WWW.KONF.X-PDF.RU
БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА - Авторефераты, диссертации, конференции
 


Pages:     | 1 |   ...   | 2 | 3 || 5 |

«РАЗРАБОТКА НОВЫХ ПРЕПАРАТОВ НА ОСНОВЕ МОНОКЛОНАЛЬНЫХ АНТИТЕЛ ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ ХОЛЕРНЫХ ВИБРИОНОВ О1, О139 СЕРОГРУПП УСКОРЕННЫМИ МЕТОДАМИ ...»

-- [ Страница 4 ] --

прошел все этапы Государственных испытаний: технические на базе ФГБУЗ ГЦГ и Э ФМБА России, медицинские на базе ФГБУЗ ГЦГ и Э ФМБА и ФКУЗ Волгоградский научно-исследовательский противочумный институт Роспотребнадзора. При контроле основных биологических показателей наборов реагентов, проводимого на тест-штаммах микроорганизмов, была показана высокая специфичность и воспроизводимость результатов испытуемых препаратов на разных сериях, также отмечено полное соответствие физико-химических свойств заявленным в ТУ 9398-002критериям качества (таблица 17).

Таблица 17 – Соответствие основных характеристик «ИГ –V. cholerae О1/О139 - РА» нормативно-технической документации Характеристика и норма по ТУ 9398-002-01898316Наименование

–  –  –

6.4. Оценка возможности применения диагностических наборов для выявления холерных вибрионов О1 и О139 серогрупп, подвергнутых воздействию различных факторов V. cholerae О1 и О139 представляют собой обширную группу вибрионов, широко распространнных в природе. При этом необходимо учитывать, что в окружающей среде возбудитель холеры может подвергаться действию различных неблагоприятных факторов, под влиянием которых может изменяться и антигенный состав холерных вибрионов. Роль стресса, связанного со снижением концентрации кислорода, изучалась сотрудниками Ростовского противочумного института (81, 92, 113, 114). Исследователями было показано, что в условиях дефицита кислорода, которому могут подвергаться вибрионы в экологической среде (в гидробионтах, простейших, желчной системе человека), антигенный состав возбудителя резко меняется, что сопровождается постепенной утратой агглютинабельности холерными сыворотками. Смена среды существования V. cholerae О1 и О139, связанная с попаданием в организм человека, позволяет в качестве стресса изучать действие жлчи. В 2003 г. G. Alvarez et. al. показали, что лгкий стресс (кислотный шок и желчь) при первичной обработке способен несколько снизить жизнеспособность вибрионов [121]. Также известно, что жлчь, представляющая собой гетерогенную смесь электролитов, желчных кислот, фосфолипидов, холестерина и билирубина, участвует в процессе пищеварения, обеспечивая эмульгирование, гидролиз жиров и всасывание продуктов их гидролиза [136]. В свою очередь, липаза холерных вибрионов расщепляет жиры в кишечнике человека до глицерина, который, по мнению S. Massey [141], ингибирует действие холерного токсина на эукариотические клетки путм стабилизации (предотвращения разрушения) каталитической субъединицы и жирных кислот, обнаруженных в желчи XTA1, (арахидоновая, линолевая, олеиновая) и снижающих экспрессию генов ctxAB и tcpA [124]. Также глицерин стимулирует проявление гемолитической активности и продукцию липазы [68, 99].

Учитывая вышеизложенное, представляло интерес изучение с помощью агглютинирующих и флуоресцирующих наборов реагентов влияния анаэробных условий, жлчи и глицерина на антигенный состав вибрионов (сохранность антигенных детерминант), что позволяет оценить диагностические возможности разработанных препаратов.

В опыте использовали ограниченное количество штаммов V. cholerae O1 и О139, которые выращивали в анаэробных условиях, в присутствии глицерина (10% и 15%) и жлчи (1% и 5%). Взаимодействие холерных вибрионов с моноклональными препаратами изучали в реакции слайдагглютинации и прямой иммунофлуоресценции. Результаты представлены в таблице 19.

–  –  –

который и в контроле агглютинировался так же. Холерные вибрионы О139 серогруппы (2 штамма) реагировали с иммуноглобулинами, образуя крупный агглютинат на 4+. Флуоресцирующие препараты обеспечивали положительную реакцию на 4+ с двумя штаммами V. cholerae О139, в случае V. cholerae О1 8 штаммов светились на 4+ и 4 – на 3+.

Что касается действия глицерина, то его влияние оказалось одинаковым, как при 10%, так и при 15%: исследуемые штаммы возбудителя холеры, подвергнутые действию глицерина, обеспечили положительную реакцию агглютинации на 4+ с набором «ИГ - V. cholerae О1/О139 - РА» и на 3+/4+ с Иг - V. cholerae О1/О139 – РИФ».

Жлчь также не влияла на положительный результат агглютинации и флуоресценции, происходило лишь незначительное снижение интенсивности свечения с 4+ на 3+ штамма V. cholerae О139 (1% и 5% жлчи) и одного из трех штаммов V. cholerae О1 в случае 5% жлчи. На агглютинабельность холерных вибрионов О139 в виде неполного просветления и легкой опалесценции жидкости повлияло присутствие 1% и 5% жлчи в среде, то есть реакция на 3+. Если говорить о V. cholerae О1, то образование агглютината на 4+ установлено у трех штаммов при выращивании с 1% жлчи и у двух штаммов с 5%.

Таким образом, положительные результаты РА и РИФ (реакция на 3+/4+) свидетельствуют о стабильности и представленности эпитопов холерных вибрионов О1 и О139 серогрупп, узнаваемых соответствующими МКА, и, как следствие, возможности применения наборов реагентов не только после выделения чистой культуры V. cholerae О1 и О139, но и для обнаружения возбудителя холеры в материале от больных и из объектов окружающей среды.

Заключение Многочисленные исследования [1, 34, 40, 42, 43, 54, 55, 57, 58, 69, 84, связанные с использованием гибридомной технологии, 117], свидетельствуют о перспективности получения МКА к различным антигенам и создания на их основе высокоспецифичных и высокочувствительных препаратов. Привлечение МКА в лабораторную диагностику особо опасных инфекций позволяет решить проблему качества реагентов. Так, уже достигнуты значительные успехи в этом направлении: в ГНЦ ПМБ разработаны набор реагентов для определения спор Bacillus anthracis в реакции слайд-агглютинации и тест-система иммуноферментная магноиммуносорбентная для выявления возбудителя сибирской язвы в споровой форме [110], чумные диагностикумы для определения капсульного F1-антигена в реакции латекс-агглютинации [48] и V антигена Y. pestis в ИФА [47]; в НИИ эпидемиологии и микробиологии им. Н.Ф. Гамалеи создана высокоэффективная иммуноферментная тест-система на основе МКА для обнаружения антигенов бруцелл [109]; в Волгоградском противочумном институте получают иммуноглобулины диагностические флуоресцирующие сапные и мелиоидозные моноклональные [18, 83]; в институте «Микроб»

сконструирована дот-иммуноферментная тест-ситема «Диатул-М» для детекции туляремийного микроба [97, 103]. Что касается диагностики возбудителя холеры, то к настоящему времени рекомендованы к использованию препараты, в основе которых поликлональные иммунные сыворотки лошадиного происхождения, имеющие ряд недостатков:

разнородность и гетерогенность популяции антител, низкие титры специфических иммуноглобулинов и, как следствие, наличие перекрестных реакций при их применении внутри вида и с гетерологичными микроорганизмами. За рубежом проблема специфичности холерных диагностикумов была решена путем конструирования моноклональных реагентов, которые нашли широкое применение [129, 130, 131, 133]. В России их перечень, согласно МУК 4.2. 2870-11, ограничивается иммунохроматографическими тест-системами, полученными в ГНЦ ПМБ на основе МКА гибридом ГХ-F8/О1 к ЛПС V. cholerae О1 и СНG6 к холерному токсину, для быстрого выявления возбудителя холеры О1 и токсинообразующих штаммов [21, 111]. Несмотря на попытки улучшения качества холерных препаратов путем получения более специфичных кроличьих сывороток [13, 14], проблема быстрого и точного выявления возбудителя, в частности в реакциях иммунофлуоресценции и слайдагглютинации, занимающих в диагностике холеры важное место, остается актуальной.

В связи с чем была проведена работа, направленная на совершенствование лабораторной диагностики холеры путем конструирования новых препаратов на основе МКА для диагностики холерных вибрионов О1 и О139 серогрупп в реакциях прямой иммунофлуоресценции и слайд-агглютинации. Разработке препаратов предшествовали эксперименты по расширению набора гибридом за счет получения новых и отбору стабильных продуцентов МКА О1 и МКА О139.

Гибридомы, синтезирующие иммуноглобулины к видоспецифическим эпитопам V. cholerae О1, получали путем слияния иммунных спленоцитов мышей линии Balb/C с миеломными клетками, взятыми в логарифмичекой фазе. В качестве сливающего агента использовали удобный, эффективный и безопасный индуктор – 50% ПЭГ «Fluka», 1500 (химический метод гибридизации). Культивирование гибридомных клеток проводили на ростовой среде с предварительно подобранными оптимальными компонентами (сыворотка плода коровы, глутамин, пируват и витамины), одновременное добавление которых приводило к повышению пролиферативной активности.

Результаты тестирования полученных гибридом в ТИФА, РНИФ, РА и РП позволили отобрать для работы гибридомы Е9, А5 и F11. Одновременно в этот набор была включена гибридома ГХ-F8/О1, депонированная в «Специализированной коллекции перевиваемых соматических клеток позвоночных» Института Цитологии (г. Санкт-Петербург) под номером РККК (П) 386Д. Что касается гибридом, продуцирующих иммуноглобулины, узнающие антигенные детерминанты в составе поверхностных структур V. cholerae О139, то в работе исследовали полученные ранее гибридомы 3Е4, 3В5, 3А9, 2F6, 3E8, которые тестировали в различных серологических реакциях с целью выявления диагностически значимых. В результате было установлено, что гибридомы 2F6 и 3E8 после выемки из азота утратили способность секретировать антитела. Только 3Е4, 3В5 и 3А9 сохранили антителопродукцию на исходном уровне, поэтому их неоднократно реклонировали с целью выявления высокопродуктивных.

Практический интерес в нашей работе представляли гибридомы, секретирующие МКА, обладающие способностью связываться со «своим»

эпитопом в реакциях непрямой иммунофлуоресценции и слайдагглютинации, поэтому дальнейшее исследование заключалось в оценке специфической активности МКА О1 и МКА О139 на расширенном наборе штаммов холерных вибрионов перечисленными методами. Полученные результаты явились основанием для отбора гибридом ГХ-F8/О1 и F11, секретирующих иммуноглобулины класса G, взаимодействующие со всеми штаммами V. cholerae О1. Две из тестируемых гибридом Е9 и А5 выявляли только V. cholerae Inaba, но в поставленные задачи не входило конструирование серовароспецифических диагностикумов. Продуценты МКА О139 3Е4, 3В5, 3А9 – синтезировали специфические иммуноглобулины класса М, которые обеспечивали положительную реакцию агглютинации и флуоресценции с представителями V. cholerae О139. Что касается близкородственных и гетерологичных микроорганизмов, то они не взаимодействовали ни с МКА О1, ни с МКА О139, т. е. перекрестная реактивность отсутствовала. Следует отметить, что гибридома 3А9 оказалась нестабильной, так как при длительном культивировании теряла способность синтезировать специфические иммуноглобулины, поэтому в качестве продуцентов видоспецифических МКА О139 решено было использовать 3Е4 и 3В5, а МКА О1 - ГХ-F8/О1 и F11.

Следующим этапом было получение и накопление МКА в препаративных количествах. Пассирование гибридом in vitro позволило накопить не только клетки для последующего введения мышам с целью получения асцитов, но и культуральную жидкость, являющуюся источником МКА. Сравнивая различные варианты стимулирующего действия препаратов на процесс образования опухолей, мы установили, что больший процент формирования АЖ (60 %) наблюдался при использовании пристана в количестве 0,5 мл на мышь за 7 - 14 дней до введения гибридных клеток и при инокуляции смеси гибридом с НАФ. В результате культивирования гибридом in vivo асцитообразование регистрировали у 60 % животных в случае гибридомы ГХ-F8/О1 и у 20% в случае F11. Кроме того, объем АЖ, получаемый от одной мыши, привитой F11, и активность специфических иммуноглобулинов оказались значительно ниже, чем соответствующие у гибридомы ГХ-F8/О1. Для накопления МКА О139 в виде АЖ могут быть использованы и 3Е4, и 3В5, так как образование АЖ наблюдали через 2 – 4 недели у 50 % мышей, которым вводили гибридные клетки. Полученные данные свидетельствуют о том, что из четырех испытуемых гибридом F11 оказалась менее эффективной для получения препаративного количества МКА в виде АЖ.

Важным этапом является также процесс выделения иммуноглобулиновой фракции из КЖ и АЖ гибридом, потому что он определяет качество получаемых моноклональных препаратов. Сравнение данных количественного выхода специфических иммуноглобулинов такими методами, как высаливание белков насыщенным раствором сульфата аммония с последующим диализом (зависимость растворимости белков от концентрации сульфата аммония) и очистка МКА осаждением балластных белков каприловой кислотой с дальнейшим концентрированием насыщенным раствором сульфата аммония, позволило сделать выбор в пользу быстрой одностадийной очистки преципитацией (NH4)2SO4. Кроме того, в ходе концентрирования КЖ исследуемых гибридом установлено, что КЖ являются полноценным источником МКА при условии культивирования гибридом in vitro до стадии максимального антителообразования.

Далее осажденные насыщенным раствором сульфата аммония КЖ и АЖ гибридом ГХ-F8/О1, F11, 3Е4, 3В5 исследовали в различных серологических реакциях для определения активности и специфичности иммуноглобулинов. Наиболее высокая антителопродукция МКА О1 наблюдалась у гибридомы ГХ-F8/О1, так как титры препаратов из КЖ и АЖ в ТИФА, ДИА, РНИФ, РА значительно превышали показатели активности антител, синтезируемых гибридомой F11. Кроме того, F11 не обладала преципитирующей активностью в отличие от ГХ-F8/О1, МКА которой узнавали в структуре О-антигена идентичные, многократно повторяющиеся детерминанты, обеспечивающие формирование преципитата. Активность и специфичность иммуноглобулинов, продуцируемых гибридомами 3Е4 и 3В5, была сопоставимой во всех серологических реакциях.

Привлечение в работу методов ПААГ и иммуноблота позволило установить локализацию узнаваемых иммуноглобулинами антигенных детерминант: положительная реакция с МКА ГХ-F8/О1 зарегистрирована в области 35 - 40 кДа, с МКА F11 - в районе 25 – 35 кДа, с МКА О139 гибридом 3Е4 и 3В5 - ниже 14 кДа. В исследованиях ряда авторов [15, 60, 67, 104, 119] показано, что у О-антигена V. cholerae О1 в процессе электрофореза не формируется «лесенка», а выявляется одна зона в нижней части фореграммы на уровне 25 – 30 кДа. Данные литературы и локализация в нижней части блотограммы эпитопов, узнаваемых видоспецифическими МКА О1, дают основание предполагать, что последние принадлежат Ополисахаридной цепи ЛПС. Для окончательного выбора диагностически ценных гибридом-продуцентов МКА необходимо было располагать данными в отношении стабильности и частоты экспонирования соответствующих им эпитопов на поверхности V. cholerae О1 и О139. Принимая во внимания тот факт, что возбудитель холеры способен выживать в окружающей среде, несмотря на воздействие неблагоприятных факторов, была проведена оценка сохранности О-антигенных детерминант ЛПС холерных вибрионов с помощью МКА при различных способах инактивации. Такие способы воздействия, как 1М гидроксид натрия, 10М и 1М соляная кислота, 1,5% хлороформ, 1,5% формалин, трипсин 1:50, кипячение в течение 30 минут, не оказали существенного влияния, обеспечивая положительную реакцию в ТИФА. В то же время отмечено снижение показателей оптической плотности после обработки V. cholerae О1 и О139 10М NaOH и 6% Н2О2, что, возможно, является следствием утраты или нарушения структуры части эпитопов ЛПС.

Способность МКА реагировать с клетками холерных вибрионов после инактивации их химическими агентами дает основание говорить о направленности специфических иммуноглобулинов к эпитопам углеводной природы [67].

В задачи работы входило конструирование диагностикумов на основе МКА с последующим применением их в лабораторной практике, поэтому предпочтение отдавали гибридомам - продуцентам МКА, специфически взаимодействующих с детерминантами, наиболее устойчивыми к различным воздействиям, а также представленные на клеточной поверхности с высокой частотой и в доступной для связывания форме. Если сравнивать активность специфических иммуноглобулинов гибридом ГХ-F8/О1 и F11 в отношении инактивированных штаммов, то более высокие показатели ОП отмечены в отношении ГХ-F8/О1, что позволяет говорить не только о большей чувствительности к внешнему воздействию детерминант, выявляемых F11, но и об их содержании в составе ЛПС в меньшем количестве или замаскированном другими структурами. Что касается эпитопной направленности исследуемых гибридом, то результаты конкурентного ТИФА свидетельствуют о пространственной разобщенности детерминант, узнаваемых МКА О1 ГХ-F8/О1 и F11, а в случае 3Е4 и 3В5 эпитопы оказались пространственно сближенными на молекуле антигена.

Поэтому для конструирования моноклональных препаратов решено было использовать в качестве основного источника МКА О1 гибридому ГХ-F8/О1, а МКА О139 - 3Е4 и 3В5, которые выявляют консервативные эпитопы ЛПС, с высокой плотностью представленные на клеточной поверхности вибрионов и в меньшей степени подверженные модификации или утрате при воздействии различных инактивирующих факторов, что способствует повышению диагностической ценности препаратов.

Ставя перед собой задачу получения флуоресцирующих иммуноглобулинов, нами были подобраны оптимальные условия конъюгации: концентрация белка (МКА) не ниже 5 мг/мл, флуоресцеин-5изотиоцианат - 0,5 мг на 10 мг белка, 10% КББ, рН реакционной смеси 9,0. В ходе экспериментов установлено снижение рН после добавления красителя, в результате чего значительная часть ФИТЦ не вступала в реакцию с белком, поэтому мы проводили либо предварительный диализ раствора иммуноглобулинов против КББ, либо корректировку рН в течение первых 30 минут раствором КББ. Конъюгация проходила в условиях холодильника в течение 18 часов или при комнатной температуре 4 часа. Но предпочтительным, по нашему мнению, является методический вариант, предусматривающий сокращение времени реакции до четырех часов. Для повышения стабильности и сроков хранения препаратов проводили их лиофильное высушивание. По отработанной схеме мы приготовили экспериментальные образцы флуоресцирующих моноклональных препаратов для выявления V. cholerae О1 и V.cholerae О139. Установлено, что красящий титр ФИТЦ-МКА О1 равняется 1:16, ФИТЦ-МКА О139 - 1:8. Определение чувствительности препаратов показало, что она находится на уровне 105м.к./мл. Также следует отметить, что специфическое свечение наблюдалось и в мазках с меньшей концентрацией холерных вибрионов, но в поле зрения выявлялись единичные вибрионы. ФИТЦ-МКА были укомплектованы в Набор реагентов «Иммуноглобулины моноклональные диагностические флуоресцирующие сухие для серологической идентификации V. cholerae О1 и О139 (in vitro) методом РИФ «Иг - V.

cholerae О1/О139 - РИФ». Флуоресцирующие иммуноглобулины в комплекте находятся в рабочем разведении с целью эффективного их использования.

Набор рассчитан на выявление холерных вибрионов О1 и О139 серогрупп в 30 исследуемых образцах (расход на одно исследование – 30 мкл). Для оценки диагностической значимости «Иг - V. cholerae О1/О139 - РИФ» были проведены лабораторные испытания на широком наборе штаммов, которые продемонстрировали высокую специфичность набора и явились основанием для оформления нормативной документации (инструкции по применению, справки об изделии медицинского назначения и технических условий (ТУ 9398-001-01898316-2012). В течение 2012 года были проведены технические и медицинские испытания, по результатам которых исследуемые серии набора соответствовали основным характеристикам нормативно-технической документации. Изучение стабильности показателей вскрытых регидратированных реагентов набора «Иг - V. cholerae О1/О139 – РИФ»

позволило установить, что приготовленные серии препаратов после растворения сохраняют специфическую активность в течение 7 суток при температуре от 2 до 8C, но для более длительного хранения мы рекомендуем раствор антител разлить на аликвоты и хранить при температуре минус 20C.

Исследование стабильности специфической активности набора реагентов при хранении позволило установить срок годности – три года.

На следующем этапе работы изучали агглютинирующую способность МКА О1 и МКА О139, которые, как и диагностические поликлональные сыворотки, выявляют клетки холерных вибрионов соответствующих серогрупп, но при этом отличаются большей специфичностью. Важным моментом конструирования диагностикумов для РА является выбор источника иммуноглобулинов, поэтому мы сравнили препараты МКА из АЖ и КЖ. Высокая агглютинабельность зарегистрирована в отношении иммуноглобулинов, выделенных из АЖ, что объясняется концентрацией МКА, равной 10 – 15 мг/мл.

Несмотря на более низкие титры МКА из КЖ, по сравнению с асцитными, накопление специфических антител при культивировании in vitro имеет свои преимущества, в частности исключается использование лабораторных животных, что делает технологический процесс получения препаратов проще, и в случае холерных вибрионов О139 серогруппы активность МКА О139 была сопоставима с асцитными. В свою очередь АЖ могут не подвергаться предварительной очистке, так как пул сопутствующих иммуноглобулинов невысок в сравнении со специфическими, поэтому их можно использовать для постановки реакции слайд-агглютинации в достаточно высоких разведениях без предварительного осаждения сульфатом аммония, но при этом необходимо удалить из АЖ клеточные элементы путем центрифугирования и мембранной фильтрации со средним размером пор 0,45 мкм. С этой точки зрения асцитные МКА в большей степени отвечают диагностическим требованиям. Далее, на основе МКА из асцитической жидкости мышей линии BALB/с были приготовлены агглютинирующие препараты. Следует отметить, что при необходимости можно использовать и МКА из КЖ гибридом-продуцентов, сконцентрированные с помощью насыщенного раствора (NH4)2SO4. Полученные МКА О1 и МКА О139 укомплектовали в набор реагентов «Иммуноглобулины моноклональные диагностические cухие для серологической идентификации V. cholerae О1 и О139 (in vitro) методом РА «ИГ –V. cholerae О1/О139 — РА». В течение 2012 г.

диагностикум «ИГ- V. cholerae О1/О139 – РА» успешно прошел технические и медицинские испытания, в ходе которых показана высокая специфичность испытуемых препаратов разных серий и отмечено полное соответствие физико-химических свойств заявленным в нормативно-технической документации. На основании исследований стабильности лиофилизированных агглютинирующих иммуноглобулинов был установлен срок годности набора – 5 лет. Регидратированные препараты после растворения можно хранить при t от 2 до 8C не более 7 суток (для более длительного хранения растворы антител рекомендуется разлить на аликвоты и хранить при t минус 20C).

Разработанные наборы реагентов «Иг - V. cholerae О1/О139 - РИФ» и «ИГ- V. cholerae О1/О139 – РА» продемонстрировали диагностическую эффективность при изучении влияния анаэробных условий, жлчи и глицерина на антигенный состав вибрионов (сохранность антигенных детерминант), обеспечив положительные результаты РА и РИФ, что еще раз подтверждает данные о стабильности и высокой частоте представленности эпитопов О-антигена, узнаваемых соответствующими им МКА. Полученные результаты свидетельствуют о перспективности применения агглютинирующих и флуоресцирующих препаратов как в стационарных, так и мобильных лабораториях, в том числе и при проведении мониторинга объектов окружающей среды в случае постановки РИФ с набором «Иг V. cholerae О1/О139 - РИФ», который можно использовать для выявления возбудителя холеры не только после выделения чистой культуры, но и в нативном материале различного происхождения. Результаты проведенных исследований явились основанием для подачи флуоресцирующих и агглютинирующих диагностических препаратов на государственную регистрацию в качестве изделий медицинского назначения. Расширение спектра препаратов за счет привлечения в диагностику современных более эффективных моноклональных реагентов позволит повысить качество и достоверность лабораторных анализов на холеру.

Выводы

1. Получен и охарактеризован набор стабильных гибридом-продуцентов МКА, которые взаимодействуют с видоспецифическими эпитопами О-антигена V. cholerae О1 и О139, представленными на клеточной поверхности с высокой частотой и в доступной для связывания форме. На гибридомы получены два патента №2425874 от 13.04.2010 и №2425875 от 07.06.2010.

2. С помощью набора МКА и иммунологических методов установлено, что эпитопы, узнаваемые гибридомами ГХ-F8/О1, 3Е4, 3В5, являются устойчивыми к различного рода воздействиям (щелочь, кислота, перекись водорода, хлороформ, формалин, трипсин, кипячение) и сохраняют свою структурную организацию.

3. Источником МКА могут быть как асцитические, так и культуральные жидкости, причем количество моноклональных иммуноглобулинов, выделенных из определенных объемов культуральной жидкости, является достаточным для приготовления диагностических препаратов, что исключает привлечение лабораторных животных.

4. Разработана биотехнологическая схема изготовления флуоресцирующих иммуноглобулинов, включающая в себя следующие этапы: получение и очистка МКА; конъюгация МКА с флуорохромом; удаление избытка ФИТЦ;

лиофилизация. Результаты лабораторных испытаний ФИТЦ-МКА на широком наборе штаммов позволили укомплектовать их в диагностический набор реагентов «Иг - V. cholerae О1/О139 – РИФ».

5. На основе МКА сконструирован диагностический набор «ИГ - V.

cholerae О1/О139 - РА», который позволяет выявлять холерные вибрионы О1 и О139 серогрупп в реакции слайд-агглютинации, обеспечивая отсутствие перекрестных реакций с близкородственными и гетерологичными микроорганизмами без дополнительной постановки ее развернутого варианта, что существенно сокращает время постановки реакции и экономические затраты.

6. Положительные реакции иммунофлуоресценции и агглютинации с холерными вибрионами О1 и О139, выращенными в анаэробных условиях, в присутствии глицерина (10% и 15%) и жлчи (1% и 5%), свидетельствуют о сохранности антигенных детерминант ЛПС и диагностических возможностях разработанных препаратов, пригодных для детекции V. cholerae О1 и О139 не только после выделения чистой культуры, но и для обнаружения возбудителя холеры в материале от больных и из объектов окружающей среды.

7. Диагностическая ценность разработанных препаратов подтверждена техническими и медицинскими испытаниями, в ходе которых на разных сериях была показана высокая специфичность и отмечено полное соответствие физико-химических свойств заявленным в ТУ критериям качества, на основании чего наборы реагентов «Иг - V. cholerae О1/О139 – РИФ» и «ИГ - V.cholerae О1/О139 - РА» направлены на государственную регистрацию в качестве изделий медицинского назначения.

Список литературы

1. Абакумов, М.А. Визуализация экспериментальной глиомы С6 методом МРТ с помощью магнитных наночастиц, конъюгированных с моноклональными антителами к фактору роста эндотелия сосудов / М.А.Абакумов, С.А. Шеин, Х. Вишвасрао и др. // Бюл. экспер. биол. и мед. – 2012. – Т.154, №8. – С. 242 – 246.

2. Абрамова, Е.Г. Возможность применения иммуноглобулинов флуоресцирующих холерных О139 для детекции Vibrio cholerae О139 различными методами экспресс-анализа / Е.Г. Абрамова, Т.В. Аленкина, Г.В. Бочкарева, О.В. Громова // Пробл. комиссия «Холера и патоген. для человека вибрионы». – Ростов-на-Дону, 2004. – Вып. 17. – С. 84 – 85.

3. Абрамова, Е.Г. Применение флуоресцирующих холерных О139 иммуноглобулинов для выявления Vibrio cholerae О139 различными методами экспресс-анализа / Е.Г. Абрамова, Т.В. Аленкина,

Г.В.Бочкарева, О.В. Громова // Медицинская микробиология – ХХI век:

Матер. Всерос. науч.-практ. конф. – Саратов, 2004. – С. 10 - 11.

4. Абрамова, Е.Г. Экспресс-диагностика Vibrio cholerae О139 методом флуоресцирующих антител / Е.Г. Абрамова, Т.В. Аленкина, Г.В.Бочкарева, О.В. Громова // Пробл. комиссия «Холера и патоген. для человека вибрионы». – Ростов-на-Дону, 2002. – Вып. 15. – С. 85 - 86.

5. Алексеева, Л.П. Диагностические препараты на основе МКАт для идентификации возбудителя холеры О1 группы в реакциях коагглютинации и прямой иммунофлуоресценции / Л.П. Алексеева, О.С.Бурлакова, А.С. Новохатский и др. // Совр. направления создания мед.

диагностикумов: Тез. докл. Всесоюз. конф. - М., 1988. – С. 38.

6. Алексеева, Л.П. К вопросу об агглютинабельности холерных Омоноклональных иммуноглобулинов / Л.П. Алексеева, О.С. Бурлакова, В.В. Балахнова // Микробиол. журн. – 1992. – Т.54, №6. – С. 50 – 54.

7. Алексеева, Л.П. Моноклональные антитела в исследовании структуры и биологических свойств липополисахарида возбудителя холеры / Л.П.Алексеева, О.С. Бурлакова, В.В. Балахнова // Пробл. комиссия «Холера и патоген. для человека вибрионы». – Ростов на-Дону, 1992. – С.112 - 115.

8. Алексеева, Л.П. Моноклональные антитела к детерминантам О-антигена холерного вибриона О1 группы и перспективы их использования / Л.П.Алексеева, А.С. Новохатский, О.С. Бурлакова // Акт. вопр.

микробиологии, лаб. диагностики и профилактики холеры: тез. всесоюз.

науч. конф. – Ростов-на-Дону, 1988. – С.140 – 144.

9. Алексеева, Л.П. Моноклональные антитела к липополисахариду Vibrio cholerae О139 / Л.П. Алексеева, О.И. Сальникова, Б.Л. Мазрухо и др. // Биотехнология. - 2002. - №2. – С. 79 – 84.

10.Алексеева, Л.П. Оценка полисахаридных антигенов Vibrio cholerae О139 различного происхождения с помощью моноклональных антител / Л.П.Алексеева, Б.Л. Мазрухо, О.С. Чемисова и др. // Журн. микробиол. – 2002. - №4. – С. 25 – 29.

11.Алексеева, Л.П. Сравнительная оценка методов дот-иммуноанализа и иммунохроматографии при выявлении холерных вибрионов О1 серогруппы / Л.П. Алексеева, Н.Р. Телесманич, Ю.М. Ломов и др. // Журн.

микробиол. – 2010. - №6. – С. 88 – 93.

12.Алексеева, Л.П. Флуоресцирующие моноклональные иммуноглобулины для ускоренной диагностики холерных вибрионов О1 и О139 серогрупп / Л.П. Алексеева, О.С. Чемисова, Б.Л. Мазрухо, Е.В. Ишина // Соврем.

технологии в диагност. особо опас. инф. бол.: Матер. 4-ой Межгос. науч.практ. конф. госуд.-участ. СНГ. – Саратов, 2003. – С. 13 – 17.

13.Аленкина, Т.В. Иммуноглобулины диагностические флуоресцирующие холерные О139 адсорбированные кроличьи / Т.В. Аленкина, Г.В.Бочкарева, И.В. Шульгина и др. // Актуал. пробл. предупрежд. и ликвид. последствий чрезвыч. ситуаций в области сан.-эпид. благополучия населения госуд.-участ. СНГ: Матер. Х Межгос. науч.-практ. конф. госуд.участ. СНГ. - Ставрополь, 2010. - С. 161 - 162.

14.Аленкина, Т.В. Разработка и основные этапы внедрения препарата «Иммуноглобулины диагностические флуоресцирующие холерные О139»

/ Т.В. Аленкина, Г.В. Бочкарева, Л.В. Саяпина и др. // Пробл. особо опас.

инф. – Саратов, 2012. - Вып. 113. - С. 74 – 78.

15.Алешина, Ю.А. Свойства экспериментальных и производственных препаратов протективного О-антигена Vibrio cholerae М41 Огава / Ю.А.Алешина, В.И. Павлова, А.В. Комиссаров и др. // Пробл. особо опас.

инф. – Саратов, 2013. – Вып. 2. – С. 70 – 72.

16.Антитела: Методы. В 2 кн. Кн.1 / Пер. с англ.; Под ред. Д. Кэтти. – М.:

Мир, 1991. - 287 с. : ил.

17.Антитела: Методы. В 2 кн. Кн.2 / Пер. с англ.; Под ред. Д. Кэтти. – М.:

Мир, 1991. - 384 с. : ил.

18.Антонов, В.А. Современные подходы к диагностике сапа и мелиоидоза.

Идентификация и типирование Burkholderia mallei и Burkholderia pseudomallei / В.А. Антонов, В.И. Илюхин, Н.П. Храпова и др. // Пробл.

особо опас. инф. – Саратов, 2012. –Вып. 2 (112). – С. 46 – 50.

19.Ашмарин, И.П. Статистические методы в микробиологических исследованиях / И.П. Ашмарин, А.А. Воробьев. – Л.: Медгиз., 1962. -180с.

20.Бабицын, С.Н. Антиэнтеротоксические моноклональные антитела в диагностике холеры: дис… канд. мед. наук : 14.00.36 / Бабицын Сергей Николаевич. - Алма-Ата, 1991. - 165 с.

21.Баранова, Е.В. Разработка иммунохроматографических тестов для выявления штаммов серогруппы О1 и токсинобразующих штаммов холерного вибриона / Е.В. Баранова, Г.Н. Федюкина, П.В. Соловьев и др.

// Пробл. комиссия «Холера и патоген. для человека вибрионы». – Ростовна-Дону, 2013. - Вып. 26. - С. 215 - 218.

22.Баранова, Е.В. Разработка иммунохроматографического теста для обнаружения токсигенных штаммов Vibrio cholerae / Е.В. Баранова, П.В.Соловьев, В.В. Агафонова и др. // Актуал. пробл. предупрежд. и ликвид. последствий чрезвыч. ситуаций в области сан.-эпид. благополучия населения госуд.-участ. СНГ: Матер. Х Межгос. науч.-практ. конф. госуд.участ. СНГ. - Ставрополь, 2010. - С. 165.

23.Биотехнология. Принципы и применение: пер с англ. / под ред.

И.Хиггинса, Д. Беста и Дж. Джонса. – М.: Мир, 1988. – 480 с. : ил.

24.Биотехнология. Т. 20. Гибридомная технология и применение моноклональных антител в медицине и биотехнологии / ВИНИТИ. – М., 1989. - 133 с.

25.Биотехнология: теория и практика: учеб. пособие для вузов / под ред.

Н.В. Загоскиной, Л.В. Назаренко. – М.: Издательство Оникс, 2009. – 496 с.

26.Брагина, И.В. Новые технологии в практике работы микробиологических лабораторий госсанэпидслужбы России / И.В. Брагина, Н.С. Криволапова, Э.Ф. Опочинский, Т.В. Воронцова // Медицинская микробиология – ХХI век: Матер. Всерос. науч.-практ. конф. - Саратов, 2004. - С. 47 - 49.

27.Булатова, Т.В. Эффективность применения тест-системы иммуноферментной моноклональной для оценки активности серий гликопротеина 200 кDa возбудителя мелиоидоза / Т.В. Булатова // Матер.

V Ежегодного Всерос. Конгресса по инф. болезням. – М., 2013. -С. 74.

28.Бурлакова, О.С. Изучение свойств моноклональных антител к О-антигену холерных вибрионов сероваров Огава и Инаба / О.С. Бурлакова, Л.П.Алексеева, А.С. Новохатский // Акт. вопр. микробиологии, лаб.

диагностики и профилактики холеры: тез. Всесоюз. науч. конф. – Ростовна-Дону, 1988. – С.152 – 154.

29.Бурлакова, О.С. Моноклональные антитела к О-антигену возбудителя холеры: автореф. дис...канд. мед. наук : 03.00.07 / Бурлакова Ольга Спартаковна. - Ростов-на-Дону, 1993. – 23 с.

30.Бурлакова, О.С. Огава-специфический Ко-реагент для обнаружения возбудителя холеры / О.С. Бурлакова, Л.П. Алексеева, А.С. Новохатский, Г.М. Орлова // Актуал. вопр. разработки препаратов для мед.

биотехнологии: Тез. конф. – Махачкала, 1988. – 4.2. - С. 237 – 238.

31.Буханцова, Л.В. Моноклональные антитела против антигенов спор вобудителя сибирской язвы и перспективы их применения / Л.В.Буханцова, Н.П. Храпова, А.В. Липницкий // Соврем. технологии в диагност. особо опас. инф. бол.: Матер. 4-ой Межгос. науч.-практ. конф.

госуд.-участ. СНГ. – Саратов, 2003. – С. 34 – 36.

32.Бывалов, А.А. Получение и характеристика моноклональных антител к липополисахариду Yersinia pseudotuberculosis / А.А. Бывалов, Г.Д. Елагин, Д.В. Печенкин и др. // Биотехнология. – 2010. - №3. – С. 78 – 83.

33.Быченкова, Т.А. Комлект индикаторных средств на основе мультиплексного иммуноанализа для детекции патогенов / Т.А.Быченкова, А.Л. Тютерева, Н.С. Короткова и др. // Матер. V Ежегодного Всерос. Конгресса по инф. болезням. – М., 2013. - С. 79.

34.Вергун, О.М. Экспресс-диагностика употребления наркотиков с использованием иммунохроматографических тест-систем, разработанных в республике Беларусь на основе моноклональных антител / О.М. Вергун // Клин. лаб. диагностика. – №9. – 2010. – С. 57.

35.Ганова, Л.А. Диагностическая иммуноферментная тест-система для выявления антител к Brucella abortus в сыворотке крови и молоке крупного рогатого скота / Л.А. Ганова, Г.Е. Раевская, В.Г. Пилипенко и др. // Соврем. технологии в диагност. особо опас. инф. бол.: Матер. 4-ой Межгос. науч.-практ. конф. госуд.–участ. СНГ. - Саратов, 2003.– С. 51–53.

36.Григоренко, Л.В. Особенности агглютинабельности штаммов Vibrio cholerae non O1/non O139, выделенных из воды открытых водоемов / Л.В.Григоренко, В.Д. Кругликов, Э.А. Москвитина и др. // Пробл.

комиссия «Холера и патоген. для человека вибрионы». – Ростов-на-Дону, 2011. – Вып. 24. - С.114 – 117.

37.Девдариани, З.Л. Научно-методические основы конструирования чумных моноклональных иммуноглобулиновых реагентов с использованием гибридомной биотехнологии: автореферат дис…докт. мед. наук : 03.00.07 / Девдариани Зураб Леванович. - Саратов. – 1993. – 52 с.

38.Девдариани, З.Л. Экспресс-диагностика токсигенных штаммов Vibrio сholerae в дот-иммуноанализе с помощью моноклональных антител / З.Л. Девдариани, Т.В. Аленкина, В.А. Федорова // Клин. лаб. диагностика.

– 1999. - №8. – С. 24 – 33.

39.Девдариани, З.Л. Экспресс-идентификация токсигенных штаммов возбудителя холеры / З.Л. Девдариани, Т.В. Аленкина, В.А. Федорова // Матер. науч.-практ. конф., посвящ. 100-лет. образов. противочумной службы России. – Саратов, 1997. - Т.2. – С. 171 – 172.

40.Деев, С.М. Моноклональные антитела для диагностики и терапии / С.М. Деев // Биотехнология. – 2008. - №2. – С. 3 – 13.

41.Джапаридзе, М.Н. Использование нового штамма Vibrio cholerae О139 в качестве продуцента энтеральной химической вакцины / М.Н. Джапаридзе, А.В. Наумов, О.В. Громова и др. // Журн. микробиол. – 1996. - №2. – С. 52 – 55.

42.Дзагурова, Т.К. Разработка иммуноферментной тест-системы на основе моноклональных антител для определения специфической активности вакцины против геморрагической лихорадки с почечным синдромом / Т.К.Дзагурова, О.Н. Солопова, П.Г. Свешников и др. // Вопросы вирусологии. – 2013. –Вып. 58 (1). – С. 40 – 44.

43.Доронин, И.И. Получение Fab-фрагментов GD2-специфичных антител и анализ их противоопухолевой активности in vitro / И.И. Доронин, И.В. Холоденко, И.М. Молотковская, Р.В. Холоденко // Бюл. экспер. биол.

и мед. – 2012. – Т.154, №11. – С. 616 – 622.

44.Дыкман, Л.А. Технология фагового дисплея антител / Л.А. Дыкман // Бактериофаги: Теоретич. и практ. аспекты применения в медицине, ветеринарии и пищевой пром-ти: Матер. науч.-практ. конф. – Ульяновск, 2013. - Т.2. – С. 109 – 114.

45.Захарова, Т.Л. Создание многокомпонентной диагностической иммуноферментной тест-системы для оценки экспрессии основных генов вирулентности и иммуногенности у холерных вибрионов / Т.Л. Захарова, С.П. Заднова, Л.Ф. Ливанова и др. // Биотехнология. – 2008. – №2. – С. 88

– 96.

46.Иванов, А.А. Терапия моноклональными антителами – панацея или паллиатив? / А.А. Иванов, И.П. Белецкий // Internet. http://www.remedium.ru/drugs/doctor/psychiatry/detail.php?ID=47547.

47.Иващенко, Т.А. Конструирование тест-системы иммуноферментной моноклональной для выявления V антигена Y. pestis / Т.А. Иващенко, Е.В.Белова, И.Г. Шемякин // Матер. V Ежегодного Всерос. Конгресса по инф. болезням. – М., 2013. – С. 170.

48.Иващенко, Т.А. Разработка латекс-агглютинационной тест-системы для выявления капсульного антигена F1 Yersinia pestis / Т.А. Иващенко, Е.В. Белова, С.В. Дентовская и др. // Биотехнология. – 2012. - №6. – С. 76

– 85.

49.Ильичев, А.А. Использование фаговых пептидных библиотек для изучения эпитопов, узнаваемых нейтрализующими ВИЧ-1 антителами широкого спектра действия Z13E1, VRC03 и VRC01 / А.А. Ильичев, А.Н. Чикаев, Д.Н. Щербаков и др. // Бактериофаги: Теоретич. и практ.

аспекты применения в медицине, ветеринарии и пищевой пром-ти: Матер.

науч.-практ. конф. – Ульяновск, 2013. - Т.1. – С. 7 – 14.

50.Иммунологические методы / Под ред. Г. Фримеля, пер. с нем.

А. П. Тарасова. – М.: Медицина, 1987. – 472 с.: ил.

51.Иммунология: практикум: учеб. пособие / под ред. Л.В. Ковальчука, Г.А. Игнатьевой, Л.В. Ганковской. – М.: ГЭОТАР-Медиа, 2012. – 176 с.

52.Иммунология: учеб. пособие / Р. Койко, Д. Саншайн, Э. Бенджамини; пер.

с англ. А.В. Камаева, А.Ю. Кузнецовой; под ред. Н.Б. Серебряной. – М.:

Издательский центр «Академия», 2008. – 368 с.

53.Использование моноклональных антител в научных исследованиях // Internet. - http://ernas.info/content/ispolzovanie-monoklonalnyh-antitel-vnauchnyh-issledovaniyah.

54.Казачинская, Е.И. Получение моноклональных антител, специфичных к основному тегументному белку рр65 вируса герпеса человека 5-го типа / Е.И. Казачинская, М.А. Суслопаров, В.Б. Локтев // Иммунология. – 2011. С. 50 – 53.

55.Кармакова, Т.А. Тест-система для определения муцина MUC1 в сыворотке крови человека методом иммуноферментного ингибиторного анализа на основе моноклонального антитела ИКО25 / Т.А. Кармакова, М.С. Воронцова, В.В. Скрипник и др. // Клин. лаб. диагностика. - 2011. С. 53 – 56.

56.Кисиличина, Д.Г. Особенности оценки экспрессии ZAP-70 в опухолевых клетках при В-клеточном хроническом лимфолейкозе методом проточной цитофлюориметрии / Д.Г. Кисиличина, С.А. Луговская, М.Е. Почтарь и др. // Клин. лаб. диагностика. – 2012. - №8. – С. 47 – 52.

57.Климова, Р.Р. Моноклональные антитела в диагностике герпесвирусных инфекций, вызываемых вирусом простого герпеса / Р.Р. Климова, О.В. Масалова, С.Н. Атанадзе, А.А. Кущ // Журн. микробиол. – 1999. – №5. - С. 99 – 103.

58.Климова, Р.Р. Моноклональные антитела к пандемическому вирусу гриппа А/IIV-Moscow/01/2009 обладающие высокой (H1N1)sw1, вируснейтрализующей активностью / Р.Р. Климова, О.В. Масалова, Е.И. Бурцева и др. // Вопросы вирусологии. – 2011. – №3. – С. 15 – 20.

59.Клотченко, С.А. Создание аналитического биочипа для типирования вируса гриппа с колориметрическим и флуоресцентным способом детекции / С.А. Клотченко, М.А. Плотникова, А.В. Васин // Матер.

V Ежегодного Всерос. Конгресса по инф. болезням. – М., 2013.– С. 195.

60.Книрель, Ю.А. Строение липополисахаридов грамотрицательных бактерий. III. Структура О-специфических полисахаридов (Обзор) / Ю.А. Книрель, Н.К. Кочетков // Биохимия. – 1994. – Т.59, Вып. 12. – С.1784-1851.

61.Кузьмина, Г.А. Использование моноклональных пероксидазных конъюгатов для идентификации холерных вибрионов О1, О139 серогрупп в реакции дот-иммуноанализа / Г.А. Кузьмина, Л.П. Алексеева, О.Ф.Фатеева и др. // Пробл. комиссия «Холера и патоген. для человека вибрионы». – Ростов-на-Дону, 2011.- Вып. 24. – С. 172 – 175.

62.Лабораторная диагностика опасных инфекционных болезней.

Практическое руководство / Под ред. Онищенко Г.Г. – М.: ОАО «Издательство «Медицина», издательство «Шико», 2009. – 472 с.

63.Лабораторная диагностика холеры: Методические указания МУК 4.2.2218-07. – М.: Федеральный центр гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора, 2007. – 87 с.

64.Ларионова, Л.В. Конструирование полимерных антигенных холерных диагностикумов для выявления специфических противохолерных антител / Л.В. Ларионова, Н.Р. Телесманич, Е.Ю. Люкшина, Д.И. Симакова // Пробл. комиссия «Холера и патоген. для человека вибрионы». – Ростовна-Дону, 2013. - Вып. 26. - С. 220 - 223.

65.Ларионова, Л.В. Разработка препаратов для комплексной серологической диагностики холеры у людей / Л.В. Ларионова, А.А. Черникова, И.В.Архангельская и др. // Обмен в-в при адаптации и повреждении (дни мед. лаб. диагностики): Матер. Х межвузов. конф. с междунар. участием. Ростов-на-Дону, 2011. - С.101 – 103.

66.Лимфоциты: Методы: Пер. с англ. / Под ред. Дж. Клауса. – М., 1990. – С.79 – 80.

67.Лобанов, В.В. Особенности липополисахарида холерных вибрионов / В.В.Лобанов, В.В. Сухарь // Журн. микробиол. – 2002. – №2. – С. 102- 107.

68.Ломов, Ю.М. Выявление липазы у холерных вибрионов О1 серогруппы в реакции агломерации объмной (РАО) / Ю.М. Ломов, Н.Р. Телесманич, В.В. Агафонова // Журн. микробиол. - 2007. - №1. – С. 74 – 77.

69.Лунева, Н.М. Разработка латексного диагностикума на основе моноклональных антител для идентификации энтерогеморрагической E.сoli О157 серогруппы / Н.М. Лунева, Р.З. Шайхутдинова, Е.В. Белова, И.Г. Шемякин // Биотехнология. – 2011. - №5. – С. 85 – 92.

70.Мазрухо, А.Б. Применение препаратов на основе моноклональных антител для выявления возбудителя холеры в условиях работы СПЭБ / А.Б. Мазрухо, В.В. Агафонова, О.А. Татаренко и др. // Пробл. комиссия «Холера и патоген. для человека вибрионы». – Ростов-на-Дону, 2011. – Вып. 24. - С. 183 – 188.

71.Мазрухо, Б.Л. Серодиагностика холеры, обусловленной вибрионами «Бенгал»: препараты для идентификации / Б.Л. Мазрухо, Е.В. Ишина // Матер. второй Всерос. конф. «Гомеостаз и инфекционный процесс». – Саратов, 1998. – С. 45.

72.Маркина, О.В. Изучение токсинопродуцирующей способности штаммов Vibrio cholerae О1 и Vibrio cholerae О139 с помощью иммуноферментного анализа и культуры клеток: автореф. дис…канд. биол. наук : 03.00.07 / Маркина Ольга Владимировна. – Ставрополь, 2008. - 22 с.

73.Медицинская микробиология, вирусология и иммунология: учеб. по дисциплине «Микробиология, вирусология и иммунология» для студентов учреждений высш. проф. образования / Под ред. В.В. Зверева, М.Н.Бойченко. – М.: ГЭОТАР – Медиа, 2010. – Т.2. - 480 с.: ил.+CD.

74.Методические рекомендации по получению гибридом-продуцентов моноклональных антител к бактериальным антигенам. – М., 1986. – 38 с.

75.Михеева, Е.А. Получение и применение моноклональных антител для обнаружения холерного токсина / Е.А. Михеева, З.Л. Девдариани, Н.Е.Терешкина и др. // Соврем. технологии в совершенствов. мер предупр.

и отв. действий на ЧС в области обществ. здравоохр. сан.-эпид. характера:

Матер. XI Межгос. науч.-практ. конф. – Саратов, 2012. – С. 162 – 164.

76.Моноклональные антитела. Гибридомы: новый уровень биологического анализа. Пер. с англ. / Под ред. Р.Г. Кеннета, Т. Дж. Мак-Керна, К.Б.Бехтол. – М.: Медицина, 1983. - 416 с. : ил.

77.Москвитина, Э.А. Оценка эпидемиологической обстановки по холере в мире в современный период. Прогноз / Э.А. Москвитина, А.Б. Мазрухо, Ю.М. Ломов и др. // Пробл. комиссия «Холера и патоген. для человека вибрионы». – Ростов-на-Дону, 2011. – Вып. 24. - С. 9 – 14.

78.Новикова, И.А. Клиническая иммунология и аллергология: учеб. пособие / И.А. Новикова. – Минск: Тесей, 2011. – 392 с.

79.Основы биотехнологии: учеб. пособие для высших пед. учеб. заведений / Т.А. Егорова, С.М. Клунова, Е.А. Живухина. – М.: Издат. центр «Академия», 2003. - 208 с.

80.Петрова, Е.Э. Получение и характеристика моноклональных антител к холерному токсину / Е.Э. Петрова, Р.Л. Комалева, О.Е. Лахтина и др. // Биоорганическая химия. – 2009. – Т.35, №3. – С. 357 – 367.

81.Помухина, О.И. Антигенная вариабельность холерных вибрионов в условиях дефицита кислорода / О.И. Помухина, И.Я. Черепахина, О.С.Бурлакова и др. // Диагност., лечение и профилакт. опас. инф. забол.

Биотехнология. Ветеринария: Матер. юбил. науч. конф., посвящ. 70-лет.

НИИ микробиол. МО РФ. – Киров, 1998. – С. 195 – 196.

82.Порядок организации и проведения лабораторной диагностики холеры для лабораторий территориального, регионального и федерального уровней:

Методические указания МУК 4.2.2870-11. – М.: Федеральный центр гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора, 2011. – 83 с.

83.Прохватилова, Е.В. О разработке новых иммунобиологических препаратов на основе моноклональных антител к Burkholderia mallei и / Е.В. Прохватилова, Н.П. Храпова, Burkholderia pseudomallei В.В.Алексеев, М.Я. Кулаков // Пробл. особо опас. инф. – Саратов, 2003. – Вып. 86. – С. 153 – 159.

84.Родина, А.В. Получение и характеристика моноклональных антител к адипонектину человека для его количественного определения в сыворотке крови / А.В. Родина, Н.В. Гороховец, В.А. Макаров и др. // Биотехнология.

– 2011. - №4. – С. 73 – 81.

85.Рыбальский, Н.Г. Моноклональные антитела и гибридомы /

Н.Г.Рыбальский, М.А. Серова, Г.А. Игнатьева, А.П. Старчеус. – Москва:

ВАСХНИЛ, 1989. – 343 с.

86.Савельева, И.В. К совершенствованию серологической диагностики холеры / И.В. Савельева, В.И. Ефременко, А.Д. Антоненко и др. // Матер.

X съезда Всерос. науч.-практ. об-ва эпидемиол.-микробиол. и паразитол.

– М., 2007. – Т.3. – С. 78.

87.Савельева, И.В. Липосомальная тест-система для серологической диагностики холеры / И.В. Савельева, В.И. Ефременко // Сб. науч. тр., посвящ. 75-лет. НИИ микробиол. МО РФ. – Киров, 2003. – С. 52 - 53.

88.Савельева, И.В. Экспериментальная разработка липосомального энтеротоксического диагностикума для серологической диагностики холеры: автореф. дис…канд. мед. наук: 03.00.07, 14.00.36 / Савельева Ирина Вилориевна. - Ростов-на-Дону, 2002 - 20 с.

89.Самелия, Ж.Г. Изучение антигенной структуры различных серовариантов возбудитиеля псевдотуберкулеза с использованием поли- и моноклональных антител: автореф. дис…канд. биол. наук: 03.00.07, 14.00.36 / Самелия Жанна Гурамовна. – Саратов. – 2002. – 23 с.

90.Самойлович, М.П. Совершенствование гибридомной технологии и создание моноклональных антител для систем иммуноанализа:

автореферат дис…докт. биол. наук : 14.00.36 / Самойлович Марина Платоновна. - Санкт-Петербург, 2006. – 37 с.

91.Свешников, П.Г. Введение в молекулярную иммунологию и гибридомную технологию / П.Г. Свешников, В.В. Малайцев, И.М. Богданова, О.Н.Солопова. - Издательство МГУ. Москва, 2006 // Internet. http://www.hybridoma.ru/glavi.htm.



Pages:     | 1 |   ...   | 2 | 3 || 5 |

Похожие работы:

«Сафранкова Екатерина Алексеевна КОМПЛЕКСНАЯ ЛИХЕНОИНДИКАЦИЯ ОБЩЕГО СОСТОЯНИЯ АТМОСФЕРЫ УРБОЭКОСИСТЕМ Специальность 03.02.08 – экология (биологические науки) Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: доктор...»

«АСБАГАНОВ Сергей Валентинович БИОЛОГИЧЕСКИЕ ОСНОВЫ ИНТРОДУКЦИИ РЯБИНЫ (SORBUS L.) В ЗАПАДНОЙ СИБИРИ 03.02.01 – «Ботаника» ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: к.б.н., с.н.с. А.Б. Горбунов Новосибирск 2014 ОГЛАВЛЕНИЕ ВВЕДЕНИЕ.. 4 Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.. 8 Ботаническая...»

«ХАФИЗОВ ТОИР ДАДАДЖАНОВИЧ ОСОБЕННОСТИ РОСТА, РАЗВИТИЯ И ПРОДУКТИВНОСТИ ЧАЙОТА (SECHIUM EDULE L. – CHAYOTE) В УСЛОВИЯХ ГИССАРСКОЙ ДОЛИНЫ ТАДЖИКИСТАНА Специальность: 06.01.01. – общее земледелие, растениеводство ДИССЕРТАЦИЯ на соискание учёной степени кандидата сельскохозяйственных наук НАУЧНЫЙ РУКОВОДИТЕЛЬ: доктор биологических наук, профессор, Гулов С.М. Душанбе – 201 ОГЛАВЛЕНИЕ...»

«Попцов Александр Леонидович ЗНАЧЕНИЕ ИНДИКАЦИИ ДНК ПАРВОВИРУСА В19 В ОБЕСПЕЧЕНИИ ИНФЕКЦИОННОЙ БЕЗОПАСНОСТИ ПЛАЗМЫ ДЛЯ ФРАКЦИОНИРОВАНИЯ 14.01.21 – Гематология и переливание крови ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Научный руководитель кандидат медицинских наук И.В....»

«Гегерь Эмилия Владимировна ЭКОЛОГИЧЕСКАЯ ОЦЕНКА ВЛИЯНИЯ ТЕХНОГЕННЫХ НАГРУЗОК ОКРУЖАЮЩЕЙ СРЕДЫ НА ФОРМИРОВАНИЕ БИОЛОГИЧЕСКИХ И МЕДИЦИНСКИХ ПОКАЗАТЕЛЕЙ ЗДОРОВЬЯ НАСЕЛЕНИЯ (НА ПРИМЕРЕ БРЯНСКОЙ ОБЛАСТИ) Специальность 03.02.08 – Экология (биологические...»

«СОЛОВЬЕВ Альберт Николаевич КЛИМАТОГЕННАЯ И АНТРОПОГЕННАЯ ДИНАМИКА БИОТЫ В МЕНЯЮЩИХСЯ ЭКОЛОГИЧЕСКИХ УСЛОВИЯХ ВОСТОКА РУССКОЙ РАВНИНЫ Специальность 03.02.08 – экология Диссертация на соискание ученой степени доктора биологических наук Киров Оглавление Введение Глава 1. Обзор состояния проблемы климатогенной...»

«Смешливая Наталья Владимировна ЭКОЛОГО-ФИЗИОЛОГИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ РЕПРОДУКТИВНОЙ ФУНКЦИИ СИГОВЫХ РЫБ ОБЬ-ИРТЫШСКОГО БАССЕЙНА 03.02.06 Ихтиология Диссертация на соискание учёной степени кандидата биологических наук Научный руководитель кандидат биологических наук, доцент Семенченко С.М. Тюмень – 2015 ОГЛАВЛЕНИЕ...»

«СЫРКАШЕВА Анастасия Григорьевна СОВРЕМЕННЫЕ ПОДХОДЫ К ПОВЫШЕНИЮ ЭФФЕКТИВНОСТИ ПРОГРАММ ВСПОМОГАТЕЛЬНЫХ РЕПРОДУКТИВНЫХ ТЕХНОЛОГИЙ У ПАЦИЕНТОК С ДИСМОРФИЗМАМИ ООЦИТОВ 14.01.01акушерство и гинекология Диссертация на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Научные руководители: доктор...»

«Куяров Артём Александрович РОЛЬ НОРМАЛЬНОЙ МИКРОФЛОРЫ И ЛИЗОЦИМА В ВЫБОРЕ ПРОБИОТИЧЕСКИХ ШТАММОВ ДЛЯ ПРОФИЛАКТИКИ АЛЛЕРГИЧЕСКИХ ЗАБОЛЕВАНИЙ У СТУДЕНЧЕСКОЙ МОЛОДЕЖИ СЕВЕРА 03.02.03 – микробиология 03.01.06 – биотехнология (в том числе бионанотехнологии) Диссертация на соискание учёной степени кандидата...»

«Цвиркун Ольга Валентиновна ЭПИДЕМИЧЕСКИЙ ПРОЦЕСС КОРИ В РАЗЛИЧНЫЕ ПЕРИОДЫ ВАКЦИНОПРОФИЛАКТИКИ. 14.02.02 – эпидемиология ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени доктора медицинских наук Научный консультант: заслуженный деятель науки РФ, лауреат Государственной премии СССР профессор, доктор медицинских наук Ющенко Галина Васильевна Москва – 20 Содержание...»

«Семенова Наталья Юрьевна МОРФОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ ИНТРАМЕДУЛЛЯРНЫХ СТРОМАЛЬНЫХ СТРУКТУР ГЕМОПОЭТИЧЕСКОЙ НИШИ И ЭЛЕМЕНТОВ ЛИМФОИДНОЙ СТРОМЫ ПРИ ХРОНИЧЕСКОМ ЛИМФОЛЕЙКОЗЕ 14.01.21 – гематология и переливание крови ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени кандидата биологических...»

«СИДОРОВА ТАТЬЯНА АЛЕКСАНДРОВНА ОСОБЕННОСТИ АДАПТИВНЫХ РЕАКЦИЙ У ДЕВУШЕК К УСЛОВИЯМ ГОРОДСКОЙ СРЕДЫ 03.02.08 Экология Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: доктор биологических наук, доцент Драгич О.А. Омск-2015 СОДЕРЖАНИЕ Введение.. Глава 1 Обзор литературы.. 1.1. Механизмы адаптации организма человека к окружающей среде 1.2. Закономерности развития...»

«КОНОНОВА ЕКАТЕРИНА АЛЕКСАНДРОВНА ЭКОЛОГО-БИОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ НОВЫХ СОРТОВ СТЕВИИ Stevia rebaudiana (Bertoni) Hemsley ПРИ ВВЕДЕНИИ В КУЛЬТУРУ В ЦЕНТРАЛЬНОМ ПРЕДКАВКАЗЬЕ по специальности 06.01.05 – селекция и семеноводство сельскохозяйственных растений Диссертация на соискание ученой степени кандидата...»

«ЗАУЗОЛКОВА Наталья Андреевна АГАРИКОИДНЫЕ И ГАСТЕРОИДНЫЕ БАЗИДИОМИЦЕТЫ ЛЕСОСТЕПНЫХ СООБЩЕСТВ МИНУСИНСКИХ КОТЛОВИН 03.02.01 – «Ботаника» ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель – кандидат биологических наук, И. А. Горбунова Абакан – 2015 СОДЕРЖАНИЕ ВВЕДЕНИЕ... ГЛАВА 1....»

«Кофиади Илья Андреевич ИММУНОГЕНОТИПИРОВАНИЕ И ГЕНОДИАГНОСТИКА В БИОМЕДИЦИНЕ: ФУНДАМЕНТАЛЬНЫЕ И ПРИКЛАДНЫЕ АСПЕКТЫ «03.03.03 – иммунология» диссертация на соискание ученой степени доктора биологических наук Москва, 2013 ОГЛАВЛЕНИЕ СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ В РАБОТЕ СОКРАЩЕНИЙ 8 ВВЕДЕНИЕ 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 1.1 ИСТОРИЯ РАЗВИТИЯ...»

«КОВАЛЕВА АННА ВАЛЕРЬЕВНА ПРИМЕНЕНИЕ ФИТОСИРОПОВ И ФИТОЭКСТРАКТОВ В ПРОИЗВОДСТВЕ ХЛЕБОБУЛОЧНЫХ ИЗДЕЛИЙ Специальность 05.18.01 – Технология обработки, хранения и переработки злаковых, бобовых культур, крупяных продуктов, плодоовощной продукции и виноградарства Диссертация на соискание ученой степени кандидата технических наук Научный руководитель: доктор...»

«Миронов Андрей Викторович КОРРЕКЦИЯ АККОМОДАЦИОННЫХ НАРУШЕНИЙ У ПАЦИЕНТОВ ЗРИТЕЛЬНО-НАПРЯЖЕННОГО ТРУДА МЕТОДАМИ ФИЗИЧЕСКОГО ВОЗДЕЙСТВИЯ 14.01.07 – глазные болезни 14.03.11 восстановительная медицина, спортивная медицина, лечебная физкультура, курортология и физиотерапия Диссертация на...»

«Проскурякова Лариса Александровна НАУЧНОЕ ОБОСНОВАНИЕ СИСТЕМЫ СОХРАНЕНИЯ ЗДОРОВЬЯ...»

«САФИНА ЛЕЙСЭН ФАРИТОВНА Анафилактический шок на ужаления перепончатокрылыми насекомыми (частота встречаемости, иммунодиагностика, прогнозирование) 14.03.09 – клиническая иммунология, аллергология Диссертация на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Научный...»

«БИТ-САВА Елена Михайловна МОЛЕКУЛЯРНО-БИОЛОГИЧЕСКОЕ ОБОСНОВАНИЕ ЛЕЧЕНИЯ BRCA1/СНЕК2/BLM-АССОЦИИРОВАННОГО И СПОРАДИЧЕСКОГО РАКА МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ Специальности: 14.01.12 – онкология 03.01.04 – биохимия ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени доктора медицинских наук Научный консультант: заслуженный деятель науки РФ, д.м.н., профессор, член-корр. РАН В.Ф. Семиглазов Научный консультант:...»







 
2016 www.konf.x-pdf.ru - «Бесплатная электронная библиотека - Авторефераты, диссертации, конференции»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.