WWW.KONF.X-PDF.RU
БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА - Авторефераты, диссертации, конференции
 


Pages:     | 1 | 2 || 4 | 5 |   ...   | 10 |

«НАУЧНОЕ И ПРАКТИЧЕСКОЕ ОБОСНОВАНИЕ СРЕДСТВ И СПОСОБОВ ИММУНОМЕТАБОЛИЧЕСКОЙ КОРРЕКЦИИ У СВИНЕЙ ...»

-- [ Страница 3 ] --

Деринат-натрия дезоксирибонуклеат. Биологически активное вещество, представляющее собой вытяжку из молок осетровых рыб. Препарат оказывает иммуномодулирующее действие на клеточном и гуморальном уровнях, активизирует антиинфекционный иммунитет, регулирует гемопоэз, стимулирует репаративные и регенераторные процессы. Применяется как в моно-, так и комплексной терапии при различных патофизиологических состояниях, протекающих на фоне нарушений функционирования иммунной системы. Хорошо совместим с другими лекарственными средствами, что находит применение при разработке комплексных препаратов, в частности, ферровирадеринат в комплексе с поливалентным железом.

Для внутримышечного применения используют 1,5% раствор дерината. Для снятия болезненной реакции при инъекциях препарата в его состав включен водный раствор новокаина в 0,25% концентрации. Кроме того, известно, что препараты на растворе новокаина оказывают более быстрое действие, чем на физиологическом растворе. Предлагаемое лекарственное средство позволяет получить новое технологическое решение, за счет включения в его состав доступного стандартного сырья.

Левамизол. Кристаллическое вещество, левовращающий изомер тетрамизола, не оказывающий прямого влияния на бактерии, вирусы, грибы, но обеспечивающий устойчивость организма к бактериальной и вирусной инфекции, особенно при состоянии иммунной депрессии. Он оказывает положительное влияние лишь на больных со средневыраженной степенью иммунологической недостаточности. Под влиянием левамизола происходит более раннее переключение синтеза IgM на IgG с нарастанием концентрации всех основных классов иммуноглобулинов, а также С-компонентов комплемента.

Иммуностимулирующее действие левамизола проявляется в полной мере лишь при определенных оптимальных концентрациях препарата. Обладает также свойствами иммуномодулятора - при некоторых сравнительно умеренных иммунодефицитных состояниях, проявляет иммуностимулирующие свойства, при некоторых аутоиммунных заболеваниях – умеренные иммуносупрессивные свойства. В качестве иммуномодулирующего средства: инфекционные заболевания (в том числе рецидивирующая инфекция, вызванная вирусами Herpes simplex типа 1 и 2, Varicella zoster, хронический активный гепатит B, персистирующий вирусный гепатит); ревматоидный артрит, болезнь Крона, болезнь Рейтера, афтозный стоматит, СКВ (для поддержания ремиссии); злокачественные новообразования (после хирургического, лучевого или химиотерапевтического лечения) бронхов, толстой кишки, молочных желез, в состоянии ремиссии при болезни Ходжкина, в интервалах цитостатического лечения лейкемии.

Таким образом, использование достаточно известных и относительно доступных компонентов, их различных сочетаний при оптимальном соотношении, позволяет создать оригинальную серию препаратов для иммуномодулирующей терапии и коррекции у животных метаболических процессов.

Токсические свойства препаратов оценивали путем определения острой, субхронической и хронической токсичности, местно-раздражающего и аллергенного действия. Определение острой токсичности проводили на мышах, белых крысах при трех способах введения по методу Г. Кербера (1931).

Препарат готовили ex tempora на физиологическом растворе и вводили в дозах 3100, 2800, 2500, 2200, 1900, 1600, 1300, 1000, 700 и 400 мг/кг. Каждую дозу испытывали на 3 особях при разных способах введения. Для контрольных животных использовали физиологический раствор в тех же объёмах.

Среднюю смертельную дозу (LD50) определяли по Керберу (М.Л. Беленький, 1963).

О токсичности препарата судили по клинической картине, количеству погибших животных и по результатам патологоанатомического вскрытия.

Переносимость препаратов изучали на поросятах, телятах. Испытуемый препарат применяли внутримышечно ежедневно в течение 20 суток в условно-терапевтической дозе и в дозах, в 3 и 5 раз превышающих условнотерапевтическую.

По окончании эксперимента проводили биохимические исследования сыворотки крови. В период проведения экспериментов у животных определяли лейкограмму, морфологический и биохимический состав крови. Фармакодинамику препаратов оценивали по клиническим показателям, направленности белкового, углеводного, минерального и витаминного обменов, общей неспецифической резистентности организма, интенсивности роста и продуктивности животных. При этом оценивали общее состояние животных, у молодняка определяли среднесуточные приросты и сохранность.

С целью удобства восприятия полученных результатов отдельные материалы и методы исследований изложены в соответствующих разделах результатов собственных исследований.

–  –  –

ЯБ+ МС+

ЯБ ФЯБ ЛФЯ

МС

–  –  –

Материал исследований Научно-производственные опыты проведены на свинокомплексе ЗАО»

Троицкий» Белгородской области; в хозяйствах Курской области; ООО «Племенное» Воловского района Липецкой области.

В качестве иммуномодулирующего средства использован комплексный иммунометаболический препарат Металлосукцинат, содержащий водорастворимые сернокислые соли железа, меди, кобальта и цинка, в количестве 0, 25 мг/мл – 0,4 мг/мл, янтарную кислоту в количестве 10,0 мг /мл и АСД Ф-№ 2, в количестве 40,0 мг/мл, стерильного раствора для инъекций во флаконах. По результатам клинических исследований была установлена оптимальная терапевтическая доза препарата МС равная 0,1 мл/кг массы тела, однократно, внутримышечно.

Влияние металлосукцината на неспецифическую резистентность и иммунологическую реактивность супоросных, подсосных свиноматок и поросятсосунов было изучено в 2-х сериях опытов.

В первой серии опытов изучалось корригирующее влияние металлосукцината на иммунометаболический статус и факторы неспецифической резистентности супоросных и подсосных свиноматок, поросят-сосунов.

Во второй серии опытов проведены исследования по специфической профилактике сальмонеллеза, пастереллеза и стрептококкоза с использованием вакцины (ППС) в сочетании с металлосукцинатом, на фоне применяемой в хозяйстве вакцины ОКЗ – против колибактериоза, сальмонеллеза, клебиселлеза и протейной инфекции для сельскохозяйственных животных.

Объектом клинических исследований являлись глубокосупоросные и лактирующие свиноматки, поросята-сосуны. Производственные испытания иммунокорректорной активности и метаболического статуса металлосукцината проведены на различных технологических группах животных свиноводческого хозяйства ООО «Племенное» рассчитанный на получение и выращивание 24000 тыс. поросят в год. Глубокосупоросные свиноматки — второй половины супоросности, со сроком супоросности: 70-80 и 100 сут.; лактирующие свиноматки и поросята-сосуны до 30-сут. возраста.

Сравнительную оценку эффективности действия «металлосукцината»

проводили на фоне принятой технологии и лечебно-профилактических мероприятий проводимых в хозяйстве. При проведении всех производственных опытов соблюдали принцип подбора опытных и контрольных групп животных, равнозначных по условиям содержания, кормления, половых и возрастных параметров.

Схема 2

–  –  –

Для проведения первой серии опытов (схема -2) было сформировано 150 гол. свиноматок, живой массой 180-200 кг, с 2х- 3х - дневной разницей в дате осеменения, которых разделили на две группы, из которых были выбраны по 10 гол. аналогов для проведения биохимического контроля крови и последующим клиническим наблюдением за поросятами-сосунами.

Поросятам контрольной группы-1 препараты не вводили, животным второй опытной группы применяли металлосукцинат (МС) - на 2й, - 12й и й дни после рождения в дозах 1,5 мл, 2,0 мл и 3,0 мл соответственно. Поросятам 3й опытной группы вводили суифферовит, согласно наставлению по применению.

В более ранних исследованиях проведена серия опытов по изучениюнеспецифической коррекции иммунобиохимического гомеостаза, за счет кормовых средств, на четырех группах свиноматок, по 12 гол в каждой Кр.бел. породы отобранних по принципу аналогов в 32 сут. периодом супоросности с последующим наблюдением до 100 сут. срока супоросности и последующего опороса с контролем физиологических и биохимических и зоотехнических показателей и на четырех группах поросят-отъемышей (Кр. бел.

х Ландрас) по 25 гол. в каждой, отобранных по принципу аналогов (12 свинок и 13 боровков) в период 32-112 сут.

Во второй серии опытов, исследования по специфической профилактике сальмонеллеза, пастереллеза и стрептококкоза в сочетании с металлосукцинатом и определению иммунологической активности препарата проводили на поросятах-сосунах в возрасте 1-30 сут.

, на фоне принятых в хозяйстве технологических обработок. Для этого по принципу аналогов было сформировано 4 группы cвиноматок (n=15). Свиноматкам первой группы вводили металлосукцинат. Во второй группе свиноматок использовали вакцину ОКЗ, применяемую в хозяйстве, третьей вакцину ППС + МС, четвертая группа служила контролем. Полученных поросят разделили на четыре группы, согласно схемы вакцинации (n=160), с последующим, клинико-иммунологическим наблюдением до 60 суточного возраста.

Методы исследований Исследования крови у супоросных свиноматок, при изучении неспецифической коррекции иммунобиохимического гомеостаза, проводили через 10 сут. после введения препаратов на 70е и 80е сут. и за 14 сут. до опороса в сут. период супоросности, у поросят-сосунов в 15 сут. и 30 сут. возрасте.

Контроль за состоянием иммунологической реактивности при специфической иммунокоррекции свиноматок, проводили по уровню в сыворотке крови специфических агглютининов. Исследования провели до введения биопрепаратов, в день их повторного введения (10 сутки) и через 10 дней после повторного введения. У поросят в 30 сут. и 60 сут. возрасте.

Уровень метаболитов белкового, углеводно-жирового обмена веществ с использованием биохимического анализатора «Виталаб Флексор-Е» и биохимического «БТС-330».

Бактерицидную активность определяли по О.В. Смирновой и Т.А. Кузьминой (1966). Принцип метода основан на свойстве сыворотки крови оказывать бактерицидное и бактериостатическое действие на микроорганизм. Уровень бактерицидной активности определяли по степени задержки роста суточной культуры эшерихии в жидкой питательной среде под влиянием исследуемой сыворотки крови.

Лизоцимную активность определяли по К.А. Каграмановой и З.В. Ермольевой (1966). Метод основан на способности лизоцима сыворотки крови вызывать лизис бактерий Micrococcus lisodeicticus.

Фагоцитарную активность крови определяли по B.C. Гостеву (С.И. Плященко, В.Т. Сидоров, 1979). Принцип метода основан на способности лейкоцитов захватывать и разрушать микробные клетки. Фагоцитарную активность выражали процентным отношением активных, участвовавших в фагоцитозе, лейкоцитов к общему числу подсчитанных нейтрофильных лейкоцитов.

Фагоцитарное число вычисляли путем деления числа фагоцитированных бактерий на общее количество подсчитанных лейкоцитов. Для выделения лимфоцитов из крови применяли метод, основанный на принципе различной скорости седиментации их в градиенте плотности.

Т-лимфоциты идентифицировали методом спонтанного розеткообразования с эритроцитами барана (Е-РОК). Принцип метода основан на том, что Тлимфоциты имеют рецепторы на поверхности мембраны, способные образовывать иммунную связь с поверхностными антигенами гетерологичных эритроцитов. При этом эритроциты располагаются по окружности лимфоцита и образуют розетку. Абсолютное количество Т-лимфоцитов рассчитывали по формуле: Т-лимфоциты = (абв) : 10000, где а - количество лейкоцитов в 1л крови, б - процент лимфоцитов в крови, в - процент розеткообразующих Тлимфоцитов. В-лимфоциты идентифицировали по выявлению рецепторов к третьему компоненту комплемента (ЕАС-РОК). Определение комплементрецептора является одним из тестов при идентификации В-лимфоцитов, для чего соединяют лимфоциты с эритроцитами барана, нагруженными комплексом антитело+комплемент.

Содержание иммуноглобулинов G, М- классов в сыворотке крови устанавливали методом простой радиальной иммунодиффузии с использованием моноспецифических антисывороток по G. Manchini (1965). В Росссии методы получения моноспецифических антисывороток для определения иммуноглобулинов M и G разработаны в лаборатории иммунологии и биотехнологии ВИЭВ проф. Ю.Н. Федорова. Принцип метода-основан, на измерении диаметра кольца преципитации, образующегося при внесении исследуемой сыворотки в лунки, вырезанные в слое агара, в котором предварительно диспергирована моноспецифическая антисыворотка.

В крови определяли число эритроцитов и лейкоцитов на счетчике (Культер-Каунтер), гемоглобин - гемоглобинцианидным методом В.Г. Предтеченский В.Г. (1964), глюкозу ортотолуидиновым методом Гультмана в модификации Хиваринена - Никкила. В сыворотке крови определяли содержание общего белка рефрактометрическим методом, белковые фракции - электрофорезом в агаровом геле, содержание общих липидов по цветной реакции с сульфофосфованилиновым реактивом, макро- и микроэлементный состав крови на атомно-абсорбционном спектроскопе. Активность аспартат- и аланинаминотрасферазы в сыворотке крови определяли с использованием наборов реактивов фирмы "Vital Diagnostics" (Россия).

Статистическую обработку полученных данных проводили с использованием персонального компьютера IBM (программа «Microsoft Excel 2000»), с вычислением средних арифметических (М), их среднестатистических ошибок (m) и критерия достоверности (P); цифровые данные оценивали с применением критерия Фишера-Стьюдента. С целью удобства восприятия полученных результатов отдельные материалы и методы исследований изложены в соответствующих разделах результатов собственных исследований.

3.0. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1. Теоретическое и экспериментальное обоснование способов получения препаратов 3.1.1. Лабораторные исследования экспериментальных составов Бактерицидные свойства водных растворов АСД Ф-2. Руководствуясь наставлением по применению препарата АСД Ф-2, были изготовлены исходные растворы 4% и 8% концентрации. При контрольном измерении рН установлено, что препарат АСД даже в 4% концентрации обладает высокой (рН 10) щелочной реакцией. Безусловно, столь высокий щелочной показатель препарата не мог не обеспечивать угнетение процесса размножения любых микроорганизмов. По всей видимости, именно это и обеспечивало его высокую локальную антисептическую активность при раневых инфекциях.

Чтобы убедиться в высказанном предположении параллельно были изготовлены растворы АСД 4% и 8% концентрации, в которых повышенную щелочность нейтрализовали янтарной кислотой. При этом было установлено, что на каждые 4% АСД требовалось 1% концентрация янтарной кислоты. К примеру, 40 мл АСД, растворенный в 960 мл дистиллированной воды, для доведения рН до нейтральной требовалось добавить 10 г янтарной кислоты.

Далее, используя тест определения чувствительности микроорганизмов к антибактериальным препаратам, пропитали бумажные диски диаметром 0,5 см водными и нейтральными растворами АСД 4% и 8% концентрации. После 5 минутного подсушивания, пропитанные бумажные диски разложили на засеяный культурой S.aureus агар. После 15 часовой выдержки чашек Петри в термостате при 37°С провели учет результатов зон задержки и угнетения роста микробов вокруг бумажных дисков, которые представлены в таблице 1.

Полученные данные свидетельствовали о том, что антимикробный эффект препарата АСД Ф-2 обусловлен высоким содержанием аммиака.

–  –  –

Это подтвердило наше предположение о том, что прямая антисептическая активность препарата АСД Ф-2 при раневых гнойно-септических процессах проявляется за счет приведения рН патологического очага в щелочную сторону, ингибируя размножение микроорганизмов. Нейтрализация щелочной реакции АСД Ф-2 привела к утрате бактерицидной активности препарата.

Раздражающее действие водных растворов АСД Ф-2 и янтарной кислоты. Раздражающее действие на ткани вышеуказанных растворов провели на морских свинках. Путем выщипывания волосяного покрова у морских свинок было получено легкое поверхностное повреждение кожи. На свежедепилированные участки тела с одной стороны сделали аппликации водных растворов АСД Ф-2, а с другой – нейтральный. Параллельно был поставлен опыт на морских свинках, на которых изучалось раздражающее действие 1% раствора янтарной кислоты (рН=4,0) и нейтрального раствора янтарной кислоты (рН=7,0) (сукцинат натрия).

Спустя 12 и 24 часа провели оценку степени раздражающего действия испытуемых растворов. При этом было установлено, что на участках тела, на которые были сделаны аппликации 8% водного раствора АСД, имели хорошо выраженную гиперемию кожи с начинающими признаками воспаления в виде набухания эпидермиса. Значительно слабее было раздражающее действие водных растворов 4% АСД. На этих участках тела была обозначена лишь гиперемия кожи. Отсутствие гиперемии кожи было на участках тела, на которые были сделаны аппликации нейтральных растворов АСД как 8%, так и 4% концентрации. Не отмечено гиперемии кожи и на участках тела, на которые были сделаны аппликации сукцината натрия. В слабой, практически незаметной степени гиперемии была на участке тела, на которые наносился 1% раствор янтарной кислоты.

Таким образом, нейтрализация щелочной реакции АСД янтарной кислотой, привела к утрате раздражающего действия данного препарата на ткани. Отсутствие гиперемии на аппликации сукцината натрия нами было расценено весьма позитивно, так как это позволяло надеяться на создание инъекционной формы комплексного препарата, который мог сочетать в себе положительные качества АСД и янтарной кислоты.

Токсические свойства водных растворов АСД Ф-2, янтарной кислоты и формалина. Полученные в экспериментальном опыте данные, подтвердили наше предположение о том, что нейтрализация щелочной реакции АСД янтарной кислотой приведет к утрате антисептической активности. Поэтому стояла задача включить в состав разрабатываемого комплексного препарата компонент, обладающий антибактериальной активностью. В качестве такого компонента нами был выбран формалин. При изготовлении экспериментального варианта комплексного антисептического иммунотропного препарата установили, что добавление формалина 0,5%-1% концентрации к нейтральному раствору АСД не приводило к выпадению осадка. Не выпадал осадок и после 30 минутного автоклавирования в режиме 1,2-1,3 атм. Все это свидетельствовало о том, что АСД, янтарная кислота и формалин являются совместимыми компонентами комплексного препарата. Разрабатываемый комплексный препарат, вполне мог обладать теми свойствами, которые мы планировали получить, а именно, обеспечить нормализацию обменных процессов в возбужденных тканях, обезвреживание микроорганизмов и нейтрализацию их токсичных продуктов жизнедеятельности.

Бактерицидную активность определили в опыте in vitro, стандартным методом, по тесту задержки роста микроорганизмов вокруг бумажных дисков, пропитанных выше указанными растворами комплексного препарата. В качестве тест объекта использовали культуру золотистого стафилококка засеянного в бактериологические чашки на мясопептонный агар. После 24часовой выдержки в термостате при 37оС диаметр зон задержки роста микроорганизмов составили: вокруг дисков, пропитанных комплексным препаратом, содержащим формалина 0,2% – 5-7 мм; 0,3% – 10-12 мм; 0,4% – 15-17 мм; 0,5% – 20-22 мм. Диаметр зон задержки 15 мм и более свидетельствовал о высокой бактерицидной активности.

Испытание безвредности провели на белых мышах. Ежедневное, на протяжении 5 дней, внутрибрюшинное введение в объеме 0,5 мл испытуемых образцов препарата, содержащих 0,2%, 0,3% и 0,4% формалина не сопровождалось угнетением общего состояния подопытных животных. Введение препарата содержащего 0,5% формалина привело к снижению активности животных, тем не менее, гибели их не наблюдалось. Таким образом, по результатам экспериментальных опытов установлено, что для обеспечения антисептической активности комплексного препарата наиболее оптимальной является концентрация формалина не ниже 0,4%, но и не выше 0,5%.

Для приготовления комплексного препарата 10 г янтарной кислоты, 2,5г новокаина растворили в 35 мл дистиллированной воды. Добавлением 40 мл АСД Ф-2 обеспечивается получение нейтрального раствора (рН= 6,9 – 7).

В нейтральный раствор добавили 10 мл формалина, что обеспечивало его концентрацию равную 0,4% (из расчета 40% формальдегида). Довели объем до 1000 мл добавлением воды. Препарат расфасовали по флаконам емкостью 100 мл, и для обеспечения стерильности подвергли автоклавированию в режиме 1 атм. в течение 20 минут.

Изучение протективной, антисептической и иммуностимулирующей активности препарата провели в сравнении с комплексным препаратом «янтарный биостимулятор».

Изучение свойств сравниваемых препаратов провели на белых мышах при моделировании у них острого сепсиса культурой кишечной палочки.

В первой серии опытов всем подопытным белым мышам в количестве 15 особей внутрибрюшинно ввели оттитрованную смертельную (2LD50) дозу выше указанной культуры. Спустя 3 часа одной группе (n=5) внутрибрюшинно в объеме 0,5 мл ввели янтарный биостимулятор с формалином; другой группе (n=5) – янтарный биостимулятор; третей группе (n=5) в качестве плацебо – 0,25% раствор новокаина. Спустя сутки в первой группе пала одна мышь; во второй – пали 3 особи; в третьей пали все подопытные животные.

При исследовании биоматериала от павших мышей были выделены исходные культуры кишечной палочки. При биохимическом исследовании выделенные культуры имели одинаковые свойства и равную вирулентность. Оставшихся в живых мышей усыпили спустя 48 часов после заражения. При бактериологическом исследовании биоматериала были выделены культуры кишечной палочки лишь от 2-х мышей из второй группы. При этом вирулентность выделенных культур снизилась на 50% от исходной.

Во второй серии опытов за 12 часов до заражения провели предварительную внутрибрюшинную иммунизацию белых мышей первой группы (n=5) янтарным биостимулятором с формалином, а второй группы (n=5) янтарным биостимулятором. Объем вводимых препаратов был одинаковым и составил 0,5 мл. Спустя сутки после заражения во всех подопытных группах пало по 2 мыши. Остальные особи благополучно перенесли заражение и остались живы (срок наблюдения 5 дней). При бактериологическом исследовании биоматериала от павших мышей были выделены исходные культуры кишечной палочки, имевшие вирулентность фактически равную исходной.

Результаты проведенных исследований свидетельствуют о том, что включение в состав янтарного биостимулятора формалина обусловило выраженное антимикробное действие вскоре после заражения животных. Введение формол-янтарного биостимулятора за 12 часов до заражения не имело столь выраженного протективного эффекта, что может быть обусловлено фактически полным выведением формалина из организма за этот период.

Протективные свойства экспериментальных составов. В лабораторных исследованиях установлено, что 1% раствор ЯК достаточен для нейтрализации высокой щелочной реакции 4% водного раствора АСД Ф-2. При этом 1% концентрация янтарной кислоты соответствует ее количественному содержанию 10 мг в 1 мл, что позволяет стандартизировать раствор и обеспечить необходимый количественный уровень при инъекциях для запуска процесса восстановления здоровья клетки и усиления эффективности действия других лекарственных средств, в частности антисептика стимулятора АСД Ф-2.

Включение в состав комплексного препарата новокаина в 0,25% концентрации, обусловлено необходимостью снятия болевой реакции при инъекциях.

Кроме того, известно, что тканевые препараты на растворе новокаина оказывают более быстрое действие, чем взвеси, приготовленные на физиологическом растворе.

При внутрибрюшинном введении препарата в дозе от 0,2 и до 0,5 мл белым мышам массой 16-18 г состояния угнетения или их гибели в течение 10 дней не наблюдали.

Определение степени защитных свойств препарата провели на белых мышах при моделировании острого инфекционного процесса культурой синегнойной палочки и острого токсикоза экзотоксином кишечной палочки. В качестве активного контроля для сравнения использовали белых мышей, которым в аналогичной дозе были сделаны инъекции АСД Ф-2, разведенной дистиллированной водой в соотношении 4:100 (4%), и сукцината натрия однопроцентной концентрации. Комплексный препарат, как и его составные компоненты, вводились внутрибрюшинно в объеме 0,25 мл. Спустя два дня после инъекций одну группу мышей заразили смертельной дозой синегнойной палочки, а другую подвергли интоксикации токсином кишечной палочки. Результаты изучения защитного действия препаратов представлены в таблицах 2 и 3.

–  –  –

Полученные данные свидетельствуют о том, что АСД Ф -2 оказал выраженное антиинфекционное, а сукцинат натрия - антитоксическое действие, однако при парентеральном введении эти препараты вызывают выраженную болевую реакцию. Препарат, изготовленный из двух компонентов (АСД ФЯК), с включением 0,25% новокаина, обладал выраженным антитоксическим свойствами и отличался отсутствием болевой реакции при введении.

При моделировании инфекционного процесса с культурой синегнойной палочки на белых мышках уровень защиты составил 80%, при моделировании острого токсикоза с токсином кишечной палочки - 70%.

3.1.2. Характеристика основных составов и способов получения препаратов

Разработка и применение иммуномодуляторов широкого спектра действия при неспецифической и специфической иммунокоррекции организма продуктивных животных является одним из приоритетных направлений в современной иммунологии (Б.В. Пинегин, 1984; Р.В. Петров, 1997; Р.М. Хаитов, 2003; Н.В. Самбуров, 2006).

При этом одновременная коррекция иммунного и метаболического статусов за счет использования иммуномодуляторов, приобретает особую актуальность в условиях современных технологий в животноводстве (Ю.Н. Федоров, 1999). Вместе с тем, создание иммуномодуляторов, обладающих при этом лечебными свойствами, имеет инновационное направление в ветеринарной медицине.

Янтарный биостимулятор. Исходя из концепции одновременной коррекции обменных и иммунных процессов при иммунодефицитах, наше внимание было сосредоточено на разработке комплексных препаратов, аккумулирующих в себе положительные свойства монопрепаратов в конкретной готовой исходной форме.

Особое внимание при этом уделялось фармакологической совместимости компонентов, изначально обладающих разным механизмом действия.

Тщательный подбор компонентов при этом должен преследовать цель получения позитивных иммунобиологических эффектов при минимальных дозировках и исключении побочных эффектов.

В последние годы в медицине и в ветеринарии широкую известность получили лекарственные препараты на основе янтарной кислоты (ЯК). ЯК и ее соли обладают широким спектром воздействия на различные механизмы регуляции метаболической активности клеток. Объектом действия ЯК являются клетки и ткани, находящиеся в состоянии возбуждения или патологически измененные (М.Н. Кондрашова, 1996).

Логика применения янтарной кислоты, для коррекции патофизиологических состояний, основана на ее антиоксидантных и антитоксических свойствах. Вместе с тем, янтарная кислота является мощным стимулятором выработки энергии в клетках, что особенно важно при патофизиологических состояниях, при недостатке энергии в организме для нормального обеспечения жизненно важных функций. Стимулирующее действие янтарной кислоты особо выражено при снижении естественной резистентности организма. В настоящее время экспериментально обосновано использование янтарной кислоты в комплексной терапии злокачественных новообразований (И.Е. Парфенова, 2003).

Таким образом, абсолютная безвредность янтарной кислоты и ее производных, способность оказывать положительный эффект даже при абсолютно низких дозировках, усиливать действие других лекарственных средств, делают ее весьма ценной при разработке комплексных препаратов, кормовых и пищевых добавок. При этом использование известного в ветеринарии антисептика стимулятора Дорогова (АСД Ф-2) свидетельствует, что он обладает мощным иммуностимулирующим действием.

Установлено, что действие АСД Ф-2 на организм проявляется в нормализации обменных процессов при различных патофизиологических состояниях, стимуляции активности иммунной системы при эндогенной инфекции.

При наружном применении проявляет выраженное антисептическое и трофикостимулирующее действие. Препарат относится к малотоксичным соединениям. Низкомолекулярные компоненты данной фракции по своей структуре родственны продуктам клеточного обмена и не воспринимаются организмом как чужеродные, что исключает появление побочных реакций повышенной чувствительности. Тем не менее, из данных литературы известно о том, что животные легко переносят внутривенные инфузии растворов АСД - 5% концентрации. Следует отметить, что внутривенное введение АСД второй фракции успешно применялось в клинике лечения чумы у собак, гнойносептических инфекционных заболеваний, в экспериментальных опытах по терапии бруцеллезной инфекции (К.И. Шакалов, 1961).

С учетом вышеуказанных иммунометаболических свойств компонентов, нами разработан способ получения комплексного препарата, включающего раствор янтарной кислоты, в который дополнительно вводится тканевый препарат - антисептик - стимулятор Дорогова второй фракции. Однако недостатком препарата АСД является высокая щелочная реакция, что не позволяет его применять для инъекций. Известно, что препараты, предназначенные для инъекций, при меньшей концентрации биологически активных веществ, тем не менее, обладают более выраженным и быстрым биологическим действием, чем лекарственные формы, применяемые per.os.

По-нашему предположению нейтрализация щелочной реакции препарата АСД Ф-2 янтарной кислотой, позволила бы получить инъекционную форму комплексного иммунометаболического препарата. Разрабатываемый способ получения комплексного препарата, вполне может аккумулировать в себе положительные качества исходных компонентов, что имело бы важное значение в повышении устойчивости организма животных к неблагоприятным факторам внешней среды, нормализации обменных процессов в клетках при различного рода иммунодефицитах, нарушениях обмена веществ, экзо- и эндогенных интоксикациях. При разработке основного препарата данной серии «янтарный биостимулятор» установлено, что 1% раствора ЯК достаточно для нейтрализации высокой щелочной реакции 4% водного раствора АСД второй фракции. При этом 1% концентрация янтарной кислоты соответствует ее количественному содержанию 10 мг в 1 мл, что позволяет стандартизировать раствор и обеспечить необходимый количественный уровень при инъекциях для запуска процесса восстановления здоровья клетки и усиления эффективности действия других лекарственных средств, в частности антисептика стимулятора АСД второй фракции. Включение в состав комплексного препарата новокаина в 0,25% концентрации, обусловлено необходимостью снятия болевой реакции при инъекциях. Для приготовления комплексного препарата использовали 950 мл дистиллированной воды, в которой последовательно растворили 10 г янтарной кислоты, что соответствовало ее 1% концентрации; 25 мг новокаина. Добавление 40 мл АСД второй фракции позволило нейтрализовать повышенную кислотность, доведя ее рН с 3,0 до 8,0.

Добавлением к указанному раствору едкого натрия нейтрализовали остаточную повышенную кислотность, доведя ее до требуемой рН 6,9-7,0. Полученный готовый продукт имел слабо зеленовато-коричневую окраску и был прозрачным. Препарат расфасовали по флаконам емкостью 50,0 мл и провели автоклавирование в режиме 1-1,2 атм. в течение 20 минут.

«Янтарный биостимулятор - плюс» (ЯБ+). При разработке препарата в качестве наиболее близкого прототипа определен янтарный биостимулятор (патент РФ № 2303979 от 10.08.07), включающий 1% янтарной кислоты; 4% АСД Ф-2; 0,25% новокаина. В качестве альтернативы АСД использовали нуклеинат натрия, выдерживающий температурное воздействие при стерилизации.

Полученное комплексное средство включает физиологически совместимые компоненты, которые оказывают выраженное корригирующее воздействие на иммунометаболические процессы организма, что повышает противоинфекционную и антитоксическую резистентность.

Для приготовления комплексного препарата использовали 950 мл дистиллированной воды, в которой при нагревании растворили 15 г янтарной кислоты, 20 г нуклеината натрия и 2,5 г новокаина. Дробным добавлением раствора гидроокиси натрия довели до рН 6,8 – 7,0. Выпадения осадка не наблюдалось, что свидетельствовало о совместимости компонентов. Добавили дистиллированную воду до 1000 мл.

Препарат расфасовали по флаконам емкостью 50 мл и провели стерилизацию автоклавированием в режиме 1,0-1,12 атм. в течение 25 мин. Стерилизация автоклавированием не изменила физических свойств препарата.

Металлосукцинат. Обеспечение животных микроэлементами, при оптимальном уровне их доступности, является одной из актуальных проблем в физиологии питания животных. Недостаточность микроэлементов в организме, особенно на фоне несбалансированности рационов по протеину, клетчатке, энергетической обеспеченности и другим питательным веществам, является одной из причин нарушения обмена веществ и проявлению вторичных иммунодефицитов в форме иммунодепрессионного состояния, ослаблением иммунологической реактивности, возникновением бактериальных и вирусных инфекций.

Анализ состояния обмена веществ у коров, с высоким уровнем продуктивности свидетельствует о дефиците жизненно важных микроэлементов – Cu, Zn, Co, Fe. Наиболее часто микроэлементоз отмечается у супоросных свиноматок и подсосных поросят. Указанные микроэлементы являются жизненно важными и входят в состав многих витаминов, ферментов, гормонов, обеспечивая их физиологическую активность и интенсивность обмена веществ. Нормализуя обмен веществ, они оказывают влияние на рост и развитие, воспроизводительную функцию, рождение жизнеспособного потомства.

Основным источником незаменимых микроэлементов для животных являются корма. Минеральный состав кормов весьма вариабелен и зависит от многих факторов, таких как состав почвы, уровень внесения удобрений, вид растений. Нередко в кормах наблюдают недостаток одних микроэлементов и избыток других. Тем не менее, даже при наличии высокого содержания микроэлементов в кормах организм животных не всегда способен их усвоить. Минеральные вещества корма усваиваются организмом взрослых животных лишь на 25-30% (Д.В. Пчельников с соавт., 2003; 2005). Еще более сложная ситуация складывается для новорожденных поросят, физиологическая потребность которых в микроэлементах удовлетворяется материнским молоком только на 10-15%. Вследствие этого у них быстро снижается уровень гемоглобина в крови и развивается анемия.

Дефицит железа и других микроэлементов приводит к развитию дегенеративных изменений в различных тканях. Особую опасность при этом, представляют патоморфологические изменения в тканях иммунной системы.

Недостаток микроэлементов у взрослых животных отрицательно отражается на их воспроизводительной функции, ведет к рождению слабого, нежизнеспособного потомства. Попытки восполнить недостаток микроэлементов в организме с помощью добавок в корма солей меди, цинка, железа, кобальта и других микроэлементов имеют ряд недостатков. Прежде всего, все соли микроэлементов, попав в желудочно-кишечный тракт быстро гидролизуются, образуя практически нерастворимые соединения, которые в большинстве своем не усваиваются, а выводятся с экскрементами. Решая данную проблему, многие исследователи проявляют особый интерес к разработке и применению хелатных соединений микроэлементов. Применение хелатных соединений микроэлементов обеспечивает лучшую ассимиляцию солей металлов, чем при введении их в рацион в обычной неорганической форме. Одним из наиболее перспективных хелатообразующих соединений является янтарная кислота. Микроэлементы в комплексе с янтарной кислотой обладают целым рядом ценных свойств: более высокий процент усвоения и доступности для биохимических реакций, практически исключается антагонизм элементов.

Янтарная кислота оказывает корригирующее действие на микроэлементный обмен в организме, снижая риск избыточного накопления элементов.

В настоящее время разработаны и апробированы, с положительной активностью, целый ряд комплексных микроэлементных препаратов на основе янтарной кислоты. Среди последних разработок особого внимания заслуживают комплексы янтарной кислоты с микроэлементами, известными под названием гемовит и гемовит-плюс (А.В. Козлов, 1985; Д.В. Пчельников с соавт., 2003). Несомненным достоинством этих препаратов является широкий набор микроэлементов и оральный метод применения.

В этой связи разработка комплексного инъекционного препарата, с использованием микроэлементов, для профилактики иммунодефицитов, нарушений обмена веществ и повышения неспецифической резистентности организма животных, является актуальной и практически значимой. Известен способ получения комплексного металлоглобулинового препарата (Н.В. Кленина, С.А. Михайлова, В.С. Антонов «Способ получения комплексного препарата иммуноглобулинов с металлами» А.С. SU 1352696 A 61 K 39/39 СССР от 26.06.1985). По данным авторов, соединение иммуноглобулинов с металлами обеспечивает их биодоступность при парентеральном методе введения, данный препарат обладает выраженным стимулирующим действием на иммунорезистентность организма. Тем не менее, использование при изготовлении препарата иммуноглобулинов, предъявляет повышенные требования к здоровью животных, используемых в качестве доноров при сборе сыворотки крови. Кроме того, для обеспечения стерильности препарата исключается использование надежного и простого метода стерилизации автоклавированием.

Нами была поставлена задача, получения инъекционной формы иммунотропного препарата с широким спектром биологического действия для профилактики и лечения микроэлементозов, нарушения обмена веществ, повышения резистентности организма животных.

При ее решении, обоснованным считали включение в состав комплексного препарата в качестве иммуномодулятора АСД Ф-2, в качестве микроэлементов были использованы водорастворимые сернокислые соли железа, меди, цинка, кобальта. Активатором этих солей служила янтарная кислота.

Пролонгатором активных веществ являлся полиэтиленгликоль.

Соединение янтарной кислоты с микроэлементами значительно повышает их активность и усвояемость и вместе с тем, в случае «передозировки»

какого-либо микроэлемента, янтарная кислота выступает в роли корректора, предохраняя клетки и ткани от его избыточного поступления. Микроэлементы, входящие в состав данного препарата, являются жизненно необходимыми.

Известно, что даже при высоком содержании микроэлементов в кормах их усвояемость, относительно не высокая. Так, усвояемость железа из большинства кормов может составлять 5%-30%. Недостаточное поступление микроэлементов в организм приводит к ослаблению функциональной активности отдельных звеньев иммунной системы, глубоким нарушениям обменных процессов и иммунодепрессивному состоянию организма. На таком фоне организм животных особенно чувствителен к возбудителям факторных инфекционных болезней.

При введении в состав препарата указанных выше микроэлементов, учитывали их биологическую роль и значение: медь и железо входят в состав ряда ферментов, участвующих в окислительно-восстановительных реакциях, способствуют переходу железа из неорганического соединения в органическое (гемоглобин), предотвращая анемическое состояние животных; сульфат цинка, входящий в состав препарата, стимулирует реакции иммуногенеза, профилактирует паракератоз; кобальт входит в состав цианокобаламина.

Для обеспечения более длительного биологического действия активных веществ компонентов в состав комплексного препарата включен полиэтиленгликоль в 3% концентрации, с молекулярной массой 400.

Иллюстрацией получения препарата, названного нами «металлосукцинат» служит следующий экспериментальный пример. Для приготовления комплексного препарата «металлосукцинат» использовали 900 мл дистиллированной воды, в которой последовательно растворили 10г янтарной кислоты; 2 г сульфата железа; 1 г сульфата кобальта; 100 мг сульфата цинка; 100 мг сульфата меди; 30 г – полиэтиленгликоля; 40 г АСД Ф-2; 2,5 г – новокаина. Дробным добавлением 10% гидроокиси натрия довели рH до 7,0. После чего добавили дистиллированную воду до объема равного 1000 мл. Таким образом, полученный препарат имеет следующий состав компонентов на 1000 мл (1000 г) раствора; мас.%: АСД Ф-2 – 4,0; янтарная кислота – 1,0;

сульфат железа – 0,2; сульфат меди – 0,01; сульфат цинка – 0,01; сульфат кобальта – 0,1; новокаина – 0,25; полиэтиленгликоль – 3,0; дистиллированная вода – остальное. Полученный комплексный препарат расфасовали по флаконам емкостью 50,0 мл и провели стерилизацию автоклавированием в режиме 1,2 атм. в течение 20 минут.

Металлосукцинат – плюс. Данный комплексный препарат разработан для профилактики нарушений обменных процессов, повышения факторов неспецифического иммунитета и резистентности организма животных.

В качестве иммуностимулятора в состав препарата включен синтетический иммуностимулятор нуклеинат натрия, применяемый для профилактики и лечения инфекционных заболеваний, протекающих на фоне иммунодефицитных состояний. Для усиления гепатопротекторной активности в состав препарата включен метионин незаменимая аминокислота являющаяся «критической» для моногастричных животных, поскольку их пищеварительная система не может ее синтезировать из азотосодержащих соединений корма.

При недостатке метионина часто наблюдается анемия, жировая и токсическая дистрофия печени. В организме метионин активизирует действие ряда ферментов, гормонов, витамина В12, фолиевой и аскорбиновой кислот. Многие процессы обезвреживания токсинов в печени происходят также с участием метионина.

Предлагаемый состав препарата позволяет получить одновременно метаболический и иммуностимулирующий эффекты. Компоненты, входящие в его состав, являются доступными и стандартными. Их наиболее оптимальное соотношение составляет в г/л: янтарная кислота -10,0; сульфат железа -2,0;

сульфат меди – 0,1; сульфат цинка – 0,1; сульфат кобальта – 1,0; метионин – 10,0; нуклеинат натрия – 10,0; вода для инъекций – до 1000 мл.

Данное соотношение янтарной кислоты, солей металлов, метионина и нуклеината натрия найдено экспериментально и обеспечивает получение синергетического эффекта при парентеральном (инъекционном) методе введения. Стерилизация автоклавированием не изменяет физико-химических свойств и биологической активности препарата.

Технологический процесс получения комплексного препарата иллюстрируется следующим примером. Для получения 1 литра препарата в колбу наливают 800-850 мл воды для инъекций. В нее же вносят 10,0 г янтарной кислоты и нагревают до 50-60С. В подогретый раствор, при перемешивании, последовательно вносят навески, содержащие 2,0 г сульфата железа; 0,1 г сульфата меди; 0,1 г сульфата цинка; 1,0 г сульфата кобальта; 10,0 г метионина; 10,0 г нуклеината натрия. После полного растворения компонентов раствор охлаждают до 30-35С и доводят рН до 6,7- 7,0 дробным добавлением гидроокиси натрия. Окончательный объем до 1000 мл доводят добавлением воды для инъекций. Полученный раствор разливают во флаконы из темного стекла емкостью 50-100 мл и подвергают стерилизации в течение 25 и 30 минут, соответственно.

Полученный в вышеуказанном примере состав был стерилен. При посевах проб состава на мясопептонный бульон (МПБ) и МПБ под вазелиновое масло в пробирках и на мясопептонный агар (МПА) на чашках Петри с последующей выдержкой в термостате при 37С в течение 48 часов рост микрофлоры отсутствовал.

При проверке острой и субхронической токсичности препарата на белых мышах установлено, что LD50 составила 22500 мг/ кг живой массы, что позволяет отнести его к классу малоопасных средств.

Полученный препарат, названный «металлосукцинат - плюс» при испытании на животных индуцировал ряд жизненно важных биологических эффектов.

Формол-янтарный биостимулятор (комплексный антисептический препарат). Создание экономически выгодных и эффективных средств для профилактики и лечения бактериальных и вирусных инфекций являются весьма сложным биологическим процессом. Неоднозначность задачи заключается в том, что одновременно необходимо добиться решения ряда вопросов:

- в частности, подавить жизнедеятельность патогенной микрофлоры, нейтрализовать ее токсические продукты жизнедеятельности, восстановить резистентность организма. Для подавления жизнедеятельности патогенной микрофлоры наиболее широко применяется химио-антибиотикотерапия. Однако рост лекарственной устойчивости микроорганизмов обусловливает задачу поиска средств исключающих возникновение этого феномена. Кроме того, применение мощных средств химио-антибиотикотерапии вызывает угнетение иммунной системы. Важное значение имеют вопросы восстановления нарушенных метаболических процессов и механизмов иммунорегуляции у животных.

Тем не менее, мы поставили перед собой задачу провести направленный поиск по конструированию комплексного препарата, обладающего выраженной антимикробной, детоксицирующей и иммунотрофикостимулирующей активностью. На основании литературных данных и результатов собственных исследований нами был обозначен выбор следующих компонентов, характеристику фармакологических свойств которых мы считаем уместным кратко привести.

АСД Ф-2. Мы уже отмечали большой положительный опыт применения препарата АСД Ф-2 и янтарной кислоты. При этом уникальные свойства янтарной кислоты в настоящее время служат основанием для ее использования при разработке лечебно-профилактических препаратов нового поколения относящихся к так называемым «умным лекарствам». Применительно к нашей разработке были все основания рассчитывать на положительный эффект янтарной кислоты в части нормализации иммунометаболических процессов у животных.

Вместе с тем, заслуживает определенного внимания, достаточно известное химическое соединение - формалин.

Формалин. Альдегид муравьиной кислоты. Еще в 1915 г. выдающийся французский иммунолог Г. Рамон доказал, что формалин представляет собой прекрасный антисептик для сохранения стерильности биологических препаратов, в частности, сывороток терапевтического назначения. Он же в 1923 г.

открыл принцип получения «убитых» вакцин и анатоксинов, в основу которого было положено воздействие на микробы и их токсины формалином. Из данных литературы известно, что формалин обладает высокой антимикробной активностью. Так, в концентрации 1:4000 формалин в течение часа прекращает рост стойких микробов – возбудителей сибирской язвы и рожи свиней. Гибель золотистого стафилококка происходит в растворе формалина в течение 30 минут (И.Е. Мозгов, 1985). В исследованиях В.Н. Ласкового и В.В. Рыбина (1995), К.В. Степанова (1990) показано, что инъекции 0,15-0,3% растворов формалина оказывают иммуностимулирующее действие на организм животных и профилактируют желудочно-кишечные заболевания молодняка. В исследованиях А.А. Евглевского (1992; 1997) установлено, что инъекции 0,3% формалина оказывают выраженное десенсибилизирующее действие на организм животных при туберкулезе.

Возможность применения низких концентраций формалина при локальных гнойно-септических заболеваниях показана в исследованиях А.А.

Евглевского с соавт. (2004; 2005; 2006), М.Г. Лебедевой (2004), Н.В. Воробьевой (2006).

Таким образом, уникальные фармакологические свойства данных компонентов представляли для нас определенный научно- практический интерес при разработке комплексного иммунометаболического антисептического препарата.

Схема получения препарата включает следующие процессы:

смешивание в воде янтарной кислоты, новокаина, антисептика стимулятора Дорогова второй фракции и формалина при соотношении компонентов (мас.%) - янтарная кислота 1; АСД Ф-2 - 4; новокаин - 0,25; формалин - 0,4; дистиллированная вода остальное;

стерилизация автоклавированием, в режиме 1 атм. в течение 20 минут.

Полученный состав обладает антисептической, иммуномодулирующей и трофикостимулирующей активностью при парентеральном способе введения. Данный препарат имеет нейтральную реакцию, технически прост в изготовлении, обладает высоким иммуностимулирующим действием при инъекционном методе введения.

Левамизол формол-янтарный. При изучении биологического действия левамизола было установлено, что он повышает общую сопротивляемость организма и может быть использован как средство для иммунотерапии.

Опыты на изолированных клетках и наблюдения за здоровыми и больными людьми показали, что препарат способен восстановить измененные функции Т-лимфоцитов и фагоцитов и вследствие своего тематического эффекта может регулировать клеточные механизмы иммунологической системы. Более подробные исследования продемонстрировали, что левамизол, избирательно стимулируя регуляторную функцию Т-лимфоцитов, может выполнять функции иммуномодулятора, способного усилить слабую реакцию клеточного иммунитета, ослаблять сильную и не действовать на нормальную.

Благодаря таким свойствам левамизол был предложен для лечения различных заболеваний, в патогенезе которых придают значение расстройствам иммуногенеза: первичные и вторичные иммунодефицитные состояния, аутоиммунные болезни, хронические и рецидивирующие инфекции, опухоли и др. Однако левамизол обладает выраженным побочным, преимущественно судорожным действием на организм.



Pages:     | 1 | 2 || 4 | 5 |   ...   | 10 |

Похожие работы:

«ПОРЫВАЕВА Антонина Павловна ТЕОРЕТИЧЕСКИЕ И ПРАКТИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ МОДЕЛИРОВАНИЯ ХРОНИЧЕСКОЙ ГЕРПЕСВИРУСНОЙ ИНФЕКЦИИ 03.02.02 Вирусология ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени доктора биологических наук Научный консультант: доктор медицинских наук, профессор Глинских Нина Поликарповна Екатеринбург 2015 ОГЛАВЛЕНИЕ 1 ВВЕДЕНИЕ 2 ОСНОВНАЯ ЧАСТЬ 2.1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ...»

«ВОРОБЬЕВА Ольга Вадимовна СРАВНИТЕЛЬНЫЙ И ИСТОРИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ МЕТОДИЧЕСКОГО ПРОГРЕССА В АЛЛЕРГОЛОГИИ: АЛЛЕРГЕН-СПЕЦИФИЧЕСКАЯ ИММУНОТЕРАПИЯ 14.03.09 – клиническая иммунология, аллергология Диссертация на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Научный руководитель: доктор медицинских наук, профессор, член-корреспондент...»

«АУЖАНОВА АСАРГУЛЬ ДЮСЕМБАЕВНА ОЦЕНКА ДЕЙСТВИЯ АБИОТИЧЕСКИХ ФАКТОРОВ И БИОПРЕПАРАТА РИЗОАГРИН НА МИКРОБИОЛОГИЧЕСКУЮ АКТИВНОСТЬ ПОЧВЫ, АДАПТИВНОСТЬ И ПРОДУКТИВНОСТЬ ЯРОВОЙ МЯГКОЙ ПШЕНИЦЫ 03.02.08 – Экология Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: доктор...»

«ДЕНИСЕНКО ВАДИМ СЕРГЕЕВИЧ ОПЕРЕЖАЮЩАЯ ФИЗИЧЕСКАЯ ПОДГОТОВКА СТУДЕНТОВ УЧЕБНЫХ ЗАВЕДЕНИЙ СФЕРЫ ФИЗИЧЕСКОЙ КУЛЬТУРЫ В КОНТЕКСТЕ ОБЕСПЕЧЕНИЯ НЕПРЕРЫВНОСТИ ПРОФЕССИОНАЛЬНОГО ОБРАЗОВАНИЯ 13.00.04 – Теория и методика физического воспитания, спортивной тренировки, оздоровительной и адаптивной физической культуры ДИССЕРТАЦИЯ на соискание...»

«ТУРТУЕВА ТАТЬЯНА АНАТОЛЬЕВНА РАЗРАБОТКА СБОРА НЕЙРОПРОТЕКТИВНОГО И ЭКСТРАКТА СУХОГО НА ЕГО ОСНОВЕ 14.04.02 фармацевтическая химия, фармакогнозия ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук Научный руководитель: доктор фармацевтических наук, профессор НИКОЛАЕВА ГАЛИНА ГРИГОРЬЕВНА Улан-Удэ – 2015 ОГЛАВЛЕНИЕ...»

«Киселева Ирина Анатольевна СПЕЦИАЛИЗИРОВАННЫЙ ПРОДУКТ ДИЕТИЧЕСКОГО ПРОФИЛАКТИЧЕСКОГО ПИТАНИЯ НА ОСНОВЕ КОКТЕЙЛЯ БАКТЕРИОФАГОВ: КОНСТРУИРОВАНИЕ, ТЕХНОЛОГИЯ ПРОИЗВОДСТВА, ОЦЕНКА БЕЗОПАСНОСТИ И ЭФФЕКТИВНОСТИ ПРИМЕНЕНИЯ 03.01.06 – биотехнология (в том числе...»

«Лёвкина Ксения Викторовна Влияние сроков, норм высева и удобрений на урожайность и качество зерна озимой твердой пшеницы в подзоне светло-каштановых почв Волгоградской области Специальность: 06.01.01 – общее земледелие, растениеводство Диссертация на соискание учёной степени кандидата сельскохозяйственных наук Научный...»

«Кузнецова Татьяна Сергеевна ПРОГНОЗИРОВАНИЕ РЕФРАКЦИОННОГО РЕГРЕССА ПОСЛЕ ЭКСИМЕР-ЛАЗЕРНОЙ КОРРЕКЦИИ БЛИЗОРУКОСТИ ВЫСОКОЙ СТЕПЕНИ ПРИ МЕХАНИЧЕСКОЙ И ФЕМТОЛАЗЕРНОЙ ТЕХНОЛОГИЯХ ФОРМИРОВАНИЯ ЛОСКУТА РОГОВИЦЫ 14.01.07 – глазные болезни Диссертация на соискание ученой степени кандидата...»

«Горовой Александр Иванович БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫЕ ВЕЩЕСТВА ДРЕВЕСНОЙ ЗЕЛЕНИ И ШИШЕК PINUS KORAIENSIS (ПОЛУЧЕНИЕ, СОСТАВ, ИСПОЛЬЗОВАНИЕ) 03.02.14 – биологические ресурсы Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: доктор биологических наук, профессор Тагильцев Ю. Г. Хабаровск – 2015 СОДЕРЖАНИЕ стр Введение.. 4 Глава 1 Обзор...»

«БОЛОТОВ ВЛАДИМИР ПЕТРОВИЧ ОЦЕНКА СОДЕРЖАНИЯ И МИГРАЦИЯ ТЯЖЕЛЫХ МЕТАЛЛОВ В ЭКОСИСТЕМАХ ВОЛГОГРАДСКОГО ВОДОХРАНИЛИЩА Специальность: 03.02.08. Экология Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: доктор биологических наук,...»

«Шестакова Вера Владимировна МОРФО-АНАТОМИЧЕСКИЕ И ФИЗИОЛОГО-БИОХИМИЧЕСКИЕ КРИТЕРИИ СЕЛЕКЦИОННОЙ ОЦЕНКИ УСТОЙЧИВОСТИ ФОРМ РОДА CERASUS MILL. К КОККОМИКОЗУ Специальность: 06.01.05. – селекция и семеноводство сельскохозяйственных растений Диссертация на соискание учёной степени кандидата сельскохозяйственных наук Научный...»

«ДЯТЛОВА ВАРВАРА ИВАНОВНА ПОЛУЧЕНИЕ РЕКОМБИНАНТНЫХ И СИНТЕТИЧЕСКИХ АНТИГЕНОВ MYCOBACTERIUM TUBERCULOSIS И ПЕРСПЕКТИВЫ ИХ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ ДЛЯ СЕРОДИАГНОСТИКИ ТУБЕРКУЛЕЗА Специальность: 03.02.03 – микробиология. Диссертация на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Научный...»

«УДК 256.18(268.45) ШАВЫКИН АНАТОЛИЙ АЛЕКСАНДРОВИЧ ЭКОЛОГО-ОКЕАНОЛОГИЧЕСКОЕ СОПРОВОЖДЕНИЕ ОСВОЕНИЯ НЕФТЕГАЗОВЫХ МЕСТОРОЖДЕНИЙ АРКТИЧЕСКОГО ШЕЛЬФА (НА ПРИМЕРЕ БАРЕНЦЕВА МОРЯ) Специальность 25.00.28 «океанология» Диссертация на соискание ученой степени доктора географических наук Мурманск – 2015 ОГЛАВЛЕНИЕ ОГЛАВЛЕНИЕ ВВЕДЕНИЕ...»

«БЕСЕДИНА Екатерина Николаевна УСОВЕРШЕНСТВОВАНИЕ МЕТОДА КЛОНАЛЬНОГО МИКРОРАЗМНОЖЕНИЯ ПОДВОЕВ ЯБЛОНИ IN VITRO Специальность 06.01.08 – плодоводство, виноградарство Диссертация на соискание учёной степени кандидата сельскохозяйственных наук Научный руководитель – кандидат биологических наук Л.Л. Бунцевич Краснодар 201 Содержание...»

«Кузнецова Наталья Владимировна СОВРЕМЕННОЕ ГИДРОБИОЛОГИЧЕСКОЕ СОСТОЯНИЕ РЕКИ ЯХРОМА КАК МОДЕЛЬНОЙ МАЛОЙ РЕКИ ПОДМОСКОВЬЯ 03.02.10 – гидробиология Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук...»

«Ядрихинская Варвара Константиновна ЭКОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ РАСПРОСТРАНЕНИЯ ОСТРЫХ КИШЕЧНЫХ ИНФЕКЦИЙ В Г. ЯКУТСКЕ И РЕСПУБЛИКЕ САХА (ЯКУТИЯ) 03.02.08 – экология Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель кандидат биологических наук, доцент М.В. Щелчкова Якутск 2015...»

«МУСТАФАЕВ РОВШАН ДЖАЛАЛ ОГЛЫ «СОВРЕМЕННЫЕ ЛАЗЕРНЫЕ ТЕХНОЛОГИИ В ЛЕЧЕНИИ ПЕРИТОНИТА» (Экспериментально-клиническое исследование) Диссертация на соискание ученой степени доктора медицинских наук по специальности–14.01.17 хирургия Научный консультант: доктор медицинских наук, профессор Гейниц А.В. Москва 2014 СПИСОК ПРИНЯТЫХ В РАБОТЕ...»

«Труш Роман Викторович ФАРМАКО-ТОКСИКОЛОГИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ СКАЙ-ФОРСА И ЕГО ЭФФЕКТИВНОСТЬ ПРИ КОЛИБАКТЕРИОЗЕ ЦЫПЛЯТ-БРОЙЛЕРОВ 06.02.03 – ветеринарная фармакология с токсикологией Диссертация на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук Научный руководитель Горшков Григорий Иванович заслуженный деятель науки РФ, доктор биологических наук, профессор Белгород – п. Майский 2015 г. СОДЕРЖАНИЕ...»

«Храмцов Павел Викторович ИММУНОДИАГНОСТИЧЕСКАЯ СИСТЕМА ДЛЯ ОЦЕНКИ НАПРЯЖЕННОСТИ ПОСТВАКЦИНАЛЬНОГО ИММУНИТЕТА К КОКЛЮШУ, ДИФТЕРИИ И СТОЛБНЯКУ 14.03.09 – Клиническая иммунология, аллергология Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: доктор биологических наук, Раев Михаил Борисович...»

«Дандал Али Шебли ПАТОГЕНИТЕЧЕСКИЕ СВОЙСТВА ВИРУСА ИНФЕКЦИОННОГО БРОНХИТА КУР 06.02.02 «ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология» Диссертация на соискание ученой степени кандидата ветеринарных...»







 
2016 www.konf.x-pdf.ru - «Бесплатная электронная библиотека - Авторефераты, диссертации, конференции»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.