WWW.KONF.X-PDF.RU
БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА - Авторефераты, диссертации, конференции
 


Pages:   || 2 | 3 | 4 | 5 |

«МОРФОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ ИНТРАМЕДУЛЛЯРНЫХ СТРОМАЛЬНЫХ СТРУКТУР ГЕМОПОЭТИЧЕСКОЙ НИШИ И ЭЛЕМЕНТОВ ЛИМФОИДНОЙ СТРОМЫ ПРИ ХРОНИЧЕСКОМ ЛИМФОЛЕЙКОЗЕ ...»

-- [ Страница 1 ] --

Федеральное государственное бюджетное учреждение

«Российский научно-исследовательский институт гематологии и

трансфузиологии Федерального медико-биологического агентства»

(ФГБУ РосНИИГТ ФМБА России)

На правах рукописи

Семенова Наталья Юрьевна

МОРФОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ ИНТРАМЕДУЛЛЯРНЫХ

СТРОМАЛЬНЫХ СТРУКТУР ГЕМОПОЭТИЧЕСКОЙ НИШИ И ЭЛЕМЕНТОВ

ЛИМФОИДНОЙ СТРОМЫ ПРИ ХРОНИЧЕСКОМ ЛИМФОЛЕЙКОЗЕ

14.01.21 – гематология и переливание крови

ДИССЕРТАЦИЯ

на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Научные руководители:

доктор медицинских наук, профессор С.С. Бессмельцев доктор медицинских наук, профессор В.И. Ругаль

САНКТ-ПЕТЕРБУРГ

ОГЛАВЛЕНИЕ

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Хронический лимфолейкоз (ХЛЛ)

1.2. Биология ниши гемопоэтических стволовых клеток костного мозга: строение и функции

1.3. Роль стромального микроокружения костного мозга в нормальном и малигнизированном гемолимфопоэзе, включая ХЛЛ

1.4. Участие стромы лимфоидной ткани в развитии лимфоидных предшественников в норме и ее состояние при малигнизации лимфопоэза

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Общая характеристика пациентов

2.2. Методы исследований

2.3. Методы статистической обработки

2.4. Объем проведенных исследований

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1. Нишеобразующие структуры стромального микроокружения костного мозга в норме

3.2. Паренхима и формирующие нишу стволовых клеток стромальные образования костного мозга при ХЛЛ

3.3. Гистоморфологическая характеристика стромального компонента в лимфатических узлах при немалигнизированных реактивных лимфаденопатиях......... 68

3.4. Особенности структурной организации стромы лимфатических узлов при ХЛЛ.... 75 ЗАКЛЮЧЕНИЕ

ВЫВОДЫ

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность проблемы Механизмы, определяющие злокачественную трансформацию клеток-предшественниц лимфопоэза при лимфопролиферативных заболеваниях окончательно не расшифрованы, в связи с чем исследования с целью получения неизвестных ранее, новых данных, связанных с лейкозной трансформацией клеток и, в частности, основанных на анализе мало изученной на сегодня кроветворной и лимфоидной стромы, особенно нишеобразующих структур являются одной из актуальных проблем современной гематологии. В обширной группе лимфопролиферативных заболеваний хронический лимфолейкоз (ХЛЛ) стоит на первом месте по частоте встречаемости [1]. В установлении причин появления и дальнейшей судьбы лейкозного клона при этом заболевании значимое место занимает изучение особенностей состояния ключевых нишеобразующих стромальных структур кроветворного и лимфоидного микроокружения, непосредственно регулирующих развитие гемопоэтических стволовых клеток и их коммитированных в лимфоидном направлении потомков [47, 55, 109, 137].

Состоянию костномозговой стромы, оценке ее роли в нормальном гемолимфопоэзе и значению ее дефектов в развитии гемобластозов, включая лимфопролиферативные заболевания, в последние годы уделяется большое внимание [9, 12, 36, 38, 59, 65]. При этом особенности структурной организации элементов стромального микроокружения, участвующие в формировании ниши клеток-предшественниц гемолимфопоэза в целом и при ХЛЛ в частности, практически не изучены. Согласно концепции остеобластно-васкулярной ниши кроветворное микроокружение содержит специализированные стромальные клеточные структуры - ниши, формируемые элементами стромы эндоста и микрососудами, которые определяют локализацию стволовых клеток и создают условия для их длительного самоподдержания, а также регулируют их дифференцировочный и пролиферативный потенциал. Вне ниши стволовые кроветворные клетки не способны выполнять свои функции [90, 134, 171, 174]. Также известно, что именно в костномозговых нишах гемопоэтические стволовые клетки (ГСК) получают первоначальные сигналы гемопоэзиндуцирующего микроокружения, направляющие развитие гемопоэтических предшественников в лимфоидном направлении. Коммитированные лимфоидные предшественники мигрируют из костного мозга в лимфоидные органы, где при непосредственном влиянии стромального компонента лимфоидной ткани происходит их дальнейшее развитие.

В связи с этим анализ структурных особенностей кроветворной ткани и состояния стромального микроокружения больных ХЛЛ является актуальным, так как на основании сведений о морфофункциональном статусе паренхимы и стромы костного мозга представляется возможным получить факты, уточняющие патогенез появления и становления неопластического клона В-лимфоцитов при ХЛЛ.

В тоже время, практически отсутствуют работы о состоянии не менее значимого регуляторного компонента, определяющего лимфопоэз – лимфоидного микроокружения, при нарушениях пролиферации и дифференцировки лимфоидных клеток при их малигнизации [5, 31, 45]. Коммитированные в лимфоидном направлении стволовые клетки мигрируют из стромальной ниши костного мозга в различные лимфоидные ткани и органы, в частности, лимфатические узлы. В них под воздействием, прежде всего фолликулярных дендритных клеток (ФДК) и эндотелия микрососудов, происходят завершающие этапы В-лимфопоэза и иммуногенеза. Учитывая этот факт, важную роль приобретает анализ состояния стромальных структур лимфатических узлов, напрямую ответственных за процессы пролиферации и дифференцировки мигрировавших из костного мозга лимфоидных предшественников.

Таким образом, изучение морфофункциональных свойств ключевых нишеобразующих элементов кроветворного и лимфоидного микроокружения при малигнизированном лимфопоэзе является значимой научно-практической задачей. Сведения, полученные в ходе ее решения, важны для теоретической и практической гематологии, так как будут способствовать расшифровке патогенеза ХЛЛ, уточнению прогноза его течения и совершенствованию качества лечения заболевания.

Степень разработанности темы Структурная организация стромы костного мозга при гемобластозах в целом изучена, однако морфофункциональный статус нишеобразующих элементов стромального микроокружения костного мозга, эндостальных образований и сосудов микроциркуляции при малигнизации лимфопоэза, в частности у больных ХЛЛ, охарактеризован мало. Недостаточно изучено состояние лимфоидного микроокружения при злокачественной трансформации лимфоидных предшественников и практически отсутствуют сведения о фолликулярных дендритных клетках, экстрацеллюлярном матриксе и характере микроциркуляции лимфатических узлов при ХЛЛ.

До настоящего времени в условиях появления лейкозного клона у больных ХЛЛ отсутствует одновременный, сочетанный анализ ключевых стромальных структур костного мозга и лимфатических узлов, непосредственно участвующих в регуляции гемолимфопоэза и не сформулировано представление роли дефектов нишеобразующих образований кроветворной и лимфоидной стромы в патогенезе ХЛЛ.

Цель исследования. Определить морфофункциональные особенности стромальных элементов кроветворного и лимфоидного микроокружения, участвующих в формировании ниши гемопоэтических стволовых клеток (ГСК) и лимфоидных клеток-предшественниц, и оценить роль стромальных изменений в патогенезе хронического лимфолейкоза.

Задачи исследования:

1. Изучить особенности инфильтрации опухолевыми лимфоцитами паренхимы костного мозга больных хроническим лимфолейкозом во взаимосвязи с состоянием стромы интрамедуллярных пространств губчатой кости.

Представить морфологическую и иммуногистохимическую характеристику 2.

нишеобразующих структур стромального микроокружения костного мозга клеток

– эндостальных зон костных трабекул и сосудов микроциркуляторного русла кроветворной ткани при малигинизации гемолимфопоэза.

Охарактеризовать гистоморфологические изменения паренхимы и стромы 3.

лимфатических узлов больных ХЛЛ с поражением лимфоидной ткани.

4. Проанализировать структурную организацию ключевых стромальных регуляторных элементов лимфопоэза – фолликулярных дендритных клеток и сосудов микроциркуляторного русла при ХЛЛ.

5. Предложить концепцию роли дефектов нишеобразующих структур кроветворной и лимфоидной стромы в неопластической трансформации ГСК и клеток-предшественниц лимфопоэза.

Научная новизна Впервые на клиническом материале представлены неизвестные ранее сведения о морфофункциональном состоянии нишеобразующих структур костного мозга и лимфатических узлов, непосредственно регулирующих развитие гемопоэтических стволовых клеток и клеток предшественниц в условиях малигнизации В-лимфопоэза при ХЛЛ. Данные получены на основании одновременного сочетанного структурного анализа кроветворного и лимфоидного микроокружения.

Установлено, что независимо от характера опухолевой инфильтрации костного мозга – нодулярного, интерстициального или диффузного, наблюдаются морфофункциональные перестройки клеточных и внеклеточных элементов, участвующих в формировании гемопоэтической ниши: изменяется соотношение содержания интратрабекулярных коллагенов I и III типов, увеличивается количество эндостальных стромальных клеток костного мозга, изменяется их структурная организация, нарастает плотность микрососудов костномозговой паренхимы, включая анатомические зоны локализации родоначальных кроветворных клеток в области эндоста. Выявлена взаимосвязь между плотностью микрососудов и интенсивностью опухолевого поражения костного мозга, а также показана корреляция между прогностическим фактором Zap70 (70-kd дзета-асоциированный белок) и плотностью микрососудов.

Получены новые данные, свидетельствующие о вовлечении ключевых структур лимфоидного микроокружения в генез малигнизации лимфоидных клеток при ХЛЛ – обнаружены признаки дезинтеграции ФДК в паренхиме лимфатических узлов с одновременным усилением ангиогенеза, проявляющимся разрастанием сети мелких сосудов в лимфоидной ткани.

Выдвинуто новое концептуальное положение о роли дефектов стромальных образований костного мозга, формирующих гемопоэтическую нишу, и стромальной ниши лимфатических узлов в генезе злокачественной трансформации лимфоидных предшественников.

Теоретическая и практическая значимость работы Полученные в ходе проведенного исследования данные дополняют существующие знания о роли дефектов кроветворного и лимфоидного микроокружения в малигнизации лимфопоэза.

Установленные качественные и количественные изменения нишеобразующих структур костномозговой и лимфоидной стромы позволяют сделать заключение об их вовлечении в процесс неопластической трансформации лимфоидных предшественников при ХЛЛ и могут указывать на перестройку функции ниши, направленную на поддержание лейкозного клона.

Использованная методика одновременной оценки морфофункционального статуса структур кроветворной и лимфоидной ниш позволяет выявить у больных ХЛЛ стромальные дефекты, которые могут использоваться в клинике при оценке прогноза заболевания, контроля проводимого лечения и для его совершенствования.

Методология и методы исследования В работе были использованы общенаучные (анализ данных, синтез) и частные научные методы (лабораторные, статистические).

При изучении гистологических препаратов фрагментов подвздошной кости и биоптатов лимфатических узлов применялись окраски гематоксилин-эозином, азур-II-эозином, импрегнация серебром, по Массону, проводившиеся по стандартным методикам.

Иммуногистохимические (ИГХ) исследования выполняли с использованием панели первичных антител (Dako, Abcam, Spring Bioscience) и полимерной системы визуализации Dako по рекомендованным производителями протоколам окрашивания.

Морфологическую оценку препаратов осуществляли на световом микроскопе Nikon Eclipse E200 со встроенной фотокамерой с помощью программного обеспечения анализа изображений «ВидеоТесТ-Морфология 5.2» с окуляром х10, при объективах х20, х40. Анализ гистологических препаратов выполнялся в 20 полях зрения для каждого образца.

Статистическая обработка полученных данных проводилась методом вариационной статистики с определением средней величины М, ее средней ошибки m, стандартного отклонения SD. Достоверность различий оценивалась с помощью критерия Стьюдента (t), критерия Манна-Уитни. Различие между сравниваемыми показателями считалось статистически значимым при р 0,05. Для выяснения зависимости между показателями применялся корреляционный анализ. Математическую обработку результатов исследования проводили с использованием программ Statistica v.6.0, MedCalc, Microsoft Excel для Windows ХР.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Стромальными структурами костного мозга человека, участвующими в формировании гемопоэтической ниши, являются эндостальные клетки, сосуды микроциркуляции, интрамедуллярный и интратрабекулярный экстрацеллюлярный матрикс. В лимфатических узлах структурами непосредственно регулирующими развитие мигрировавших из костного мозга лимфоидных предшественников являются фолликулярные дендритные клетки и микрососуды.

2. Перестройки морфофункционального статуса стромальных нишеобразующих структур при ХЛЛ развиваются независимо от типа опухолевой инфильтрации костного мозга.

3. Развитие хронического лимфолейкоза сопровождается качественными и количественными изменениями эндостальных стромальных клеток и плотности микрососудов.

4. Дезинтеграция и изменение фенотипа фолликулярных дендритных клеток и усиленный ангиогенез в тканях лимфатических узлов являются характерными особенностями состояния лимфоидной ткани при ХЛЛ.

5. Одним из патогенетических факторов развития ХЛЛ является нарушение морфофункционального статуса нишеобразующих структур кроветворной и лимфоидной стромы.

Степень достоверности и апробация работы

Достоверность и обоснованность результатов работы обеспечена комплексным анализом нишеобразующих стромальных структур костного мозга и лимфатических узлов 112 пациентов с первично установленным диагнозом ХЛЛ с использованием современных методов гистологических и иммуногистохимических исследований и подтверждена адекватными поставленным задачам методами статистической обработки полученных данных.

Результаты работы обсуждены и доложены на Всероссийских и Международных конференциях: Всероссийской научно-практической конференции «Актуальные вопросы гематологии и трансфузиологии» (Санкт-Петербург, 2012, 2014), Всероссийской научнопрактической конференции c международным участием «Инновационные технологии в нейроэндокринологии, нейронауках и гематологии» (Санкт-Петербург, 2013), 18 Конгрессе Европейской ассоциации гематологов (Стокгольм, 2013), Международной научно-практической конференции медицина: актуальные вопросы»

«Современная (Новосибирск, 2014), Всероссийской научно-практической конференции «Клиническая лабораторная диагностика в гематологии и службе крови» (Санкт-Петербург, 2014), II Конгрессе гематологов России (Москва, 2014), 19 Конгрессе Европейской ассоциации гематологов (Милан, 2014), Юбилейной конференции, посвященной 140-летию со дня рождения А.А. Максимова «От унитарной теории кроветворения до трансплантации костного мозга» (Санкт-Петербург, 2014).

Внедрение результатов исследований в практику Основные положения диссертации внедрены в практическую и научноисследовательскую работу в ФГБУ научно-исследовательский институт «Российский гематологии и трансфузиологии ФМБА России». Материалы исследования используются в педагогическом процессе в ГБОУ ВПО «Северо-Западный государственный медицинский университет им. И.И. Мечникова» и при диагностике и лечении больных лимфопролиферативными заболеваниями в СПбГУЗ «Городская больница №15».

Результаты диссертационной работы включены в Методические рекомендации «Современные методы диагностики и лечения неходжкинских лимфом» (СПб, 2015).

Публикации По теме кандидатской диссертации опубликовано 19 научных работ, из них 5 в научнопрактических журналах, рекомендованных ВАК Министерства образования и науки Российской Федерации для публикации результатов диссертационных исследований. Также опубликована глава в коллективной монографии «Актуальные вопросы медицинских морфологических дисциплин» (Новосибирск, 2014, с. 62-80).

Объем и структура диссертации Диссертация изложена на 114 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, описания методов исследования, изложения результатов собственных исследований, обсуждения полученных результатов, выводов, практических рекомендаций и списка литературы, включающего 175 источников: 23 отечественных и 152 иностранных.

Работа иллюстрирована 10 таблицами и 27 рисунками.

Личный вклад автора Автором лично проведены анализ литературных данных и планирование диссертационной работы, выполнены все гистологические, иммуногистохимические исследования, морфометрия и фотографирование полученных микропрепаратов, осуществлены статистическая обработка, анализ полученных данных, обобщение результатов исследований и подготовка материалов к публикациям.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Хронический лимфолейкоз (ХЛЛ) Хронический лимфоцитарный лейкоз (ХЛЛ) в 98% случаев представляет собой опухоль из мономорфных мелких В-лимфоцитов, накапливающихся в периферической крови, костном мозге, лимфатических узлах и других органах и обычно экспрессирующих CD5 (Т-клеточный антиген), CD23 и другие В-клеточные антигены (CD19, CD20) при невысоком уровне экспрессии поверхностных иммуноглобулинов. Т-клеточный вариант встречается крайне редко [168].

Удельный вес ХЛЛ среди лейкозов взрослых по-прежнему остается самым высоким, достигая 25—30% в Западной и Восточной Европе и Северной Америке (до 40 % у лиц старше 65 лет). Однако средний возраст заболевших ХЛЛ (65 лет) если и остается как будто постоянным, то главным образом за счет увеличения средней продолжительности жизни населения, что хорошо согласуется с прогнозами демографической ситуации в мире, несмотря на рост заболеваемости в более молодом возрасте (10—15% в возрасте до 55 лет; встречаются случаи до 40 лет). Следует иметь в виду, что нередко (40—60%) заболевание диагностируется в асимптомной фазе (лимфоцитоз при рутинном анализе крови) [1].

Более глубокое изучение биологии лимфоидных клеток при ХЛЛ, вариабельности клинического течения и ответа на новые варианты терапии заболевания привело к уточнению, а в ряде случаев и к пересмотру ранее казавшихся незыблемыми общебиологических и клинических положений, что существенным образом отразилось на формировании представлений о механизмах развития злокачественной трансформации лимфоидных предшественников при этой патологии. Однако существующие в настоящее время обширные сведения не позволяют установить истинную причину, лежащую в основе ХЛЛ.

На сегодня известно, что патогенез ХЛЛ фактически не связан с реципрокными сбалансированными транслокациями хромосом, чем и отличается от других В-зрелоклеточных лимфопролиферативных заболеваний, при которых такие протоонкогены, как циклин d1, bcl2, bcl6, pax5, c-myc, вовлечены в хромосомные перестройки. Инактивация гена-супрессора опухолевого роста р53 на хромосоме 17р13 и делеции или мутации гена atm на хромосоме 11q22-23 наблюдаются на поздних стадиях заболевания, не являясь, вероятно, первичными опухолевыми событиями. Не смотря на то, что на ранних этапах развития ХЛЛ отмечаются делеции 13q14 (почти в половине случаев), структурные аберрации хромосомы 11 (20%) и трисомия 12 хромосомы (15%), этот факт, однако, не может быть однозначным подтверждением основополагающей патогенетической причины становления ХЛЛ.

В соответствии с мутационным статусом генов вариабельной области тяжелых цепей иммуноглобулинов среди больных ХЛЛ выделяют, по крайней мере, две большие подгруппы, мало отличающиеся друг от друга по экспрессии других генов, среди которых интерес представляет Zap70 (дзета-ассоциированный протеин), присутствующий на нормальных Тлимфоцитах и естественных клетках-киллерах, но не на нормальных В-клетках и большинстве клеток с мутантным IgVH.

Этот белок имеет отношение к включению сигнальных путей при связывании иммуноглобулинов и может соотноситься с более агрессивным течением заболевания с немутантным IgVH, но его экспрессия не зависит от хромосомных аберраций [53]. Вместе с тем профиль экспрессии генов, кодирующих различные протеинкиназы, среди которых имелись и участвующие в передаче сигналов в клетке, не определялся мутантным статусом IgVH, а был специфичен для ХЛЛ [150].

Оценка количественной экспрессии генов, связанных с апоптозом и клеточным циклом, свидетельствует в пользу того, что из двух известных механизмов накопления опухолевых клеток при злокачественном заболевании — дефицит программированной клеточной гибели и активация клеточного цикла — для ХЛЛ все же более характерен первый [18, 89].

Даже если допустить принадлежность ХЛЛ к числу лимфопролиферативных заболеваний с низкой фракцией роста, при которых нарастание опухолевой массы в организме определяется в основном ингибицией апоптоза, не исключается накопление в последующем других изменений регуляции клеточного цикла, часто сопряженных с генами-супрессорами опухолевого роста, что способствует нарастанию пролиферативных процессов и агрессивности течения заболевания [39, 56, 132].

В противоположность тому, что наблюдается in vivo, быстрая гибель клеток ХЛЛ при культивировании связана с отсутствием ростовых или других факторов в среде, про которые известно, что они препятствуют апоптозу (гранулоцитарный колоние-стимулирующий фактор, основной фактор роста фибробластов, ИЛ-4, ИЛ-13, ИЛ-10, ИФН- и, растворимый CD23).

Несоответствие между интенсивностью апоптотических процессов при ХЛЛ in vivo и in vitro пытаются объяснить защитным действием на лейкозные клетки контакта со стромальными клетками костного мозга в организме [27]. C защитой злокачественных клеток при ХЛЛ от апоптоза связана и слабая экспрессия CD95 и CD95-R, через которые осуществляется запуск внешнего пути апоптоза. Стромальные клетки костного мозга поддерживают выживаемость лейкозных клеток. В свою очередь опухолевые В-клетки сами индуцируют у стромального микроокружения способность поддерживать выживаемость этих клеток (реципрокное взаимодействие) [28].

Механизмы формирования ХЛЛ, как и любого другого заболевания, представляют интерес не только с точки зрения выяснения фундаментальных основ патологии, но прежде всего их понимание необходимо для установления терапевтических мишеней и способов воздействия на них, что является предметом многих исследований [118, 136, 162].

Микроокружение опухолевых клеток является ведущим в прогрессировании этого клинически гетерогенного заболевания и усилия последних лет сосредоточены на исследовании взаимодействия опухоль-микроокружение для раскрытия фундаментальных основ заболевания и поиска новых прогностических факторов, которые покажут клинически значимые корреляции.

Заболевание остается неизлечимым и генез его требует дальнейших исследований.

Учитывая роль стромы костного мозга и лимфоидной ткани, в частности лимфатических узлов, в развитии лимфоидных предшественников, очевидно, что анализ указанных образований актуален, а полученные данные о структуре кроветворной и лимфатической стромы при ХЛЛ имеют важное теоретическое и практическое значение для целей уточнения генеза неопластической трансформации лимфоидных предшественников, совершенствования лечения заболевания и прогноза его течения.

1.2. Биология ниши гемопоэтических стволовых клеток костного мозга: строение и функции В конце прошлого столетия была сформулирована новая концепция относительно поведения и роли стволовых клеток взрослого организма в поддержании функциональных свойств быстро обновляющихся тканей, таких как кроветворная, эпителий кишечника, эпидермис и иных с менее интенсивной способностью к самообновлению.

Основным положением указанной концепции был тезис о том, что длительное самоподдержание стволовых клеток и реализация генетической программы дифференцировки возможны только при условии их пребывания в специфическом микроокружении, которое формирует для них особую нишу. Примечательно, что впервые идея ниши была обозначена относительно гемопоэтических стволовых клеток (ГСК) в 1978 г. R. Schofield [134]. Ниша является не просто локальным местопребыванием ГСК, а имеет структурно-анатомические и функциональные характеристики, вне ниши ГСК не способны выполнять свои ключевые функции. Так ГСК могут циркулировать в кровеносном русле и, находясь практически в любых тканях и органах, тем не менее, не функционируют в качестве стволовых клеток. Хоминг – способность мигрировать в свою нишу для получения соответствующих сигналов, является основным свойством ГСК [10].

В организме человека ежесуточно продуцируется и одновременно погибает 500 млрд.

клеток крови. Это ставит систему гемопоэза на первое место среди всех тканей и органов по темпам клеточного самообновления. В таких условиях для поддержания клеточного баланса требуется, прежде всего, определенное количество стволовых клеток с закрепленной генетической программой их развития в кроветворном направлении, а также наличие эпигенетических механизмов, регулирующих реализацию пролиферативного и дифференцировочного потенциала ГСК. У взрослых гемопоэз в нормальных условиях ограничивается костной тканью. В ней локальные регуляторные механизмы развития ГСК определяются гемопоэзиндуцирующим микроокружением, в котором ключевая инструктивная роль принадлежит стромальным клеткам костного мозга (КМ). Ранее было показано, что помимо опорной функции, которую выполняет строма для костномозговой паренхимы, стромальные элементы ответственны за миграцию, сортировку, репликацию, пролиферацию и дифференцировку клеток КМ. Кроме того, стромальные клетки способны восстанавливать исходное микроокружение при повреждении органов, содержащих ретикулярную строму. Во всех случаях сначала восстанавливается строма, а затем она репопулирует кроветворными клетками. Строма выполняет опорную функцию для костномозговой паренхимы, а с помощью гуморальных факторов гемопоэза стромальные элементы осуществляют пролиферацию и дифференцировку клеток КМ. Между паренхимой КМ и элементами стромы, создающей микроокружение, существует тесная взаимосвязь [10, 42, 100].

40 лет назад исследования, выполненные в лаборатории J.J. Trentin, показали, что стромальные клетки играют активную роль в регуляции дифференцировки ГСК во все типы линий клеток крови. J.J. Trentin предположил, что это индуктивное воздействие, включающее взаимодействие стромальных клеток и ГСК, и в связи с этим, гемопоэтическая строма была названа гемопоэзиндуцирующим микроокружением (ГИМ) [152]. Первое подтверждение, что существуют различные ГИМ в разных гемопоэтических органах было получено при исследовании, в котором имплантировали строму КМ (главное место гранулопоэза) в селезенку (поддержание эритропоэза) [152].

В этом эксперименте реципиентные мыши были облучены и им были введены клетки КМ, чтобы возобновить клетки-предшественники ГСК, мыши были декапитированы через 18– 24 часа и ткань КМ имплантировали напрямую в селезенку облученных вторичных реципиентов. Селезенки собрали через дней после трансплантации и участки трансплантированных селезенок визуализировали под световым микроскопом.

Имплантированная строма КМ легко отличима от стромы селезенки по различиям в соединительной ткани и по присутствию костных спикул в строме КМ [152]. Интересно, что типы колоний, выявленные в секциях селезенок, были зависимы от стромального микроокружения, в котором они развивались. Внутри стромы КМ колонии были главным образом гранулоцитарные по своей природе, в то время как в строме селезенки колонии, главным образом, были эритроидные, а в колониях, перекрывающих границы стром двух типов, линии были перемешаны.

Этот эксперимент подтвердил тот факт, что строма различных органов индуцирует дифференцировку специфических линий клеток крови из предшественников и с этого времени она получила название – ГИМ, в дальнейших исследованиях были идентифицированы различные ГИМ [51, 151, 152]. В 1978 R. Schofield, основываясь на наблюдениях коллег, предсказал, что помимо микроокружения, которое индуцирует дифференцировку, также существует специфическая гемопоэтическая ниша стволовых клеток, которая фиксирует их на месте, предотвращает созревание, позволяя стволовым клеткам пролиферировать и поддерживать их свойства. Как только потомки ГСК покидают нишу, они переходят к дифференцировке [134]. Эти предположения были основаны на наблюдениях, что ГСК необходимо располагаться в КМ, чтобы сохранять «бесконечный»

потенциал, в то время как ГСК, которые располагались в селезенке и формировали колонии были более ограничены в своей возможности поддерживать гемопоэз [134]. В течение последующих 25 лет исследования микроокружения КМ были, главным образом, основаны на микроскопических исследованиях или ex vivo культивируемых системах, особенно на долгоживущих КМ культурах, которые способны поддерживать гемопоэз в течение длительного времени [62, 63]. В этих исследованиях, КМ стромальные клетки были охарактеризованы как фибробласты, ретикулярные клетки, эндотелиальные клетки, адипоциты и остеобласты. Изучение стромы в момент активного гемопоэза в длительной культуре КМ показало, что в строме существуют дискретные участки микроокружения, в которых клетки дифференцируются по определенным линиям [54].

Однако, точные отличительные черты клеточных типов, составляющих нишу ГСК, оставались неизвестными. В 2003 году в двух экспериментах, проведенных на мышиных моделях, было показано, что формирующий кость остеобласт способен влиять на размер пула ГСК in vivo, что означало, что остеобласт является важным компонентом ГСК ниши [48, 175].

В 2005 в других исследованиях была определена важная роль эндотелиальных клеток синусоидов КМ, что позволило предположить, что они также являются нишей для ГСК [85].

Строение ниши гемопоэтических стволовых клеток По мере накопления знаний об инструктивной роли микроокружения в обеспечении жизнедеятельности ГСК и понимании того факта, что его функциональный потенциал обеспечивается тесным взаимодействием многих элементов стромы КМ, становилось очевидным, что роль отдельных ее образований непосредственно влияющих на ГСК неравнозначны. В последнее десятилетие экспериментальные исследования структуры и функций микроокружения ГСК позволили выделить из широкого спектра формирующих его элементов конкретные костномозговые стромальные образования, которые непосредственно контролируют жизнедеятельность ГСК, определяют их локализацию и запускают генетически детерминированную программу пролиферации и дифференцировки родоначальных клеток гемолимфопоэза (рис. 1).

Понимание гемопоэтической ниши значительно возросло за последние несколько лет, что, по крайней мере, частично связано с развитием новых методов клеточных исследований.

В формировании ниши принимают участие многие типы клеток, включая остеобласты, клетки эндотелия, обильно экспрессирующие СХСL12 ретикулярные клетки (CAR-клетки), мультипотентные мезенхимальные стромальные клетки (ММСК), симпатические нервные волокна. В нишах ГСК могут находиться в состоянии покоя, а могут активно пролиферировать.

На сегодняшний день четко выделяют две ниши – эндостальную и васкулярную, не исключено, что в ближайшем будущем появятся новые «ниши» [32, 61, 112, 121].

Рисунок 1. Стромальное микроокружение ГСК костного мозга.

Схематическое изображение эндостальной и васкулярной ниши в костном мозге [рис. с изменениями по http://raysports.com.br/site/wp-admin/css/hematopoietic-stem-cells-niche].

Васкулярная ниша образована, главным образом, ММСК и CAR-клетками, эндотелиоцитами синусоидов. ГСК в составе этих ниш, как правило, активно пролиферируют.

Компонентами эндостальных ниш являются выстилающие кость клетки (эндост) и ММСК. ГСК в эндостальных нишах, в основном находятся в состоянии покоя. Конкретные межклеточные взаимодействия и молекулярные механизмы, которые обуславливают статус клеточного цикла ГСК в разных костномозговых нишах до сих пор остаются до конца неуточненными [21-23, 112].

Основные клеточные нишеобразующие элементы Остеобласты У взрослых людей постоянный гемопоэз возникает в КМ, который расположен в полости кости. Вместо того чтобы быть инертной структурой, костная ткань постоянно претерпевает процесс ремоделирования через тесные связи между формированием кости из остеобластов и резорбцией кости остеокластами [103]. Остеобласты обычно располагаются вдоль эндоста между костью, КМ и периостом, который составляет внутренние и наружные поверхности кости соответственно. Главные функции остеобластов в ремоделировании кости - это секреция неминерализованных белков матрикса кости (собирательно названных остеоид) и клеток остеобластной линии, регулирующих дифференцировку остеокластов [99, 103]. В двух одновременно опубликованных исследованиях установлено, что остеобласты играют активную роль как часть регулирующего микроокружения ГСК [48, 175]. В одном исследовании, проведенном на мышах, был удален рецептор костного морфогенетического белка кости 1A (BMPR1A). Результатом этого явилось эктопическое образование трабекулярной костеобразной области (TBLA), и значительное увеличение в количестве N-кадгерин+ остеобластов (SNOклетки) в TBLA. Увеличение TBLA коррелировало с увеличением количества ГСК (которые определялись по функциональным и фенотипическим свойствам), и было обнаружено, что ГСК прикреплялись к SNO-клеткам в ассоциации с N-кадгерином [175]. В другом исследовании изучались эффекты конститутивно активированного паратиреоидного гормона/паратиреоидсвязанного белкового рецептора (PPR) под контролем остеобласт-специфичного промотора коллагена 2.3kB1(1) [48]. PPR-трансгенные мыши имели значительное увеличение ГСК клеток одновременно с увеличением площади, занимаемой трабекулярной костью и повышенным числом трабекулярных остеобластов, которые экспрессировали лиганд Notch Jagged1. ГСК клетки из PPR-трансгенных мышей имели более активированный Notch, чем ГСК дикого типа.

Более того, контакт между ГСК и Jagged1-экспрессирующими остеобластами требовался для мобилизации ГСК, а добавление ингибитора секретазы, который подавляет активацию Notch, к культурам стромальных клеток предотвращало этот эффект [48]. Обработка стромальных культур дикого типа паратиреоидным гормоном повторяло фенотипы, которые наблюдались у PPR-трансгенных мышей. Было также показано, что паратиреоидный гормон имеет терапевтический потенциал для ГСК мобилизации и гемопоэтической реабилитации после трансплантации через регуляцию размера остеобластной ГСК ниши в моделях мыши [25, 48].

Следует отметить, что эти in vivo модели были созданы, главным образом, на основе данных, полученных в предыдущей работе in vitro, в которой было замечено, что остеобласты и остеобластные клеточные линии могут поддерживать гемопоэтические клетки в культуре. Было показано, что остеобласты человека поддерживают ГСК в ex vivo культивируемых системах [144,157]. В то время как увеличение количества остеобластов продемонстрировали прирост ГСК, уменьшение количества остеобластов не всегда равным образом коррелировало с сокращением ГСК. Удаление остеобластов ганцикловиром в трансгенных по тимидин-киназе мышах, экспрессирующейся остеобластами, вызывает сокращение костномозгового и усиление экстрамедуллярного гемопоэза. Это сопровождалось сокращением абсолютного числа примитивных гемопоэтических клеток в КМ, в селезенке и печени [155]. Тем не менее, дисфункция остеобластов у мышей, дефектных по бигликану не отразилась на изменении количества ГСК в КМ [84]. Следовательно, каждый из специфических типов остеобластов вносит вклад в нишу или остеобласты не требуются для функции ниши и могут быть вытеснены другими типами клеток при условиях постепенного уменьшения числа остеобластов. Установлено, что продукты остеобластов являются позитивными регуляторами ГСК и включают в себя ангиопоэтин-1, тромбопоэтин и Jagged-1, в то время как остеобластассоциированные негативные регуляторы ГСК ниши включают остеопонтин и dikkopf1 [30, 48, 85,165].

Остеобласты обильно экспрессируют хемокин CXCL12, который играет роль в хемотаксисе, хоуминге и выживании ГСК, а также в удержании ГСК в КМ [44]. Хотя следует отметить, что другие не остеобластные ретикулярные клетки КМ также экспрессируют высокие уровни CXCL12 и могут играть роль в нише [119,143]. Несмотря на то, что остеобласты являются помощниками в регуляции ГСК в КМ, остается неизвестным требуется ли их контакт напрямую с ГСК.

Эндотелиальные клетки Эндотелиальные клетки выстилают все сосуды в организме. В КМ они формируют барьер между развивающимися гемопоэтическими клетками и кровью, регулируют циркуляцию клеток крови [15, 42, 139]. Факты, подтверждающие возможность того, что периваскулярная зона служит регуляторной нишей для стволовых клеток, были получены в двух исследованиях.

Исследование гемопоэтических клеток животных in vivo показало, что они располагаются рядом с особыми субсекциями микроциркуляторного русла КМ, где клетки сохраняются или увеличиваются в количестве за 70-дневный интервал [139]. Эти данные позволяют предположить, что периваскулярная зона является потенциальной нишей, но изученные гемопоэтические популяции не были хорошо обогащены ГСК. Именно открытие SLAMантигенов, помечающих ГСК, сделало возможным гистологическую оценку того, где ГСК располагаются в микроокружении КМ [85]. Исследования показали, что большинство ГСК находились в периваскулярной зоне и только меньшинство из них (меньше 16%) в периэндостальной области. Эти данные согласуются с гипотезой о том, что периваскулярные участки также являются нишей, но есть несколько спорных моментов. Самое важное это то, что ГСК двигаются внутрь и из кровяного русла, таким образом, остается формально возможным то, что клетки собираются вокруг сосудов, потому, что это важная точка в их движении. Если это так, то это не соответствует критериям ниши.

Также в трабекулярном регионе, где располагается большинство ГСК, тяжело распознать все анатомические связи, основываясь на двумерных изображениях. Представляет ли периваскулярная зона истинную нишу в КМ до сих пор требует экспериментального подтверждения. Хотя, возрастные изменения в гемопоэзе предположительно указывают на то, что периваскулярные участки, скорее всего, служат нишами, и существуют исследования in vitro, которые показывают, что эндотелиальные клетки, полученные из различных тканей, могут поддерживать ГСК системы в культуре [15, 42, 98]. В эмбриональном развитии ГСК возникают в желточном мешке, плацента может также служить местом продукции ГСК. Печень плода становится областью, где располагаются ГСК в течение следующего триместра беременности, гемопоэз устанавливается в КМ несколько позже, во втором триместре эмбрионального развития [59, 116, 117]. За исключением КМ все места, где самообновление может быть изолировано в течение эмбрионального развития, лишены остеобластов, но содержат эндотелиальные клетки, которые тесным образом ассоциированы с поколением ГСК [116, 117].

Одним из важных компонентов стромы костного мозга являются потомки МСК ретикулярные клетки. Основным местом их локализации являются интрамедуллярные пространства губчатой кости, включая эндостальные зоны. Кроме того, часто ретикулярные клетки располагаются по периферии сосудов МЦР. Одна из их функций - регуляция миграции зрелых клеток крови из костного мозга в циркуляцию [164].

Микроскопическими исследованиями показано, что эти клетки имеют темное ядро и средних размеров цитоплазму. Часть из них содержит крупные жировые капли.

Интрамедуллярные ретикулярные клетки своими длинными цитоплазматическими отростками пронизывают костномозговые полости и формируют механический каркас, внутри которого располагаются гемопоэтические клетки. Таким образом, они выполняют роль своеобразного "якоря", который задерживает клетки крови и способствует их передвижению в циркуляцию.

Контактируя между собой, а также с костью и сосудами они не позволяют спадаться стенкам синусоидов, состоящих из одного слоя эндотелиальных клеток [42, 160, 164]. Кроме того, в их цитоплазме обнаружены микрофиламенты. Известно, что ретикулярные клетки лимфатических узлов способствуют транспортировке лимфоцитов, по всей вероятности в костном мозге ретикулярные клетки способствуют миграции клеток крови в интрамедуллярных пространствах костномозговых лакун.

Ретикулярные клетки выполняют и более специфические функции. Имея в цитоплазме хорошо развитый белоксинтезирующий аппарат, ретикулярные клетки являются основным источником образования экстрацеллюлярного матрикса, формирующего микросреду интрамедуллярных пространств костного мозга. Синтезируя коллаген, глюкозаминогликаны и другие физиологически активные субстанции, ретикулярные клетки способны непосредственно влиять на процессы пролиферации и дифференцировки кроветворных предшественников.

Особенно следует отметить роль коллагена, который выполняет не только опорную функцию, но и необходим в процессах эмбрио- и морфогенеза, оказывает влияние на рост и дифференцировку клеток. В интрамедуллярных пространствах костного мозга присутствует в основном коллаген I и III типа.

Адипоциты занимают значительное место в костномозговых полостях. Их роль в гемопоэзе пока еще окончательно не ясна, хотя некоторые авторы полагают, что эти клетки также обладают способностью продуцировать гемопоэтические ростовые факторы [152]. В условиях нормального кроветворения жировые клетки заполняют у взрослых все пространство костномозговой полости, не занятое миелоидной тканью. В промежутках между жировыми клетками диффузно расположены гранулоциты. Иногда адипоциты тесно прилежат к поверхности костных балок. При электронно-микроскопическом исследовании можно отметить тесные взаимоотношения преадипоцитов с молодыми гранулоцитарными элементами, в местах межклеточных контактов обнаружены перестройки плазмолемм преадипоцитов. По всей видимости, незрелые жировые клетки оказывают влияние на гранулоцитопоэз. Что касается зрелых жировых клеток, то они являются энергетическими депо костного мозга и лабильным матриксом, легко теряющим липиды для обеспечения развития гемопоэтических клеток в условиях повышенного запроса при различных экстремальных ситуациях. Способность адипоцитов адсорбировать на своей поверхности широкий спектр физиологически активных субстанций позволяет жировым клеткам непосредственно участвовать в гуморальной регуляции процессов пролиферации и дифференцировки гемопоэтических предшественников.

Костномозговые стромальные клетки продуцируют макромолекулы, которые формируют высокоорганизованную структуру, известную как экстрацеллюлярный матрикс.

Главные компоненты экстрацеллюлярного матрикса - коллагены (фибриллярные протеины, продуцируемые ретикулярными и эндотелиальными клетками), фибронектин (гликопротеин, секретируемый ретикулярными клетками и макрофагами), ламинин (гликопротеин, продуцируемый эндотелиальными клетками) и протеогликаны. Экстрацеллюлярный матрикс является не только механической поддержкой для гемопоэтических элементов, но также играет динамическую роль в регуляции гемопоэза [79, 81, 151].

Идентификация двух различных типов клеток, как важных компонентов ГСК ниши, привело ко многим вопросам, на которые до сих пор нет ответов. Остеобласты и эндотелиальные клетки представляют собой отдельные ниши или представляют одну ГСК нишу? Ниши для покоящихся и активированных ГСК одинаковые или они различаются?

Исследования локализации ГСК в их нише in vivo преимущественно основывались на визуализации клеток в гистологических препаратах КМ [50, 85, 112, 175]. Эти двухмерные изображения не отражают действительную трехмерную структуру микроокружения КМ.

Поэтому, такие исследования могут быть лишены правильной анатомической структуры ГСК ниши, которая скорее состоит из многообразия различных клеточных типов, чем привязана к одному типу клеток. Очень вероятно, например, что остеобласт-содержащая ниша ГСК находится в тесной связи с эндотелиальными клетками. Доказательством в пользу этого служат данные о том, что КМ, включая эндостальную поверхность, сильно васкуляризирован [60, 113].

На самом деле, васкуляризация хрящевой пластинки важный процесс в течение формирования эмбриональной кости посредством эндохондрального окостенения, и сокращение кровоснабжения значительно сокращает формирование кости [43, 101, 102]. Более того, кровоснабжение играет ключевую роль в продолжающемся процессе ремоделирования кости [43]. Следовательно, остеобласт-содержащая ГСК ниша, возможно, находится по близости к эндотелиальным клеткам, и эти два типа клеток могут совместно формировать трабекулярную ГСК нишу. Хотя, существуют отдельные участки КМ, в которых эндотелиальные клетки не расположены рядом с остеобластами, в частности, в областях, лишенных трабекулярной кости в центральном участке диафиза [60]. Еще предстоит изучить, локализуются ли эти эндотелиальные клетки также рядом с ГСК или они отличаются от тех, которые были идентифицированы как периваскулярная ГСК ниша. Тем не менее, некоторые недавние исследования предположили существование двух различных ГСК ниш, которые поддерживают неактивные или активированные ГСК.

Некоторые исследователи отмечают, что остеобласт-содержащая ниша представляет собой нишу, в которой ГСК остаются не активированными. На сегодняшний день было показано что, по крайней мере, три молекулы, найденные на поверхности остеобластов (Nкадгерин, ангиопоэтин-1 и тромбопоэтин) регулируют активацию ГСК через взаимодействие с их рецепторами (N-кадгерин, Tie-2 и Mpl соответственно) [30, 67, 73, 166, 172, 175]. Более того, результатом остеобласт-специфической экспрессии канонического ингибитора Wnt-пути dikkopf1 стал выход ГСК из состояния покоя в добавок к уменьшению потенциала трансплантанта ГСК [67]. Эти данные позволяют предположить, что Wnt-сигналинг в нише важен для поддержания покоя и самообновления ГСК. В периваскулярной нише наоборот ГСК находятся в более активированном состоянии. Таким образом, активированные ГСК включают в себя ГСК, находящиеся в цикле и те ГСК, которые были подвергнуты стрессу, такому как добавление химиотерапевтических медикаментов или (например, 5-фторурацил циклофосфоамид) или цитокинов [110, 124, 166, 174]. До сих пор не ясно, может ли такая ниша являться временной для ГСК, представляет ли она собой стабильную нишу для отдельной популяции ГСК или ГСК в периваскулярной нише были транзитом, когда их визуализировали.

Также неизвестно имеют ли все остеобласты и эндотелиальные клетки одинаковый потенциал поддержки ГСК или специализированные остеобласты/эндотелиальные клетки, специфические размещения остеобластов/эндотелиальных клеток имеют разные роли в регуляции ГСК. Например, трабекулярные остеобласты изначально были идентифицированы как часть ГСК ниши, хотя, обычно мы ссылаемся на ГСК нишу как на эндостальную поверхность, которая относится как к кортикальной, так и к трабекулярной кости [48, 175].

Известно, что кортикальная и трабекулярная кости различаются по своему анатомическому положению, структуре и функциям. Кортикальная кость расположена в диафизальном участке трубчатой кости, она тонкая и плотная (80–90% кости кальцифицировано) и считается, что она выполняет, главным образом, механические и защитные функции. И, наоборот, трабекулярную кость можно найти в метафизарном участке кости, она менее плотная (15–25% кальцифицированно) и выполняет, в большинстве своем, метаболическую функцию [34]. Еще предстоит определить, имеют или нет остеобласты при различных анатомических локализациях разные роли в отношении регулирования ГСК. В этом направлении особое значение приобретает анализ и выявление в гетерогенной группе клеточных элементов эндоста популяции CD146+ клеток. Указанные клетки, обладая остеогенным потенциалом, необходимы для поддержания кроветворения. В эксперименте гемопоэз прекращался при их отсутствии.

Подобным образом, эндотелиальные клетки - это специализированные клетки, которые имеют различные функции в различных тканях и органах, также существуют различия в свойствах и функциях эндотелиальных клеток, полученных из разного размера кровеносных сосудов, артерий и капилляров [35]. Более того, было показано, что ГСК привязаны к специфическим микродоменам, экспрессирующим CXCL12 в кровеносных сосудах КМ, что позволяет предположить, что специфические участки эндотелиальных клеток могут функционировать как периваскулярная ГСК ниша [139].

Таким образом, обладающие различной функциональной способностью эндостальные клетки губчатой кости, сосуды МЦР и эстрацеллюлярный матрикс являются основными образованиями стромального микроокружения кроветворной ниши, играющими ключевую роль в самоподдержании, пролиферации и дифференцировке ГСК.



Pages:   || 2 | 3 | 4 | 5 |

Похожие работы:

«ЖУРАВЛЕВА МАРИЯ СПАРТАКОВНА Количественная характеристика показателей иммунного ответа у кур на различные типы антигенов 06.02.02 – ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология Диссертация на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук Научный руководитель:...»

«ПОРЫВАЕВА Антонина Павловна ТЕОРЕТИЧЕСКИЕ И ПРАКТИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ МОДЕЛИРОВАНИЯ ХРОНИЧЕСКОЙ ГЕРПЕСВИРУСНОЙ ИНФЕКЦИИ 03.02.02 Вирусология ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени доктора биологических наук Научный консультант: доктор медицинских наук, профессор Глинских Нина Поликарповна Екатеринбург 2015 ОГЛАВЛЕНИЕ 1 ВВЕДЕНИЕ 2 ОСНОВНАЯ ЧАСТЬ 2.1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ...»

«Палаткин Илья Владимирович Подготовка студентов вуза к здоровьесберегающей деятельности 13.00.01 общая педагогика, история педагогики и образования Диссертация на соискание ученой степени кандидата педагогических наук Научные руководители: доктор биологических наук, профессор,...»

«СЕРГЕЕВА ЛЮДМИЛА ВАСИЛЬЕВНА ПРИМЕНЕНИЕ БАКТЕРИАЛЬНЫХ ЗАКВАСОК ДЛЯ ОПТИМИЗАЦИИ ФУНКЦИОНАЛЬНО-ТЕХНОЛОГИЧЕСКИХ СВОЙСТВ МЯСНОГО СЫРЬЯ И УЛУЧШЕНИЯ КАЧЕСТВА ПОЛУЧАЕМОЙ ПРОДУКЦИИ Специальность 03.01.06 – биотехнология ( в том числе бионанотехнологии) Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель Доктор биологических наук, профессор Кадималиев Д.А. САРАНСК 2014 ОГЛАВЛЕНИЕ ВВЕДЕНИЕ.....»

«Ульянова Онега Владимировна МЕТОДОЛОГИЯ ПОВЫШЕНИЯ БЕЗОПАСНОСТИ БАКТЕРИАЛЬНЫХ ВАКЦИН НА МОДЕЛИ ВАКЦИННЫХ ШТАММОВ BRUCELLA ABORTUS 19 BA, FRANCISELLA TULARENSIS 15 НИИЭГ, YERSINIA PESTIS EV НИИЭГ 03.02.03 – микробиология Диссертация на соискание ученой степени доктора биологических наук Научный консультант:...»

«Кошелева Оксана Владимировна НАЕЗДНИКИ СЕМЕЙСТВА EULOPHIDAE (HYMENOPTERA, CHALCIDOIDEA) СТАВРОПОЛЬСКОГО КРАЯ СО СПЕЦИАЛЬНЫМ ОБСУЖДЕНИЕМ ПОДСЕМЕЙСТВА TETRASTICHINAE 03.02.05 – энтомология Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: доктор биологических наук, С. А. Белокобыльский Санкт-Петербург...»

«ГАЛИНИЧЕВ АНДРЕЙ ВАСИЛЬЕВИЧ ЦИКАДОВЫЕ (HEMIPTERA, CICADINA) УРАЛА: СОСТАВ ФАУНЫ, ЭКОЛОГИЯ И ХОРОЛОГИЯ 03.02.08 – экология (биологические науки) Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: доктор биологических наук, профессор Г. А. Ануфриев...»

«Решетникова Татьяна Валерьевна ФОРМИРОВАНИЕ ОРГАНИЧЕСКОГО ВЕЩЕСТВА ПОЧВЫ В КУЛЬТУРАХ ОСНОВНЫХ ЛЕСООБРАЗУЮЩИХ ПОРОД СИБИРИ Специальность 03.02.08 – «Экология (биология)» Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: доктор биологических наук Э.Ф. Ведрова Красноярск 2015 Содержание Введение..5 Глава 1....»

«КУРБАТОВА Ольга Леонидовна ДЕМОГРАФИЧЕСКАЯ ГЕНЕТИКА ГОРОДСКОГО НАСЕЛЕНИЯ 03.02.07 – генетика 03.03.02 – антропология ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени доктора биологических наук МОСКВА – 2014 ОГЛАВЛЕНИЕ ВВЕДЕНИЕ ГЛАВА 1. Материалы и методы ГЛАВА 2. Влияние процессов миграции на генофонды городских популяций 2.1. Теоретические предпосылки 12 2.2....»

«СЕТДЕКОВ РИНАТ АБДУЛХАКОВИЧ РАЗРАБОТКА НОВЫХ СРЕДСТВ СПЕЦИФИЧЕСКОЙ ПРОФИЛАКТИКИ И ЛЕЧЕНИЯ ЭШЕРИХИОЗОВ ТЕЛЯТ И ПОРОСЯТ 06.02.02 – ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология Диссертация на соискание ученой степени доктора ветеринарных наук Научный консультант: доктор ветеринарных наук, профессор, заслуженный деятель науки РФ и РТ Юсупов...»

«Шатских Оксана Алексеевна МОРФОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ТИМУСА В УСЛОВИЯХ ПОСТУПЛЕНИЯ МЕЛАТОНИНА Специальность 03.03.04. – клеточная биология, цитология, гистология Диссертация на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Научный руководитель: доктор биологических наук, профессор Сергеева В. Е. Чебоксары...»

«ХОАНГ ЗИЕУ ЛИНЬ ЭКОЛОГИЗАЦИЯ ЗАЩИТЫ КАПУСТНЫХ КУЛЬТУР ОТ ОСНОВНЫХ ЧЕШУЕКРЫЛЫХ ВРЕДИТЕЛЕЙ В УСЛОВИЯХ МОСКОВСКОГО РЕГИОНА Специальность: 06.01.07 – защита растений Диссертация на соискание учёной степени кандидата биологических наук Научный руководитель: Попова Татьяна Алексеевна, кандидат биологических наук, доцент...»

«Сергеева Ольга Вячеславовна ВОЗДЕЙСТВИЕ ДНОУГЛУБИТЕЛЬНЫХ РАБОТ В ПОРТУ СОЧИ НА ДОННЫХ БЕСПОЗВОНОЧНЫХ И СРЕДУ ИХ ОБИТАНИЯ 03.02.10 – гидробиология ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: кандидат биологических наук, доцент Мария Владимировна Медянкина Москва – 2015 Оглавление ВВЕДЕНИЕ Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 1.1. Макрозообентос прибрежной части Черного моря, включая портовые акватории 1.2. Ихтиофауна портовых акваторий,...»

«СИДОРОВА ТАТЬЯНА АЛЕКСАНДРОВНА ОСОБЕННОСТИ АДАПТИВНЫХ РЕАКЦИЙ У ДЕВУШЕК К УСЛОВИЯМ ГОРОДСКОЙ СРЕДЫ 03.02.08 Экология Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: доктор биологических наук, доцент Драгич О.А. Омск-2015 СОДЕРЖАНИЕ Введение.. Глава 1 Обзор литературы.. 1.1. Механизмы адаптации организма человека к окружающей среде 1.2. Закономерности развития...»

«Храмцов Павел Викторович ИММУНОДИАГНОСТИЧЕСКАЯ СИСТЕМА ДЛЯ ОЦЕНКИ НАПРЯЖЕННОСТИ ПОСТВАКЦИНАЛЬНОГО ИММУНИТЕТА К КОКЛЮШУ, ДИФТЕРИИ И СТОЛБНЯКУ 14.03.09 – Клиническая иммунология, аллергология Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: доктор биологических наук, Раев Михаил Борисович...»

«Коротких Алина Сергеевна БИОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА И СЕЛЕКЦИОННАЯ ОЦЕНКА ВИДОВ И СОРТОВ РОДА NARCISSUS L. В УСЛОВИЯХ ЮГО-ЗАПАДА ЦЧЗ (НА ПРИМЕРЕ БЕЛГОРОДСКОЙ ОБЛАСТИ) 06.01.05 – селекция и семеноводство сельскохозяйственных растений ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой...»

«АБДУЛЛАЕВ Ренат Абдуллаевич ГЕНЕТИЧЕСКОЕ РАЗНООБРАЗИЕ МЕСТНЫХ ФОРМ ЯЧМЕНЯ ИЗ ДАГЕСТАНА ПО АДАПТИВНО ВАЖНЫМ ПРИЗНАКАМ Шифр и наименование специальности 03.02.07 – генетика 06.01.05 – селекция и семеноводство сельскохозяйственных растений ДИССЕРТАЦИЯ на соискание учёной степени кандидата...»

«_ ТЕМИРОВ Николай Николаевич КОРРЕКЦИЯ АФАКИИ РАЗЛИЧНОГО ГЕНЕЗА МУЛЬТИФОКАЛЬНЫМИ ИНТРАОКУЛЯРНЫМИ ЛИНЗАМИ С АСИММЕТРИЧНОЙ РОТАЦИОННОЙ ОПТИКОЙ Специальность 14.01.07 – «Глазные болезни» ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Научный руководитель: доктор медицинских...»

«СЕРОВА ТАТЬЯНА АЛЕКСАНДРОВНА МИКОБИОТА ДЕРЕВЯННЫХ КОНСТРУКЦИЙ ИСТОРИЧЕСКИХ ЗДАНИЙ САНКТ-ПЕТЕРБУРГА Специальность: 03.02.12 – микология ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: Титова Ю. А. кандидат биологических наук Санкт-Петербург Стр. Оглавление ВВЕДЕНИЕ.. 4 ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.. 11...»

«Мухаммед Тауфик Ахмед Каид ХАРАКТЕРИСТИКА ГЕНОТИПОВ С ХОРОШИМ КАЧЕСТВОМ КЛЕЙКОВИНЫ, ОТОБРАННЫХ ИЗ ГИБРИДНЫХ ПОПУЛЯЦИЙ АЛЛОЦИТОПЛАЗМАТИЧЕСКОЙ ЯРОВОЙ ПШЕНИЦЫ МЯГКОЙ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ДНК-МАРКЕРОВ Специальность 06.01.05 – селекция и семеноводство сельскохозяйственных растений Диссертация на соискание ученой степени кандидата сельскохозяйственных наук Научный...»







 
2016 www.konf.x-pdf.ru - «Бесплатная электронная библиотека - Авторефераты, диссертации, конференции»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.