WWW.KONF.X-PDF.RU
БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА - Авторефераты, диссертации, конференции
 


Pages:     | 1 || 3 | 4 |

«ОЦЕНКА ПИЩЕВЫХ (АКАРИЦИДНЫХ) СВОЙСТВ РЯДА СУБТРОПИЧЕСКИХ И ТРОПИЧЕСКИХ РАСТЕНИЙ В ОТНОШЕНИИ ПАУТИННОГО КЛЕЩА TETRANYCHUS ATLANTICUS MСGREGOR ...»

-- [ Страница 2 ] --

Ротенон распадается в течении нескольких дней, отсутствует фотостабильность (Dweck, 2002). Основное применение находит в уничтожении популяций рыб, т.к. препарат имеет высокую токсичность для рыб СK50 (96 ч) для радужной форели 1,9 мкг/л (The Pesticide Manual, 2012).

Ротенон для теплокровных умеренно токсичен: ЛД50 132-1500 мг/кг (крысы, перорально), он весьма токсичен для свиней. Для человека более токсичен ингаляционный путь попадания (ЛД50 300 – 500 мг/кг). Этот препарат относят к 3 классу опасности по EPA. Для пчел не имеет токсичности, но токсична смесь с пиретрумом (Мельников, 1995). Ротенон наносит 100%-ю гибель хищного клеща фитосейулюса Phytoseiulus persimilis Athias-Henriot. (Duso et. al., 2008).

Ним-производные

В экологическом земледелии Евросоюза в настоящее время в защите растений от паутинных клещей используют препараты растительного происхождения, в составе которых инсектоакарицидные вещества азадирахтины (Ним-производные) (Jacobson, 1986). Тропическое дерево Ним Azadirachta indica A. Juss (Meliaceae) давно было известно в Индии и использовалось в народной медицине на протяжении более тысячелетия.

Экстракты различных частей дерева используются для борьбы с болезнями растений, вредителями, экто- и эндопаразитами у человека и животных, в личной гигиене и т.д. (Copping, 2001).

К ним первую очередь относится инсектоакарицид из растения нимацаль-Т/С, КЭ (д.в. азадирахтин 10 г/л), который получают из семян индийской сирени (A. indica) (фирма производитель Trifolio – M GmbH., Германия). Семена Ним-дерева имеют в составе лимоноиды: азадирахтин, диацетилгедунин, гидроксиазадирадионин, мелиантриол, нимбин, саланнин, нимболид, 17- диацетилнимбин ( Jacobson, 1986).

В состав препарата включены вещества из группы лимонойдов которые состоят из азадирахтина А (1%) и азадирахтинов Б, В, Г, Д, и др.

растительне масло (51%), ним-субстанции (2,5%).

Наличие в Нимацале-Т/С вещества как комплекса групп осложняет возможность развития резистентности у вредителя к препарату, это было потвержденно в лабораторных опытах с испытанием азадирахтина А против капустной моли Plutella xylsotella L. (Lepidoptera, Yponomeutidae) в течении 43 генераций (Хуммель, 2007).

Ним экстракты показали эффективность против 200 видов вредителей насекомых, включая такие группы, как – чешуекрылые, белокрылки, жуки, трипсы, минеры, тли (Copping, 2001).

Нимацаль-Т/С – это кишечно-контактный инсектоакарицид, применяемый против личинок и имаго колорадского жука на картофеле, комплекса гусениц чешуекрылых и капустной тли на капусте, а также против свободно-живущих колюще-сосущих вредителей (трипсов) (Smitley and Davis, 2000).

Помимо насекомых, ним-препараты эффективны против клещей (Smitley and Davis, 2000) и моллюсков (Mostafa and Abdel-Megeed, 1996).

Однако механизм действия на эти группы вредителей неизвестен. Получили данные от том, что нимацаль-Т/С можно использовать для борьбы с виноградным мучнистым червецом Planococcus ficus Sing. (биологическая эффективность для самок составила 97%, личинок – 98,6%), и против диаспиновых щитовок (японская палочковидная Lopholeucaspis japonica Ckll., запятовидная померанцевая Lepidosaphes beckii Newn. и палочковидная L. gloveri Pack. – биологическая эффективность составляла в отношении самок 57,2-59,9%, личинок 70,6-94,7%) (Табатадзе, Лопадзе, 2002).

Главным из механизма действия нимацаля-Т/С его влияние на физиологию развития вредителей, он попадает сначала в кишечный тракт, затем в кровеносную систему организма, блокирует функцию гормональной системы для выработки линочного гормона экдизона и, происходит нарушение процесса метаморфоза (Schmutterer, 1990) Препарат после обработки остаётся на растении в виде тонкой плёнки, и проникает в листья сквозь устьица, а также транспортируется в нём системно. Уже спустя несколько часов после обработки до 40% действующего вещества проникают в листовую поверхность и защищены там от погодных условий и УФ-лучей. Поэтому, чем медленнее раствор подсыхает на растении или чем больше времени без осадков проходит после обработки (минимум 8-10 часов), тем большее количество препарата проникает и остается в растении. Препараты, которые содержат азадирахтин или ним-масло имеют высокую эффективность против вредителей, в сравнении с препаратами, где эти вещества содержатся по одному.

Гипотетически ним-масло эффективно улучшает проникновение азадирахтина через покровы насекомых (Walter, 1995).

Применение чистого азадирахтина А может приводить к более скорому развитию резистентности в отличие от обработок смесями азадирахтинов.

Срок защитного действия 7-10 дней но иногда дольше, зависит от норм расхода и видов вредителя (FAO specifications and evaluations for agricultural pesticides, 2003).

Фунгицидные и акарицидные свойства проявляют гидрофобные нимэкстракты, которые приводят к физическому удушению и высушиванию особей. Ним-экстракты обладают также антифидантными и реппелентными свойствами, которые вызваны содержанием в них саланина. Азадирахтин проявляет фунгицидную активность против мучнистой росы и ржавчины 2000). Активные компоненты могут (Quarles, 1994; Govindachari, адсорбироваться через корни растений и системно передвигаться вверх по ксилеме. Системный эффект намного хуже проявляется при опрыскивании (Gill, 1971; Larew 1988, Kleeberg, 2001). За счет системных свойств нимпродуктов возможно применение их не только путем опрыскивания, но с оросительной системой. Так, внесение препарата через оросительную систему снижало количество тлей на салате на 50% (Palumbo et al., 2001).

Нимацаль-Т/С используют в основном в 0,4-0,5%-ой концентрации, т.е. 2,5 л/га на 500-600 л воды/га для промышленного и 7,5 мл на 1,5 л воды или 50 мл на 10 л воды для ЛПХ.

–  –  –

Согласно результатам исследований нимацаль имеет малую токсичность для человека – ЛД50 для крыс 5000 мг/кг; не наносит раздражаение на кожу, слегка раздражает глаза, по ингаляционной токсичности СК50 0,72 мг/л. Класс опасности 4 по классификации EPA. Не проявляет мутаенности и канцерогенности.

Нимацаль-Т/С довольно быстро разрушается в окружающей среде – ДТ50 на листьях 17 часов, внутри почвы 25 дней. Коммерческие препараты содержат фотостабилизатор. Сильно разрушается в воде (50-100 часов) или на свету. СК50 для зеленоватой водоросли Scenedesmus subspicatus 530 мг/л (72 часа), для дафнии речной Daphnia magna 107,55 мг/л (24 часа).

Азадирахтин среднетоксичен для рыб (СК50 для форели 0,48 мг/кг). Он токсичен для пчел, божьих коровок, пауков, паразитоидов. Нежелательно применять на время сбора пчелами меда. (EPA, 2009). Для червей Eisenia fetida препарат на основе азадирахты – не токсичен (Copping, 2002).

Ним-экстракты высокотоксичны для семиточечной коровки Coccinella septempunctata L. или для хищника златоглазки обыкновенной Chrysoperla carnea (Stephens), (Medina et. al., 2003). В отношении хищного клеща фитосейулюса он среднетоксичен, так смертность для самок составляет 40%, для яиц – 12,3% (Duso et.al., 2008). Другими авторами указывается, что акарицид Нимарк (концентрация 5%) в условиях лаборатории обеспечивал среднюю токсичность против подвижных стадий развития Tetranychus urticae, смертность была в пределах 70,6-77,6% на 3-и сутки после обработки.

В отношении фитосейулюса акарицид был высокотоксичен – 89,6-90% (Papaioannou-soliotis et.al., 2000).

Фитотаксичность для растений после обработки Нимацалем-Т/С в основном очень мала. Ожоги листьев были отмечены лишь у груши сорта Конференц и у некоторых отдельных цветочных культур. Пагубное влияние препарата на растения возможно предотвратить, если за 1-2 дня до опрыскивания, провести пробное опрыскивание (Клееберг, 2000;).

Основное преимущество Нимацаля-Т/С это отсутствие срока ожидания. Но Руч и соавторы (2005) установили, что за период полураспада у нимацаля составил на томатах 3 дня, на землянике – 4,9, на петрушке – 2-3, на укропе – 0,5. На основании полученных данных в Италии установлены сроки ожидания для всех культур в 3 дня, хотя в других странах этих ограничений нет (Ruch et. al., 2005).

Ним-продукты, показавшие 100%-ю эффективность, можно использовать в борьбе с малярийным комаром Anopheles stephensi Liston (Diptera: Culicidae) (Nathan et. al., 2005).

Эффективность в отношении к паутинному клещу ним-препараты отличаются в зависимости от состава и препаративной формы а также фирмы производителя (Papaioannou-soliotis et.al., 2000).

Исследования показали высокую эффективность ним – продуктов. Так например, в 2003 результаты применения нимацаля-Т/С (3 обработки, с концентрацией 0,5%) и фитоверма при защите томата и огурца в тепличных условиях Литвы. На томатах против тепличной белокрылки смертность составляла от 94,1 до 98,2% уже после второй обработки. Такая же эффективность была получена при использовании против паутинного клеща на огурце, где уже после первой обработки она состаляла 97,9% (фитоверм – 99,7%) (Хуммель, 2006).

В Чехии были испытаны в 2003 г. в теплицах против паутинного клеща на томатах. Было отмечено, что все препарат проявляет высокие акарицидные свойства, но и с некоторым различием в смертности отдельных стадий вредителей. На 7-й день после обработки Нимацалем-Т/С (0,5%) смертность в среднем 60,9% особей всех стадий развития (взрослые, яйца, нимфы), то спустя 2 недели после обработки их гибель составляла уже 90,4%. «Fasoneem» (0,5% экстракт ним-жмыха) и «PronateX» (2,5% раствор ним-масла) смертность для вредителя составляла 62,6-67,2 и 82,3-92,4% соответственно (Pavela, 2003).

Паутинные клещи гибли на 2-3 сутки после обработки Нимацалем в смеси с Фитовермом, а популяция восстанавливалась приблизительно через 1-1,5 месяца, что привело к следующим после опрыскиваниям (Виткаускас, 2004).

В Бразилии хорошо себя показал препарат нимацаль-Т/С (д.в. 1%) (0,2% концентрации) на перце (Capsicum frutescens L.). Показал высокую биологическую активность, около 95% в борьбе с прозрачноым клещем Polyphagotarsonemus latus Banks. (Acari: Tarsonemidae). Вертимек же подавлял клеща до конца опыта на 100%, на 6-е сутки (Venzona et.al., 2008).

Акарицид Ойкос (д.в. азадирахтин) в лабораторных условиях выдал высокую биологическую эффективность против самок паутинного клеща – 90%, и яиц – 39%.

Кроме клещей, как пишет Коллинс (2005), азадирахтин может ингибировать размножение вредителей запасов (Acarus siro L., Lepidoglyphus и до 90%, destructor Schrank. Tyrophagus putrescentiae Schrank) соответственно возможно применение ним-препаратов в защите продуктов хранения от вредителей (Collins, 2005).

1.5 Описание программного обеспечения для проведения наблюдений за поведением лабораторных объектов «RealTimer»

В качестве компьютерной программы, которая регистрирует прохождение отдельных поведенческих реакций, мы обратились к программе «RealTimer» (www.opensience.ru, 2009.) Внешняя сторона данной программы состоит в том, что экспериментатор должен выбрать клавиши, которые ему удобно нажимать при возникновении у животного того или иного элемента поведения.

Программа фиксирует время нажатия клавиш от начала эксперимента, а также длительность и последовательность нажатия.

Для проведения полноценного эксперимента предусмотрены быстрое удаление последней записи (в случае ошибки) и ввод комментариев по ходу эксперимента.

Программа позволяет регистрировать поведение животных не только в реальном времени, но и по видеозаписи, где можно повторить один и тот же эпизод несколько раз, изменить скорость воспроизведения или даже проанализировать движение животного кадр за кадром.

Главные отличия программы RealTimer от других программ для регистрации поведения При разработке RealTimer на первое место ставилось удобство взаимодействия с программой, а также простота её освоения.

Работая с животными в ходе эксперимента, человек обычно не имеет возможности отвлекаться на сложности интерфейса, многочисленные опции, предлагаемые программой, или чтение объёмной инструкции. Поэтому для начала работы с RealTimer требуется, как правило, лишь запустить программу и определить удобные для нажатия клавиши – вслед за этим можно сразу же приступать к регистрации поведения животного. Автор программы нацелил пользователей на то, чтобы освоение большинства функций программы происходило интуитивно, без необходимости заглядывать в прилагаемую инструкцию.

Не секрет, что зарубежные аналоги чаще всего распространяются по принципу "всё-в-одном", с избыточными для большинства исследователей возможностями. При этом они достаточно дороги. RealTimer имеет модульную структуру, в которой каждый элемент выполняет свою задачу.

Вместе с тем, некоторые модули распространяются бесплатно или имеют упрощенный бесплатный вариант.

Вместо того, чтобы разрабатывать собственный модуль для воспроизведения видеозаписей, автор программы обеспечил совместимость RealTimer с широко известным бесплатным видеоплейером – Media Player Classic, который распространяется под свободной лицензией (GPL) и имеет непревзойдённые возможности по качеству вопроизведения видеозаписей и ассортименту совместимых форматов хранения видео.

RealTimer не содержит в себе модулей для статистической обработки результатов эксперимента и построения диаграмм. Вместо этого предусмотрена возможность экспресс-обработки полученных данных с последующим экспортом в виде таблицы в любую программу, которой исследователь привык пользоваться для статистической оценки результатов и создания иллюстраций.

PlanTimer При работе с животными успех эксперимента зависит не только от "стандартности" выполнения процедур по отношению к каждому животному, но и от соблюдения временных интервалов между процедурами. Однако, если эксперимент сложный, включающий более одной тестируемой особи и несколько процедур, последовательно проводимых с каждым из них, то тогда следует вооружиться несколькими (как минимум двумя) секундомерами или таймерами: первый, основной, призван отсчитывать общее время, прошедшее с момента начала работы с первой особью, а второй – длительность процедуры, проводимой с каждой особью.

Таким образом, в основе использования программы PlanTimer лежит возможность иметь на каждую тестируемую особь свой индивидуальный таймер, чтобы упростить весь процесс и дать экспериментатору возможность сосредоточиться на выполнении самих процедур.

Основные возможности программы PlanTimer

Программа поддерживает одновременную работу четырёхсот таймеров. Таймеры находятся в клетках таблицы: 1 клетка = 1 таймер. Одна строка в таблице (4 последовательных таймера) предназначена для работы с одной особью животного. В одном эксперименте может участвовать до 100 особей (рис. 3).

Можно настроить программу как на прямой, так и на обратный отсчет времени для работы в режимах секундомера или таймера, соответственно.

После запуска первого таймера второй таймер автоматически начнет отсчитывать время до начала работы со второй особью и т.д., в соответствии с указанным вами временным интервалом между животными.

Таймеры визуально «активны»: приближаясь к концу заданного временного интервала, таймеры меняют цвет от белого до ярко оранжевого, а просроченные таймеры приобретают желтый цвет.

Дополнительные возможности программы PlanTimer Данную программу с успехом можно использовать для регистрации поведения многих видов животных. В любой момент можно остановить работающий таймер или возобновить работу остановленного таймера, что дает возможность:

Показания остановленных таймеров по окончании эксперимента можно сохранить и, в дальнейшем, распечатать.

Обработка записей

После того, как эксперимент проведен, начинается следующий этап исследования - обработка полученных данных. Первый шаг - подсчет числа (или длительности) поведенческих актов, совершенных животным за время тестирования. Если в результате таких расчетов оказалось, что опытная группа животных отличается от контрольной по некоторым показателям, многие исследователи прекращают работу с данными. Вместе с тем, немало ценной информации остается не выявлено. Например, как изменялось то или иное поведение с течением тестового периода. Для этого надо разбить весь период на несколько интервалов и подсчитать число одноименных событий в каждом из них. И если динамика какого-либо поведенческого элемента различается в опытной и контрольной группах, то это повод не только для определенного вывода (например, о нарушении процесса привыкания животного к нетрадиционному корму, но и для более вдумчивого планирования следующего эксперимента. Чем больше информации можно получить из уже проведенного эксперимента, тем, в конечном итоге, меньше потребуется особей для выполнения поставленной задачи.

Основные возможности программы

Программа содержит 4 раздела: Файлы, Интервалы, События, Таблица, последовательное заполнение которых позволяет быстро обработать полученные данные.

Для того, чтобы подсчитать число элементов поведения, находящихся внутри определенных временных интервалов, а также длительных событий (например, во время пребывания животного в темном отсеке темно-светлой камеры), в программе предусмотрена опция просмотра записи эксперимента.

Результатом работы программы является сводная таблица, в которую включаются данные по нескольким животным (индивидуальным записям) и, если требуется, по нескольким временным интервалам в пределах эксперимента. Таблицу можно скопировать в любую программу для статистической обработки данных или построения диаграмм.

Мы адаптировали указанную программу RealTimer к наблюдению за поведенческими реакциями самки паутинного клеща в рамках альтернативного выбора ею пищевого источника. В частности, в качестве основных элементов поведения были избраны следующие:

замирание (остановка) особи на одном месте, нахождение (ползание) особи на энтомологической игле, нахождение (ползание) особи на «мосту», соединяющем два пищевых альтернативных образца, нахождение особи на эталонном пищевом источнике (фасоли), нахождение особи на новом пищевом источнике (рис. 4).

Рис. 4 Программа RealTimer в рабочем состоянии

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ

Глава 2. Материал и общая методика исследований Исследования по теме диссертации проводились в сельскохозяйственной академии РГАУ-МСХА имени К.А. Тимирязева в 2011-2014 гг. Лабораторные исследования проводились на кафедре защиты растений.

–  –  –

В работе использовали следующие растения : Impatiens neuguinta L., Impatiens balsamina L., Shlumbergera buckleyi Lindley., Epyphillum crenatum Lindley., Callisia fragrans L., Chlorophytum borivilianum L., Calathea zebrine L., Aloe vera L., Clerodentum splendens L., Ficus religiosa L., Ficus ramentacea L., Ficus aspera Forst., Calathea bella L., Hibiscus calyphyllus Forssk., Euphorbia cyathophora L., Thunbergia grandiflora L., Sanchezia nobilis Hook., Justicia Aloe arborescens Mill., Callisia fragrans Lindley. В число aurea Schltdl., растений из которых были сделаны экстракты входят: Aloe arborescens Mill., Callisia fragrans Lindley., Aloe vera L., Aloe arborescens Mill., Shlumbergera buckleyi Lindley., Chlorophytum borivilianum L.

Объектами исследований были паутинные клещи рода Tetranychus:

атлантический паутинный клещ Tetranychus atlanticus McGregor, 1941 (sensu Mitrofanov et al., 1987), нередко сводимый в синоним туркестанского паутинного клеща Tetranychus turkestani Ug. et Nik.

Лабораторная линия атлантического паутинного клеща, поддерживаемая на кафедре защиты растений РГАУ-МСХА имени К.А.Тимирязева, была основана профессором С. Я. Поповым в 1998 г.

Маточная колония была привезена из ЗАО «Совхоз имени Ленина»

Ленинского района Московской области с растений земляники. За время проведения многочисленных исследований лабораторная линия была протестирована на естественную смертность, которая при оптимальных условиях содержания клещей не превышала 2-3%.

–  –  –

Паутинных клещей в лабораторных условиях разводили, используя в качестве кормового растения кустовую обыкновенную фасоль (Phaseolus vulgaris L.). Фасоль выращивали в пластиковых контейнерах объёмом 3 л с однотипной плодородной почвой, без внесения удобрений. Контейнеры с растениями фасоли помещали в вегетационный бокс, где поддерживали температуру воздуха в интервале 22±2°С, относительную влажность 70±10%, фотопериод 16:8 (L:D) ч и освещенность более 13 Мквантов/м2сек.

Клещей содержали на срезанных листьях фасоли, которые предварительно помещали на ватные «изоляторы-колобки» (рис. 10), расположенные в кюветах с водой. Кюветы с водой находились в термостате с заданными режимами температуры: 18-20°С, относительной влажности воздуха 70-80%, фотопериодом (L:D) 16:8 ч и освещенностью более 13 Мквантов/м2сек.

–  –  –

После угнетения листа фасоли вследствие активного питания и размножения паутинных клещей производили его замену. Лист разрезали на фрагменты и помещали вместе с клещами на свежий лист фасоли (рис. 6).

Рис. 6 Переселение клещей на свежий лист фасоли.

2.3. Материал и методы исследований на репеллентные и антифидантные свойства тропических и субтропических растений.

В качестве объекта исследования избрали атлантического паутинного клеща (Tetranychus atlanticus McGregor, 1941), наиболее значимого по степени распространенности в России. Следует оговориться, что некоторые акарологи нередко сводят обозначенный вид в синоним туркестанского паутинного клеща (Tetranychus turkestani Ugarov et Nikolski, 1937), однако мы вслед за систематиками В.И. Митрофановым, И.З. Лившицем и З.И.

Струнковой (1987) различаем указанные виды как самостоятельные (Попов, 2013а). Атлантический паутинный клещ обитает на территории России в природе по меньшей мере на 74 видах кормовых растений, относящихся к 64 родам и 32 семействам (Попов, 1997) и занимает обширные территории Евразии (Попов, 2013б).

Маточную колонию атлантического паутинного клеща, первоначально взятого на землянике садовой в 2010 г., культивировали в условиях лаборатории на фасоли до начала экспериментов в течение 3-х лет.

Оценку на предпочитаемость или отвергание растительной культуры осуществляли по поведенческим реакциям половозрелых самок клеща в рамках альтернативного выбора предпочитаемого растительного образца (фасоль как эталон) и нового, исследуемого (тропическое или субтропическое растение). Опыт проводили под световой панелью, температура составляла 22±1 °С, освещенность – 15 мкМ квантов/м2сек.

Пищевыми образцами (растительной культурой) служили вырезки из соответствующей листовой ткани размером 2 2 см, располагаемые на расстоянии 5 мм друг от друга в чашке Петри на влажном многослойном изоляте из фильтровальной бумаги. Вырезки соединяли мостом из гидрофобного материала. В середину такого моста укрепляли энтомологическую иглу с шаровидной вершиной. Самку подсаживали на вершину иглы. Предполагалось, что во время движения вниз она была способной ориентироваться в выборе привлекательного для питания и размножения пищевого образца. Для наблюдения за поведенческими реакциями использовали видеокамеру серии «Sony» с хорошей разрешающей способностью и запасом видеопамяти 8 ч. Результаты видеосъёмки обрабатывались на компьютере с помощью программы наблюдения за модельными организмами RealTimer (http://www.openscience.ru/index.php?page=software&item=001), настроенной нами для наблюдения за поведенческими реакциями паутинных клещей. При этом фиксировалось количество выборов того или иного пищевого образца и время пребывания на нём.

Опыт по оценке поведенческих реакций самок T. atlanticus на тестируемом новом растении проводили не менее 8 час в 3-х повторностях.

Такое большое время тестирования одной самки было избрано, чтобы наверняка зафиксировать максимальную продолжительность нахождения самки на новом пищевом источнике.

Регистрировали также смертность яиц, личинок и нимф, при этом повторность (количество дисков-высечек) – 10-12-кратная, общее количество яиц на высечках – в основном около 100 экземпляров.

2.4. Общая методика исследований оценки акарицидных свойств экстрактов растений.

При постановке опытов по оценке акарицидных свойств экстрактов растений в отношении паутинного клеща T. atlanticus в лабораторных условиях в качестве пищевых арен для паутинных клещей использовали высечки из листьев фасоли или земляники диаметром 2 см, которые помещали в бюксы с водой диаметром 3 см и высотой 4 см.

–  –  –

Высечки из раститетльной ткани заселяли особями различных стадий развития паутинного клеща в зависимости от условий эксперимента и подвергали обработке препаратами (опытные варианты) или не обрабатывали (контрольные варианты).

Обработки препаратами проводили с помощью лабораторного опрыскивателя, откалиброванного на площадь обработки 100 капель на 1 см2.

Химические реагенты В качестве химических реагентов использовали этилацетат, ацетон, спирт этиловый (табл. 1), а также воду дистиллированную. Их краткое описание приведено в таблице.

Таблица 1 Краткое описание химических реагентов, используемых в опыте по экстракции активных веществ из тестируемых растений

–  –  –

Растительный материал и экстракция Листья растений, предварительно измельченные, помещали в сушилку на трое суток при температуре 55° C. Высушенные растения измельчали в порошок, взвесили 2 раза по 4 г порошка и поместили в две пробирки.

Добавляли в каждую пробирку химический реагент в отношении 1:7, на 1 грамм порошка 7 мл буфера. Затем помещали пробирки на мешалку на 1 час.

После перемешивания пробирки уравновешивали и ставили в электрическую центрифугу на 10 мин при температуре 26° С и скорости 65000 об/мин.

Полученный экстракт отфильтровывали и выливали в отдельную пробирку.

–  –  –

На высечки размером 2 2 см подсаживал половозрелых самок паутинных клещей до того момента, когда на высечках было 30 живых самок. Если самки погибали в процессе переноса, их заменял другими. Затем высечки опрыскивал растворами экстрактов, причем количество капелек было в интервале 100-120 капелек на 1 см2. Обработанные высечки помещали на ватный колобок помещённый в кювету с водой, затем помещали в термостат с температурой 26° С, относительной влажностью 65 % и фотопериодом (L : D) = 16 : 8 ч. Учеты смертности поводил через 24, 48 и 72 ч, соответственно.

Анализ данных

Смертность паутинных клещей корректировали относительно контроля (Abbott, 1925), далее данные анализировали с помощью однофакторного дисперсионного анализа. В ряде опытов данные анализировали с помощью критерия Тьюки при достоверности данных р0.05, с использованием программного обеспечения Statistica 6.0.

Глава 3. Интегрированная оценка предпочитаемости (отвергания) нестандартного пищевого источника паутинным клещом Tetranychus atlanticus Поиск пестицидов нового поколения, отвечающих возрастающим экологическим требованиям общества, всё чаще осуществляется на основе скрининга природных веществ органического происхождения.

Подобные токсические вещества, как известно, быстрее и без остатка утилизируются в природных пищевых цепях. Они могут быть столь многообразны по составу и механизму действия активных веществ, что резистентность к ним со стороны вредного организма будет формироваться весьма продолжительное время.

В связи с этим в отношении атлантического паутинного клеща определяли предпочитаемость (отвергание) растений субтропического и тропического происхождения, которые могли бы служить источником получения акарицидных экстрактов или создания синтетических акарицидных аналогов. Обращение к этой группе растений связано с большим их разнообразием и насыщенностью ядовитыми веществами.

Подтверждением этого является скрининг и использование, например, экстрактов алоэ (Aloe vera L.), акарицидная эффективность которых в отношении красного паутинного клеща Tetranychus cinnabarinus (Boisduval) через 72 часа после применения достигала 80,39-92,16% (Jie Wei et al., 2011).

В опытах использовали атлантического паутинного клеща Tetranychus atlanticus McGregor, 1941 (Acariformes, Tetranychidae), который является доминирующим видом среди паутинных клещей, обитающих на травянистой растительности на всем большом протяжении России (Попов, 1994). Вслед за акарологами-систематиками В.И. Митрофановым, З.И. Струнковой и И.З.

Лившицем (1987) мы отличаем его от близкого вида – туркестанского паутинного клеща Tetranychus turkestani Ugarov et Nikolski, 1937, в синоним которого нередко сводят первый обозначенный вид зарубежные авторы. В России он зарегистрирован на 74 видах кормовых растений, относящихся к 52 64 родам и 32 семействам, с разной степенью предпочитаемости (Попов, 1997).

Оттестированную маточную колонию атлантического паутинного клеща, первоначально взятого на землянике садовой из природы, культивировали в лабораторных условиях на фасоли до начала экспериментов в течение 2-х лет. Выбор фасоли как кормового растения паутинного клеща был обусловлен тем, что промежуточное питание паутинных клещей рода Tetranychus на фасоли как бобовом растении снижает порог антибиоза при их последующем переходе на питание новым пищевым источником (Попов, Слотин, 2000).

Оценку на предпочитаемость (acceptance) или отвергание (rejection) тестируемого растения проводили по двум биологическим свойствам:

поведенческим реакциям половозрелых самок паутинного клеща в рамках альтернативного выбора между предпочитаемым пищевым образцом (фасоль как контроль) и новым исследуемым, а также по выживаемости развивающихся особей.

При оценке по поведенческим реакциям образцами служили вырезки листовой ткани размером 2 2 см, располагаемые в чашке Петри на влажном многослойном изоляте из фильтровальной бумаги. Вырезки соединяли мостом из гидрофобного материала. В середину такого моста укрепляли энтомологическую иглу. Самку подсаживали на шляпку иглы. Во время движения вниз она уже, возможно, могла ориентироваться в выборе привлекательной для питания и размножения ткани растения. Для наблюдения за поведенческими реакциями использовали фотокамеру серии «Sony» с высокой разрешающей способностью и запасом непрерывной видеосъёмки 8 ч. «Разгонку» самки паутинного в отношении каждого пищевого образца клеща осуществляли не менее 8 раз по 3-4 ч каждый раз.

Результаты видеосъёмки обрабатывались на компьютере, при этом фиксировались количество выборов того или иного пищевого образца и время пребывания на нём.

Рис. 9 Камера в рабочем состоянии Оценку выживаемости особей преимагинальных стадий клеща проводили на дисках-высечках диаметром около 2-х см, плавающих в воде в бюксах несколько большего сечения. Растительная культура (диски-высечки) заселялась отрождающимися личинками путем их пассивного перехода с листовых высечек фасоли, где предварительно самками были отложены яйца.

Клешей содержали в термостате с оптимальными условиями: температурой (t°) 25±0,5°С, относительной влажностью (RH) 60±5% и фотопериодом (L:D) 16:8 ч. Регистрировали смертность яиц, личинок и нимф. Повторность (количество дисков-высечек) – 10-12-кратная, общее количество яиц на высечках – в основном более 100 штук.

Статистическую обработку результатов исследований, касающихся смертности развивающихся особей, осуществляли по критерию Тьюки.

–  –  –

Исследовали на предпочитаемость (отвергание) самками атлантического паутинного клеща 8 видов растений, принадлежащим к 6 ботаническим семействам: Impatiens neuguinta L. и Impatiens balsamina L.

(сем. Бальзаминовые - Balsaminaceae), Shumbergera buckley Lindley и Epyphillum crenatum Lindley (сем. Кактусовые - Cactaceae), Callisia fragrans L.

(сем. Коммелиновые – Commelinaceae), Chlorophytum borivilianum L. (сем.

Лилейные – Liliaceae), Calathea zebrine L. (сем. Марантовые – Marantaceae), Aloe vera L. (сем. Xanthorrhoeaceae).

В Списке растений-хозяев паутинных клещей, опубликованном на сайте www.http://www1.montpellier.inra.fr/ и регулярно пополняемом, к настоящему времени насчитывается около 3940 видов растений. В этом списке указаны 3 вида семейства Balsaminaceae, в том числе Impatiens neuguinta L. и Impatiens balsamina L. Из семейства Cactaceae обозначены 9 видов, однако они не включают тестируемые нами Shumbergera buckley Lindley и Epyphillum crenatum Lindley. Из семейства Commelinaceae зарегистрированы 7 видов, однако тестируемого нами Callisia fragrans L. в списке не имеется. Из семейства Liliaceae приведено 16 видов, но среди них отсутствует тестируемый нами Chlorophytum borivilianum L. Из семейства Marantaceae в Списке имеются сведения по 3 видам растений-хозяев, при этом Calathea zebrine L. отсутствует. Из семейства Xanthorrhoeaceae там же указано 4 вида, однако Aloe vera L. не обозначен. Таким образом, из 8 исследуемых нами видов тропических и субтропических растений 6 видов отсутствуют в аннотированном Списке растений-хозяев паутинных клещей.

Как видно из таблицы, при альтернативном выборе пищевого источника полностью отвергались пять тестируемых растений – Epyphillum crenatum, Callisia fragrans, Chlorophytum borivilianum, Calathea zebrine и Aloe vera. При этом на Shlumbergera buckley самка провела незначительное количество времени, выбрав его первоначально (25 мин 1с, что составляет 2,1 % времени Таблица 2. Предпочитаемость самками пищевого источника и смертность преимагинальных особей атлантического паутинного клеща Tetranychus atlanticus при обитании на ряде тропических и субтропических растений

–  –  –

*- Статистическая обработка по критерию Тьюки.

от длительности нахождения самки на обоих пищевых источниках) – поэтому растение также может считаться отвергаемым. На всех указанных видах растений зафиксирована 100%-я смертность развивающихся особей.

При этом на Calathea zebrine, Callisia fragrans, Shlumbergera buckley и Epyphillum crenatum 100 %-я гибель происходила на стадии личинки, а на и – на нимфальной стадии Chlorophytum borivilianum Aloe vera (протонимфы).

Impatiens neuguinta и Impatiens balsamina из семейства Balsaminaceae оказались относительно благоприятными для развития паутинных клещей.

Из 8 индивидуальных «разгонок» самка паутинного клеща первично избирала Impatiens neuguinta дважды, но затем оба раза перемещалась на фасоль; тем не менее, один раз она перемещалась на него с фасоли. Всего она провела на этом тестируемом кормовом растении 5 ч 48 мин, что составило 28,5% от общего времени нахождения самки на обоих пищевых источниках.

Из подобных же 8 «разгонок» самка паутинного клеща первично избирала Impatiens balsamina трижды, но каждый раз перемещалась с него на фасоль.

Всего она провела на этом кормовом растении 6 ч 11 мин, что составило 29,2% от общего времени нахождения самки на обоих пищевых источниках.

Общая смертность преимагинальных особей паутинного клеща (с поправкой на контроль) на Impatiens neuguinta и Impatiens balsamina составила 40,2 и 30,3% соответственно. При этом на Impatiens neuguinta основная доля погибших особей пришлась на стадию протонимфы, а на Impatiens balsamina – почти равномерно на стадии личинки и протонимфы.

По нашим наблюдениям, растения Calathea zebrine и Callisia fragrans, вероятно, обладали выраженным акарицидным эффектом: ни одна личинка не смогла питаться на этих кормовых источниках.

Оценка альтернативных методов исследования При проведении трудоёмких исследований желательно выявить те методы, которые дают высокую точность, но малозатратны по времени.

Мы рассчитали коэффициенты корреляции между двумя методами оценки кормового источника на предпочитаемость (отвергание) паутинным клещом по поведенческим реакциям самки, с одной стороны, и выживаемости развивающихся особей, с другой стороны. Оказалось, что коэффициент линейной корреляции (r) между показателями «количество выборов самкой нового кормового источника» и «процент смертности особей в период преимагинального развития» составил 0,9, а между показателями «процент длительности нахождения самки на новом кормовом источнике» и «процент смертности особей в период преимагинального развития» составил 1,0.

По нашим расчетам, общая длительность опыта по оценке смертности развивающихся особей паутинного клеща при оптимальных условиях их содержания составляет 10-12 дней, при этом необходимо от 3 до 8-10 раз производить подсчеты количества особей. В то время как «разгонку» самки паутинного в отношении каждого пищевого образца клеща можно осуществить за 3-4 дня (8 повторностей по 3-4 ч каждая). Дополнительно на компьютерный анализ поведенческих реакций уходит около 30-40 мин, всего на 8 повторностей – 4-6 ч. Тогда общие затраты на 1 опыт составляют 4-5 дней, что в 2 раза меньше по сравнению с опытом на смертность особей.

Из этого следует, что при наличии инструментария, фиксирующего поведенческие реакции самки паутинного клеща (цифровой видеокамеры) вполне возможно пользоваться этим методом как своего рода экспрессметодом оценки. Однако при этом необходимо уточнить, какую долю от общего времени тестируемая самка паутинного клеща может находиться на кормовом источнике, дающем 100%-ю смертность развивающихся особей.

Таким образом, при анализе 8 кормовых растений субтропического и тропического происхождения (Impatiens neuguinta, Impatiens balsamina, Shumbergera buckley, Epyphillum crenatum, Callisia fragrans, Chlorophytum borivilianum, Calathea zebrine и Aloe vera первые два растения оказались относительно предпочитаемыми для паутинного клеща Tetranychus atlanticus McGregor, 1941. Остальные виды растений (Shumbergera buckley, Epyphillum crenatum, Callisia fragrans, Chlorophytum borivilianum, Calathea zebrine и Aloe vera) вполне объективно могут быть подвергнуты на оценку получения акарицидных экстрактов в отношении паутинных клещей рода Tetranychus.

Из двух методов исследования предпочитаемости (acceptance) новых кормовых источников паутинным клещом в качестве экспресс-метода может быть использован метод оценки нового кормового источника по поведенческим реакциям самки, фиксируемым цифровой видеокамерой.

Глава 4. Методическая разработка экспресс-метода оценки предпочитаемости (отвергания) нестандартного пищевого источника паутинным клещом Tetranychus atlanticus Целью данной работы являлось установление поведенческих показателей паутинных клещей на примере Tetranychus atlanticus, которые дают методическую основу для осуществления экспресс-метода оценки предпочитаемости (отвергания) нового пищевого источника по поведенческим реакциям самки паутинного клеща, фиксируемым с помощью видеокамеры.

Осуществляли «разгонку» самки паутинного клеща при предоставлении ей равного выбора предпочитаемого (фасоль как эталон) и непредпочитаемого (тестируемое субтропическое или тропическое растение) растительного источника. Альтернативно фасоли (Faseolus vulgaris L.) оценивали растения Calathea zebrine Lindl. и Calathea bella L. (сем.

Амарантовые – Marantaceae), Ficus aspera Forst., Ficus ramentaceae L. и Ficus religiosa L. (сем. Тутовые – Moraceae), Euphorbia cyathophora L. (сем.

Молочайные – Euphorbiaceae), Justicia aurea Schltdl., Sanchezia nobilis Hook. и Thunbergia grandiflora L. (сем. Акантовые – Acanthaceae), Hibiscus calyphyllus Forssk. (сем. Мальвовые – Malvaceae), Clerodentum splendens L. (сем.

Вербеновые – Verbenaceae).

–  –  –

Вопросы оценки предпочитаемости (отвергания) тех или иных растений клещами-фитофагами всегда привлекали внимание акарологов.

Исследовалась пищевая норма реакции вида, устанавливались возможности и способы расширения пищевой специализации. На базе этих исследований осуществлялся поиск «акарицидных» видов растений, которые могли бы служить источником получения акарицидных растительных экстрактов. Не исключался и вопрос с расшифровкой акарицидного состава растений и создания на этой основе синтетических аналогов природных акарицидов.

Наиболее простыми способами установления пищевых предпочтений клещей-фитофагов являются следующие: частота выбора нового кормового источника в паре с предпочитаемым эталонным растением, «разгонка»

особей при предоставлении им нескольких пищевых источников, оценка по смертности преимагинальных особей при культивировании их на пищевом источнике.

Мы нашли, что способы оценки степени предпочитаемости пищевых источников по поведенческим реакциям половозрелой самки, фиксируемым с помощью видеокамеры, а также по смертности преимагинальных особей атлантического паутинного клеща при подсадке последнего на новый нестандартный пищевой источник, почти тождественны (Попов, Карачевцев, 2013). При этом из двух названных методов целесообразно отдать предпочтение экспресс-методу оценки по поведенческим реакциям самки, поскольку он менее трудоёмок по сравнению с методом определения смертности особей. Однако в процессе проведения наблюдений за поведенческими реакциями самок с помощью видеокамеры было зафиксировано, что в ряде случаев самки осуществляли обследования непредпочитаемого кормового источника достаточно длительное время. И если оценивать предпочитаемость растений клещами-фитофагами по длительности их пребывания на эталонном и новом пищевом источнике, то во внимание необходимо брать показатель максимального времени, в течение которого тестируемая самка может находиться на новом нестандартном пищевом источнике.

Для этого провели дополнительные исследования пищевых предпочтений при предоставлении самке паутинного клеща двух альтернативных пищевых источников.

–  –  –

В качестве объекта исследования избрали атлантического паутинного клеща (Tetranychus atlanticus McGregor, 1941), наиболее значимого по степени распространенности в России. Следует оговориться, что некоторые акарологи нередко сводят обозначенный вид в синоним туркестанского паутинного клеща (Tetranychus turkestani Ugarov et Nikolski, 1937), однако мы вслед за систематиками В.И. Митрофановым, И.З. Лившицем и З.И.

Струнковой (1987) различаем указанные виды как самостоятельные (Попов, 2013а). Атлантический паутинный клещ обитает на территории России в природе по меньшей мере на 74 видах кормовых растений, относящихся к 64 родам и 32 семействам (Попов, 1997) и занимает обширные территории Евразии (Попов, 2013б).

Маточную колонию атлантического паутинного клеща, первоначально взятого на землянике садовой в 2010 г., культивировали в условиях лаборатории на фасоли до начала экспериментов в течение 3-х лет.

Оценку на предпочитаемость или отвергание растительной культуры осуществляли по поведенческим реакциям половозрелых самок клеща в рамках альтернативного выбора предпочитаемого растительного образца (фасоль как эталон) и нового, исследуемого (тропическое или субтропическое растение). Опыт проводили под световой панелью, температура составляла 22°С, освещенность – 15 мкМ квантов/м2сек.

Пищевыми образцами (растительной культурой) служили вырезки из соответствующей листовой ткани размером 2 2 см, располагаемые на расстоянии 5 мм друг от друга в чашке Петри на влажном многослойном изоляте из фильтровальной бумаги. Вырезки соединяли мостом из гидрофобного материала. В середину такого моста укрепляли энтомологическую иглу с шаровидной вершиной. Самку подсаживали на вершину иглы. Предполагалось, что во время движения вниз она была способной ориентироваться в выборе привлекательного для питания и размножения пищевого образца. Для наблюдения за поведенческими реакциями использовали видеокамеру серии «Sony» с хорошей разрешающей способностью и запасом видеопамяти 8 ч. Результаты видеосъёмки обрабатывались на компьютере с помощью программы наблюдения за модельными организмами RealTimer (http://www.openscience.ru/index.php?page=software&item=001), настроенной нами для наблюдения за поведенческими реакциями паутинных клещей. При этом фиксировалось количество выборов того или иного пищевого образца и время пребывания на нём.

Опыт по оценке поведенческих реакций самок T. atlanticus на тестируемом новом растении проводили не менее 8 час в 3-х повторностях.

Такое большое время тестирования одной самки было избрано, чтобы наверняка зафиксировать максимальную продолжительность нахождения самки на новом пищевом источнике.

Регистрировали также смертность яиц, личинок и нимф, при этом повторность (количество дисков-высечек) – 10-12-кратная, общее количество яиц на высечках – в основном около 100 экземпляров.

Результаты исследований

Исследовали на предпочитаемость (отвергание) самками T. atlanticus 11 видов тропических и субтропических растений, принадлежащих к 6 ботаническим семействам: Calathea zebrine Lindl. и Calathea bella L. (сем.

Амарантовые – Marantaceae), Ficus aspera Forst., Ficus ramentaceae L. и Ficus religiosa L. (сем. Тутовые – Moraceae), Euphorbia cyathophora L. (сем.

Молочайные – Euphorbiaceae), Justicia aurea Schltdl., Sanchezia nobilis Hook. и Thunbergia grandiflora L. (сем. Акантовые – Acanthaceae), Hibiscus calyphyllus Forssk. (сем. Мальвовые – Malvaceae), Clerodentum splendens L. (сем.

Вербеновые – Verbenaceae).

Cогласно Списку растений-хозяев паутинных клещей, опубликованному на сайте www.http://www1.montpellier.inra.fr/ CBGP/spmweb/docs/HostPlants.pdf. и насчитывающему 3938 видов 140 видов семейства Marantaceae принадлежат к растениям-хозяевам паутинных клещей, но Calathea zebrine и Calathea bella в этом Списке нет. Там же из семейства Moraceae указаны 56 видов, включая Ficus religiosa; однако Ficus aspera и Ficus ramentacea отсутствуют. Из семейства Euphorbiaceae указаны 95 видов, включая Euphorbia cyathophora. Из семейства Acanthaceae приведено 25 видов, но среди них отсутствуют Justicia aurea и Sanchezia nobilis. Из семейства Malvaceae в Списке имеются сведения по 82 видам растений-хозяев, включая Hibiscus calyphyllus. Из семейства Verbenaceae там же указан 51 вид, однако Clerodentum splendens L. в списке отсутствует.

Таким образом, из 11 исследуемых нами видов тропических и субтропических растений Ficus religiosa (семейство Moraceae), Hibiscus calyphyllus (семейство Malvaceae) и Euforbia cyathophora (семейство Euphorbiaceae) благоприятны для развития паутинных клещей, а 8 видов отсутствуют в указанном списке.

Первым шагом в тестировании растительных культур явился их анализ на пригодность для развития преимагинальных особей паутинных клещей, поскольку обычно по этому параметру судят о растениях-хозяевах. Анализ осуществляли как по научным публикациям по этому вопросу, так и по результатам специально заложенного опыта на выживаемость личинок и нимф T. atlanticus на тестируемых растительных культурах. Подробная методика этого опыта изложена в нашей публикации по интегрированной оценке предпочитаемости (отвергания) нестандартного пищевого источника атлантическим паутинным клещом (Попов, Карачевцев, 2013).

Выяснено, что самка паутинного клеща может проводить на непредпочитаемой растительной культуре, не покидая её, до 3,1 ч. Из этого следует, что опыт по «разгонке» самки паутинного клеща необходимо планировать продолжительностью не менее 3-х ч. Если же самка окажется на источнике больше этого времени, то следует проанализировать компьютерную запись её поведенческих реакций на предмет возможных искусственных препятствий при переходе на предпочитаемый источник. По ходу выполнения исследования определено, что растения Euforbia cyathophora, Ficus religiosa, Ficus aspera и Hibiscus calyphyllus являются благоприятными для развития паутинного клеща, тогда как остальные виды Justicia aurea, Sanchezia nobilis, Thunbergia grandiflora, Calathea zebrine, Calathea bella, Clerodentum splendens не могут служить для него пищевым источником. По растениям Ficus ramentacea и Hibiscus calyphyllus следует провести дополнительное исследование по смертности особей в преимагинальный период развития.

По результатам анализа было принято решение, что Euforbia cyathophora, Ficus religiosa, Ficus aspera и Hibiscus calyphyllus можно считать растениями, пригодными для обитания паутинных клещей рода Tetranychus.

Наоборот, Calathea bella, Calathea zebrine, Clerodentum splendens и Thunbergia grandiflora показали себя как растения, на которых клещи не могли развиваться.

Что касается Ficus ramentacea, то в отношении его требуются дополнительные исследования. Желательно также повторить опыт по оценке уровня выживаемости преимагинальных особей на Hibiscus calyphyllus.

Результаты по оценке поведенческих реакций самок T. atlanticus на тестируемых растительных культурах и их пригодности для развивающихся особей представлены в таблице.

Таблица 3. Оценка поведенческих реакций (выбор и длительность пребывания) самки Tetranychus atlanticus на растительной культуре (высечках) тропических и субтропических растений и их пригодности для развития особей в сравнении с эталонным предпочитаемым растением (фасолью – Faseolus vulgaris L.

)

–  –  –

* Статистическая обработка по критерию Тьюки:



Pages:     | 1 || 3 | 4 |

Похожие работы:

«Палаткин Илья Владимирович Подготовка студентов вуза к здоровьесберегающей деятельности 13.00.01 общая педагогика, история педагогики и образования Диссертация на соискание ученой степени кандидата педагогических наук Научные руководители: доктор биологических наук, профессор,...»

«Ульянова Онега Владимировна МЕТОДОЛОГИЯ ПОВЫШЕНИЯ БЕЗОПАСНОСТИ БАКТЕРИАЛЬНЫХ ВАКЦИН НА МОДЕЛИ ВАКЦИННЫХ ШТАММОВ BRUCELLA ABORTUS 19 BA, FRANCISELLA TULARENSIS 15 НИИЭГ, YERSINIA PESTIS EV НИИЭГ 03.02.03 – микробиология Диссертация на соискание ученой степени доктора биологических наук Научный консультант:...»

«Брит Владислав Иванович «Эффективность методов вакцинации против ньюкаслской болезни в промышленном птицеводстве» Специальность: 06.02.02 ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени кандидат ветеринарных наук Научный руководитель:...»

«Вафула Арнольд Мамати РАЗРАБОТКА ЭЛЕМЕНТОВ ТЕХНОЛОГИИ ВЫРАЩИВАНИЯ ПАПАЙИ ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ ЗДОРОВОГО ПОСАДОЧНОГО МАТЕРИАЛА И ЭКСТРАКТОВ С БИОПЕСТИЦИДНЫМИ СВОЙСТВАМИ ДЛЯ ЗАЩИТЫ ЕЕ ОТ ВРЕДНЫХ ОРГАНИЗМОВ Специальности: 06.01.07 – защита растений 06.01.01 – общее земледелие и растениеводство Диссертация на соискание ученой степени кандидата сельскохозяйственных...»

«Якимова Татьяна Николаевна Эпидемиологический надзор за дифтерией в России в период регистрации единичных случаев заболевания 14.02.02 эпидемиология диссертация на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Научный руководитель: доктор...»

«ХАПУГИН Анатолий Александрович РОД ROSA L. В БАССЕЙНЕ РЕКИ МОКША 03.02.01 – ботаника Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель Силаева Татьяна Борисовна д.б.н., профессор САРАНСК ОГЛАВЛЕНИЕ ВВЕДЕНИЕ Глава 1. ИСТОРИЯ ИЗУЧЕНИЯ РОДА ROSA L. В БАССЕЙНЕ МОКШИ. Глава 2. КРАТКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РОДА ROSA L. 2.1. Характеристика рода Rosa L. 2.2. Систематика рода Rosa L. Глава 3....»

«Мухаммед Тауфик Ахмед Каид ХАРАКТЕРИСТИКА ГЕНОТИПОВ С ХОРОШИМ КАЧЕСТВОМ КЛЕЙКОВИНЫ, ОТОБРАННЫХ ИЗ ГИБРИДНЫХ ПОПУЛЯЦИЙ АЛЛОЦИТОПЛАЗМАТИЧЕСКОЙ ЯРОВОЙ ПШЕНИЦЫ МЯГКОЙ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ДНК-МАРКЕРОВ Специальность 06.01.05 – селекция и семеноводство сельскохозяйственных растений Диссертация на соискание ученой степени кандидата сельскохозяйственных наук Научный...»

«Сухарьков Андрей Юрьевич РАЗРАБОТКА МЕТОДОВ ОЦЕНКИ ОРАЛЬНОЙ АНТИРАБИЧЕСКОЙ ВАКЦИНАЦИИ ЖИВОТНЫХ 03.02.02 «Вирусология» Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: кандидат ветеринарных наук, Метлин Артем Евгеньевич Владимир 2014 ОГЛАВЛЕНИЕ 1 ВВЕДЕНИЕ 2 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 2.1 Характеристика возбудителя бешенства 2.2 Эпизоотологические...»

«Доронин Максим Игоревич ЭКСПРЕСС-МЕТОДЫ ВЫЯВЛЕНИЯ ВИРУСА ИНФЕКЦИОННОГО НЕКРОЗА ГЕМОПОЭТИЧЕСКОЙ ТКАНИ ЛОСОСЕВЫХ РЫБ 03.02.02 «Вирусология» Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: доктор биологических наук, Мудрак Наталья Станиславовна Владимир 2015 ОГЛАВЛЕНИЕ 1 ВВЕДЕНИЕ 2 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 2.1 Характеристика возбудителя инфекционного...»

«Цвиркун Ольга Валентиновна ЭПИДЕМИЧЕСКИЙ ПРОЦЕСС КОРИ В РАЗЛИЧНЫЕ ПЕРИОДЫ ВАКЦИНОПРОФИЛАКТИКИ. 14.02.02 – эпидемиология ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени доктора медицинских наук Научный консультант: заслуженный деятель науки РФ, лауреат Государственной премии СССР профессор, доктор медицинских наук Ющенко Галина Васильевна Москва – 20 Содержание...»

«АБДУЛЛАЕВ Ренат Абдуллаевич ГЕНЕТИЧЕСКОЕ РАЗНООБРАЗИЕ МЕСТНЫХ ФОРМ ЯЧМЕНЯ ИЗ ДАГЕСТАНА ПО АДАПТИВНО ВАЖНЫМ ПРИЗНАКАМ Шифр и наименование специальности 03.02.07 – генетика 06.01.05 – селекция и семеноводство сельскохозяйственных растений ДИССЕРТАЦИЯ на соискание учёной степени кандидата...»

«БРИТАНОВ Николай Григорьевич ГИГИЕНИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ ПЕРЕПРОФИЛИРОВАНИЯ ИЛИ ЛИКВИДАЦИИ ОБЪЕКТОВ ПО ХРАНЕНИЮ И УНИЧТОЖЕНИЮ ХИМИЧЕСКОГО ОРУЖИЯ 14.02.01 Гигиена Диссертация на соискание ученой степени доктора медицинских наук Научный консультант: доктор медицинских наук, профессор...»







 
2016 www.konf.x-pdf.ru - «Бесплатная электронная библиотека - Авторефераты, диссертации, конференции»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.