролин выделен и идентифицирован впервые. На рисунке 13 представлена структурная формула выделенного соединения.

–  –  –

Флавоноид витексин выделен из экстракта шелухи гречихи посевной в виде желтых кристаллов c Тпл=201 – 203 С. В УФ–спектре наблюдаются максимумы поглощения при 337; 269; 215 нм, характерные для соединений флавоноидной природы (приложение Б20).

–  –  –

Батохромный сдвиг первой полосы поглощения на 24 нм при добавлении ацетата натрия к этанольному раствору флавоноида указывает на наличие гидроксигруппы у С–7, а батохромный сдвиг той же полосы на 46 нм в присутствии хлорида алюминия свидетельствует о наличии гидроксигруппы у С–5. Положение гидроксильной группы при С–4 подтверждается батохромным сдвигом первой полосы поглощения на 62 нм при добавлении этилата натрия.

Данные УФ–спектроскопии доказывают положение гидроксильных групп у C–7, C–5 и C–4.

В ЯМР С–спектре (рисунок 14) флавоноида наблюдается 20 сигналов.

Наиболее слабопольный сигнал 182,8 м.д. принадлежит атому С–4 карбонильной группы. Сравнение химических сдвигов остальных сигналов слабопольной части спектра с литературными данными позволяет утверждать, что в качестве агликона в флавоноиде выступает апигенин (таблица 17).

–  –  –

Рисунок 14– ЯМР– 13С–спектр витексина В сильнопольной части спектра (60 – 83 м.д.) присутствуют 6 сигналов, принадлежащих резонансу ядер атомов углеводного фрагмента молекулы. Число резонансных сигналов и их химические сдвиги подтверждают наличие в молекуле исследуемого соединения глюкопиранозы. Отсутствие в спектре характерного для флавоноидов сигнала при 94 м.д., свидетельствует о замещении атома водорода в положении С–8. В то же время химический сдвиг атома С–1 углеводного фрагмента молекулы при 74,0 м.д., указывает на отсутствие полуацетальной связи между атомами С–8 флавоноидного фрагмента и С–1 углеводного фрагмента, и наличие между ними С–С связи.

Для установления конфигурации гликозидной связи измеряли константу спин–спинового взаимодействия (J), используя данные ЯМР–1Н–спектра (рисунок 15). Измеренная константа спин–спинового взаимодействия аномерного протона при м.д.(д), составила что подтверждает наличие –D– 4,66 8,0 Hz, глюкопиранозного фрагмента в молекуле флавоноида.

Рисунок 15– ЯМР–1H–спектр витексина Также в ЯМР–1H – спектре соединения в слабопольном поле имеется сигнал

– синглет интенсивностью на 1H при 13,16 м.д., характерный для протона OH – группы у пятого атома углерода молекулы флавоноида. Кроме этого, в спектре присутствуют сигналы, характерные для протонов кольца В: два дуплета на 2H каждый с центрами 8,00 (J=12 Hz) и 6,89 (J=12 Hz), и сигналы 2H, характерные для кольца В и С: синглеты при 6,26; 6,78 м.д. cоотвественно.

Данные УФ–, ИК–, ЯМР–спектров и сравнение физико–химических

–  –  –

Рисунок 16– Апигенин–3–O––D–глюкопиранозид (витексин) Витексин биологически активное вещество, обладающее

– сосудорасширяющим действием и способствующее усилению ферментативного метаболизма в сердечной мышце [Препарат «Боярышник GN Экстракт».

электронный ресурс].

Впервые этот флавоноид был выделен и идентифицирован из Vitex lucens (семейство Verbenaceae) [Andersen, Markham, 2006]. Витексин содержится в растениях Acer palmatum, Chrysanthemum fuscatum, Ficus deltoidea, Crataegus monogyna, Cajanus cajan [Extraction of flavonoids..., 2006; Flavonoids from Chrysanthemum fuscatum, 2007; Influence of the extraction..., 2008; Vitexin and isovitexin...,2012], а также в растении – Fagopyrum esculentum (проростках, семенах, шелухе) [Chromatographic and spectrophotometric...,1967; Hegnauer, 1969;

Ohshita, Tsushida, 1997; Dietrychszostak, Oleczek, 1999; Максимов, Кулеш, Горовой, 2002; Клыков, 2014]. Из шелухи гречихи этот флавоноид количественно выделен впервые.

Таким образом, шелуха гречихи является перспективным источником для извлечения витексина, который может быть использован в качестве стандартного соединения для оценки его содержания в других видах растительного сырья.

3.3.3 Разделение и идентификация флавоноидов из шелухи и травы гречихи посевной методом обращенно-фазовой ВЭЖХ В литературе описано большое количество способов и методов разделения и идентификации флавоноидов, но, пожалуй, самыми пригодными для этих целей являются методы высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ), благодаря применению сорбентов с узкой фракцией дисперсности частиц и возможности нетрудоемкой замены полярности элюента. Нами исследована возможность разделения флавоноидов из исходных спиртовых экстрактов шелухи и травы гречихи посевной.

Разделение флавоноидов методом ВЭЖХ, проводится, как правило, на обращенно – фазовых сорбентах, чаще всего с привитым углеводородом (С18) при элюировании смесями ацетонитрил:вода или метанол:вода в различных соотношениях с небольшим содержанием (до 2%) уксусной кислоты. Эти подвижные фазы удобны для разделения сложных смесей флавоноидов в условиях изократического и градиентного элюирования и допускают использование УФ–детекторов [Хеншен и др., 1988].

Приведенные выше условия использованы для разделения флавоноидов из экстрактов травы и шелухи гречихи посевной. Разделение проводили на жидкостном хроматографе Shimadzu LC–6A c УФ–детектором в изократическом режиме. В качестве элюентов использовали смеси ацетонитрил : вода в различных соотношениях по объему и содержанием уксусной кислоты до 1%. На рисунках 12,13 приведены хроматограммы исходных спиртовых экстрактов травы и шелухи гречихи посевной.

–  –  –

в) Рисунок 17 – Хроматограммы экстракта шелухи гречихи посевной в системах ацетонитрил : вода (по объему) с содержанием 1% уксусной кислоты :

а) ацетонитрил : вода (40:60); б) ацетонитрил : вода (23:77); в) ацетонитрил : вода (15:80).

–  –  –

Рисунок 18 – Хроматограммы экстракта травы гречихи посевной в системах ацетонитрил : вода (по объему) с содержанием 1% уксусной кислоты: а) ацетонитрил : вода (15:80); б) ацетонитрил : вода (20:80).

Как видно из рисунков эффективность разделения пиков 17,18 флавоноидов, выделенных из шелухи гречихи посевной возрастает с уменьшением объемной доли ацетонитрила в системе до 15 %, а в экстрактах травы гречихи, эффективность разделения пиков возрастает с увеличением объемной доли ацетонитрила до 20 %. Таким образом, лучшие результаты разделения флавоноидов из экстракта шелухи гречихи достигаются при использовании системы ацетонитрил : вода (15:80) по объему с содержанием 1% уксусной кислоты, а для травы гречихи посевной ацетонитрил : вода (20:80) по объему с содержанием 1% уксусной кислоты. Поэтому дальнейшее исследование экстрактов проводили с использованием выбранных систем.

В выбранных нами условиях разделения и детектирования проведено сравнение хроматограмм индивидуальных соединений (рутина, кверцетина, ориентина, витексина) и компонентов экстрактов шелухи и травы гречихи посевной.

Идентификацию пиков на хроматограмме проводили сопоставлением времен удерживания компонентов экстракта по отношению к временам удерживания стандартных образцов флавоноидов.

Пики с временами удерживания 4,79 мин; 6,88 мин и 8,34 (при сравнении относительных времен удерживания исследуемого экстракта с аналогичными данными по индивидуальным веществам) отнесены к флавоноидам: ориентину, витексину и рутину соответственно.

Качественный состав флавоноидов шелухи и травы гречихи практически идентичен, но среди флавоноидов травы гречихи витексин не обнаружен.

Количественное определение отдельных флавоноидов проводили методом сравнения площадей пиков исследуемых и стандартных соединений. В диапазоне исследуемых концентраций площадь пика линейно зависит от концентрации исследуемого соединения. Это позволило применить метод сравнения для расчета содержания флавоноидов в исследуемых объектах.

В таблице 18 представлены результаты определения массовой доли идентифицированных флавоноидов в шелухе и траве гречихи – Fagopyrum sagittatum.

Таблица 18– Массовая доля флавоноидов (%) в траве и шелухе гречихи посевной

- Fagopyrum sagittatum.

Массовая доля флавоноидов, Массовая доля флавоноидов в % (относительно суммы пересчете на сухое сырье, % Флавоноиды флавоноидов) Трава Шелуха Трава Шелуха гречихи гречихи гречихи гречихи Ориентин 1,45 17,65 0,02 0,04 Витексин – 11,76 – 0,02 Рутин 87,14 11,76 0,95 0,02 Массовая доля флавоноидов в траве и шелухе гречихи составила 1,09±0,21% и 0,20±0,03 % соответственно в пересчете на рутин. Из литературных данных известно, что в траве гречихи, произрастающей в Самарской области, сумма флавоноидов варьирует от 5,3 до 6,1 % в пересчете на рутин, в зависимости от места произрастания и года сбора [Анисимова, 2011]. Массовая доля флавоноидов в шелухе гречихи, произрастающей в Кемеровской области, составляет 1,32 % [Туева, 2006]. По данным Ванг Инг и др. [2010] в шелухе гречихи, произрастающей на территории Китая, содержание флавоноидов составляет 1,10 %. На массовую долю флавоноидов в шелухе гречихи Польских сортов (Luba, Kora, Panda, Emka, Hzuszouska) приходится от 0,1 % до 0,15 % [Dietrych – Szostak, 2004], что близко по содержанию к шелухе, полученной после переработки гречихи, произрастающей на территории Приморского края.

Преобладающим флавоноидом в траве гречихи – Fagopyrum sagittatum является рутин, cодержание которого составляет 0,95 % в пересчете на сухое сырье (относительно суммы флавоноидов 87,17 %). В траве гречихи, (сорта Приморская и Изумруд), культивируемой в Приморском крае в период с 1997 по 1999 гг, массовая доля рутина в сырье варьировала от 2,4 % до 3,0 % в пересчете на сухое сырье [Клыков, 2000], что превышает содержание рутина, выделенного нами (1,31 1,91 %) из травы гречихи сорта «Башкирская красностебельная», собранной в Приморском крае в 2010 г.

По–видимому, это связано не только с сортом гречихи, но и значительным влиянием природных факторов среды в данный период (влажности, температуры). По данным М. М. Анисимовой [2011] в траве гречихи, культивируемой в Самарской области, массовая доля рутина составляла 2,5 – 3,7 % в пересчете на сухое сырье (относительно суммы флавоноидов 47 – 61 %), что значительно меньше содержания рутина (относительно суммы флавоноидов 87,17 %) выделенного из травы гречихи, произрастающей в Приморском крае. Повидимому, трава гречихи, культивируемой в Приморском крае, может быть перспективным сырьем для получения рутина (витамина Р).

В современной медицине рутин (витамин Р) применяют для профилактики и лечения сердечно–сосудистых заболеваний, гипертонии, сахарного диабета, язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки, ревматизма, злокачественных образований, заболеваний печени и желчного пузыря. Рутин уменьшает отмирание тканей при обморожении, усиливает защитные свойства организма работающих с рентгеновскими лучами и радиоактивными веществами [Мисюрева, 1998].

Доминирующим флавоноидом в шелухе гречихи, произрастающей в Приморском крае, является ориентин, массовая доля которого составляет 0,04 % в пересчете на сухое сырье (относительно суммы флавоноидов 17,65 %).

Массовая доля рутина в шелухе гречихи составляет 0,02 % в пересчете на сухое сырье (относительно суммы флавоноидов 11,76 %), что значительно меньше содержания в траве гречихи.

Из литературы известно, что доминирующим флавоноидом в шелухе гречихи Польских сортов (Luba, Kora, Panda, Emka, Hzuszouska) является рутин, массовая доля которого в зависимости от сорта варьирует от 0,05 до 0,08 % в пересчете на сухое сырье (относительно суммы флавоноидов 43–53 %) [Dietrych – Szostak, Burda, Podolska, 2005]. Массовая доля ориентина и витексина составляет 0,01–0,02 % (относительно суммы флавоноидов 6,0–13,3 %) [Dietrych

–Szostak, 2004]. По данным M. Watanabe et al. [1997] в шелухе гречихи культивируемой в Японии, массовая доля рутина составляет 0,004 %, витексина – 0,005 % (в пересчете на сухое сырье). Массовая доля рутина в шелухе гречихи, культивируемой в Канаде, варьирует от 0,05 до 0,08 % [Ooman, Mazza, 1996].

Таким образом, шелуха гречихи, произрастающей в Приморском крае, может являться источником для выделения флавоноида ориентина и последующего использования его в качестве стандартного соединения.

3.3.4 Определение ситостеролина в шелухе и траве гречихи посевной методом обращенно–фазовой ВЭЖХ Обычно разделение, идентификацию и количественное определение соединений класса фитостеролов в растительных объектах проводят методом обращенно–фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с использованием масс–спектрометрических [Careri, Elviri, Mangia, 2001; Rajanandh, и УФ–детекторов в диапазоне Kavitha, 2010; Extraction and analysis...., 2010] рабочих длинах волн 196 – 210 нм [Careri, Elviri, Mangia, 2001; Chronic Exposure..., 2008; Jian–lin, Ke, Xue–hua, 2008; Rajanandh, Kavitha, 2010; Extraction and Intraspecific variability of fireweed...., 2011]. Разделение analysis..., 2010;

фитостеролов проводят на привитых обращенных фазах С8 или C18 при элюировании смесями ацетонитрил : вода [Хеншен и др., 1988], метанол : вода ацетонитрил : метанол [Chronic Exposure..., 2008;

[Rajanandh, Kavitha, 2010], Intraspecific variability of fireweed...., 2011] или ацетонитрил : этанол [Je–Chiuan Ye et al., 2010]. Разделение и количественное определение ситостеролина методом ВЭЖХ, проводят на обращенной фазе С18 при элюировании смесями ацетонитрил : метанол в соотношении (20 : 80) об./об. [Chronic Exposure..., 2008] или 100 % метанолом [Jian–lin, Ke, Xue–hua, 2008]. Приведенные выше условия использовали для определения ситостеролина в экстракте шелухи и травы гречихи посевной. Нами проведено исследование наличия ситостеролина в траве гречихи посевной. Анализ проводили на жидкостном хроматографе Shimadzu LC

–6A c УФ–детектором при рабочей длине волны 210 нм в изократическом режиме. В качестве подвижной фазы использовали ацетонитрил : метанол в соотношении (20 : 80) об./об. Идентификацию ситостеролина на хроматограмме разделенной смеси экстракта проводили, сравнивая времена удерживания разделенных пиков с временем удерживания стандартного соединения ситостеролина. Количественное содержание определяли методом градуировочного графика.

Массовая доля ситостеролина в шелухе гречихи составила 0,16±0,04 % в пересчете на сухое вещество. В экстракте травы гречихи ситостеролин не обнаружен. Вероятно, это соединение образуется в процессе развития растения лишь в его отдельных органах. Так как, ситостеролин является биологически активным соединением, обладающим ценными физиологическими свойствами, действие которого основано на снижение сорбции холестерина на стенках кровеносных сосудов. Ситостеролин также обладает иммуномодулирующим действием. Использование шелухи гречихи вероятно перпективно как альтернативный источник выделения ситостеролина и последующего использования его в фармацевтической промышленности для получения препаратов, необходимых при лечении сердечно–сосудистых заболеваний.

–  –  –

Особое место в лекарственной флоре Дальнего Востока России занимают растения, содержащие экдистероиды, алкалоиды, флавоноиды и имеющие большое значение в медицине для создания новых лекарственных средств. Такие растения представляют собой резерв для расширения лекарственной сырьевой базы региона [Максимов, Кулеш, Горовой, 2002].

Доля дальневосточных растений в официальной медицине очень невелика.

Главным препятствием для введения этих растений в официальную практику является их недостаточная изученность. Как правило, сведения по химическому составу и фармакологическому действию ограничены и требуют дополнительных исследований.

Одним из таких растений является серпуха венценосная – Serratula coronata L.s.l.

Это растение содержит ценные биологически активные соединения, среди которых особое место занимают экдистероиды [Серпуха венценосная...., электронный ресурс; Володин, Лукша, Дайман, 1998; Экдистероиды в культурах клеток Serratula coronata и Ajuga reptans, 2002; Исследование химического состава...., 2003; Пунегова, 2004]. Данные исследований, проведенных в Дальневосточном государственном университете и Тихоокеанском институте биоорганической химии имени Г.Б. Елякова ДВО РАН, свидетельствуют о том, что основным экдистероидом в серпухе венценосной произрастающей на территории Приморского края Дальнего Востока является 20–гидроксиэкдизон [Зарембо, Горовой, Соколова, 2001]. Имеются сведения по содержанию в серпухе венценосной и флавоноидов [Исследование химического состава..., 2003;

Ангаскиева, 2006]. Известно, что флавоноиды растения, произрастающего в Сибири, представлены апигенином, лютеолином, кверцетином, кемпферолом, рутином, гликозидами лютеолина и кверцетина [Ангаскиева, 2006]. Однако сведения по содержанию флавоноидов в надземной части растения серпухи венценосной, произрастающей на территории Приморского края Дальнего Востока России, отсутствуют.

Нами проведено исследование содержания этих биологически активных соединений стеблях, листьях, соцветиях серпухи венценосной.

Методами жидкостной экстракции и препаративной колоночной хроматографии из экстрактов надземной части растения серпухи венценосной (соцветий, стеблей, листьев) выделено 3 соединения класса флавоноидов: 1 – 5,7,4–тригидрокси–3–метоксифлавон(изокемпферид), 2 – 5,7,4–тригидроксифлавон (апигенин), 3 – 5,7,3,4–тригидрокси–3–метоксифлавон (3–метилкверцетин).

3.4.1 Идентификация флавоноида 5,7,4–тригидрокси–3–метоксифлавона (изокемпферида) Изокемферид выделен из экстрактов соцветий и стеблей серпухи венценосной в виде желтых кристаллов с Тпл= 258 – 260 С. В УФ–спектре соединения наблюдаются максимумы поглощения при 349; 267 и 218 нм, характерные для соединений флавоноидной природы (приложение Б23).

В масс–спектре (приложение Б24), полученном методом химической ионизации при атмосферном давлении (APCI), присутствует один пик [M+H]+ с m/z 301,07, что отвечает брутто–формуле C16H12O6.

В ЯМР–13С–спектре данного соединения наблюдается 14 сигналов (рисунок 19). Химические сдвиги 13 резонансных сигналов в области 90 – 180 м.д.

сопоставимы с литературными данными флавоноида кемпферола (таблица 19).

–  –  –

Рисунок 19– ЯМР – 13С – спектр изокемпферида Методом УФ–спектроскопии исследовано влияние диагностических добавок (комплексообразующих и ионизирующих реагентов) на смещение полос в спектрах поглощения, что позволило установить положение гидрокси– и

–  –  –

Батохромный сдвиг ІІ полосы поглощения на 4 нм при добавлении ацетата натрия указывает на наличие гидроксигруппы у С–7 атома углерода, а батохромный сдвиг І полосы поглощения на 42 нм в присутствии хлорида алюминия свидетельствует о наличии гидроксигруппы у С–5. Положение гидроксигруппы при С–4 подтверждается батохромным сдвигом первой полосы поглощения на 47 нм при добавлении этилата натрия.

На основании полученных данных установлено положение гидроксильных групп у С–5, С–7 и С–4 атомов углерода.

Таким образом, на основании данных УФ–, ЯМР–С13– спектроскопии и масс–спектрометрии установлено, что выделенный флавоноид является 5,7,4– тригидрокси–3–метоксифлавоном (изокемпферидом) [Andersen, Markham, 2006].

–  –  –

3.4.2 Идентификация флавоноида 5,7,4- тригидроксифлавона (апигенина) Апигенин выделен из экстрактов соцветий и стеблей серпухи венценосной в виде светло–желтых кристаллов с Тпл=347–349 С. Соединение имеет характерный для флавоноидов УФ–спектр с максимумами поглощения при 339, 267, 215 нм (приложение Б25).

В масс–спектре присутствует один пик [М+Н]+ с m/z 271,06, что отвечает брутто–формуле C15H10O5 (приложение Б24).

В ЯМР–13С–спектре (рисунок 21) наблюдается 13 сигналов, расположенных в слабопольной и не наблюдающихся в сильнопольной части спектра, что свидетельствует об отсутствие заместителей в молекуле флавоноида.

Рисунок 21– ЯМР – 13С – спектр апигенина При исследовании спиртового раствора в УФ–области с диагностическими

–  –  –

Флавоноид 3–метилкверцетин выделен из экстрактов соцветий, стеблей и листьев серпухи венценосной в виде желтых кристаллов с Тпл = 274 – 276 C. УФ– спектр рассматриваемого соединения характерен для флавоноидов и имеет максимумы поглощения при длинах волн 356, 258, 214 нм (приложение Б26).

В масс–спектре (приложение Б24) присутствует единственный пик [М+Н]+ с m/z 317,07, что отвечает брутто–формуле C16H12O7. В ЯМР–13С–спектре исследуемого соединения наблюдается 16 сигналов (рисунок 23).

Рисунок 23 – ЯМР –13С–спектр 3–метилкверцетина Химические сдвиги 15 резонансных сигналов в области 90 – 180 м.д.

сопоставимы с литературными данными флавоноида кверцетина (таблица 22).

Таблица 22 – Значения химических сдвигов в спектрах ЯМР–13С 3– метилкверцетина и кверцетина Спектр ЯМР–13С Спектр ЯМР–13С

–  –  –

Методом УФ–спектроскопии с добавлением диагностических реагентов показано, что флановоноид имеет гидроксигруппы у С–5, С–7; С–3 и С–4 атомов углерода. Данные УФ–, ЯМР–13С–спектров и сравнение физико– химических величин с описанными в литературе позволили установить, что выделенное соединение является 5,7,3,4–тригидрокси–3–метоксифлавоном (3– метилкверцетином) [Flavonoids of Serratula cichoracea...., 2007].

–  –  –

Рисунок 24– 5,7,3,4–тригидрокси–3–метоксифлавон (3–метилкверцетин) Это соединение содержится в других видах рода Serratula: S. cichoracea [Aliouche, 2007], S. tinctoria [Яцюк, Лященко, 1969; Глызин, Баньковский, Мельникова, 1972; Соколов, 1993; S. tinctoria, a source..., 2009; Буданцев, 2013].

3.4.4 Разделение и идентификация флавоноидов, выделенных из надземной части серпухи венценосной методом обращенно–фазовой ВЭЖХ Исследована возможность разделения смеси флавоноидов из экстрактов надземной части серпухи венценосной (соцветий, листьев и стеблей) при изократическом элюировании системой растворителей ацетонитрил : вода при разных объемных соотношениях и содержанием до 1 % уксусной кислоты.

–  –  –

б) в) Рисунок 25 – Хроматограммы экстракта соцветий серпухи венценосной в системах ацетонитрил : вода (по объему) с содержанием 1% уксусной кислоты :

а) ацетонитрил : вода (15:85); б) ацетонитрил : вода (20:80); в) ацетонитрил : вода (40:60). Скорость ПФ 2 мл / мин.

–  –  –

Рисунок 26 – Хроматограммы экстракта листьев серпухи венценосной в системах ацетонитрил : вода (по объему) с содержанием 1% уксусной кислоты : а) ацетонитрил : вода (15:85); б) ацетонитрил : вода (20:80); в) ацетонитрил : вода (40:60). Скорость ПФ 2 мл / мин.

–  –  –

Рисунок 27 – Хроматограммы экстракта стеблей серпухи венценосной в системах ацетонитрил : вода (по объему) с содержанием 1% уксусной кислоты : а) ацетонитрил : вода (15:80); ацетонитрил : вода (20:80); б) ацетонитрил : вода (40:60). Скорость ПФ 2 мл / мин.

Как видно из рисунков 25, 26, 27 удовлетворительное разделение смеси флавоноидов из экстрактов соцветий, листьев и стеблей серпухи венценосной наблюдается при соотношении смеси ацетонитрил : вода (15 : 85) по объему, продолжительность анализа около 30 минут.

Значительное увеличение эффективности разделения пиков флавоноидов наблюдается при использовании фазы ацетонитрил : вода при соотношении (20 :

80) по объему. Дальнейшее увеличение концентрации ацетонирила до 40 % уменьшает время анализа, но значительно ухудшает разделение компонентов смеси флавоноидов.

Оптимальными условиями для разделения флавоноидов из экстрактов надземной части серпухи венценосной является использование в качестве подвижной фазы системы ацетонитрил : вода в объемных соотношениях (20:80) и содержанием до 1% уксусной кислоты при скорости подвижной фазы 2 мл/мин.

Дальнейшее исследование экстрактов проводили с использованием выбранной системы.

В выбранных нами условиях разделения проведено сравнение хроматограмм индивидуальных соединений (рутина, лютеолина, кверцетина, 3– метилкверцетина, апигенина, изокемпферида) и компонентов экстрактов соцветий, листьев и стеблей серпухи венценосной.

Идентификацию сигналов на хроматограмме проводили сопоставлением времен удерживания компонентов экстракта и стандартных образцов.

Пики с временами удерживания 4,69–4,94 мин; 4,97–6,39 мин; 5,86–7,49 мин; 10,43–13,26 мин и 13,17–16,88 мин (на основании результатов сравнения относительных времен удерживания исследуемого экстракта с аналогичными данными по индивидуальным веществам) отнесены к кверцетину, лютеолину, 3– метилкверцетину, апигенину и изокемпфериду соответственно.

Количественное определение отдельных флавоноидов проводили методом градуировочного графика.

В таблице 24 представлены результаты определения количественного содержания флавоноидов в надземной части растения серпухи венценосной – Serratula coronata.

Основная доля флавоноидов надземной части растения сосредоточена в листьях и варьирует в зависимости от места произрастания и года сбора (14,87– 18,50 %), значительно меньше в соцветиях (4,18 – 5,88 %) и минимальное в стеблях (2,61 – 3,44 %) в пересчете на рутин. По данным А.С. Ангаскиевой и др.

[Исследование химического состава..., 2003] в надземной части растения серпухи венценосной, произрастающей на юге Томской области, массовая доля флавоноидов составляет 7,3 %. В надземной части растения, произрастающей в Западной Сибири (Новосибирская область), массовая доля флавоноидов составляет 9,9 % [Flavonoids content..., 2008]. Данных по содержанию флавоноидов в серпухе венценосной – Serratula coronata в отдельных органах, в литературе не приводится. Есть сведения о содержании флавоноидов в серпухе красильной - Serratula tinctoria. По данным [Serratula tinсtoria, a source...., 2009] в листьях и стеблях серпухи красильной – Serratula tinctoria, произрастающей на юге Франции (Лаурисе), массовая доля флавоноидов составляет 1,45 – 1,55 % в листьях и в стеблях пересчете на сухое сырье).

0,3 % (в Таблица 24 – Массовая доля флавоноидов (%) в надземной части серпухи венценосной – Serratula coronata L.s.l.

–  –  –

Из идентифицированных флавоноидов серпухи венценосной (кверцетин, 3– метилкверцетин, лютеолин, апигенин и изокемпферид) все 5 являются агликонами (в состав молекулы флавоноида не входит углеводный остаток).

Наибольшее количество агликонов (около 30 %) содержится в соцветиях серпухи венценосной.

Преобладающим флавоноидом (агликоном) в надземной части растения является 3–метилкверцетин, cодержание которого в соцветиях колеблется в пределах от 10,4 % до 11,9 %, в листьях оно составляет 2,5 – 5,1 % и стеблях – 1,2

– 2,9 % (относительно суммы флавоноидов).

Массовая доля флавоноидов апигенина и изокемпферида в растении колеблется в зависимости от места и года его произрастания. Максимальное содержание в растениях, произрастающих в Хасанском районе, в диапазоне (0,97 – 8,84 % и 0,21 – 3,88 % соответственно), а минимальное - в растениях, произрастающих в Шкотовском районе (0,48 – 2,59 % и 1,45 % соответственно).

Причем в листьях, собранных в Шкотовском районе (сентябрь 2010 г.), апигенин и изокемпферид не обнаружены. По–видимому, это связано с влиянием сроков сборов образцов(сентябрь).

ВЫВОДЫ

1. Для выделения флавоноидов из отходов производства семян (травы, шелухи) гречихи посевной – Fagopyrum sagittatum Gilib. и надземной части (соцветия, листья, стебли) серпухи венценосной – Serratula coronata L.s.l. исследованы оптимальные условия (температура, соотношение сырье:экстрагент, время экстракции, соотношение компонентов экстрагента) методом жидкостной экстракции.

2. Максимальный выход флавоноидов из шелухи гречихи 0,20±0,03 % достигается экстракцией сырья 40 % раствором этилового спирта на кипящей водяной бане двукратно в течение 90 минут и соотношении сырье:экстрагент 1:30; максимальный выход флавоноидов из травы гречихи посевной 1,09±0,21% достигается при экстракцией 60 % раствором этилового спирта при температуре 65 С в течение 90 минут и соотношении сырье : экстрагент 1:50.

3. Максимальный выход флавоноидов из листьев серпухи венценосной 15,11±2,07 % достигается экстракцией 70 % раствором этилового спирта при температуре 65 С в течение 60 минут; соотношение сырье : экстрагент 1:30;

максимальный выход флавоноидов из соцветий серпухи венценосной достигается экстракцией 70 % этиловым спиртом при 5,88±0,07 % температуре 65 С в течение 120 минут; соотношении сырье: экстрагент 1:50.

4. Схема выделения и очистки флавоноидов из отходов производства семян (травы, шелухи) гречихи посевной – Fagopyrum sagittatum Gilib. и надземной части серпухи венценосной Serratula coronata L.s.l. включает 3 стадии:

экстракция сырья этанолом, концентрирование полученного экстракта при пониженном давлении, разделение исследуемых компонентов методом препаративной колоночной хроматографии.

5. Методом высокоэффективной жидкостной хроматографии в шелухе гречихи идентифицировано 3 соединения класса флавоноидов (рутин, ориентин, витексин), в траве – 2 соединения (рутин, ориентин) и показано, что доминирующим флавоноидом в шелухе гречихи является ориентин, а в траве рутин; массовая доля этих веществ составляет 17,65 % и 87,14 % от суммы флавоноидов.

6. Впервые из шелухи гречихи посевной выделено биологически активное соединение ситостеролин, структура которого доказана методами УФ–, ИК–, С, ЯМР– 1Н – спектроскопии и масс–спектрометрии; массовая доля ЯМР– ситостеролина в растении составляет 0,16 % (в пересчете на воздушно–сухую массу).

7. Методом высокоэффективной жидкостной хроматографии исследован состав флавоноидов в надземной части серпухи венценосной Serratula coronata, и идентифицировано 5 соединений, относящихся к классу флавоноидов лютеолин, апигенин, изокемпферид);

(кверцетин, 3–метилкверцетин, флавоноиды в растении представлены агликонами. Доминирующим флавоноидом в надземной части Serratula coronata является 3–метилкверцетин, cодержание которого в соцветиях колеблется в пределах от 10,4 до 11,9%, в листьях 2,5 – 5,1 % и стеблях - 1,2 – 2,9 % (относительно суммы флавоноидов).

8. Исследованные виды растений являются перспективными биологическими ресурсами источниками получения флавоноидов рутина, ориентина, витексина, 3метилкверцетина, изокемпферида и фитостерола ситостеролина.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ И УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ

ОФ ВЭЖХ – обращенно–фазовая высокоэффективная жидкостная хроматография;

ГСО – государственный стандартный образец;

УФ – ультрафиолетовый;

ИК – инфракрасный;

ЯМР – ядерно–магнитный резонанс;

ПФ – подвижная фаза.

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ6

1. Ангаскиева, А.С. Фармакологическое исследование серпухи венценосной культивируемой в Сибири: автореф. дисс…канд. фарм.наук: 15.00.02/ Ангаскиева Аюна Сыреновна. – Томск, 2006. – 19с.

Андреева, В.Ю. Разработка методики количественного определения 2.

флавоноидов в манжетке обыкновенной Alchemilla vulgaris L.s.l./ В.Ю. Андреева, Г.И. Калинкина// Химия растительного сырья. – 2000. – № 1. – С. 85 – 88.

3. Андреева, В.Ю. Исследование химического состава надземной части манжетки обыкновенной Alchemilla vulgaris L.s.l./ В.Ю. Андреева, Г.И. Калинкина// Химия растительного сырья. – 2000. – № 2. – С. 79 – 85.

4. Андреева, В.Ю. Оценка элементного состава некоторых видов лекарственного растительного сырья, произрастающих на территории Томской области и предлагаемых к использованию в кардиологической практике/ В.Ю. Андреева, А.С. Ангаскиева// Химия растительного сырья. – 2011. – № 2. – С. 149 – 151.

5. Анисимова, М.М. Фармакологическре исследование травы гречихи посевной (Fagopyrum sagittatum Gilib.): автореф. дисс…канд. фарм. Наук: 14.04.02/ Анисимова Мария Михайловна. – Самара, 2011. – 25с.

6. Анисимова, М.М. Качественный и количественный анализ флавоноидов травы гречихи посевной /М.М. Анисимова, В.А. Куркин, В.Н. Ежков//Известия Самарского научного центра Российской академии наук. – 2010. – Т. 12, № 1(8). – С. 2011 – 2014.

7. Баркалов, В.Ю. Сосудистые растения советского Дальнего Востока: 8 томах.

Том 6. Астровые (сложноцветные)/ В.Ю. Баркалов, А.А. Коробков, Н.Н. Цвелев;

под. общ. ред. С.С. Харкевич. Спб.: Наука, 1992.427c.

8. Беляков, В.А. О переносе энергии с химически возбужденных карбонильных соединений на производные антрацена и кислород/ В.А. Беляков, Р.Ф. Васильев, Г.Ф. Федорова// Известия АН СССР. – 1973. – Т. 37, № 4. – С. 747 – 752.

6 Список литературы оформлен в соответствии с ГОСТ 7.1 – 2003 БИБЛИОГРАФИЧЕСКАЯ ЗАПИСЬ.

БИБЛИОГРАФИЧЕСКОЕ ОПИСАНИЕ. Общие требование и правила составления

9. Беляков, В.А. Кинетика жидкостного окисления дифенилметана при умеренных температурах/ В.А. Беляков, Р.Ф. Васильев, Г.Ф. Федорова// Кинетика и катализ.

1996.Т. 37, № 4.С. 542552.

10. Ботиров, Э.Х. Химическое исследование флавоноидов лекарственных и пищевых растений/Э.Х. Ботиров, А.В. Дренин, А.В. Макарова//Химия растительного сырья. – 2006. – № 1. – С. 45 – 48.

11. Бубенчикова, В.Н. Разработка методик качественного и количественного определения флавоноидов в сырье ромашки аптечной/ В.Н. Бубенчикова, Ю.А.

Кондратова//Кубанский научный медицинский вестник. –2006.– № 10.– С. 19 – 21.

12. Буданцев, А.Л. Растительные ресурсы России: Дикорастущие цветковые растения, их компонентный состав и биологическая активность: Том 5. Семейство Asteraceae/ А.Л. Буданцев.– СПб.; М.: Товарищество научных изданий КМК, 2013. – 312с.

13. Ванг Инг. Состояние процесса производства и разработка стратегий в отношений продуктов из гречихи в Китае/ Ванг Инг, Чен Дзя, Фенг Ибаили// Вестник Орловского государственного аграрного университета. – 2010. – № 4 (25). – С. 9 – 14.

14. Ванидзе, М.Р. Флавоноидные соединения плодов Фейхоа/ М.Р. Ванидзе, А.Г.

Каландия, А.Г. Шалашвили//Химия растительного сырья. – 2009. – № 3. – С. 103 – 108.

Васильев, Р.Ф. Хемилгомипесценция, активированная производными 15.

антрацена/ Р.Ф. Васильев, А.А. Вичутинский, А.С. Черкасов// Доклады АН СССР.

– 1963. – Т. 149, № 1. – С. 124 – 127.

16. Ведерников, Д.Н. Экстрактивные вещества почек березы повислой Betula pendula Roth. (Betulaceae). 4. Состав сесквитерпеновых диолов, триолов, флавоноидов/ Д.Н. Ведерников, В.И. Рощин// Химия растительного сырья. – 2011.

– № 1. – С. 111–118.

17. Возобновляемые источники химического сырья: комплексная переработка отходов производства риса и гречихи/ В.И. Сергиенко, Л.А. Земнухова, А.Г.

Егоров, Е.Д. Шкорина, Н.С. Василюк//Российский химический журнал. – 2004. – Т. XLVIII, № 3. – С. 116 – 124.

18. Володин, В.В. Инокостерон и макистерон из Serratula coronata /В.В. Володин, В.Г. Лукша, Л. Дайман// Физиология растений. – 1998. – Т. 45, № 3. – С. 378 – 382.

19. Воробьева, А.Н. Таксономия и фитоэкдистероиды Дальневосточных видов родов Stemmacantha Cass., Serratula L. и Saussurea DC. (Asteraceae): дисс….канд.

биол. наук: 03.00.32/Воробьева Анна Николаевна. – Владивосток, 2004. – 174с.

20. Выбор оптимальных условий экстракции и количественного определения флавоноидов в растительных сборах для лечения заболеваний органов пищеварения/К.А. Пупыкина, С.А. Мещерякова, Г.И. Сафиулова, С.В. Закиева// Медицинский вестник Башкортостана. – 2008. – № 4. – С. 80 – 83.

21. Высокоэффективная жидкостная хроматография в биохимии/ под. ред. А.

Хеншен, К.-П. Хупе, Ф. Лотшпайх, В. Вёльтер. – М.: Мир, 1988. – 685c.

22. Гелла, Э.В. Фармакогностическое исследование растений–источников биологически активных кислородсодержащих гетероциклических соединений и оксикоричных кислот : дисс…докт. фарм. наук/ Гелла Эдуард Викторович :

15.00.02. – М., 1991. – 81с.

23. Георгиевский, В.П. Биологически активные вещества лекарственных растений/ В.П. Георгиевский, Н.Ф. Комиссаренко, С.Е. Дмитрук.Новосибирск:

Наука, 1990. 333с.

24. Глинкевич, Н.И. Химический анализ лекарственных растений: изд 2–ое, перераб. и дополн./ Н.И. Глинкевич, Л.Н. Софрович. – М.: Высшая школа, 1983. – 176c.

25. Глызин, В.И. 3-O-метилкверцетин из Serratula inermis/В.И. Глызин, А.И.

Баньковский, Т.М. Мельникова// Химия природных соединений. – 1972. – № 3. – С. 389 – 390.

26. Государственная фармакопея СССР. Одиннадцатое издание. М.: Медицина, 1990. – Вып. 2. – 399с.

27. Гришина, Е.И. Фармакогнозия: электронное учебное пособие/ Е.И. Гришина, И.С. Погодин, Е.А. Лукша. Омск: 2008.1067с.

28. Групповой состав фенольных соединений, извлекаемых из плодовых оболочек гречихи посевной (Fagopyrum esculentum Moench)/ Э.Р. Каримова, Э.Т.

Ямансарова, О.С. Куковинец, М.И. Абдуллин// Вестник Башкирского университета : Серия Химия. – 2011. – Т.16, № 4. – С. 1167 – 1169.

29. Гужва, Н.Н. Биологически активные вещества астрагала экспарцетного, произрастающего в Предкавказье/ Н.Н. Гужва//Химия растительного сырья. – 2009. – № 3. – С. 123 – 132.

30. Дерффель, К. Статистика в аналитической химии/ К. Дерффель. – М.: Мир, 1994. – 380с.

Доржиева, Е.Д.-Ж. Разработка методик определения подлинности 31.

лекарственного сырья – серпухи венценосной/ Е.Д.-Ж Доржиева// Сборник статей Всероссийской 64-ой итоговой студенческой крнференции им. Н.И. Пирогова.Томск, 2005. – С.360.

32. Дренин, А.А. Флавоноиды и изофлавоноиды трех видов растений родов Trifolium L. и Vicia L.: автореф. дисс…канд. хим. наук/ Дренин Алексей Анатольевич. –Сургут, 2008. – 24с.

33. Дудкин, Р.В. Оценка качества сухого экстракта «Секрет молодости»/Р.В.

Дудкин, И.А. Девяткина, А.Е. Бурова// Вестник ВГУ. –2005. – № 1. – С. 170 – 174.

34. Евдокимова, О.В. Разработка и валидация методики количественного определения суммы флавоноидов в траве тысячелистника/ О.В. Евдокимова// Вестник ВГУ. Химия, биология, фармация. –2007. – № 2. –С. 155 – 160.

35. Жуковский, П.М. Культурные растения и их сородичи/ П.М. Жуковский. – Л.:

Колос, 1971. –752с.

36. Зарембо, Е.В. Содержание 20 – гидроксоэкдизона в видах родах Rhaponticum Ludw. и Serratula L. флоры Дальнего Востока России/Е.В. Зарембо, П.Г. Горовой, Л.И. Соколова // Растительные ресурсы. – 2001. – № 3. – С. 59 – 64.

37. Зиэп, Т.Т. Нго. Разработка методики количественного определения суммарного содержания флавоноидов в траве пустырника спектрофотометрическим методом/Зиэп Т.Т. Нго, Е.В. Жохова// Химия растительного сырья. – 2007. – № 4. – С. 73 – 77.

38. Зиятдинова, Г.К. Определение флавонолов в фармпрепаратах методом вольтамперометрии/Г.К. Зиятдинова, Г.К. Будников//Химико – фармацевтический журнал. – 2005. – Т. 39, № 10. – С. 54 – 56.

39. Зотиков, В.И. Современное состояние и перспективы развития производства гречихи в России/ В.И. Зотиков, Т.С. Наумкина, В.С. Сидоренко//Вестник Орловского государственного аграрного университета. – 2010. – Вып. 25, № 4. – С. 18.

40. Изучение масс – спектрометрического поведения природных флавоноидных агликонов, продуктов их исчерпывающего метилирования и тридейтерометилирования/ Г.П. Кононенко, С.А. Поправко, Б.В. Розынов, В.Г.

Заикин, Н.С. Вульфсон// Биоорганическая химия.–1980.– Т. 6, № 2. – С. 267 – 280.

41. Использование соломы в качестве удобрения: рекомендации/ О.Г. Назаренко, Т.Г. Пашковская, В.И. Продан, Е.А. Чеботникова. –пос. Рассвет: ФГУ ГЦАС «Ростовский», 2011. – 11 c.

42. Исследование качественного и количественного состава густого экстракта первоцвета лекарственного /Г.М. Латыпова, З.Р. Романова, В.Н. Бубенчикова, Г.В.

Аюпова// Химия растительного сырья. – 2009. – № 4. – С. 113 – 116.

Исследование фенольных соединений листьев голубики, брусники, 43.

толокнянки, черники и зимолюбки, произрастающих а республики Саха (Якутия)/ Л.П. Охрименко, Г.И. Калинкина, Е.А. Лукша, Н.Э. Коломиец//Химия растительного сырья. – 2009. – № 3. – С. 109 – 115.

44. Исследование химического состава серпухи венценосной культивируемой в Сибири/ А.С. Ангаскиева, В.Ю. Андреева, Г.И. Калинкина, Е.Н. Сальникова, Е.А.

Бородышена, Т.Г. Харина//Химия растительного сырья. – 2003. – № 4. – С. 47– 50.

45. Каминский, В.Д. Гречневая лузга как кормовая добавка/ В.Д. Каминский, А.И.

Карунский, М.Б. Бабич// Хранение и переработка зерна.- 2000. - № 5. – С. 26 – 31.

46. Каримов, А. Флавоноиды Scutellaria haematochlora Juz. и S. ocellata Juz./А.

Каримов, М.П. Юлдашев, Э.Х. Ботиров//Химия растительного сырья. – 2012. – № 3. – С. 101 – 105.

47. Клыков, А.Г. Биологические ресурсы видов рода Fagopyrum Mill. (гречиха) на Российском Дальнем Востоке (таксономия, химический состав, возможности использования, культивирование):дисс….докт. биол. наук: 03.02.14; 03.02.08/ Клыков Алексей Григорьевич. – Владивосток, 2014.– 403c.

48. Клыков, А.Г. Изучение исходного материала гречихи с целью создания сортов с высоким содержанием рутина: автореф. дисс… канд. сельск. наук :

06.01.05/ Клыков Алексей Григорьевич. – Благовещенск, 2000. – 16с.

49. Клышев, Л.К. Флавоноиды растений (распространение, физико – химические свойства, методы исследования)/ Л.К. Клышев, В.А. Бандюкова, Л.С. Алюкина. – Алма – Ата: Наука «Казахской ССР», 1978. – 220c.

50. Коноплева, М.М. Природные биологически активные вещества/ М.М.

Коноплева//Фармакогнозия. –1999. – С. 68 – 69.

51. Коноплева, М.М. Фармакогнозия: природные биологически активные вещества/ М.М. Коноплева. – Витебск: ВГМУ, 2002. – 210c.

52. Коцупий, О.В. Изменчивость состава и содержания флавоноидов Astragalus membranaceus (Fischer) Bunge из Восточной Сибири / О.В. Коцупий// Сибирский ботанический вестник [электронный журнал]. – 2007. – Т. 1, Вып. 2. –С. 69 – 78.

53. Кудринская, В.А. Спектрофотометрическое определение флавоноидов по реакции азосочетания с тетрафторборатом 4–нитрофенилдиазония/В.А.

Кудринская, С.Г. Дмитриенко, Ю.А. Зотов// Вестник Московского университета.

– 2010. – Т. 51, № 4. – С. 296 – 301.

54. Куркина, А.В. Методика количественного определения суммы флавоноидов в траве репешка аптечного/ А.В. Куркина// Химико – фармацевтический журнал. – 2011. –Т.45, № 1. – С. 88 – 91.

55. Лебедев, А.Т. Масс – спектрометрия в органической химии/ А.Т. Лебедев. – М.: БИНОМ. Лаборатория знаний, 2003. – 493 c.

56. Лобанова, А.А. Исследование биологически активных флавоноидов в экстрактах из растительного сырья/ А.А. Лобанова, В.В. Будаева, Г.В. Сакович// Химия растительного сырья. –2000. – № 1. – С. 47 – 52.

57. Лобанова, И.Ю. Выделение и изучение состава флавоноидов листьев осины обыкновенной/ И.Ю. Лобанова, В.Ф. Турецкова //Химия растительного сырья. – 2011. – № 2. – С. 117 – 122.

58. Ломбоева, С.С. Методика количественного определения суммарного содержания флавоноидов в надземной части ортилии однобокой (Orthilia secunda (L.) House)/C.C. Ломбоева, Л.М. Танхаева, Д.Н. Оленников// Химия растительного сырья. – 2008. – № 2. – С. 65 – 68.

59. Лоскутова, Е. Исследование состава отходов производства гречихи для обоснования возможности получения ценных продуктов/Е. Лоскутова, С.

Кленышева [Электронный ресурс]. Режим доступа: http:/www. Zkola.ru/docs/indexhtml, свободный.

60. Лукьянчикова, Г.И. Исследование биологически активных флавоноидов в экстрактах из растительного сырья/ Г.И. Лукьянчикова, С.Г. Тираспольская// Фармация. – 1985. – Т. 35, № 6. – С. 60 – 61.

61. Максимов, О.Б. Полифенолы дальневосточных растений// Б.О. Максимов, Н.И. Кулеш, П.Г. Горовой. – Владивосток: Дальнаука, 2002. – 332с.

62. Малахова, О.В. Метод неводного титрования в определении биологически активных флавоноидов/ О.В. Малахова, Э.Р. Ишкенов, М.К. Наурызбаев//Тезисы докладов VII конференции «Аналитика Сибири и Дальнего Востока – 2004». – Новосибирск, 2004. – Т. 2 – С. 193.

63. Махлюак, В.П. Лекарственные растения в народной медицине/ В.П. Махлюак.

– Саратов: Приволжкое книжное изд – во, 1993. – 542с.

64. Методика количественного определения суммарного содержания флавоноидов в новом средстве растительного происхождения «3 красных»/Т.В. Корнопольцева, Б.Б. Батомункуев, Г.В. Чехирова, Т.А. Асеева// Сибирский медицинский журнал.

– 2008. – Т. 83, № 8. – С. 84 – 86.



Pages:     | 1 | 2 || 4 |

Похожие работы:

«СЕТДЕКОВ РИНАТ АБДУЛХАКОВИЧ РАЗРАБОТКА НОВЫХ СРЕДСТВ СПЕЦИФИЧЕСКОЙ ПРОФИЛАКТИКИ И ЛЕЧЕНИЯ ЭШЕРИХИОЗОВ ТЕЛЯТ И ПОРОСЯТ 06.02.02 – ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология Диссертация на соискание ученой степени доктора ветеринарных наук Научный консультант: доктор ветеринарных наук, профессор, заслуженный деятель науки РФ и РТ Юсупов...»

«РАХМАТУЛЛИН Рамиль Рафаилевич БИОПЛАСТИЧЕСКИЙ МАТЕРИАЛ НА ОСНОВЕ ГИДРОКОЛЛОИДА ГИАЛУРОНОВОЙ КИСЛОТЫ И ПЕПТИДНОГО КОМПЛЕКСА ДЛЯ ВОССТАНОВИТЕЛЬНОЙ И РЕКОНСТРУКТИВНОЙ ХИРУРГИИ...»

«ГОРБУНОВА Анна Николаевна ГИДРОЛИЗ РАЦЕМИЧЕСКИХ АМИДОВ ФЕРМЕНТАМИ ПОЧВЕННЫХ АКТИНОБАКТЕРИЙ 03.02.03 Микробиология Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: кандидат биологических наук, доцент Максимов А. Ю. Пермь – 201 ОГЛАВЛЕНИЕ ВВЕДЕНИЕ ГЛАВА 1. ОБЗОР...»

«Мухаммед Тауфик Ахмед Каид ХАРАКТЕРИСТИКА ГЕНОТИПОВ С ХОРОШИМ КАЧЕСТВОМ КЛЕЙКОВИНЫ, ОТОБРАННЫХ ИЗ ГИБРИДНЫХ ПОПУЛЯЦИЙ АЛЛОЦИТОПЛАЗМАТИЧЕСКОЙ ЯРОВОЙ ПШЕНИЦЫ МЯГКОЙ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ДНК-МАРКЕРОВ Специальность 06.01.05 – селекция и семеноводство сельскохозяйственных растений Диссертация на соискание ученой степени кандидата сельскохозяйственных наук Научный...»

«КОПИЙ ВЕРА ГЕОРГИЕВНА УДК 574.587 (252.5) СООБЩЕСТВА МАКРОЗООБЕНТОСА ПЕСЧАНОЙ ПСЕВДОЛИТОРАЛИ У ЧЕРНОМОРСКИХ БЕРЕГОВ КРЫМА Специальность 03.02.10 – гидробиология Диссертация на соискание учёной степени кандидата биологических наук Научный руководитель Заика Виктор Евгеньевич член-корреспондент НАН Украины, доктор биологических наук, профессор Севастополь 2014 СОДЕРЖАНИЕ ВВЕДЕНИЕ..4 РАЗДЕЛ 1. СОСТОЯНИЕ ИЗУЧЕННОСТИ...»

«Радугина Елена Александровна РЕГУЛЯЦИЯ МОРФОГЕНЕЗА РЕГЕНЕРИРУЮЩЕГО ХВОСТА ТРИТОНА В НОРМЕ И В УСЛОВИЯХ ИЗМЕНЕННОЙ ГРАВИТАЦИОННОЙ НАГРУЗКИ 03.03.05 – биология развития, эмбриология Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: Доктор биологических наук Э.Н. Григорян Москва – 2015 Оглавление Введение Обзор литературы 1 Регенерация...»

«САФИНА ЛЕЙСЭН ФАРИТОВНА Анафилактический шок на ужаления перепончатокрылыми насекомыми (частота встречаемости, иммунодиагностика, прогнозирование) 14.03.09 – клиническая иммунология, аллергология Диссертация на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Научный...»

«Якимова Татьяна Николаевна Эпидемиологический надзор за дифтерией в России в период регистрации единичных случаев заболевания 14.02.02 эпидемиология диссертация на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Научный руководитель: доктор...»

«БАРИНОВА Ирина Владимировна Патогенез и танатогенез плодовых потерь при антенатальной гипоксии 14.03.02 – Патологическая анатомия ДИССЕРТАЦИЯ на соискание учёной степени доктора медицинских наук Научные консультанты: Заслуженный деятель науки РФ Доктор биологических наук, доктор медицинских наук, профессор профессор САВЕЛЬЕВ...»

«Гуськов Валентин Юрьевич МОРФОЛОГИЧЕСКАЯ И ГЕНЕТИЧЕСКАЯ ИЗМЕНЧИВОСТЬ БУРОГО МЕДВЕДЯ URSUS ARCTOS LINNAEUS, 1758 ДАЛЬНЕГО ВОСТОКА РОССИИ 03.02.04 – зоология Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель доктор биологических наук, с.н.с. А.П. Крюков Владивосток – 2015 Оглавление Введение Глава 1. Обзор...»

«УДК 256.18(268.45) ШАВЫКИН АНАТОЛИЙ АЛЕКСАНДРОВИЧ ЭКОЛОГО-ОКЕАНОЛОГИЧЕСКОЕ СОПРОВОЖДЕНИЕ ОСВОЕНИЯ НЕФТЕГАЗОВЫХ МЕСТОРОЖДЕНИЙ АРКТИЧЕСКОГО ШЕЛЬФА (НА ПРИМЕРЕ БАРЕНЦЕВА МОРЯ) Специальность 25.00.28 «океанология» Диссертация на соискание ученой степени доктора географических наук Мурманск – 2015 ОГЛАВЛЕНИЕ ОГЛАВЛЕНИЕ ВВЕДЕНИЕ...»

«КУДРЯШОВА ЛЮДМИЛА ЮРЬЕВНА ОСОБЕННОСТИ БИОЛОГИИ АМЕРИКАНСКОГО ТРИПСА ECHINOTHRIPS AMERICANUS MORGAN И ПРИЁМЫ БОРЬБЫ С НИМ В ОРАНЖЕРЕЯХ СЕВЕРО-ЗАПАДА РФ Специальность 06.01.07 – Защита растений ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: доктор сельскохозяйственных наук, профессор, заслуженный...»

«УДК 5 КАРАПЕТЯН Марина Кареновна АНТРОПОЛОГИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ МОРФОЛОГИЧЕСКОЙ ИЗМЕНЧИВОСТИ КОСТНОГО ПОЗВОНОЧНИКА (ПО МЕТРИЧЕСКИМ И ОСТЕОСКОПИЧЕСКИМ ДАННЫМ) 03.03.02 «антропология» по биологическим наукам ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени кандидата биологических наук НАУЧНЫЙ РУКОВОДИТЕЛЬ: доктор исторических наук, чл.-корр. РАН А.П. БУЖИЛОВА...»

«Железнова Татьяна Константиновна ЭКОЛОГО-ГЕОГРАФИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ ОРНИТОФАУНЫ СЕВЕРНОЙ ЕВРАЗИИ 03.02.08 – Экология (биологические науки) Диссертация на соискание ученой степени доктора биологических наук Москва-2015 ВВЕДЕНИЕ Актуальность проблемы Северная Евразия занимает по площади около половины Палеарктики, это область умеренной зоны северного полушария с арктической периферией [Дарлингтон, 1966]. На протяжении всей...»

«Степина Елена Владимировна ЭКОЛОГО-ФЛОРИСТИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА СТЕПНОЙ РАСТИТЕЛЬНОСТИ ЮГО-ЗАПАДНЫХ РАЙОНОВ САРАТОВСКОЙ ОБЛАСТИ 03.02.08 – экология (биологические науки) Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: доктор...»

«Калинкин Дмитрий Евгеньевич ФАКТОРЫ ФОРМИРОВАНИЯ ЗДОРОВЬЯ НАСЕЛЕНИЯ ГОРОДОВ В ЗОНЕ ВОЗДЕЙСТВИЯ ПРЕДПРИЯТИЙ АТОМНОЙ ИНДУСТРИИ 14.02.03 – общественное здоровье и здравоохранение Диссертация на соискание учной степени доктора медицинских наук Научный консультант: д-р мед. наук, профессор Тахауов Равиль Манихович Томск – 2015 ОГЛАВЛЕНИЕ ВВЕДЕНИЕ...»

«Дулепова Наталья Алексеевна ФЛОРА И РАСТИТЕЛЬНОСТЬ РАЗВЕВАЕМЫХ ПЕСКОВ ЗАБАЙКАЛЬЯ 03.02.01 – Ботаника Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель д.б.н., c.н.с., А.Ю. Королюк Новосибирск – 2014 ОГЛАВЛЕНИЕ ВВЕДЕНИЕ ГЛАВА 1. Материалы и методы исследования 1.1. Район и объект исследования 1.2....»

«НОВИЧКОВ АНДРЕЙ СЕРГЕЕВИЧ Молочная продуктивность и качество молока коз русской породы в условиях техногенного загрязнения Саратовской агломерации 06.02.10 – частная зоотехния, технология производства продуктов животноводства Диссертация на соискание учёной степени кандидата биологических наук Научный руководитель: доктор биологических наук, профессор М.В. Забелина Саратов 2015 СОДЕРЖАНИЕ...»

«Баранов Михаил Евгеньевич Экологический эффект биогенных наночастиц ферригидрита при ремедиации нефтезагрязненных почвенных субстратов Специальность (03.02.08) – Экология (биология) Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: кандидат...»

«Иртегова Елена Юрьевна РОЛЬ ДИСФУНКЦИИ СОСУДИСТОГО ЭНДОТЕЛИЯ И РЕГИОНАРНОГО ГЛАЗНОГО КРОВОТОКА В РАЗВИТИИ ГЛАУКОМНОЙ ОПТИЧЕСКОЙ НЕЙРОПАТИИ 14.01.07 – глазные болезни ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Научный руководитель: доктор медицинских наук, профессор...»







 
2016 www.konf.x-pdf.ru - «Бесплатная электронная библиотека - Авторефераты, диссертации, конференции»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.