WWW.KONF.X-PDF.RU
БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА - Авторефераты, диссертации, конференции
 


Pages:     | 1 | 2 || 4 |

«БИОДЕСТРУКЦИЯ ДРОТАВЕРИНА ГИДРОХЛОРИДА АКТИНОБАКТЕРИЯМИ РОДА RHODOCOCCUS ...»

-- [ Страница 3 ] --

А Б В Г Рисунок 30. АСМизображения клеток R. rhodochrous ИЭГМ 647, выращенных в течение 10 сут в среде RS в присутствии ДГ в качестве единственного источника углерода. А, Б – амплитудные изображения;

В, Г – трехмерные проекции. Стрелками указаны зоны лизиса отдельных клеток.

О физиологическом состоянии клеток в присутствии ДГ свидетельствовали результаты исследований, полученные при помощи конфокальной микроскопии. Как видно из рисунка 31, большинство клеток сохраняли жизнеспособность в присутствии ДГ (клетки с зеленой флюоресценцией), однако на изображениях также присутствовали клетки с красной флюоресценцией, что указывало на повреждение их клеточных мембран.

А Б

Рисунок 31. Изображения клеток ИЭГМ 647 R. rhodochrous в присутствии ДГ и при внесении глюкозы, полученные с помощью лазерной сканирующей конфокальной микроскопии (А) и совмещенные с АСМ-изображением (Б), окрашенные витальным красителем Live/Dead.

В присутствии ДГ также обнаруживались клетки более округлых (2,02±0,11 нм) форм (рисунок 32). В условиях полноценной питательной среды родококки росли автономно, формируя удлиненные (2,47±0,14 нм) палочки с закругленными концами с относительно гладкой клеточной поверхностью с малоразвитым рельефом (рисунок 33).

А Б Рисунок 32. АСМизображения клеток R. rhodochrous ИЭГМ 647, выращенных в течение 10 сут в среде RS в присутствии ДГ в качестве единственного источника углерода. А – амплитудное изображение;

Б – трехмерная проекция.

А Б Рисунок 33. АСМизображения клеток R. rhodochrous ИЭГМ 647, выращенных в течение 3 сут в МПБ. А – амплитудное изображение;

Б – трехмерная проекция.

Таким образом, в результате проведенных исследований установлено, что характерной особенностью родококков в присутствие в среде культивирования ДГ является изменение их физико-химических и морфофизиологических свойств, что, по-видимому, можно рассматривать как механизмы адаптации клеток и, как следствие, повышения их устойчивости к токсическому воздействию экотоксиканта.

Глава 6. Биодеструкция дротаверина иммобилизованными и покоящимися клетками Биодеструкция ДГ иммобилизованными клетками.

В окружающей природной среде микроорганизмы существуют в основном в иммобилизованном виде. В связи с этим интерес представляло сравнительное исследование ДГ-деструктирующей активности свободных и иммобилизованных на различных носителях бактериальных клеток. Как видно из рисунка 34, применение родококков, иммобилизованных на твердом носителе (адсорбенте на основе древесных пород) позволяло существенно сократить (до 7 сут) продолжительность процесса биодеструкции ДГ, по сравнению с таковой при использовании свободных клеток (см. рисунок 20). Очевидно, полученный результат обусловлен более высокой физиологической устойчивостью иммобилизованных на твердом носителе клеток к действию экотоксиканта (van Loosdrecht et al., 1990; Cassidy et al., 1996).

–  –  –

При использовании клеток, включенных в матрицу криогеля на основе ПВС, остаточное содержание ДГ на 15 сут эксперимента составляло еще 78 % (рисунок 35). Это объясняется, тем, что ДГ становился, по-видимому, наименее доступным для родококков, включенных в криогель.

–  –  –

Биодеструкция ДГ покоящимися клетками. Актуальность разработки приемов повышения деструктивной активности родококков обусловлена тем, что в природных системах практически отсутствуют оптимальные ростовые условия (температура, pH, N и пр.). Хотя родококки способны осуществлять катаболические процессы в неоптимальных условиях внешней среды (de Carvalho and da Fonseca 2005; Larkin et al. 2006), скорости деструкции разлагаемых ими соединений при этом весьма низки.

Одним из приемов повышения деструктирующей активности родококков состоит в получении их дормантных форм. В качестве биодеструктора использовали штамм R. ruber ИЭГМ 326. Выбор данного штамма обусловлен, с одной стороны, его устойчивостью к ДГ (МПК 200 мг/л), с другой – низкой способностью к разложению этого фармполлютанта, по сравнению с другими штаммами-биодеструкторами ДГ. Покоящиеся клетки R. ruber ИЭГМ 326 получали в модели голодания культур по источнику азота (что, по сути, имитировало распространенную экологическую ситуацию) и длительном хранении при температуре окружающей среды. ЦПК R. ruber ИЭГМ 326 в данных условиях сохраняли морфологические особенности и целостность клеток.

В свою очередь, создание условий азотной лимитации и последующее хранение при комнатной температуре не оказались оптимальными для массового образования ЦПК R. rhodochrous ИЭГМ 647. Клетки утрачивали колониеобразующую способность. Возможно, что в примененных условиях R. rhodochrous ИЭГМ 647 переходили в некультивируемое состояние, аналогично описанному ранее для другого штамма этого вида NCIMB 13805 (Shleeeva et al., 2002). Таким образом, штамм R. ruber ИЭГМ 326 был подходящим объектом для апробации подходов, направленных на повышение его биодеградативного потенциала, в том числе за счет использования покоящихся форм в качестве инокулята, вносимого непосредственно в среду с ДГ (“прямое инокулирование”) или через пассаж на плотной среде (LB или МПА) (“непрямое инокулирование”).

Особенностями ультраструктурной организации ЦПК R. ruber ИЭГМ 326 (рисунок 36 Б), отличавшими их от вегетативных клеток (рисунок 36 А), были:

отсутствие признаков деления; укороченная округлая форма; уплотнение клеточной стенки; наличие наружного капсульного слоя; появление крупных электроннопрозрачных включений, по-видимому, алканатов; электронно-плотная гомогенная цитоплазма.

–  –  –

Рисунок 36. Вид вегетативных клеток (А) и цистоподобных покоящихся клеток R. ruber ИЭГМ 326 (Б) в фазово-контрастном микроскопе. Длина масштабной метки – 2 мкм.

Об интактности ЦПК и сохранности барьерной функции их мембран у ЦПК свидетельствовало наличие зеленой флюоресценции у 95 % клеток, прокрашенных двухкомпонентным красителем Live/Dead (от общего числа ЦПК клеток в 7-мес культуре, по данным прямых микроскопических наблюдений).

–  –  –

o при 35±2 C через 48 ч не превышала лишь 0,7 мг/л ДГ, тогда как при использовании в качестве инокулята ЦПК она составляла 2,5 мг/л (таблица 10). Эффективность биодеструкции ДГ соответствовала при этом 250 % от контроля. Приведенные в таблице 10 данные свидетельствуют о том, что использование покоящихся форм обеспечивало 3,5-кратное преимущество перед вегетативными клетками для биодеструкции ДГ в условиях, неоптимальных для протекания метаболических процессов.

–  –  –

Отмечено, что при инокулировании среды с ДГ суспензией ЦПК и последующей инкубации при 35 оС дыхательная активность возобновлялась через более короткий (4 ч) промежуток времени по сравнению с таковым (11 ч) при 27 оС (рисунки 38, 39).

А

–  –  –

При этом максимальная скорость (3,9 мкл/мин) и общий объем (16,8 мл/л), (см. таблицу 10) выделенного CO2 также были выше, чем в вариантах инокулирования среды вегетативными клетками.

Биодеструкция ДГ в присутствии глюкозы. В вариантах “прямого инокулирования” среды RS с ДГ и дополнительно внесенной глюкозой (5 г/л) как суспензиями вегетативных клеток, так и ЦПК и последующей инкубации при оптимальной температуре 27 С максимальная скорость выделения CO2 и его общее количество были существенно выше, чем без добавления соокисляемого субстрата (таблица 10, рисунок 40).

А 50 Скорость дыхательной активности, мкл/мин

–  –  –

Эффективность деструкции ДГ в валовом отношении составляла 8,8 мг/л при использовании вегетативных клеток и 9,2 мг/л при инокулировании покоящимися формами R. ruber ИЭГМ 326, что соответствовало почти 50 %-ной его убыли (см. рисунок 37). Дыхание клеток, развившихся из ЦПК, восстанавливалось после более длительного (20 ч) лаг-периода, проходило с повышенной максимальной (45 мкл CO2/мин) скоростью и большим (920 мл/л) выходом углекислоты, по сравнению с вариантом инокулирования суспензиями вегетативных клеток (рисунок 40, таблица 10). Также выявлены отличия в динамике изменения скорости выделения CO2: достижение первого максимума на раннем (6 ч) и второго – на более позднем (37 ч) сроке инкубации после внесения вегетативных клеток и два близких максимума (27 и 34 ч) в случае инокуляции ЦПК (рисунок 40).

Таким образом, внесение глюкозы обеспечивало 8 – 9 - кратное повышение эффективности деструкции ДГ (по валовому содержанию на единицу объема) в оптимальных (27 С) условиях, по сравнению с соответствующим вариантом его утилизации в качестве единственного источника углерода и энергии.

Биодеструкция ДГ при “непрямом” инокулировании среды.

В сравнительных экспериментах в качестве инокулята использовали суспензии вегетативных клеток R. ruber ИЭГМ 326 в виде смыва с поверхностных культур, развившихся в первом пассаже при прорастании ЦПК на плотной среде.

Соответствующим контролем служил вариант с наименьшей эффективностью утилизации ДГ (до 5 %) с внесением клеток штамма после восстановления из лиофилизированного состояния. В этих экспериментах показано, что использование варианта “непрямого инокулирования” (вегетативных клеток, выросших из ЦПК) позволило повысить эффективность деструкции ДГ в 4,4 раза при оптимальной температуре (27 С), по сравнению с контролем. При этом эффективность деструкции ДГ составила 4,4 мг/л, что соответствовало его 22 %-ной убыли (рисунок 37; таблица 10).

Таким образом, ЦПК родококков, как форма биологической приспособленности способствует не только их выживанию при комплексных изменениях окружающей среды и воздействии неблагоприятных факторов, но и эффективной деструкции фармполлютантов.

По результатам ГХ-МС анализа, в процессе биодеструкции ДГ после инокуляции вегетативными клетками или ЦПК через 48 ч образовывались одинаковые продукты бактериальной деструкции ДГ, в частности производные протокатеховой кислоты по установленному нами пути обмена. Информация о возможных путях биодеструкции ДГ и продуктах его биодеструкции представлена в следующей главе данной работы.

Глава 7. Возможные пути биодеструкции дротаверина.

Токсичность продуктов его биодеструкции Продукты и пути биодеструкции ДГ. При ГХ-МС анализе экстрактов культуральной жидкости сделано заключение о том, что в первые 5 сут эксперимента среди продуктов биодеструкции ДГ детектируется соединение предполагаемой структуры: 1-(3,4-диэтоксибензоил)-6,7-диэтокси-3,4-дигидроизохинолин, m/z=411,2 (рисунок 41), соединение 1-(3,4-диэтоксибензоил-6,7-диэтоксиизохинолин, m/z=409,0 (рисунок 42).

Рисунок 41. Масс-спектры 1-(3,4-диэтоксибензоил)-6,7-диэтокси-3,4дигидроизохинолина (m/z=411,2), 1-(2-аминоэтил)-3,4-диэтоксибензойной кислоты (m/z=252,8) и 3,4- диэтоксибензоила (m/z=193,0).

Рисунок 42. Масс-спектры 1-(3,4-диэтоксибензоил)-6,7-диэтоксиизохинолина (m/z=409,0) и 3,4-диэтоксибензоила (m/z=192,8).

Наряду с указанными продуктами детектировано соединение предполагаемой структуры 1-оксо-6,7-диэтокси-1,2,3,4–тетрагидроизохинолин (m/z = 235,2, M+, 70,0% (рисунок 43). Это наиболее вероятное соединение является структурным аналогом производных изокарбостирила.

Рисунок 43. Масс- спектр 1-оксо-6,7-диэтокси-1,2,3,4-тетрагидроизохинолина (m/z = 235,2).

Образование данного гидрированного производного 6,7-диэтоксиизохинолинН)-она согласуется с общими представлениями о химическом окислении производных 1-бензилизохинолина. Известно, что замещенные 1(2Н)изохинолоны широко используются как строительные блоки в органическом синтезе и обладают разнообразными видами биологической активности (Griffin et al., 1998; Virag, Szabo, 2002).

По окончанию эксперимента в среде аккумулировались метаболиты со спектроскопическими характеристиками 3,4-диэтоксибензальдегида m/z (%) 137 (100), 138 (63), 194 (39) (M+), 81 (18), 109 (17), 3,4-диэтоксибензойной кислоты m/z (%) 154 (100), 137 (139), 210 (33) (M+), 97 (13), 51 (11) и этилового эфира 3,4-диэтоксибензойной кислоты m/z (%) 137 (100), 154 (57), 238 (49) (M+), 109 (23), 79 (21), 182 (19). Данные соединения, представленные на хроматограмме (рисунок 44), обнаруживались в инкубационной среде вплоть до полного исчезновения ДГ и не выявлялись в контрольных экспериментах.

Рисунок 44. Хроматограмма метаболитов ДГ, детектируемых в постферментационной среде родококков.

–  –  –

Рисунок 45. Пути биодеструкции ДГ с использованием R. rhodochrous ИЭГМ 608. 1 – 1-(3,4-диэтоксибензилиден)-6,7-диэтокситетрагидроизохинолин (ДГ); 2 – 1-(3,4-диэтоксибензоил)-6,7-диэтоксидигидроизохинолин; 3 – 1-оксо-6,7-диэтокси-1,2,3,4-тетрагидроизохинолин; 4 – 2-(2-аминоэтил)-4,5-диэтоксибензойная кислота; 5 – 3,4-диэтоксибензальдегид; 6 – 3,4-диэтоксибензойная кислота; 7 – этиловый эфир 3,4-диэтоксибензойной кислоты; 8 – 3,4-диэтоксибензоил; 9 – 1-(3,4-диэтоксибензил)-6,7-диэтоксиизохинолин.

Химические модификации молекулы ДГ (соединение 1) могут протекать, предположительно, по двум направлениям: через дегидрирование изохинолинового цикла с образованием 1-(3,4-диэтоксибензоил)-6,7диэтоксиизохинолина (соединение 9), а также по пути окисления метиленового звена бензильной группы молекулы с образованием 1-(3,4-диэтоксибензоил)-6,7диэтокси-3,4-дигидроизохинолина (соединение 2). Важным подтверждением образования соединения 2 является наличие в масс-спектре иона с М+=193 8), соответствующего остатку 3,4-диэтоксибензоила.

(фрагмент 1-(3,4диэтоксибензоил)-6,7-диэтокси-3,4-дигидроизохи-нолин в дальнейшем расщепляется с образованием лактама (соединение 3). Особо следует отметить образование 2-(2-аминоэтил)-4,5-диэтоксибензойной кислоты (соединение 4, m/z=252,8, M+, 2,0 %), свидетельствующей о раскрытии цикла гидрированного изохинолона. Вышеуказанные соединения к концу ферментации не обнаруживались в инкубационной среде, что подтверждало дополнительные стадии превращения метаболитов. К концу ферментации в инкубационной среде аккумулировались продукты – производные протокатеховой кислоты соединение 5), кислота, (3,4-диэтоксибензальдегид, 3,4-диэтоксибензойная соединение 6) и этиловый эфир 3,4-диэтоксибензойной кислоты, соединение 7).

Исследование токсичности продуктов биодеструкции ДГ.

В экспериментах, направленных на изучение всхожести семян овса было показано, что продукты биодеструкции ДГ не являлись токсичными, о чем свидетельствовали высокие (96 %) показатели всхожести семян, в то время как у семян, обработанных водными растворами ДГ в различных концентрациях, составляла от 16 до 24 % (рисунок 46). Токсичность продуктов биодеструкции ДГ в отношении проростков овса Avensa sativa L. также не выявлена. Проростки овса при обработке смесью продуктов биодеструкции ДГ имели хорошо развитую корневую систему. Так, максимальные показатели длины корней составляли 13,5 см, длина стебля в единичных случаях достигала 15,0 см (таблица 11, рисунки 47, 48).

Как видно из рисунка 48, при обработке проростков овса водными растворами ДГ отмечено подавление роста надземных и подземных органов, сопровождающееся морфологическими изменениями, в частности сужением листовой пластинки, снижением тургора осевой части проростка.

–  –  –

Рисунок 46. Всхожесть семян овса обыкновенного Avensa sativa L.

при воздействии ДГ и продуктов его биодеструкции. 1 – абиотический контроль; 2 – биотический контроль; 3 – 0,002 % ДГ; 4 – 0,001 % ДГ; 5 – 0,01 % ДГ; 6 – 1,0 % ДГ; 7 – продукты биодеструкции ДГ.

–  –  –

Рисунок 47. Изменение морфометрических показателей овса обыкновенного Avensa sativa L. при воздействии ДГ и продуктов его биодеструкции. 1 – абиотический контроль; 2 – биотический контроль;

3 – 0,001 % ДГ; 4 – 0,002 % ДГ; 5 – 0,01 % ДГ; 6 – 1,0 % ДГ; 7 – продукты биодеструкции ДГ.

Рисунок 48. Изменение морфометрических показателей овса Avensa sativa L. под воздействием ДГ и продуктов его биодеструкции.

1 – биотический контроль; 2 – 0,002 % ДГ; 3 – продукты биодеструкции ДГ;

4 – 1,0 % ДГ.

–  –  –

В соответствии с классификацией OECD (Organization for Economic Cooperation and Development, 2001) по определению острой токсичности продукты биодеструкции ДГ обладают менее выраженной (103 мг/кг, 3 класс) токсичностью по сравнению с таковой ДГ (70,8 мг/кг, 2 класс опасности).

Таким образом, в результате проведенных исследований выявлено, что процесс бактериального разложения ДГ происходит с раскрытием изохинолинового цикла и сопровождается образованием простых ароматических соединений – производных протокатеховой кислоты, при этом продукты биодеструкции ДГ не обладают выраженной токсичностью по сравнению с таковой ДГ.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Имеющиеся в настоящее время данные о последствиях воздействий наиболее часто используемых фармацевтических препаратов на организмы разного уровня организации (от бактерий до человека), а также способности бактерий к их биодеструкции представляют не только фундаментальный интерес, но и имеют большое практическое значение, поскольку затрагивают актуальные проблемы не только экологии микроорганизмов и оценки поведения фармпрепаратов в открытых экосистемах, но и ставят вопросы необходимости эффективного уничтожения фармотходов.

В процессе анализа литературных данных установлено, что одним из распространенных устойчивых фармацевтических поллютантов, обнаруживаемых в природной окружающей среде, является ДГ, обладающий спазмолитическим, миотропным и сосудорасширяющим действием. Отмечено, что среди экологически значимых групп микроорганизмов, способных чутко реагировать на изменения в среде обитания и инициировать соответствующие адаптивные реакции, особое место занимают актинобактерии рода Rhodococcus.

Показано, что основными стратегиями выживания микроорганизмов в природных системах при поступлении в них как биогенных, так и абиогенных токсикантов являются: (1) переход клеток в покоящееся состояние, сопровождающееся повышением их стрессоустойчивости и (2) мобилизация физиологических или генетических ресурсов для повышения скорости процессов детоксикации.

Полученные экспериментальные данные, по сути, отражают реализацию этих двух стратегий поведения микроорганизмов в среде, загрязненной фармполлютантами и свидетельствуют о гибком адаптивном потенциале экологически значимых видов родококков, что проявилось не только в устойчивости к экотоксиканту – ДГ, но и способности к его разложению с разной степенью эффективности, в том числе в неоптимальных условиях.

В настоящей работе впервые показана способность родококков экологически значимых видов к использованию ДГ в качестве единственного источника азота, углерода и энергии. Выявлено, что выраженную (МПК200 мг/л) устойчивость к ДГ имеют представители экологически значимых видов R. erythropolis, R. rhodochrous и R. ruber. Наиболее высокая ДГ-деструктирующая активность отмечена у штаммов R. erythropolis ИЭГМ 767, R. rhodochrous ИЭГМ 608, ИЭГМ 647 и R. ruber ИЭГМ 326. Однако скорости этих процессов были низки. Для повышения деструктурирующей активности родококков в отношении ДГ использовались различные приемы – от прединкубации клеток в присутствии низких концентраций токсиканта, введения косубстрата и варьирования условий культивирования до использования в качестве инокулята иммобилизованных и дормантных клеток.

В результате проведенных экспериментов установлено, что оптимальными условиями для культивирования родококков являлись присутствие в среде глюкозы, температура 28 оС, pH среды 6,8 и чередование (160 и 60 об/мин) скоростей перемешивания) культуральной жидкости. При этом полное разложение 20 мг/л ДГ с использованием свободных клеток происходило через 15 сут.

Показано, что при воздействии ДГ на родококки происходит увеличение степени гидрофобности их клеточной стенки, что проявлялось в увеличении среднеквадратичной шероховатости клеток, их электрокинетического потенциала и содержания суммарных клеточных липидов. Ранее в работах Е.В. Рубцовой с соавт. (2012), М.К. Серебренниковой с соавт. (2014), de Carvalho с соавт. (2009) также отмечено изменение данных свойств родококков в присутствии других токсичных соединений. Среди прочих ответных реакций родококков на присутствие в среде фармполлютанта отмечены диссоциация клеток, изменение их морфометрических показателей и формирование клеточных агрегатов. Полученные результаты согласуется с данными А.С. Сироткина с соавт. (2007), Ю.А. Николаева и В.К. Плакунова (2007). Вероятно, выявленные физиолого-морфологические изменения родококков можно рассматривать как один из механизмов их адаптации к присутствию токсичного соединения.

Немаловажную роль при формировании клеточных агрегатов имеет гидродинамический режим (Волошин, 2006; Линькова, 2011). Так, в проведенных нами экспериментах, агрегирование бактериальных клеток происходило намного быстрее при чередовании показателей скоростного режима от 160 до 60 об/мин, чем в условиях интенсивного или медленного перемешивания, а также при внесении в среду культивирования глюкозы. Согласно данным Ю.Ю. Гущиной с соавт. (2005), внесение дополнительного энергетического субстрата в среду культивирования способствует увеличению адаптивного потенциала бактерий.

Показано, что нахождение клеток в иммобилизованном состоянии позволяет им более активно деструктировать субстрат. Полученный результат, вероятно, обусловлен более высокой физиологической устойчивостью иммобилизованных на твердом носителе клеток к действию экотоксиканта (van Loosdrecht et al., 1990;

Cassidy et al., 1996). В свою очередь, снижение деструктирующей активности родококков, иммобилизованных в матрицу ПВС, в отношении ДГ может быть вызвано сложностью поступления деструктируемого субстрата к клеткам.

Полученные результаты согласуются с данными, приведенными в литературе (Ludwig et al., 2014).

Для длительного выживания в неблагоприятных условиях среды важным является способность родококков к образованию конститутивно покоящихся форм – ЦПК. Такая форма биологической приспособленности способствует не только выживанию бактерий при комплексных изменениях окружающей среды и воздействии неблагоприятных факторов, но и обеспечивает распространение бактерий и освоение ими новых ниш. Следует подчеркнуть, что ЦПК образуются в циклах развития микробных культур (их онтогенезе), являются конститутивными формами покоя микроорганизмов и потому не тождественны клеткам, описанным в качестве “resting cells” в ряде исследований по биодеградации различных токсикантов, например, таким, как: “resting cells стационарной фазы роста” (Nallapan Maniyam et al., 2011) или “resting cells, выживающие при перенесении в голодные буферные среды” (Kim et al., 2007;

Marchand et al., 2008). В сравнительных исследованиях каталитической активности вегетативных и дормантных клеток при биодеструкции ДГ установлена возможность повышения ДГ-деструктирующего потенциала родококков с использованием ЦПК при неоптимальной (35±2 оС) температуре.

Для мониторинга убыли ДГ из среды культивирования родококков нами разработана методика хроматографического определения ДГ, пригодная для использования в лабораторных условиях. Предложена кинетическая модель, позволяющая прогнозировать длительность и оптимальное время окончания процесса биодеструкции ДГ.

Выявлено, что процесс бактериального разложения ДГ происходит с раскрытием изохинолинового цикла и сопровождается образованием простых ароматических соединений – производных протокатеховой кислоты. Ранее в работах по биодеструкции папаверина, близкого по химической структуре к ДГ, отсутствовали сведения, подтверждающие факт раскрытия изохинолинового цикла папаверина (Hauer et al., 1982). Экспериментально обосновано, что продукты биодеструкции ДГ не обладают выраженной токсичностью по сравнению с таковой исходного препарата. В связи с этим с позиций прикладной микробиологии способность родококков к биодеструкции азотсодержащих гетероциклических фармполлютантов, реализованная на примере ДГ, представляет интерес для разработки биопрепаратов на основе родококков для применения в системах очистки сточных вод и биоремедиации загрязненных объектов от фармацевтических токсикантов.

101

ВЫВОДЫ

1. На основе генофонда Региональной профилированной коллекции алканотрофных микроорганизмов впервые показана способность актинобактерий рода Rhodococcus к использованию дротаверина гидрохлорида в качестве единственного источника азота, углерода и энергии. Родококки экологически значимых видов R. erythropolis, R. rhodochrous и R. ruber обладают выраженной (МПК200) толерантностью к дротаверину. Полное разложение 20 мг/л дротаверина в течение 15 сут клетками R. rhodochrous ИЭГМ 608 и ИЭГМ 647, предварительно выращенных в условиях низких (2 мг/л) концентраций дротаверина, достигается в присутствии глюкозы при 28 оС, pH 6,8 и чередовании скоростей (160 и 60 об/мин) перемешивания культуральной жидкости.

2. Разработана методика детекции и количественного определения дротаверина гидрохлорида в культуральной жидкости родококков, характеризующаяся выраженной воспроизводимостью и точностью анализа.

Изучены основные кинетические закономерности и предложена математическая модель, позволяющая прогнозировать длительность и время окончания процесса биодеструкции дротаверина.

3. Выявлены характерные физико-химические (повышение дзетапотенциала, гидрофобности клеток) и морфофизиологические (уменьшение размеров, увеличение шероховатости, формирование клеточных агрегатов) изменения родококков под воздействием дротаверина.

Показано, что наиболее высокой метаболической активностью 4.

и устойчивостью к воздействию дротаверина обладают родококки, иммобилизованные на твердом носителе (адсорбенте на основе древесных пород).

По сравнению с вегетативными клетками обосновано преимущество использования цистоподобных покоящихся клеток R. ruber ИЭГМ 326 в качестве инокулята, для биодеградации дротаверина при неоптимальной (35±2 о

С) температуре.

5. Определены возможные пути разложения дротаверина гидрохлорида с использованием штаммов R. rhodochrous ИЭГМ 608, ИЭГМ 647 и R. ruber ИЭГМ 326. Впервые получены сведения, подтверждающие факт раскрытия изохинолинового цикла соединения дротаверина гидрохлорида. Анализ конечных продуктов биодеструкции дротаверина в постферментационной среде культивирования родококков выявил наличие простых органических соединений

– производных протокатеховой кислоты, не обладающие выраженной токсичностью по сравнению с таковой дротаверина.

103

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

–  –  –

М.С. Куюкина, И.Б. Ившина, М.И. Рычкова, О.Б. Чумаков // Микробиология.

Т. 69, № 1. С. 62–69.

2000.

Волошин, С.А. Значение межклеточных взаимодействий у бактерий 9.

Micrococcus luteus и Rhodococcus rhodochrous для инициации роста: автореф. дис.

…. канд. биол. наук: 03.00.04 / Волошин Сергей Александрович. – Москва, 2005. – 25 с.

Гетьман, М.А. // Лекарственные средства в окружающей среде / 10.

М.А. Гетьман, И.А. Наркевич // Ремедиум. – 2013. – № 2. – С. 50–54.

Гуринович, А.Д. Очистка природных вод от фармацевтических 11.

препаратов методом окисления / А.Д. Гуринович, Б.Н. Житенв, Н.В. Воронович // Вестник Брестского государственного технического университета. – 2012. – № 2. – С. 21–27.

Данилюк, А.А. Определение лабильных аналитов и продуктов их 12.

метаболизма методами ГХ-МС и ВЭЖХ: автореф. дис…. канд. хим. наук: 02.00.02 / Данилюк Александра Александровна. – Воронеж, 2013. – 17 с.

Деградация парацетамола с истекшим сроком годности свободными 13.

клетками актинобактерий / И.Б. Ившина, М.И. Рычкова, Е.В. Вихарева, Л.А.

Чекрышкина, И.И. Мишенина // Катализ промышленности. – 2006. – № 2. – С. 44– 49.

Демаков, В.А. Иммобилизация клеток микроорганизмов:

14.

биотехнологические аспекты / В.А. Демаков, А.Ю. Максимов, Ю.Г. Максимова // Биотехнология. – 2008. – № 2. – С. 30–45.

Демушкин, В.П. Влияние дротаверина гидрохлорида на 15.

жизнеспособность культивируемых клеток-зерен мозжечка крыс / В.П.

Демушкин, Е.В. Жаворонкова, Л.Г. Хаспеков // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. – 2011. – Т. 152, № 10. – С. 425–427.

Деструкция ароматических углеводородов штаммом Rhodococcus 16.

wratislaviensis КТ112-7, выделенным из отходов соледобывающего предприятия / Д.О. Егорова [и др.] // Прикладная биохимия и микробиология. – 2013. – Т. 49, № 3. – С. 267–278.

Егорова, Д.О. Новые галотолерантные штаммы – деструкторы 17.

бифенила рода Rhodococcus / Д.О. Егорова, И.О. Коршунова, Е.Г. Плотникова // Вестник Пермского университета. Серия Биология. – 2010. – Вып. 1 (1). – С. 50– 54.

Елькин, А.А. Биокаталитическое окисление тиоанизола свободными и 18.

иммобилизованными клетками родококков: дис. … канд. биол. наук: 03.02.03 / Елькин Андрей Анатольевич. – Пермь, 2011. – 121 с.

Жуков, Д.В. Механизмы деградации углеводородов нефти 19.

микроорганизмами / Д.В. Жуков, В.П. Мурыгина, С.В. Калюжный // Успехи современной биологии. – 2006. – Т. 126, № 3. – С. 285–296.

Ившина, И.Б. Большой практикум. Микробиология / И.Б. Ившина. – 20.

СПб.: Проспект науки, 2014. – 112 с.

Ившина, И.Б. Состояние и проблемы развития специализированных 21.

центров микробиологических ресурсов в России / И.Б. Ившина // Микробиология.

– 2012. – Т. 81, № 5 – С. 551–560.

Ившина, И.Б. Адаптационные механизмы выживания алканотрофных 22.

родококков, реализованные в неблагоприятных условиях среды / И.Б. Ившина, Т.Н. Каменских, Б.А. Анохин // Вестник Пермского университета. Серия Биология. – 2007. – Вып. 5 (10). – С. 107–112.

Ившина, И.Б. Бактерии рода Rhodococcus (иммунодиагностика, 23.

детекция, биоразнообразие): дис. … д–ра биол. наук: 03.00.07 / Ившина Ирина Борисовна. – Пермь, 1997. – 197 с.

Ившина, И.Б. Пропанокисляющие родококки // И.Б. Ившина, Р.А.

24.

Пшеничнов, А.А. Оборин. – Свердловск: УНЦ АН СССР, 1987. 125 с.

Исследование морфологии поверхности клеток 25. Azotobacter chroococcum в условиях гипертермии методом атомно-силовой микроскопии / Ю.Ю. Гущина [и др.] // Поверхность. Рентгеновские, синхротронные и нейтронные исследования. – 2005. № 5. – С. 87–92.

Каменских, Т.Н. Особенности криоконсервации алканотрофных 26.

актинобактерий рода Rhodococcus / Т.Н. Каменских, Е.А. Калашникова, И.Б.

Ившина // Вестник Пермского университета. Серия Биология. – 2010. – Вып. 1 (1).

– С. 15–20.

Клунко, Н.С. Управление отходами фармацевтического производства 27.

в контексте проблем рационального природопользования / Н.С. Клунко // Матер.

Междунар. 32 науч. конф. “Экономическая наука и практика”. Чита, 2012. – С.

32–37.

Коронелли, Т.В. Поверхностно-активные свойства некоторых 28.

штаммов углеводородокисляющих бактерий / Т.В. Коронелли, С.Г. Юферова // Вестник Московского университета. Серия Биология. – 1990. – № 1. – С. 14–18.

Коронелли, Т.В. Принципы и методы интенсификации 29.

биологического разрушения углеводородов в окружающей среде (обзор) / Т.В.

Коронелли // Прикладная биохимия и микробиология. – 1996. – Т. 32, № 6. – С.

579–585.

Коронелли, Т.В. Экологическая стратегия бактерий, использующих 30.

гидрофобный субстрат / Т.В. Коронелли, Е.Д. Нестерова // Микробиология. – 1990. – Т. 59, № 6. – С. 993–997.

Корсакова, Е.С. Бактерии-деструкторы стойких органических 31.

загрязнителей – эфиров фталевой кислоты, как основа для создания новых экобиотехнологий / Е.С. Корсакова, А.А. Пьянкова, Е.Г. Плотникова // Известия Самарского научного центра Российской академии наук. – 2013. – Т. 15, № 3 (5). – С. 1633–1636.

Костина, Л.В. Аккумуляция солей тяжелых металлов клетками 32.

актинобатерий и использование Rhodococcus – сурфактантов для мобилизации и извлечения тяжелых металлов из нефтезагрязненной почвы: дис. … канд. биол.

наук: 03.02.03 / Костина Людмила Викторовна. – Пермь, 2010. – 264 с.

Криворучко, А.В. Особенности процесса иммобилизации клеток 33.

родококков на твердых носителях / А.В. Криворучко // Матер. III Всеросс.

Молодежной школы-конференции “Актуальные аспекты современной микробиологии”. Москва, 2007. – С. 55–57.

Линник, Ю.В. Метод наименьших квадратов и основы 34.

математической обработки наблюдений / Ю.В. Линник. М.: Физматгиз, 1962. – 336 с.

Линькова, Ю.В. Деструкция аминоароматических веществ 35.

анаэробными микробными сообществами: автореф. дис. …. канд. биол. наук:

03.02.03 / Линькова Юлия Валерьевна. – Москва, 2011. – 26 с.

Методическиe указания 4.1.1697-03 “Методы контроля. Химические 36.

факторы: спектрофотометрическое измерение массовых концентраций 1-[(3,4диэтоксифенил)метилен]-6,7-диэтоки-1,2,3,4-тетра-гидроизохинолина гидрохлорида (дротаверина гидрохлорид, Но-шпа) в воздухе рабочей зоны”. – 2003. – 10 c.

Методы консервации коллекционных культур актинобактерий рода 37.

Rhodococcus / Ю.Н. Шляпина, А.С. Степина, Т.Н. Каменских, И.Б. Ившина // Вестник Уральской медицинской науки. – 2011. – № 4/1 (38). – C. 43–44.

Микробная трансформация фенантрена и антрацена / М.А. Бабошин 38.

[и др.] // Микробиология. – 2005. – Т. 73, № 3. – С. 357–364.

Милько, Е.С. Гетерогенность популяции бактерий и процесс 39.

диссоциации: (Корине- и нокардиоподобные бактерии) / Е.С. Милько, Н.С.

Егоров. – М.: МГУ, 1991. – 141 с.

Методические рекомендации РФ 2.1.7.2297-07 “Обоснование класса 40.

опасности отходов производства и потребления по фитотоксичности” – 2007. – 12 c.

Мулюкин, А.Л. Покоящиеся формы неспорообразующих бактерий:

41.

дис. … д–ра биол. наук: 03.02.03 / Мулюкин Андрей Львович. – М., 2010. – 349 с.

Нестеренко, О.А. Нокардиоподобные и коринеподобные бактерии / 42.

О.А. Нестеренко, Е.И. Квасников, Т.М. Ногина – Киев: Наук. Думка, 1985. – 336 с.

Николаев, Ю.А. Биопленка – “город микробов” или аналог 43.

многоклеточного организма? / Ю.А. Николаев, В.К. Плакунов // Микробиология.

Т. 76, № 2. С. 149–163.

2007.

Николаев, Ю.А. Внеклеточные факторы адаптации бактерий 44.

к неблагоприятным условиям среды / Ю.А. Николаев // Прикладная биохимия и микробиология. Т. 40, № 4. С. 387–397.

2004.

Но-шпа: маркетинговая стратегия и разработка рекламных 45.

материалов. – Корпорация “Sanofi”. – 2013. – 31 c.

Оптимизация процесса биодеструкции непригодных к медицинскому 46.

использованию лекарственных средств, производных фенола / И.Б. Ившина, М.И.

Рычкова, Е.В. Вихарева, Т.А. Нечеухина, А.А. Селянинов // Вестник Пермского университета. Серия Биология. – 2009. – Вып. 10 (36). – С. 136–140.

Выбор способа иммобилизации бактерий – нефтедеструкторов для 47.

разработки биосенсоров на основе кислородного электрода / О.Н. Понаморева [и др.] // Известия Тульского государственного университета. Естественные науки. – 2011. – № 1. – С. 237–246.

Предозонирование – как средство интенсификации процессов 48.

биологической очистки сточных вод / А.А. Цхе [и др.] // Политематический сетевой электронный научный журнал Кубанского государственного аграрного университета (Научный журнал КубГАУ). – 2013. – № 87 – Режим доступа:

http://ej.kubagro.ru/2013/03/pdf/38.pdf. [18.07.2014].

Прозоровский, В.Б. Экспресс-метод определения средней 49.

эффективной дозы и ее ошибки / В.Б. Прозоровский, М. П. Прозоровская, В.М. Демченко // Фармакология и токсикология. – 1978 – № 4. – С. 497–502.

Разработка технологии и стандартизации суппозиториев 50.

с дротаверина гидрохлоридом и парацетамолом / Э.Ф. Степанова [и др.] // Курский научно-практический вестник “Человек и его здоровье”. – 2008. – № 2. – С. 141–144.

Рубцова, Е.В. Влияние условий культивирования на адгезивную 51.

активность родококков в отношении н-гексадекана / Е.В. Рубцова, М.С. Куюкина, И.Б. Ившина // Прикладная биохимия и микробиология. Т. 48, № 5. С.

2012.

501–509.

Самойленко, Н.Н. Загрязнение муниципальных вод 52.

фармацевтическими препаратами и их производными / Н.Н. Самойленко, И.А.

Ермакович // Восточно-Европейский журнал передовых технологий JSSN. – 2013.

– Вып. 4 (10), № 64. – С. 8 – 11.

Селянинов, А.А. Класс кинетически моделируемых биомеханических 53.

случайных процессов / А.А. Селянинов // Российский журнал биомеханики. – 2012. – Т. 16, № 4 (58). – С. 22–35.

Сироткин, А.С. Агрегация микроорганизмов: флоккулы, биопленки, 54.

микробные гранулы / А.С. Сироткин, Г.И. Шагинурова, К.Г. Ипполитов. – Казань, “Фн” АН РТ. – 2007. – 160 с.

Соляникова, И.П. Организация биодеградативных путей 55.

у родококков: автореф. дис.… д–ра биол. наук: 03.00.04 / Соляникова Инна Петровна. – Пущино, 2007. – 54 с.

Ушкалова, Е.А. Место дротаверина в медицинской практике / Е. А.

56.

Ушкалова // Новая аптека. – 2008. – № 6. – С. 72–74.

Федеральный закон РФ № 52 от 12.03.1999 “О санитарноэпидемиологическом благополучии населения”. – Режим доступа:

http://base.consultant.ru/cons/cgi/online.cgi?base=law&n=164608&req=doc[3.07.2014] Хамидуллина, Р.Г. Различная природа множественной лекарственной 58.

устойчивости клеток Serratia marcescens и Escherichia coli / Р.Г. Хамидуллина, О.А. Гимадутдинов // Альманах современной науки и образования. – 2008. – № 12. – С. 133–135.

Черкасова, Н.Ю. Анализ лекарственных средств для лечения 59.

дисменореи / Н.Ю. Черкасова, А.В. Фомина, О.В. Филиппова // Фармакоэкономика. – 2013. – Т. 6, № 2. – С. 36–40.

Чиганова, М.А. Влияние поступления ксенобиотиков на качество вод 60.

(на примере водных объектов-источников питьевого водоснабжения г. Москвы):

автореф. дис…. канд. геогр. наук: 25.00.36 / Чиганова Мария Алексеевна. – Москва, 2013. – 22 с.

Яшин, Я. Наукометрическое исследование материалов Питтсбургской 61.

конференции по аналитической химии и прикладной спектроскопии (PITTCON 2012) / Я. Яшин, А. Яшин // Аналитика. – 2012. – № 3 (4). – С. 48–52.

62. A Review on pharma pollution / K. Shalini [et al.] // International Journal of PharmTech Research. – 2010. – V. 2, N. 4. – P. 2265–2270.

63. Acute toxicity study of drotaverine hydrochloride in rats by intramuscular route / S. Nair [et al.] // Indian Drugs. – 2002. – V. 39, N. 7. – P. 387–391.

64. Adaptation of Rhodococcus erythropolis cells to high concentrations of toluene / C.C.C.R. de Carvalho [et al.] // Applied Microbiology and Biotechnology. – 2007. – V. 76. – P. 1423–1440.

65. Adsorption and degradation of ketoprofen in soils / J. Xu [et al.] // Journal of Environmental Quality. – 2009. – V. 38. – P. 1177–1182.

66. Aislabie, J. Isolation of microorganisms capable of degrading isoquinoline under aerobic conditions / J. Aislabie, S. Rothenburger, R. Atlas // Applied Environmental Microbiology. – 1989. – V. 55. – N. 12. – P. 3247–3249.

67. Physiological and morphological responses of the soil bacterium Rhodococcus opacus strain PD630 to water stress / H.M. Alvarez [et al.] // FEMS Microbiology and Ecology. – 2004. – V. 50, N. 2. – P. 75–86.

68. Aminobenzothiazole degradation by free and Ca-alginate immobilized cells of Rhodococcus rhodochrous / C. Chorao [et al.] // Chemosphere. – 2009. – V. 75. – P.

121–128.

69. Analysis of pharmaceuticals spiked in natural water samples / P. Selimi [et al.] // Protection and Restoration of the Environment VII – Mykonos. – 2004. – 7 pp.

70. Antibiotic uptake by plants from soil fertilized with animal manure / К.

Kumar [et al.] // Journal of Environmental Quality. – 2005. – V. 34. – P. 2082–2085.

71. Antibiotics in the offshore waters of the Bohai Sea and the Yellow sea in China: occurrence, distribution and ecological risks / R. Zhang [et al.] // Environmental Pollution. – 2013. – V. 174. – P. 71–77.

72. Bedner, M. Transformation of acetaminophen by chlorination produces the toxicants 1,4-benzoquinone and N-acetyl-p-benzoquinone / M. Bedner, W. Maccrehan // Environmental Science and Technology. – 2006. – V. 40. – P. 516–522.

73. Bennet, G. Status and understanding of groundwater Quality in the Klamath Mountains study Unit, 2010: California GAMA Priority Basin Project / G. Bennet, M. Fram, K. Belitz // Water Boards, 2014. – 70 pp.

74. Benotti, M.J. Microbial degradation of pharmaceuticals in estuarine and coastal seawater / M.J. Benotti, B.J. Brownawell // Environmental Pollution. – 2009. – V. 157. – P. 994–1002.

75. Bessems, J.G. Paracetamol (acetaminophen)-induced toxicity: molecular and biochemical mechanisms, analogues and protective approaches / J.G. Bessems, N.P. Vermeulen // Critical Reviews in Toxicology. – 2001. – V. 31, N. 1. – P. 55–138.

76. Bioconversion of codeine to semi-synthetic opiate derivatives by the cyanobacterium Nostoc muscorum / S. Niknam [et al.] // World Journal of Microbiology and Biotechnology. – 2010. – V. 26. – P. 119–123.

77. Biodegradation of Bulk Drug Industrial Effluents from Microbial / P.A.

Babu [et al.] // Journal of Scientific and Industrial Research. – 1999. – V. 58. – P. 431– 435.

78. Biodegradation of papaverine and harmaline with the Basidiomyectous Pharierochaese chrysosporium / L. Zhao [et al.] // 5th International Conference on Bioinformatics and Biomedical Engineering. – 2011. – P. 1–4.

Biodegradation potential of the genus Rhodococcus / L. Martnkov [et al.] 79.

// Environment International. – 2009. – V. 35. – P. 162–177.

80. Biotransformation of benzonitrile herbicides via hydratase–amidase pathway in rhodococci / A.B. Vesel [et al.] // Journal of Industrial Microbiology and Biotechnology – 2012. – V. 39. – P. 1811–1819.

81. Bouchez, M. An interfacial uptake mechanism for the degradation pyrene by a Rhodococcus strain / M. Bouchez, D. Bblachet, J.-p. Vandecasteele // Microbiology. – 1997. – V. 143. – P. 1082–1093.

Bowe, L. Investigating emergent contaminants “Pharmaceutical impacts 82.

solutions” / L. Bowe. – – Режим доступа:

and possible 2008.

http:// www.mass.gov/eea/docs/dep/toxics/stypes/ec-bowe.pdf [10.09.2014].

83. Calisto, V. Psychiatric pharmaceuticals in the environment / V. Calisto, V. Esteves // Chemosphere. – 2009. – V. 77. – P. 1257–1274.

84. Carucci, A. Biodegradability and toxicity of pharmaceuticals in biological wastewater treatment plants / A. Carucci, G. Coppai, M. Piredda // Journal of Environmental Science and Health Part A. – 2006. – V. 41. – P. 1831–1842.

85. Cassidy, M.B. Environmental applications of immobilized microbial cells:

a review / M.B. Cassidy, H. Lee, I.T. Trevors // Journal of Industrial Microbiology and Biotechnology. – 1996. – V. 16. – P. 79–101.

86. Celiz, M.D. Pharmaceutical metabolites in the environment: analytical challenges and ecological risks / M.D. Celiz, J. Tso, D.S. Aga // Environmental Toxicology and Chemistry. – 2009. – V. 28, N. 12. – P. 2473–2484.

87. Cell surface hydrophobicity and slime production of Staphylococcus epidermidis Brazilian isolates / N. Krepsky [et al.] // Current Microbiology. – 2003. – V. 46. – P. 280–286.

88. Cells of Pseudomonas putida and Enterobacter sp. adapt to toxic organic compounds by increasing their size / G. Neumann [et al.] // Extremophiles. – 2005. – V.

9. – P. 163–168.

89. Characterization and biodegradation kinetics of a new cold-adapted carbamazepine-degrading bacterium Pseudomonas sp. CBZ-4 / A. Li [et al.] // Journal of Environmental Sciences. – 2013. – V. 25, N. 11. – P. 2281–2290.

90. Chefetz, B. Sorption and mobility of pharmaceutical compounds in soil irrigated with reclaimed waste water / B. Chefetz, T. Mualem, J. Ben-Ari // Chemosphere. – 2008. – V. 73. – P. 1335–1343.

Chvre, N. Pharmaceuticals in surface waters: sources, behavior, ecological 91.

risk, and possible solutions. Case study of Lake Geneva, Switzerland / N. Chvre // WIREs Water. – 2014. – V. 1. – P. 69–86.

92. Cloning of a genetically unstable cytochrome P-450 Gene Cluster involved in degradation of the pollutant ethyltret-butyl ether / S. Chauvaux [et al.] // Journal of Bacteriology. – 2001. – V. 183, N. 22. – P. 6551–6557.

93. Novel rhodococci and other mycolate actinomycetes from the deep sea / J.A. Colquhoun [et al.] // Antonie van Leeuwenhoek. – 1998. – V. 74. – P. 27–40.

94. Comparative evaluation of NCCLS M27-A and eucast broth micro dilution procedures for antifungal susceptibility testing of Candida species / M. Cuenca-Estrella [et al.] // Antimicrobial Agents and Chemotherapy. – 2002. – V. 46, N. 11. – P. 3644– 3647.

95. Daughton, C.G. Illicit Drugs: Contaminants in the environment and utility in forensic epidemiology / C.G. Daughton // Reviews of Environmental Contamination and Toxicology / Ed. D.M. Whitacre. Springer, 2011. – P. 59–110.

96. de Carvalho, C.C.C.R. Adaptation of Rhodococcus erythropolis cells for growth and bioremediation under extreme conditions / C.C.C.R. de Carvalho // Research in Microbiology. – 2012. – V. 163. – P. 125–136.

97. de Carvalho, C.C.C.R. Adaptation of Rhodococcus to organic solvents / C.C.C.R. de Carvalho // Biology of Rhodococcus / Ed. H.M. Alvarez. Berlin, Heidelberg: Springer-Verlag, 2010. – P. 110–131.

98. de Carvalho, C.C.C.R. Cell wall adaptations of planktonic and biofilm Rhodococcus erythropolis cells to growth on C5 to C16 n-alkane hydrocarbons / C.C.C.R. de Carvalho, L.Y. Wick, H.J. Heipieper // Applied Microbiology and Biotechnology. – 2009. – V. 82. – Р. 311–320.

99. Membrane transport systems and the biodegradation potential and pathogenicity of genus Rhodococcus / C.C.C.R. de Carvalho [et al.] // Frontiers in Physiology. – 2014. – V.5, N. 133. Р. 1–13.

100. de Carvalho, C.C.C.R. The remarkable Rhodococcus erythropolis / C.C.C.R. de Carvalho, M.M.R. da Fonseca // Applied Microbiology and Biotechnology.

– 2005. – V. 67. – P. 715726.

101. De Lorenzo, M.E. Individual and Mixture Effects of Selected Pharmaceuticals and Personal Care Products on the Marine Phytoplankton Species Dunaliella tertiolecta / M.E. De Lorenzo, J. Fleming // Archives of Environmental Contamination and Toxicology. – 2008. – V. 54, N. 2. – P. 203–210.

102. Debasmita, N. Optimization and kinetics studies on biodegradation of atrazine using mixed microorganisms / N. Debasmita, M. Rajasimman // Alexandria Engineering Journal. – 2013. – V. 52. – P. 499–505.

103. Degradation of 40 selected pharmaceuticals by UV/H2O2 / B.A. Wols [et al.] // Water Research. – 2013. – V. 47, N. 15. – P. 5876–5888.

104. Degradation of acetaminophen by Delftia tsuruhatensis and Pseudomonas aeruginosa in a membrane bioreactor / B. de Gusseme [et al.] // Water Research. – 2011. – V. 45, N. 4. – P. 1829–1837.

105. Degradation of carbamazepine by Trametes versicolor in an air pulsed fluidized bed bioreactor and identification of intermediates / A. Jelic [et al.] // Water Research. – 2012. – V. 46, N. 4. – P. 955–964.

106. Degradation of Estrogens by Rhodococcus zopfii and Rhodococcus equi Isolates from Activated Sludge in Wastewater Treatment Plants / T. Yoshimoto [et al.] // Applied and Environmental Microbiology. – 2004. – V. 70, N. 9. – Р. 5283–5289.

107. Degradation of pyrene by Rhodococcus sp. UW 1 / U. Walter [et al.] // Applied Microbiology and Biotechnology. – 1991. – V. 34. – P. 671–676.

108. Degradation of quinoline by Rhodococcus sp. QL2 isolated from activated sludge / Zhu S.-n. [et al.] // Journal of Hazardous Materials – 2008. – V. 160. – P. 289– 294.

109. Degradation of the recalcitrant pharmaceuticals carbamazepine and 17ethiniylestradiol by ligninolytic fungi / I.J.S. Santos [et al.] // Chemical Engineering Transactions. – 2012. – V. 27. – 16 pp.

110. Desulphurisation of benzothiophene and dibenzothiophene by actinomycete organisms belonging to the genus Rhodococcus, and related taxa / C.

Oldeld [et al.] // Antonie van Leeuwenhoek. – 1998. – V. 74. – P. 119–132.

111. Determination of polar pharmaceuticals in sewage water of Greece by gas chromatography – mass spectrometry / V. Koutsouba [et al.] // Chemosphere. – 2003. – V. 51, N. 2. – P. 69–75.

112. Drillia, P. Mobility of pharmaceuticals in sole / P. Drillia, K. Stamatelatou, G. Lyberatos // VIII International Conference on Environmental Science and Technology – 2003. – P. 184–190.

113. Du, L. Occurrence, fate and ecotoxicity of antibiotics in agro-ecosystems.

A review / L. Du, W. Liu // Agronomy for Sustainable Development. –2012. – V. 32. – Р. 309–327.



Pages:     | 1 | 2 || 4 |

Похожие работы:

«ФЕДЕРАЛЬНОЕ ГОСУДАРСТВЕННОЕ БЮДЖЕТНОЕ ОБРАЗОВАТЕЛЬНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ ВЫСШЕГО ОБРАЗОВАНИЯ «БАШКИРСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ АГРАРНЫЙ УНИВЕРСИТЕТ» НА ПРАВАХ РУКОПИСИ НИКУЛИНА НЕЛЯ ШАМИЛЕВНА ПРОДУКТИВНЫЕ КАЧЕСТВА И БИОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ КОРОВ ЧЕРНО-ПЕСТРОЙ ПОРОДЫ ПРИ ИСПОЛЬЗОВАНИИ ПРОБИОТИЧЕСКОЙ ДОБАВКИ «БИОГУМИТЕЛЬ-Г» 06.02.10 – частная зоотехния, технология производства продуктов животноводства Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: доктор...»

«РЫЛЬНИКОВ Валентин Андреевич ЭКОЛОГИЧЕСКИЕ ОСНОВЫ И ПОДХОДЫ К УПРАВЛЕНИЮ ЧИСЛЕННОСТЬЮ СИНАНТРОПНЫХ ВИДОВ ГРЫЗУНОВ (на примере серой крысы Rattus norvegicus Berk.) Специальность 03.00.16 – экология Диссертация на соискание ученой степени...»

«Шинкаренко Андрей Семенович Формирование безопасного и здорового образа жизни школьников на современном этапе развития общества Специальность 13.00.01– общая педагогика, история педагогики и образования Диссертация на соискание ученой степени кандидата педагогических наук Научные...»

«Флоринский Игорь Васильевич Теория и приложения математико-картографического моделирования рельефа Специальность 25.00.33 – картография Диссертация на соискание ученой степени доктора технических наук Пущино – 2010 СОДЕРЖАНИЕ Обозначения и сокращения Введение Глава 1 Основные понятия и методы моделирования рельефа 1.1 Цифровые модели рельефа и морфометрические характеристики 1.1.1 Методы...»

«Дулепова Наталья Алексеевна ФЛОРА И РАСТИТЕЛЬНОСТЬ РАЗВЕВАЕМЫХ ПЕСКОВ ЗАБАЙКАЛЬЯ 03.02.01 – Ботаника Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель д.б.н., c.н.с., А.Ю. Королюк Новосибирск – 2014 ОГЛАВЛЕНИЕ ВВЕДЕНИЕ ГЛАВА 1. Материалы и методы исследования 1.1. Район и объект исследования 1.2....»

«Чечулова Анна Васильевна ПРОГНОСТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ НАСЛЕДСТВЕННЫХ И ПРИОБРЕТЕННЫХ ФАКТОРОВ РИСКА ВЕНОЗНОГО ТРОМБОЭМБОЛИЗМА У ПАЦИЕНТОВ МОЛОДОГО ВОЗРАСТА 14.01.21 – гематология и...»

«Коротких Алина Сергеевна БИОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА И СЕЛЕКЦИОННАЯ ОЦЕНКА ВИДОВ И СОРТОВ РОДА NARCISSUS L. В УСЛОВИЯХ ЮГО-ЗАПАДА ЦЧЗ (НА ПРИМЕРЕ БЕЛГОРОДСКОЙ ОБЛАСТИ) 06.01.05 – селекция и семеноводство сельскохозяйственных растений ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой...»

«ПИМЕНОВА ЕКАТЕРИНА ВЛАДИМИРОВНА РАЗРАБОТКА МЕТОДА ОЦЕНКИ ЦИТОТОКСИЧНОСТИ АНТИГЕНОВ ВОЗБУДИТЕЛЯ МЕЛИОИДОЗА IN VITRO НА МОДЕЛИ ПЕРЕВИВАЕМЫХ КЛЕТОЧНЫХ КУЛЬТУР 03.02.03 – микробиология Диссертация на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Научный руководитель: доктор...»

«Берко Татьяна Владимировна ПРОДУКТИВНОСТЬ И ВОСПРОИЗВОДИТЕЛЬНЫЕ КАЧЕСТВА ПТИЦЫ РОДИТЕЛЬСКОГО СТАДА КРОССА «ХАЙСЕКС КОРИЧНЕВЫЙ» ПРИ ИСПОЛЬЗОВАНИИ В КОРМЛЕНИИ ТЫКВЕННОГО ЖМЫХА, ОБОГАЩЕННОГО БИОДОСТУПНОЙ ФОРМОЙ ЙОДА 06.02.10 – частная зоотехния, технология производства продуктов животноводства ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный...»

«Смешливая Наталья Владимировна ЭКОЛОГО-ФИЗИОЛОГИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ РЕПРОДУКТИВНОЙ ФУНКЦИИ СИГОВЫХ РЫБ ОБЬ-ИРТЫШСКОГО БАССЕЙНА 03.02.06 Ихтиология Диссертация на соискание учёной степени кандидата биологических наук Научный руководитель кандидат биологических наук, доцент Семенченко С.М. Тюмень – 2015 ОГЛАВЛЕНИЕ...»

«СИДОРОВА ТАТЬЯНА АЛЕКСАНДРОВНА ОСОБЕННОСТИ АДАПТИВНЫХ РЕАКЦИЙ У ДЕВУШЕК К УСЛОВИЯМ ГОРОДСКОЙ СРЕДЫ 03.02.08 Экология Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: доктор биологических наук, доцент Драгич О.А. Омск-2015 СОДЕРЖАНИЕ Введение.. Глава 1 Обзор литературы.. 1.1. Механизмы адаптации организма человека к окружающей среде 1.2. Закономерности развития...»

«СЕРГЕЕВА ЛЮДМИЛА ВАСИЛЬЕВНА ПРИМЕНЕНИЕ БАКТЕРИАЛЬНЫХ ЗАКВАСОК ДЛЯ ОПТИМИЗАЦИИ ФУНКЦИОНАЛЬНО-ТЕХНОЛОГИЧЕСКИХ СВОЙСТВ МЯСНОГО СЫРЬЯ И УЛУЧШЕНИЯ КАЧЕСТВА ПОЛУЧАЕМОЙ ПРОДУКЦИИ Специальность 03.01.06 – биотехнология ( в том числе бионанотехнологии) Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель Доктор биологических наук, профессор Кадималиев Д.А. САРАНСК 2014 ОГЛАВЛЕНИЕ ВВЕДЕНИЕ.....»

«Мухачева Татьяна Александровна МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЕЙ ИКСОДОВОГО КЛЕЩЕВОГО БОРРЕЛИОЗА В ПРИРОДНЫХ ОЧАГАХ НА ТЕРРИТОРИИ РОССИИ 03.02.03 – микробиология Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: Ковалев Сергей Юрьевич,...»

«РОМАНЕНКО НИКОЛАЙ АЛЕКСАНДРОВИЧ АНЕМИЯ У БОЛЬНЫХ ОНКОГЕМАТОЛОГИЧЕСКИМИ ЗАБОЛЕВАНИЯМИ: ОСОБЕННОСТИ ПАТОГЕНЕЗА, МЕТОДЫ КОРРЕКЦИИ, КАЧЕСТВО ЖИЗНИ 14.01.21. – гематология и переливание крови Диссертация на соискание ученой степени доктора медицинских наук Научный консультант – доктор медицинских наук, профессор...»

«ТИТОВА СВЕТЛАНА АНАТОЛЬЕВНА Влияние фитопатогенных микроорганизмов на энзиматическую активность растения-хозяина Glycine max (L.) Merr. и Glycine soja Sieb. et Zucc. 03.02.08 ЭКОЛОГИЯ Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: к.б.н., доцент Семенова Е.А. БЛАГОВЕЩЕНСК –...»

«БОЛГОВА Светлана Борисовна РЫБНЫЕ КОЛЛАГЕНЫ: ПОЛУЧЕНИЕ, СВОЙСТВА И ПРИМЕНЕНИЕ Специальность: 05.18.07 Биотехнология пищевых продуктов и биологических активных веществ Диссертация на соискание ученой степени кандидата технических наук Научный руководитель: Заслуженный деятель науки РФ, доктор технических наук, профессор Антипова...»

«Владимирова Элина Джоновна ИНФОРМАЦИОННЫЕ АСПЕКТЫ ВЗАИМОДЕЙСТВИЙ ЛЕСНОЙ КУНИЦЫ И НЕКОТОРЫХ ВИДОВ ХИЩНЫХ МЛЕКОПИТАЮЩИХ СО СРЕДОЙ ОБИТАНИЯ (CARNIVORA: CANIDAE ET MUSTELIDAE) Том 1 03.02.08 – экология, 03.02.04 – зоология Диссертация на соискание...»

«ПОДОЛЬНИКОВА ЮЛИЯ АЛЕКСАНДРОВНА ОСОБЕННОСТИ СВОБОДНОРАДИКАЛЬНОГО СТАТУСА МОЛОКА КОРОВ УРБАНИЗИРОВАННОЙ ТЕРРИТОРИИ (НА ПРИМЕРЕ ОМСКОЙ ОБЛАСТИ) Специальность: 03.02.08 – экология ДИССЕРТАЦИЯ на соискание степени кандидата биологических наук Научный руководитель: Заслуженный работник высшей школы РФ доктор...»

«ТУНЁВ ВИТАЛИЙ ЕВГЕНЬЕВИЧ ЭКОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ, ДИНАМИКА ЧИСЛЕННОСТИ И ПРОМЫСЕЛ ПЕЛЯДИ Coregonus peled (Gmelin, 1789) ТАЗОВСКОГО БАССЕЙНА Специальность 03.02.08 – экология (биология) 03.02.06 – ихтиология Диссертация на соискание учёной степени кандидата биологических наук Научный руководитель:...»

«Алексеев Иван Викторович РАЗВИТИЕ КОМПЛЕКСНОГО ИНЖЕНЕРНО-ГЕОЛОГИЧЕСКОГО И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОГО МОНИТОРИНГА НА ЯКОВЛЕВСКОМ РУДНИКЕ ДЛЯ ПОВЫШЕНИЯ БЕЗОПАСНОСТИ ВЕДЕНИЯ ОЧИСТНЫХ РАБОТ ПОД НЕОСУШЕННЫМИ ВОДОНОСНЫМИ ГОРИЗОНТАМИ Специальность 25.00.08 – Инженерная геология,...»







 
2016 www.konf.x-pdf.ru - «Бесплатная электронная библиотека - Авторефераты, диссертации, конференции»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.