WWW.KONF.X-PDF.RU
БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА - Авторефераты, диссертации, конференции
 


Pages:   || 2 | 3 | 4 | 5 |   ...   | 6 |

«МОРФОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ТИМУСА В УСЛОВИЯХ ПОСТУПЛЕНИЯ МЕЛАТОНИНА ...»

-- [ Страница 1 ] --

Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение

высшего профессионального образования «Чувашский государственный

университет имени И. Н. Ульянова»

На правах рукописи

Шатских Оксана Алексеевна

МОРФОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ТИМУСА

В УСЛОВИЯХ ПОСТУПЛЕНИЯ МЕЛАТОНИНА

Специальность 03.03.04. – клеточная биология, цитология, гистология

Диссертация на соискание ученой степени

кандидата медицинских наук

Научный руководитель:

доктор биологических наук, профессор Сергеева В. Е.

Чебоксары – 2015

СОДЕРЖАНИЕ

Введение ………………………………………………………………………… 4 ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ …………………………………………..... 12

1.1. Современные представления о структуре и функциях тимуса.................. 12 1.1.1. Гуморальная регуляция функционирования тимуса……………… 22 1.1.2. Клеточный состав тимуса и нейромедиаторные биогенные амины ………………………………………………………………………. 24

1.2. Роль мелатонина в организме………………………………………..……. 28 1.2.1. Физиологическая роль мелатонина……………………….…..….... 28 1.2.2. Применение мелатонина в клинической практике……………...... 32 1.2.3. Иммуномодулирующее действие мелатонина ………….....……… 33 ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ ……………........... 38

2.1. Организация эксперимента …………………………………………... 38

2.2. Гистологические методы исследования ………………………………... 40

2.3. Люминесцентно-гистохимические методы исследования ……........ 40

2.4. Иммуногистохимические методы исследования ……………………… 42

2.5. Метод морфометрии ……………………..…………………………….. 43

2.6. Математические методы исследования ………………………………... 43 ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ …………. 45 Структурно-функциональное состояние тимуса мышей при поступлении мелатонина в различных световых условиях...........…………………………. 45

3.1. Морфологическая характеристика тимуса ………………….…………… 45

3.2. CD1а-позитивные клетки тимуса ………………………………………… 51

3.3. CD3-позитивные клетки тимуса …………………………………………. 54

3.4. CD57-позитивные клетки тимуса ………………………………………… 59

3.5. CD68-позитивные клетки тимуса ………………………………………… 63

3.6. Тучные клетки тимуса ……………………………………………….......... 68

3.7. Морфофункциональная реакция биоаминсодержащих структур тимуса экспериментальных животных…………………………………………………. 80 3.7.1. Гистаминсодержащие клетки тимуса …………………………………... 81 3.7.2. Серотонинсодержащие клетки тимуса …………………………………. 88 3.7.3. Катехоламинсодержащие клетки тимуса ………………………………. 95 3.7.4. Взаимосвязь биогенных аминов в клетках тимуса экспериментальных мышей…………………………………………………….. 99 ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЯ ……………………….. 109 ЗАКЛЮЧЕНИЕ…………………………………………………………………. 121 ВЫВОДЫ ……………………………………………………………………….. 123 РЕКОМЕНДАЦИИ……………………………………………………………… 125 СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ …………………………………………………….. 126 СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ ……………………………………………………… 127 СПИСОК ИЛЛЮСТРАТИВНОГО МАТЕРИАЛА ………………………....... 168

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы исследования В последние годы в связи с увеличением количества различных видов патологий, связанных с недостаточно эффективной работой иммунной системы человека ввиду ухудшения экологии, стрессовых воздействий, алиментарных причин [32, 106, 144], к центральным органам иммунной защиты приковано внимание исследователей [156, 199].

В рамках этой проблемы несомненный интерес представляют вопросы, связанные с функционированием тимуса. Актуальность любых исследований этого органа обусловлена, как высокой встречаемостью разных видов патологий, связанных с разнообразными нарушениями работы тимуса [53], так и явной недостаточностью изученности клеточных основ различных нарушений в вилочковой железе.

Одним из наименее исследованных аспектов функционирования тимуса является гуморальная регуляция деятельности различных клеток этого органа.

Несмотря на кажущуюся хорошую изученность действия различных регуляторных факторов на вилочковую железу, эта проблема далека от разрешения. Тимус изучали при воздействии ряда гормонов: соматотропного [81], адренокортикотропного [62], глюкокортикостероидов [38], хорионического гонадотропина [95, 96], вместе с тем влияние одного из важнейших гуморальных факторов организма – мелатонина – на различные клеточные типы тимуса практически не исследовано.

На сегодняшний день мелатонин находит всё более широкое применение в клинике, как адаптоген при смене часовых поясов, при инсомнии [65, 210], в терапии патологии сердечно-сосудистой системы [211] и желудочно-кишечного тракта [17], климактерического синдрома [5], дегенеративных заболеваний нервной системы [309], а также вводится в схемы противоопухолевого лечения при некоторых видах рака [80].

Широкое клиническое применение мелатонина требует детального изучения всех его биологических функций, особенно эффектов на различные органы иммунной системы, тем более, что в некоторых клетках тимуса, селезенки, костного мозга и лимфатических узлов обнаружены рецепторы к мелатонину [146]. В ряде работ показано модулирующее и синхронизирующее влияние мелатонина на деятельность Т-лимфоцитов in vivo и in vitro в культуре клеток и в тимусе [59, 60, 141, 236, 293], однако влияние мелатонина на различные структурно-функциональные характеристики тимуса мало изучено.

В создании микроокружения лимфоцитов тимуса важное место занимают NK-клетки, макрофаги и тучные клетки [12, 18, 196]. Уже известно, что экзогенный мелатонин увеличивает количество NK-клеток и моноцитов, как в костном мозге, так и в селезенке [158], однако таких данных для тимуса в литературе нам не встретилось. В работе Ozkanlar S. с соавт. (2015) показано снижение количества положительных на эстеразу тучных клеток в тимусе у крыс после введения мелатонина. Вместе с тем мы не обнаружили данные о том, как изменяются различные характеристики тучных клеток в тимусе при введении этого эпифизарного гормона. Недостаточная изученность различных типов клеток в тимусе во многом обусловлена низкой информативностью классических морфологических подходов, но методы иммуногистохимии позволяют корректно их идентифицировать. Так, для выявления кортикальных (дубль-позитивных) тимоцитов используется маркер CD1a [45], макрофагов – CD68 [338], натуральных киллеров – CD57 [246, 314]. Высокоспецифичным маркером Тлимфоцитов является CD3 антиген, мембранное его расположение характерно для зрелых Т-лимфоцитов, а цитоплазматическая локализация – для незрелых тимоцитов [51].

Биогенные амины, такие как гистамин, серотонин и катехоламины, также играют важную роль в процессах функционарования любых клеток [36, 77, 115, 184, 285]. Изменение содержания биогенных аминов в люминесцирующих клетках тимуса напрямую связано с модуляцией их функций в иммунных реакциях [66], Так, например, избыточное содержание гистамина и серотонина подавляет функции Т-лимфоцитов [62, 129]. Поэтому изучение изменений содержания биогенных аминов в структурах тимуса под действием мелатонина представляет несомненный интерес, ввиду того, что возможная роль влияния эпифизарного гормона на их содержание и секрецию клетками тимуса не исследована.

Характер освещения напрямую связан с работой эпифиза, и также оказывает влияние на состояние иммунной системы. Так, в ряде работ показано угнетающее действие постоянного освещения на иммунокомпетентные клетки [19, 58], ввиду подавления в организме синтеза мелатонина. Пребывание в постоянной темноте индуцирует эпифизарную гиперфункцию [13, 341]. Однако возможное влияние световой депривации на структурно-функциональные характеристики тимуса практически не изучено [258].

В связи с этим изучение влияния мелатонина на тимус при различных режимах освещения является важным и актуальным в практическом и теоретическом аспектах.

Цель работы Изучить морфологическую и иммуногистохимическую характеристику тимуса лабораторных мышей при поступлении мелатонина с питьевой водой в течение двух или четырех недель в зависимости от условий освещения.

Задачи исследования

1. Изучить морфометрические характеристики тимуса: площади коркового и мозгового веществ дольки при ежедневном поступлении мелатонина с питьевой водой в концентрации 4 мг/литр в течение двух или четырех недель в условиях естественного освещения или постоянного затемнения.

2. Исследовать количественное распределение CD1а-позитивных, CD3позитивных клеток во всех зонах долек в тимусе мышей в моделируемых условиях эксперимента.

3. Определить особенности локализации и количественного распределения CD57-позитивных и CD68-позитивных клеток во всех зонах долек в тимусе животных, получавших мелатонин в различных световых условиях в течение двух или четырех недель.

4. Сравнить количество тучных клеток, степень их метахромазии и дегрануляции в соединительнотканных корковых перегородках и паренхиме тимуса мышей при поступлении мелатонина в течение двух или четырех недель в условиях естественного освещения или постоянного затемнения.

5. Исследовать содержание биогенных аминов (гистамина, серотонина и катехоламинов) в структурах тимусной дольки лабораторных мышей в моделируемых условиях эксперимента.

Научная новизна Впервые выявлено, что мелатонин, поступающий ежедневно с питьевой водой в концентрации 4 мг/литр в течение 2 или 4 недель в условиях естественного освещения или постоянного затемнения оказывает иммуномодулирующее действие на тимус, сопровождающееся уменьшением площади коркового вещества и увеличением площади мозгового вещества долек, увеличением количества макрофагов и натуральных киллеров в корковом и мозговом веществе долек тимуса. При этом изменения количественных показателей натуральных киллеров более выражены в тимусе мышей, находившихся в условиях постоянного затемнения, а макрофагов – в тимусе мышей, находившихся в условиях естественного освещения.

Показано, что CD3-позитивные клетки чувствительны, а CD1а-позитивные клетки резистентны к ежедневному поступлению мелатонина в течение 2 или 4 недель в концентрации 4 мг/литр независимо от условий освещения.

Установлено, что количество тучных клеток в соединительнотканных корковых перегородках и паренхиме тимуса под влиянием мелатонина увеличивается, что сопровождается увеличением доли тучных клеток без признаков дегрануляции, и эти изменения более выражены в тимусе мышей, находившихся в условиях постоянной темноты.

Выявлено, что при поступлении мелатонина независимо от длительности и условий освещения происходит снижение содержания гистамина в биоаминсодержащих клетках дольки, и эти изменения носят более выраженный характер в тимусе мышей, находившихся в условиях постоянного затемнения в течение месяца. Содержание серотонина и катехоламинов в люминесцирующих гранулярных клетках долек после 4 недель поступления мелатонина увеличивается в тимусе мышей, находившихся в условиях естественного освещения, и снижается – в тимусе мышей, находившихся в условиях постоянного затемнения.

Впервые показано, что в условиях поступления экзогенного мелатонина большую чувствительность к постоянному затемнению проявляют в тимусе макрофаги, NK-клетки и тучные клетки, но не Т-лимфоциты.

Теоретическое и практическое значение Результаты проведенных исследований – один из примеров эндокринной регуляции нейроиммунных взаимодействий в тимусе. Они демонстрируют ответную реакцию иммунокомпетентных клеток при непосредственном участии нейромедиаторных биогенных аминов на экзогенный мелатонин, что позволяет расширить представления о роли гормона в деятельности иммунной системы.

Выводы и научные положения диссертационной работы могут быть использованы в учебном процессе вузов медико-биологического профиля при изучении дисциплин «Гистология», «Иммунология», «Эндокринология».

Полученные результаты относятся к области фундаментальных исследований и расширяют представления о закономерностях нейрогуморального обеспечения иммунного гомеостаза. Это может быть учтено при создании методов моделирования иммунного ответа с применением гормонов, в частности мелатонина.

Реализация результатов исследования Научные положения, выводы и фотоматериалы диссертационного исследования используются в учебном процессе ФГБОУ ВПО «Чувашский государственный университет им. И. Н. Ульянова», в работе бюджетного учреждения «Республиканская клиническая больница» МЗСР ЧР, автономного учреждения Чувашской Республики «Институт усовершенствования врачей»

МЗСР ЧР.

Степень достоверности и апробация результатов Для обработки полученного в ходе эксперимента материала (гистологические препараты, цифровые данные) было использовано сертифицированное оборудование. Клеточные маркеры CD1a, CD3, CD57, CD68 широко используются в клинике. Достоверность полученных результатов в ходе исследования была обеспечена с помощью подбора адекватных иммуногистохимических и люминесцентно-гистохимических методов, последующей статистической обработки.

Основные научные положения, выводы и результаты доложены и обсуждены на 8-й Всероссийской научной конференции «Бабухинские чтения в Орле» (Москва, 2011), Всероссийском молодежном научного семинаре «Наука и инновации – 2012» (Йошкар-Ола, 2012), II Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Морфология в теории и практике», посвященной 90-летию со дня рождения Д. С. Гордон (Чебоксары, 2012), 86–й Всероссийской научной конференции памяти академика АН РТ, проф. И. Г.

Салихова (Казань, 2012), XIX Международном конгрессе по реабилитации в медицине и иммунореабилитации (Дубай, 2012), V Международном молодежном медицинском конгрессе «Санкт-Петербургские научные чтения – 2013» (СанктПетербург, 2013), Научно-практической конференции, посвященной 40-летию кафедры патофизиологии «Актуальные вопросы клинической и экспериментальной медицины» (Чебоксары, 2014), Всероссийской научнопрактической конференции с международным участием «Современные проблемы естественно-научных исследований» (Чебоксары, 2014), 89-й Всероссийской научно-практической конференции студентов и молодых ученых (Казань, 2015), Международной научно-практической конференции «Теоретические и прикладные проблемы современной науки и образования» (Курск, 2015).

Научные положения, выносимые на защиту

1. Поступление мелатонина в организм лабораторных мышей в течение 2 или 4 недель в условиях естественного освещения или постоянного затемнения приводит к снижению площади коркового вещества и увеличению площади мозгового вещества долек тимуса. Одновременно наблюдается уменьшение численности CD3-позитивных клеток и увеличение количества макрофагов, натуральных киллеров в корковом веществе долек тимуса; уменьшение количества CD3-позитивных клеток и увеличение количества макрофагов, натуральных киллеров в мозговом веществе долек тимуса, что сопровождается снижением содержания гистамина в люминесцирующих клетках долек и увеличением количества тучных клеток без признаков дегрануляции в тимусе.

2. В условиях поступления экзогенного мелатонина большая зависимость от световых условий в тимусе проявляется в содержании макрофагов, тучных клеток и натуральных киллеров, но не Т-лимфоцитов.

Публикации Основные положения диссертации отражены в 12 опубликованных работах, 8 из них (3 статьи и 5 публикаций с тезисами докладов) – в центральных периодических журналах и изданиях, рекомендованных ВАК для защиты кандидатских и докторских диссертаций.

Структура и объем диссертации Диссертационный материал изложен на 172 страницах компьютерного исполнения и состоит из введения, обзора литературы, описания материала и методов исследования, результатов собственного исследования, обсуждения полученных результатов, заключения, выводов и списка использованной литературы, списка сокращений, списка иллюстративного материала.

Работа включает 10 таблиц и 40 рисунков, из которых 20 – диаграммы и 20 – микрофотографии. Список литературы содержит 101 отечественный и 268 иностранных источников.

Личное участие автора Автором лично осуществлялся выбор экспериментальных животных, разработка схемы эксперимента, условий и сроков воздействия, дозировки мелатонина, выведение животных из эксперимента, приготовление криостатных срезов, постановка люминесцентно-гистохимических реакций по методам Кросса, Эвена, Роста и Фалька-Хилларпа, цитоспектрофлуориметрия, выбор иммуногистохимических маркеров, микроскопия препаратов, фотографирование, статистическая обработка данных. Написание глав диссертационного исследования, подготовка материалов к публикации проводились автором самостоятельно.

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Современные представления о структуре и функциях тимуса Тимус – центральный орган лимфопоэза и иммуногенеза. В нем осуществляется антигеннезависимая дифференцировка клеток в Т-лимфоциты из костномозговых предшественников, разновидности которых обеспечивают реакции клеточного иммунитета и регулируют реакции гуморального иммунитета, в связи с чем находятся на ключевых позициях в иммунных реакциях. [75, 99, 160, 262, 368].

Тимус находится в переднем средостении и состоит из двух ассиметричных долей, разделенных не полностью на дольки. Топография и строение тимуса сходны у большинства млекопитающих и человека, в том числе у мышей и человека [29, 88].

Снаружи тимус покрыт соединительнотканной капсулой. От нее внутрь органа отходят перегородки, которые делят железу на дольки. В каждой дольке выделяют корковое и мозговое вещество [18].

В основе органа находится эпителиальная ткань, состоящая из отростчатых клеток (эпителиоретикулоцитов) и клеток моноцитарного происхождения, между которыми лежат дифференцирующиеся Т-лимфоциты. Для всех эпителиоретикулоцитов свойственно наличие десмосом, тонофиламентов и белков кератинов, продуктов главного комплекса гистосовместимости на своих мембранах. Периферические части долек гуще заполнены лимфоцитами и образуют корковое вещество. Центральные части долек имеют меньшее количество лимфоцитов – это мозговое вещество долек органа.

Стромальные клетки. Основа коркового и мозгового вещества долек представлена отростчатыми эпителиоретикулоцитами. Эпителиоциты формируют трехмерную сеть, которая образует каркас органа, секретируют ряд биологически активных веществ: цитокины, тимические гормоны, молекулы компонентов экстрацеллюлярного матрикса, синтезируют и презентируют тканеспецифические антигены [6, 100, 110, 160, 267, 319]. На мембранах эпителиоретикулоцитов присутствуют антигены главного комплекса гистосовместимости MHC-I и MHCII.

По ультрамикроскопическим признакам выделяют 6 типов эпителиальных клеток: I тип – клетки располагаются под капсулой, ограничивают перегородки и периваскулярные пространства капилляров коркового вещества; клетки типа II и III типы – занимают наружную и внутреннюю кортикальную зоны; IV тип – формируют кортико-медуллярную зону; V тип – представляют собой неспециализированные эпителиальные клетки мозгового вещества долек; VI тип – формируют основную популяцию клеток мозгового вещества и участвуют в образовании телец Гассаля [21, 90].

На основе результатов иммуногистохимических исследований [18, 209] разделяют четыре основных типа эпителиальных клеток: субкапсулярные (парасептальные, периваскулярные), кортикальные, медуллярные и клетки телец Гассаля. Ucar A. с соавт. (2014) выделяют две основные субпопуляции тимусных эпителиальных клеток: кортикальные и медуллярные.

Общепринято разделение тимуса на следующие структурнофункциональные зоны:

1) субкапсулярная зона, где проходит пролиферация и дифференцировка предшественников Т-лимфоцитов;

2) внутренняя кортикальная зона, где происходит созревание и дальнейшая антигеннезависимая дифференцировка Т-лимфоцитов;

3) мозговое вещество долек, в котором лежат рециркулирующие зрелые Тлимфоциты;

4) внутридольковые периваскулярные пространства коркового и мозгового вещества [90, 113, 149, 212, 226].

Субкапсулярная зона. Субкапсулярная зона находится непосредственно под базальной мембраной долек и составляет примерно 1/4 часть ширины коркового вещества долек. Зона состоит из сети светлых эпителиальных клеток, в ячейках которых лежат лимфоидные клетки, представленные пре-Т-лимфоцитами (ранними тимоцитами) и лимфобластами, а также немногочисленные макрофаги.

В данной зоне различают следующие клетки: крупные эпителиальные клетки, которые участвуют в формировании гемато-тимического барьера [23], клетки «няньки», которые впервые выделены из коры тимуса мыши и описаны Wekerle H., Ketelson V. (1980). Позднее эти клетки были найдены и в тимусе человека [303], крыс, свиней, овец, лягушек и кур [287]. Клетки-«няньки» характеризуются более крупными размерами, у них может содержаться в цитоплазме от 50 до 200 лимфоцитов [205, 288], из которых 30 – 50% находятся в фазе митоза.

Эпителиальные клетки субкапсулярной зоны тимуса содержат тимусные гормоны, экспрессируют цитокератин, нейрофилин-1, слабо экспрессируют или вообще не экспрессируют антигены главного комплекса гистосовместимости [18, 231, 237].

Около 95% лимфоцитов тимуса находятся в корковом веществе долек. Это физиологически незрелые клетки, которые слабо рециркулируют, малоподвижны и имеют способность к активации митогенами [99]. Лимфоциты субкапсулярной зоны составляют 0,5 – 5% всего пула тимоцитов. Это первые мигранты из костного мозга – пре-Т-клетки – лимфобласты, которые имеют определенный набор поверхностных молекул, но лишены основных маркеров дифференцировки:

CD4 и CD8. Отсюда идет их название – «двойные негативы» [92, 99].

Тимоцитарные бласты субкапсулярной области, которые находятся в тесном контакте с клетками-«няньками», активно делятся и заканчивают свой путь развития в данной зоне умеренной экспрессией корецепторов CD4 и CD8 и бета-цепи TCR [247].

CD1а – это мембранный гликопротеин, маркер кортикальных тимоцитов (70%), клеток Лангерганса кожи, незрелых дендритных клеток [39, 45, 51, 97, 138, 207, 244, 290]. CD1а маркер экспрессируется на большинстве CD4+CD8+ тимоцитов и небольшой части CD4-CD8+ и CD4+CD8- клеток. Так как этот маркер не присутствует на зрелых периферических Т-клетках, то, следовательно, CD1апозитивные тимоциты являются незрелыми [302]. Показано, что CD1а презентирует антигены на клеточную поверхность для распознавания их Тклетками [194].

В дальнейшем тимоциты с фенотипом СD4+CD8+бетаTCR+ мигрируют во внутренний кортикальный слой. Факт прохождения положительной селекции в коре указывает дальнейшую дифференцировку на субпопуляции CD4+CD8- и CD4-CD8+, которая обеспечивается, в основном, на границе коркового и мозгового вещества долек под влиянием взаимодействия с дендритными клетками и макрофагами [193]. Здесь же идет и отрицательная селекция тимоцитов [330].

В процесса селекции тимоцитов также принимают участие натуральные киллеры [196]. NK-клетки несут на своей мембране маркеры CD16, CD56, CD57.

CD57 (HNK-1) – мембранный антиген натуральных киллеров, рецептор адгезии, олигосахарид. Антиген экспрессируется на 60% NK-клеток, Т-клетках, 15 – 20% мононуклеаров периферической крови, некоторых В-лимфоцитах, клетках нейроэктодермального происхождения [51, 74, 246, 351]. CD57 является маркером терминальной дифференцировки NK-клеток [123, 246, 314, 356, 361, 365], что характеризуется снижением способности пролиферировать и вырабатывать -INF по сравнению с неэкспрессирующими данный антиген NK-клетками. CD57позитивные NK-клетки более чувствительны к стимуляции через CD16 рецепторы, но в меньшей степени реагируют на IL-12 и IL-18. Ввиду этого NKклетки, несущие CD57 маркер, продуцируют больше -INF при стимуляции CD16 рецепторов и при воздействии IL-2. Однако естественная цитотоксичность NKклеток в ходе терминальной дифференцировки существенно не меняется, и CD57позитивные NK-клетки являются более мощными эффекторами антителозависимой клеточной цитотоксичности, нежели не несущие данный антиген NK-клетки [147, 246]. Чувствительность к индуцированной активацией смерти клеток не отличается у CD57-позитивных и CD57-негативных NK-клеток [246]. В работе Sanno N. и др. (1997) указывается на возможность паракринной роли клеток, несущих NK-1 антиген.

В результате прошедших дифференцировочных событий в медуллярной области скапливаются клетки с фенотипом CD4+CD8-TCR+ (T-хелперы) и CD4CD8+TCR+ (T-киллеры), часть из которых мигрирует в периферические органы иммуногенеза [55].

Внутренняя кортикальная зона. Эпителиальный остов внутренней кортикальной зоны представлен как светлыми, так и темными эпителиальными клетками, по своей ультраструктуре соответствующими III и IV типам по классификации Г. А. Галил-Оглы и соавт. (1988). Клеток-«нянек» в этой зоне нет.

Темные клетки лежат ближе к мозговому веществу долек. Отростки клеток соединяются между собой и формируют широкопетлистую сеть, в ячейках которой находятся лимфоциты. При этом есть участки с относительно густой сетью эпителиальных клеток и участки, где эпителиальных клеток практически нет. Такие участки называют «резервуарами» для Т-лимфоцитов коркового вещества [171]. Эпителиальные клетки внутренней кортикальной зоны не содержат тимусных гормонов, слабо экспрессируют цитокератин и сильно экспрессируют антигены II класса МНС [18].

Большая часть лимфоцитов экспрессирует антигены CD2, CD7, CD1, CD4 и CD8 («двойные позитивные» CD4+ и CD8+), «двойные негативные» (CD4- и CD8-) лимфоциты, а также лимфоциты, характеристика которых сходна с характеристикой лимфоцитов субкапсулярной зоны, и зрелые лимфоциты с антигенами либо CD4 (Т-хелперы), либо CD8 (Т-киллеры). Эти зрелые лимфоциты в большинстве своем имеют хоминг-рецепторы для миграции в Тзависимые зоны периферических лимфоидных органов [98, 212, 297, 316]. Такие рецепторы экспрессируются у 1 – 3% Т-лимфоцитов тимуса, причем 70% из них – это зрелые лимфоциты внутренней кортикальной и медуллярной зон долек.

Важной особенностью дифференцировки лимфоцитов в этой зоне является формирование у них Т-клеточного рецептора к антигену [108, 165].

Функциональное значение внутренней кортикальной зоны состоит в обеспечивании дифференцировки поступающих из субкапсулярной зоны ранних тимоцитов. Предполагается, что здесь происходит: 1) отбор и гибель аутоагрессивных Т-лимфоцитов; 2) отбор лимфоцитов, имеющих рецепторы к белкам MHC (позитивная селекция). Созревшие аутотолерантные лимфоциты либо мигрируют в области кортико-медуллярной границы, либо переходят в мозговое вещество [212]. Новые генерации лимфоцитов образуются в тимусе каждые 6 – 9 часов. В экспериментах на мышах показано, что в сутки в тимус поступает 0, 01% от общего числа всех ее лимфоцитов, «рождается» в ней 30%, подвергается элиминации в коре путем апоптоза 29% и эмигрирует 1% [143, 315].

Так как тимус не имеет самообновляющейся популяции гемопоэтических клеток, ввиду этого тимопоэз быстро угнетается из-за отсутствия притока новых клетокпредшественников. L. Calderon и T. Boehm (2011) обнаружили, что основным механизмом, обеспечивающим миграцию клеток в орган, является хемотаксис, который опосредуется через хемокиновые рецепторы Cсr9, Ccr7 и Cxcr4.

Макрофаги тимуса имеют костномозговое происхождение, одной из главных функций которых является элиминация поврежденных лимфоцитов.

Макрофаги синтезируют IL-1, IL-6 и фактор некроза опухолей (ФНО), а также простагландины Е, ограничивающие процессы пролиферации в тимусе.

Макрофаги тимуса представлены гетерогенной популяцей, которая отличается морфологически, фенотипически и по функциональным способностям.

Иммунофенотипические исследования обнаруживают в тимусе ED1+ и ED2+ макрофаги. Первые являются активно фагоцитирующими, локализуются во всех зонах тимуса, демонстрируют высокую активность кислой фосфатазы и экспрессируют на поверхности антигены II класса МНС. Их функция сводится к утилизации лимфоцитов, погибающих в результате негативной селекции [335]. С другой стороны, эти клетки входят в систему гистосовместимости, могут презентировать тимоцитам антигены II класса МНС и, следовательно, принимать прямое участие в процессах позитивной и негативной селекции Т-лимфоцитов.

ED2+ макрофаги являются нефагоцитирующими. Сигналом к пролиферативной активации Т-лимфоцитов является IL-1, который продуцируют макрофаги.

Популяция ED2+ клеток может восполняться как за счет дифференцировки ED1+ клеток, так и за счет поступления циркулирующих моноцитов, которые мигрируют в тимус через посткапиллярные венулы и периваскулярные пространства [18].

Широко распространенным в гистологии маркером для выявления макрофагов является антиген CD68 [131, 259]. CD68 (макросиалин) – скавенджеррецептор [272, 326], антиген клеток моноцитарно/макрофагальной линии, входит в семейство лизосом-ассоциированных мембранных гликопротеинов [114, 338].

Кортико-медуллярная зона. Кортико-медуллярная зона содержит клетки стромы костномозгового происхождения, в первую очередь дендритные клетки [128]. В данной зоне происходит выход лимфоцитов на периферию и в мозговое вещество. Дендритные клетки ответственны за Т-клеточную негативную селекцию [111, 249, 262]. Дендритные клетки представляют уникальную клеточную популяцию тимуса, которая экспрессирует молекулы МНС класса I и II в высоких концентрациях [224, 346]. Эти клетки обладают способностью захватывать, процессировать и презентировать ауто- и аллогенные антигены в контексте молекул МНС [181, 206, 249]. Кроме того, дендритные клетки продуцируют дополнительные сигналы, решающие в конечном итоге, подвергнется ли клетка клональной делеции или продолжит созревание [107].

Мозговое вещество долек. Мозговое вещество долек представлено густой сетью крупных эпителиальных клеток, образующих небольшие ячейки.

Количество Т-лимфоцитов здесь меньше, чем в корковом веществе долек, но эта зона характеризуется большим числом клеток мезенхимального происхождения и наличием эпителиальных тимических телец (тельца Гассаля). Медуллярные эпителиальные клетки содержат тимусные гормоны, экспрессируют цитокератины, но не экспрессируют антигены МНС [18].

В мозговом веществе долек выявляются более крупные светлые эпителиальные клетки, формирующие тимические тельца. Клетки тимических телец, как и субкапсулярные, относятся к светлым, эктодермального генеза.

Согласно объединенной теории центральной иммунотолерантности, эпителиальные клетки телец Гассаля играют особую роль в поддержании иммунологического гомеостаза: презентируют тканеспецифические антигены для элиминации аутореактивных лимфоцитов, синтезируют хемокины, влияющие на миграцию лимфоцитов [14, 15, 16].

В настоящее время выявлено существование специфической популяции эпителиальных клеток мозгового вещества тимуса, обеспечивающих уникальные свойства в процессах иммуногенеза. Клетки характеризуются активностью гена Aire, кодирующего белковый транскрипционный фактор, вызывающий транскрипцию эктопических тканеспецифических белков [264]. С помощью Aire происходит синтез белков различных тканей в эпителиальных клетках тимуса, создавая в нем как бы иммунологический образ всего организма. Поэтому Aire+ клетки являются своеобразными «транскрипционными машинами» по созданию тканеспецифических антигенов, которые важны для элиминации аутореактивных лимфоцитов, а значит, для создания и поддержания иммунологического гомеостаза в организме [221].

В настоящее время доказано, что Aire+ эпителиальные клетки подвергаются ступенчатому процессу дифференцировки, характеризующемуся изменением экспрессии определенных поверхностных маркеров. Конечной стадией этого процесса, при которой клетки достигают наибольшего развития, есть формирование телец Гассаля. Окончательное функциональное созревание Aire+ эпителиальных клеток мозгового вещества происходит только тогда, когда они организуются в тельца Гассаля, что подтверждается многочисленными работами [127], доказывающими специфические свойства клеток телец Гассаля. Гибель этих клеток в результате аутофагии приводит к освобождению растворимых тканеспецифических антигенов, которые используются дендритными клетками для процессов селекции в тимусе [221].

Т-регуляторные клетки (Treg) имеют важное значение для поддержания иммунологической толерантности [152, 263, 331]. Различают следующие подвиды CD4+ Т-лимфоцитов с регуляторными свойствами: тимические CD4+CD25+ [307], происходящие из естественных Treg, вторичные супрессорные Т-клетки, в том числе Th3-клетки [353] и Tr1-клетки, индуцибельные на периферии [304].

Супрессируя иммунный ответ, Т-регуляторные клетки продуцируют цитокины IL-10, -IFN, IL-35, а также экспрессируют на своей поверхности рецептор CTLAСупрессия обеспечивается при непосредственном контакте клеток – прямой способ, и на расстоянии – дистантный способ. Целью Т-регуляторных клеток становятся Т-эффекторы и дендритные клетки. При дистантном способе супрессии цитокины взаимодействуют с рецепторами на поверхности мембран Тэффекторных клеток и подавляют их активность, супрессируя иммунный ответ. С помощью CD25 происходит захват IL-2, который является основным аутокринным стимулирующим фактором. При прямом механизме супрессии Treg секретируют гранзим B, который при помощи перфоринов приводит к гибели активных Т-лимфоцитов путем апоптоза.

Недавние исследования показали, что Th17 клетки и Tregs имеют общий индуцированный путь, и нарушение баланса Th17/Treg может быть причиной аутоиммунных заболеваний [362]. При этом популяция Th17 лимфоцитов находится под контролем действия мелатонина, так как внутриклеточный рецептор для эпифизарного гормона является фактором дифференцировки для Th17-клеток [24].

Т-лимфоциты мозгового вещества долек составляют 15–20% всех лимфоцитов тимуса. Зрелые медуллярные тимоциты несут маркеры CD3, CD5, CD4, CD8 и антигены HLA 1-го и 2-го классов.

CD3 – высокоспецифичный маркер субпопуляции Т-лимфоцитов [45, 49, 148, 172, 350]. Это пан Т-клеточный антиген, состоящий из 5 полипептидных цепей, которые ковалентно связываются с Т-клеточным рецептором (TCR), вместе с которым обеспечивают передачу внутриклеточного сигнала при активации Т-клеток [51]. Отличительной особенностью Т-клеточного развития в тимусе является жестко контролируемая экспрессия TCR и CD3 комплекса, которая значительна на CD4-CD8+ и CD4+CD8- клетках, и низкая на CD4+CD8+ лимфоцитах [350]. В незрелых Т-клетках CD3 имеет цитоплазматическую локализацию, а у зрелых Т-лимфоцитов имеет мембранное расположение [51].

Полагают, что в мозговом веществе долек накапливаются созревшие Тлимфоциты из коркового вещества, они кортизол- и радиорезистентны и могут рециркулировать. Согласно другим гипотезам, Т-лимфоциты мозгового вещества представляют собой либо рециркулирующие Т-лимфоциты, поступающие из крови, либо – отдельную субпопуляцию. В любом случае, они рециркулируют, и миграция их происходит в области кортико-медуллярной границы через внутридольковые периваскулярные пространства [171, 212].

Значение мозгового вещества – обеспечение через микроокружение полного созревания Т-лимфоцитов, которое обеспечивается благодаря тимическим гормонам эпителиальных клеток, прямыми контактами с интердигитирующими клетками и влиянием интерлейкинов. Главным отличием тимических гормонов мозгового вещества является то, что они дальнодействующие, так как секретируются в кровь, тогда как тимические гормоны коры оказывают лишь местное воздействие [212].

Внутридольковые периваскулярные пространства. Внутридольковые периваскулярные пространства представлены идущими вглубь паренхимы тимуса узкими или более широкими ответвлениями междольковых септ, внутри которых расположены кровеносные сосуды. С одной стороны внутридольковые периваскулярные пространства отграничены базальной мембраной сосудов, с другой – базальной мембраной эпителиальных клеток собственно паренхимы тимуса. Внутридольковые периваскулярные пространства коркового вещества узкие, характеризуются утолщенными базальными мембранами, непрерывным слоем эпителиальных клеток и черепицеобразным расположением эндотелия капилляров. Такое строение является морфологическим эквивалентом гематотимического барьера [212].

Концепция гематотимического барьера долгое время была незыблемой.

Корковое вещество тимуса рассматривалось как среда, свободная от антигенов, в которой идет созревание Т-лимфоцитов. Однако в литературе постоянно появляются данные, противоречащие данной концепции. В серии работ [22, 67, 121] было показано, что антигены, циркулирующие в крови, могут обходить гематотимический барьер и проникать в тимус транскапсулярным путем.

Поскольку кровеносные капилляры капсулы тимуса фенестрированы, то антигены из крови могут попадать в соединительнотканную строму, достигая лимфоцитов тимуса. Пассаж молекул антигенов идет в том же направлении, в котором двигаются созревающие тимоциты – от субкапсулярной зоны к мозговому веществу. Поэтому аутоантигены могут нести определенную роль в процессах созревания Т-лимфоцитов. Результаты этих экспериментов составили основу гипотезы о связи лимфоидной паренхимы тимуса с внутренней средой организма, участии аутоантигенов во внутритимической дифференцировке Т-лимфоцитов и новой теории становления иммунологической толерантности. Авторы признают, что классический гематотимический барьер, по-видимому, существует, но функциональное значение его остается не совсем ясным [116, 130].

1.1.1. Гуморальная регуляция функционирования тимуса Физиологические функции тимуса находятся под контролем ряда гормонов, которые оказывают влияние на пролиферацию, дифференцировку, миграцию и апоптоз развивающихся тимоцитов. Так, в тимусе обнаружены рецепторы к глюкокортикостероидам [366], соматотропному гормону, тиреоидным гормонам, половым стероидам, хорионическому гонадотропному гормону [43], мелатонину [146].

Известно, что глюкокортикостероиды вызывают апоптоз тимоцитов [313], которые экспрессируют рецепторы к гормону в ядре и цитоплазме [43]. Терапия глюкокортикостероидами приводит к атрофии тимуса, что сопровождается снижением количества митозов, снижением площади коркового вещества долек, инверсией коркового и мозгового веществ, массовой миграцией клеток в кровоток [37]. Однако эффект глюкокортикостероидов находится в зависимости от дозы:

низкие концентрации стимулируют иммунные процессы, а высокие – подавляют [233]. Выявлен синтез глюкокортикоидов в самом тимусе эпителиальными клетками. Внутритимусные глюкокортикоиды оказывают локальную регуляцию дифференцировки тимоцитов, а также участвуют в возрастной инволюции органа [337].

Глюкокортикоиды играют ключевую роль в развитии стресс-реакций, которые приводят к инволюции органа [44]. Так, в первой стадии отмечается усиление процессов пролиферации лимфобластов субкапсулярной зоны коркового вещества дольки тимуса, при этом масса органа увеличивается. Во второй фазе в корковом веществе долек увеличивается количество лимфоцитов и кровенаполнение органа. В третью фазу гибель Т-лимфоцитов начинает нарастать и снижается секреция тимусных полипептидов. В четвертую стадию гибель тимоцитов приводит к опустошению мозгового вещества, а в пятую стадию нарастает коллагенизация стромы, склерозируются сосуды, начинается жировое перерождение тимуса [44].

Известно, что гормон роста и пролактин усиливают пролиферацию и миграцию тимоцитов [313], стимулируют выработку тимулина эпителиальными клеткам тимуса [266]. Инъекции соматотропного гормона увеличивают клеточность тимуса у старых мышей. Гипоплазия тимуса, наблюдаемая у карликовых мышей, устраняется введением гормона роста [266]. В работе Спирина И. В. (2007) продемонстрировано иммуностимулирующее действие соматотропного гормона на тимус, что сопровождалось увеличением площади коркового вещества долек тимуса, повышением числа дендритных клеток и макрофагов. Содержание иммуносупрессорных биогенных аминов (гистамина и серотонина) при этом снижалось, а иммуностимулирующих катехоловых аминов

– повышалось.

Тиреоидные гормоны увеличивают продукцию тимулина эпителиальными клетками. Так, в работе Chang W.-P. (2005) продемонстрировано повышение синтеза тимулина при одновременном увеличении плазменного уровня тиреоидных гормонов. Трийодтиронин активирует экспрессию рецепторов и лигандов во внеклеточном матриксе (фибронектин, ламинин) [160], ускоряет выход тимоцитов из клеток «нянек» и из тимуса на периферию [43].

Модулирующее действие хорионического гонадотропина на тимус сопровождается снижением пролиферативных процессов в органе, запускает процессы дифференцировки Т-лимфоцитов, усиливает дегрануляцию тучных клеток и приводит к увеличению содержания гистамина в структурах тимуса [95, 96]. Заморина С. А. (2000) в исследовании показала, что хорионический гонадотропин оказывает депрессивный эффект на фагоцитарную активность гранулоцитов и модулирует секреторную активность лимфоцитов.

Половые гормоны оказывают влияние на пролиферацию, дифференцировку и апоптоз иммунных клеток. Действие гормонов опосредуется через мембранные и ядерные рецепторы [43]. Известно, что тестостерон, оказывая модулирующее действие на иммунную систему, повышает восприимчивость к протозойным, грибковым, бактериальным и вирусным инфекциям [222]. В работе Сариловой И.

Л. (2009) показано, что тестэктомия стимулирует иммунные процессы, что сопровождается увеличением количества антигенпредставляющих клеток, повышением содержания катехоламинов в тимоцитарной паренхиме при одновременном снижении депрессорного моноамина серотонина. Кастрация самок и самцов вызывает увеличение веса и клеточности тимуса, усиление пролиферации Т-хелперов и Т-киллеров [43].

1.1.2. Клеточный состав тимуса и нейромедиаторные биогенные амины Клетки микроокружения тимоцитов, обеспечивающие регуляцию функций тимуса, продуцируют большое количество сигнальных молекул, таких как биогенные амины, нейропептиды, цитокины и другие биологически активные вещества, обеспечивающие нейроиммуноэндокринные взаимодействия [8, 69].

C помощью люминесцентно-гистохимических методов в тимусе обнаруживаются люминесцирующие гранулярные клетки (ЛГК), обладающие функцией синтеза и накопления и секреции биогенных аминов: ЛГК между корковым и мозговым веществом (премедуллярные ЛГК) и ЛГК коркового вещества (субкапсулярные ЛГК) [78].

Среди люминесцирующих гранулярных клеток тимуса определяют следующие группы клеток: клетки APUD–серии, макрофаги [28], дендритные клетки [28, 84].

Любое воздействие на организм, например, введение гормонов [81, 95], иммуномодуляторов [85], поступление солей кальция и кремния в организм [34, 35, 25], антигенная стимуляция [78], плацентарная недостаточность [79], тестэктомия [76], канцерогенез [33] и многое другое приводит к перераспределению содержания биогенных аминов между ЛГК и тимоцитами.

Изменение содержания биогенных аминов в люминесцирующих клетках тимуса напрямую связано с модуляцией их функций в иммунных реакциях [66].

Известно, что гранулярные люминесцирующие клетки на границе коркового и мозгового вещества дольки способны к синтезу биогенных аминов: серотонина и катехоламинов. В субкапсулярной зоне люминесцирующие клетки являются аминопоглотителями, неспособными к синтезу биоаминов и относящимися к типичным макрофагам, лимфоцитарная паренхима тимуса также проявляет функции биоаминопоглотителей [18, 78] и свойством связывать нейромедиаторы [36].

Показано, что увеличение содержания катехоламинов в гранулярных люминесцирующих клетках тимуса свидетельствует о повышении их функциональной активности, а увеличение содержания катехоламинов в лимфоцитарной паренхиме – усилению их пролиферации [76].

Катехоламины путем стимуляции адренорецепторов оказывают воздействие на миграцию, циркуляцию и пролиферацию лимфоцитов, определяют синтез цитокинов и активность клеток лимфоидного ряда [37]. 2-адренорецепторы обнаруживаются на всех иммунных клетках, кроме Th-2 клона лимфоцитов [311]. Уменьшение числа экспрессированных -адренорецепторов совпадало с пиками пролиферации лимфоцитов [163]. Мембранные 2-адренорецепторы были обнаружены на макрофагах [327]. В исследованиях Zoukos Y. et al. (1994) и Heijnen C. J. et al.

(1996) 1-адренорецепторы экспрессировались на лимфоцитах у лиц с ревматоидным артритом и рассеянным склерозом. Катехоламины оказывают регулирующее влияние на продукцию моноцитами/макрофагами провоспалительных веществ [168, 232]. Так, норадреналин и адреналин ингибируют секрецию ФНО [174], IL-12 [145], -INF, вырабатывающиеся антигенпрезентирующими клетками, но в тоже время способствуют усилению продукции IL-6 [125], IL-10 и трансформирующего фактора роста [168].

Катехоламины проявляют свойства ингибирования активности натуральных киллеров, фагоцитарной активности нейтрофилов, продукции супероксида и активных радикалов лейкоцитами [145]. В тоже время норадреналин стимулирует продукцию в тимусных эпителиальных клетках IL-6, которым крайне важен для дифференцировки лимфоцитов [285].

Серотонин является нейромедиатором в центральной нервной системе, вазоактивным биоамином и иммуномодулятором в периферических тканях [105, 277]. Известно, что избыток серотонина свидетельствует об иммуносупрессии [2].

Высокие дозы серотонина подавляют цитотоксическую функцию аллоиммуных эффекторных Т-лимфоцитов и лимфокинактивированных клеток-киллеров [230, 234]. Серотонин ингибирует обратный захват норадреналина нервными окончаниями.

При нехватке гистамина, последний может замещаться серотонином [155]. В работах Kut J. L. et al. (1992) и Young M. R. et al. (1993) показали дозозависимый эффект экзогенного серотонина: низкие дозы обеспечивали активирующее влияние на Тлимфоциты, в то время как высокие концентрации подавляли функции клеток.

Эффект серотонина распространяется и на клетки неспецифической иммунной защиты. В частности, вводимый биоамин в присутствии IL-2 усиливает цитотоксичность натуральных киллеров [202, 203].

В работе Лузиковой Е. Л. (2008) показано, что значительное повышение содержания серотонина и гистамина в люминесцирующих гранулярных клетках тимуса указывает на подавление их функций, а тимоцит с высоким содержанием серотонина может рассматриваться как клетка-супрессор. Повышение содержания серотонина в лимфоцитарной паренхиме приводит к снижению пролиферации Тлимфоцитов.

Гистамин оказывает широкое влияние на различные процессы в организме:

развитие аллергических реакций, процессы ранозаживления, онкологии, сердечно-сосудистые заболевания и функции иммунокомпетентных клеток [279].

Биоамин проявляет иммуномодулирующие свойства, которые определяются его концентрацией и типом активированного рецептора. Клетки врожденного и приобретенного иммунитета чувствительны к действию гистамина [175, 280].

Гистамин участвует в регуляции функций дендритных клеток [323], контролирует выработку провоспалительных цитокинов, экспрессию молекул адгезии и миграцию иммунокомпетентных клеток, таких как эозинофилы, дендритные клетки, NK-клетки, Т-лимфоциты, путем связывания со специфическими рецепторами [161, 198]. Избыточное содержание гистамина носит иммуносупрессивный эффект [204]: ингибирует функции Т-лимфоцитов [129], подавляет синтез IL-4 и -INF [223], снижает продукцию тимулина эпителиальными клетками тимуса [200]. Под действием гистамина Т-супрессоры выделяют гистамин-индуцированный супрессорный фактор, который подавляет функции NK-клеток [275]. В тоже время гистамин защищает NK-клетки от ингибирующего действия моноцитарных активных форм кислорода [274].

Гистамин оказывают эффект на регуляцию Т-клеточного ответа: стимулирует Th2 путь, и подавляет Th1 ответ [283].

Основным источником гистамина являются тучные клетки [324, 343].

Тучные клетки – гетероморфная популяция клеток, которые характеризуются наличием в цитоплазме гранул, проявляющих метахроматические свойства при окрашивании красителями тиазинового ряда [94]. Имеют широкое распространение и обнаружены практически во всех органах [150, 292].

Тучные клетки принимают активное участие не только в реакциях врожденного и приобретенного иммунного ответа, гомеостаза, но и ангиогенезе, ремоделировании тканей, опухолевых процессах [54, 270, 355]. Тучные клетки наряду с моноцитами и дендритными клетками являются одними из первых звеньев иммунной системы, которые взаимодействуют с антигенами внешней и внутренней среды [344]. Тучные клетки могут функционировать как эффекторные, так и иммунорегуляторные клетки [102, 162, 182]. Тучные клетки обладают способностью регулировать переход от врожденного к приобретенному иммунному ответу посредством влияния на пролиферацию, дифференцировку, миграцию и функционирование иммунокомпетентных клеток: макрофагов, натуральных киллеров, В- и Т-лимфоцитов и др. [162, 182, 183, 344]. Выделяя гистамин, тучные клетки снижают супрессорную активность Т-регуляторных клеток [133].



Pages:   || 2 | 3 | 4 | 5 |   ...   | 6 |

Похожие работы:

«КОЛОТВИН АНДРЕЙ ВАСИЛЬЕВИЧ Прогностическая значимость генетического полиморфизма патогена и хозяина для оценки эффективности терапии и развития фиброза печени при хроническом гепатите С Молекулярная биология –...»

«СЕРГЕЕВА ЛЮДМИЛА ВАСИЛЬЕВНА ПРИМЕНЕНИЕ БАКТЕРИАЛЬНЫХ ЗАКВАСОК ДЛЯ ОПТИМИЗАЦИИ ФУНКЦИОНАЛЬНО-ТЕХНОЛОГИЧЕСКИХ СВОЙСТВ МЯСНОГО СЫРЬЯ И УЛУЧШЕНИЯ КАЧЕСТВА ПОЛУЧАЕМОЙ ПРОДУКЦИИ Специальность 03.01.06 – биотехнология ( в том числе бионанотехнологии) Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель Доктор биологических наук, профессор Кадималиев Д.А. САРАНСК 2014 ОГЛАВЛЕНИЕ ВВЕДЕНИЕ.....»

«Цвиркун Ольга Валентиновна ЭПИДЕМИЧЕСКИЙ ПРОЦЕСС КОРИ В РАЗЛИЧНЫЕ ПЕРИОДЫ ВАКЦИНОПРОФИЛАКТИКИ. 14.02.02 – эпидемиология ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени доктора медицинских наук Научный консультант: заслуженный деятель науки РФ, лауреат Государственной премии СССР профессор, доктор медицинских наук Ющенко Галина Васильевна Москва – 20 Содержание...»

«Решетникова Татьяна Валерьевна ФОРМИРОВАНИЕ ОРГАНИЧЕСКОГО ВЕЩЕСТВА ПОЧВЫ В КУЛЬТУРАХ ОСНОВНЫХ ЛЕСООБРАЗУЮЩИХ ПОРОД СИБИРИ Специальность 03.02.08 – «Экология (биология)» Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: доктор биологических наук Э.Ф. Ведрова Красноярск 2015 Содержание Введение..5 Глава 1....»

«УДК Тадж: 5+59+634.9 САНГОВ РАДЖАБАЛИ ЭКОЛОГИЯ ГЛАВНЕЙШИХ ВРЕДНЫХ ЧЕШУЕКРЫЛЫХ (LEPIDOPTERA) ОРЕХОВОЙ ПЛОДОЖОРКИ (SARROTHRIPUS MUSCULANA ERSSCH) И ЯБЛОНЕВОЙ МОЛИ (HYPONOMENTA MALINELUSUS SELL) И РАЗРАБОТКА ЭКОЛОГИЗИРОВАННОЙ СИСТЕМЫ ЗАЩИТЫ ЛЕСОВ ТАДЖИКИСТАНА 06.01.07 – защита растений ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени доктора сельскохозяйственных наук Научные консультанты: СУГОНЯЕВ Е.С. доктор биологических...»

«Цховребова Альбина Ирадионовна ВЛИЯНИЕ ФАКТОРОВ СРЕДЫ НА РАЗВИТИЕ БЕСХВОСТЫХ АМФИБИЙ СЕВЕРНЫХ СКЛОНОВ ЦЕНТРАЛЬНОГО КАВКАЗА Специальность 03.02.14 – биологические ресурсы Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель доктор биологических наук профессор Калабеков Артур Лазаревич Владикавказ 2015 Содержание Ведение..3 Глава I. Обзор литературных данных. 1.1....»

«ПОПОВ ВИКТОР СЕРГЕЕВИЧ ТЕОРЕТИЧЕСКОЕ И ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЕ ОБОСНОВАНИЕ ИССЛЕДОВАНИЙ СРЕДСТВ И СПОСОБОВ ИММУНОМЕТАБОЛИЧЕСКОЙ КОРРЕКЦИИ У СВИНЕЙ 06.02.02 – ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени доктора ветеринарных наук Научный консультант: доктор...»

«Серёгин Сергей Викторович Оптимизация конструкций рекомбинантных ДНК для получения иммунобиологических препаратов 03.01.03 – молекулярная биология Диссертация на соискание ученой степени доктора биологических наук Научный консультант: доктор биологических наук Бажан Сергей Иванович...»

«САФИНА ЛЕЙСЭН ФАРИТОВНА Анафилактический шок на ужаления перепончатокрылыми насекомыми (частота встречаемости, иммунодиагностика, прогнозирование) 14.03.09 – клиническая иммунология, аллергология Диссертация на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Научный...»

«Степина Елена Владимировна ЭКОЛОГО-ФЛОРИСТИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА СТЕПНОЙ РАСТИТЕЛЬНОСТИ ЮГО-ЗАПАДНЫХ РАЙОНОВ САРАТОВСКОЙ ОБЛАСТИ 03.02.08 – экология (биологические науки) Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: доктор...»

«Доронин Максим Игоревич ЭКСПРЕСС-МЕТОДЫ ВЫЯВЛЕНИЯ ВИРУСА ИНФЕКЦИОННОГО НЕКРОЗА ГЕМОПОЭТИЧЕСКОЙ ТКАНИ ЛОСОСЕВЫХ РЫБ 03.02.02 «Вирусология» Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: доктор биологических наук, Мудрак Наталья Станиславовна Владимир 2015 ОГЛАВЛЕНИЕ 1 ВВЕДЕНИЕ 2 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 2.1 Характеристика возбудителя инфекционного...»

«ГАБЫШЕВ Виктор Александрович ФИТОПЛАНКТОН КРУПНЫХ РЕК ЯКУТИИ И СОПРЕДЕЛЬНЫХ ТЕРРИТОРИЙ ВОСТОЧНОЙ СИБИРИ 03.02.10 – Гидробиология Диссертация на соискание ученой степени доктора биологических наук Научный консультант Доктор биологических наук Доцент Л.Г. Корнева Якутск 2015 Оглавление ВВЕДЕНИЕ Глава 1. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ Глава 2. ХАРАКТЕРИСТИКА РАЙОНА И ОБЪЕКТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ...»

«Искам Николай Юрьевич ЭФФЕКТИВНОСТЬ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ НОВОЙ КОРМОВОЙ ДОБАВКИ АЦИД-НИИММП НА ОСНОВЕ ОРГАНИЧЕСКИХ КИСЛОТ ПРИ ПРОИЗВОДСТВЕ ГОВЯДИНЫ 06.02.10 – частная зоотехния, технология производства продуктов животноводства; 06.02.08 – кормопроизводство, кормление сельскохозяйственных животных и технология кормов. ДИССЕРТАЦИЯ на...»

«Тюрин Владимир Анатольевич МАРАЛ (CERVUS ELAPHUS SIBIRICUS SEVERTZOV, 1873) В ВОСТОЧНОМ САЯНЕ (РАСПРОСТРАНЕНИЕ, ЭКОЛОГИЯ, ОПТИМИЗАЦИЯ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ) Специальность 03.02.08 – Экология (биологические науки) Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: Д-р биол. наук, профессор М.Н. Смирнов Красноярск 201 Содержание Введение.. 4 Глава 1. Изученность экологии марала.. Биология марала.. 9...»

«ИВАНОВ Сергей Иванович Особенности воспроизводства атлантического лосося (Salmo salar L.) в озерно-речной системе реки Шуя (Республика Карелия) Специальность 03.02.06 – ихтиология ДИССЕРТАЦИЯ на соискание учёной степени...»

«УДК 5 КАРАПЕТЯН Марина Кареновна АНТРОПОЛОГИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ МОРФОЛОГИЧЕСКОЙ ИЗМЕНЧИВОСТИ КОСТНОГО ПОЗВОНОЧНИКА (ПО МЕТРИЧЕСКИМ И ОСТЕОСКОПИЧЕСКИМ ДАННЫМ) 03.03.02 «антропология» по биологическим наукам ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени кандидата биологических наук НАУЧНЫЙ РУКОВОДИТЕЛЬ: доктор исторических наук, чл.-корр. РАН А.П. БУЖИЛОВА...»

«Куяров Артём Александрович РОЛЬ НОРМАЛЬНОЙ МИКРОФЛОРЫ И ЛИЗОЦИМА В ВЫБОРЕ ПРОБИОТИЧЕСКИХ ШТАММОВ ДЛЯ ПРОФИЛАКТИКИ АЛЛЕРГИЧЕСКИХ ЗАБОЛЕВАНИЙ У СТУДЕНЧЕСКОЙ МОЛОДЕЖИ СЕВЕРА 03.02.03 – микробиология 03.01.06 – биотехнология (в том числе бионанотехнологии) Диссертация на соискание учёной степени кандидата...»

«Мухачева Татьяна Александровна МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЕЙ ИКСОДОВОГО КЛЕЩЕВОГО БОРРЕЛИОЗА В ПРИРОДНЫХ ОЧАГАХ НА ТЕРРИТОРИИ РОССИИ 03.02.03 – микробиология Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: Ковалев Сергей Юрьевич,...»

«ПЛЕШКОВА ЮЛИЯ АЛЕКСАНДРОВНА МАТЕМАТИЧЕСКОЕ МОДЕЛИРОВАНИЕ ЭФФЕКТИВНЫХ СИСТЕМ ПЕРЕДАЧИ ОПТИЧЕСКОГО СИГНАЛА НАСЕКОМЫМ Специальность 05.13.1 Математическое моделирование, численные методы и комплексы программ Диссертация на соискание ученой степени...»

«ДОРОНИН Игорь Владимирович Cистематика, филогения и распространение скальных ящериц надвидовых комплексов Darevskia (praticola), Darevskia (caucasica) и Darevskia (saxicola) 03.02.04 – зоология Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: доктор биологических наук, заслуженный эколог РФ Б.С. Туниев Санкт-Петербург Оглавление Стр....»







 
2016 www.konf.x-pdf.ru - «Бесплатная электронная библиотека - Авторефераты, диссертации, конференции»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.