WWW.KONF.X-PDF.RU
БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА - Авторефераты, диссертации, конференции
 


«ГЕНОИДЕНТИФИКАЦИЯ ВИРУСА БЫЧЬЕГО ЛЕЙКОЗА ...»

На правах рукописи

ЗАКИРОВА ЗУХРА РУСТАМОВНА

ГЕНОИДЕНТИФИКАЦИЯ ВИРУСА БЫЧЬЕГО ЛЕЙКОЗА

06.02.02 – Ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология,

микология с микотоксикологией и иммунология

06.02.01 – Диагностика болезней и терапия животных, патология, онкология и

морфология животных

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

Казань – 2015

Работа выполнена в федеральном государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Казанская государственная академия ветеринарной медицины имени Н.Э.

Баумана»

Научный руководитель: доктор ветеринарных наук, профессор Хазипов Нариман Залилович

Научный консультант: доктор биологических наук, Вафин Рамиль Ришадович

Официальные оппоненты: Васильев Дмитрий Аркадьевич - доктор биологических наук, профессор, заведующий кафедрой микробиологии, эпизоотологии и ветеринарно-санитарной экспертизы ФГБОУ ВПО «Ульяновская ГСХА»

Байматов Валерий Нурмухаметович, доктор ветеринарных наук, профессор, профессор кафедры общей патологии имени В.М.

Коропова ФГБОУ ВПО МГАВМиБ

Ведущая организация: Федеральное государственное бюджетное учреждение «Федеральный центр токсикологической, радиационной и биологической безопасности», г. Казань

Защита диссертации состоится «19» июня 2015 г. в «14.00» часов на заседании диссертационного совета Д 220.034.01 при Казанской государственной академии ветеринарной медицины имени Н.Э. Баумана по адресу: 420029, г. Казань, ул. Сибирский тракт, 35.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке и на сайте федерального государственного бюджетного http://www.ksavm.senet.ru/ образовательного учреждения высшего профессионального образования «Казанская государственная академия ветеринарной медицины имени Н.Э.

Баумана»

Автореферат разослан «____» ___________2015 г.

Ученый секретарь диссертационного совета Трофимова Елена Николаевна

1.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Лейкоз крупного рогатого скота – хроническое инфекционное заболевание опухолевой природы, возбудителем которого является вид Bovine leukemia virus (аббр. BLV; вирус бычьего лейкоза, сокращ.

ВБЛ) рода Deltaretrovirus семейства Retroviridae, согласно международной вирусной таксономии (A.M.Q. King et al., 2012).

Современная оценка генетического разнообразия ВБЛ на основе филогенетического анализа информативного маркерного локуса env-гена с интерпретацией генотипических кластеров построенных дендрограмм (S.M.

Rodriguez et al., 2009; А.Ю. Шаева и др., 2012; M. Rola-Luszczak et al., 2013), является наиболее действенным подходом геноидентификации BLV, нежели предложенные ранее (пионерские) стратегии типизации (H. Fechner et al., 1997D. Beier et al., 2001; M. Licursi et al., 2002) на основе полиморфизма длины рестрикционных фрагментов, выстроенные исключительно на принципе интерпретации генерируемых env-ПЦР-ПДРФ-профилей.

Нынешняя филогенетическая классификация ВБЛ предусматривает наличие восьми генотипов, семь из которых впервые были описаны в работе S.M. Rodriguez et al. (2009), а восьмой генотип – в ранней публикации 2011 г.

нашей группы ученых (А.Ю. Шаева и др., 2011), с независимым подтверждением существования нового (8-го) генотипа BLV в чуть более поздних статьях других отечественных и зарубежных исследователей (D. Bali et al., 2012; M.M. Ababneh et al., 2012; M. Rola-Luszczak et al., 2013), чьи оригинальные работы по частичному секвенированию геномов ВБЛ и дальнейшему генотипированию этого вируса также являются актуальными.

Цель и задачи исследования. Цель исследования – создание научнопрактических основ геноидентификации вируса бычьего лейкоза, интегрированных в систему молекулярного мониторинга инфицированности стад генотипами BLV.

Для реализации цели решались следующие задачи:

уточнить эпизоотическую ситуацию в Республике Татарстан РФ в отношении лейкоза крупного рогатого скота.

установить генотипическую принадлежность изолятов ВБЛ, циркулирующих в животноводческих хозяйствах Республики Татарстан, в соответствии с филогенетической классификацией возбудителя на основе анализа секвенированных последовательностей локуса env-гена провируса BLV;

типировать депонированных в GenBank NCBI представителей BLV в зависимости от выбранных стратегий геноидентификации с ретроспективной оценкой степени согласованности генотипических подходов;

разработать и апробировать стратегию ПЦР-ПДРФ-генотипирования ВБЛ, согласующуюся с филогенетической классификацией возбудителя;

систематизировать информационные данные о фактах выявления представителей нового (8-го) генотипа BLV в различных регионах мира.

Научная новизна.

Впервые выявлены циркулирующие в популяциях крупного рогатого скота Республики Татарстан изоляты ВБЛ с уникальными нуклеотидными последовательностями локуса env-гена, значительно повышающими уровень знаний о генетическом разнообразии изучаемого вирусного патогена.

Впервые разработана и апробирована стратегия ПЦР-ПДРФгенотипирования BLV, согласующаяся с филогенетической классификацией возбудителя.

Научная новизна работы отражена в публикациях ведущих рецензируемых научных журналов перечня ВАК, а также в глобальной электронной базе данных GenBank NCBI.

Научно-практическая значимость.

Полученные данные результатов молекулярно-генетических исследований изолятов ВБЛ на предмет их генотипической принадлежности значительно повышают уровень знаний о генетическом разнообразии BLV, с их последующим эффективным применением в научно-практической деятельности ветеринарной медицины.

Стратегия ПЦР-ПДРФ-генотипирования ВБЛ, разработанная с учетом новых знаний о генетическом разнообразии возбудителя, и согласующаяся с его филогенетической классификацией, позволяет проводить идентификацию всех восьми известных генотипов, и может быть внедрена в систему молекулярного мониторинга инфицированности стад генотипами BLV.

Апробация работы. Основные положения диссертации доложены на:

– международной интернет-конференции «Актуальные проблемы биохимии и бионанотехнологии» (Казань, 2012).

– международном симпозиуме «Биохимия – основа наук о жизни», посвященного 150-летию образования кафедры биохимии Казанского университета (Казань, 2013).

– VIII Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Молекулярная диагностика – 2014» (Москва, 2014).

Публикация результатов исследования. По теме диссертации опубликовано 8 статей, в том числе 5 публикаций в ведущих рецензируемых научных журналах, рекомендованных ВАК, а также 43 депонированные в глобальную базу данных GenBank NCBI публикации нуклеотидных последовательностей локуса env-гена выявленных изолятов провируса BLV.

Основные положения, выносимые на защиту.

Эпизоотическая ситуация по лейкозу крупного рогатого скота в Республике Татарстан эндемическая, краткосрочный тренд по неблагополучию – нарастающий.

В популяциях крупного рогатого скота Республики Татарстан циркулируют изоляты 4-го, 7-го и 8-го генотипов BLV, генотипическая принадлежность которых была установлена на основании филогенетического анализа секвенированных последовательностей локуса env-гена возбудителя.

Типированием 422 депонированных в GenBank NCBI представителей ВБЛ в зависимости от выбранных стратегий геноидентификации подтверждена несогласованность известных ранее способов ПЦР-ПДРФ-типизации BLV с нынешней филогенетической классификацией возбудителя.

Апробированная стратегия ПЦР-ПДРФ-генотипирования 8-ми известных генотипов ВБЛ с 5 рестриктазами (PvuII, SspI, HphI, HaeIII и BstYI) разработана нами в согласованности с нынешней филогенетической классификацией возбудителя.

Представители нового (8-го) генотипа BLV регистрируются в различных регионах мира – Хорватии, Украине, России, Иордании; факт их существования впервые обоснован нашей группой исследователей, с независимым подтверждением зарубежными и отечественными учеными.

Объем и структура диссертационной работы. Диссертация изложена на 167 страницах компьютерного текста и включает: введение, обзор литературы, материалы и методы исследования, результаты собственных исследований, обсуждение результатов исследования, выводы, практические предложения, список сокращений и условных обозначений, список использованной литературы (всего 134 источника, из них 73 отечественных и 61 зарубежный источник) и приложения (43 депонированные в глобальную базу данных GenBank NCBI публикации нуклеотидных последовательностей локуса envгена выявленных изолятов провируса BLV) Диссертация иллюстрирована 8 рисунками и 22 таблицами.

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

Исследования проводились в 2011-2014 годы на кафедре биологической и неорганической химии ФГБОУ ВПО «Казанская государственная академия ветеринарной медицины им. Н.Э. Баумана», ФГБУ «Татарская межрегиональная ветеринарная лаборатория» Россельхознадзора РФ (г.

Казань), ГБУ «Республиканская ветеринарная лаборатория» РТ (г. Казань), в НПК «Синтол» (г. Москва), а также в сельхозпредприятиях районов Республики Татарстан Российской Федерации (РТ РФ).

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

При проведении эпизоотологических исследований анализировались статистические данные ветеринарной отчетности, результаты лабораторной диагностики на лейкоз крупного рогатого скота по РИД и гематологии.

Молекулярно-генетическому исследованию было подвергнуто 100 проб крови BLV-позитивных коров сельхозпредприятий 16 районов РТ на предмет идентификации выявленных представителей вируса бычьего лейкоза (ВБЛ), как на основе филогенетического анализа секвенированных последовательностей локуса env-гена возбудителя, так и ПЦР-ПДРФ-генотипирования (табл. 1).

–  –  –

ВСЕГО ОБРАЗЦОВ 100 Экстракция тотальной ДНК из цельной крови крупного рогатого скота осуществлена с помощью коммерческого набора «ДНК-сорб Б» согласно инструкции производителя (ЦНИИ Эпидемиологии МЗ РФ).

При постановке ПЦР с выделенными образцами провирусной ДНК BLV использовалась модификация «nested» ПЦР с применением «внешних»

(«env5032» и «env5608») и «внутренних» («env5099» и «env5521») праймеров, инициирующих на заключительном этапе реакции амплификацию фрагмента env-гена ВБЛ длиной 444 bp [H. Fechner et al., 1997D. Beier et al., 2001; M.

Licursi et al., 2002].

Эндонуклеазы рестрикции, подобранные для ПЦР-ПДРФ-генотипирования BLV в соответствии с филогенетической классификацией: PvuII, SspI, HphI (изошизомер AsuHPI), HaeIII, BstYI (изошизомер BstX2I).

ПЦР-ПДРФ-моделирование: NEBcutter v.2.0 ((http://tools.neb.com/ NEBcutter2/).

Детекция результатов ПЦР- и ПЦР-ПДРФ-анализа выполнена методом горизонтального электрофореза в 2,5% агарозном геле в буфере ТBE (рН 8,0), содержащем этидий бромид с последующей визуализацией результатов в ультрафиолетовом трансиллюминаторе (=310 нм).

Размеры фрагментов ДНК оценены по подвижности в сравнении со стандартными ДНК маркерами.

В работе использованы реактивы для молекулярно-биологических исследований производства ООО «СибЭнзим» (Россия).

Секвенирование продуктов амплификации локуса env-гена выявленных изолятов провируса ВБЛ выполнено на генетическом анализаторе «ABI PRISM 3100» (Applied. Biosystems, США) в НПК «Синтол» (Россия) с использованием праймеров «env5099» и «env5521» в качестве сиквенсных.

Секвенированные последовательности локуса env-гена изолятов провируса BLV были выравнены по длине 400 нуклеотидов c соответствующими опубликованными в GenBank нуклеотидными последовательностями известных представителей используя программы BLV, BLAST и с последующим (http://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi) MEGA-4 филогенетическим анализом.

Номера доступа (Accession Number, A/N) депонированных в GenBank NCBI в 2013 г. нуклеотидных последовательностей локуса env-гена изолятов провируса BLV, выявленных у крупного рогатого скота в животноводческих хозяйствах Республики Татарстан: KC867136-KC867150, KC886607-KC886634

3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

–  –  –

Так, если в 2006 году, из 510 тыс. происследованных в РИД голов кр.рог.ск. было выявлено 83,8 тыс. инфицированных вирусом бычьего лейкоза животных (16,4%), то к 2014 году их процент увеличился на 1,9% и достиг 18,3% (151 тыс. голов), на фоне сравнительно большего количества исследованного поголовья (811 тыс. голов) (табл. 2).

Данные же по гематологии последних 9 лет, наоборот, свидетельствуют о тенденции к снижению от года в год как общего числа исследованных, так и выявленных гематологически больных животных (табл. 2). Например, если в 2006 году, было исследовано по гематологии 296 тыс. голов с долей гематологически больных в 7,8 тыс. голов (2,6%), то к 2014 году их процент уменьшился на 0,5% и достиг 2,1% (5,1 тыс. голов) на фоне сравнительно меньшего количества исследованного поголовья (242 тыс. голов) (табл. 2).

По результатам анализа данных серологических исследований (РИД) была установлена и степень инфицированности поголовья крупного рогатого скота вирусом бычьего лейкоза в разрезе всех районов Республики Татарстан за 2010г.

Так, если в 2010-2011 гг в группу наиболее высокой степени инфицированности ВБЛ (от 30,1% и выше) входило 5 районов Республики Татарстан (Пестречинский, Бугульминский, Лениногорский, Мамадышский, Альметьевский), а в период с 2012-2013 гг – 7 районов РТ, то в 2014 году (табл.

11) число районов с наиболее тяжелой ситуацией по лейкозу увеличилось до 12 (Мамадышский, Бугульминский, Кайбицкий, Камско-Устьинский, Алькеевский, Тетюшский, Рыбно-Слободский, Буинский, Заинский, Лениногорский, Альметьевский, Нурлатский).

Можно констатировать, что эпизоотическая ситуация по лейкозу крупного рогатого скота в Республике Татарстан эндемическая, остается по-прежнему напряженной, с определенной тенденцией к усугублению.

3.2. Генотипирование изолятов вируса бычьего лейкоза, выявленных среди поголовья крупного рогатого скота в Республики Татарстан Задачей данного раздела исследования являлось установление генотипической принадлежности изолятов ВБЛ, циркулирующих в животноводческих хозяйствах Республики Татарстан, в соответствии с филогенетической классификацией возбудителя на основе анализа секвенированных последовательностей локуса env-гена провируса BLV.

В результате сравнительного филогенетического анализа выравненных нуклеотидных последовательностей локуса env-гена изолятов провируса BLV, выявленных у кр.рог.ск. в животноводческих хозяйствах 16 районов Республики Татарстан, установлена их генотипическая принадлежность.

Так, из 100 идентифицированных изолятов 64 относились к 4-му генотипу BLV, 28 представителей ВБЛ принадлежали кластеру 7-го генотипа, а остальные 8 происследованных образцов провируса характеризовались признаком нового, недавно обоснованного нами 8-го генотипа возбудителя (табл. 3).

–  –  –

Фактически, на основании полученных результатов можно сделать вывод, что в популяциях крупного рогатого скота Республики Татарстан циркулируют изоляты трех из восьми известных генотипов ВБЛ, идентифицированных филогенетическим анализом секвенированных последовательностей локуса env-гена как представители 4-го, 7-го и 8-го генотипов BLV.

Из 100 секвенированных образцов, в GenBank NCBI были депонированы только 43 уникальные последовательности локуса env-гена BLV, результат генотипической идентификации которых на основе филогенетической классификации был отражен на построенной филограмме (рис. 1).

Дополнительно, по результатам оценки гетерогенности типовых представителей BLV по env-гену был проведен анализ внутри- и межгенотипической гетерогенности известных генотипов ВБЛ, информационные данные которого представлены в обобщенной табл. 4.

–  –  –

0.005.

Анализ же внутри- и межгенотипической гетерогенности типовых изолятов BLV показал несостоятельность использования «гетерогенного»

критерия оценки генетического разнообразия представителей ВБЛ в определении их таксономической принадлежности. Причина установленной несостоятельности кроется в отсутствии четкого алгоритма идентификации, т.к.

процентный диапазон значений внутригенотипической гетерогенности не разграничивает интервал значений межгенотипической гетерогенности (табл.

4).

3.3. Типизация депонированных в GenBank NCBI представителей BLV в зависимости от выбранных стратегий геноидентификации Задачей данного раздела исследования являлась типизация депонированных в GenBank NCBI 422 представителей BLV в зависимости от выбранных стратегий геноидентификации, основанных или на интерпретации результатов ПЦР-ПДРФ-анализа, или филогенетического анализа секвенированных последовательностей локуса env-гена возбудителя, с ретроспективной оценкой степени согласованности генотипических подходов.

Так, сравнительной оценкой нуклеотидных последовательностей локуса env-гена 422 представителей ВБЛ на предмет их типизации в зависимости от выбранных стратегий геноидентификаций подтверждено, что известные ранее способы типизации BLV, разработанные на основе ПЦР-ПДРФ-анализа, не согласуются с новым подходом к оценке генотипического разнообразия ВБЛ на основе филогенетического анализа env-гена возбудителя.

Например, изоляты BLV, идентифицированные по стратегии D Beier et al.

(2001) как представители Австралийской подгруппы, по филогенетической классификации могут принадлежать 1-му, 3-му, 6-му, 7-му или 8-му генотипам;

а Японской подгруппы – 1-му, 6-му или 7-му генотипам ВБЛ. Кроме того, для данной стратегии типизации выявлено дополнительно 9 уникальных комбинаций ПЦР-ПДРФ-профилей, тождественных 9 неклассифицированным подгруппам BLV (табл. 5).

–  –  –

? 444 444 316/128 444 1-- - --2- 3 ? 444 444 316/128 225/191/28 1 - - - --- - 1 ? 444 280/164 316/128 225/219 - 36 - - 10 - 3 - 49 ? 444 280/164 316/128 444 -1- - --- - 1 ? 444 280/164 316/128 219/189/36 - -- - 1-- - 1 ? 444 280/164 444 444 - --1 --- - 1 ? 444 208/164 253/191 225/219 - --1 --- - 1 ? 444 280/164 444 219/121/104 - --4 --- - 4

–  –  –

Причем, для данной стратегии типизации [M. Licursi et al., 2002] выявлено дополнительно 16 уникальных комбинаций ПЦР-ПДРФ-профилей, тождественных 16 неклассифицированным генотипам BLV (табл. 6).

При этом, изоляты BLV, идентифицированные по филогенетической классификации как представители 1-го генотипа, по стратегии M. Licursi et al.

(2002) могут относиться к 1-му, 3-му, 5-му и трем неклассифицированным генотипам ВБЛ, 2-го генотипа – к 6-му и двум неклассифицированным генотипам; 3-го генотипа – к 5-му и одному неклассифицированному генотипу;

–  –  –

198/94/87/32/27/6 328/116 285/94/32/21/6/6

ВАРИАНТНАЯ ГРУППА

–  –  –

И для данной стратегии типизации [H. Fechner et al., 1997] установлено 11 уникальных комбинаций ПЦР-ПДРФ-профилей, тождественных 11 неклассифицированным вариантным группам BLV (табл. 7).

При этом, изоляты BLV, идентифицированные по филогенетической классификации как представители 1-го генотипа, по стратегии H. Fechner et al.

(1997) могут характеризоваться признаком вариантных групп B, C, D, G и трех неклассифицированных групп; 2-го генотипа – вариантной группы F и одной неклассифицированной; 3-го генотипа – вариантной группы C; 4-го генотипа – вариантных групп A, D и трех неклассифицированных; 5-го генотипа – вариантной группы F и двух неклассифицированных; 6-го генотипа – вариантных групп B и С; 7-го генотипа – вариантных групп B, C, D, F и двух неклассифицированных; 8-го генотипа – вариантной группы E (табл. 7).

3.4. Разработка и апробация стратегии ПЦР-ПДРФ-генотипирования ВБЛ согласующейся с филогенетической классификацией возбудителя Руководствуясь принципом совершенствования стратегии ПЦР-ПДРФгенотипирования, согласующейся с филогенетической классификацией ВБЛ, в ходе системного анализа рестрикционных картирований локуса env-гена известных представителей BLV, нами были предложены новые условия идентификации по 5 эндонуклеазам рестрикции (PvuII, SspI, HphI, HaeIII и BstYI).

Информация с интерпретацией полученных env-ПЦР-ПДРФ-профилей 422 проанализированных представителей BLV, фактически отражающей стратегию ПЦР-ПДРФ-генотипирования ВБЛ в соответствии с филогенетической классификацией возбудителя, представлена в обобщенной табл. 8.

Так, 1-ый генотип BLV характеризуется наличием семи комбинаций envПЦР-ПДРФ-профилей (К1-7), 2-ой генотип – четырёх комбинаций (К8-11), 3-ий генотип – наличием трёх комбинаций (К12-14); 4-ый генотип – девяти комбинаций (К15-23); 5-ый генотип – трех комбинаций (К24-26); 6-ой генотип

– двух комбинаций (К27-28), 7-ой генотип – четырнадцати комбинаций (К29и 8-ой генотип ВБЛ – наличием пяти комбинаций (К43-47) env-ПЦР-ПДРФпрофилей BLV (табл. 8).

Следует подчеркнуть, что недавно обоснованный нами 8-ой генотип ВБЛ может быть успешно идентифицирован даже с использованием одной единственной рестриктазы генерирующей ПДРФ-фрагменты HaeIII, (225/94/87/32/6 bp), характерные только для этих представителей. А с применением двух ферментов могут быть определены представители 2-го (PvuII и BstYI), 3-го (HphI и HaeIII) и 5-го генотипов (PvuII и HphI) BLV Однако, для исчерпывающей идентификации генотипов BLV целесообразно руководствоваться полной картиной env-ПЦР-ПДРФ-профилей с сопоставлением полученных данных с результатами секвенирования ПЦРпродуктов и последующим филогенетическим анализом представителей ВБЛ по локусу env-гена данного возбудителя.

–  –  –

Достоверность in silico моделирования рестриктограмм по 5 эндонуклеазам рестрикции с характерными для определенного генотипа BLV комбинациями env-ПЦР-ПДРФ-профилей обоснована анализом выравнивания и рестрикционного картирования. А согласованность разработанной стратегии ПЦР-ПДРФ-генотипирования ВБЛ с филогенетической классификацией возбудителя подтверждена, в том числе, филогенетическим анализом локуса env-гена 47 типовых изолятов восьми известных генотипов BLV (рис. 2), генерировавших 47 уникальных комбинаций ПЦР-ПДРФ-профилей (табл. 8).

–  –  –

0.005 Рис. 2. Филограмма 47 типовых изолятов 8 известных генотипов ВБЛ, построенная на основании филогенетического анализа локуса env-гена [MEGA-4: алгоритм NJ, 400 nt, 47 seq.] При апробации разработанной стратегии генотипирования на 100 выявленных нами изолятах BLV регистрировались 10 комбинаций env-ПЦРПДРФ-профилей из 47 существующих, из которых пять (К15, К17, К18, К19, К20) были свойственны 4-му генотипу, три (К29, К30, К41) – 7-му генотипу, и два (К43, К44) – 8-му-генотипу ВБЛ, соответственно.

Электрофореграммы пяти env-ПЦР-ПДРФ-профилей (K15, К17, К18, К19, К20) выявленных изолятов 4-го генотипа BLV были запечатлены на соответствующих рисунках (рис. 3-4), представленных в качестве наглядных примеров реализации стратегии ПЦР-ПДРФ-генотипирования ВБЛ, согласующейся с филогенетической классификацией данного возбудителя Рис. 3. Электрофореграмма ПЦР-ПДРФ-профилей изолятов провируса BLV «N031», «N015» и «N023» (предложенная стратегия генотипирования BLV) Обозначения: 1, 7, 13) ДНК-маркеры 100 bp + 50 bp (СибЭнзим). 2-6) ПЦР-ПДРФ-профиль изолята провируса BLV «N031» (К15, 4-ый генотип): 2) PvuII-ПДРФ (280/164 bp); 3) SspIПДРФ (399/45 bp); 4) HphI-ПДРФ (224/220 bp); 5) HaeIII-ПДРФ (198/94/87/32/27/6 bp); 6) BstYI-ПДРФ (444 bp). 8-12) ПЦР-ПДРФ-профиль изолята провируса BLV «N015» (К17, 4-ый генотип): 8) PvuII-ПДРФ (280/164 bp); 9) SspI-ПДРФ (399/45 bp); 10) HphI-ПДРФ (444 bp);

11) HaeIII-ПДРФ (198/94/87/32/27/6 bp); 12) BstYI-ПДРФ (444 bp). 14-18) ПЦР-ПДРФпрофиль изолята провируса BLV «N023» (К18, 4-ый генотип): 14) PvuII-ПДРФ (280.164 bp);

15) SspI-ПДРФ (399/45 bp); 16) HphI-ПДРФ (224/220 bp); 17) HaeIII-ПДРФ (198/94/87/32/27.6 bp); 18) BstYI-ПДРФ (253/191 bp).

ПЦР-ПДРФ-профиль изолята провируса BLV «N031», запечатленный на электрофореграмме рис. 3 (треки 2-6) позиционируется как 15-ая комбинация (К15) env-ПЦР-ПДРФ-профиля 4-го генотипа ВБЛ, в чей круг входят не менее 115 изолятов (табл. 8), 25 из которых, в части их нуклеотидной последовательности локуса env-гена, депонированы в GenBank NCBI нами.

ПЦР-ПДРФ-профиль изолята провируса BLV «N015» (рис. 3, треки 8-12) представляет собой 17-ую комбинацию (К17) env-ПЦР-ПДРФ-профиля 4-го генотипа ВБЛ, насчитывая не менее 17 представителей (табл. 8), в том числе 2 депонированные нами в GenBank NCBI нуклеотидные последовательности локуса env-гена выявленных на территории Республики Татарстан изолятов возбудителя (изолят «N015», GenBank A/N: KC867143; изолят «N062», GenBank A/N: KC886615).

ПЦР-ПДРФ-профиль изолята провируса BLV «N023» (рис. 3, треки 14-18) относится к 18-ой комбинации (К18) env-ПЦР-ПДРФ-профиля 4-го генотипа, с пока единственно насчитываемой (для данной комбинации) и депонированной нами в GenBank NCBI нуклеотидной последовательностью локуса env-гена возбудителя (изолят «N023», GenBank A/N: KC867149).

ПЦР-ПДРФ-профиль изолята провируса BLV «N029», запечатленный на электрофореграмме рис. 4 (треки 2-6) позиционируется как 19-ая комбинация (К19) env-ПЦР-ПДРФ-профиля 4-го генотипа ВБЛ, в чей круг входят не менее 7 изолятов (табл. 8), 2 из которых, в части их нуклеотидной последовательности локуса env-гена, депонированы в GenBank NCBI нами.

Рис. 4. Электрофореграмма ПЦР-ПДРФ-профилей изолятов провируса BLV «N029», «N034» и «N013» (предложенная стратегия генотипирования BLV) Обозначения: 1, 7, 13) ДНК-маркеры 100 bp + 50 bp (СибЭнзим). 2-6) ПЦР-ПДРФ-профиль изолята провируса BLV «N029» (К19, 4-ый генотип): 2) PvuII-ПДРФ (280/164 bp); 3) SspIПДРФ (444 bp); 4) HphI-ПДРФ (224/220 bp); 5) HaeIII-ПДРФ (198/94/87/32/27/6 bp); 6) BstYIПДРФ (444 bp). 8-12) ПЦР-ПДРФ-профиль изолята провируса BLV «N034» (К20, 4-ый генотип): 8) PvuII-ПДРФ (280/164 bp); 9) SspI-ПДРФ (399/45 bp); 10) HphI-ПДРФ (224/220 bp); 11) HaeIII-ПДРФ (198/121/87/32/6 bp); 12) BstYI-ПДРФ (444 bp). 14-18) ПЦР-ПДРФпрофиль изолята провируса BLV «N013» (К29, 7-ой генотип): 14) PvuII-ПДРФ (444 bp); 15) SspI-ПДРФ (444 bp); 16) HphI-ПДРФ (224/137/83 bp); 17) HaeIII-ПДРФ (198/94/87/32/27.6 bp);

18) BstYI-ПДРФ (294/128/22 bp).

ПЦР-ПДРФ-профиль изолята провируса BLV «N034» (рис. 4, треки 8-12) относится к 20-ой комбинации (К20) env-ПЦР-ПДРФ-профиля 4-го генотипа, с пока единственно насчитываемой (для данной комбинации) и депонированной нами в GenBank NCBI нуклеотидной последовательностью локуса env-гена возбудителя (изолят «N034», GenBank A/N: KC886611).

ПЦР-ПДРФ-профиль изолята провируса BLV «N013» (рис. 4, треки 14-18) представляет собой 29-ую комбинацию (К) env-ПЦР-ПДРФ-профиля 7-го генотипа ВБЛ, насчитывая не менее 7 представителей (табл. 8), в том числе 2 депонированные нами в GenBank NCBI нуклеотидные последовательности локуса env-гена выявленных на территории Республики Татарстан изолятов возбудителя (изолят «N28», GenBank A/N: HM102356; изолят «N013», GenBank A/N: KC867142).

Электрофореграмма ПЦР-ПДРФ-профилей выявленных нами изолятов провируса BLV: «N067 (41-ая комбинация 7-го генотипа ВБЛ), «N006» и «N142» (43-ая и 44-ая комбинации 8-го генотипа) запечатлена на рис. 5.

Рис. 5. Электрофореграмма ПЦР-ПДРФ-профилей изолятов провируса BLV «N067», «N006» и «N142» (предложенная стратегия генотипирования BLV) Обозначения: 1, 7, 13) ДНК-маркеры 100 bp + 50 bp (СибЭнзим). 2-6) ПЦР-ПДРФ-профиль изолята провируса BLV «N067» (К41, 7-ой генотип): 2) PvuII-ПДРФ (444 bp); 3) SspI-ПДРФ (444 bp); 4) HphI-ПДРФ (224/137/44/39 bp); 5) HaeIII-ПДРФ (198/94/87/32/27/6 bp); 6) BstYIПДРФ (316/128 bp). 8-12) ПЦР-ПДРФ-профиль изолята провируса BLV «N006» (К43, 8-ой генотип): 8) PvuII-ПДРФ (444 bp); 9) SspI-ПДРФ (399/45 bp); 10) HphI-ПДРФ (224/220 bp);

11) HaeIII-ПДРФ (225/94/87/32/6 bp); 12) BstYI-ПДРФ (198/128/118 bp). 14-18) ПЦР-ПДРФпрофиль изолята провируса BLV «N142» (К44, 8-ой генотип): 14) PvuII-ПДРФ (444 bp); 15) SspI-ПДРФ (399/45 bp); 16) HphI-ПДРФ (224/220 bp); 17) HaeIII-ПДРФ (225/94/87/32/6 bp);

18) BstYI-ПДРФ (316/128 bp).

Изолят N067 (KC886618), генерирующий 41-ую комбинацию env-ПЦРПДРФ-профиля (рис. 5, треки 2-6), был использован в качестве единственного типового представителя данной комбинации (К41) 7-го генотипа BLV (табл. 8).

Изолят N006 (KC867140) 8-го генотипа ВБЛ, генерирующий 43-ую комбинацию env-ПЦР-ПДРФ-профиля (рис. 5, треки 8-12) имел схожую рестриктограмму (К43) с остальными 4 выявленными изолятами. 2 из которых, в части уникальных нуклеотидных последовательностей локуса env-гена депонированы в GenBank NCBI (N063 (KC886616), N089 (KC886624) (табл. 9).

А в качестве типового изолята BLV, генерирующего 44-ую комбинацию env-ПЦР-ПДРФ-профиля 8-го генотипа (рис. 5, треки 14-18) использовался контрольный изолят N174 (JF713455), с чьей рестриктограммой (К44) были схожи 2 других изолята – N121 (KC886631) и N142 (KC886634), выявленные нами в 2013 г. (табл. 9).

Сводные данные результатов апробации разработанной стратегии генотипирования на 100 изолятах ВБЛ, выявленных у кр.рог.ск. в животноводческих хозяйствах Республики Татарстан РФ отражены в табл. 9.

–  –  –

ВЫВОДЫ

1. Эпизоотическая ситуация в Республике Татарстан в отношении лейкоза крупного рогатого скота, характеризуемая как эндемическая, остается попрежнему напряженной, с определенной тенденцией к усугублению;

краткосрочный тренд по неблагополучию – нарастающий.

2. В популяциях крупного рогатого скота Республики Татарстан циркулируют изоляты ВБЛ, идентифицированные на основе интерпретации результатов филогенетического анализа секвенированных последовательностей локуса env-гена как представители 4-го, 7-го и нового, недавно обоснованного 8-го генотипов BLV, соответственно.

3. Сравнительной оценкой 422 нуклеотидных последовательностей локуса env-гена изолятов ВБЛ на предмет их классификации в зависимости от выбранной стратегии идентификации подтверждено отсутствие согласованности известных ранее способов ПЦР-ПДРФ-типизации BLV с современной филогенетической классификацией возбудителя.

4. Разработанная и апробированная нами стратегия ПЦР-ПДРФгенотипирования ВБЛ с подобранными условиями идентификации всех 8-ми генотипов по 5 эндонуклеазам рестрикции (PvuII, SspI, HphI, HaeIII и BstYI) согласована с современным подходом к оценке его генотипического разнообразия на основе филогенетическо анализа env-гена возбудителя.

5. Систематизацией информационных данных о фактах выявления представителей нового (8-го) генотипа BLV в различных регионах мира установлена регистрация его изолятов в Хорватии, Украине, России и Иордании, с независимым подтверждением существования данного генотипа зарубежными и отечественными учеными, но впервые обоснованного нашей группой исследователей.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Внедрить в систему молекулярного мониторинга инфицированности стад генотипами BLV разработанную нами стратегию ПЦР-ПДРФ-генотипирования, согласующуюся с современной филогенетической классификацией данного возбудителя.

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

Работы, опубликованные в ведущих рецензируемых научных журналах, рекомендованных ВАК РФ Шаева, А.Ю. Идентификация нового генотипа ВЛКРС / А.Ю. Шаева, З.Р.

1.

Гараева, Р.Р. Вафин, Н.З. Хазипов, А.М. Алимов // Ученые записки КГАВМ. – Казань, 2012. – Т. 211. – С. 192-197.

2. Шаева, А.Ю. Новый генотип вируса лейкоза КРС / А.Ю. Шаева, З.Р.

Гараева // Ветеринария и кормление. – 2012. - № 5. – С. 51-52.

3. Закирова З.Р. Геноидентификация изолятов ВЛКРС, выявленных в животноводческих хозяйствах республики Татарстан / З.Р. Закирова // Ученые записки КГАВМ. – Казань, 2013. – Т. 215. – С. 118-121.

4. Вафин, Р.Р. Выявление нового (8-го) генотипа ВЛКРС в различных регионах мира / Р.Р. Вафин, Н.З. Хазипов, А.Ю. Шаева, З.Р. Закирова, Л.И. Зайнуллин, С.В. Тюлькин, И.Р. Абдулина, А.М. Алимов // Фундаментальные исследования. – 2013. – № 10 (часть 7). – С. 1467-1471.

5.1. Вафин, Р.Р. Генотипическая идентификация вируса бычьего лейкоза / Р.Р.

Вафин, Н.З. Хазипов, А.Ю. Шаева, З.Р. Закирова, Л.И. Зайнуллин, С.В.

Тюлькин, И.Р. Абдулина, А.М. Алимов // Молекулярная генетика, микробиология и вирусология. – 2014. – № 4. – С. 34-40.

5.2. Vafin, R.R. Genotypic identification of the bovine leukemia virus / R.R. Vafin, N.Z. Khazipov, A.Y. Shaeva, Z.R. Zakirova, L.I. Zaynullin, S.V. Tyulkin, I.R.

Abdulina, A.M. Alimov // Molecular Genetics, Microbiology and Virology. – 2014. – V. 29. – N. 4. – P. 195-203.

Публикации в материалах конференций, научных и научно-практических журналах и изданиях Гараева, З.Р. Филогенетический анализ изолятов ВЛКРС, 6.

циркулирующих в животноводческих хозяйствах Республики Татарстан / З.Р. Гараева, А.Ю. Шаева, Р.Р. Вафин, Н.З. Хазипов, Л.И. Зайнуллин // Сборник трудов III Международной интернет-конференции «Актуальные проблемы биохимии и бионанотехнологии». – Казань, 2012. – С. 94-95.

Хазипов, Н.З. Генотипирование изолятов Bovine Leukemia Virus, 7.

выявленных в Республике Татарстан / Н.З. Хазипов, З.Р. Закирова, А.Ю.

Шаева, Р.Р. Вафин, Л.И. Зайнуллин // Сборник трудов международного симпозиума «Биохимия – основа наук о жизни», посвященного 150-летию образования кафедры биохимии Казанского университета. – Казань, 2013.

– С. 128-129.

Вафин, Р.Р. Генотипирование вируса бычьего лейкоза (BLV) / Р.Р. Вафин, 8.

Н.З. Хазипов, А.Ю. Шаева, З.Р. Закирова, Л.И. Зайнуллин, С.В. Тюлькин // Сборник трудов VIII Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Молекулярная диагностика – 2014». – Москва, 2014. – Т. 2. – С. 521.




Похожие работы:

«ЯИЦКАЯ Наталья Александровна ТЕРМОХАЛИННЫЙ РЕЖИМ КАСПИЙСКОГО МОРЯ ПРИ ИЗМЕНЕНИИ УРОВНЯ 25.00.28 – Океанология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата географических наук Мурманск Работа выполнена в отделе информационных технологий и математического моделирования Института аридных зон Южного научного центра РАН, г. Ростов-на-Дону и Мурманском морском биологическом институте Кольского научного центра РАН, г. Мурманск Научный руководитель: Бердников Сергей...»

«КОНДРАТОВА ВАЛЕНТИНА НИКОЛАЕВНА ГЕНОДИАГНОСТИКА РАКА: ОПТИМИЗАЦИЯ МЕТОДОВ ВЫЯВЛЕНИЯ МУТАНТНЫХ АЛЛЕЛЕЙ В ДНК ТКАНЕЙ И БИОЛОГИЧЕСКИХ ЖИДКОСТЕЙ ОРГАНИЗМА 14.01.12 – онкология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Москва – 2015 Работа выполнена в федеральном государственном бюджетном научном учреждении «Российский онкологический научный центр имени Н.Н.Блохина» (директор – академик РАН, профессор М.И. Давыдов) Научный руководитель:...»

«ЧУКАЛОВА Наталия Николаевна ЭКОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ, ОБУСЛАВЛИВАЮЩИЕ ЭПИЗООТИЧЕ­ СКОЕ СОСТОЯНИЕ ЛЕЩА (ABRAMIS BRAMA L.) В КУРШСКОМ ЗАЛИВЕ БАЛТИЙСКОГО МОРЯ 03.00.16 Экология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Калининград 2008 Работа выполнена в Федеральном государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Калининградский государственный технический университет» Научный Доцент, кандидат биологических...»

«ЕФИМОВ ПЕТР ГЕННАДЬЕВИЧ РОД PLATANTHERA Rich. (ORCHIDACEAE Juss.) И БЛИЗКИЕ РОДЫ ВО ФЛОРЕ РОССИИ 03.00.05. – «Ботаника» Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук САНКТ-ПЕТЕРБУРГ Работа выполнена в Отделе Гербарий высших растений Ботанического института им. В. Л. Комарова РАН. Научный руководитель: доктор биологических наук Аверьянов Леонид Владимирович Официальные оппоненты: доктор биологических наук Шамров Иван Иванович, кандидат...»

«УДК 595.787 ДУБАТОЛОВ Владимир Викторович ЧЕШУЕКРЫЛЫЕ ПОДСЕМЕЙСТВА ARCTIINAE (LEPIDOPTERA, ARCTIIDAE) ПАЛЕАРКТИКИ 03.00.09 – энтомология Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук Новосибирск – 2007 Работа выполнена в Институте систематики и экологии животных Сибир ского отделения Российской академии наук. Официальные оппоненты: доктор биологических наук...»

«Попов Игорь Олегович НАБЛЮДАЕМЫЕ И ОЖИДАЕМЫЕ КЛИМАТООБУСЛОВЛЕННЫЕ ИЗМЕНЕНИЯ РАСПРОСТРАНЕНИЯ ИКСОДОВЫХ КЛЕЩЕЙ IXODES RICINUS И IXODES PERSULCATUS НА ТЕРРИТОРИИ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ И СТРАН БЛИЖНЕГО ЗАРУБЕЖЬЯ Специальность 03.02.08 «Экология» АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой...»

«Скородумова Любовь Олеговна АНАЛИЗ СТАТУСА ЭКСПРЕССИИ РАКОВО-ТЕСТИКУЛЯРНЫХ ГЕНОВ КАК МИШЕНЕЙ ДЛЯ ТЕРАПИИ И ПРОФИЛАКТИКИ ОНКОЛОГИЧЕСКИХ ЗАБОЛЕВАНИЙ Специальность 03.01.03 – молекулярная биология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук МОСКВА Работа выполнена в лаборатории генной терапии Федерального государственного бюджетного учреждения науки Института биологии гена Российской академии наук Научный Ларин Сергей Сергеевич, кандидат...»

«Гуляева Анастасия Юрьевна ФАРМАКО-ТОКСИКОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА И ТЕРАПЕВТИЧЕСКАЯ ЭФФЕКТИВНОСТЬ ЛЕКАРСТВЕННОГО ПРЕПАРАТА ДЛЯ ИНТРАЦИСТЕРНАЛЬНОГО ВВЕДЕНИЯ НА ОСНОВЕ ЭНРОФЛОКСАЦИНА И КЕТОПРОФЕНА 06.02.03 ветеринарная фармакология c токсикологией АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Москва 2014 Работа выполнена в отделе качества и стандартизации фармакологических лекарственных средств федерального государственного бюджетного учреждения...»

«Харитонцев Борис Степанович Флорогенез и фитоценогенез на юге Западной Сибири Специальность: 03.00.05 – БОТАНИКА Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук Екатеринбург – 2009 Работа выполнена в Институте экологии растений и животных Уральского отделения Российской академии наук Научный консультант – академик РАН, заслуженный деятель науки РФ, доктор биологических наук, профессор Горчаковский Павел Леонидович Официальные оппоненты: доктор...»

«СТЕПАНОВА СВЕТЛАНА КИМОВНА ГЕНЕТИЧЕСКАЯ ВАРИАБЕЛЬНОСТЬ ЛОКУСА МИОТОНИНПРОТЕИНКИНАЗЫ В ЯКУТСКОЙ ПОПУЛЯЦИИ 03.02.07 – генетика АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Томск 2015 Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном научном учреждении «Якутский научный центр комплексных медицинских проблем» и в Федеральном государственном бюджетном научном учреждении «Научноисследовательский институт медицинской генетики» (г.Томск)...»

«АБДУЛЛОЕВ ХУШБАХТ САТТОРОВИЧ ИММУНОБИОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА ВИРУСА ИНФЕКЦИОННОГО БРОНХИТА КУР ГЕНОТИПА QX 06.02.02 – ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук Владимир – 2015 Работа выполнена в ФГАОУ ВО «Российский университет дружбы народов» и ФГБУ «Федеральный центр охраны здоровья животных» (ФГБУ «ВНИИЗЖ»). Макаров Владимир Владимирович,...»

«Дандал Али Шебли ПАТОГЕНЕТИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА ВИРУСА ИНФЕКЦИОННОГО БРОНХИТА КУР 06.02.02 «ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология» АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук Владимир-2015 Работа выполнена в ФГБУ «Федеральный центр охраны здоровья животных» (ФГБУ «ВНИИЗЖ) Россельхознадзора и в ФГБАОУ ВПО «Российский университет дружбы народов» Научный руководитель: Макаров Владимир...»

«Берко Татьяна Владимировна Продуктивность и воспроизводительные Качества птицы родительского стада кросса «хайсекс коричневый» при использовании В кормлении тыквенного жмыха, Обогащенного биодоступной формой йода 06.02.10 – частная зоотехния, технология производства продуктов животноводства АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Волгоград – 2015 Диссертационная работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном научном...»

«ФЕТИСОВА ЕВГЕНИЯ ВЛАДИМИРОВНА МЕТОДИКА ДОВУЗОВСКОГО ОБУЧЕНИЯ МАТЕМАТИКЕ ИНОСТРАННЫХ СТУДЕНТОВ, ОБУЧАЮЩИХСЯ НА РУССКОМ ЯЗЫКЕ (МЕДИКО-БИОЛОГИЧЕСКИЙ ПРОФИЛЬ) 13.00.02 – теория и методика обучения и воспитания (математика) АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата педагогических наук Москва 2013 Работа выполнена на кафедре программного обеспечения и администрирования информационных систем Федерального государственного бюджетного образовательного учреждения...»

«АФГОНОВ МУХАММАДАЛИ МИРАЛИЕВИЧ Системно-деятельностный подход к гуманитарно-краеведческой воспитательной деятельности в общеобразовательных учреждениях Республики Таджикистан 13.00.01 общая педагогика, история педагогики и образования (педагогические науки) АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора педагогических наук Душанбе 2015 Работа выполнена на общеуниверситетской кафедре педагогики Таджикского национального университета доктор педагогических наук,...»

«Равашдех Шариф Халид Абдул-Азиз БИОЛОГИЯ, ВРЕДОНОСНОСТЬ И СОВЕРШЕНСТВОВАНИЕ МЕР БОРЬБЫ ПРОТИВ ТОМАТНОЙ МОЛИ Tuta absoluta (Meyrick) В УСЛОВИЯХ ИОРДАНИИ 06.01.07 – защита растений АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Москва – 2014 Работа выполнена на кафедре генетики, растениеводства и защиты растений Российского университета дружбы народов и на Сельскохозяйственной станции Дейр Алла (Королевство Иордания). Научный руководитель:...»

«Новикова Любовь Александровна СТРУКТУРА И ДИНАМИКА ТРАВЯНОЙ РАСТИТЕЛЬНОСТИ ЛЕСОСТЕПНОЙ ЗОНЫ НА ЗАПАДНЫХ СКЛОНАХ ПРИВОЛЖСКОЙ ВОЗВЫШЕННОСТИ И ПУТИ ЕЕ ОПТИМИЗАЦИИ 03.02.01 – ботаника Автореферат диссертации на соискание учёной степени доктора биологических наук Саратов – 2011 Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Пензенский государственный педагогический университет имени В.Г. Белинского»...»

«Лысков Дмитрий Федорович СИСТЕМАТИКА РОДА PRANGOS (UMBELLIFERAE, APIOIDEAE) И СБЛИЖАЕМЫХ ТАКСОНОВ: СОПОСТАВЛЕНИЕ МОРФОЛОГОАНАТОМИЧЕСКИХ И МОЛЕКУЛЯРНЫХ ДАННЫХ Специальность 03.02.01 – Ботаника АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Москва — 2015 Работа выполнена на биологическом факультете ФГБОУ ВО «Московский государственный университет имени М.В.Ломоносова» Научный руководитель: Пименов Михаил Георгиевич доктор биологических наук,...»

«ГАДЖИЕВА САДАГЕТ СУЛТАНВАГИДОВНА ФАУНА, БИОЛОГИЯ И ЭКОЛОГИЯ РОДА ANOPHELES MG. (СЕМ. CULICIDAE) В ПРИБРЕЖНЫХ ЭКОСИСТЕМАХ КАСПИЙСКОГО МОРЯ 03.00.08 – зоология 03.00.16 – экология Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук Махачкала 2010 Работа выполнена на кафедре зоологии Дагестанского государственного педагогического университета, в Научно-исследовательском институте им. Н.И.Вавилова, Институте прикладной экологии Республики Дагестан...»

«Басати Зарема Кантемировна ФОРМИРОВАНИЕ ПОТРЕБИТЕЛЬСКИХ СВОЙСТВ И ИССЛЕДОВАНИЕ КАЧЕСТВА РАССОЛЬНЫХ СЫРОВ С ПРИМЕНЕНИЕМ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ ДОБАВОК Специальность 05. 18. 15 – Товароведение пищевых продуктов и технология продуктов общественного питания Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата технических наук Санкт-Петербург Диссертационная работа выполнена на кафедре экспертизы потребительских товаров Государственного образовательного учреждения высшего...»







 
2016 www.konf.x-pdf.ru - «Бесплатная электронная библиотека - Авторефераты, диссертации, конференции»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.