WWW.KONF.X-PDF.RU
БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА - Авторефераты, диссертации, конференции
 


Pages:     | 1 | 2 || 4 | 5 |

«РОЛЬ НОРМАЛЬНОЙ МИКРОФЛОРЫ И ЛИЗОЦИМА В ВЫБОРЕ ПРОБИОТИЧЕСКИХ ШТАММОВ ДЛЯ ПРОФИЛАКТИКИ АЛЛЕРГИЧЕСКИХ ЗАБОЛЕВАНИЙ У СТУДЕНЧЕСКОЙ МОЛОДЕЖИ СЕВЕРА ...»

-- [ Страница 3 ] --

Анализ литературы и источников патентной информации свидетельствует, что внимание к ацидофильным лактобактериям в последние годы неуклонно растёт.[73, 146] В то же время в ряде работ лактобациллы рассматриваются и как потенциальные возбудители патологических состояний.[187, 223, 224] Важно, что исследователи отмечают обособленное положение представителей данного вида как не участвующих в развитии каких-либо известных патологических процессов, раскрывая всё новые стороны их полезного влияния на организм.

[66, 116, 143, 209] Это нашло свое отражение в формировании новых направлений использования ацидофильных лактобацилл при конструировании медицинских средств лечебно-профилактического назначения.[2, 66, 139, 210] Широко используются фармакопейные препараты, включающие убитые клетки, лизаты, очищенные экстракты и другие биологически активные компоненты микроорганизмов данного вида, что значительно увеличило потенциальные возможности применение пробиотиков в клинической практике.[5. 6, 82, 154] Живые культуры ацидофильных лактобацилл применяются как в форме нативных кисломолочных взвесей моновидового состава, так и в виде компонента поливидовых продуктов, в том числе йогуртов.[5, 56, 158] Убедительно показана клиническая эффективность в нормализации микрофлоры ацидофильными лактобактериями различных форм патологии желудочно-кишечного тракта[73], отмечен эффект иммунокоррекции у лиц с пищевой аллергией[107, 143, 236], но не описан механизм, объясняющий достаточно полно участие микроорганизмов в полученном положительном эффекте.[59] Рассматривая значение микрофлоры, регулярно поступающей в организм в качестве пищевого продукта, важно отметить современное состояние вопроса диетического питания.[68] Считается, что концептуальная база науки о питании достаточно полно разработана. Необходимо признать наличие разных теоретических позиций между специалистами в данной области.[38, 68] Представлена позиция, показывающая, что условия общепринятой концепцией сбалансированного питания не в полной мере учитывают механизмы, поддерживающие микробный биоценоз желудочно-кишечного тракта. Наряду с традиционным подходом в организации сбалансированного питания обосновано функциональное питание.[42, 56, 68, 144, 220] В этом направлении расширяется представление о процессе питания с учётом определённой роли микрофлоры в жизнедеятельности организма человека.[42, 68, 144, 214] Под термином «функциональное питание» подразумевают использование таких продуктов естественного происхождения, которые при ежедневном применение оказывают определённое регулирующие действие на организм в целом или на его определённые системы. К основным категориям функционального питания относят пищевые волокна, а также продукты, содержащие бифидобактерии и олигосахариды.[42, 68, 144, 214] Чтобы разобраться в многообразии пробиотических штаммов и точно использовать их по назначению, необходимо, особенно свежевыделенные изоляты, надежно идентифицировать, то есть определить их правильное таксономическое положение.[2, 73, 173] Ведётся целенаправленный поиск наиболее активных во всех отношениях штаммов. При этом особое внимание уделяется их всесторонней характеристике, включая строение генома и наличие плазмид. О составе и функциях плазмид желательно знать для обеспечения безопасности биопрепаратов в смысле нераспространения региональной антибиотикорезистентности, а данные о первичной структуре хромосомной ДНК нужны для правильной идентификации стартерных культур.[32, 70, 223] При конструировании пробиотиков необходимо вести поиск штаммов не только активных в лечебно-профилактическом отношении, но и безопасных в смысле распространения R-генов. В идеальном случае – это должны быть штаммы, устойчивые к антибиотикам, но за счёт детерминируемости хромосомными генами, то есть надо стараться подбирать бесплазмидные штаммы.[70, 149] Знание не только полезных, но и возможных негативных эффектов, используемых бактериологических препаратов с антимикробным действием позволило сформулировать основные принципы отбора производственных штаммов пробиотиков. Учитывалось, в первую очередь, поведение бактериальных популяций в условиях естественных биотопов, но в меньшей степени принималось во внимание биохимическая активность микроорганизмов по накоплению биогенных аминов.[23, 56, 68] Дискутируются позиции применения антибиотиков и пробиотиков. В работе Белобородова В.Б.[13] ставится вопрос, почему клиническая эффективность целенаправленной антимикробной терапии может быть ниже предполагаемой. К числу проблем, связанных с применением антибиотиков, относятся рост антибиотикорезистентности, рост резистентности к -лактамным препаратам за счёт

-лактамаз расширенного спектра у Enterobacreriaceae, увеличение частоты обнаружения полирезистентных штаммов. Подчеркивается необходимость молекулярно-генетического типирования Staphylococcus aureus на примере метициллинрезистентных штаммов, выделенных в стационарах различных регионов Российской Федерации.[41] Не вызывает сомнений, что даже после относительно лёгкого эпизода заболевания у значительной части больных остаются незавершёнными репаративные процессы в кишечнике, нуждается в поддержке пристеночное и полостное пищеварение, не восстановлены структуры микробной экологии, не нормализован кишечный транзит и не разрешены полностью иммунопатологические процессы. Дальнейшая антимикробная терапия не может решить эти задачи. В то же время рациональное применение пробиотиков будет способствовать скорейшему завершению патологических процессов в кишечнике.[47, 50] Проведённый обзор литературы о значении лактобацилл в конструировании пробиотических препаратов указывает, что эволюционный аспект происхождения, определённая роль в биосфере и микробной экологии организма человека, а также изученные к настоящему времени потенциальные биохимические возможности представителей рода Lactobacillus Beijerink 1901 позволили прийти к заключению о целесообразности сделать их предметом более пристального исследования. Прежде всего, по влиянию лактобацилл на механизмы, формирующие биоценоз организма человека.

Важным моментом в структуре доказательной медицины является методический подход статистической обработки медико-биологической информации, где практическое отражение находят методы не просто статистической обработки первичного материала, а многомерной статистики в интересах моделирования сложных медико-биологических систем.[56, 97, 102] Методы оценки и моделирования многофакторного эксперимента, дисперсионного и регрессионного анализа результатов исследования с учётом множества признаков и факторов, рассмотрены в современных обзорах и реализованы в ряде проведённых исследований.[77, 102] В ряде работ по системному анализу биосистем применяется программа идентификации параметров аттракторов поведения вектора состояния биосистем в m-мерном пространстве, разработанная Еськовым В.М. с соавт.[23, 39] В медико-биологических исследованиях широко используются материалы монографии по непараметрическим методам статистики Гублера Е.В.[30], посвящённой преимущественно методам, которые применяются для классификации, диагностики и прогнозирования различных состояний нормы и патологии организма человека. Представленный в этой работе последовательный статистический анализ А. Вальда относится к широко применяемым в медицине вероятностным методам. Автором метода предложена так называемая однородная процедура, имеющая целью отнесение группы объектов к какому-либо классу на основе многократного измерения одного признака в этой группе. Эта процедура модифицирована Е.В. Гублером и А.А. Генкиным под названием неоднородной. Модификация состоит в измерении ряда признаков у одного объекта (симптомов у больного) и имеет целью отнесение объекта к определённому классу. Неоднородная процедура впервые применена на примере диагностики ожоговой болезни. В ходе последовательного получения информации о характеристиках симптома или синдромах достигается определённый уровень вероятности диагноза.[30] Многомерный анализ вместе с математическим прогнозом значительно повышает эффективность исследований и позволяет прогнозировать функциональное состояние организма и оценить эффективность проводимых лечебно-профилактических мероприятий.[23, 56, 77] Реализация современных методических приёмов статистического анализа исследований связана с разработкой новых программ вычислительной техники и нашло отражение в работах.[39, 134] Практическое применение постоянно разрабатываемых современных математических приёмов в анализе результатов клинических исследований является перспективным направлением в клинической микробиологии. Использование классических методов оценки достоверности различий в исследуемых груп

–  –  –

2.1. Оценка содержания лизоцима и гистамина в слюне бактерионосителей Staphylococcus spp.

Показатели видового и количественного состояния микрофлоры слизистой оболочки носа и зева у студенческой молодежи представлены в таблице 1.

Таблица 1 – Частота встречаемости Staphylococcus spp. на слизистой оболочки носа, зева у студенческой молодежи, n=192

–  –  –

Из таблице 1 следует, что среди студенческой молодежи выделение со слизистой оболочки носа Staphylococcus spp. с наличием роста 103 и более микробных клеток на тампон отмечено у 47,9% лиц. Индикация представителей S. aureus со слизистой оболочки зева наблюдалась у 28,6% исследуемых. Из этого количества лиц у 64,0% (35 человек, что составило 18,3% от числа всех исследуемых) плотность бактерий была 103 и более микробных клеток на тампон. Установлена высокая частота выделения и бактерионосительства S. epidermidis с гемолитической активностью (48,4% исследуемых лиц).

Микрофлора слизистой оболочки зева у студенческой молодежи характеризовалась меньшим количеством лиц с наличием КОЕ 3lg микробных клеток на тампон как изолятов Staphylococcus spp. (32,3%), так и изолятов S. aureus (15,6%).

При сравнении сообщества микроорганизмов на слизистой оболочке носа и зева по показателю процентного сходства установлено, что сходство количественного участия популяций Staphylococcus spp. в образующихся биоценозах составляло 79,5%.

Показатели содержания лизоцима и гистамина в слюне у студенческой молодежи приведены в таблице 2.

–  –  –

Из таблицы 2 следует, что содержание лизоцима в слюне студенческой молодежи находилось в диапазоне от 0,0 мкг/мл до 14,9 мкг/мл. Величина средней арифметической составляла 4,7±0,3 мкг/мл. Показатель медианы по абсолютной величине меньше, чем среднее арифметическое (составлял 3,4 мкг/мл) и ещё ниже уровень показателя моды (2,4 мкг/мл), (MoMeМ2,43,44,7). Соотношение моды, медианы и средней арифметической содержания лизоцима, а также коэффициента ассиметрии (А = 0,85) и эксцесса (Е = 0,6), величины которых характерны для выраженной ассиметрии с плосковершинным распределением, позволяют оценить характер распределения признака как правосторонняя асимметрия. Также возможно сделать заключение, что наиболее распространённым является показатель 2,4 мкг/мл (Мо), при этом половина исследуемых имели показатель содержания лизоцима свыше 3,4 мкг/мл и среднем уровне в группе 4,7 мкг/мл.

При сравнении полученных результатов с показателями содержания лизоцима у жителей той же возрастной группы города Оренбурга [17] установлено, что в условиях Севера этот показатель в 1,7 раза меньше (4,7 мкг/мл и 8,04 мкг/мл, соответственно).

Показатели концентрации гистамина в слюне, опредёляемые методом ИФА, характеризовались диапазоном от 0,0 до 8,3 нг/мл. Показатель средней арифметической составлял 2,0 нг/мл. Меньшими по абсолютной величине были показатель медианы (1,3 нг/мл) и показатель моды, равный 0,0 нг/мл. Вариационный ряд концентрации гистамина в слюне характеризовался значительной величиной коэффициента ассиметрии (0,95) и по показателю эксцесса характеризовался островершинным распределением (Е=2,9). Содержание гистамина в слюне, как и лизоцима, указывало на характер распределения признака также по признаку правосторонней асимметрии (MoMeМ01,31,9). Наиболее распространённым был показатель содержания гистамин в слюне равный 0 нг/мл, в то время половина исследуемых имели показатель содержания гистамина свыше 1,3 нг/мл.

Показатели содержания лизоцима в слюне у бактерионосителей Staphylococcus spp. среди студенческой молодежи представлены в таблице 3. Из таблицы 3 следует, что наибольшее содержание лизоцима в слюне отмечено в группе бактерионосителей S. еpidermidis без гемолитической активности (7,5±0,3 мкг/мл).

У бактерионосителей вида S. еpidermidis с гемолитической активностью содержание лизоцима в слюне значительно снижалось и составляло 4,4±0,2 мкг/мл (Р0,05). Самое низкое содержание лизоцима отмечено у носителей S. аureus (3,3±0,2; Р0,05).

Таблица 3 – Концентрация лизоцима и гистамина в слюне бактерионосителей

–  –  –

Примечание: Р – достоверность отличия показателей по сравнению с бактерионосителями S. epidermidis, HlyПоказатели концентрации гистамина в слюне имели отличную динамику.

Самые низкие концентрации гистамина отмечены в группе бактерионосителей S.

еpidermidis без гемолитической активности (1,1±0,1 нг/мл) и значительно возрастали в группах бактерионосителей S. еpidermidis с гемолитической активностью и S. aureus (2,1±0,1 нг/мл и 2,3±0,1 нг/мл, соответственно).

Соотношение величин концентрации лизоцима и гистамина для всей исследуемой группы студенчества составило 2,4, а для бактерионосителей S.

еpidermidis без гемолитической активности эта величина составляла 6,8 и существенно изменялась у бактериносителей S. epidermidis Hly+ и S. aureus (2,1 и 1,4, соответственно).

Расчёт коэффициента линейной корреляции (Пирсон-r) показал, что его величина – 0,9 указывает на сильную обратную связь концентрации лизоцима и гистамина в слюне.

Выраженная правосторонняя ассиметрия в рядах распределения лизоцима и гистамина при островершинном эксцессе для гистамина и плосковершинном для лизоцима определили необходимость дальнейшего исследования их взаимоотношения в слюне бактерионосителей с использованием метода сигмальных отклонений.

Профиль содержания лизоцима в группах бактерионосителей Staphylococcus spp. и диагностические коэффициенты уровня содержания лизоцима представлен в таблице 4.

Из таблицы 4 следует, что в группе бактерионосителей S. epidermidis, Hlyу подавляющего большинства исследуемых лиц содержание лизоцима больше среднего показателя и в 40,6% случаев характеризовалось как «выше среднего», в 37,5% случаев как «высокое» и в 6,3% случаев как «очень высокое».

В группе бактериносителей S. epidermidis, Hly+ содержание лизоцима у исследуемых лиц находилось в диапазоне от –2G до +2G. Наибольшее число лиц носителей S. еpidermidis с гемолитической активностью имели содержание лизоцима в пределах «ниже среднего» (в диапазоне –1G находилось 47,6% случаев) и «низкое» (в диапазоне –2G находилось 7,1% случаев).

–  –  –

Расчёт диагностических коэффициентов по методу последовательной диагностической процедуры, разработанной А. Вальдом [33], позволил получить наибольшие величины диагностического коэффициента в 6 баллов и 9 баллов при достоверной величине информативности (I равен 1,06 и 0,9, соответственно) для диапазона с содержанием лизоцима «ниже среднего» и «низкое» у бактерионосителей S. аureus. Диагностические коэффициенты в 4 балла и 6 баллов при статистически достоверной информативности (I равное 0,9) указывают на диагностически значимое снижение содержания лизоцима у бактерионосителей S. epidermidis, Hly+.

Все показатели содержания лизоцима в слюне по профилю «выше среднего» имели диагностические коэффициенты со знаком «минус».

Профиль содержания гистамина в группах бактерионосителей Staphylococcus spp. и диагностические коэффициенты уровня содержания лизоцима представлены в таблице 5.

–  –  –

Из таблицы 5 следует, что среди бактерионосителей S. epidermidis, Hly- у большинства исследуемых лиц (65,6% случаев) содержание гистамина было «ниже среднего». Содержание гистамина в слюне составило меньше 1,9 нм /мл.

61 В группе бактерионосителей S. epidermidis Hly+ содержание гистамина значительно увеличивалось. Большинство показателей концентрации гистамина находилось в диапазоне выше среднего от +1G до +3G (71,5% случаев). Наибольшее число лиц носителей S. еpidermidis Hly+ имели содержание гистамина в слюне в пределах +1G, т. е. «выше среднего» (42,9% случаев).

В группе бактерионосителей S. аureus в подавляющем числе случаев (88,9%) содержание гистамина в слюне выше среднего. При этом в 35,6% случаев показатели гистамина находились в диапазоне +2G, что оценивается как «высокое».

Показатели концентрации гистамина в диапазоне «выше среднего» имели величину диагностического коэффициента в 1 и 2 балла. Наибольшие величины диагностического коэффициента в 6 и 8 баллов при достоверной величине информативности отмечены для диапазона с содержанием гистамина «высокое» (I 0,5).

Показатели содержания гистамина в слюне в диапазоне «ниже среднего»

имели диагностические коэффициенты со знаком «минус».

Оценка содержания лизоцима и гистамина в слюне бактерионосителей Staphylococcus spp. показала, что наибольшее содержание лизоцима в слюне отмечено в группе бактерионосителей S. еpidermidis Hly-. У бактерионосителей S. еpidermidis Hly+ содержание лизоцима в слюне значительно снижалось. Самое низкое содержание лизоцима отмечено у бактерионосителей S. аureus. В группе бактерионосителей S. еpidermidis Hly- установлено наименьшее содержание гистамина в слюне.

У бактерионосителей S. еpidermidis Hly+ содержание гистамина в слюне значительно увеличивалось и самое высокое содержание гистамина наблюдалось в группе бактерионосителей S. аureus. Показатели содержания лизоцима и гистамина в ротовой жидкости находится в обратной сильной корреляционной зависимости.

2.2. Биоценоз слизистой оболочки носа и зева, содержание лизоцима и гистамина в группах риска по аллергическому риниту и атопическому дерматиту Показатели распространённости симптомов аллергического ринита и атопического дерматита среди студенческой молодежи, проживших в условиях Севера не менее 10 лет, по результатам опроса представлены в таблицах 6 и 7.

Таблица 6 – Диагностические коэффициенты клинических проявлений аллергического ринита среди студенческой молодежи

–  –  –

– – – – I 0,89 3,6 2,4 3,3 Примечание: информативность показателей достоверна при Imin=0,5.

Из таблицы 6 следует, что характерные клинические проявления аллергического ринита среди студенческой молодежи встречались с частотой 10,4% в проявлении коньюктивита (на 100 опрошенных), 18,2% случаев в чихании, в 24,4% случаев заложенности носа и 26,0% исследуемых лиц отмечали серозистослизистое отделяемое из носа.

В группе риска АР с наибольшей частотой отмечены клинические проявления заложенности носа (93,5%), чихания (67,7%), отделяемого из носа (83,9%).

Диагностические коэффициенты этих клинических проявлений составляли 10баллов с достаточной степенью информативности (I0,5).

–  –  –

Показатели диагностических коэффициентов клинических проявлений атопического дерматита среди студенческой молодежи представлены в таблице 7. Из таблицы следует, что характерные клинические проявления атопического дерматита среди студенческой молодежи встречались с частотой на 100 опрошенных от 14,6% в проявлении зуда кожных покровов до 22,4% лиц, которые отмечали шелушение.

В группе риска АтД все исследуемые отметили типичную локализацию проявлений на коже, которая в 87,5% сочеталась с зудом и в 84,4% случаев с шелушением. Диагностические коэффициенты этих клинических проявлений составляли 11-12 баллов с достаточной степенью информативности (I0,5).

Важно отметить, что 84 респондента (43,8% случаев) из общего контингента исследуемых студентов указали на наличие заболеваний желудочно-кишечного тракта, 26 из которых вошли в группу риска АтД, что составило в этой группе 81,3% и соответствовало ДК в 3 балла (I0,5). По данным Нефедовской Л. В. [84] частота заболеваний желудочно-кишечного тракта со слов опрошенных студентов Казанского университета увеличивалась в процессе обучения и составляла в возрасте 20 лет и старше 50,4 лиц на 100 опрошенных.

Показатели семейного аллергологического анамнеза исследуемых групп студенческой молодежи представлены в таблице 8.

Таблица 8 – Диагностические коэффициенты семейного аллергологического анамнеза исследуемых групп студенческой молодежи

–  –  –

Из таблице 8 следует, что показатели семейного аллергологического анамнеза студентов из группы риска АР имеют диагностические коэффициенты от 3 до 5 баллов при информативности менее 0,05 (I0,5). Диагностические коэффициенты семейного аллергологического анамнеза при атопическом дерматите имели величину от 6 до 8 баллов при достаточной степени информативности (I0,5).

Показатели видового и количественного состояния микрофлоры слизистой оболочки носа в группе сравнения и исследуемых группах риска представлены в таблице 9.

–  –  –

более 3lg Примечание: *Р – достоверность отличия показателей по сравнению с ГС, Р0,05 Из таблицы 9 следует, что в группах риска наблюдалось увеличение числа случаев с повышенным содержанием микроорганизмов рода Staphylococcus spp.

на слизистой оболочки носа в 2,9 Раз (КОЕ/мл более 3lg 74,2±7,9 в группе АР и 75,0±7,7в группе АтД, Р0,05).

Выделение S. aureus со слизистой оболочки носа в группе сравнения составило 12,9±6,0%. В группах риска носительство S. aureus значительно выше (в 3,6

– 3,7 раза) и составляло 48,3±9,0% в группе АР и 46,9±8,8% в группе АР (Р0,05).

Важно отметить, что в исследуемых группах АР и АтД наблюдалось и значительное увеличение частоты выделения со слизистой оболочки носа S. aureus в количестве более 3lg (в 5,5-5, 8 раза по сравнению с ГС) и составляло 35,5±8,6 в группе АР и 37,6±8,6% в группе АтД (Р0,05).

При оценке потенциала патогенности микрофлоры слизистой оболочки носа необходимо отметить значительное увеличение частоты выделения в группах риска S. epidermidis Hly+ плотностью КОЕ/мл более 3lg (38,7±8,7% в группе АР и 40,6±8,7% в группе АтД; Р0,05).

Применение метода последовательной диагностической процедуры, разработанной А. Вальдом[33, 59], позволило определить диагностическую значимость частоты выделяемых микроорганизмов в каждой исследуемой группе. Диагностическая информативность вышеперечисленных показателей микрофлоры слизистой оболочки носа представлена в таблице 10.

Таблица 10 – Диагностическая информативность микрофлоры слизистой оболочки носа в исследуемых группах

–  –  –

стинальными и аллергическими заболеваниями среди жителей Севера. Автором установлено, что диагностические коэффициенты в этих группах составляли 4 балла и повышались до 5 баллов при выделении S. epidermidis с гемолитическими свойствами.[56] Определение пороговой суммы диагностических коэффициентов позволяет установить, что их величины при ДК «плюс 6» соответствуют допустимой доле ошибки в 20,0%. При величине ДК равном «плюс 9» допустимая доля ошибки не превышает 10,0%. Величина ДК равная «плюс 13» соответствует допустимой доле ошибки не более 5,0%. Достижение определённого порога позволит вынести решение «заболевание» с прогнозируемым процентом ошибки.[30] В проведенных нами исследовании выявление S. aureus и S. epidermidis КОЕ/мл более 3 lg по каждому показателю соответствует диагностическим коэффициентам в 5-8 баллов при достаточной информативности (I0,5). Сумма ДК нескольких показателей при достижении порога в 13 баллов позволяет сделать заключение с величиной ошибки не более 5%.

Показатели видового и количественного состояния микрофлоры слизистой оболочки зева в исследуемых группах риска представлены в таблице 11.

Таблица 11 – Видовой и количественный состав микрофлоры слизистой оболочки зева в группах риска по аллергическим заболеваниям

–  –  –

Примечание: *Р – достоверность отличия показателей по сравнению с ГС, Р0,05.

Из таблицы 11 следует, что на слизистой оболочке зева в группах риска по сравнению с ГС наблюдалось достоверное увеличение числа случаев с повышенным содержанием Staphylococcus spp. (КОЕ/мл более 3lg 51,6±9,0 в группе риска АР и 59,4±8,7 в группе риска АтД, Р0,05).

Выделение S. aureus со слизистой оболочки зева в группе сравнения составило 9,7±5,3%. В группах риска показатель частоты носительство S. aureus значительно выше и составлял 48,4±9,0% в группе АР и 50,0±8,8% в группе АтД (Р0,05). При этом наблюдалось и значительное увеличение частоты выделения со слизистой оболочки зева S. aureus в количестве более 3lg, которое составило от 19,4±7,1% в группе АР до 21,9±7,3% случаев в группе АтД (Р0,05).

Как со слизистой оболочки носа, так и со слизистой оболочки зева в группах риска отмечалось значительное увеличение частоты выделения S. epidermidis Hly+ с плотностью микроорганизмов КОЕ/мл более 3lg (32,3±8,4 в группе АР и 37,5±8,6 в группе АтД; Р0,05).

Диагностическая информативность микрофлоры слизистой оболочки зева в исследуемых группах риска (таблица 11) представлена в таблице 12.

–  –  –

новлены при выделении S. epidermidis Hly+ с плотностью микроорганизмов КОЕ/мл более 3lg Показатели содержания лизоцима в слюне в группах риска АР и АтД среди студенческой молодежи представлены в таблице 13.

–  –  –

чимость имеет индикация S. aureus и S. epidermidis с гемолитической активностью. Диагностическая значимость индикации этих микроорганизмов в количестве КОЕ более 3 lg значительно увеличивается. Важно, что в группах риска АР и АтД наблюдалось значительное снижение (в 1,8-1,9 раза) содержания лизоцима по сравнению с группой сравнения при достоверном увеличении (в 1,6-1,7 раза) содержания гистамина в ротовой жидкости. Достоверного отличия этих показателей между группами риска не установлено. Отношение лизоцима и гистамина по средним показателям в группе сравнения составило 5,4 и значительно изменялось это соотношение в группах риска (1,9 в группе АР и 1,7 в группе АтД).

2.3. Диагностическая информативность факторов патогенности микрофлоры слизистой оболочки носа и зева Значение протеолитических ферментов, лизоцимной и уреазной активности микроорганизмов в патогенезе заболеваний и обеспечении колонизационной резистентности организма человека отражено в ряде работ.[40, 56, 67] Показатели частоты и диагностические коэффициенты ряда ферментов патогенности S. aureus, выделенных из носа и зева, представлены в таблице 14.

Таблица 14 – Частота и диагностические коэффициенты ферментов патогенности S. aureus, выделенных из носа и зева

–  –  –

Примечание: #– из массива n=192 у лиц, не болеющих более 2 раз в году; * – информативность показателей достоверна при Imin=0,5.

Из таблицы 14 следует, что для S. aureus характерны диагностически значимые величины коэффициентов при достаточной степени информативности для всех определяемых ферментов патогенности, которые составляли от 4 баллов для показателя лизоцимной активности до 5 баллов для уреазной активности (I от 0,6 до 0,8). Сумма диагностических коэффициентов, которая отражает биологический профиль микроорганизмов, выделенных у студентов группы риска АР и АтД, составила 13 баллов.

Диагностическая информативность показателей ферментов патогенности S. epidermidis, выделенных из носа и зева, представлена в таблице 15.

Таблица 15 – Диагностическая информативность ферментов патогенности S. epidermidis, выделенных из носа и зева

–  –  –

Примечание: информативность показателей достоверна при Imin=0,5.

Из таблицы 15 следует, что у подавляющего большинства изолятов S. epidermidis отмечены признаки гемолиза, как в группе сравнения (49,1%), так и группах риска (87,5% в группе АР и 93,8% случаев в группе АтД), что придало этому признаку диагностические коэффициенты в 3 балла. Реже по частоте проявления у стафилококков наблюдалась протеолитическая и уреазная активность при ДК равным также 3 баллам.

При сравнении показателей лизоцимной активности установлено, что изменения биоценоза в группах риска имело тенденцию к увеличению числа изолятов S. epidermidis с лизоцимной активностью (в группе АР 40,6% случаев, в группе АтД 43,8%). Диагностические коэффициенты в указанных группах составили 3 и 4 балла соответственно.

Сумма диагностических коэффициентов, которая отражает биологический профиль S. epidermidis, выделенных у студентов группы риска по аллергическим заболеваниям, составила 12 баллов.

Наиболее диагностически значимые показатели количества микроорганизмов и ферментов патогенности S. aureus и S. epidermidis, выделенных со слизистой оболочки носа и зева, обобщены в таблице 16.

Таблица 16 – Диагностическая информативность частоты выделения и ферментов патогенности Staphylococcus spp. со слизистой оболочки носа и зева

–  –  –

кации стафилококков, представленных таксономических родов, с аналогичной суммой ДК даёт основание для прогнозирования потенциала патогенности возбудителя в развитии указанных состояний организма.

При этом, следует учитывать, что достижение пороговой суммы ДК в 20 баллов позволяет провести дифференциальную диагностику с вероятностью ошибки не выше 1% (Р0,01) и с определённой долей вероятности прогнозировать изменения в организме человека, связанные с колонизацией микроорганизмами рода Staphylococcus spp.

Достижение пороговой суммы ДК в 10 баллов предполагает вероятностью ошибки в пределах 10% (Р0,05), что относится к зоне диагностической неопределённости, и поэтому окончательная типизация выделенного штамма возможна при проведении дополнительных дифференцирующих методов.[30] Для исследуемых ферментов патогенности изолятов S. aureus, выделенных из носа и зева в группе риска по аллергическим заболеваниям, характерны значительные по величине ДК с достаточной степенью информативности. У S. epidermidis в подавляющем большинстве выделенных культур наблюдалась гемолитическая и уреазная активность и в меньшей степени протеолитическая и лизоцимная активность. Полученные диагностические оценки микрофлоры слизистых оболочек носа и зева позволяют дифференцировать стафилококки с позиции их этиологической значимости в воспалительном процессе при аллергических заболеваниях.

73

–  –  –

ИДЕНТИФИКАЦИЯ И ЛИЗОЦИМНАЯ АКТИВНОСТЬ ЛАКТОБАЦИЛЛ

ПРИ ДИСБАКТЕРИОЗЕ КИШЕЧНИКА

3.1. Микробное сообщество и видовой состав лактобацилл при дисбактериозе кишечника В результате проведённых исследований микрофлоры кишечника у студенческой молодежи в группе риска по аллергическим заболеваниям установлено, что у всех из 63 исследуемых лиц определены изменения видового и количественного состава микрофлоры с разной степенью выраженности. При оценке результатов каждого анализа на дисбактериоз по количеству отклонений от параметров эубиоза[56, 67] установлено (рисунок 2), что изменения биоценоза по одному показателю отмечены у 14,3% исследуемых лиц.

% 20

–  –  –

Рисунок 2 – Показатели состояния микрофлоры кишечника в исследуемой группе по величине уровня отклонения от эубиоза, n=63 Частота нарушения эубиоза по двум показателям увеличивалась и наблюдалась в 19,0% случаев. Значительно увеличивалась доля лиц с изменениями биоценоза кишечника по трём показателям (30,2%). Наиболее часто у исследуемых лиц отмечены случаи с изменением эубиоза по четырём и более показателям (36,5% случаев), что указывает на значительные изменения в биоценозе кишечника в исследуемой группе риска.

Уровень изменения биоценоза в группе риска в среднем составил 2,9 на одного исследуемого, что значительно выше, чем аналогичные показатели у лиц с неспецифическими гастроинтестинальными заболевания без аллергических заболеваний.[67] Показатели изменения видового состава микрофлоры кишечника при дисбактериозе в группе риска по аллергическим заболеваниям представлены на рисунке 3.

91,3 78,3 % 69,6 60,9 34,8 34,8 21,7 8,7

–  –  –

Рисунок 3 – Видовой состав микрофлоры кишечника при дисбактериозе в группе риска по аллергическим заболеваниям Примечание: ЛКБ – уменьшение количества лактобацилл; КПГ – повышение количества E. coli Hly+; КПТ – уменьшение количества типичных E. coli; Кл – повышение количества клостридий; КПЛН – повышение количества лактозонегативных E. coli lac-;

ДГ – повышение количества грибов рода Candida; БФБ – уменьшение количества бифидобактерий; КФМ – повышение количества кокковых форм микроорганизмов.

Из рисунка 3 следует, что среди результатов анализа с проявлением дисбактериоза кишечника по одному показателю преобладали случаи со сниженным количеством лактобацилл (ЛКБ, 33,3%) и с повышенным содержанием Е. coli c гемолитической активностью (ГКП, 33,3%). Реже отмечались результаты анализов с уменьшением количества типичных Е. coli (КПТ 22,2% случаев) и увеличением количества лактозонегативных Е. coli (КПЛН 11,1% случаев).

При оценке числа случаев с проявлением дисбактериоза по двум показателям также установлено преобладание результатов со сниженным количеством лактобацилл (ЛКБ 50,0%) и лиц с повышенным содержанием Е. coli c гемолитической активностью (КПГ 41,7%). Частота случаев с увеличением количества лактозонегативных Е. coli составляла 25,0%. Нарушение эубиоза среди исследуемых обусловлено также увеличением числа случаев с повышенным количеством грибов рода Candida (ДГ 25,0%) и уменьшением содержания бифидобактерий (БФБ 16,7% случаев).

Наиболее часто изменения в видовом составе микробиоценоза кишечника в группе риска отмечены по трём и четырём показателям. Наряду с вышеперечисленными изменениями наблюдалось увеличение числа случаев с повышенным содержанием кокковых форм микроорганизмов (до 21,7% случаев), клостридий (8,7% случаев) при уменьшении содержания бифидобактерий (до 34,8% случаев).

У большинства исследуемых лиц группы риска по аллергическим заболеваниям нарушение микробиоценоза проявлялось в уменьшении количества лактобацилл (у 43 из 63 исследуемых, что составило 68,3%) и общего количества типичных Е. coli (у 31 из 63 исследуемых, что составило 49,2%). Важно отметить и увеличение случаев идентификации Е. coli с гемолитической активностью (у 37 из 63 исследуемых, что составило 69,4%) и увеличение количества лактозонегативных Е. coli (27 человек, из 63 исследуемых, что составило 42,9%).

Учитывая факт, что при дисбактериозе кишечника [56, 67] наблюдается увеличение частоты выделения E. сoli с декарбоксилирующей активностью (субстрат гистидин) при уменьшении их количества в кишечнике (56,3% выделенных штаммов обладали гистидендекарбоксилирующей активностью), при снижении их ферментативной активности (E. сoli lac- в 44,8% были гистидендекарбоксилирующими), а также у E. сoli с гемолитической активностью (E. сoli Hly+ в 68,8% были гистидендекарбоксилирующими), следует предположить о значительном увеличении доли гистидиндекарбоксилирующих E. сoli в биоценозе кишечника у лиц групп риска по аллергическим заболеваниям.

Видовой состав Lactobacillus spp., выделенных из кишечника исследуемых лиц группы риска по аллергическим заболеваниям представлен на рисунке 4.

Из рисунка 4 следует, что первые позиции по числу выделяемых лактобацилл при дисбактериозе кишечника представляют L. delbrueskii (22,2% случаев), L. сasei (19,0% случаев), L. rhamnosus (12,7% случаев). Реже выделялись L. brevis 76 (11,1% случаев), L. рlantarum (7,9% случаев), L. trichodes (6,5%). Лактобактерии вида L. аcidophilus выделялись в единичных случаях (3,2%).

% Рисунок 4 – Lactobacillus spp., выделенные из кишечника группы риска по аллергическим заболеваниям среди студенческой молодежи В результате проведённых исследований микрофлоры кишечника в группе риска с аллергическими заболеваниями у студенческой молодежи установлено, что у всех исследуемых отмечены дисбиотические изменения, которые характеризовались преобладанием отклонений от эубиоза по трём, четырём и более показателям.

У подавляющего большинства лиц установлено сниженное количество лактобацилл (87,2%) на фоне снижения общего количества типичных Е. coli и увеличением случаев идентификации Е. coli lac- и Е. coli Hly+, что указывает на повышение доли гистидиндекарбоксилирующих E. сoli в биоценозе кишечника у лиц групп риска. При видовой идентификации Lactobacillus spp., выделенных из кишечника, установлено, что наиболее часто определялись L. delbrueskii (22,2% случаев), L. сasei (19,0% случаев), L. rhamnosus (12,7% случаев). Реже выделялись L. brevis (11,1% случаев), L. рlantarum (7,9% случаев), L. trichodes (6,5%). L. аcidophilus выделялись в единичных случаях (3,2%).

3.2. Лизоцимная активность Lactobacillus spp., выделенных из кишечника лиц группы риска по аллергическим заболеваниям Лизоцимная активность различных видов лактобацилл, выделенных при дисбактериозе кишечника представлена на рисунке 5.

–  –  –

1,8 1,6 1,4 1,2 0,8 0,6 0,4 0,2 0

–  –  –

Из рисунка 5 следует, что наибольшей лизоцимной активностью обладали такие виды как: L. jensenii (1,91±0,06 мкг/мл), L. fermentum (1,47±0,05 мкг/мл) и L. plantarum (1,35±0,04 мкг/мл). В группу со средней лизоцимной активностью вошли L. rhamnosus (1,22±0,04 мкг/мл) и L. delbrueskii (1,20±0,04 мкг/мл). У L.

acidophilus лизоцимная активность составила 0,84±0,3 мкг/мл. Наименьшая лизоцимная активность отмечена у L. cellobiosus и L. сorynoformis (0,34±0,01 мкг/мл). Отсутствие лизоцимной активности наблюдалось у L. lactis.

Лизоцимная активность лактобацилл, выделенных из кишечника человека с различной степенью нарушения эубиоза, представлена в таблице 17.

Таблица 17 – Лизоцимная активность лактобацилл, выделенных из кишечника человека с различной степенью нарушения эубиоза, мкг/мл

–  –  –

Из таблицы 17 следует, что лизоцимная активность лактобацилл, выделенных из кишечника при нарушении эубиоза по одному показателю, составила 1,36±0,07 мкг/мл. По степени увеличения нарушения эубиоза в кишечнике отмечено значительное снижение лизоцимной активности лактобацилл. При нарушении эубиоза по двум показателям лизоцимная активность лактобацилл составила 0,95±0,05мкг/мл. Нарушение эубиоза по трём и четырём показателям сопровождалось уменьшением величины этого показателя до 0,77±0,04 мкг/мл и 0,79±0,04, соответственно (Р0,05).

Профиль показателей лизоцимной активности лактобацилл, выделенных из кишечника при дисбактериозе представлен в таблице 18.

Таблица 18 – Профиль показателей лизоцимной активности лактобацилл, выделенных из кишечника при дисбактериозе, мкг/мл, n=63

–  –  –

Из таблицы 18 следует, что при дисбактериозе кишечника преобладали штаммы с лизоцимной активностью в диапазоне ниже средней величины (61,9% случаев). Низкая лизоцимная активность лактобацилл, выделенных из кишечника при дисбактериозе, отмечена у 11,1% изолятов. Лизоцимная активность «ниже среднего» отмечена в 50,8% случаев. У 23,8% штаммов лактобацилл отмечена лизоцимная активность «выше среднего» и только в 14,3% случаях у исследуемых штаммов этот показатель относился к категории «высокая».

В результате исследования лизоцимной активности Lactobacillus spp. установлено, что наибольшей лизоцимной активностью обладали такие виды, как: L.

jensenii, L. fermentum, L. plantarum. В группу со средней лизоцимной активностью вошли L. rhamnosus, L. delbrueskii, L. acidophilus. Наименьшая лизоцимная активность отмечена у L. cellobiosus и L. сorynoformis. По степени увеличения нарушения эубиоза в кишечнике отмечено значительное снижение лизоцимной активности у лактобацилл. По профилю показателей лизоцимной активности лактобацилл, выделенных из кишечника при дисбактериозе диапазон «низкая» и «ниже среднего» отмечен у 61,3% изолятов.

–  –  –

4.1. Кислотообразующая и сахаролитическая активность пробиотических штаммов рода Lactobacillus Исследователи подчеркивают важность изучения биологических свойств лактобацилл, которые во многом определяют механизмы их колонизации и персистенции на слизистых оболочках как кислотообразование, сахаролитическую, протеолитическую активность, антагонизм, а также органолептические свойства.[59, 73, 139] Показатели активности сквашивания молока и кислотообразования живых культур бакпрепаратов, включающих бактерии рода Lactobacillus spp., приведены в таблице 19. В видовом названии учитывали результаты молекулярно-генетического типирования производственных штаммов лактобацилл по гену 16S рРНК, проведенных Алёшкиным А.В. [2] и Кулаковой Ю.В.[66]

–  –  –

Из таблицы 19 следует, что скорость сквашивания молока, как показатель проявления ферментативной активности микроорганизмов к протеолизу белка, у исследуемых культур имела существенные отличия и составляла от 5,2±0,2 часа для L. helveticus NKJC до 10,0±0,4 ч для L. plantarum 8RA3. Коэффициент вариации сквашивания молока для исследуемых штаммов не превышал 12,7%, что характеризует исследуемые штаммы лактобацилл как с мало- и среднеизменчивые.

В оценке коэффициента вариации учитывали критерии по которым показатель до 10,0% можно отнести к категории слабоизменчивым, при V от 10,0 до 20,0% – среднеизменчивым, при показателе V более 20,0% – сильноизменчивым.[56] При оценке энергии кислотообразования у исследуемых штаммов лактобацилл установлено, что показатели кислотообразования находились в диапазоне от 46,4±1,20 Т для L. plantarum 8RA3, до 70,6±2,9 L. helveticus JCH и эти колебания не выходили за пределы величин, нормирующих кислотность бактериальных препаратов. Расчёт коэффициента вариации показателя кислотообразования (V=6,3-7,9%) позволил исследуемые культуры жидких заквасок отнести к категории со слабоизменчивыми характеристиками.

Исследование показателей кислотообразования и протеолитической активности живых культур лактосодержащих бакпрепаратов позволило установить, что скорость сквашивания молока как показатель способности микроорганизмов к протеолизу белка у исследуемых культур имела отличия в 1,5-2,2 раза. Величина коэффициента вариации свидетельствовала о преобладании среди штаммов с малой и средней степенью изменчивости кислотообразования и протеолитической активности.

4.2.Диаминооксидазная, лизоцимная и антагонистическая активность пробиотических штаммов рода Lactobacillus Основными условиями получения пробиотической продукции с низким содержанием гистамина являются как, подбор штаммов и консорциумов бактерий, не повышающих или понижающих содержание гистамина в питательной среде, так и использование производственных питательных сред с низким содержанием гистамина.[59, 109] Показатели лизоцимной активности и диаминооксидазной активности по исследуемых культур Lactobacillus spp., представлены в таблице 20.

Из таблицы 20 следует, что штаммы лактобацилл обладали различной лизоцимной активностью. Наибольшие показатели отмечены у штаммов L. helveticus ГРК-08 (3,2±0,2 мкг/мл) и штаммов Lactobacillus helveticus NKJC и JCH, L.

casei KAA. Коэффициент вариации показателя лизоцимной активности свидетельствовал о средней изменчивости фенотипического проявления у этих культур (V=26,9-43,8%).

<

–  –  –

В исследуемой группе лактобацилл установлен диаминооксидазный эффект с определённый степенью выраженности для каждого штамма. Согласно условию методического приёма, предусматривающего внесение дополнительного количества гистамина в питательную среду (44 мкг), после суточной инкубации[56] отмечено выраженное уменьшение гистамина у штаммов L. helveticus ГРК-08 (51,1±2,6 мкг) и в меньшей степени L. helveticus NKJC (42,2±3,2 мкг), L. helveticus JCH (38,4±3,0 мкг).

Определение коэффициента вариации показателей диаминооксидазной активности лактобацилл в диапазоне от 26,9 до 43,8% позволило характеризовать фенотипического проявления у исследуемых штаммов как сильноизменчивые.

Проведено определение антагонистической активности бактерий рода Lactobacillus к наиболее часто выделяемым при дисбактериозе кишечника E. coli (Hly+) и S. aureus (таблица 21).

Из таблицы 21 следует, что антибактериальная активность к наиболее часто выделяемым при дисбактериозе кишечника E. сoli Hly+ наблюдалась у исследуемых культур L. helveticus с преобладанием антагонизма средней (53,8-61,5% случаев) и высокой степени (15,4-53,8% случаев).

–  –  –

стической активностью. Штамм L. helveticus ГРК-08 в более половине случаев (76,9% случаев) оказывал антагонистической эффект средней и высокой степени по отношению к S. aureus.

Важное значение в исследовании имели результаты определения индивидуальной резистентности каждого штамма S. aureus к определённому виду лактобацилл из числа проявивших устойчивость к действию комплекса антибиотических механизмов лактобацилл, поскольку ряд этих механизмов включает воздействие лизоцима, молочных кислот, веществ антибиотической природы, лактоцинов, перекиси водорода при различной степени их фенотипического проявления.[56] Из числа опытных штаммов S. aureus резистентность к лактобактериям установлена у 8 изолятов (30,8%).

Результаты определения резистентности S. aureus к исследуемым штаммам лактобацилл, представлены в таблице 22.

Таблица 22 – Показатели резистентности S. aureus к лактобациллам

–  –  –

Примечание: Р – резистентные штаммы; + – чувствительные штаммы.

Как следует из таблицы 22, каждый из 8 резистентных штаммов S. aureus, выделенных на предыдущем этапе определения резистентности, чувствителен к антибиотическому действию других штаммов лактобацилл. Наибольшая степень резистентности с условным показателем 0,7 проявилась у одного штамма, устойчивость которого наблюдалась к 4 из 6 исследуемых штаммов лактобацилл.

Обратил на себя внимание факт широкого разнообразия антагонистической активности определённого вида лактобацилл к различным изолятам S. aureus. Штаммы Lactobacillus helveticu ГРК-08 активны к 7 изолятам из 8 наиболее резистентных S. aureus, в то время как L. plantarum 90TC-4 только к 3 изолятам, что определяет необходимость учитывать антибиотическую активность лактобацилл при персонифицированном подборе пробиотических штаммов.

Проведёнными исследованиями установлено, что штаммы лактобацилл имели различную степень выраженности диаминооксидазной активности. Антибактериальный эффект лактобацилл L. helveticus против E. сoli Hly+ наблюдался у большинства исследуемых культур с преобладанием антагонизма средней и высокой степени. По отношению к изолятам S. aureus антибактериальный эффект лактобацилл выражен значительно ниже, что диктует необходимость подбора лактобацилл с учётом формирования резистентности региональных штаммов условно-патогенных микроорганизмов.

4.3. Коррекция нарушений нормальной микрофлоры с использованием пробиотических штаммов лактобацилл Проведена коррекция нарушений нормальной микрофлоры в группах риска студенческой молодежи по аллергическим заболеваниям с использованием живых пробиотических штаммов. Показанием к проведению коррекции явились результаты клинико-бактериологических исследований, ранжированные по величине диагностической информативности (таблица 23).

Таблица 23 – Показатели диагностической коэффициентов и информативность показаний к коррекции нарушений нормальной микрофлоры

–  –  –

Расчёт пороговой суммы диагностических коэффициентов показал, что при сумме ДК равной «плюс 13» допустимая доля ошибки не превышает 5,0%.

Достижение пороговой суммы позволит вынести решение «показание» с прогнозируемым процентом ошибки.

Для повышения эффективности коррекции нарушений эубиоза слизистой оболочки носа и зева обосновано применение пробиотиков в форме приготовленных кисломолочных смесей как биологически активная добавка (БАД).

Предварительно заквасочные культуры контролировались по биологическим характеристикам в соответствии с «МУК 4.2.2602-10. Система предрегистрационного доклинического изучения безопасности препаратов. Отбор. Проверка и хранение производственных штаммов, используемых при производстве пробиотиков» [83] и назначались в каждом случае индивидуально с учётом антагонизма к выделенной от пациента микрофлоры.

Критериями отбора штаммов заквасочных культур явились показатели, в числе которых использовались наряду с общепризнанными и ранее рекомендуемыми показателями [139], так и обоснованные в настоящей работе:

– определённые органолептические свойства продукта;

– контролируемость показателя кислотности продукта в пределах 60-100°Т;

– количественное содержание живых микробных клеток в единице объёма продукта и время сквашивания молока;

– биохимические свойства штаммов (ферментация углеводов, протеолитическая, лизоцимная активность, диаминооксидазная активность);

– определённая антагонистическая активность лактобацилл к выделенным от больных штаммам с различной степенью резистентности к антибиотикам.

Оценка эффективности пробиотических штаммов проводилось амбулаторно в трёх группах: контрольная группа (ГК) и две группы сравнения ГС АД и ГСАтД.



Pages:     | 1 | 2 || 4 | 5 |

Похожие работы:

«Брит Владислав Иванович «Эффективность методов вакцинации против ньюкаслской болезни в промышленном птицеводстве» Специальность: 06.02.02 ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени кандидат ветеринарных наук Научный руководитель:...»

«АБДУЛЛАЕВ Ренат Абдуллаевич ГЕНЕТИЧЕСКОЕ РАЗНООБРАЗИЕ МЕСТНЫХ ФОРМ ЯЧМЕНЯ ИЗ ДАГЕСТАНА ПО АДАПТИВНО ВАЖНЫМ ПРИЗНАКАМ Шифр и наименование специальности 03.02.07 – генетика 06.01.05 – селекция и семеноводство сельскохозяйственных растений ДИССЕРТАЦИЯ на соискание учёной степени кандидата...»

«ХАПУГИН Анатолий Александрович РОД ROSA L. В БАССЕЙНЕ РЕКИ МОКША 03.02.01 – ботаника Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель Силаева Татьяна Борисовна д.б.н., профессор САРАНСК ОГЛАВЛЕНИЕ ВВЕДЕНИЕ Глава 1. ИСТОРИЯ ИЗУЧЕНИЯ РОДА ROSA L. В БАССЕЙНЕ МОКШИ. Глава 2. КРАТКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РОДА ROSA L. 2.1. Характеристика рода Rosa L. 2.2. Систематика рода Rosa L. Глава 3....»

«Мухаммед Тауфик Ахмед Каид ХАРАКТЕРИСТИКА ГЕНОТИПОВ С ХОРОШИМ КАЧЕСТВОМ КЛЕЙКОВИНЫ, ОТОБРАННЫХ ИЗ ГИБРИДНЫХ ПОПУЛЯЦИЙ АЛЛОЦИТОПЛАЗМАТИЧЕСКОЙ ЯРОВОЙ ПШЕНИЦЫ МЯГКОЙ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ДНК-МАРКЕРОВ Специальность 06.01.05 – селекция и семеноводство сельскохозяйственных растений Диссертация на соискание ученой степени кандидата сельскохозяйственных наук Научный...»

«БРИТАНОВ Николай Григорьевич ГИГИЕНИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ ПЕРЕПРОФИЛИРОВАНИЯ ИЛИ ЛИКВИДАЦИИ ОБЪЕКТОВ ПО ХРАНЕНИЮ И УНИЧТОЖЕНИЮ ХИМИЧЕСКОГО ОРУЖИЯ 14.02.01 Гигиена Диссертация на соискание ученой степени доктора медицинских наук Научный консультант: доктор медицинских наук, профессор...»

«СЕРГЕЕВА ЛЮДМИЛА ВАСИЛЬЕВНА ПРИМЕНЕНИЕ БАКТЕРИАЛЬНЫХ ЗАКВАСОК ДЛЯ ОПТИМИЗАЦИИ ФУНКЦИОНАЛЬНО-ТЕХНОЛОГИЧЕСКИХ СВОЙСТВ МЯСНОГО СЫРЬЯ И УЛУЧШЕНИЯ КАЧЕСТВА ПОЛУЧАЕМОЙ ПРОДУКЦИИ Специальность 03.01.06 – биотехнология ( в том числе бионанотехнологии) Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель Доктор биологических наук, профессор Кадималиев Д.А. САРАНСК 2014 ОГЛАВЛЕНИЕ ВВЕДЕНИЕ.....»

«Вафула Арнольд Мамати РАЗРАБОТКА ЭЛЕМЕНТОВ ТЕХНОЛОГИИ ВЫРАЩИВАНИЯ ПАПАЙИ ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ ЗДОРОВОГО ПОСАДОЧНОГО МАТЕРИАЛА И ЭКСТРАКТОВ С БИОПЕСТИЦИДНЫМИ СВОЙСТВАМИ ДЛЯ ЗАЩИТЫ ЕЕ ОТ ВРЕДНЫХ ОРГАНИЗМОВ Специальности: 06.01.07 – защита растений 06.01.01 – общее земледелие и растениеводство Диссертация на соискание ученой степени кандидата сельскохозяйственных...»

«Якимова Татьяна Николаевна Эпидемиологический надзор за дифтерией в России в период регистрации единичных случаев заболевания 14.02.02 эпидемиология диссертация на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Научный руководитель: доктор...»

«Цвиркун Ольга Валентиновна ЭПИДЕМИЧЕСКИЙ ПРОЦЕСС КОРИ В РАЗЛИЧНЫЕ ПЕРИОДЫ ВАКЦИНОПРОФИЛАКТИКИ. 14.02.02 – эпидемиология ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени доктора медицинских наук Научный консультант: заслуженный деятель науки РФ, лауреат Государственной премии СССР профессор, доктор медицинских наук Ющенко Галина Васильевна Москва – 20 Содержание...»







 
2016 www.konf.x-pdf.ru - «Бесплатная электронная библиотека - Авторефераты, диссертации, конференции»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.