«РОЛЬ НОРМАЛЬНОЙ МИКРОФЛОРЫ И ЛИЗОЦИМА В ВЫБОРЕ ПРОБИОТИЧЕСКИХ ШТАММОВ ДЛЯ ПРОФИЛАКТИКИ АЛЛЕРГИЧЕСКИХ ЗАБОЛЕВАНИЙ У СТУДЕНЧЕСКОЙ МОЛОДЕЖИ СЕВЕРА ...»
Авторы отмечают, что в колонизации слизистой оболочки зева значительная роль принадлежит грамположительным коккам, преимущественно эпидермальному и золотистому стафилококкам и стрептококкам группы viridans. Отмечена частота выделения грамотрицательных кокков рода Neisseria, доля которых составила 11%, и грибов рода Candida, частота выделения которых составила 12% от общего количества изолятов.[77] Результаты проведённого исследования видового и количественного состава микрофлоры у больных с воспалительными процессами дыхательных путей в ряде других регионов Российской Федерации[62, 121] по основным показателям совпадали с данными по Московской области[80].
Их этиологическая значимость в развитии воспаления по мере продвижения от верхних к нижним дыхательным путям уменьшается. Доля грамположительных кокков на слизистой оболочке носа составляет 80% всей выделенной микрофлоры, зева – 60%, в мокроте – 50%.[80, 121] В работе Миронова А.Ю.[80] отмечаются изменения видового и родового состава кокковой микрофлоры при гнойно-воспалительных заболеваниях респираторного тракта. На слизистой оболочке носа среди грамположительных кокков преобладают стафилококки (70-80%), со слизистой оболочки зева они выделяются в меньших количествах (30-40%), а в пробах мокроты составляют всего лишь 8-16%.
Среди стафилококков, как возбудителей гнойно-воспалительных заболеваниях респираторного тракта, большую роль играют коагулазоотрицательные стафилококки, частота выделения которых уменьшается от верхних к нижним дыхательным путям. При гнойно-воспалительных заболеваниях носа КОС выделяются в 47-49%, в зеве – 7-18%, в лёгких и бронхах – до 11%. Наиболее часто идентифицированным видом при гнойно-воспалительных заболеваниях респираторного тракта является S. epidermidis.[80, 121] Показано, что в настоящее время при бронхиальной астме возросла встречаемость поливалентной сенсибилизации, в том числе и к бактериальным аллергенам. 82,9% детей с данной патологией имеют сенсибилизацию к антигенам Staphylococcus aureus и 64,9% – к антигенам Esherichia coli. При этом антигены микроорганизмов могут индуцировать образование IgE антител, т. е. выступать в роли аллергенов. Автор отмечает, что особенностью инфекционной аллергии является гиперсенсибилизация, сочетающаяся с хроническим воспалением, при этом микроорганизмы оказывает двоякое действие: с одной стороны, аллергизирующее, с другой стороны, бактериальная инфекция вызывает хроническое неспецифическое воспаление.[85] В ряде работ убедительно показана антагонистическая активность нормальной микрофлоры носоглотки, которая обеспечивает защиту от носительства не только гемолитических стрептококков, но и факторов патогенности стафилококков, пневмококков, энтеробактерий.[21, 65, 204] Особенности взаимосвязи факторов иммунитета и инфекции, как динамичное противостояние живых систем подчеркиваются в работах.[7, 163, 205, 211] Показаны особенности фенотипической характеристики стафилококков и состояние местного иммунитета при бактерионосительстве в работе Карташовой О.Л.
с соавт.[52] Значение микробного антагонизма в формировании биоценозов слизистой оболочки кишечника, характерного для пробиотических препаратов, отражено в работах Бондаренко В.М.[16], Бухарина О.В.[19], Онищенко Г.Г.[92] и обзорных работах иностранных авторов.[148, 226] В основе антагонизма бактерий могут лежать различные механизмы как неспецифического характера (изменения рН и еН среды, продукция перекиси водорода, кислот, других метаболитов, а также истощение питательной среды за счёт интенсивного размножения микроба-антагониста), так и специфическая продукция антибиотических веществ.[78, 82, 161, 171] Наиболее выражен антагонизм при непосредственном контакте живых клеток в условиях микробного биоценоза (так называемый «прямой антагонизм»), когда осуществляется интенсивная продукция антибиотических веществ.[75, 119, 147, 180, 206] Среди антибиотических веществ определённое внимание исследователей уделено лизоциму, как регулятору микробного биоценоза.[11, 19, 67, 179, 238] Генетические факторы, регулирующие продукцию лизоцима, отнесены к плазмидам.[19] Из факторов экологической значимости в межмикробном взаимодействии важная роль отводится лизоциму микроорганизмов. Лизоцим относится к классу ферментов – мурамидаз. Субстратом действия лизоцима являются полисахариды клеточной стенки микроорганизмов. В настоящее время лизоцимная активность выявлена у микроорганизмов различных таксономических групп: грибов, простейших, бактерий, вирусов.[11, 18, 56] Лизоцим патогенов, участвуя в антагонизме бактерий, обеспечивает колонизацию и селекцию их в экологической нише и в частности стафилококков.[56] Доказана роль лизоцимной активности в селекции высоковирулентных штаммов стафилококка на миндалинах у больных. Установлена прямая корреляционная зависимость между лизоцимной активностью и бактериоциногенией у стафилококков и гемолитических стрептококков.[34, 56, 132] Лизоцимная активность нормальной микрофлоры, возможно, совместно с лизоцимом секрета слизистой оболочки, способствует стабилизации индигенной микрофлоры как слизистой оболочки верхних дыхательных путей, так и желудочно-кишечного тракта.[56, 211] Изучение лизоцимной активности лактобацилл, как представителей нормальной микрофлоры, показало, что лактобациллы образуют своего рода защитный биослой на слизистых оболочках.[86, 186, 227] В антагонистических механизмах межбактериальных взаимоотношений важную роль играет не только продукция членами биоценоза антагонистически активных веществ, но и умение им противодействовать. Развитие у микроорганизмов резистентности к факторам микробного антагонизма в экологической нише (антибиотикам, бактериоцинам, лизоциму, бактериофагу) рассматривается в качестве одного из показателей механизма колонизации и патогенеза бактерионосительства. [56, 129, 137, 216, 232] В первую очередь, внимание исследователей привлекает поражающая функция возбудителя. Чаще всего, она реализуется токсинами. Это обусловливает возникновение патологии определённого вида.[41, 50, 189] Как и большинство свойств поведенческого характера, токсинообразование, скорее всего, можно отнести к категории приспособлений, позволивших некоторым гетеротрофным бактериям занять новую «экологическую нишу», но одновременно сделавших эти бактерии небезопасными для эукариотических клеток.[132, 230] Механизм передачи генетической информации, детерминирующий продукцию токсинов, в одинаковой степени свойствен как патогенным, так и условно-патогенным микроорганизмам. Гены лекарственной устойчивости часто находятся на тех же мигрирующих генетических элементах (R-плазмиды), что и tox-гены.[47, 89] Распространение детерминант резистентности под давлением отбора, вызванного таким селективным фактором, как антибиотики, одновременно привело и к более широкому распространению генов токсигенности, особенно среди условно-патогенных бактерий.[12, 89, 235] Сам процесс адаптации к антибиотикам рассматривается как селекция устойчивых штаммов, которые распространяются в экологической нише.
В организме человека лизоцим является мощным защитным фактором слизистой оболочки полости рта, конъюнктивы глаза содержится в слезах, слюне, крови, материнском молоке, тканях различных внутренних органов. Высокая концентрация лизоцима выявляется в околоплодных оболочках и водах плода.
Основная масса лизоцима синтезируется, по-видимому, тканевыми макрофагами и нейтрофилами [19] В процессе эволюции у бактерий и грибов сформировались различные механизмы ингибирования лизоцима, определяемые как антилизоцимная активность микроорганизмов.[18] Абсолютные значения признака определяются не, только видовой принадлежностью микроорганизма, но и его нахождением в определённом биотопе.[19] В проведённых исследованиях подчеркивается, что плазмидная природа факторов лизоцимной активности, множественной устойчивости к антибиотикам, их связь с F+-плазмидой создают оптимальные условия для быстрого распространения в популяции признаков патогенности и селекции клонов с высокой колонизационной активностью в эконише.[65] Проведённые исследования содержания лизоцима в слюне показали, что с возрастом лизоцимная активность снижается.[141] При исследовании пациентов со стоматологической патологией, установлено, что у больных хроническим рецидивирующим афтозным стоматитом снижается функция неспецифической защиты слюны, что проявляется в снижении её лизоцимной активности.[56] Изучению перспектив анализа слюны в диагностических целях придаётся особое значение, что обусловлено целым рядом причин. Использование слюны может быть не только дополнительным методом в клинических исследованиях, но и имеет ряд преимуществ по сравнению с анализом крови и мочи: сбор слюны прост и удобен для случаев неклинических окружающих условий; он безболезненный; значительнее, чем при работе с кровью, снижается риск заражения медперсонала, содержание некоторых молекул (например, определённых гормонов, антител, лекарств) в слюне отражает их концентрацию в крови.[28, 56, 119, 166] Высказывается мнение, что расширение использования слюны в клиническом анализе поможет ускорить переход от диагностики заболеваний к наблюдению за здоровьем.[28, 101, 171] Относительно слабо разработан вопрос о специфических ингибиторах активности лизоцима. Гепарин ингибирует активность мурамидазы уже в концентрации 510-5.[18] Другие ингибиторы лизоцима на стадии исследования. Речь идёт о специфических ингибиторах, так как способность некоторых веществ выступать в роли антагонистов лизоцимной активности не подлежит сомнению.
1.2. Биологическое значение лактобацилл Лактобациллы – микроорганизмы, широко распространённые в окружающей среде. Лактобациллы – микроаэрофильные, грамположительные бактерии, не образующие спор и не продуцирующие каталазу. Бактерии требовательны к составу питательных сред, нуждаются во внесении в них аминокислот, витаминов, жирных кислот, углеводов, производных нуклеиновых кислот. [73, 150] Разработана методика индикации и идентификации бактерий рода Lactobacillus с использованием полимеразной цепной реакции. Применяются нуклеотидные последовательности гена 16S рибосомной РНК молочнокислых бактерий депонированных в Gen Bank.[66, 126] Широко используется и более простая методика идентификации лактобацилл с помощью определителя Берджи по тестам сахаролитической активности, которая позволяет определить фенотипические свойства лактобацилл в условия биоценоза исследуемого организма.[42, 67] На основании продукции углекислоты из глюкозы, потребности в тиамине, ферментации фруктозы, продукции фруктозодифосфатальдолазы лактобациллы делятся на две группы: гомо- и гетероферментативные. Вопросы номенклатуры и таксономии бактерий рода Lactobacillus до настоящего времени окончательно не решены.[2, 73, 149] Лактобактерии входят в группу молочнокислых микроорганизмов, включающую представителей 11 родов: Lactobacillus spp., Lactococcus spp., Leuconostoc spp., Camobacterium spp., Enterococcus spp., Streptococcus spp., Pediococcus spp., Tetragenococcus spp., Oenococcus spp., Vagococcus spp., Weissella spp. Род Lactobacillus объединяет 56 видов, из которых 5 подразделяют на два и более подвидов.[73] На основании результатов исследований нуклеотидных последовательностей 16S rRNA представители этого рода распределяются на три филогенетические группы: L. delbrueskii, L. casei, Leuconostoc. Представители рода рассматриваются на уровне семейства – Lactobacillaceae comb. nov. В составе семейства рассматривают три нуклеотидные группы: I (31-39% G+C), II (40-46% G+C), III (47-53% G+C). В соответствии с тремя нуклеотидными группами эти бактерии реклассифицируются на три рода: первый – с типовым видом L. acidophilus (32G+C), второй – с типовым видом L. casei (45-47% G+C), третий – с типовым видом L. delbrueskii (49-53% G+C) [21, 73].
Результаты молекулярно-генетического типирования производственных штаммов пробиотиков показывают, что молекулярно-генетическая идентификация производственных штаммов лактобацилл по гену 16S рРНК продемонстрировала полное совпадение с фенотипическим у L. plantarum 8-РА-З [2, 66]. У L.
acidophilus (NK-1, К3Ш24, 100 аш) и L. fermentum 90-ТС-4 последовательность 16S рРНК не соответствовала паспортным данным штаммов, полученным традиционными методами [2, 4]. Сравнение нуклеотидной последовательности их 16S рРНК с последовательностями в базе данных GenBank свидетельствует, что штаммы NK-1 и 100 аш, идентифицированные ранее как L. acidophillus, на самом деле относятся к L. helveticus, штамм L. acidophillus К3Ш24 – к группе L. casei/ paracasei, a L. fermentum 90-ТС-4 – к L. plantarum [2].
Поскольку ни одна из известных таксономических схем не получила общего признания [2], дифференциация видов рода Lactobacillus представляет значительные трудности и в практических лабораториях, как правило, проводится по фенотипическим признакам[42, 73], что определило в нашей работе использование феносистематики лактобацилл, изложенной в работе Левановой Г.Ф. и Ефимова Е. И.[73, 93] Молочнокислые бактерии являются важной составляющей нормальной микрофлоры пищеварительного тракта.[42] Лактобактерии, хотя и не являются доминирующими микроорганизмами кишечной микрофлоры, однако выделяются в значительном количестве из различных отделов кишечного тракта. Такие бактерии, как Lactobacillus acidophilus, L. salivarius, L. fermentum, L. plantarum, L.
casei, L. reuteri, L. gasseri, L. crispatus являются представителями лактобацилльной микрофлоры человека. В толстом кишечнике здоровых взрослых людей преобладают L. brevis (28%), L. plantarum (19%), L. acidophilus (12%), L. cellobiosus (9,5%), L. casei (9,5%).[21, 42, 73, 167] Одним из наиболее известных биологических свойств лактобацилл является выраженная способность к продукции молочной кислоты. Активность кислотообразования зависит от состава питательной среды и условий культивирования. Считают, что только L+-изомер молочной кислоты является биологически активной формой, которая быстро и целиком утилизируется организмом человека.[35, 193] Lactobacillus spp. проявляют антагонизм по отношению к грамотрицательным бактериям за счёт образования молочной кислоты, а антагонистическая активность по отношению к грамположительным бактериям связана с продукцией бактерицинов.[21, 36, 66, 192] Культуры L. casei, проявляют высокую степень антагонистической активности по отношению к S. flexnerii, B. subtilis, E. coli [116]. В отношении S. aureus и S. typhimurium выявлена вариабельность. У исследуемых L. сasei не выявлено связи между высокой степенью антагонизма и образованием молочной кислоты к грамотрицательным бактериям. Механизм действия лактобацилл к данной группе микроорганизмов определяется воздействием не только молочной кислоты, но и других факторов.[116] Наряду с описанием действия одного из бактерицидных факторов, подчеркивается необходимость оценки целого ряда биологически активных соединений, которые продуцируются лактобациллами, таких как молочная кислота, которая угнетает рост патогенных и условно-патогенных микроорганизмов, лизоцим, бактерицидные вещества.[131, 142] При сравнительной оценке активности кислотообразования и антагонистической активности отмечено, что кислотообразующая активность, проявляемая бифидобактериями, имеет индивидуальный для каждого штамма характер, независимо от видовой принадлежности. Приведён пример, что среди представителей B. longum встречались, как выраженные (B. longum 58B), так и слабые (B.
longum 32В) кислотопродуценты. Среди лактобацилл представители видов L.
acidophilus и L. rhamnosus обладают более выраженной активностью кислотообразования, чем L. plantarum. Штаммы L. rhamnosus, являлись более сильными антагонистами, чем штаммы L. аcidophilus.[73] В механизме формирования колонизационной резистентности важная роль принадлежит кислотообразующей активности бактерий L. acidophilus 27L, которые обладают высоким кислотообразованием, но не имеют выраженной антагонистической активности. Это может означать, что продукция кислот – не единственный механизм антагонистической активности.
Одним из важнейших эффектов лактобацилл на иммунитет является формирование и активация Т- и В-клеточного иммунного ответа.[45] Как представителям микрофлоры желудочно-кишечного тракта лактобактериям принадлежит важная роль в поддержании местного иммунитета. Ассоциированные со слизистой оболочкой кишечника лактобациллы обладают универсальными иммуномодулирующими свойствами, которые включают как иммуностимуляцию, так и иммуносупрессию.[45, 160] Продукты метаболизма лактобацилл играют важную роль и в повышении неспецифической резистентности организма. Установлено, что стимуляция продукции цитокинов возможна не только в присутствии живых бактерий рода Lactobacillus.[90, 113] Определённое значение придается описанию видового разнообразия лактобацилл в возрастном аспекте. При изучении видового состава лактобацилл у клинически здоровых детей раннего возраста установлено, что доминирующими видами лактобацилл являются Lactobacillus acidophilus и L. rhamnosus.[104] Лактофлора у клинически здоровых детей первого года жизни представлена 7 видами: Lactobacillus acidophilus, L. rhamnosus, L. fermentum, L. plantarum, L. brevis, L. salivarius, L. delbrueckii spp. lactis. По частоте встречаемости лактобактерии распределились следующим образом. Наиболее часто (в 57,7% случаев) выделяли L. acidophilus, а L. rhamnosus выделены у 23,1% обследованных детей, L. plantarum – у 15,4%, L. fermentum – у 7,7%, L. brevis – у 3,9%, L. salivarius
– у 3,9%, L. delbrueckii spp. lactis – у 3,9% детей.[104] Лактобациллы выделены у 86,7% обследованных детей, общий их уровень в кишечнике составил 7,3±1,2 lg КОЕ/г. В 84,6% случаев лактофлора представлена одним видом лактобацилл, из которых наиболее часто автор выделяет L.
acidophilus. В 15,4% случаев отмечалось сочетание двух видов лактобацилл.[104] В исследованиях, проведенных Забировой Т.М.[42], отмечено, что представителями лактобацилльной микрофлоры человека являются такие бактерии, как Lactobacillus acidophilus, L. salivarius, L. fermentum, L. plantarum, L. casei, L.
reuteri, L. gasseri, L. crispatus. В толстой кишке здоровых взрослых людей преобладают L. brevis (28%), L. plantarum (19%), L. acidophilus (12%), L. cellobiosus (9,5%), L. casei (9,5%).[42] При изучении биологических свойств лактобацилл биотопов человека в норме и патологии установлено, что в видовом составе лактобацилл, выделенных из кишечника при дисбиозе у жителей города Оренбурга наиболее часто встречались такие виды как L. acidophilus и L. plantarum, составлявшие от 18 до 38% при отсутствии L. delbrueskii.[42] В биологическом значении лактобацилл исследователи отмечают их способность к выделению лизоцима, который является фактором врождённого иммунитета в организме, оказывает бактерицидное действие, стимулирует фагоцитоз, проявляет способность нейтрализовать некоторые микробные токсины, а так же проявляет противовоспалительное действие. Идентификация лактобацилл и количественная оценка их лизоцимной активности при дисбктериозе кишечника в условиях Севера не проводилась, что составило одну из задач исследований данной работы.
1.3. Микробный фактор образования свободного гистамина
Участие гистамина и биогенных аминов в жизнедеятельности здорового и больного организма является предметом многочисленных исследований, что отражено в работах Воропаевой Е.А.[23], Горкина В.З.[26], Гущина И.С.[31], Зарудий Ф.С.[43], Клюевой Л.А.[56], Куярова А.В. с соавт.[67, 68] Современные исследования о распределении, биосинтезе и метаболизме гистамина в различных тканях организма реализованы при диагностике ряда заболеваний.[56, 240] В отечественных работах представлены результаты при исследовании микробной экологии и состояния слизистой оболочки желудочнокишечного тракта у больных аллергическими заболеваниями[27, 77], при оценке микроэкологических нарушении и их коррекции при хроническом рецидивирующем афтозном стоматите[56], в исследованиях нейромедиаторных аминов, их предшественников и продуктов окисления в культуре Escherichia coli[91], при оценке роли факторов патогенности золотистых стафилококков в развитии атопического дерматита.[128] В ряде работ зарубежных авторов показана дифференциальная характеристика биогенных аминов бактериальной природы, участвующих в пищевых отравлениях[169, 184], значение гистамина в регуляции иммунокомпетентных клеток и антителообразовании[182, 201], содержания гистамина в ротовой жидкости при парадонтозе у лиц с вредными привычками.[156] В описании гистамина подчеркивается, что это нейромедиатор различных физиологических функций, один из центральных эндогенных медиаторов иммунитета, основной медиатор аллергии и воспаления.[31, 43, 56] Гистамин – 2,4-(2 аминоэтил)-имидазол является составным компонентом большинства органов и тканей. С точки зрения как отечественных, так и зарубежных исследователей гистамин способен быть биорегулятором своего собственного синтеза у человека.[43, 56, 202] В организме человека идентифицировано более 12 производных гистамина. Главным его источником служит аминокислота L-гистидин, подвергающаяся декарбоксилированию тканевыми и микробными ферментами. Этот процесс обеспечивается не только специфическим ферментом гистидин-декарбоксилазой, но и L-ароматической аминокислотной декарбоксилазой.[21, 43, 56, 215, 241] Наиболее высокая концентрация гистамина у здорового человека определяется в тканях, непосредственно соприкасающихся с внешней средой. Высокая концентрация гистамина обнаружена в коже век, головы, шеи, живота. Эпидермис содержит медиатора больше, чем другие слои кожи. Лишь костная и хрящевая ткани не содержат гистамина.[43, 56, 242, 243] В физиологических условиях гистамин находится преимущественно в связанном неактивном состоянии. Главным депо связанного гистамина являются мастоциты тканей (кожи, кишечника, печени, бронхов), базофилы крови. В слизистой желудка, двенадцатиперстной кишки присутствует до 80% связанного медиатора (специфическое тканевое депо) и 20% – в тучных клетках (неспецифическое тканевое депо).[43, 56] Свободный гистамин в дальнейшем может подвергаться гидролитическому дезаминированию с помощью фермента диаминооксидазы (гистаминазы), присутствующего в тканях и крови, а также инактивироваться тканевой гистамин-метилтрансферазой.[26, 56] Значение микроорганизмов в высвобождении гистамина показано на модели тучных клеток и базофилов. Установлена способность индуцировать выделение свободного гистамина гемофильными бактериями и такими представителями микрофлоры кишечника человека как, E. coli с гемолитической активностью и C. albicans. Решающую роль при этом играют бактериальные адгезины, обеспечивающие контакт с клетками-мишенями и гемолизины, вызывающие функциональную и структурную дезорганизацию плазматических мембран.[31, 43, 56, 172, 177, 229] Не только бактериальные клетки, но и их органеллы способны вызывать высвобождение гистамина из базофилов и тучных клеток. Наибольшую активность проявляют в этом плане пептидогликаны и, в меньшей степени, тейхоевые кислоты. Способность высвобождать гистамин из различных депо человека отмечена у S.
epidermidis с гемолитическими свойствами (более 54% случаев, КОЕ 103). Течение аллергического ринита характеризуется достоверным повышением общего IgЕ при сезонном аллергическом рините в 3,9 раза, при круглогодичном – в 1,5 раза.[77] Реализация реакции «антиген-антитело», наряду с высвобождением гистамина, сопровождается выделением и других веществ, участвующих в реализации иммунных реакций.[31, 43, 115] Примером участия микробного фактора одновременно в двух названных механизмах могут быть следующие данные. Базофилы больных с хроническими отитами, у которых наблюдалась гиперпродукция IgE к антигенам S. aureus, в смеси со стафилококком высвобождали гистамин при наличии на их поверхности IgE. С другой стороны, штамм S. aureus Wood-46 индуцировал высвобождение гистамина вне зависимости от присутствия на поверхности этих базофилов иммуноглобулинов. Добавление смеси бактерий к базофилам, изолированных от больных или здоровых лиц, резко увеличивало выход гистамина из клеток.[43] Предполагается, что неиммунные механизмы высвобождения гистамина в естественных условиях имеют большее значение, чем иммунные, работающие к тому же относительно короткий промежуток времени.[31, 43] Особое внимание в обзоре литературы нами уделено биологическому значению процессов декарбоксилирования у бактериальных клеток, поскольку показано, что представители родов Acinetobakter, Pseudomonas, Proteus, Cоrynebacterium, Staphylococcus, Streptococcus, присутствующие транзиторно или постоянно на коже и слизистых оболочках, могут декарбоксилировать биологически активный амин.[4, 20, 43, 56, 66] Отмечено, что количество микроорганизмов с декарбоксилирующей активностью на слизистой оболочке носоглотки больше у больных, чем у здоровых людей.[20, 26, 64, 67] У энтеробактерий, поддерживающих эубиоз и вызывающих его нарушение в кишечнике, определена сильная степень корреляционной связи частоты декарбоксилирования орнитина, лизина, аргинина, гистидина, что свидетельствует о возможной активации к декарбоксилированию одновременно разных субстратов.[67, 68] В работе Landete J. M.[188] показано выделение двух различных групп декарбоксилаз микроорганизмов – пиридоксальфосфат- и пируватзависимые. Пиридоксальфосфатзависимые гистидиндекарбоксилазы встречаются у грамотрицательных бактерий, принадлежащих к различным видам. Пируватзависимые гистидиндекарбоксилазы имеются у грамположительных бактерий и, в частности, у молочнокислых бактерий.[188] Как различные пиридоксальфосфат-, так и различные пируватзависимые гистидиндекарбоксилазы, выделенные из разных видов бактерий имеют существенные отличия в аминокислотном составе, каталитическом поведении, физических свойствах.
Понимание роли гистамина в механизме развития различных аллергических заболеваний послужило основанием для исследования содержания этого медиатора в различных пищевых продуктах [56] и оценки контаминации продуктов питания бактериями с выраженной гистидиндекарбоксилирующей активностью.[67, 125] Представлено мнение о том, что аллергические заболевания могут развиваться только в результате срыва иммунорегулирующих механизмов и, прежде всего, нарушения функции иммунорегулирующих клеток.[135] В этом плане гистамин заслуживает самого пристального внимания. Гистамин активирует супрессорные функции CD8 клеток через Н2-рецепторы; ингибирует цитотоксическую и хелперную активность Т-лимфоцитов; подавляет ответ на митогены, синтез антител, продукцию фактора угнетающего миграцию макрофагов.[31, 43, 67, 135] Эти эффекты гистамина могут играть положительную роль в обратном развитии ГНТ, однако, при нарушении механизмов инактивации и деградации гистамина эти же свойства его вызывают срыв иммунорегуляторных механизмов.
mitis, L. bulgaricus, L. plantarum, L. вuchneri.[67, 68] В эксперименте показано, что у большинства млекопитающих (кроме крыс) в слизистой оболочке желудка гистаминаза не определялась, тогда как, гистидиндекарбоксилаза обнаруживалась в различных отделах желудочно-кишечного тракта. Гистамин в желудочно-кишечном тракте может синтезироваться в значительном количестве, а разрушаться довольно медленно.[43] Защитные механизмы излишнего образования гистамина в кишечнике и проникновения его в организм, очевидно, самые различные.[26] Значительный синтез гистамина отмечают в желудке. Предполагается, что в патогенезе язвенной болезни существенную роль играет высвобождение больших количеств гистамина при сенсибилизации домашней пылью, плесневыми грибами, пищевыми аллергенами [107]. Внимание в этих работах привлекли результаты, которые показывают, что при обследовании больных язвенной болезнью у 64,0% из них имеются атопические аллергические заболевания.[56, 107] Участие микроорганизмов в синтезе гистамина порождает вопрос об их возможности к деструкции данного медиатора. Публикации по данному вопросу отразили, в основном, характеристику микроорганизмов, контаминирующих пищевые продукты.[56, 68, 125] Ряд обзорных работ, опубликованных в последние годы, свидетельствует о необходимости дальнейшей проработки вопроса о доминирующих механизмах образования и накопления гистамина в организме.[31, 56, 91] Выделено три основных процесса, которые могут способствовать появлению свободного гистамина. Большое внимание придаётся высвобождение медиатора из тканевого депо за счёт иммунных и неиммунных механизмов.[43, 59] Определённое значение имеет поступление гистамина с продуктами питания.[43, 68] В ряде работ представлено положение о роли микроорганизмов в образовании гистамина в организме хозяина.[43, 195, 200] Проведённый обзор литературы свидетельствуют, что микробному фактору может принадлежать роль механизма в значительной степени регулирующего количество свободного гистамина в организме. Увеличенное количество свободного гистамина, в свою очередь, может обуславливать патофизиологические эффекты, связанные с особенностями микроэкологических состояний. Из тех же приведённых работ следует, что микробный фактор, как регулирующий механизм метаболизма гистамина, остался вне поля активного внимания исследователей. Необходимы целенаправленные исследования для детализации участия микрофлоры хозяина в процессах образования и ассимиляции свободного гистамина в определённых условиях и состояниях. Это может способствовать выбору наиболее перспективного направления профилактики синдромов, патофизиологически связанных с гистамином и разработке приёмов, обеспечивающих коррекцию содержания свободного гистамина в тканях организма.
1.4. Подбор пробиотических штаммов лактобацилл Бактериотерапия использует принцип, который сформулирован Ильей Ильичем Мечниковым, в использовании живых микроорганизмов в лечебных и профилактических целях. В многочисленных современных работах пристальное внимание исследователей привлечено к определённым эффектам лечебно-профилактического действия пробиотиков-микроорганизмов представляющих нормальную микрофлору организма человека[3, 120, 122, 123, 156, 207, 208] и, в частности, кисломолочных бактерий.[2, 56, 103, 111] Выделено применение пробиотиков для профилактики и лечения кишечных инфекций, выявлены положительные эффекты от их использования при регуляции газового состава кишечника, ферментной активности, водно-солевого обмена, метаболизма желчных кислот и холестерина, в комплексе лечения хронического рецидивирующего афтозного стоматита.