WWW.KONF.X-PDF.RU
БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА - Авторефераты, диссертации, конференции
 


«НАФТАЛИНМЕТАБОЛИЗИРУЮЩИЙ КОНСОРЦИУМ МИКРООРГАНИЗМОВ, ВЫДЕЛЕННЫЙ ИЗ ЗАСОЛЕННОЙ ПОЧВЫ ...»

На правах рукописи

АНАНЬИНА Людмила Николаевна

НАФТАЛИНМЕТАБОЛИЗИРУЮЩИЙ КОНСОРЦИУМ

МИКРООРГАНИЗМОВ, ВЫДЕЛЕННЫЙ ИЗ ЗАСОЛЕННОЙ ПОЧВЫ

03.00.07 Микробиология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени

кандидата биологических наук

Пермь – 2007

Работа выполнена в лаборатории химического мутагенеза Института экологии и

генетики микроорганизмов УрО РАН, Пермь

Научный руководитель:

кандидат биологических наук Плотникова Елена Генриховна

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук Октябрьский Олег Николаевич доктор биологических наук, профессор Карпунина Тамара Исаковна

Ведущая организация:

Институт микробиологии им. С.Н. Виноградского РАН, Москва 2007 г. в 1200 часов на заседании

Защита состоится «26» октября диссертационного совета Д 004.019.01 в Институте экологии и генетики микроорганизмов УрО РАН по адресу: 614081, г. Пермь, ул. Голева, д. 13.

Факс:

(342) 2446711.

Автореферат размещен на сайте Института экологии и генетики микроорганизмов УрО РАН (http:/www.iegm.ru).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Института экологии и генетики микроорганизмов УрО РАН.

Автореферат разослан «25» сентября 2007 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, Ившина Ирина Борисовна чл.-корр. РАН

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Широкое применение в промышленности, присутствие в побочных продуктах коксо-, газо- и нефтеперерабатывающих производств, образование при сгорании различных органических материалов (каменного угля, нефти, газа, древесины, мусора и др.) привело к повсеместному распространению полициклических ароматических углеводородов в окружающей среде. Физико-химические свойства соединений этого класса (гидрофобность, высокая сорбционная способность и стабильность) способствуют их аккумуляции в природных экосистемах. Кроме того, полициклические ароматические углеводороды обладают токсичным, мутагенным, тератогенным и канцерогенным действиями на живые организмы. Все вышеперечисленное послужило причиной выделения соединений этого класса в категорию приоритетных поллютантов (Mumtaz et al., 1995). Основную роль в разложении соединений данного класса в природе играет микробная деструкция (Sutherland et al., 1995). В настоящее время накоплен большой объем информации о способности бактерий использовать ряд полициклических ароматических углеводородов в качестве единственного источника углерода и энергии (Kanaly, Harayama, 2000; Habe, Omori, 2003).

Наиболее изученными являются бактериальные генетические и биохимические системы катаболизма нафталина, который используется в качестве модельного соединения для изучения систем деструкции полициклических ароматических углеводородов (Боронин и др., 1989; Yen, Serdar, 1988; Bosch et al., 1999; Laurie et al., 1999; Jones et al., 2003; Parales, 2003; Kulakov et al., 2000, 2005).

В ряде случаев загрязнение экосистем полициклическими ароматическими углеводородами сопровождается засолением, которое может иметь природное или антропогенное происхождение, сформированное в результате разработки нефтяных месторождений и работы соледобывающих предприятий. В этих условиях ведущими факторами формирования микробиоценозов становятся соленость среды и поллютант. Микроорганизмы и их сообщества, способные к деструкции полициклических ароматических углеводородов при высокой солености среды, описаны в единичных сообщениях (Звягинцева и др., 2001; Плотникова и др., 2001;

Mille et al., 1991; Daz et al., 2000; Hedlud et al., 2001; Kasai et al., 2002; Abed et al., 2006). Остаются малоизученными взаимодействия внутри таких сообществ, а также механизмы регуляции их состава, метаболической активности и устойчивости к высокому содержанию солей. Проведение исследований в этой области внесет существенный вклад в разработки новых стратегий биоремедиации экстремальных экосистем.

Цель работы – исследование нафталинметаболизирующего консорциума микроорганизмов, выделенного из засоленной почвы.

Задачи исследования

1. Выделить стабильное/устойчивое сообщество микроорганизмов, способное использовать нафталин в качестве единственного источника углерода и энергии в присутствии высоких концентраций хлорида натрия.

2. Определить таксономическое положение бактерий сообщества на основе принципов полифазной таксономии.

3. Изучить взаимоотношения бактерий в консорциуме при росте на нафталине в условиях высокой солености.

4. Исследовать осмопротекторные соединения грамположительных галотолерантных и грамотрицательных умеренно галофильных бактерий, изолированных из консорциума.

Научная новизна. Определен состав консорциума бактерий, осуществляющего разложение нафталина в условиях высокой солености среды (до 9 % хлорида натрия). Установлено, что в консорциум входят галотолерантные бактерии-деструкторы нафталина и галотолерантные, умеренно галофильные бактерии, не способные осуществлять разложение данного полициклического ароматического углеводорода. Показано, что катаболизм нафталина в консорциуме осуществляют актинобактерии рода Rhodococcus. На основании филогенетической обособленности и фенотипических отличий описаны новый род и вид Salinicola socius sp. nov., gen. nov., новые виды Rhodococcus naphthalenivorans sp. nov. и Thalassospira permense sp. nov. Показано, что представители родов Salinicola и Rhodococcus при высокой осмолярности среды накапливают глутамат, эктоин и гидроксиэктоин, выступающие в роли внутриклеточных осмопротекторов. Для представителей рода Rhodococcus подобная комбинация осмопротекторов описывается впервые. Экспериментально обосновано присутствие протокооперативных взаимоотношений в консорциуме между бактериямидеструкторами нафталина и бактериями-спутниками.

Теоретическое и практическое значение работы. Полученные данные уточняют классификацию семейства Halomonadaceae и расширяют знания о разнообразии бактерий сообщества техногенных засоленных почв (г. Березники, Пермский край). Результаты исследований могут служить основой для разработки методов мониторинга биоразнообразия данного микробиоценоза. Результаты, касающиеся механизмов функционирования консорциума микроорганизмов, разлагающего полициклические ароматические углеводороды при высокой солености среды, могут быть использованы для усовершенствования методов биоремедиации экстремальных экосистем. Создана рабочая коллекция галотолерантных/галофильных бактерий, перспективных для использования в биотехнологии. Материалы диссертации используются в лекционных курсах на кафедрах микробиологии и иммунологии, ботаники и генетики растений Пермского государственного университета.

Положения, выносимые на защиту

1. Выделенное из засоленной почвы нафталинметаболизирующее сообщество микроорганизмов является многокомпонентной системой, включающей галотолерантные бактерии-деструкторы нафталина, умеренно галофильные и галотолерантные бактерии-спутники.

2. На основании фенотипических характеристик и филогенетического анализа описаны новые таксоны Salinicola socius sp. nov., gen. nov., Rhodococcus naphthalenivorans sp. nov. и Thalassospira permense sp. nov.

3. В выделенном из засоленной почвы нафталинметаболизирующем консорциуме бактерий формируются взаимовыгодные отношения между галотолерантными бактериями-деструкторами нафталина и умеренно галофильными бактериями-спутниками.

4. Умеренно галофильные бактерии-спутники и галотолерантные бактериидеструкторы нафталина в условиях высокой солености среды накапливают низкомолекулярные органические соединения (осмопротекторы).

Апробация работы и публикации. Материалы диссертации доложены и обсуждены на Международной научно-практической конференции «Проблемы и перспективы реабилитации техногенных экосистем», Астрахань, 2004;

II Международной конференции «Микробное биоразнообразие: состояние, стратегия сохранения, биологический потенциал», Пермь-Казань-Пермь, 2005; 9-йй Пущинских школах-конференциях молодых ученых «Биология - наука ХХI века», Пущино, 2005, 2006; Всероссийской молодежной школе-конференции «Актуальные аспекты современной микробиологии», Москва, 2005; Всероссийской молодежной школе-конференции «Генетика микроорганизмов и биотехнология», Москва-Пущино, 2006; IV Международном конгрессе «Биотехнология: состояние и перспективы развития», Москва, 2007.

По теме диссертации опубликовано 16 печатных работ, в том числе 2 статьи в рецензируемых журналах.

Объем и структура диссертации. Работа изложена на 165 страницах машинописного текста, содержит 12 таблиц и 29 рисунков. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, трех глав экспериментальных исследований, заключения, выводов, списка цитируемой литературы, включающего 229 литературных источника, из них 28 на русском языке и 201 зарубежный, и приложений.

Связь работы с научными программами. Диссертационная работа выполнена в соответствии с планом НИР Института экологии и генетики микроорганизмов УрО РАН и является частью исследований, проводимых по теме «Биохимические и генетические системы трансформации сложных органических соединений бактерий, перспективных для биотехнологии» (номер государственной регистрации НИР 0120.0406511). Исследования поддержаны грантами РФФИ (№04-04-96042-р_урал_а, №07-04-96078-р_урал_а), Программой интеграционных фундаментальных исследований, выполняемых в УрО РАН совместно с учеными СО РАН (проект «Микробные сообщества экстремальных экосистем»).

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Выделение консорциума микроорганизмов. Образцы почвы отобраны на расстоянии 10 м от солеотвала калийного комбината ОАО «Уралкалий»

(г. Березники, Пермский край). Для получения накопительной культуры 1 г почвы вносили в колбу объемом 250 мл, содержащую 100 мл минеральной среды Раймонда (Розанова, Назина, 1982), нафталин (1 г/л), NaCl (6 %) и инкубировали на термостатируемом шейкере УВМТ-12-250 при 100 об/мин и 28°С до появления микробного роста. Исследования проводили с сообществом (консорциумом) микроорганизмов, полученным путем многократных пересевов накопительной культуры и культивирования при вышеперечисленных условиях, обозначенным SMB3.

Бактериальные штаммы. Чистые культуры микроорганизмов из консорциума бактерий выделяли на полноценной агаризованной среде Раймонда, содержащей 5 г/л триптона, 2,5 г/л дрожжевого экстракта и 30 г/л NaCl (Плотникова и др., 2001). В работе использовали галотолерантные бактериидеструкторы нафталина родов Rhodococcus и Arthrobacter, а также умеренно галофильные бактерии сем. Halomonadaceae, изолированные ранее из засоленных почв (Алтынцева, 2001; Плотникова и др., 2001, 2006).

Ростовые характеристики консорциума микроорганизмов, смешанных культур микроорганизмов (модельные эксперименты) и штаммов-деструкторов изучали в периодических культурах, выращивая в колбах объемом 250 мл на орбитальном шейкере УВМТ-12-250 (100 об/мин) при 28оС. В опытах по культивированию консорциума SMB3 на разных субстратах (нафталине, салицилате, гентизате и ацетате), а также при изучении ростовых характеристик смешанных культур микроорганизмов (модельные эксперименты) концентрация субстратов составляла 0,5 г/л. В экспериментах по исследованию кинетики роста штаммов-деструкторов и консорциума микроорганизмов в условиях разной солености среды (0-9 % NaCl) концентрация нафталина была равна 1 г/л.

Определение биомассы проводили путем измерения оптической плотности (ОП540) культуральной жидкости на спектрофотометре UV-Visible BioSpec-mini («Shimadzu», Япония) в кювете с длиной оптического пути 0,5 см. Поскольку бактерии консорциума четко различались макроморфологическими характеристиками, проведен подсчет колониеобразующих единиц (КОЕ) морфотипов колоний в составе микробного консорциума. КОЕ определяли методом серийных разведений с последующим высевом и подсчетом колоний на агаризованной полноценной среде Раймонда, содержащей 3 % NaCl. Расчет удельной скорости роста (µ), времени удвоения (td) и длительности lag-фазы (Tl) производили по стандартным формулам (Нетрусов и др., 2005).

Определение таксономического положения микроорганизмов.

Морфологические и физиолого-биохимические признаки бактерий исследовали согласно стандартным методикам (Методы общей бактериологии, 1983). Для определения энзиматической активности использовали тест-системы «СИБ»

(Нижний Новгород, Россия) в соответствии рекомендациям производителя.

Наличие миколовых кислот выявляли методом тонкослойной хроматографии (Goodfellow, Minnikin, 1985). Изомер диаминопимелиновой кислоты в продуктах кислотного гидролиза клеточных стенок определяли методом бумажной хроматографии (Becker, 1964). Препараты клеточных стенок получали по методу, описанному (Schleifer, Kandler, 1972). Состав жирных кислот целых клеток и хинонов определяли по описанным ранее методам (Zhilina et al., 1997).

Нуклеотидный состав ДНК определяли по температуре ее тепловой денатурации (Owen, Lapage, 1976). Выделение тотальной ДНК проводили описанным ранее методом (Current protocols in molecular biology, 1995). Предварительную группировку штаммов бактерий осуществляли методами ДНК-типирования REPПЦР, BOX-ПЦР и ARDRA (Versalovic et al., 1994; Scortichini et al., 2002).

Определение нуклеотидной последовательности гена 16S рРНК, амплифицированного с эубактериальными праймерами 27F и 1492R в термоциклере «My Cycler» («Bio-Rad», США), проводили с применением набора реактивов CEQ Dye Terminator Cycle Sequencing Kit («Beckman Coulter», США) на автоматическом ДНК-секвенаторе CEQ 2000 XL DNA Analysis System («Beckman Coulter», США) (Гавриш и др., 2004). Последовательности 16S рДНК выравнивали с помощью программы CLUSTAL W (Thompson et al., 1994). Построение филогенетического древа производили с помощью пакета программ TREECON (Van de Peer, DeWachter, 1994).

Денатурирующий градиентный гель электрофорез (ДГГЭ). Структуру консорциума микроорганизмов исследовали методом ДГГЭ фрагментов гена 16S рРНК, амплифицированных с применением эубактериальных праймеров 27F и 518R (Tiirola et al., 2002). Праймер 27F включал 40 нуклеотидный GC-хвост (5`-CGCCCGCCGCGCCCCGCGCCCGTCCCGCCGCCCCCGCCCG-3`) на 5`-конце.

Электрофорез был выполнен на DcodeTM Universal Mutation System («Bio-Rad», США) согласно протоколу (Muyzer et al, 1993) Выделение и анализ осмопротекторов. Выделение осмопротекторов проводили из клеток, выращенных в минеральной среде Раймонда с разной соленостью и глюкозой в качестве субстрата. Спектры ЯМР регистрировали на импульсном Фурье-спектрометре ЯМР типа WP80SY («Bruker», Германия) (Хмеленина и др., 2000).

Статистическая обработка. Повторность опытов трехкратная. При статистической обработке определяли среднюю арифметическую, стандартное отклонение, доверительный интервал, достоверность результата. Для обработки результатов использовали статистический модуль Exсel 5.0.

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

Рост сообщества бактерий в присутствии различных концентраций хлорида натрия. Исследование влияния солености среды на рост сообщества бактерий в минеральной среде Раймонда с нафталином в качестве единственного источника углерода и энергии показало, что максимальные значения оптической плотности культуры наблюдаются при 3 % NaCl и в отсутствие соли. Увеличение концентрации хлорида натрия в среде культивирования до 9 % приводит к снижению показателей ростовых характеристик. При более высоких концентрациях соли увеличения оптической плотности не зафиксировано (рис. 1).

–  –  –

Выявленный ингибирующий эффект повышенных концентраций хлорида натрия на рост бактерий в процессе разложения токсичных ксенобиотиков, в том числе полициклических ароматических углеводородов, отмечен многими исследователями (Звягинцева и др., 2001; Плотникова и др., 2001; Mille et al., 1991).

Характеристика бактерий сообщества SMB3. Из исследуемого бактериального сообщества, культивированного в жидкой минеральной среде на нафталине в присутствии 6 % NaCl, выделено семь штаммов бактерий,

–  –  –

Раймонда при 30 % NaCl, для оптимального роста изолятов необходимо присутствие 3-10 % NaCl в среде культивирования. Таким образом, согласно классификации Кашнера изоляты SMB31 и SMB35 являются умеренными галофилами (Кашнер, 1981; Ventosa et al., 1998).

Таксономическая характеристика умеренно галофильных бактерий семейства Halomonadaceae. Умеренно галофильные бактерии SMB31 и SMB35 отличаются друг от друга по морфологическим и физиолого-биохимическим признакам (табл. 2).

Филогенетический анализ, основанный на сравнении нуклеотидных последовательностей гена 16S рРНК, показал, что штаммы занимают обособленное положение внутри семейства Halomonadaceae (рис. 2). Изолят SMB31 группируется с Halomonas taeanensis (уровень сходства 16S рДНК – 99,8 %), а штамм SMB35 образует периферическую ветвь в подкластере, включающем роды Halomonas, Cobetia и Chromohalobacter (значение «bootstrap» – 76 %). Уровни сходства 16S рДНК изолята SMB35 и видов рода Halomonas находятся в пределах от 90,6 % до 95,1 %. Наиболее высокие величины сходства – 95,0-95,1 % – обнаружены с тремя видами рода Halomonas – H. pacifica, H. taeanensis и H. ventosae, не входящими ни в группу Halomonas sensu stricto (I группа), ни в наиболее многочисленную группу галомонад (II группа) и не группирующимися друг с другом (рис. 2). В целом ряде классов микроорганизмов, в том числе протеобактерий, подобные величины сходства 16S рДНК квалифицируются как межродовые (Takeuchi et al., 2001; Evtushenko, Takeuchi, 2003; An et al., 2006).

Штамм SMB35 обладает существенными характеристиками, дифференцирующими его от видов Halomonas sensu stricto, близкородственных видов рода Halomonas и от представителей других родов семейства Наlomonadaceae, среди которых необходимо выделить содержание Г+Ц-пар в ДНК, подвижность и характер расположения жгутиков, диапазон концентраций хлорида натрия, при которых возможен рост, способность гидролизовать крахмал, желатину, твин 80 и мочевину (табл. 2, 3).

Выявленные фенотипические отличия, а также филогенетическая обособленность штамма SMB35 дают основание для выделения нового рода и вида, для которого предлагается название Salinicola socius gen. nov., sp. nov.

Нуклеотидная последовательность 16S рДНК штамма Salinicola socius SMB35T (1433 п.н.) депонирована в GenBank под номером DQ 979342.

Штамм SMB31 на данном этапе работы идентифицирован как Halomonas sp.

0.02

–  –  –

Рис. 2. Филогенетическое древо, построенное с использованием метода neighbor-joining, основанное на сравнении нуклеотидных последовательностей 16S рДНК. Масштаб соответствует 2 нуклеотидным заменам на каждые 100 нуклеотидов. Цифрами показана статистическая достоверность порядка ветвления, определенная с помощью «bootstrap»-анализа 1000 альтернативных деревьев (приведены значения выше 50 %).

–  –  –

Таксономическая характеристика галотолерантной бактерии семейства Rhodospirillaceae. У штамма определена последовательность гена 16S рРНК, составляющая 1391 п.н. Филогенетический анализ показал, что штамм является членом семейства Rhodospirillaceae и стабильно группируется вместе с представителем хемоорганотрофного рода – Thalassospira lucentensis, с которым имеет наиболее высокий уровень сходства 16S рДНК (96,7 %) (рис. 3).

Подобно филогенетически близкому организму Thalassospira lucentensis штамм SMB34 является аэробом, хемоорганотрофом, клетки представляют собой оксидазо- и каталазоположительные, подвижные за счет одного полярного жгутика, изогнутые палочки. Среди преобладающих жирных кислот присутствует гексадекановая кислота.

Вместе с тем, изолят обладает физиолого-биохимическими и хемотаксономическими признаками, четко дифференцирующими его от вида Thalassospira lucentensis. Наиболее значимыми из них являются наличие нитратредуктазы, положительная реакция в тесте Хью-Лейфсона, концентрации хлорида натрия (0-8 %), при которых возможен рост, преобладающие жирные кислоты (циклопропаннонадекановая, 9-октадеценовая, циклопропангептадекановая, гексадекановая кислоты).

0.02

–  –  –

Рис. 3. Филогенетическое древо, построенное с использованием метода neighbor-joining, основанное на сравнении нуклеотидных последовательностей 16S рДНК. Масштаб соответствует 2 нуклеотидным заменам на каждые 100 нуклеотидов. Цифрами показана статистическая достоверность порядка ветвления, определенная с помощью «bootstrap»-анализа 1000 альтернативных деревьев (приведены значения выше 50 %).

Основываясь на перечисленных выше данных филогенетического анализа, а также на существенных отличиях по фенотипическим характеристикам от известного вида, на настоящем этапе исследований штамм отнесен к новому виду Thalassospira permense sp. nov.

Определение таксономического положения актинобактерий рода Rhodococcus – деструкторов нафталина. Анализ хемотаксономических признаков грамположительных штаммов SMB37 и SMB38 показал, что в состав пептидогликана входит мезо-диаминопимелиновая кислота, в клеточной стенке 0.02

–  –  –

Рис. 4. Филогенетическое древо, построенное с использованием метода neighbor-joining, основанное на сравнении нуклеотидных последовательностей 16S рДНК. Масштаб соответствует 2 нуклеотидным заменам на каждые 100 нуклеотидов. Цифрами показана статистическая достоверность порядка ветвления, определенная с помощью «bootstrap»-анализа 1000 альтернативных деревьев (приведены значения выше 50 %).

–  –  –

выявлены миколовые кислоты. Бактериальные культуры характеризуются жизненным циклом кокк-палочка-кокк. Филогенетический анализ нуклеотидных последовательностей 16S рДНК штаммов SMB37 и SMB38, составляющих 1272 п.н. и 1400 п.н., соответственно, выявил их принадлежность к роду Rhodococcus. Данные филогенетического анализа 16S рДНК штамма SMB38 показывают, что он имеет высокий уровень сходства с R. jostii (99,6 %) в подкластере R. erythropolis. На данном этапе исследований штамм SMB38 идентифицирован как Rhodococcus sp. (рис. 4).

На филогенетическом древе штамм SMB37 попадает в подкластер R. rhodochrous, что подтверждается высоким значением «bootstrap»-анализа (90 %) (рис. 4). Уровень сходства 16S рДНК штамма с видами этой группы составляет 97,8-98,4 %. В литературе имеется достаточно много сообщений (Briglia et al., 1996; Yoon, Cho et al., 2000; Yoon et al., 2000; Goodfellow et al., 2002, 2004;

Jones et al., 2004), свидетельствующих о том, что виды рода Rhodococcus при подобных значениях сходства 16S рДНК и даже намного выше – от 99,0 % до 99,5 % – имеют уровень ДНК-ДНК гомологии намного ниже 70 % – значения, рекомендованного для выделения бактериального вида (Wayne et al., 1987). С учетом вышесказанного и существенных отличий по фенотипическим признакам (табл. 4), в их числе устойчивость к соли и способность использовать нафталин в качестве единственного источника углерода и энергии, штамм SMB37 представляет собой новый вид рода Rhodococcus, с предложенным названием Rhodococcus naphthalenivorans sp. nov.

Штамм SMB32 – представитель группы «Arthrobacter nicotianae».

Филогенетический анализ нуклеотидной последовательности штамма SMB32, составляющей 1415 п.н., показал, что он попадает в группу «A. nicotiana» рода Arthrobacter со значением «bootstrap»-анализа 92 %, включающую виды A. nicotianae, A. sulfureus, A. mysorens, A. uratoxydans, A. protophormiae, A. rhombi, A. creatinolyticus, A. arilaitensis, A. bergerei, A. ardleyensis, A. psychrolactophilus, A. kerguelensis и A. gangotriensis. Наиболее высокое значение сходства 16S рДНК штамм имеет с A. nicotianae (99,5 %), A. mysorens (99,5 %) и A. arilaitensis (99,5 %).

Фенотипические данные, в том числе состав пептидогликана, в котором выявлены лизин, аланин и глутаминовая кислота в молярном соотношении 1:2:1,5, соответствующем А4 типу, характерного для артробактерий группы «A. nicotianae», подтверждают результаты филогенетического анализа; сахара клеточной стенки представлены галактозой, глюкозой, рибозой, целлобиозой и маннозой. Ввиду не выраженности фенотипических отличий изолята от филогенетически близких видов, на данном этапе штамм определен как Arthrobacter sp. (группа «A. nicotianae»).

Штамм Microbacterium sp. SMB33. Филогенетический анализ нуклеотидной последовательности 16S рДНК штамма SMB33 (1421 п.н.) показал, что он является членом рода Microbacterium. Наиболее высокий уровень сходства, составляющий 99,1-99,7 %, изолят имеет с представителями орнитинсодержащих видов (M. maritypicum, M. oxydans, M. liquefaciens, M. saperdae, M. luteolum, M. hydrocarbonoxydans, M. testaceum, M. aerolatum, M. keratanolyticum, M. paraoxydans, M. resistens, M. foliorum) и с одним лизинсодержащим – M. oleivorans (99,2 %).

Анализ клеточной стенки показал, что в состав пептидогликана входят орнитин, глутаминовая вместе с гидроксиглутаминовой кислоты, глицин и аланин в молярном соотношении 1:1,5:2:2. Сахар клеточной стенки – галактоза.

Полученные данные согласуются с результатами сравнения нуклеотидных последовательностей. На данном этапе работы штамм идентифицирован как Microbacterium sp.

Изучение взаимоотношений бактерий в консорциуме SMB3 Консорциум – это совокупность организмов, функционально связанных друг с другом (Manual of environmental microbiology, 2002). В представленной работе исследованы взаимоотношения бактерий-деструкторов и сопутствующих бактерий в консорциуме SMB3.

Влияние интермедиатов деструкции нафталина на состав консорциума микроорганизмов. Изучена способность бактерий консорциума использовать в качестве субстратов промежуточные продукты разложения нафталина. Показано, что штаммы-деструкторы нафталина рода Rhodococcus способны утилизировать салицилат, гентизат и ацетат (табл. 5), что предполагает разложение нафталина родококками через салицилат по гентизиновому пути (Grund et al., 1992;

Di Gennaro et al., 2001; Kulakov et al., 2005). Поскольку бактерии-спутники способны расти на интермедиатах катаболизма нафталина (табл. 5), проведено исследование влияния промежуточных метаболитов деструкции нафталина на структуру консорциума SMB3 методом денатурирующего градиентного гель электрофореза и подсчетом колониеобразующих единиц. Установлено, что культивирование консорциума на ацетате, салицилате и гентизате приводит к элиминации ряда бактерий, в то время как при инкубировании с нафталином в качестве единственного источника углерода и энергии состав консорциума стабильно сохраняется (рис. 5, 6).

Наблюдаемое уменьшение биоразнообразия консорциума при смене источника углерода и энергии (нафталина на промежуточные продукты его метаболизма) можно объяснить сокращением звеньев трофической цепи, что ведет к конкуренции между бактериальными популяциями, трансформирующими одинаковый субстрат. Полученные результаты доказывают, что в консорциуме присутствуют сформированные трофические связи, в которых каждый член сообщества занимает определенную экологическую нишу.

–  –  –

Рис. 6. Количество клеток бактерий консорциума SMB3, выращенного на разных субстратах в минеральной среде Раймонда в присутствии 7 % NaCl (стационарная фаза роста).

1 – штамм SMB31, 2 – штамм SMB32, 3 - штамм SMB33, 4 - штамм SMB34, 5 - штамм SMB35, 6 – штамм SMB37, 7 - штамм SMB38.

Рост штамма SMB37 в составе Rhodocoсcus naphthalenivorans консорциума и индивидуальной культуре. Исследуемый консорциум бактерий способен расти на нафталине в присутствии до 9 % NaCl (рис. 1). В то же время из консорциума выделен штамм-деструктор нафталина R. naphthalenivorans SMB37, для индивидуальной культуры которого верхним пределом для роста в минеральной среде Раймонда на нафталине служит концентрация хлорида натрия 7,5 % (табл. 1).

Сравнительный анализ характера роста штамма-деструктора SMB37 при культивировании в составе консорциума и индивидуальной культуре показал, что наиболее высокое значение колониеобразующих единиц штамма в индивидуальной культуре зафиксировано в присутствии 3 % NaCl (108 КОЕ/мл), в отсутствие соли значение КОЕ на один порядок ниже (107 КОЕ/мл) (рис. 7). В обоих вариантах (отсутствие NaCl и 3 % NaCl) количество клеток выше при культивировании штамма в составе консорциума (108 КОЕ/мл и 109 КОЕ/мл, соответственно). При выращивании штамма-деструктора SMB37 в составе консорциума SMB3 и индивидуальной культуре в присутствии 7,5 % NaCl наблюдается значительное различие в значениях КОЕ: при культивировании штамма SMB37 в составе консорциума КОЕ на три порядка выше (108 КОЕ/мл), чем при росте в индивидуальной культуре (105 КОЕ/мл).

Таким образом, экспериментально обосновано, что на эффективность роста штамма-деструктора нафталина R. naphthalenivorans SMB37 в условиях высокой солености среды положительное влияние оказывают другие члены микробного консорциума SMB3.

–  –  –

Изучение кинетики роста моделированных смешанных культур на нафталине в условиях высокой солености среды. Для изучения взаимного влияния штаммов в консорциуме SMB3 проведены эксперименты по моделированию смешанных культур с использованием штаммов-деструкторов нафталина R. naphthalenivorans SMB37, Rhodococcus sp. SMB38 и умеренно галофильного штамма Halomonas sp.

SMB31 в следующих вариантах:

R. naphthalenivorans SMB37 и Halomonas sp. SMB31 (I); Rhodococcus sp. SMB38 и Halomonas sp. SMB31 (II); R. naphthalenivorans SMB37, Rhodococcus sp. SMB38 и Halomonas sp. SMB31 (III).

Контроль качественного состава смешанных культур бактерий проводили методом денатурирующего градиентного гель электрофореза (рис. 8). На электрофореграмме ДГГЭ 16S рДНК ампликонов видно, что в смешанных культурах вариантов I, II и III присутствует фрагмент 16S рДНК, соответствующий таковому чистой культуры Halomonas sp. SMB31. В вариантах I и II присутствуют полосы, четко отличающиеся по положению в геле друг от друга и совпадающие с полосами фрагментов 16S рДНК штаммов R. naphthalenivorans SMB37 и Rhodococcus sp. SMB38. В треке варианта III выявлена полоса, соответствующая слабо разделенным фрагментам 16S рДНК штаммов R. naphthalenivorans SMB37 и Rhodococcus sp. SMB38.

Результаты ДГГЭ подтверждают экспериментальные данные, полученные на основе макроморфологических свойств бактерий (подсчет КОЕ). Показано, что умеренно галофильная бактерия Halomonas sp. SMB31 сохраняется в составе смешанных культур при культивировании на нафталине и, более того, способна к эффективному росту (рис. 9А, Б). Совместное культивирование штаммовдеструкторов с умеренно галофильной культурой Halomonas sp. SMB31 значительно сокращает lag-период, увеличивает удельную скорость роста штамма Rhodococcus sp. SMB38 и количество клеток штамма R. naphthalenivorans SMB37 (рис. 9В). Полученные данные показывают наличие взаимовыгодных отношений между бактериями-деструкторами и бактериями-спутниками в исследуемом консорциуме при выращивании в условиях высокой солености среды. Можно предположить, что подобное взаимодействие связано с обменом низкомолекулярными органическими веществами (осмопротекторами) между Рис. 8. ДГГЭ фрагментов 16S рДНК индивидуальных и смешанных культур бактерий.

1 – смешанная культура варианта III, 2 - смешанная культура варианта II, 3 – смешанная культура варианта I, 4 - штамм SMB38, 5 – штамм SMB37, 6 – штамм SMB31.

–  –  –

Рис. 9. Рост моделированных смешанных культур и индивидуальных культур штаммов-деструкторов в минеральной среде Раймонда на нафталине в присутствии 7 % NaCl.

Незаштрихованные маркеры – индивидуальные культуры штаммов-деструкторов, заштрихованные маркеры – штаммы в смешанных культурах.

бактериями. Известно, что эубактерии в гиперосмотических условиях синтезируют de novo или поглощают из среды культивирования осмопротекторные соединения, что позволяет им выживать в подобных условиях (Ventosa et al., 1998;

Roberts, 2005). На следующем этапе работы исследована способность бактерий консорциума к синтезу осмолитов.

Анализ осмопротекторных соединений. Исследуемые умеренно галофильные штаммы Halomonas sp. SMB31 и Salinicola socius SMB35 в условиях высокой осмолярности среды внутриклеточно накапливают эктоин и глутамат.

Следует отметить, что представители разных родов одного семейства существенно различаются качественным составом осмопротекторных соединений при росте в присутствии 10 % NaCl: данная концентрация хлорида натрия приводит к накоплению в клетках штамма SMB35 гидроксиэктоина (табл. 6). Полученные нами результаты о качественном составе осмопротекторов представителей семейства Halomonadaceae согласуются с литературными данными (Ono et al., 1999; Calderon et al., 2004; Vargas et al., 2006).

Изучение осмолитов штаммов R. naphthalenivorans SMB37 и Rhodococcus sp. SMB38 выявило накопление в клетках эктоина, гидроксиэктоина и глутамата (табл. 6). Ранее для R. erythropolis обнаружено накопление глутамата, аспартата и трегалозы при гиперосмотическом стрессе (Комарова и др., 2002).

Установленный нами комплекс осмопротекторных соединений родококков описан впервые. В отличие от умеренно галофильного штамма Salinicola socius SMB35 у галотолерантных изолятов SMB37 и SMB38 гидроксиэктоин обнаружен в клетках, Таблица 6.

–  –  –

выращенных при более низких концентрациях хлорида натрия (5 %). Следует отметить, что с возрастанием концентраций хлорида натрия в среде культивирования в клетках штамма SMB37 снижается содержание осмолитов (табл. 6), этот факт может объяснить отсутствие роста индивидуальной культуры штамма на нафталине при высоких концентрациях хлорида натрия (8-9 %), в сравнении со штаммом SMB38 (табл. 1).

Результаты проведенных исследований бактериального консорциума SMB3 свидетельствуют о наличии трофических связей, поскольку, во-первых, в его состав входят как бактерии-деструкторы нафталина, так и не утилизирующие это соединение бактерии-спутники; во-вторых, использование в качестве субстратов интермедиатов разложения нафталина приводит к изменению структуры консорциума, в то время как при культивировании на нафталине состав стабильно сохраняется. Кроме того, нами выявлены и экспериментально обоснованы взаимовыгодные отношения между бактериями-деструкторами нафталина и умеренно галофильной бактерией, которые, как предполагается, основаны на обмене осмопротекторными соединениями.

ВЫВОДЫ

1. Из почвы района солеразработок выделено сообщество бактерий, использующее нафталин в качестве единственного источника углерода и энергии в присутствии до 9 % NaCl. Установлено, что данное сообщество состоит из двух галотолерантных штаммов-деструкторов нафталина рода Rhodococcus, а также галотолерантных бактерий родов Arthrobacter, Microbacterium и Thalassospira и умеренно галофильных бактерий семейства Halomonadaceae, не способных к деструкции нафталина (бактерии-спутники).

2. На основании филогенетической обособленности и отличий от представителей известных родов семейства Halomonadaceae по фенотипическим признакам описан новый род и вид Salinicola socius sp. nov., gen. nov.

3. В соответствии с данными анализа 16S рДНК и по ряду морфологических, физиолого-биохимических признаков предложен новый вид Rhodococcus naphthalenivorans sp. nov. Установлено, что штамм R. naphthalenivorans SMB37 растет на нафталине в присутствии до 7,5 % хлорида натрия.

4. Предложен новый вид Thalassospira permense sp. nov., представитель которого формирует стабильный филогенетический кластер вместе с Thalassospira lucentensis в семействе Rhodospirillaceae, но принципиально отличается от последнего составом жирных кислот, способностью восстанавливать нитраты, концентрациями хлорида натрия, при которых возможен рост.

5. В исследуемом консорциуме сформированы протокооперативные взаимоотношения между бактериями.

6. Установлено, что рост штаммов Salinicola socius SMB35, Halomonas sp. SMB31, Rhodococcus naphthalenivorans SMB37, Rhodococcus sp. SMB38 при высокой осмолярности среды сопровождается накоплением в клетках органических осмопротекторов – глутамата, эктоина и гидроксиэктоина.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Ананьина Л.Н., Алтынцева О.В. Почвенные микробные сообщества, способные утилизировать нафталин при высоких концентрациях хлорида натрия//Матер. II Регион. конф. молодых ученых «Современные проблемы экологии, микробиологии и иммунологии». – Пермь, 2002. – С. 32.

2. Ананьина Л.Н., Алтынцева О.В., Плотникова Е.Г. Почвенные галотолерантные бактерии-деструкторы нафталина//Матер. 6-ой Междунар.

Пущинской школы-конф. молодых ученых «Биология - наука ХХI века». – Пущино, 2002. – С. 4.

3. Ананьина Л.Н., Алтынцева О.В., Плотникова Е.Г. Сообщество микроорганизмов, выделенное из почвы, загрязненной отходами производства "Уралкалий"//Матер. 2-ой Междунар. конф. студентов, аспирантов и молодых ученых «Экология и научно-технический прогресс». – Пермь, 2003. – С. 287-290.

4. Ананьина Л.Н., Алтынцева О.В., Плотникова Е.Г. Галотолерантный штамм-деструктор нафталина Rhodococcus sp. Б3-8//Матер. 2-ой Регион. конф.

молодых ученых «Стратегия взаимодействия микроорганизмов с окружающей средой». – Саратов, 2004. – С. 35-36.

5. Плотникова Е.Г., Ананьина Л.Н., Алтынцева О.В. Природные микробные ассоциации – как основа для биоремедиации загрязненных почв//Матер. Междунар. конф. «Проблемы и перспективы реабилитации техногенных экосистем». – Астрахань, 2004. – С. 43-46.

6. Рыбкина Д.О., Ананьина Л.Н., Зубрицкий А.В., Плотникова Е.Г.

Экстрахромосомальная ДНК у бактерий-деструкторов ароматических соединений//Матер. 5-ой Междунар. многопрофильной конф. молодых ученых и студентов «Актуальные проблемы современной науки». – Самара, 2004. – С. 31-34.

7. Ананьина Л.Н., Алтынцева О.В., Плотникова Е.Г. Изучение сообщества микроорганизмов, выделенного из района солеразработок//Вестник Пермского государственного университета. Серия Биология. – 2005. – Вып. 6. – С. 109-114.

8. Ананьина Л.Н., Алтынцева О.В., Плотникова Е.Г. Моделирование микробных сообществ, осуществляющих деструкцию нафталина в присутствии высоких концентраций хлорида натрия//Матер. Междунар. конф. «Проблемы биодеструкции техногенных загрязнителей окружающей среды». – Саратов, 2005. - С. 7.

9. Ананьина Л.Н., Гавриш Е.Ю. Галофильные бактерии микробного сообщества, выделенного из почв района солеразработок//Матер. 9-й Пущинской школы-конф. молодых ученых «Биология - наука ХХI века». – Пущино, 2005. – С. 180.

10. Ананьина Л.Н., Гавриш Е.Ю., Евтушенко Л.И., Плотникова Е.Г.

Новый экстремальный галотолерантный грамотрицательный микроорганизм//Матер. II Междунар. конф. «Микробное разнообразие: состояние, стратегия сохранения, биологический потенциал». – Пермь-Казань-Пермь, 2005. - С. 9.

11. Ананьина Л.Н., Гавриш Е.Ю., Плотникова Е.Г. Грамотрицательные галофильные бактерии, выделенные из района солеразработок//Матер. Всерос.

молодежной школы-конф. «Актуальные аспекты современной микробиологии». – Москва, 2005. – С. 5.

12. Ананьина Л.Н., Алтынцева О.В. Осмопротекторы галофильных бактерий семейства Halomonadaceae//Матер. 10-й Пущинской школы-конф.

молодых ученых «Биология - наука ХХI века». – Пущино, 2006. – С. 179.

13. Ананьина Л.Н., Плотникова Е.Г. Изучение сообщества микроорганизмов, способного расти на нафталине в присутствии высоких концентраций NaCl, методом денатурирующего градиентного гельэлектрофореза//Матер. Междунар. школа-конф. «Генетика микроорганизмов и биотехнология». – Москва-Пущино, 2006. – C. 98.

14. Плотникова Е.Г., Рыбкина Д.О., Ананьина Л.Н., Ястребова О.В., Демаков В.А. Характеристика микроорганизмов, выделенных из техногенных почв Прикамья//Экология. – 2006. – № 4. – С. 1-9.

15. Ананьина Л.Н., Плотникова Е.Г., Гавриш Е.Ю., Демаков В.А., Евтушенко Л.И. Salinicola socius gen. nov., sp. nov. – новая умеренно галофильная бактерия из ассоциации микроорганизмов, утилизирующей нафталин//Микробиология. – 2007. – Т.76, № 3. – С. 369-376.

16. Ананьина Л.Н., Ястребова О.В., Плотникова Е.Г. Галофильные бактерии сем. Halomonadaceae//Матер. Междунар. конгресса «Биотехнология:

состояние и перспективы развития». – Москва, 2007. – С. 39.

–  –  –

НАФТАЛИНМЕТАБОЛИЗИРУЮЩИЙ КОНСОРЦИУМ

МИКРООРГАНИЗМОВ, ВЫДЕЛЕННЫЙ ИЗ ЗАСОЛЕННОЙ ПОЧВЫ

АВТОРЕФЕРАТ




Похожие работы:

«ПРОХОРОВ ВАДИМ ЕВГЕНЬЕВИЧ РЕДКИЕ ВИДЫ СОСУДИСТЫХ РАСТЕНИЙ ФЛОРЫ РЕСПУБЛИКИ ТАТАРСТАН: ЭКОЛОГО-ЛАНДШАФТНЫЕ ОСОБЕННОСТИ ХОРОЛОГИИ И ДИНАМИКИ 03.00.16 — экология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Казань — 2006 Работа выполнена на кафедре общей экологии государственного образовательного учреждения высшего профессионального образования Казанский государственный университет имени В. И. Ульянова-Ленина Научный руководитель: доктор...»

«Давидян Юлия Рубеновна “Детекция и мониторинг специфической реаранжировки генов иммуноглобулинов в процессе лечения острых лимфобластных лейкозов”. 14.00.29 Гематология и переливание крови АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Москва, 2007 Работа выполнена в Государственном учреждении Гематологический Научный центр Российской Академии Медицинских Наук Научный руководитель: доктор медицинских наук Е.Н. Паровичникова Официальные...»

«КАПУСКИН Егор Вадимович ОПТИМИЗАЦИЯ УСЛОВИЙ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ ВИРУСА ЧУМЫ МЕЛКИХ ЖВАЧНЫХ ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ ДИАГНОСТИЧЕСКИХ И ВАКЦИННЫХ ПРЕПАРАТОВ 16.00.03. «Ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология» АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук Владимир – 2008 Работа выполнена в Федеральном государственном учреждении «Федеральный центр охраны здоровья животных», г. Владимир. Научный...»

«ИВАНОВА ЕЛЕНА СЕРГЕЕВНА РАЗРАБОТКА ТЕХНОЛОГИИ СЛОЕНЫХ ИЗДЕЛИЙ НА ОСНОВЕ РЖАНОЙ МУКИ Специальность 05.18.07. – Биотехнология пищевых продуктов и биологических активных веществ АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата технических наук Санкт-Петербург Работа выполнена в ФГБОУ ВПО «Санкт-Петербургский национальный исследовательский университет информационных технологий, механики и оптики» (НИУ ИТМО) Научный руководитель: доктор технических наук Кузнецова Лина...»

«СЕЛИФОНОВА Жанна Павловна СТРУКТУРНО-ФУНКЦИОНАЛЬНАЯ ОРГАНИЗАЦИЯ ЭКОСИСТЕМ ЗАЛИВОВ И БУХТ ЧЕРНОГО И АЗОВСКОГО МОРЕЙ (РОССИЙСКИЙ СЕКТОР) Специальность 25.00.28 – Океанология Д 002.140.01 Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук Мурманск, 2016 -2Работа выполнена в ФГБУН Мурманском морском биологическом институте...»

«Курбонов Косим Муродович СОВРЕМЕННЫЕ ЭПИЗООТОЛОГО-ЭПИДЕМИОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ И НАДЗОР ЗА БРУЦЕЛЛЕЗОМ В РЕСПУБЛИКЕ ТАДЖИКИСТАН 14.02.02 – эпидемиология Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Москва – 2015 Работа выполнена в Таджикском научно-исследовательском институте профилактической медицины Министерства здравоохранения и социальной защиты населения Республики Таджикистан Научные руководители: Доктор медицинских наук, профессор...»

«МАКАРИКОВА Татьяна Анатольевна ЦЕСТОДЫ СЕМЕЙСТВА HYMENOLEPIDIDAE PERRIER, 1897 (CYCLOPHYLLIDEA) РУКОКРЫЛЫХ ВОСТОЧНОЙ АЗИИ 03.02.04 – зоология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Новосибирск – 2013 Работа выполнена в лаборатории паразитологии Федерального государственного бюджетного учреждения науки Института систематики и экологии животных СО РАН Научный руководитель: доктор биологических наук, профессор Гуляев Владимир Дмитриевич...»

«Панкина Илона Анатольевна Технология приготовления пищевого белкового полуфабриката из зерна люпина узколистного (L. angustifolius L.) и кулинарной продукции на его основе Специальность 05.18.15 Товароведение пищевых продуктов и технология продуктов общественного питания Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата технических наук Санкт-Петербург Диссертационная работа выполнена на кафедре технологии и организации питания ГОУ ВПО «Санкт-Петербургский...»

«ДЕМИДОВА Ирина Михайловна ПОВЫШЕНИЕ ЭФФЕКТИВНОСТИ ПРОИЗВОДСТВА МОЛОКА С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ СИЛОСА, ЗАГОТОВЛЕННОГО С НОВЫМ КОНСЕРВАНТОМ 06.02.10 – частная зоотехния, технология производства продуктов животноводства; 06.02.08 – кормопроизводство, кормление сельскохозяйственных животных и технология кормов АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата сельскохозяйственных наук Волгоград – 2015 Работа выполнена в ФГБНУ «Поволжский научно-исследовательский институт...»

«ОБУХОВА Мария Евгеньевна МОРФОФУНКЦИОНАЛЬНОЕ ОБОСНОВАНИЕ ФАКТОРОВ РИСКА ПОВРЕЖДЕНИЙ ПОЗВОНОЧНИКА У СОБАК 06.02.01 – диагностика болезней и терапия животных, патология, онкология и морфология животных Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Москва 2015 Работа выполнена в ФГБОУ ВПО «Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии имени К.И. Скрябина». Научный руководитель: Слесаренко Наталья Анатольевна доктор...»

«Миронов Андрей Викторович КОРРЕКЦИЯ АККОМОДАЦИОННЫХ НАРУШЕНИЙ У ПАЦИЕНТОВ ЗРИТЕЛЬНО-НАПРЯЖЕННОГО ТРУДА МЕТОДАМИ ФИЗИЧЕСКОГО ВОЗДЕЙСТВИЯ 14.01.07 – глазные болезни 14.03.11 восстановительная медицина, спортивная медицина, лечебная физкультура, курортология и физиотерапия Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Москва 2015 Работа выполнена на кафедре офтальмологии Федерального государственного бюджетного образовательного учреждения...»

«Никонова Алёна Александровна Определение полихлорированных бифенилов в природных и биологических объектах Байкальской природной территории с применением методов скоростной хроматографии и масс-спектрометрии Специальность 02.00.02 – аналитическая химия Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата химических наук Иркутск – 201 Работа выполнена в Учреждении Российской академии наук Лимнологического института Сибирского отделения РАН Научный руководитель:...»

«Ондар Елена Эрес-ооловна ГУМУС ПОЧВ ТУВЫ Специальность 03.00.27. – почвоведение Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Томск – 200 Работа выполнена в Институте почвоведения и агрохимии СО РАН Научный руководитель: доктор биологических наук, профессор М.И. Дергачева Официальные оппоненты: доктор биологических наук И.Н. Феденева кандидат биологических наук Е.В. Каллас Ведущая организация: Уральский государственный университет им. А.М....»

«ЧУСЬ РОМАН ВЛАДИМИРОВИЧ ТЕХНОЛОГИЧЕСКИЕ ПРИЕМ Ы ПОВЫШ ЕНИЯ ПРОДУКТИВНОСТИ СВИНОМАТОК И ПОРОСЯТ-СОСУНОВ 06.02.10 частная зоотехния, технология производства продуктов животноводства АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата сельскохозяйственных наук Курган 2015 Работа выполнена в федеральном государственном бюджетном образова­ тельном учреждении высшего профессионального образования «Кубанский государственный аграрный университет» Научный руководитель:...»

«Червоткина Татьяна Анатольевна ВИДОВОЕ РАЗНООБРАЗИЕ ХИРОНОМИД (DIPTERA, CHIRONOMIDAE) КАК ИНДИКАТОР СОСТОЯНИЯ ВОДОЕМОВ ГОРОДА КАЛИНИНГРАДА 03.02.08 – экология Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Калининград – 2012 Работа выполнена в ФГАОУ ВПО «Балтийский федеральный университет имени Иммануила Канта» Научный руководитель: кандидат биологических наук, доцент Винокурова Наталья Владимировна Официальные оппоненты: доктор биологических...»

«ДОРОНИН Максим Игоревич ЭКСПРЕСС-МЕТОДЫ ВЫЯВЛЕНИЯ ВИРУСА ИНФЕКЦИОННОГО НЕКРОЗА ГЕМОПОЭТИЧЕСКОЙ ТКАНИ ЛОСОСЕВЫХ РЫБ 03.02.02 «Вирусология» Aвтореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Владимир – 2015 Работа выполнена в федеральном государственном бюджетном учреждении «Федеральный центр охраны здоровья животных» (ФГБУ «ВНИИЗЖ»). доктор биологических наук Научный руководитель: Мудрак Наталья Станиславовна Грищенко Леонид Иванович – Официальные...»

«ЯИЦКАЯ Наталья Александровна ТЕРМОХАЛИННЫЙ РЕЖИМ КАСПИЙСКОГО МОРЯ ПРИ ИЗМЕНЕНИИ УРОВНЯ 25.00.28 – Океанология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата географических наук Мурманск Работа выполнена в отделе информационных технологий и математического моделирования Института аридных зон Южного научного центра РАН, г. Ростов-на-Дону и Мурманском морском биологическом институте Кольского научного центра РАН, г. Мурманск Научный руководитель: Бердников Сергей...»

«Хоцкин Никита Валерьевич Пространственная память и обучение у мышей, различающихся по предрасположенности к наследственной каталепсии: влияние нейротрофического фактора мозга BDNF Физиология – 03.03.01 АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: д.б.н., г.н.с. Куликов А.В. Новосибирск, 2015 Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном научном учреждении Федеральный исследовательский центр Институт...»

«СТЕПАНОВА СВЕТЛАНА КИМОВНА ГЕНЕТИЧЕСКАЯ ВАРИАБЕЛЬНОСТЬ ЛОКУСА МИОТОНИНПРОТЕИНКИНАЗЫ В ЯКУТСКОЙ ПОПУЛЯЦИИ 03.02.07 – генетика АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Томск 2015 Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном научном учреждении «Якутский научный центр комплексных медицинских проблем» и в Федеральном государственном бюджетном научном учреждении «Научноисследовательский институт медицинской генетики» (г.Томск)...»

«ТОПТЫГИНА АННА ПАВЛОВНА КОМПЛЕКСНАЯ ОЦЕНКА ПРОЦЕССОВ ФОРМИРОВАНИЯ И ПОДДЕРЖАНИЯ ИММУНОЛОГИЧЕСКОЙ ПАМЯТИ НА ПРИМЕРЕ ВАКЦИНАЦИИ ПРОТИВ КОРИ, КРАСНУХИ И ЭПИДЕМИЧЕСКОГО ПАРОТИТА. 14.03.09 – Клиническая иммунология, аллергология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук МОСКВА-2015 Работа выполнена в Федеральном бюджетном учреждении науки «Московский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. Г.Н. Габричевского»...»







 
2016 www.konf.x-pdf.ru - «Бесплатная электронная библиотека - Авторефераты, диссертации, конференции»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.