WWW.KONF.X-PDF.RU
БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА - Авторефераты, диссертации, конференции
 


Pages:     | 1 |   ...   | 2 | 3 || 5 |

«МОРФОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ ИНТРАМЕДУЛЛЯРНЫХ СТРОМАЛЬНЫХ СТРУКТУР ГЕМОПОЭТИЧЕСКОЙ НИШИ И ЭЛЕМЕНТОВ ЛИМФОИДНОЙ СТРОМЫ ПРИ ХРОНИЧЕСКОМ ЛИМФОЛЕЙКОЗЕ ...»

-- [ Страница 4 ] --

Контрольная группа пациентов сопоставима по полу, возрасту и национальности с основной группой. Контрольную группу составили 50 человек: трепанобиоптаты подвздошной кости были взяты у 30 здоровых лиц, биоптаты лимфатических узлов 20 человек с реактивными лимфаденопатиями послужили группой сравнения при изучении лимфоидной ткани.

Для гистологических исследований использовались парафиновые блоки. При изучении гистологических структур применялись стандартные окраски - гематоксилинэозин, азур-II-эозин, импрегнация серебром, по Массону. ИГХ анализ проводили с использованием панели первичных антител и полимерной системы визуализации Dako по протоколам окрашивания, рекомендованными производителем.

Морфометрическую оценку результатов выполняли на световом микроскопе Nikon Eclipse E200 со встроенной фотокамерой с помощью программного обеспечения анализа изображений «ВидеоТесТ-Морфология 5.2» с окуляром х10, при объективах х20, х40.

Анализ гистологических препаратов проводился в 20 полях зрения для каждого образца.

Статистическая обработка полученных данных проводилась методом вариационной статистики с определением средней величины М, ее средней ошибки m, стандартного отклонения SD. Достоверность различий оценивалась с помощью критерия Стьюдента (t), критерия Манна-Уитни. Различие между сравниваемыми показателями считалось статистически значимым при р 0,05. Для выяснения зависимости между показателями применялся корреляционный анализ. Математическую обработку результатов исследования проводили с использованием программ Statistica v.6.0, MedCalc, Microsoft Excel для Windows ХР.

В деятельном костном мозге строма является структурной основой гемопоэзиндуцирующего микроокружения, она обеспечивает механическую опору клеткам, регулирует развитие ГСК, интрамедуллярную и трансэндотелиальную миграцию стволовых и зрелых клеток крови. Представленный в работе морфофункциональный анализ паренхиматозно-стромальных взаимосвязей свидетельствует о том, что структурная организация стромальных элементов костного мозга направлена на поддержание динамического равновесия гемолимфопоэза и претерпевает значительные перестройки при ХЛЛ, свидетельствующие об их важной роли в патогенезе заболевания.

Известно, что распространенность опухолевого поражения костного мозга и характер инфильтрации кроветворной ткани опухолевыми клетками является значимым, так как эти факторы во многом определяют дальнейшее течение заболевания и его лечение. Полученные нами данные о типах инфильтрации костного мозга при ХЛЛ не противоречат этому утверждению. При анализе 96 трепанобиоптатов костного мозга нами выделено три типа инфильтрации костного мозга – нодулярный (n=18, 18,8%), интерстициальный и диффузный На основе (n=26, 27%) (n=52, 54,2%).

гистоморфологических и клинико-лабораторных данных пока нами было показано, что тип инфильтрации является одним из факторов для оценки прогноза течения заболевания.

При анализе стадий заболевания по Rai была показана тенденция усиления инфильтрации костного мозга при увеличении стадии, так практически у всех пациентов с 4 стадией заболевания (12 из 18) определена диффузная инфильтрация костного мозга, у 6 пациентов установлена интерстициальная инфильтрация, в то время как нодулярная не была отмечена ни у одного пациента. Напротив, при 1 стадии заболевания, у 15 пациентов отмечена нодулярная инфильтрация, у 7 интерстициальная, диффузная инфильтрация выявлена у 1 пациента.

Нами был проведен гистоморфометрический анализ нишеобразующих структур микроокружения костного мозга: сосудов МЦР, эндостальных клеток, белков экстрацеллюлярного и интратрабекулярного матрикса.

Сосуды МЦР определялись нами с использованием панели антител - специфичных маркеров клеток эндотелия - CD34 cl.II, CD31, фактор фон Виллебранда (vWF), характеризующих различную степень зрелости сосудов микроциркуляторного русла. ИГХ исследования показали тенденцию к увеличению количества сосудов при диффузной инфильтрации по сравнению с контрольной группой. Для дальнейших сравнений нами были выбраны средние значения удельной площади сосудов, полученные с антителами CD34. Этот маркер позволяет объективизировать оценку микрососудистого русла различной степени зрелости, включая популяцию незрелых эндотелиальных клеток.

При сравнении удельной площади сосудов (CD34 cl.II) между нодулярной и интерстициальной типами инфильтрации значения достоверно не отличались 12,3±2,5% и 13,1±1,2% соответственно (р 0,05), выделить пороговое значение для этих типов инфильтрации не удалось, но тенденция увеличения удельной площади сосудов прослеживалась при окраске со всеми антителами.

При морфометрическом анализе были показаны достоверные отличия между группой сравнения и пациентами с ХЛЛ – в контрольной группе площадь сосудов составила 9,1±1,2%, при нодулярной инфильтрации 12,3±2,5%, при интерстициальной 13,1±1,2%, при диффузной 17,9±3,7% (р 0,05). При этом во всех группах плотность сосудов была сильнее увеличена в субэндостальных зонах и зонах лимфоидной инфильтрации костного мозга.

Наличие или отсутствие соматических мутаций в экспрессии генов вариабельных участков тяжелых цепей иммуноглобулинов (IgVH) является серьезным прогностическим показателем при ХЛЛ. Отсутствие мутации связывают с быстрым прогрессированием заболевания, в то время как гипермутации являются благоприятными для прогноза заболевания. Исследования профиля экспрессии генов при ХЛЛ показали, что существует корреляция между экспрессией 70-kd дзета-ассоциированного белка (Zap70) и статусом гипермутаций, до 97% Zap70+ больных имеют немутантную конфигурацию гена IgVH, а 94% Zap70- больных имеют соматическую гипермутацию. Такая сильная корреляция экспрессии с мутационным статусом IgVH наблюдается только при ХЛЛ. Таким образом, Zap70 может служить суррогатным маркером прогноза для ХЛЛ [29, 161].

Наши данные показали зависимость экспрессии белка Zap70 и типа инфильтрации костного мозга. Во всех случаях диффузной инфильтрации костного мозга (52 случая) большинство лейкозных клеток были положительны (до 90%), в то время как при нодулярной инфильтрации экспрессии в подавляющем большинстве случаев (15 из 18) обнаружено не было, в 4 случаях экспрессия была выявлена в 40% клеток.

Интерстициальная инфильтрация (26 случаев) костного мозга отличалась переменной экспрессией Zap70 – в 9 случаях экспрессия до 40% клеток, в 12 случаях экспрессия до 60% клеток, в 5 случаях отсутствие экспрессии Zap70.

Мы проанализировали зависимость между площадью сосудов и экспрессией Zap70 и выявили уверенную корреляцию между этими показателями (R=0,7, р 0,05, N=96). В немногочисленных исследованиях по изучению площади сосудов в костном мозге при ХЛЛ получены противоречивые данные. Некоторые исследования продемонстрировали, что повышенное обилие сосудов является фактором плохого прогноза, ассоциировано с дальнейшей прогрессией и с химиоустойчивостью опухоли. Однако, не все исследователи определяют роль этого фактора в развитии заболевания, так есть работы, в которых не показано статистически значимое изменение площади сосудов, что может быть связано с недостаточной выборкой пациентов [167]. Следует подчеркнуть, что нами были определены площади сосудов с применением панели антител, а также с одновременным анализом экспрессии маркера прогноза Zap70 и были получены убедительные данные, говорящие о том, что площадь сосудов МЦР изменяется в зависимости от стадии инфильтрации костного мозга и может служить маркером прогноза в развитии ХЛЛ.

Эндостальная выстилка образована остеобластами, остеогенными клеткамипредшественниками (часто обозначаемыми как «клетки костной выстилки» — bone-lining cells) и остеокластами; при этом остеобласты рассматриваются как главный клеточный компонент эндоста, отвечающий за регуляцию ГСК [22, 106]. Анализ количества эндостальных клеток показал статистически значимые отличия между группой с диффузной инфильтрацией костного мозга и контролем - 2,3±0,4 клеток на единицу измерения и 1,4±0,2 клеток на единицу измерения соответственно (р 0,05). Достоверных отличий между контрольной группой (1,4±0,2) и группами с нодулярной (1,3±0,5) и интерстициальной (1,8±0,4) инфильтрацией получено не было (р 0,05).

Маркер CD146 (MCAM) первоначально был идентифицирован как онкомаркер меланомы, но последние работы показывают, что CD146 участвует в различных физиологических процессах, таких как сигнальная трансдукция, миграция клеток, дифференцировка мезенхимальных клеток и ангиогенез.

В основном CD146+ клетки в костном мозге - это субэндотелиальные клетки, которые принимают участие в регуляции ангиогенеза. В исследованиях было показано, что во многих органах определяется экспрессия CD146 на периваскулярных клетках, в основном на перицитах. CD146/MCAMпозитивные клетки являются важной составляющей ниши ГСК. Роль CD146+ стромальных элементов в том, что они экспрессируют CXCL12 и другие продукты экспрессии генов, причастных к регулированию ГСК. Показано, что CD146+ клетки поддерживают долгосрочное нахождение ГСК в нише через клеточные контакты, и, по крайней мере, частично посредством активации Notch-сигналинга [70]. В наших исследованиях количество клеток, в которых была обнаружена экспрессия CD146, было увеличено при диффузном типе поражения костного мозга по сравнению с контрольной группой (р 0,05). Экспрессия CD146 наблюдалась не только на клетках эндоста, но и в субэндостальных зонах.

Характерной чертой ХЛЛ является накопление в организме иммунологически дефектных долгоживущих лимфоцитов [1, 55]. В исследованиях in vitro было показано, что длительность жизни лейкозных клеток определяется адгезивными взаимодействиями с кроветворным микроокружением, в результате которых блокируется клеточный апоптоз.

Адгезия осуществляется посредством адгезивно-рецепторных молекул клеточных мембран и компонентов экстрацеллюлярного матрикса, участвующих в проведении внутриклеточных регуляторных сигналов, экспрессия которых регулируется цитокинами.

Изменение продукции цитокинов стромальными клетками через воздействие на рецепторный аппарат клеточных мембран, может приводить к нарушению механизма регуляции клеточного цикла, удлинению срока жизни лимфоцитов и их дифференцировки. При импрегнации серебром у больных ХЛЛ наблюдалось увеличение числа ретикулярных клеток в интрамедуллярных пространствах и развитие очагов фиброза, что также определяется в основном при диффузном типе поражения костного мозга. При гистологических и иммуногистохимических исследованиях отмечалась тенденция перераспределения коллагенов I, III, IV типов. Эти изменения могут быть причиной нарушения секреции и соотношения гуморальных факторов регуляции гемолимфопоэза и, как следствие, приводить к нарушению пролиферации и дифференцировки стволовых клеток.

Коллагены важные структурные белки экстрацеллюлярного матрикса.

– Содержание коллагена в костном мозге определяется его контролируемой продукцией и деградацией популяциями коллаген-продуцирующих клеток, таких как фибробласты и эндотелиальные клетки. Фибробласты продуцируют коллаген I и III типов, в то время как эндотелиальные клетки продуцируют коллаген IV типа. Между этими клетками есть различие и в топографической ориентации, так фибробласты окружают костномозговые синусы и чередуются с гемопоэтическими клетками в костномозговой паренхиме, эндотелиальные клетки образуют стенки сосудов МЦР. Накопление коллагена в костном мозге может быть обусловлено усилением синтеза, нарушением деградации коллагена или обоими механизмами вместе. В то же время усиление синтеза коллагена может быть связано не только с повышенным уровнем его продукции клетками, но и с увеличением количества этих клеток [106, 121, 147]. Нами были отмечены изменения в распределении коллагенов разных типов по мере нарастания фиброзных изменений, так была показана тенденция увеличения количества коллагена I и III типов, в то время как коллаген IV типа и ламинин практически не определялись, сосуды имели прерывистую базальную мембрану. Коллаген I типа в костном мозге во всех случаях отмечается в трабекулах и стромальных клетках рядом с ними. Коллаген III типа определяется в зонах эндоста, рядом с мегакариоцитами.

Представленные результаты изучения состояния стромы костного мозга больных ХЛЛ свидетельствуют о реакции стромального микроокружения на появление опухолевых клеток в интрамедуллярных пространствах губчатого вещества кости. Как мы отмечали ранее, именно в костной ткани присутствует специализированная популяция стромальных остеогенных клеток, формирующих нишу для предшественниц гемолимфопоэза.

Указанная категория клеток определяет, в частности, развитие стволовых клеток в направлении В-лимфопоэза. Ключевыми структурными компонентами, формирующими нишу, являются эндостальные стромальные клетки губчатого вещества кости, которые совместно с нарабатываемыми ими гуморальными регуляторными факторами и экстрацеллюлярным матриксом при участии микрососудов обеспечивают реализацию генетической программы пролиферации и дифференцировки стволовых клеток, включая лимфоидные предшественники, из которых может возникнуть пул неопластических клеток при ХЛЛ [133, 137, 174]. Как следует из наших исследований, отчетливые изменения регистрировались именно в эндостальных зонах, где происходит перестройка соотношения эндостальных клеток и системы микроциркуляции. Это обстоятельство может служить весомым аргументом, указывающим на возможность перестройки функционального потенциала гемопоэтической ниши. На сегодняшний день твердо установлено значение дефектов ниши в расстройствах гемолимфопоэза, вплоть до непосредственного участия стромальных элементов формирующих нишу в появлении лейкозного клона [3, 13, 65, 159]. На наш взгляд вероятность важной, если не ключевой, роли в патогенезе ХЛЛ дефектов стромального микроокружения очень высока. Прежде всего, это может быть связано с тем, что дефекты ниши могут приводить к нарушению сигнальных путей запуска генетически детерминированной программы пролиферации и дифференцировки нормальных гемопоэтических предшественников, включая клеткипредшественницы В-лимфопоэза. В условиях дисбаланса сигнальных путей вероятность появления неопластического клона крайне высока, а функция ниши может перейти на поддержание трансформированных клеток.

Таким образом, отмеченные морфологические особенности стромы костного мозга больных ХЛЛ могут быть обусловлены как первичным поражением кроветворного микроокружения, так и цитокиновым дисбалансом в результате воздействия на строму лейкозного клона. Полученные нами результаты относительно дефектов стромы при разных типах инфильтрации могут свидетельствовать как о биологической гетерогенности заболевания, так и о постепенном развитии опухолевого процесса. Взаимоотношения строма – паренхима в системе гемолимфопоэза является базисным для развития и созревания миелоидных и лимфоидных клеток в норме и на основании полученных нами данных можно говорить о роли дефектов стромальных нишеобразующих структур в прогрессии ХЛЛ.

Другая часть наших исследований была посвящена оценке стромальнопаренхиматозных особенностей лимфатических узлов при ХЛЛ. По данным литературы такой анализ не проводился. Настоящее исследование было направлено на анализ нишеобразующих элементов стромы – дендритных клеток и сосудов МЦР.

В функциональном отношении клетки лимфоидной системы могут быть разделены на три типа: стволовые кроветворные клетки, клетки-предшественники первичных лимфоидных органов, клетки вторичных лимфоидных органов. По типу клеточного обновления лимфоидная ткань занимает одно из первых мест. Развитие лимфоидных клеток не прекращается всю жизнь - это необходимо для “подстройки” иммунитета к постоянно изменяющейся иммунологической ситуации. Основная функция лимфоузлов состоит в обеспечении взаимодействия антигена, который поступает туда по афферентным лимфатическим сосудам, с Т- и В-лимфоцитами, мигрирующими из крови [2, 5].

Ультраструктурные исследования стромы лимфоузлов показали, что число микрососудов в лимфоузлах пациентов с лимфаденопатиями было обычно низким и значительно возрастало при В-клеточных НХЛ. При опухолях промежуточной степени злокачественности зарегистрировано значительное повышение количества микрососудов, а самое высокое количество наблюдалось при лимфомах высокой степени злокачественности [53]. Эти данные подтверждают мнение, что ангиогенез повышается с ростом злокачественности, и подчеркивают его роль как эпигеномного фактора при Вклеточном прогрессировании.

Формирование сосудов в опухолях происходит на фоне изменений экстрацеллюлярного матрикса. Это приводит к развитию неполноценных сосудов преимущественно капиллярного типа, имеющих нередко прерывистую базальную мембрану и нарушенную эндотелиальную выстилку. Эндотелий может замещаться опухолевыми клетками, а иногда и вовсе отсутствовать. В лимфатических узлах при ХЛЛ нами показано увеличение количества мелких сосудов на фоне сниженной экспрессии белков внеклеточного матрикса – коллагена IV типа, ламинина и десмина.

Для многих опухолей показана связь плотности микрососудов с прогрессией заболевания. Недавно была установлена зависимость показателей выживаемости при ХЛЛ от сывороточного уровня факторов ангиогенеза – фактора роста эндотелия сосудов VEGF и роста фибробластов bFGF [1]. Одной из причин повышенного интереса к механизмам ангиогенеза явилось наличие некоторых нарушений данного процесса в отличие от нормального физиологического ангиогенеза. Особенности строения кровеносных сосудов на разных стадиях их формирования определяются уровнем экспрессии и характером взаимодействия различных ангиогенных факторов. В результате реализации аутокринных и паракринных механизмов регуляции уровня ангиогенных факторов, секретируемых эндотелиальными клетками и клетками экстрацеллюлярного матрикса, происходит формирование «локальных очагов васкуляризации», в которых происходит активное прорастание ткани кровеносными капиллярами, как в норме, так и при патологии.

В качестве регуляторов ангиогенеза могут выступать белковые соединения, продуцируемые различными клетками — лимфоцитами, макрофагами, тучными, эндотелиальными клетками, опухолевыми и др. Известно, что ангиогенез в опухоли происходит в условиях нарушенных межклеточных и паренхиматозно-стромальных взаимоотношений. Наряду с факторами роста в процессе ангиогенеза имеет большое значение состав экстрацеллюлярного матрикса стромы опухоли [6].

Белки экстрацеллюлярного матрикса, такие как коллагены I, III, IV типа, ламинин, десмин практически не определяются при ХЛЛ, в то время как экспрессия их в контрольной группе выявляется рядом с сосудистым компонентом, в воротах лимфатических узлов, под капсулой и в Т-зависимой зоне.

Морфометрический анализ сосудов показал статистически достоверное увеличение площади сосудов при ХЛЛ 12,8±0,3% по сравнению с контролем 6,5±0,5% (р 0,05).

Ключевая роль развития лимфоидных предшественников в лимфатических узлах принадлежит дендритным ретикулярным клеткам. Исследования последних лет показали изменения количества дендритных ретикулярных клеток в зависимости от гистологического варианта лимфом. Так, лимфомы фолликулярного типа сопровождаются увеличением количества ретикулярных клеток, в то время как при диффузных лимфомах отмечено уменьшение их числа и значительные деструктивные изменения. Данные о вовлечении в патологический процесс дендритных ретикулярных клеток при НХЛ были подтверждены при иммуногистохимических и экспериментальных исследованиях [2, 7].

Работы, посвященные изучению дендритных клеток при некоторых формах опухолей, показали, что количество и иммунофенотип ДК, их распределение в опухолевой и непораженной ткани отражаются на прогнозе этих новообразований [8, 120].

Нами показана дезинтеграция сети ФДК лимфоузлов. ИГХ исследования с панелью антител показали интересные данные, так не была отмечена выраженная экспрессия маркера дендритных клеток FDС CNA.42, антигены CD23 и CD21 выявлялись на опухолевых клетках, маркер CD35 также определялся в небольшом количестве наблюдений и в небольшом процентном соотношении, фасцин, маркирующий интердигитальные и фолликулярные дендритные клетки, присутствовал в уменьшенном объеме по сравнению с контролем. Эти данные свидетельствуют о дезинтеграции сети ФДК в лимфатических узлах, косвенно говорят о сокращении их количества под действием опухолевого клона и, вероятно, судя по отсутствию экспрессии ряда маркеров, о смене их фенотипа.

Исследования ФДК показали гетерогенность их клеточной популяции, так ФДК из светлой зоны герминативного центра и темной зоны имеют разные поверхностные маркеры, так экспрессия DRC-1 и CD23 характерна для клеток из светлой зоны вторичного фолликула. ФДК считаются наиболее важным фактором, определяющим состав лимфоидной популяции и влияющим на регулирование функциональной активности лимфоидных клеток. Они могут создавать не только противоопухолевые, но и проопухолевые стимулы. Дендритные клетки совместно с TGF способствуют дифференцировке предшественников FoxP3-клеток в зрелые CD4+ FoxP3клетки. С другой стороны, они не только презентируют опухолевые антигены натуральным киллерам и цитотоксическим клеткам, которые обеспечивают противоопухолевый иммунитет, но и принимают непосредственное участие в элиминации опухолевых клеток [74, 120].

Напомним, что ХЛЛ характеризуется накоплением CD5+ долгоживущих клеток, устойчивых к апоптозу [58, 109]. Несмотря на их долгую жизнь in vivo, ХЛЛ клетки часто уходят в апоптоз в условиях in vitro - клетки не получают сигналов выживания, которые присутствуют в микроокружении in vivo. Сокращение числа ФДК в лимфатических узлах больных ХЛЛ и изменения в их фенотипе, что показано в наших исследованиях, может являться благоприятным фактором для выживания и прогрессии лейкозного клона.

Возможно, опухолевые клетки создают условия для подавления системы фолликулярных дендритных клеток на цитокиновом уровне.

С другой стороны при некоторых вариантах лимфом показано увеличение количества дендритных клетки, как в опухолевых инфильтратах, так и в непораженных участках лимфатических узлов. Исследователи предполагают, что дендритные клетки совместно с другими компонентами стромы лимфатических узлов могут изменять свою морфологию и выполняемые функции и обеспечивать поддержание лейкозного клона, создавать условия для пролиферации и быстрого роста опухолевой массы [109]. Вполне допустима мысль, что сокращения количества ФДК на самом деле не происходит, однако поверхностный аппарат клеток изменяется и они приобретают мутантный фенотип.

Биологическое значение этого факта еще предстоит выяснить, но уже сейчас очевидна вовлеченность дендритных клеток в генез неопластической трансформации лимфоидных предшественников и их роль в поддержание лейкозного клона.

Обсуждая результаты сочетанного анализа, стоит отметить, что сохраняется общая тенденция, которая была обнаружена при изучении отдельных вариантов поражения костного мозга. При усилении опухолевой инфильтрации в паренхиме подвздошной кости больных ХЛЛ также происходят изменения нишеобразующих структур – увеличение количества сосудов МЦР, количества клеток на эндосте, одновременно замечены более сильные поражения лимфатических узлов, в которых также отмечается усиление сосудистого рисунка и сокращение сети ФДК. Нами были обнаружены единичные случаи, которые не вписываются в эту концепцию – так при интерстициальном и диффузном поражении костного мозга изменения в лимфатических узлах были не так ярко выражены в 6 случаях. Мы предполагаем, что это может быть связано с тем, что пациенту был диагностирован ХЛЛ в самом начале патологического процесса, и повреждения нишеобразующих структур еще не успели генерализоваться. В большинстве случаев по степени поражения костного мозга можно предполагать более сильные повреждения в лимфатических узлах, и наоборот.

Таким образом, выяснение характера воздействия стромы на гемопоэз остается актуальной задачей для гематологии. Для решения проблемы регуляторных воздействий целесообразно использование морфологических методов, включая ИГХ, так как факты, полученные с применением морфологических методов при изучении костного мозга и лимфоидной ткани в норме и при нарушениях кроветворения, способствуют дальнейшей конкретизации роли отдельных компонентов кроветворной и лимфоидной стромы в нормальном и малигнизированном гемолимфопоэзе. Злокачественная трансформация ГСК достигается при наличии нескольких условий, так на сегодняшний день основными принято считать следующие – генетические изменения в клетке, невозможность уйти в апоптоз, а также благоприятное микроокружение для развития и прогрессии опухолевого клона.

Имеется большое количество фактов о различных нарушениях при малигнизации ГСК и их коммитированных в различных направлениях потомков. Они включают в себя молекулярно-генетические и клеточные механизмы. Давно изучается роль экспрессии онкогенов, гуморальных ингибиторов и стимуляторов пролиферации, цитокинов, факторов апоптоза и ангиогенеза, дисфункции иммунной системы и другие процессы, но только в последние годы стали проводиться исследования о роли гемопоэтической ниши в злокачественной трансформации ГСК [106, 133, 149, 158, 163].

Полученные нами результаты подтверждают существующее положение о роли дефектов ниши в злокачественной трансформации ГСК и освещают некоторые особенности патогенеза ХЛЛ, в частности дают представление о морфофункциональных перестройках стромальных нишеобразующих элементов костного мозга и лимфатических узлов, имеющих существенное значение в процессе малигнизации лимфоидных клетокпредшественниц при этом заболевании.

Как известно, в постнатальном периоде формирующая гемопоэтическую нишу эндостальная зона является основным местом локализации стволовых кроветворных клеток. Здесь же определяется их дифференцировка в лимфоидном направлении, продвижение от эндоста в экстравазальных пространствах к синусоидам и далее в лимфоидную ткань Регуляторный эффект стромальной ниши [106, 144, 175].

осуществляется путем прямых контактов стромальных клеток с кроветворными предшественниками, а также посредством нарабатываемых стромой гуморальных факторов стимуляции и ингибирования процессов пролиферации и дифференцировки ГСК. Контроль над формированием рецепторного аппарата лимфоцитов и их спецификации в основном лежит на клетках стромального микроокружения костного мозга и тех лимфоидных органов и тканей, куда попадают лимфоциты. Любые нарушения клеток микроокружения могут приводить к аберрациям функционального статуса лимфоидных клеток, в частности их рецепторного аппарата. In vitro было показано, что развитие В-лимфоцитов в условиях нормального лимфопоэза определяется их адгезивным взаимодействием со стромой [151]. У больных ХЛЛ эти взаимодействия нарушены из-за неполноценности адгезивных молекул и нарушения продукции стромой гуморальных факторов, определяющих продолжительность жизни лимфоцитов при ХЛЛ. Изменения структурной организации и функции клеток кроветворного микроокружения могут стать одной из причин нарушения механизмов регуляции нормального В-лимфопоэза, приводящих к развитию заболевания.

В-лимфопоэз не ограничивается только костным мозгом, в нем происходит дифференцировка В-лимфоцита, результатом которой является «вертикальная»

образование В-лимфоцита. Дальнейшее созревание В-лимфоцитов «наивного»

происходит в лимфатических узлах, во вторичном зародышевом фолликуле под воздействием антигена, который является для В-лимфоцитов основным фактором роста и дифференцировки. Здесь огромное значение играет состояние микроокружения, основными составляющими являются дендритные клетки, ретикулярные клетки, экстрацеллюлярный матрикс и нарабатываемые стромой цитокины. Если «наивный»

лимфоцит попадает в измененное микроокружение, то вероятность развития опухоли и дисбаланса пролиферации/апоптоза увеличивается многократно.

В настоящее время общепризнанной является точка зрения, что в основе развития злокачественной ткани лежит дефект стволовой клетки [4]. Так, относительно лейкозного процесса принято считать, что лейкемизация возникает из одной клетки, весь процесс поддерживается небольшим числом лейкозных стволовых клеток. При этом обсуждаются два основных пути становления лейкозного процесса. Первый – стохастический – характеризуется наличием опухолевой массы, состоящей из гетерогенной популяции незрелых опухолевых клеток, небольшая часть которых способна к самоподдержанию и дифференцировке, при этом выбор происходит случайно.

Иерархическая гипотеза подразумевает существование опухолевой популяции, в которой незначительная часть клеток поддерживает заболевание. Предполагается, что стволовые клетки, детерминированные к миелоидной дифференцировке, могут изменяться таким образом, что начинают использовать гены, уже не экспрессирующиеся на этой стадии дифференцировки, то есть гены стволовых клеток. Кроме указанных существует гипотеза, согласно которой опухоль может появиться первоначально не из стволовой кроветворной клетки, а из коммитированных клеток, претерпевших генетические трансформации, в результате чего приобрели свойства стволовых и способны к самоподдержанию.

Наконец высказывается предположение, что трансформация стволовой клетки происходит в эмбриональном периоде, она сохраняется после рождения и по мере истощения пула стволовых клеток и наступления времени выхода ее в пролиферацию и дифференцировку происходит появление лейкозного клона.

Обобщая современные сведения и учитывая собственные данные о состоянии стромы костного мозга при малигнизированном гемопоэзе, считаем возможным дополнить существующие гипотезы лейкозогенеза собственным представлением об этом процессе, а именно, роли в его становлении дефектов стромальной ниши стволовых клеток (рис. 27).

Наши данные о состоянии эндоста при малигнизированном кроветворении свидетельствуют о резко выраженных изменениях структур, формирующих нишу стволовой клетки. Вне зависимости от характера их генеза – вторичного или первичного, они в любом случае приводят к нарушениям развития стволовой клетки. Так в первом случае возникший и развивающийся лейкозный клон кроветворных клеток способен привести первоначально к функциональным, а затем структурным изменениям стромального микроокружения, формирующего гемопоэтическую нишу. Основным итогом этого является нарушение регуляции нормального гемопоэза, что создает благоприятные условия для прогрессии лейкоза. Наряду с этим, возможен второй путь, при котором происходит первичное поражение стромальных элементов кроветворной ниши. Это приводит к извращению генетической программы нормальной пролиферации и дифференцировки стволовых клеток гемолимфопоэза, результатом чего является становление дисмиелопоэза с последующим появлением лейкозного клона. Например, одним из пусковых механизмов подобного процесса может быть вирусное поражение стромальных элементов, что подтверждается проведенными ранее исследованиями, в которых нами были выявлены в клетках стромы внутриядерные включения вирусной природы и доказанной способности вирусов персистировать в стромальных клетках костного мозга. Считаем, что наша гипотеза может быть проверена в будущем и принципиально не должна отвергаться.

Деструкция стромальной архитектоники нишеформирующих структур костного мозга и лимфатических узлов может являться ключевым фактором становления и развития ХЛЛ. В условиях малигнизации миелоидных и лимфоидных предшественников характер перестроек нишеобразующих структур костного мозга и лимфоидной ткани имеет важное значение для установления причин развития системных заболеваний крови, определении тактики лечения, оценке его эффективности и прогнозировании возможных путей развития системных заболеваний кроветворной и лимфоидной ткани.

В заключение необходимо отметить, что изучение роли ниши в нормальном и малигнизированном гемолимфопоэзе только начинает разрабатываться. Эта проблема волнует умы многих ученых и объем накопленных разрозненных данных о роли микроокружения достиг того предела, когда приходит осознание, что в кроветворной ткани взаимодействие строма-паренхима имеет основополагающее значение для развития ГСК. В решении этой проблемы сочетанный морфологический, иммуноморфологический, молекулярно-генетический анализ нишеобразующих структур стромального микроокружения необходим для обнаружения причинно-следственных связей, определяющих развитие и прогрессию многих заболеваний системы крови, а также для поиска новых мишеней терапии этих заболеваний.

Рисунок 27. Концепция роли дефектов нишеобразующих элементов кроветворной и лимфоидной стромы в малигнизированном миелолимфопоэзе.

ВЫВОДЫ

1. У больных хроническим лимфолейкозом, независимо от характера инфильтрации лимфоцитами паренхимы костного мозга – нодулярного, интерстициального или диффузного, наблюдаются морфофункциональные изменения структур стромального микроокружения, формирующих нишу гемопоэтических стволовых клеток.

2. Характерной особенностью развития ХЛЛ является достоверное увеличение количества эндостальных стромальных клеток интрамедуллярных пространств, включая CD146+ клетки, (р 0,05) и перестройки структурной организации клеточных и внеклеточных элементов стромы поверхности костных трабекул, являющихся анатомическими зонами локализации и длительного самоподдержания стволовых клеток.

3. При опухолевой лимфоидной инфильтрации в костном мозге больных ХЛЛ выявлено достоверное усиление плотности микрососудов костных лакун подвздошной кости, включая эндостальные участки, при этом наиболее выраженные изменения отмечались при диффузном поражении кроветворной ткани (в 2 раза).

4. Установлена корреляция между прогностическим фактором - экспрессией молекулы Zap70 на опухолевых клетках и плотностью микрососудов на материале трепанобиоптатов больных ХЛЛ (R=0,7, р 0,05), что свидетельствует о неблагоприятном типе течения заболевания при увеличении плотности сосудов в паренхиме костного мозга.

5. В лимфатических узлах больных ХЛЛ обнаруживаются нарушения структурной организации паренхиматозной и стромальной ткани, наблюдаются качественные и количественные изменения ключевых элементов лимфоидной стромы, участвующих в поддержании лимфопоэза, а также перестройка экстрацеллюлярного матрикса.

6. Характерными особенностями опухолевой инфильтрации лимфатических узлов при ХЛЛ является дезинтеграция сети фолликулярных дендритных клеток, изменение их фенотипа и снижение количества в 3 раза (р 0,05), увеличение плотности микрососудов в 2 раза (р 0,05) и изменение экстрацеллюлярного матрикса лимфоидной ткани (распределение коллагенов III, IV типов, десмина, ламинина).

Установленные качественные и количественные изменения стромальных 7.

нишеобразующих структур костного мозга и лимфатических узлов указывают на вовлечение кроветворной и лимфоидной ниш в генез неопластической трансформации лимфоидных предшественников у больных ХЛЛ и свидетельствуют о перестройке функций микроокружения, направленных на поддержание лейкозного клона при этом заболевании.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. При установлении диагноза ХЛЛ рекомендован анализ состояния кроветворной ткани больных ХЛЛ на материале трепанобиопсий подвздошной кости. Необходимо оценивать характер лимфоидной инфильтрации (нодулярный, интерстициальный, диффузный) и пролиферативный потенциал опухолевых клеток.

2. Наряду с выделением типов опухолевой инфильтрации необходимо изучение гистоморфологических особенностей нишеобразующих структур костного мозга, таких как плотность сосудов микроциркуляторного русла, количество клеток на эндосте и их фенотип, распределение коллагенов I, III, IV типа. Помимо стандартных гистологических окрасок для более точного анализа этих структур целесообразно проводить иммуногистохимическое исследование с антителами CD34 cl.II, CD146, collagen I, collagen III, collagen IV.

3. При изучении биоптатов лимфатических узлов у больных ХЛЛ для дифференциальной диагностики следует проводить иммуногистохимические исследования как для установления фенотипа опухолевых клеток (CD3, CD5, CD10, CD20, CD23, CD79, Cyclin D1, Bcl2, Bcl6, kiтак и для характеристики состояния фолликулярных дендритных клеток (CD35, Anti-fascin, Anti-FDC CNA.42), ангиогенеза (CD31, CD34 cl.II) и измерения уровня экспрессии белка Zap70.

4. Сочетанный гистоморфологический анализ стромальных структур кроветворной и лимфоидной ниш может быть использован в практической работе в целях уточнения прогноза течения заболевания и для оценки эффективности проводимой терапии при повторных исследованиях костного мозга и лимфатических узлов в динамике заболевания.

–  –  –

BMP 2, 4, 6 – костные морфогенетические белки 2, 4, 6 MHC I (II) – молекула гистосовместимости I (II) класса SNO-клетки – N-кадгерин+ остеобласты TBLA – трабекулярная костная область ГИМ – гемопоэзиндуцирующее микроокружение ГСК – гемопоэтическая стволовая клетки ДК – дендритная клетка ИГХ – иммуногистохимия ИЛ 4, 6, 8 – интерлейкины 4, 6, 8 КМ – костный мозг ЛСК – лейкозная стволовая клетка мДК – миелоидная дендритная клетка МДС – миелодиспластический синдром ММСК – мультипотентная мезенхимальная стволовая клетка МПС – миелопролиферативный синдром МСК – мезенхмимальная стромальная клетка МЦР – микроциркуляторное русло НХЛ – неходжкинская лимфома ОМЛ – острый миелоидный лейкоз ФДК – фолликулярная дендритная клетка ХЛЛ – хронический лимфолейкоз ХМЛ – хронический миелоидный лейкоз

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Бакиров, Б.А. Клинико-патогенетическая характеристика и факторы прогноза в развитии и течении хронического лимфолейкоза: автореферат дис. … д-ра.мед.наук: 14.01.21 / Бакиров Булат Ахатович. – СПб., 2013. – 46 с.

2. Белянин, В.Л., Цыплаков Д.Э. Диагностика реактивных гиперплазий лимфатических узлов / В.Л. Белянин, Д.Э. Цыплаков. – СПб-Казань, 1999. – 328 с.

3. Бессмельцев, С.С. Множественная миелома клиника, диагностика, (патогенез, дифференциальный диагноз). Часть 1 / С.С. Бессмельцев // Клин. Онкогематол. – 2013. — Т.6, N3. — С. 237-58.

4. Дризе, Н.И. Различия между лейкозными и нормальными кроветворными стволовыми клетками / Н.И. Дризе // Онкогематология. – 2006. – Т. 1, №2. – С. 5-9.

5. Киселева, М.В. Морфо-функциональное состояние стромы лимфатических узлов при некоторых лимфопролиферативных заболеваниях: дис. … канд. мед. наук: 14.00.29 / Киселева Мария Витальевна. – СПб., 2001. – 128 с.

6. Коган, Е.А. Автономный рост и прогрессия опухолей / Е.А. Коган // Российский журнал гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии. – 2002. – Т.12, №4. – С. 45-49.

7. Криволапов, Ю.А. Морфологическая диагностика лимфом / Ю.А. Криволапов, Е.Е.

Леенман. – СПб.: Коста., 2006. – С. 45-48.

8. Леенман, Е.Е. Место дендритных клеток в микроокружении при лимфоме Ходжкина /М.С.

Мухина, К.М. Пожарисский, Е.Е. Леенман и др. // Архив патологии. – 2010. – №2. – С. 3-7.

9. Лелявский, А.А. Ниша гемопоэтических стволовых клеток invivo: «увидеть своими глазами»

/ А.А. Лелявский // КТТИ. – 2009. – №1. – С. 32-38.

10. Пальцев, М.А. Что есть стволовая клетка / В кн.: Биология стволовых клеток и клеточные технологии. Том 1. Под ред. М.А. Пальцева. — М.: ОАО «Изд. «Медицина», изд. «Шико». – 2009. – С. 13-31.

11. Райт, Д. Морфологическая диагностика патологии лимфатических узлов / Д. Райт, Б. Эддис, Э. Леонг. – М.: Мед.лит., 2008. – С. 42-86.

12. Ругаль, В.И. Морфофункциональная характеристика стромы костного мозга в норме и при остром миелобластном лейкозе: дис. … д-ра. мед. наук: 14.01.21 / Ругаль Виктор Иванович. – Ленинград, 1989. – 297 с.

13. Ругаль, В.И. Структурные особенности паренхимы и стромы костного мозга больных множественной миеломой / В.И. Ругаль, С.С. Бессмельцев, Н.Ю. Семенова и др. // Биомед.

журн. Medline.Ru. – 2012. - Т.13. – С. 515-23.

14. Ругаль, В.И. Особенности нишеобразующих структур и стромы костного мозга больных хроническим лимфоцитарным лейкозом / В.И. Ругаль, С.С. Бессмельцев, Н.Ю. Семенова и др. // Биомедицинский журнал Medline.Ru. – 2013. – Т.14. – С. 347-361.

15. Ругаль, В.И. Морфология синусоидальных сосудов гемопоэтической ниши костного мозга / В кн.: Актуальные вопросы медицинских морфологических дисциплин. Коллективная монография под ред. В.П. Волкова. - Новосибирск: Изд. «СибАК». – 2014. – С. 62-80.

16. Ругаль, В.И. Состояние интрамедулярной стромы больных неходжкинскими лимфомами с поражением костного мозга / В.И. Ругаль, Н.Ю. Семенова, С.С. Бессмельцев // Вестник гематологии. – 2011. - Т. VII, №2. – С. 36-37.

17. Ругаль, В.И. Нишеобразующие структуры стромы костного мозга и лимфатических узлов при хроническом лимфолейкозе / В.И. Ругаль, Н.Ю. Семенова, С.В. Волошин, С.С. Бессмельцев // Гены и клетки. – 2014. - Т. IХ, №2. – С. 30-134

18. Свирновский, А. И. Хронический лимфоцитарный лейкоз: парадигмы и парадоксы / А.И.

Свирновский // Медицинские новости. – 2008. – №13. – С. 7-19.

19. Семенова, Н.Ю. Нишеобразующие элементы стромы костного мозга и лимфатических узлов при ХЛЛ / Н.Ю. Семенова, С.С. Бессмельцев, В.И. Ругаль // Гематология и трансфузиология. – 2014. – Т. 59, №1(1). – С. 62-63.

20. Стругов, В.В. Моделирование микроокружения клеток хронического лимфолейкоза в лимфатических узлах / В.В. Стругов, С.В. Жук, Р.Ш. Бадаев, П.А. Бутылин, А.Н. Зарицкий // Трансляционная медицина. – 2013. – Т. 23, №6. – С. 88-102.

21. Фриденштейн, А.Я. Клеточные основы кроветворного микроокружения А.Я.

/ Фриденштейн, Е.А. Лурия. – М.: Медицина, 1980. – 215 с.

22. Чертков, И.Л. Стволовая кроветворная клетка и ее микроокружение / И.Л. Чертков, О.А.

Гуревич. - М., 1984. – 238 с.

23. Шерстнева, Е.С. Клиническое значение внутриклеточного ИЛ-8 у больных В-клеточным хроническим лимфолейкозом / Е.С. Шерстнева, Н.В. Исаева, Т.П. Загоскина и др. // Вестник гематологии. – 2007. – Т. 3, №2. - С. 49-50.

24. Adams, G.B. Stem cell engraftment at the endosteal niche is specified by the calcium-sensing receptor / G.B. Adams, K.T. Chabner, I.R. Alley et al. // Nature 2006. – N. 439. – Р. 599–603.

25. Adams,G.B. Therapeutic targeting of a stem cell niche / G.B. Adams, R.P. Martin, I.R. Alley et al.

// Nat. Biotechnol. – 2007. – N. 25. – Р. 238–43.

26. Afan, A.M. Bone marrow innervation regulates cellular retention in the murine haemopoietic system / A.M. Afan, C.S. Broome, S.E. Nicholls et al. // Br. J. Haematol. – 1997. – N. 98. – Р. 569– 77.

27. Albesiano, E. Activation-induced cytidine deaminase in chronic lymphocytic leukemia B cells:

expression as multiple forms in a dynamic, variably sized fraction of the clone / E. Albesiano, B.T.

Messmer, R.N. Damle et al. // Blood. – 2003. – Vol. 102(9). – P. 3333 – 3339.

28. Ame-Thomas, P. Human mesenchymal stem cells isolated from bone marrow and lymphoid organs support tumor B-cell growth: role of stromal cells in follicular lymphoma pathogenesis / P. AmeThomas, H. Maby-El Hajjami, C. Movoisin et al. // Blood.–2007.–Vol. 109(2).–P. 693–702.

29. Amin, S. Zap 70 in chronic lymphocytic leukemia / S. Amin, A. Parker, J. Manu // Int J Biochem Cell Biol. – 2008. – Vol. 40(9). – P. 1654–1658.

30. Arai, F. Tie2/angiopoietin-1 signaling regulates hematopoietic stem cell quiescence in the bone marrow niche / F. Arai, A. Hirao, M. Ohmura et al. // Cell. – 2004. – N. 118. – Р. 149–61.

31. Asplund, S.L. Immunophenotype does not correlate with lymph node gistology in chronic lymphocytic leukemia/small lymphocytic lymphoma / S.L. Asplund, R.W. McKenna, M. Howard, S.H. Croft // Am J of Surg Pathol. – 2002. – Vol. 26. – Р. 624–629.

32. Avecilla, S.T. Chemokine-mediated interaction of hematopoietic progenitors with the bone marrow vascular niche is required for thrombopoiesis / S.T. Avecilla, K. Hattori, B. Heissig et al. // Nat. Med.

– 2004. – N. 10. – Р. 64–71.

33. Bckman, E. Thioredoxin, produced by stromal cells retrieved from the lymph node microenvironment, rescues chronic lymphocytic leukemia cells from apoptosis in vitro / E. Bckman, A.C. Bergh, I. Lagerdahl et al. // Haematologica. – 2007. – Vol. 92(11). – Р. 1495–1504.

34. Baron, R. General Principles of Bone Biology. In: Favus M.J., editor. Primer on the metabolic bone diseases and disorders of mineral metabolism / R. Baron // Washington, DC: Amer. Society for Bone and Mineral Research. – 2003. – Р. 1–8.

35. Belloni, P.N. Microvascular endothelial cell heterogeneity: interactions with leukocytes and tumor cells / P.N Belloni, R.J. Tressler // Cancer Metastasis Rev. – 1990. – N. 8. – Р. 353–89.

36. Bessmeltsev, S. Stromal microenvironment and stem cells niche in multiple myeloma / S.

Bessmeltsev, V. Rugal // Haematologica. – 2010. – Vol. 95(25). – Р. 569–570.

37. Bewry, N.N. Stat3 contributes to resistance toward BCR-ABL inhibitors in a bone marrow microenvironment model of drug resistance / N.N. Bewry, R.R. Nair, M.F. Emmons et al. // Mol.

Cancer Ther. – 2008. – N. 7. – Р. 3169–75.

38. Bhatia, R. Abnormal function of the bone marrow microenvironment in chronic myelogenous leukemia: role of malignant stromal macrophages / R. Bhatia, P.B. McGlave, G.W. Dewald et al. // Blood. – 1995. – N. 85. – Р. 3636–45.

39. Binsky I., Haran N., Starlets D. et al. // Blood. – 2006. – Vol. 108(11). – P. 796.

40. Blau, O. Chromosomal aberrations in bone marrow mesenchymal stroma cells from patients with myelodysplastic syndrome and acute myeloblastic leukemia / O. Blau, W.K. Hofmann, C.D. Baldus et al. // Exp. Hematol. – 2007. – N. 35. – Р. 221–9.

41. Bonato, M. Lymph node histology in typical and atypical chronic lymphocytic leukemia / M.

Bonato, S. Pittaluga, A. Tierens et al. // Am J Surg Pathol. – 1998. - Vol. 22(1). – Р. 49-56.

42. Bradford, G.B. Quiescence, cycling, and turnover in the primitive hematopoietic stem cell compartment / G.B. Bradford, B. Williams, R. Rossi, I. Bertoncello // Exp. Hematol. – 1997. – N. 25.

– Р. 445–53.

43. Brandi, M.L. Vascular biology and the skeleton / M.L. Brandi, P. Collin-Osdoby // J. Bone Miner Res. – 2006. – N. 21. – Р. 183–92.

44. Broxmeyer, H.E. Rapid mobilization of murine and human hematopoietic stem and progenitor cells with AMD3100, a CXCR4 antagonist / H.E. Broxmeyer, C.M. Orschell, D.W. Clapp et al. // J.

Exp. Med. – 2005. – N. 20. – Р. 1307–18.

45. Bueso-Ramos, C.E. Aberrant morphology, proliferation, and apoptosis of B-cell chronic lymphocytic leukemia cells / C.E. Bueso-Ramos, A. Ferrajoli, L.J. Medeiros et al. // Hematology. – 2004. – Vol. 9. – Р. 279–286.

46. Burke-Gaffney, A. Thioredoxin: friend or foe in human disease / A. Burke-Gaffney, M.E. Callister, H. Nakamura // Trends Pharmacol Sci. – 2005. – Vol. 26. – Р. 398–404.

47. Caligaris-Cappio, F. Role of the microenvironment in chronic lymphocytic leukaemia / F.

Caligaris-Cappio // Br J Haematol. – 2003. – Vol. 123. – Р. 380-388.

48. Calvi, L.M. Osteoblastic cells regulate the haematopoietic stem cell niche / L.M. Calvi, G.B.

Adams, K.W. Weibrecht et al. // Nature. – 2003. – N. 425. – Р. 841–46.

49. Calvo, W. Schwann cells of the bone marrow / W. Calvo, J. Forteza-Vila // Blood. – 1970. – N. 36.

– Р. 180–8.

50. Calvo, W. On the development of bone marrow innervation in new-born rats as studied with silver impregnation and electron microscopy / W. Calvo, J. Forteza-Vila //Am. J. Anat. – 1969. – N. 126. – Р. 355–71.

51. Celso, C. Live-animal tracking of individual haematopoietic stem cells in their niche / C. Celso, H.E. Fleming, J.W. Wu, C.X. Zhao // Nature. – 2009. – Vol. 457. – P. 92–96.

52. Chan, C.K. Endochondral ossification is required for haematopoietic stem-cell niche formation/ C.K. Chan, C.C. Chen, C.A. Luppen // Nature. – 2009. – Vol. 457. – P.490–494.

53. Chen, L. ZAP-70 directly enhances IgM signaling in chronic lymphocytic leukemia / L. Chen, J.

Apgar, L. Huynh et al. // Blood. –2005. – Vol. 105(5). – P. 2036—2041.

54. Cheshier, S.H. In vivo proliferation and cell cycle kinetics of long-term self-renewing hematopoietic stem cells / S.H. Cheshier, S.J. Morrison, X. Liao, I.L. Weissman // Proc. Natl. Acad.

Sci. USA. – 1999. – N. 96. – Р. 3120–5.

55. Chiorazzi, N. Chronic lymphocytic leukemia / N. Chiorazzi, K.R. Rai, Ferrarini M. // N Engl J Med. – 2005. – Vol. 352. – Р. 804–815.

56. Chirazzi, N. Evolving view of the in-vivo kinetics of chronic lymphocytic leukemia B cells / N.

Chirazzi, M. Ferrarini // Hematology 2006. - ASH Education Program Book. - 2006. – P. 273—278.

57. Colmone, A. Leukemic cells create bone marrow niches that disrupt the behavior of normal hematopoietic progenitor cells / A. Colmone, M. Amorim, A.L. Pontier et al. // Science 2008. – N.

322. – Р. 1861–5.

58. Cordone, I. Monoclonal antibody Ki-67 identifies B and T cells in cycle in chronic lymphocytic leukemia: correlation with disease activity / I. Cordone, E. Matutes, D. Catovsky // Leukemia. –1992.

– Vol. 6(9). – Р. 902–906.



Pages:     | 1 |   ...   | 2 | 3 || 5 |

Похожие работы:

«СУЛЕЙМАНОВ САЛАВАТ РАЗЯПОВИЧ БИОЛОГИЧЕСКИЕ ПРЕПАРАТЫ В ТЕХНОЛОГИИ ВОЗДЕЛЫВАНИЯ ПОДСОЛНЕЧНИКА НА МАСЛОСЕМЕНА В УСЛОВИЯХ РЕСПУБЛИКИ ТАТАРСТАН 06.01.04 – агрохимия Диссертация на соискание ученой степени кандидата сельскохозяйственных наук Научный руководитель – кандидат сельскохозяйственных наук, доцент Низамов Рустам Мингазизович Казань 2015 СОДЕРЖАНИЕ Стр....»

«УДК 256.18(268.45) ШАВЫКИН АНАТОЛИЙ АЛЕКСАНДРОВИЧ ЭКОЛОГО-ОКЕАНОЛОГИЧЕСКОЕ СОПРОВОЖДЕНИЕ ОСВОЕНИЯ НЕФТЕГАЗОВЫХ МЕСТОРОЖДЕНИЙ АРКТИЧЕСКОГО ШЕЛЬФА (НА ПРИМЕРЕ БАРЕНЦЕВА МОРЯ) Приложения Специальность 25.00.28 «океанология» Диссертация на соискание ученой степени доктора географических наук Мурманск – 2015 ОГЛАВЛЕНИЕ ПРИЛОЖЕНИЕ А...»

«Кузнецова Татьяна Сергеевна ПРОГНОЗИРОВАНИЕ РЕФРАКЦИОННОГО РЕГРЕССА ПОСЛЕ ЭКСИМЕР-ЛАЗЕРНОЙ КОРРЕКЦИИ БЛИЗОРУКОСТИ ВЫСОКОЙ СТЕПЕНИ ПРИ МЕХАНИЧЕСКОЙ И ФЕМТОЛАЗЕРНОЙ ТЕХНОЛОГИЯХ ФОРМИРОВАНИЯ ЛОСКУТА РОГОВИЦЫ 14.01.07 – глазные болезни Диссертация на соискание ученой степени кандидата...»

«Горовой Александр Иванович БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫЕ ВЕЩЕСТВА ДРЕВЕСНОЙ ЗЕЛЕНИ И ШИШЕК PINUS KORAIENSIS (ПОЛУЧЕНИЕ, СОСТАВ, ИСПОЛЬЗОВАНИЕ) 03.02.14 – биологические ресурсы Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: доктор биологических наук, профессор Тагильцев Ю. Г. Хабаровск – 2015 СОДЕРЖАНИЕ стр Введение.. 4 Глава 1 Обзор...»

«Рагимов Александр Олегович ЭКОЛОГО-ФУНКЦИОНАЛЬНАЯ РОЛЬ ПОЧВ В ФОРМИРОВАНИИ УРОВНЯ БЛАГОПОЛУЧИЯ НАСЕЛЕНИЯ ВЛАДИМИРСКОЙ ОБЛАСТИ 03.02.08 – экология (биология) Диссертация на соискание ученой степени кандидата...»

«Попцов Александр Леонидович ЗНАЧЕНИЕ ИНДИКАЦИИ ДНК ПАРВОВИРУСА В19 В ОБЕСПЕЧЕНИИ ИНФЕКЦИОННОЙ БЕЗОПАСНОСТИ ПЛАЗМЫ ДЛЯ ФРАКЦИОНИРОВАНИЯ 14.01.21 – Гематология и переливание крови ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Научный руководитель кандидат медицинских наук И.В....»

«Палаткин Илья Владимирович Подготовка студентов вуза к здоровьесберегающей деятельности 13.00.01 общая педагогика, история педагогики и образования Диссертация на соискание ученой степени кандидата педагогических наук Научные руководители: доктор биологических наук, профессор,...»

«ШИГАПОВ Иршат Сайдашович ОСОБЕННОСТИ ФОРМИРОВАНИЯ И РАЗВИТИЯ МАЛЫХ ОЗЕР УРБАНИЗИРОВАННЫХ ТЕРРИТОРИЙ (на примере города Казани) 25.00.36 Геоэкология Диссертация на соискание ученой степени кандидата географических наук Научный руководитель: доктор биологических наук, профессор, зав. каф. природообустройства и водопользования, зав. лабораторией оптимизации водных экосистем КФУ МИНГАЗОВА Н.М. Научный консультант: доктор...»

«Чечулова Анна Васильевна ПРОГНОСТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ НАСЛЕДСТВЕННЫХ И ПРИОБРЕТЕННЫХ ФАКТОРОВ РИСКА ВЕНОЗНОГО ТРОМБОЭМБОЛИЗМА У ПАЦИЕНТОВ МОЛОДОГО ВОЗРАСТА 14.01.21 – гематология и...»

«УДК 591.15:575.17-576.3 БЛЕХМАН Алла Вениаминовна ВНУТРИПОПУЛЯЦИОННАЯ И ГЕОГРАФИЧЕСКАЯ ИЗМЕНЧИВОСТЬ ШИРОКОАРЕАЛЬНОГО ВИДА HARMONIA AXYRIDIS PALL. ПО КОМПЛЕКСУ ПОЛИМОРФНЫХ ПРИЗНАКОВ 03.00.15 генетика Диссертация на соискание ученой степени V кандидата биологических наук Научные руководители: доктор биологических наук,...»

«МИНАЕВ АЛЕКСАНДР НИКОЛАЕВИЧ ПОВЕДЕНИЕ ЛОСЯ В УСЛОВИЯХ ДОМЕСТИКАЦИИ (биотелеметрическое исследование) Специальность 03.00.08 зоология Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Москва 1992. -2ОГЛАВЛЕНИЕ Стр. Введение........... 3 Глава 1. Материал и методика....... 7 Глава 2. Система радиоопределения Лось-2 и оптимальные методы работы с...»

«ВАСИЛЬЕВА ИРИНА ОЛЕГОВНА РАЗРАБОТКА ТЕХНОЛОГИИ МЯСНОГО ПРОДУКТА С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНОГО КОМПОЗИТА НА ОСНОВЕ МОДИФИЦИРОВАННОГО КОЛЛАГЕНА И МИНОРНОГО НУТРИЕНТА 05.18.04 – Технология мясных, молочных и рыбных продуктов и холодильных производств 05.18.07 – Биотехнология пищевых продуктов и биологических...»

«Гуляева Анна Федоровна ТРАВЯНЫЕ МЕЛКОЛИСТВЕННЫЕ ЛЕСА КУЗНЕЦКОЙ КОТЛОВИНЫ: СИНТАКСОНОМИЯ, ЭКОЛОГИЯ, ГЕОГРАФИЯ 03.02.01 – «Ботаника» ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель д.б.н., ст.н.с. Н.Н. Лащинский Новосибирск 2014 СОДЕРЖАНИЕ ВВЕДЕНИЕ..4 Глава 1. ИСТОРИЯ ИЗУЧЕНИЯ РАСТИТЕЛЬНОСТИ...»

«АУЖАНОВА АСАРГУЛЬ ДЮСЕМБАЕВНА ОЦЕНКА ДЕЙСТВИЯ АБИОТИЧЕСКИХ ФАКТОРОВ И БИОПРЕПАРАТА РИЗОАГРИН НА МИКРОБИОЛОГИЧЕСКУЮ АКТИВНОСТЬ ПОЧВЫ, АДАПТИВНОСТЬ И ПРОДУКТИВНОСТЬ ЯРОВОЙ МЯГКОЙ ПШЕНИЦЫ 03.02.08 – Экология Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: доктор...»

«Тюрин Владимир Анатольевич МАРАЛ (CERVUS ELAPHUS SIBIRICUS SEVERTZOV, 1873) В ВОСТОЧНОМ САЯНЕ (РАСПРОСТРАНЕНИЕ, ЭКОЛОГИЯ, ОПТИМИЗАЦИЯ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ) Специальность 03.02.08 – Экология (биологические науки) Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: Д-р биол. наук, профессор М.Н. Смирнов Красноярск 201 Содержание Введение.. 4 Глава 1. Изученность экологии марала.. Биология марала.. 9...»

«САМБУУ Анна Доржуевна СУКЦЕССИИ РАСТИТЕЛЬНЫХ СООБЩЕСТВ В ТРАВЯНЫХ ЭКОСИСТЕМАХ ТУВЫ 03.02.01 – «Ботаника» 03.02.08 – «Экология» Диссертация на соискание ученой степени доктора биологических наук Научный консультант – доктор биологических наук, профессор А.А. Титлянова Кызыл – 2014 СОДЕРЖАНИЕ Введение... Глава 1....»

«Егорова Жанна Геннадьевна КОМПЛЕКСНАЯ ОЦЕНКА ПРОДУКТИВНОСТИ И КАЧЕСТВА МЯСА, ПОЛУЧЕННОГО ОТ СВИНЕЙ ПОСЛЕ ОВАРИОЭКТОМИИ 06.02.10 – частная зоотехния, технология производства продуктов животноводства ДИССЕРТАЦИЯ на соискание учёной степени кандидата биологических наук Научный руководитель: доктор технических наук, профессор Гиро Татьяна Михайловна Саратов – 2014 ОГЛАВЛЕНИЕ ВВЕДЕНИЕ.. 4 1 ОБЗОР...»

«Палаткин Илья Владимирович Подготовка студентов вуза к здоровьесберегающей деятельности 13.00.01 общая педагогика, история педагогики и образования Диссертация на соискание ученой степени кандидата педагогических наук Научные руководители: доктор биологических наук, профессор,...»

«Кроткова Ольга Сергеевна Структурные изменения селезенки мышей при воздействии иглоукалывания и лазера во временном аспекте диссертация на соискание ученой степени кандидата медицинских наук 03.03.04 – клеточная биология, цитология, гистология Научный руководитель – доктор медицинских наук доцент Гурьянова Е.А....»

«КАРПОВА Елена Ивановна ОПТИМИЗАЦИЯ ПРИМЕНЕНИЯ ЛАЗЕРНЫХ ТЕХНОЛОГИЙ В ВОССТАНОВИТЕЛЬНОЙ КОРРЕКЦИИ ОСЛОЖНЕНИЙ КОНТУРНОЙ ИНЪЕКЦИОННОЙ ПЛАСТИКИ ПРИ ДЕФОРМАЦИЯХ МЯГКИХ ТКАНЕЙ ЛИЦА 14.03.11 Восстановительная медицина, спортивная медицина, лечебная физкультура, курортология и физиотерапия Диссертация на соискание ученой степени доктора медицинских наук Научный консультант: доктор медицинских...»







 
2016 www.konf.x-pdf.ru - «Бесплатная электронная библиотека - Авторефераты, диссертации, конференции»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.