WWW.KONF.X-PDF.RU
БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА - Авторефераты, диссертации, конференции
 


Pages:   || 2 | 3 |

«МОРФОФУНКЦИОНАЛЬНАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫХ ПОВРЕЖДЕНИЙ ГОЛОВНОГО МОЗГА И ИХ ФАРМАКОТЕРАПИЯ РАСТИТЕЛЬНЫМИ СРЕДСТВАМИ ...»

-- [ Страница 1 ] --

На правах рукописи

РАЗУВАЕВА ЯНИНА ГЕННАДЬЕВНА

МОРФОФУНКЦИОНАЛЬНАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫХ ПОВРЕЖДЕНИЙ ГОЛОВНОГО МОЗГА

И ИХ ФАРМАКОТЕРАПИЯ РАСТИТЕЛЬНЫМИ СРЕДСТВАМИ

06.02.01 – диагностика болезней и терапия животных,

патология, онкология и морфология животных

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук

Благовещенск – 2013

Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном учреждении науки «Институт общей и экспериментальной биологии» Сибирского отделения Российской академии наук

Научный консультант:

Кухаренко Наталья Степановна – доктор ветеринарных наук, профессор

Официальные оппоненты:

Хибхенов Лопсондоржо Владимирович – доктор биологических наук, профессор, ФГБОУ ВПО «Бурятская государственная сельскохозяйственная академия им. В.Р.

Филиппова» Министерства сельского хозяйства РФ / кафедра анатомии, гистологии и патоморфологии, заведующий Ламажапова Галина Петровна, доктор биологических наук, ФГБОУ ВПО «Восточно-Сибирский государственный университет технологий и управления» / кафедра биоорганической и пищевой химии, старший преподаватель Ильина Ольга Петровна, доктор ветеринарных наук, профессор, ФГБОУ ВПО «Иркутская государственная сельскохозяйственная академия» Министерства сельского хозяйства РФ / факультет биотехнологии и ветеринарной медицины, декан

Ведущая организация: ФГБОУ ВПО «Якутская государственная сельскохозяйственная академия» Министерства сельского хозяйства РФ

Защита диссертации состоится «18» декабря 2013 года в 1000 часов на заседании диссертационного совета Д 220.027.02 при ФГБОУ ВПО «Дальневосточный государственный аграрный университет» по адресу:

675005, г. Благовещенск, ул. Политехническая, 86.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГБОУ ВПО «Дальневосточный государственный аграрный университет»

Автореферат разослан “ ” _______________2013 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, кандидат биологических наук О.Л. Самусенко

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Данные эпидемиологических исследований, проводимые Всемирной организацией здравоохранения, и исследования в отдельных странах показывают, что рост темпа жизни, урбанизация и научнотехнический прогресс, а также социально-экономическое напряжение в обществе приводят к увеличению числа заболеваний нервной системы (Атаманов А.А., Менделевич В.Д., 2011; Вельтищев Д.Ю., 2011; Weisberg R.B., 2009; Provencher M.D., 2013), среди которых, с отчетливой тенденцией к увеличению, преобладают синдром хронической усталости, тревожные расстройства и когнитивные нарушения (Воронина Т.А., 2009; Захаров В.В., 2012;

Luyckx K. et al., 2011; Durham R.C. et al., 2012). Основными факторами развития как тревожных расстройств, так и когнитивных нарушений являются наследственная предрасположенность, стрессы, расстройства мозгового кровообращения различного генеза, использование нейропсихотропных средств, а также соматические и эндокринные заболевания (Вельтищев Д.Ю., 2011;

Захаров В.В., Вахнина Н.В., 2011; Старчина Ю.А., 2012; Forbes D. et al., 2011; Provencher M.D. et al., 2012). Отмечается рост резидуальной церебрально-органической патологии, вследствие цереброастенических и энцефалопатических нарушений, возникающих на фоне внутриутробной асфиксии плода, родовых травм мозга и др. (Евтушенко Е.Д., 2003; Уракова Н.А., 2012;

Poletti М. et al., 2012; Suttanon Р. et al., 2012). С увеличением продолжительности жизни населения, резко возрос процент лиц с нейродегенеративными заболеваниями (Камчатнов П.Р. и др., 2010; Старчина Ю.А., 2012; Smith R.A.

et al., 2006; Li H. et al., 2011; Poletti М. et al., 2012).

В настоящее время в медикаментозном лечении больных с заболеваниями нервной системы применяются средства с анксиолитическим, антидепрессивным, ноотропным и другими действиями, влияние которых направлено на высшие интегративные функции мозга: восстановление нарушенных мнестических и мыслительных функций, снижение неврологического дефицита, уровня тревожности и повышение резистентности организма к экстремальным воздействиям (Гуревич М.

А., 2006; Jellinger К.А., 2008). При этом большинство применяемых синтетических препаратов вызывает побочные реакции, что, в конечном итоге, нивелирует их терапевтическую эффективность. Так, на фоне анксиолитиков бензодиазепинового ряда наблюдаются нарушения когнитивных функций, синдром отнятия и рецидива тревоги в случае их отмены (Durham R.C. et al., 2012); трициклические транквилизаторы проявляют антихолинергическое, кардиотоксическое влияние, нарушают когнитивные функции и др. (Durham R.C. et al., 2012; Friborg О. et al., 2013).

Применяемые в настоящее время синтетические ноотропные средства также обладают рядом побочных эффектов, которые ограничивают их применение (Воронина Т.А., Середенин С.Б., 2007; Akabay Р. et al., 2003).

Между тем, для лечения неврологической патологии с глубокой древности используются такие растения как женьшень, валериана лекарственная, пустырник сердечный, мелисса лекарственная, пион уклоняющийся, зверобой продырявленный, шлемник байкальский и созданные на их основе фитосборы (Барнаулов О.Д., 2010; Венгеровский А.И. и др., 2011; Арушанян Э.Б., 2008; 2012). Доказано, что благодаря наличию комплекса биологически активных веществ растительные средства обладают широким спектром фармакологической активности, оказывают выраженный терапевтический эффект и их побочное действие, в большинстве случаев, ограничивается индивидуальной непереносимостью компонентов (Авдеева Т.И., Кинкулькина М.А., 2008; Турищев С.Н., 2008; Алексеева А.В., 2011; Бурчинский С.Г., 2012; Куркин В.А. и др., 2012). Преимущество комплексных средств перед монопрепаратами обусловлено синергизмом действия лекарственных растений в сборах, благодаря чему усиливаются полезные свойства компонентов, входящих в их состав. Рационально подобранные фитопрепараты способны выступать в качестве регулирующей системы при патологических состояниях организма (Николаев С.М., 2008; 2012). Интерес представляют традиционные медицинские системы, в частности тибетская, которая широко использует многокомпонентные сборы при болезнях «гза» («болезни, насылаемые духами»: при инсультах, параличах и других нарушениях функций нервной системы) (Тибетская…, 2008).

В связи с этим актуальным является поиск средств в лечении расстройств нервной системы, обладающих широким спектром фармакологических свойств в сочетании с максимальной безвредностью. Лекарственные растения и созданные на основе тибетской традиции врачевания средства представляют большой интерес.

Целью исследования явилось определение особенностей морфофункциональных нарушений центральной нервной системы, вызванных алкогольной интоксикацией, длительным эмоциональным стрессом, депривацией сна, введением скополамина, а также гипоксией, и оценка фармакотерапевтической эффективности растительных средств при указанных патологических состояниях.

Для достижения указанной цели были сформулированы следующие задачи:

1) определить особенности влияния алкогольной интоксикации, эмоционального стресса, депривации сна, скополамина и гипоксии на морфофункциональное состояние центральной нервной системы;

2) изучить структурные изменения в коре больших полушарий головного мозга, гиппокампе и мозжечке при указанных патологических состояниях;

3) определить спектр нейропротективной активности исследуемых растительных средств;

4) оценить фармакотерапевтическую эффективность растительных средств на фоне алкогольной интоксикации;

5) определить фармакотерапевтическую эффективность экстракта соплодий хмеля обыкновенного (ЭСХО), настойки цимицифуги даурской (НЦД) и «Анксиофита» при патологических состояниях, сопровождающихся тревожными расстройствами;

6) изучить влияние растительных средств на морфофункциональное состояние нервной системы при нейродегенеративных и гипоксических состояниях;

7) выявить основные механизмы нейропротективного влияния исследуемых растительных средств.

Научная новизна. Работа представляет комплексное исследование по влиянию алкогольной интоксикации, эмоционального стресса, депривации сна, введения скополамина и гипоксии на морфофункциональное состояние головного мозга белых крыс с обоснованием возможности и целесообразности фармакокоррекции растительными средствами указанных патологических состояний. Определено, что при алкогольной интоксикации, стрессовых, нейродегенеративных и гипоксических состояниях у животных развивается комплекс поведенческих нарушений, характеризующийся двигательной и эмоциональной заторможенностью животных, нарушениями когнитивных функций. В коре больших полушарий, гиппокампе и мозжечке наблюдаются морфофункциональные изменения, характеризующиеся уменьшением количества функционально активных и увеличением количества регрессивных форм нейронов (пикнотических, резко гипохромных и «клеток-теней»), явлений сателлитоза и нейронофагии на фоне снижения энергетического потенциала и подавления активности моноаминергической системы головного мозга. Установлено, что при длительной инъекции скополамина (экспериментальная болезнь Альцгеймера) у животных отмечаются наиболее выраженные структурные изменения в гиппокампе, характеризующиеся не только тотальным гиперхроматозом нейронов, характерным для других патологических состояний, но и их лизисом, в результате чего наблюдаются массивные очаги клеточного опустошения.

Выявлено, что основными и общими механизмами в повреждающем действии нервной системы при указанных патологических состояниях являются активация свободнорадикального окисления липидов и снижение активности системы антиоксидантной защиты.

В работе установлено, что исследуемые растительные средства оказывают ноотропное, антидепрессивное, антиагрессивное, анксиолитическое и умеренное седативное действие. Определено, что «Ноофит» проявляет более выраженное ноотропное действие, «Анксиофит» – анксиолитическое; при этом, с повышением дозы фитопрепарата снижается ноотропное действие и повышается седативный эффект.

Установлено, что исследуемые растительные средства обеспечивают выраженную фармакотерапевтическую эффективность при хронической алкогольной интоксикации, оказывая противотревожное и антиамнестическое влияние, уменьшая количество регрессивных нейронов в коре больших полушарий, гиппокампе и мозжечке. Показано, что на фоне длительного эмоционального стресса и депривации сна ЭСХО, НЦД и «Анксиофит» нормализуют у животных поведенческие реакции, снижая эмоциональное напряжение, оказывая антиамнестическое влияние; уменьшают количество регрессивных нейронов в структурах головного мозга и стимулируют моноаминергическую систему. При экспериментальных нейродегенеративных состояниях «Ноофит» проявляет выраженную фармакотерапевтическую эффективность, нормализуя у животных поведенческие реакции, оказывая антиамнестическое влияние, подавляя свободнорадикальные процессы, активируя антиоксидантную систему организма, уменьшая количество регрессивных нейронов. Курсовое введение исследуемых средств оказывает антиамнестическое влияние, нормализует энергетический потенциал нейронов и снижает содержание нейрон-специфической енолазы при гипоксии.

Доказано, что основными механизмами, определяющими нейропротективное влияние растительных средств, являются стимуляция ГАМКергической и катехоламинергической нейропередач, нормализация энергетического обмена при антиоксидантном, мембраностабилизирующем, стресспротективном, антигипоксическом и церебропротекторном действии.

Практическое значение. Результаты проведенных экспериментальных исследований позволяют рекомендовать исследуемые средства для клинических исследований с целью их применения в качестве эффективных и безопасных средств в клинической и ветеринарной практике для лечения и профилактики тревожных расстройств, а также умеренных когнитивных нарушений.

Результаты проведенных исследований включены в научный отчет «Молекулярно-клеточные механизмы стресс-индуцированных патологических состояний и коррекция их средствами природного происхождения», представленный в СО РАН. Материалы исследований включены в учебное пособие «Особенности фитокоррекции заболеваний нервной системы» и используются в учебном процессе на кафедрах общей патологии человека и фармакологии, клинической фармакологии и фитотерапии медицинского факультета Бурятского государственного университета; анатомии, гистологии и патоморфологии Бурятской государственной сельскохозяйственной академии им. В.Р. Филиппова; внутренних незаразных болезней, клинической диагностики и фармакологии Иркутской государственной сельскохозяйственной академии; клинической фармакологии Иркутской государственной медицинской академии последипломного образования.

По результатам исследований получены патент РФ (№ 2460534 от 10.09.2012 «Способ получения вещества, обладающего анксиолитической активностью») и Свидетельство о государственной регистрации биологически активной добавки к пище:

«Арура-Тан № 10» – «Анксиофит» (№ 77.99.11.003.Е.004344.05.13 от 28.05.2013).

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Особенности влияния алкогольной интоксикации, эмоционального стресса, депривации сна, скополамина и гипоксии на психоэмоциональное состояние животных, когнитивные функции; влияние указанных патологических состояний на процессы свободнорадикального окисления липидов и активность ферментов антиоксидантной защиты организма.

2. Структурные изменения в коре больших полушарий головного мозга, гиппокампе и мозжечке при указанных патологических состояниях: снижение количества функционально активных нейронов (нормохромных, умеренно гипер- и гипохромных), увеличение количества регрессивных нейронов (резко гипохромных, пикнотических и «клеток-теней»), явлений сателлитоза и нейронофагии.

3. Спектр нейропротективной активности растительных средств: анксиолитическое, антидепрессивное, антиагрессивное, ноотропное и умеренное седативное действие.

4. Нейропротективное влияние фитопрепаратов при указанных патологических состояниях: снижение количества дистрофически измененных и регрессивных форм нейронов и увеличение функционально активных нейронов в структурах головного мозга; подавление свободнорадикальных процессов и активация антиоксидантной системы организма.

5. Нормализация растительными средствами при расстройствах нервной системы поведенческих реакций: снижение неврологического дефицита, чувства страха и тревоги, восстановление эмоционального статуса и антиамнестическое влияние.

6. Основные механизмы нейропротективного влияния исследуемых фитопрепаратов: стимуляция ГАМК-ергической и катехоламинергической нейропередачи, нормализация энергетического обмена, антиоксидантное, мембраностабилизирующее, антигипоксическое и церебропротекторное действие.

Апробация материалов диссертации. Основные положения диссертации доложены и обсуждены на: Южно-Сибирской Международной научной конференции молодых ученых «Экология Южной Сибири» (Абакан, 2001);

Международной научно-практической конференции «Устойчивое развитие сельского хозяйства в бассейне озера Байкал» (Улан-Удэ, 2002); Всероссийской научной конференции «Актуальные проблемы адекватного питания в эндемичных регионах» (Улан-Удэ, 2002); IX, X, XII, XIX, XX Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2002; 2003; 2005;

2012; 2013); VI Всероссийской научной конференции молодых ученых “Биология – наука XXI века» (Пущино, 2002); Международной научной конференции «Возрастная физиология и патология сельскохозяйственных животных» (Улан-Удэ, 2003); Всероссийской научно-практической конференции «Развитие традиционной медицины в России» (Улан-Удэ, 2004; 2010); III Всероссийской научно-практической конференции «Актуальные проблемы инноваций с нетрадиционными природными ресурсами и создания функциональных продуктов» (Москва, 2005); Международной научной конференции «Дорно-орнийн анагаах ухааны хосолмол тогтолцоо» (Уланбатор, 2005);

Всероссийской научной конференции молодых ученых «Экология в современном мире: взгляд научной молодежи» (Улан-Удэ, 2007); II International Symposium on Chemistry of Herbal Medicine and Mongolian Drug (Ulaanbaatar, 2006); II International Сonference «Traditional medicine: current situation and future status» (Ulaanbaatar, 2006); III International Scientific Conference «Traditional Medicine: a Current Situation and Perspectives of Development» (UlanUde, 2008); IV International Symposium on Traditional Medicine and Innovative Drugs (Erdos, 2009); Международном научном конгрессе «Современные тенденции и перспективы развития курортного дела в Российской Федерации»

(Москва, 2010); The International Scientific Conference “Current Situation and Future Trends of Drug Research and Development from Natural Sources” (Ulaanbaatar, 2010); V International Symposium on Present Situation and Future Development of Mongolian Traditional Medicine (Ulaanbaatar, 2011); II Международной научной конференции «Разнообразие почв и биоты Северной и Центральной Азии» (Улан-Удэ, 2011); II Международной научно-практической конференции «Особенности формирования здорового образа жизни: факторы и условия» (Улан-Удэ, 2012); VI International Scientific Conference “Traditional Medicine: Ways of Integration with Modern Health Care» (Ulan-Ude, 2013).

Личный вклад автора. Вклад автора состоял в формировании направления исследования, непосредственном выполнении, постановке конкретных задач и их экспериментальном решении, интерпретации и обсуждении экспериментальных данных. Диссертационная работа представляет собой обобщение результатов многолетних исследований, полученных автором лично.

Связь задач исследований с проблемным планом НИР. Работа выполнена в Отделе биологически активных веществ ФГБУН ИОЭБ СО РАН в соответствии с комплексной программой по научным проектам: интеграционный проект № 54 «Научные основы разработки новых лекарственных средств. Перспективы использования возобновляемого сырья»; проект СО РАН № 146 «Разработка лекарственных и профилактических препаратов для медицины. Фундаментальные основы и реализация», проект СО РАН № VI.52.1.3 «Молекулярно-клеточные механизмы стресс-индуцированных патологических состояний и коррекция их средствами природного происхождения».

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 105 научных работ, из них 40 статей – в периодических изданиях, рекомендованных ВАК МО и науки РФ, получены 1 патент РФ на изобретение и свидетельство о регистрации.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 285 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследований, результатов собственных исследований (4 главы), обсуждения, заключения, выводов, практических рекомендаций, списка использованной литературы, приложений. Работа иллюстрирована 65 таблицами и 92 рисунками, в том числе 53 микрофотографиями. Список литературы включает 476 источников, из них 326 отечественных и 150 иностранных.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Исследования выполнены на 1720 белых крысах линии Wistar обоего пола с исходной массой 180–200 г. Содержание животных соответствовало «Правилам лабораторной практики» (GLP) и Приказу МЗ РФ № 708Н от 23.08.2010 г. «Об утверждении правил лабораторной практики». Перед началом экспериментов животные, отвечающие критериям включения в эксперимент, распределялись на группы с учетом пола, возраста, массы и принципа рандомизации. Экспериментальную работу осуществляли в соответствии с «Правилами проведения работ с использованием экспериментальных животных» (Приложение к приказу МЗ СССР №755 от 12.08.77 г.), «Правилами, принятыми в Европейской конвенции по защите позвоночных животных (Страсбург, 1986). Протокол исследования согласован с этическим комитетом ИОЭБ СО РАН (протокол №5 от 05.09.2000). Эвтаназию животных осуществляли методом мгновенной декапитации под легким эфирным наркозом.

Кроме того, в экспериментах (in vitro) были использованы суспензии эритроцитов и желточных липопротеидов, препараты тканей и биохимические тест-системы.

Алкогольную интоксикацию (АИ) вызывали внутрижелудочным введением животным 40% этанола в объеме 9,0 мл/кг в течение 45 дней (Воронина Т.А., Островская Р.У., 2005). Эмоциональный стресс (ЭС) моделировали помещением крыс в тесные пластиковые цилиндры с последующим погружением их в воду до уровня шеи (20-220 С) на 2 часа ежедневно в течение 4 суток (Захарова И.А. и др., 2009); стресс Жуве (СЖ) – трехдневной депривацией парадоксальной фазы сна (Воронина Т.А., Середенин С.Б., 2005). Экспериментальную болезнь Альцгеймера (БА) у крыс воспроизводили по методике Т.А. Ворониной и др. (2005): животным ежедневно в течение 20 суток внутрибрюшинно вводили М-холиноблокатор – скополамин в дозе 1 мг/кг/сут. Острую гипобарическую гипоксию моделировали путем «подъема» лабораторных животных в барокамерной установке на «высоту» 9000 м со средней скоростью 50 м/с, экспозицией их в этих условиях в течение 30 мин и последующей трехчасовой реоксигенацией (Березовский В.А. и др., 1985).

В качестве объектов исследования были использованы:

сухой экстракт соплодий хмеля обыкновенного (Humulus lupulus L.) (ЭСХО), полученный путем последовательной экстракции (70%, 50% и 40 % спирт этиловый и вода) и последующей вакуумной сушкой;

настойка цимицифуги даурской (Cimicifuga dahurica (Turcz.) Maxim.) (НЦД)*, полученной экстрагированием на 70% спирте этиловом;

полиэкстракт «Анксиофит» (условное название), полученный путем последовательной экстракции (70%, 50% и 40% спирт этиловый и вода) и последующей вакуумной сушкой из: соплодий хмеля обыкновенного (Humulus lupulus L.), травы пустырника сердечного (Leonurus cardiaca L.), корней и корневищ шлемника байкальского (Scutellaria baicalensis Georgi), травы мяты перечной (Mentha х piperita L.), цветков календулы лекарственной (Calendula officinalis L.), плодов шиповника (Rosa spp.), взятых в соотношении 6:3:3:3:2:3 массовых частей;

полиэкстракт «Ноофит» – условное название экстракта жидкого, полученного путем экстракции 40% спиртом этиловым из: корней и корневищ шлемника байкальского (Scutellaria baicalensis Georgi), левзеи сафроловидной (Rhaponticum carthamoides (Willd.) Iljin) и валерианы лекарственной (Valeriana officinalis L), травы мяты перечной (Mentha х piperita L.), горца птичьего (Polygonum aviculare L.) и тысячелистника обыкновенного (Achillea millefolium L.) и листьев крапивы двудомной (Urtica dioica L.), взятых в соотношении 5:2:3:2:3:2:3 массовых частей.

Перед экспериментами, с целью исключения влияния этанола, НЦД и экстракт «Ноофит» деалкоголизировали путем выпаривания на водяной бане до 1/10 от исходного объема. Полученный остаток доводили водой очищенной до заданного объема в соответствии с рекомендациями (Правила…,1992).

ЭСХО вводили животным внутрижелудочно через зонд один раз в сутки в дозах 100, 200 и 300 мг/кг; «Анксиофит» – в дозах 50, 100 и 300 мг/кг; НЦД

– в дозах 0,5 и 1,0 мл/кг; «Ноофит» – в дозах 2,0; 5,0 и 10,0 мл/кг. Конечный объем исследуемых средств, вводимый животным, составлял 10 мл/кг. ПроИсследования проведены совместно с м.н.с. Д.Э. Гармаевым должительность введения фитоэкстрактов, а также сроки исследования варьировали в зависимости от цели и продолжительности экспериментов. Животные контрольной и интактной групп получали воду очищенную в соответствующем объеме по аналогичной схеме введения растительного средства. В качестве препаратов сравнения использовали аптечный экстракт из валерианы (ЭВ) в изоэффективной дозе 120 мг/кг и пирацетам в дозе 200 мг/кг, которые вводили животным по аналогичной схеме введения исследуемого средства.

Анксиолитическое и седативное действие фитосредств изучали согласно Методическим указаниям по изучению транквилизирующего (анксиолитического) действия фармакологических веществ (Воронина Т.А., Середенин С.Б., 2005) в методиках: конфликтная ситуация по Vogel, приподнятый крестообразный лабиринт (ПКЛ), «светлая/темная камера», «открытое поле», пролонгирование наркотического сна (кетамин гидрохлорид, 2,0 мл/кг; гексенал, 60 мг/кг). Антидепрессивное действие оценивали в тесте «поведенческое отчаяние» по Порсолту, антиагрессивную активность – в тесте «немотивированная агрессия» (Воронина Т.А., Середенин С.Б., 2005). Ноотропное действие исследовали согласно Методическим рекомендациям по изучению ноотропного действия новых фармакологических веществ (Воронина Т.А., Островская Р.У., 2005) в методиках: условная реакция пассивного избегания (УРПИ), условная реакция активного избегания (УРАИ) и условный рефлекс с положительным подкреплением, который проводили в Т-образном лабиринте.

Об антистрессорной активности исследуемых фитосредств судили по выраженности триады Селье. Для оценки напряжения симпатоадреналовой и гипоталамо-гипофизно-адренокортикальной системы в плазме крови и гомогенате головного мозга методом иммуноферментного анализа определяли содержание катехоламинов (адреналина, норадреналина и дофамина) с использованием набора «IBL, RE 59395 TriCat ELISA» на анализаторе «Stat Fax 2100»; в плазме крови – уровень адренокортикотропного гормона (АКТГ) и кортизола с помощью набора «СтероидИФА-кортизол» на автоматическом анализаторе «ALISEI»; в гомогенате головного мозга (ГМ) – содержание метаболитов катехоламинов (метанефрина и норметанефрина) с помощью набора «MetCombiPlasma» на анализаторе «Multiskan Ascent». В сыворотке крови определяли содержание нейрон-специфической енолазы (NSE) с помощью набора «Can Ag NSЕ» на иммуноанализаторе «Multiskan Ascent».

Интенсивность процессов свободнорадикального окисления (СРО) биомакромолекул оценивали по накоплению малонового диальдегида (МДА) в сыворотке крови (Стальная И.Д., Гаришвили Т.Г., 1977) и гомогенате ГМ (Владимиров Ю.В., Арчаков А.И., 1972). О состоянии антиоксидантной системы (АОС) судили по активности каталазы в гомогенате ГМ и в сыворотке крови (Королюк М.А. и др., 1988), супероксиддисмутазы (СОД) – в эритроцитах (Чевари С. и др., 1985) и содержание восстановленного глутатиона (ВГ) – в крови (Anderson T., 1991).

Для оценки влияния исследуемых средств на энергетический потенциал нейронов определяли содержание АТФ, молочной и пировиноградной кислот в гомогенате ГМ (Методы…, 1982).

Антигипоксическое действие фитопрепаратов исследовали с использованием моделей: острая нормобарическая гипоксия с гиперкапнией (Лукьянова Л.Д., 1989); острая гемическая гипоксия (натрий нитрит, 200 мг/кг) (Костюченко Ю.Ф., Фаранщук Н.Ф., 1982); острая гистотоксическая гипоксия (натрий нитропруссид, 20 мг/кг) (Лукьянова Л.Д., 1989).

Противосудорожное действие исследуемых средств изучали на моделях стрихниновых (2 мг/кг), коразоловых (100 мг/кг) и камфорных (2 мл/кг) судорог (Руководство…, 2005).

Мембраностабилизирующую активность фитосредств оценивали in vitro по степени торможения перекисного и осмотического гемолиза эритроцитов донорской крови (Ковалев И.Е. и др., 1986).

Антирадикальную активность экстрактов и их компонентов оценивали с применением DPPH-метода (Seyoum А. et al., 2006). Влияние исследуемых средств на связывание супероксидных анион-радикалов (О2·-) определяли в неэнзиматической системе феназин метосульфат/НАДН (Chen A.-S. et al., 2003); Fe2+-хелатирующую активность – фенантролиновым методом (Оленников Д.Н., 2008); связывание молекул оксида азота (NO) – согласно R.

Govindarajan et al. (2003). Для оценки влияния экстрактов на процессы перекисного окисления липидов (ПОЛ) использовали также модельную систему, состоящую из суспензии желточных липопротеидов (Клебанов Г.И., 2003).

Влияние фитосредств на состояние ГАМК-ергической системы исследовали c помощью метода конфликтной ситуации по Vogel. С целью блокады ГАМКА-рецептора использовали бикукуллин (1,0 мг/кг), а для блокады хлорного канала – пикротоксин (1,0 мг/кг) (Воронина Т.А., Островская Р.У., 2005).

Для патоморфологических исследований ГМ животных фиксировали в 10% водном растворе нейтрального формалина и 960 спирте. Парафиновые срезы окрашивали гематоксилином и эозином, а также крезилвиолетом по Нисслю (Коржевский Д.Э., Гиляров А.В., 2010). Для определения степени повреждения структур ГМ проводили морфометрический анализ клеточного состава II-V слоев коры больших полушарий (КБП), мозжечка и гиппокампа.

Во II-V слоях КБП и подсчитывали количество разных по структуре нейронов: нормохромные, умеренно и резко гиперхромные, умеренно и резко гипохромные, «клетки-тени», в гиппокампе – количество (в %) темных и светлых нейронов по отношению к общей сумме клеток (Артюхина Н.И., Русинова Е.В., 2002). Для выявления сукцинатдегидрогеназы (СДГ) свежезамороженные срезы, приготовленные на криостате МК-25, окрашивали по Нахласу, для выявления липидов – суданом IV (Микроскопическая…, 1996).

Цифровые данные статистически обработаны общепринятыми методами для малой выборки с определением средней величины (М) и ошибки (m).

Степень значимости результатов исследований (Р) оценивали с помощью непараметрического критерия Манна-Уитни. Различия между данными контроля и опыта считали статистически значимыми при вероятности 95 % (Р 0,05) (Сергиенко В.И., Бондарева И.Б, 2006).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Характеристика морфофункциональных повреждений головного мозга при различных патологических состояниях Полученные в работе данные свидетельствуют о том, что морфофункциональные изменения в структурах ГМ на фоне патологических состояний различного генеза (АИ, стрессовые, нейродегенеративные и гипоксические состояния) сопровождаются комплексом поведенческих нарушений, характеризующихся повышением уровня тревожности и эмоциональности, изменением ориентировочно-исследовательского и целенаправленного поведения на хаотичные движения, ухудшением процессов обучения и памяти. Так, на фоне 45-дневной АИ у животных контрольной группы при тестировании в «открытом поле» наблюдалось увеличение горизонтальной активности, при этом ни одно животное не заходило в центральные квадраты установки, и у них отсутствовал норковый рефлекс. Хаотическое поведение крыс сопровождалось увеличением количества дефекаций и актов груминга. О превалировании у контрольных животных чувства страха и тревоги на фоне указанного патологического состояния свидетельствовало поведение их в ПКЛ: количество заходов и время, проведенное в открытых рукавах установки, были соответственно в 4,7 и 12,4 раза ниже указанных показателей животных интактной группы. На фоне ЭС у контрольных животных количество заходов и время пребывания в открытых рукавах ПКЛ были соответственно на 79% и 73 % ниже данных интактных животных; 72-часовая депривация сна (СЖ), оказывала более выраженное угнетающее действие на эмоциональное состояние животных: ни одно животное контрольной группы в данной серии экспериментов не посетило открытые рукава ПКЛ, а количество переходов между закрытыми рукавами было в 3,0 раза ниже данных в интактной группе.

При оценке когнитивных функций установлено, что гипоксия вызывает снижение процесса обучаемости и оказывает амнестический эффект в тесте УРПИ, что проявлялось в снижении латентного периода (ЛП) захода в темный отсек установки у контрольных животных через 1 час после выработки рефлекса в 1,9 раза, через 24 часа и 7 суток – в среднем в 2,7 раза по отношению к показателям интактных животных. Введение крысам этанола в течение 45 дней не оказывало влияние на выработку УРПИ у крыс контрольной и опытных групп, что согласуется с данными исследований других авторов (Буров Ю.

В., 1985; Воронина Т.А., 1989; Шабанов П.Д., 1998), показавших, что этанол влияет на выработку условного рефлекса только после 4 месяцев введения. Однако, даже однократное введение этанола, по мнению этих же авторов, приводит к нарушению процессов консолидации и воспроизведения памятного следа, что соответствует результатам наших исследований: ЛП у крыс контрольной группы через 24 часа и 7 суток был ниже аналогичного показателя животных интактной группы на 53% и 66% соответственно.

Нарушение когнитивных функций отмечалось и на фоне стрессовых ситуаций:

в контрольной группе после четырехкратной иммобилизации ни у одного животного УРПИ не сохранился, при 80% показателе в интактной группе; на фоне СЖ рефлекс воспроизводился у 30% животных, при этом ЛП был в 3,0 раза ниже показателя крыс интактной группы.

Достоверно известно, что когнитивные нарушения коррелируют со степенью органических изменений в ГМ. Многочисленными работами показано, что КБП и гиппокамп являются структурами ГМ, участвующими в реализации и организации когнитивных и эмоциональных процессов, таких как память, внимание, ориентация в пространстве, тревога и др. (Одинак М.М. и др., 2011) и являются основными мишенями при различных патологических состояниях (Сапфирова В.А. и др., 2005; Овчинников А.А. и др., 2006; Арушанян Э.Б. и др., 2007; Мухаметшина Э.И., 2008; Lamy V. et al., 2007). Прижизненные магнитно-резонансные, а также посмертные исследования ГМ показали, что деструктивные процессы, ведущие к БА, также развиваются преимущественно в структурах, участвующих в процессах обучения и памяти (Аршавский Ю.И., 2011). При микроскопическом исследовании ГМ животных, потреблявших в течение 45 дней этанол, обнаруживались значительные изменения в структуре нейронов КБП. При этом в III слое изменения были направлены в сторону увеличения гиперхромных, а в V слое – в сторону гипохромных нейронов. При количественном анализе нейронов указанных слоев КБП установлено, что у животных контрольной группы количество нормохромных клеток снижалось в среднем на 65%, умеренно гиперхромных клеток – на 28% и 38% по сравнению с таковыми у животных интактной группы (табл. 1). При этом в III слое увеличивалось количество резко гиперхромных нейронов и «клеток-теней» в 3,1 и 4,7 раза, в V слое резко гипохромных нейронов и «клеток-теней» – в 2,0 и 10,3 раза по сравнению с данными интактных животных.

–  –  –

Для нейронов V слоя КБП при АИ было характерно поражение, называемое «острое набухание» по Шпильмейру (Жаботинский Ю.М., 1965): увеличение размеров клеточного тела, набухание отростков, постепенное растворение тигроида при четкой структуре слегка увеличенного ядра; в ряде случаев набуханию подвергается верхушечный дендрит. Полученные морфологические данные согласуются с результатами других исследователей, показавших, что введение этанола вызывает в КБП изменения, направленные на увеличение сосудистых нарушений, атрофических процессов и острых дистрофических изменений нейронов (Попова Э.Н., 1984; 1995; 1997; Пермяков А.В., 1997; Актушина Г.А., 1998; Шпинькова В.Н., 2000; Guerri C., 1994; Kril J.J., 1999).

На фоне гипоксии у животных контрольной группы во II-V слоях КБП наблюдались нейроны с «тяжелой» степенью повреждения, которая характеризуется пикнозом нейронов (28%) и образованием «клеток-теней» (16%). В результате чего, общее количество регрессивных нейронов составляло 54% от общей популяции клеток, что в 2,8 раза превышало показатели интактных животных. На фоне образования многочисленных очагов клеточного опустошения отмечались явления нейронофагии и сателлитоза, нарушения цитоархитектоники.

По данным патоморфологических исследований на фоне стрессовых ситуаций (ЭС и СЖ) структурные изменения нейронов II - V слоев КБП характеризовались появлением значительного количества резко гиперхромных пикнотических нейронов, образующих скопления, и резко гипохромных клеток, находящихся в состоянии умеренного и тотального хроматолиза.

Наблюдали набухание и вакуолизацию цитоплазмы нейронов, увеличение количества «клеток-теней», явлений сателлитоза и нейронофагии. Результаты морфометрических исследований показали, что у животных на фоне стрессовых ситуаций количество нормохромных нейронов в КБП снижалось в среднем в 2,0 раза, резко гипохромных нейронов возрастало соответственно в 1,7 и 1,4 раза, резко гиперхромных – в 3,9 и 5,3 раза и количество «клетоктеней» – в 5,1 и 6,6 раза по сравнению с указанными показателями животных интактной группы (табл. 2).

–  –  –

В связи с тем, что на сегодняшний день наблюдается неуклонное старение населения, нейродегенеративные заболевания в структуре неврологической патологии занимают значительное место, являясь основной причиной деменции (Суслина З.А., 2008; Капай Н.А. и др., 2010; Carvalho A.L. et al., 2008; Jellinger K.A., 2008; Downey D., 2008). Наиболее известными представителями данного класса заболеваний являются болезни Альцгеймера и Паркинсона, для которых характерна медленно прогрессирующая гибель определенных групп нервных клеток и одновременно – постепенно нарастающая атрофия соответствующих отделов головного и/или спинного мозга (Рогачева Т.А., Краснослободцева Н.А., 2007; Birks J., 2006). По данным многочисленных исследований установлено, что при развитии БА происходит утрата холинергических нейронов, в первую очередь, в области базальных ганглиев, при этом степень нарушения функции холинергической системы коррелирует с тяжестью когнитивного дефицита (Боголепова А.Н., 2009; Francis Р.Т. et al., 1999). В связи с этим, для моделирования БА использовали хроническое введение блокатора мускариновых холинорецепторов – скополамина.

Полученные нами данные показали, что на фоне введения скополамина у животных наблюдается понижение мышечного тонуса, нарушение координации, увеличение уровня тревожности, а также снижение способности к обучению:

на 5 сутки в контрольной группе рефлекс выработался у 30 % животных, при 100 % показателе в интактной группе (рис. 1).

–  –  –

Патоморфологические исследования ГМ свидетельствуют, что на фоне экспериментальной БА в наружном зернистом слое КБП отмечалось выраженное увеличение количества пикнотических нейронов; в третьем слое по направлению с поверхности в глубину – снижение пикнотических и увеличение клеток в состоянии хроматолиза. Исчезновение тигроидного вещества сопровождалось развитием набухания различной степени. В V слое КБП на фоне повышения количества гипохромных нейронов и «клеток-теней» увеличивалось число пикнотических нейронов, образующих небольшие скопления, что создавало мозаичную картину с явлениями нейронофагии, сателлитоза и «выпадения» нейронов. В нейронах выявлялись отложения липофусцина. Данные морфометрических исследований показали (табл. 3), что у животных контрольной группы при моделировании БА число нормохромных клеток снижалось в 11,6 раза, умеренно гиперхромных нейронов – на 16%, количество резко гипохромных нейронов возрастало в 2,5 раза, резко гиперхромных и «клеток-теней» в среднем в 5,0 раз по сравнению с таковыми показателями животных интактной группы.

–  –  –

По данным литературы известно, что гиппокамп, как центральная структура лимбической системы, играет существенную роль в формировании физической и психической зависимости от психоактивных веществ (Савоненко А.В., 1997; De Bellis M.D. et.al, 2000), участвует в организации эмоционального поведения и реакции на стресс (Арушанян Э.Б. и др., 2007). Особенно велико значение гиппокампа в организации познавательных процессов. Так, с повреждающим воздействием на структуры гиппокампа связывают амнестический эффект алкоголя (Бородкина Л.Е. и др., 2002). Установлено, что патологические изменения при нейродегенеративных состояниях в ГМ начинаются непосредственно в медиальной височной области полушарий, включающий гиппокамп (Аршавский Ю.И., 2011).

Патоморфологические исследования показывают, что нервные клетки гиппокампа у интактных животных светлые и однородные по форме, содержат большое округлое ядро и узкий ободок цитоплазмы. На фоне доминирующего количества таких нейронов в гиппокампе интактных животных, локально отмечаются гиперхромные пикнотические нейроны, не образующие скопления. По результатам наших морфометрических исследований количество последних колеблется в пределах от 4,2% до 6,7%, что согласуется с данными других авторов (Артюхина Н.И., Русинова Е.В., 2002). На фоне АИ, ЭС, СЖ и гипоксии наблюдалось увеличение количества пикнотических нейронов в гиппокампе соответственно в 3,7; 3,9; 4,6 и 5,1 раза по сравнению с указанным показателем животных интактной группы (рис. 2). Длительная инъекция скополамина вызывала более выраженные структурные изменения в гиппокампе, характеризующиеся не только тотальным гиперхроматозом нейронов, но и их лизисом, в результате чего отмечались массивные очаги клеточного опустошения. Установлено, что количество регрессивных нейронов в гиппокампе животных на фоне инъекции скополамина увеличивалось в 5,9 раза по сравнению с интактом (рис. 2).

–  –  –

Как известно, кора мозжечка очень чувствительна к действию токсических веществ и гипоксическому воздействию (Сергиенко В.И., 1993; Baker K.G., 1999; Thomas J.D.,1998; Walker J.J.,1997). В наших исследованиях введение этанола и гипоксия вызывали токсикогипоксические изменения клеток Пуркинье, сходные с изменениями нейронов в КБП: увеличивалось количество пикнотических, «клеток-теней», резко гипохромных клеток с наличием в цитоплазме вакуолей, что согласуется с данными других авторов (Wenisch S., 1996; Walker J.J.,1997).

Таким образом, полученные данные свидетельствуют, что на фоне АИ, ЭС, СЖ, нейродегенеративных и гипоксических состояний отмечаются нарушения психоэмоционального статуса и когнитивных функций животных, коррелирующие с изменениями в структурах ГМ. Последние характеризуются снижением количества функционально активных нейронов и увеличением количества пикнотических нейронов, клеток с тотальным хроматолизом тигроидного вещества и дистрофическими изменениями в виде вакуолизации цитоплазмы, а также «клеток-теней», явлений сателлитоза и нейронофагии.

По мнению некоторых авторов (Боголепов Н.Н., 1979), вакуольная дистрофия нейронов отражает нарушение их липопротеинового каркаса, что свидетельствует о тяжелых необратимых изменениях. Гиперхроматоз является эквивалентом заторможенного состояния и характеризует гипоксическое повреждение ГМ (Гипоксия…, 2000; Орловская Д.Д., 1986). Так, в литературе имеются сведения (Гипоксия…, 2000; Матвеев В.Ф., 1976; Попова Э.Н., 1984), что ультрамикроскопическое строение гиперхромных нейронов, наблюдаемых при гипоксических повреждениях и при действии психотропных веществ, однотипно: в цитоплазме наблюдаются увеличение объема митохондрий, просветление их матрикса, деструкция крист, фрагментация и лизис эндоплазматической сети. Наличие большого количества измененных нейронов: пикнотических, «клеток-теней», а также явлений сателлитоза и нейронофагии, по мнению Н.Н. Боголепова и др. (1979, 2001), является одним из признаков выраженной гипоксии ГМ и указывает на истощение резервных возможностей нейронов. Степень гипоксических изменений ГМ и других органов определяется также по снижению активности митохондриальных ферментов и повышению активности лактатдегидрогеназы в них (Пермяков А.В., Витер В.И., 1997). Так, в наших исследованиях на фоне алкогольной интоксикации на микропрепаратах животных контрольной группы, окрашенных по Нахласу, было выявлено снижение активности СДГ во всех структурах ГМ. При всех указанных патологических состояниях отмечались гидропические изменения, характеризующиеся появлением перицеллюлярного и периваскулярного отеков и наличием дренажных форм олигодендроглиоцитов, что согласуется с результатами других авторов (Сергиенко В.И. и др., 1993) и, по мнению Э.Н. Поповой (1984), являются компенсаторно-приспособительной реакцией, направленной на поддержание функции нейронов.

По данным литературы (Завалишин И.А., Захарова М.Н., 1996; Шабанов П.Д., 2009; Александровский Ю.А., 2007), ключевым звеном в гибели нейронов является СРО биомакромолекул и снижение АОС организма. Результаты исследований показали, что на фоне всех исследуемых патологических состояний отмечались повышение содержания продукта ПОЛ – МДА в сыворотке крови и гомогенате ГМ, а также снижение ферментов АОС – каталазы в сыворотке крови и гомогенате ГМ и СОД в эритроцитах, а также содержания ВГ в крови. У животных контрольных групп содержание МДА в сыворотке крови повышалось в среднем в 3,5 раза, активность каталазы понижалась в 2,0 раза по сравнению с данными интактных крыс. Наибольшее повышение МДА (в 3,6 раза) и снижение активности каталазы (в 3,0 раза) в гомогенате ГМ по отношению к интакту наблюдалось при моделировании БА (табл. 4). Также при данном патологическом состоянии выявлялось выраженное снижение активности СОД в эритроцитах (на 75 %), тогда как при других патологических состояниях указный показатель уменьшался в среднем на 55% по сравнению с показателем интактных животных.

–  –  –

Исследование спектра нейропротективной активности и фармакотерапевтической эффективности растительных средств Широкое распространение психических и неврологических расстройств в ветеринарной и клинической практике делает актуальным поиск эффективных препаратов для их лечения. Известно, что в развитии данных расстройств участвуют нейрохимический и нейроэндокринный уровни: нейромедиаторные системы, а также гормоны или пептиды, антиоксидантная система, что объясняет столь широкий спектр фармакологических препаратов, использующихся для их купирования (Курпатов В.И., Осипова С.А., 2006).

Все это определяет значительный интерес к лекарственным средствам растительного происхождения, сочетающих в себе высокую эффективность, широкий спектр терапевтического действия, за счет реализации в одном растительном средстве всех основных направлений этиопатогенетической и симптоматической терапии на фоне достаточно низкой токсичности (Вознесенская Т.Г., 2008; Николаев С.М., 2008, 2012; Турищев С.Н., 2009; Дробижев М.Ю., Овчинников А.А., 2010).

Исследование спектра нейропротективной активности фитосредств включало изучение ноотропного, анксиолитического, антидепрессивного антиагрессивного и седативного действия. «Открытое поле» – классическая модель, основанная на конфликте двух мотиваций: инстинктивной тенденции к исследованию нового окружения и тенденций минимизировать возможную опасность со стороны, и характеризует сразу два показателя лекарственного средства – исследовательскую активность и седативное действие (Voronina T.A., 2006).

В предварительной серии экспериментов по данной методике было исследовано 10 лекарственных средств: экстракт соплодий хмеля обыкновенного (ЭСХО), экстракт сабельника болотного, настойка цимицифуги даурской (НЦД), а также ряд комплексных фитопрепаратов:

«Анксиофит», «Ноофит», «Нейрофит», «Полиноофит», «Гепатон», «Вентрофит» и «Фитотон». Результаты тестирования показали, что наиболее выраженное влияние на ориентировочно-исследовательскую активность проявляет комплексное средство «Ноофит». «Анксиофит» оказывает более выраженное противотревожное действие по отношению к моноэкстракту из соплодий хмеля обыкновенного, являющегося составным компонентом первого. При этом в данном тесте на фоне введения «Анксиофита» отмечалось, что с увеличением дозы снижается анксиолитическая активность и повышается седативный эффект.

Анксиолитические свойства фитопрепаратов изучали в тестах ПКЛ, «светлая/темная камера» и конфликтная ситуация по Vogel. Установлено, что ЭСХО в дозах 200 и 300 мг/кг, «Анксиофит» в дозах 50, 100 и 300 мг/кг и «Ноофит» в дозах 5,0 и 10,0 мл/кг проявляют выраженное анксиолитическое действие в условиях ненаказуемого поведения, увеличивая количество переходов и время пребывания в светлом отсеке «светлой/темной камеры» и количество заходов и время пребывания в открытых рукавах ПКЛ; в условиях наказуемого поведения, достоверно повышая количество наказуемых взятий воды в методике по Vogel по отношению к показателям интактного контроля.

Наиболее выраженное анксиолитическое действие проявляет «Анксиофит» в дозах 100 и 300 мг/кг, увеличивая количество заходов в открытые рукава ПКЛ в 3,0 и 2,8 раза, время пребывания в них – в 7,1 и 4,7 раза, а также число наказуемых взятий воды – в 5,3 и 6,4 раза соответственно по сравнению с данными контрольных животных. Выраженное анксиолитическое действие «Анксиофита», вероятно, обусловлено -кислотами и эфирным маслом H. lupulus (Hansel R. et al., 1980; Schiller H. et al., 2006), эфирами изовалериановой кислоты M. piperita (Павлов М., 1998), кислотами, вогонином S. baicalensis (Hui К.М. et al., 2002; Jeong J.O. et аl., 2004), проявляющие анксиолитические свойства в эксперименте.

Одними из основных терапевтических свойств хмеля являются его седативное и снотворное действия. По данным литературы (Schiller Н. et al.,



Pages:   || 2 | 3 |

Похожие работы:

«Бадтиев Юрий Саламович МЕТОДОЛОГИЯ БИОДИАГНОСТИКИ КАЧЕСТВА ОКРУЖАЮЩЕЙ СРЕДЫ ВОЕННЫХ ОБЪЕКТОВ 03.00.16 – Экология, 05.26.02 Безопасность в чрезвычайных ситуациях АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук Москва 2006 Работа выполнялась в период с 1986 по 2006 г.г. в НИИ «Медстатистика», НИЦ информационных технологий экстремальных проблем, Экологическом центре...»

«ГРИГОРЬКИНА ЕВГЕНИЯ СЕРГЕЕВНА УЧЕТ ВОЗРАСТНЫХ ОСОБЕННОСТЕЙ ВЕРХНЕЧЕЛЮСТНОЙ ПАЗУХИ В ДИАГНОСТИКЕ И ЛЕЧЕНИИ СИНУСИТА Специальность 14.01.03 – болезни уха, горла и носа АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Пенза 2016 Работа выполнена на кафедре стоматологии Федерального государственного бюджетного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Пензенский государственный университет» Министерства Образования и науки...»

«САГИТОВА МИНЗИЛЯ ГАБДУЛХАЕВНА ГИГИЕНИЧЕСКОЕ ОБОСНОВАНИЕ ПРИМЕНЕНИЯ ПОЛИСАХАРИДА «ГРАМО» В ПТИЦЕВОДСТВЕ 06.02.05 ветеринарная санитария, экология, зоогигиена и ветеринарно-санитарная экспертиза АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Казань – 2015 Работа выполнена в условиях кафедры зоогигиены федерального государственного бюджетного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Казанская государственная академия...»

«Миронов Андрей Викторович КОРРЕКЦИЯ АККОМОДАЦИОННЫХ НАРУШЕНИЙ У ПАЦИЕНТОВ ЗРИТЕЛЬНО-НАПРЯЖЕННОГО ТРУДА МЕТОДАМИ ФИЗИЧЕСКОГО ВОЗДЕЙСТВИЯ 14.01.07 – глазные болезни 14.03.11 восстановительная медицина, спортивная медицина, лечебная физкультура, курортология и физиотерапия Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Москва 2015 Работа выполнена на кафедре офтальмологии Федерального государственного бюджетного образовательного учреждения...»

«Жакова Светлана Николаевна РЕПРОДУКТИВНАЯ БИОЛОГИЯ НЕКОТОРЫХ ВИДОВ И КУЛЬТИВАРОВ РОДА СИРЕНЬ (SYRINGA L.) 03.02.01 – ботаника Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Пермь – 2015 Работа выполнена на кафедре ботаники и генетики растений Федерального государственного бюджетного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Пермский государственный национальный исследовательский университет» Научный руководитель:...»

«ДОБРЕНЬКОВ ДМИТРИЙ СЕРГЕЕВИЧ ХАРАКТЕРИСТИКА БИОЦЕНОТИЧЕСКИХ ОТНОШЕНИЙ БАКТЕРИАЛЬНЫХ СООБЩЕСТВ ПОЛОСТИ РТА И МИКРОЭКОЛОГИЧЕСКОЕ ОБОСНОВАНИЕ ПРИНЦИПОВ БИОКОРРЕКЦИИ 03.02.03 – Микробиология Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Волгоград Работа выполнена в Государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Волгоградский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения...»

«ДЕМИДОВА Ирина Михайловна ПОВЫШЕНИЕ ЭФФЕКТИВНОСТИ ПРОИЗВОДСТВА МОЛОКА С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ СИЛОСА, ЗАГОТОВЛЕННОГО С НОВЫМ КОНСЕРВАНТОМ 06.02.10 – частная зоотехния, технология производства продуктов животноводства; 06.02.08 – кормопроизводство, кормление сельскохозяйственных животных и технология кормов АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата сельскохозяйственных наук Волгоград – 2015 Работа выполнена в ФГБНУ «Поволжский научно-исследовательский институт...»

«Моисеева Елена Владимировна БИОЛОГИЧЕСКИЕ ОСНОВЫ ПОВЫШЕНИЯ ЭФФЕКТИВНОСТИ РАЗВЕДЕНИЯ РАДУЖНОЙ ФОРЕЛИ PARASALMO (= ONCORHYNCHUS) MYKISS В УСЛОВИЯХ ПЛЕМЕННЫХ ЗАВОДОВ 03.02.06 – Ихтиология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание учёной степени кандидата биологических наук Москва 2015 Работа выполнена на кафедре водных биоресурсов и аквакультуры Федерального государственного бюджетного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Кубанский государственный...»

«РАГИМОВ АЛЕКСАНДР ОЛЕГОВИЧ ЭКОЛОГО-ФУНКЦИОНАЛЬНАЯ РОЛЬ ПОЧВ В ФОРМИРОВАНИИ УРОВНЯ БЛАГОПОЛУЧИЯ НАСЕЛЕНИЯ ВЛАДИМИРСКОЙ ОБЛАСТИ Специальность – 03.02.08 – экология (биология) АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Москва – 2015 Работа выполнена на кафедре почвоведения Федерального государственного бюджетного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Владимирский государственный университет имени Александра...»

«КУРАНОВА Мирья Леонидовна КЛЕТОЧНЫЕ И МОЛЕКУЛЯРНЫЕ ОСОБЕННОСТИ ПРОЯВЛЕНИЯ АТАКСИИ-ТЕЛЕАНГИЭКТАЗИИ 03.03.04 – Клеточная биология, цитология, гистология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание учёной степени кандидата биологических наук Санкт-Петербург Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном учреждении науки Институт цитологии Российской академии наук Научные руководители: кандидат биологических наук, доцент Спивак Ирина Михайловна Институт цитологии РАН...»

«АСКАРОВ АЙБУЛАТ ДАМИРОВИЧ ОЦЕНКА СОСТОЯНИЯ И ЗАЩИТНЫХ ХАРАКТЕРИСТИК ДРЕВЕСНО-КУСТАРНИКОВЫХ НАСАЖДЕНИЙ В УСЛОВИЯХ Г. УФЫ ПРИ ДЕЙСТВИИ ИОНИЗИРУЮЩЕГО ИЗЛУЧЕНИЯ Специальности: 03.02.01. – Ботаника (биология), 03.02.08 – Экология (биология) Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Оренбург – 2015 Диссертационная работа выполнена на кафедре экологии и природопользования ФГБОУ ВПО «Башкирский государственный педагогический университет...»

«Каганович Евгения Николаевна ИССЛЕДОВАНИЕ РОЛИ ГЕНЕТИЧЕСКИХ ПОЛИМОРФИЗМОВ ЦИТОКИНОВ В РАЗВИТИИ ПРЕЭКЛАМПСИИ 03.02.07 – генетика АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Белгород – 2014 Работа выполнена в Федеральном государственном автономном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Белгородский государственный национальный исследовательский университет» Министерства образования и науки Российской Федерации...»

«Хоцкин Никита Валерьевич Пространственная память и обучение у мышей, различающихся по предрасположенности к наследственной каталепсии: влияние нейротрофического фактора мозга BDNF Физиология – 03.03.01 АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: д.б.н., г.н.с. Куликов А.В. Новосибирск, 2015 Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном научном учреждении Федеральный исследовательский центр Институт...»

«Матвиенко Евгений Владимирович БОЛЕЗНИ СОРГО В ЛЕСОСТЕПИ СРЕДНЕГО ПОВОЛЖЬЯ И МЕРОПРИЯТИЯ, ОГРАНИЧИВАЮЩИЕ ИХ РАЗВИТИЕ Шифр и наименование специальности: 06.01.07 – защита растений Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Санкт-Петербург Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Самарская государственная сельскохозяйственная академия» Научный руководитель:...»

«КРАВЕЦ Виктор Сергеевич ЦИТОГЕНЕТИЧЕСКИЕ И МОЛЕКУЛЯРНО-ЦИТОГЕНЕТИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ ДЕТЕЙ С АУТИЗМОМ И ИХ МАТЕРЕЙ 03.02.07 – генетика АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание учёной степени кандидата биологических наук Белгород 2015 Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном учреждении «Научный центр психического здоровья» Российской академии медицинских наук. Научный руководитель: Юров Иван Юрьевич, доктор биологических наук Официальные оппоненты: Курило Любовь...»

«ДУБОВСКИЙ ИВАН МИХАЙЛОВИЧ Эволюция резистентности вощинной огневки Galleria mellonella (L.) к энтомопатогенным бактериям и грибам 03.02.05 – энтомология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук Новосибирск – 2015 Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном учреждении науки Институте систематики и экологии животных Сибирского отделения Российской академии наук в лаборатории патологии насекомых. доктор биологических наук,...»

«РАДУГИНА Елена Александровна РЕГУЛЯЦИЯ МОРФОГЕНЕЗА РЕГЕНЕРИРУЮЩЕГО ХВОСТА ТРИТОНА В НОРМЕ И В УСЛОВИЯХ ИЗМЕНЕННОЙ ГРАВИТАЦИОННОЙ НАГРУЗКИ 03.03.05 – Биология развития, эмбриология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Москва 2015 ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность темы исследования. Исследования в области регенерации, начавшиеся еще в XVIII веке, вновь приобрели актуальность с появлением современных методов исследования....»

«ЖИРКОВ АЛЕКСЕЙ ДМИТРИЕВИЧ ПРОФИЛАКТИКА МИКОТОКСИКОЗОВ ЛОШАДЕЙ ТАБУННОГО СОДЕРЖАНИЯ С ПРИМЕНЕНИЕМ ПРОБИОТИКА САХАБАКТИСУБТИЛ В УСЛОВИЯХ ЯКУТИИ 06.02.02 – ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук Новосибирск 2015 Работа выполнена в Государственном научном учреждении «Якутский научно-исследовательский институт сельского хозяйства»...»

«Мамай Анастасия Витальевна МИКРОБНАЯ ТРАНСФОРМАЦИЯ СОЕДИНЕНИЙ АЗОТА И УГЛЕРОДА В ЛЕСНЫХ ПОЧВАХ СРЕДНЕЙ ТАЙГИ (НА ПРИМЕРЕ КАРЕЛИИ) Специальность 03.02.03 микробиология Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Москва 2014 Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном учреждении науки Институте леса Карельского научного центра РАН и на кафедре биологии почв факультета почвоведения Московского государственного университета имени...»

«ОВСЯННИКОВ Алексей Юрьевич СЕЗОННАЯ СТРУКТУРНО-ФУНКЦИОНАЛЬНАЯ ТРАНСФОРМАЦИЯ ФОТОСИНТЕТИЧЕСКОГО АППАРАТА ХВОИ PICEA PUNGENS ENGL. И P. OBOVATA LEDEB. НА ТЕРРИТОРИИ БОТАНИЧЕСКОГО САДА УРО РАН (Г. ЕКАТЕРИНБУРГ) 03.02.08 — «Экология (в биологии)» Автореферат диссертации на соискание учёной степени кандидата биологических наук Санкт-Петербург Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном учреждении науки Ботанический сад Уральского отделения Российской академии наук...»







 
2016 www.konf.x-pdf.ru - «Бесплатная электронная библиотека - Авторефераты, диссертации, конференции»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.