WWW.KONF.X-PDF.RU
БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА - Авторефераты, диссертации, конференции
 


Pages:   || 2 | 3 |

«ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫЕ ВТОРИЧНЫЕ ИММУНОДЕФИЦИТНЫЕ СОСТОЯНИЯ И ИХ ФАРМАКОТЕРАПИЯ РАСТИТЕЛЬНЫМИ СРЕДСТВАМИ ...»

-- [ Страница 1 ] --

На правах рукописи

ХОБРАКОВА ВАЛЕНТИНА БИМБАЕВНА

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫЕ

ВТОРИЧНЫЕ ИММУНОДЕФИЦИТНЫЕ СОСТОЯНИЯ

И ИХ ФАРМАКОТЕРАПИЯ

РАСТИТЕЛЬНЫМИ СРЕДСТВАМИ

06.02.01 – диагностика болезней и терапия животных,

патология, онкология и морфология животных

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук

Благовещенск – 2012

Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном учреждении науки «Институт общей и экспериментальной биологии» Сибирского отделения Российской академии наук

Научный консультант:

доктор медицинских наук, профессор Николаев Сергей Матвеевич

Официальные оппоненты:

Хибхенов Лопсондоржо Владимирович, доктор биологических наук, профессор, ФГБОУ ВПО «Бурятская государственная сельскохозяйственная академия им. В.Р.

Филиппова» Министерства сельского хозяйства РФ, кафедра анатомии, гистологии и патоморфологии, заведующий кафедрой Овчаренко Нина Дмитриевна, доктор биологических наук, профессор, ФГБОУ ВПО «Алтайский государственный аграрный университет» Министерства сельского хозяйства РФ, кафедра общей биологии, физиологии и морфологии животных, заведующий кафедрой Кушеев Чингис Беликтуевич, доктор ветеринарных наук, профессор, ФГБОУ ВПО «Иркутская государственная сельскохозяйственная академия» Министерства сельского хозяйства РФ, кафедра специальных ветеринарных дисциплин, профессор кафедры

Ведущая организация: ФГБОУ ВПО «Якутская государственная сельскохозяйственная академия» Министерства сельского хозяйства РФ

Защита диссертации состоится «28» ноября 2012 года в 10 00 часов на заседании диссертационного совета Д 220.027.02 при ФГБОУ ВПО «Дальневосточный государственный аграрный университет» по адресу: 675005, г. Благовещенск, ул.

Политехническая, 86.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГБОУ ВПО «Дальневосточный государственный аграрный университет».

Автореферат разослан “ ” _______________2012 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, кандидат биологических наук О.Л. Самусенко

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. В настоящее время актуальной является проблема развития и коррекции состояний, сопровождающихся нарушением функционирования иммунной системы организма. Интенсивные исследования в последние десятилетия в области теоретической и клинической иммунологии способствовали выявлению широкого круга заболеваний, обусловленных дисфункцией различных звеньев иммунитета и требующих иммунокорригирующей терапии. Поиск средств и способов регуляции иммунологической реактивности организма человека и животных стал одним из приоритетных направлений развития современной медицины и ветеринарии (Астафьева Н.Г. и др., 2008; Енукашвили А.И., 2011; Иванова С.Ф., Сухинин А.А., 2011; Нестерова И.В., 2008; Хаитов Р.М., Пинегин Б.В., 2005; Gertsch J. et al., 2011;

Kumar S. et al., 2011; Luss L.V., 2005; Margalit M., 2005; Wagner H., 1991).

Потребность в лекарственной коррекции нарушенных функций организма в настоящий момент ощущается особенно остро. Воздействие неблагоприятных экологических факторов, стрессовые ситуации, применение некоторых лекарственных препаратов (в первую очередь глюкокортикоидов, антибиотиков, цитостатиков, туберкулостатиков и др.) неизбежно приводят к нарушению иммунного статуса организма. Иммунная недостаточность приводит к снижению эффективности проводимой фармакотерапии, способствует активизации условно-патогенной микрофлоры, смене возбудителя и к суперинфекции, что, в свою очередь, приводит к затяжному течению болезни, тяжелым осложнениям, а в ряде случаев – к летальному исходу. Поэтому восстановление функциональной активности иммунной системы является непременным условием успеха комплексной терапии различных патологических состояний (Винницкий Л.И. и др., 2008; Клевцова М.Н., 2008; Лебедева М.И., 2011; Локтионов А.Л., 2011; Лунев М.А. и др., 2011; Мухамадиева Л.Р., 2011;

Фомин В.В. и др., 2008; Bisheva I.V. et al., 2005; Karaulov A.V., Kokushkov D.V., 2005;

Vitkovsky Yu., 2005). В связи с этим, оправдан значительный интерес исследователей к использованию средств, способных предупреждать и корригировать нарушения в иммунной системе организма. Арсенал современных иммуномодуляторов представлен, в основном, синтетическими лекарственными средствами. Лишь в последние десятилетия начали уделять внимание средствам природного происхождения.

Иммуноактивные продукты высших растений, изученные в наименьшей степени, в отличие от синтетических имеют ряд преимуществ: мягкое иммуномодулирующее действие, низкая токсичность, способность к активации функций не только иммунной, но и нервной и эндокринной систем, благодаря наличию биологически активных веществ, оказывающих комплексное воздействие на организм в целом (Бакуридзе А.Д.

и др., 1993; Борсук О.С. и др., 2011; Лазарева Д.Н. и др., 2005; Gertsch J. et al., 2011;

Kumar S. et al., 2011; Wagner H., 1991).

К настоящему времени вопросы патогенеза вторичных иммунодефицитных состояний, а также методологические аспекты иммунокоррекции, несмотря на их актуальность и значимость, в литературе отражены отрывочно и крайне недостаточно (Бедулева Л.В., Меньшиков И.В., 2008; Угнич К.А.и др., 2008; Шмагель К.В., 2008;

Browne S.K., Holland S.M., 2010; Matsumoto K., 1982; Sanz J.M. et al., 2009; Yoshikazu M., Routes J.M., 2008). Имеющиеся сведения о влиянии метаболитов лекарственных растений на иммунную систему носят скрининговый характер или являются фрагментарными. Практически не изучено протекторное действие иммуномодуляторов растительного происхождения в условиях иммуносупрессии, а также не ясными остаются многие аспекты механизма иммуномодулирующего действия большинства фитопрепаратов.

Изложенные обстоятельства обосновывают необходимость продолжения поиска средств, обладающих иммунопротекторным действием, безопасных для организма, эффективных при применении в условиях вторичных иммунодефицитов. Подобным требованиям соответствуют средства из лекарственных растений, приготовленные из отечественного сырья.

Таким образом, решение проблем диагностики, профилактики и лечения вторичной иммунной недостаточности организма зависит как от всестороннего изучения морфофункциональных показателей состояния иммунной системы в норме и в условиях патологии, так и от выбора эффективных лекарственных средств, рекомендуемых в качестве иммуномодуляторов.

Целью исследования явилось определение особенностей нарушений функций иммунной системы, вызванных цитостатиком азатиоприном, антибиотиком канамицином и туберкулостатиками, и оценка эффективности растительных средств при экспериментальных вторичных иммунодефицитах.

Для достижения указанной цели были сформулированы следующие задачи:

1) определить влияние цитостатика азатиоприна, антибиотика канамицина и туберкулостатиков: изониазида, рифампицина, пиразинамида, стрептомицина на функциональное состояние клеточного, гуморального и макрофагального звеньев иммунитета и оценить их влияние на процессы свободнорадикального окисления липидов и активность ферментов антиоксидантной защиты организма;

2) изучить морфофункциональное состояние центрального органа иммунной системы – тимуса при экспериментальной иммунодепрессии, вызванной цитостатиком азатиоприном;

3) оценить иммунокорригирующие свойства моноэкстрактов – сухих экстрактов пятилистника кустарникового, сабельника болотного, софоры желтоватой в отношении основных звеньев иммунной системы организма при моделировании вторичных иммунодефицитов, вызванных применением азатиоприна, канамицина и туберкулостатиков;

4) оценить влияние многокомпонентных растительных средств (сухих полиэкстрактов «Иммунополифит», «Фитоуросепт», «Нефрофит») на состояние клеточного, гуморального и макрофагального звеньев иммунной системы организма при иммуносупрессии;

5) изучить влияние основных индивидуальных соединений растительного происхождения на состояние основных звеньев иммунной системы организма при иммунодепрессии;

6) сопоставить эффективность исследуемых растительных средств и препарата сравнения – экстракта элеутерококка колючего по отношению к основным звеньям иммунитета в условиях иммуносупрессии;

7) выявить основные молекулярно-клеточные механизмы иммуномодулирующего действия растительных средств.

Научная новизна.

Проведены комплексные экспериментальные исследования по влиянию цитостатика азатиоприна, антибиотика канамицина и туберкулостатиков:

изониазида, рифампицина, пиразинамида, стрептомицина на морфофункциональное состояние иммунной системы организма экспериментальных животных (мышей, белых крыс) и обоснована возможность и целесообразность коррекции растительными средствами вторичных иммунодефицитов. Установлено, что воздействие данных ксенобиотиков на организм животных сопровождается резким угнетением показателей клеточного, гуморального и макрофагального звеньев иммунного ответа. Введение цитостатика азатиоприна вызывает резкие изменения морфофункционального состояния центрального органа иммуногенеза – тимуса интактных животных, характеризующиеся инволюцией, инверсией слоев и сосудистыми нарушениями, связанными, прежде всего, с уменьшением количества клеток лимфоидного ряда, а также жировым перерождением органа. Установлена важная роль активации процессов свободнорадикального окисления липидов, угнетения эндогенной антиоксидантной системы организма и связанной с этим деструкции мембранных структур иммунокомпетентных клеток в патогенезе вторичных иммунодефицитных состояний независимо от природы повреждающего фактора.

В работе впервые установлена выраженная иммуномодулирующая активность растительных лекарственных средств – моноэкстрактов (сухих экстрактов пятилистника кустарникового, сабельника болотного, софоры желтоватой), многокомпонентных растительных средств (сухих полиэкстрактов «Иммунополифит», «Фитоуросепт», «Нефрофит»), а также индивидуальных соединений растительного происхождения в экспериментально-терапевтических дозах на показатели основных звеньев иммунной системы при вторичных иммунодефицитах.

Определены особенности иммуномодулирующего действия испытуемых средств и их фармакотерапевтическая направленность при иммунодепрессиях. Показано, что сухой экстракт пятилистника кустарникового наиболее эффективен в отношении клеточного звена, сухой экстракт софоры желтоватой – гуморального звена, сухой экстракт сабельника болотного – макрофагального звена иммунного ответа. Курсовое введение животным сухого экстракта пятилистника кустарникового в условиях иммуносупрессии нормализует морфофункциональное состояние тимуса, что выражается в восстановлении структурных компонентов тимуса.

Установлена выраженная иммуномодулирующая активность индивидуальных соединений: моноглюкозида сирингарезинола из скорцонеры испанской, флаванонов из софоры желтоватой (софорафлаванон G и кураринон), а также полисахаридов при экспериментальной иммунодепрессии. Показана зависимость степени выраженности иммуномодулирующей активности полисахаридов от их структуры: чем больше степень разветвления, тем выше активность.

Доказана важная роль усиления антигенпрезентирующей функции макрофагов при азатиоприновой иммуносупрессии, повышения продукции противовоспалительных (ILIL-10) и снижения провоспалительного (IL-8) цитокинов мононуклеарными клетками тимэктомированных животных; угнетения супрессорной активности Т-лимфоцитов у иммунизированных животных; снижения продукции стимулированными макрофагами периферической крови здоровых доноров провоспалительных (IL-1, TNF-) цитокинов, стимуляции экспрессии маркеров Т-лимфоцитов (СD4) мононуклеарами здоровых доноров в механизме иммуномодулирующего действия сухого экстракта пятилистника кустарникового. Общим молекулярно-клеточным механизмом в иммуномодулирующем действии растительных средств является их способность стабилизировать мембраны иммунокомпетентных клеток, реализация которой связана с ингибированием процессов свободнорадикального окисления липидов и повышением активности ферментов антиоксидантной защиты организма.

Практическое значение. Полученные результаты вносят вклад в развитие биологии и ветеринарной медицины, поскольку они расширяют представления о механизмах развития вторичной иммунной недостаточности и аргументируют необходимость коррекции дисфункций иммунной системы организма животных и человека.

Результаты исследований дополняют представления о степени угнетающего действия различных факторов (в том числе цитостатика азатиоприна) на тимус, как центральный орган иммунной системы, и должны учитываться в комплексной оценке последствий этих воздействий на организм.

Экспериментально обоснована возможность и целесообразность коррекции растительными средствами вторичных иммунодефицитов, что позволяет рекомендовать их для лечения и профилактики иммунодефицитных состояний у животных и человека в качестве как самостоятельных кормовых и пищевых биологически активных добавок, так и биологически активных компонентов кормового рациона животных и продуктов профилактического назначения.

Результаты проведенных исследований включены в полный отчет по доклиническим испытаниям сухого экстракта пятилистника кустарникового, который представлен в Фармкомитет Минздравсоцразвития РФ для получения разрешения на его клиническое изучение в качестве лекарственного препарата, предназначенного для лечения и профилактики иммунодефицитных состояний, а также в отчеты по доклиническим испытаниям сухих экстрактов сабельника болотного, «Нефрофита», «Фитоуросепта».

Материалы исследований включены в учебное пособие «Основы иммунодиагностики и иммунокоррекции», рекомендованное Учебно-методическим объединением по медицинскому и фармацевтическому образованию вузов России в качестве учебного пособия для системы послевузовского профессионального образования врачей, и используются в учебном процессе на кафедрах общей патологии человека;

фармакологии, клинической фармакологии и фитотерапии медицинского факультета Бурятского государственного университета; анатомии, гистологии и патоморфологии Бурятской государственной сельскохозяйственной академии им. В.Р. Филиппова;

внутренних незаразных болезней, клинической диагностики и фармакологии Иркутской государственной сельскохозяйственной академии и Башкирского государственного аграрного университета. По результатам исследований получен 1 патент РФ (№ 2178709 от 27.01.2002 «Способ получения вещества, обладающего иммуномодулирующей активностью») и 3 Регистрационных удостоверения Минздравсоцразвития РФ на биологически активные добавки к пище – Экстракт пятилистника кустарникового (РУ № 77.99.11.3.У.3233.4.10), «Нефрофит» (РУ №

005449.Р643.07.2003) и «Фитоуросепт» (РУ № 005463.Р643.06.2003).

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Особенности иммунодепрессивного действия цитостатика азатиоприна, антибиотика канамицина и туберкулостатиков; важная роль индукции свободнорадикальных процессов и связанной с этим деструкции мембранных структур иммунокомпетентных клеток в механизме развития вторичных иммунодефицитных состояний.

2. Морфофункциональное состояние центрального органа иммуногенеза - тимуса интактных животных под влиянием цитостатика азатиоприна, характеризующееся инволюцией, инверсией слоев и сосудистыми нарушениями, связанными, прежде всего, с уменьшением количества клеток лимфоидного ряда, а также жировым перерождением органа; восстановление нарушенной структуры тимуса в условиях коррекции сухим экстрактом пятилистника кустарникового.

3. Особенности иммуномодулирующего действия растительных средств:

моноэкстрактов (преимущественное влияние сухого экстракта пятилистника кустарникового в отношении клеточного, сабельника болотного – макрофагального и софоры желтоватой – гуморального звеньев иммунной системы) и многокомпонентных растительных средств (сухих полиэкстрактов «Иммунополифит», «Фитоуросепт», «Нефрофит»).

4. Особенности иммуномодулирующего действия индивидуальных соединений из лекарственных растений: моноглюкозида сирингарезинола из скорцонеры испанской, флаванонов из софоры желтоватой (софорафлаванон G и кураринон), а также полисахаридов.

5. Эффективность исследуемых растительных средств сопоставима с таковой препарата сравнения - экстракта элеутерококка колючего по отношению к основным звеньям иммунитета в условиях иммуносупрессии.

6. Важная роль усиления антигенпрезентирующей функции макрофагов, угнетения супрессорной активности Т-лимфоцитов, стимуляции экспрессии маркеров Тлимфоцитов (СD4), повышения содержания противовоспалительных цитокинов (IL-4, IL-10), снижения продукции провоспалительных цитокинов (IL-1, IL-8, TNF-) в механизме иммуномодулирующего действия сухого экстракта пятилистника кустарникового; способность ингибировать процессы свободнорадикального окисления липидов как один из общих молекулярно–клеточных механизмов в действии растительных средств при экспериментальных вторичных иммунодефицитах.

Апробация материалов диссертации. Основные положения диссертации доложены и обсуждены на: VIII, IX, X, XI Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2001, 2002, 2003, 2004); Всероссийском конгрессе «Традиционная медицина-2000» (Москва, 2000); VI Всероссийской конференции по патологии клетки (с международным участием) (Москва, 2000); Международной научно-практической конференции «Флора, растительность и растительные ресурсы Забайкалья» (Новосибирск, 2000); Всероссийской научной конференции «Разработка и внедрение новых методов и средств традиционной медицины» (Москва, 2001);

Сибирском конкурсе молодых ученых «Терапия и фундаментальные науки – перспективы содружества в новом тысячелетии» (Новосибирск, 2001); V, VIII, Х, XI Международном конгрессе «Современные проблемы аллергологии, иммунологии и иммунофармакологии» (Москва, 2002, 2007, 2011, Казань, 2009); II Международном конгрессе «Эндоэкологическая медицина. Терапия, оздоровление, профилактика в условиях кризиса экологии организма» (Москва-Халкидики, 2002); Международной научно-практической конференции «Химия и применение природных и синтетических биологически активных соединений» (Алматы, 2004); VI Симпозиуме по фенольным соединениям (Москва, 2004); Международной конференции «Дорно-орнийн анагаах ухааны хосолмол тогтолцоо» (Уланбатор, 2005); The Second International Symposium on Chemistry of Herbal Medicine and Mongolian Drug (Ulaanbaatar, 2006); Second International Сonference on «Traditional medicine: current situation and future status» (Ulaanbaatar, 2006);

III International Scientific Conference «Traditional medicine: a current situation and perspectives of development» (Ulan-Ude, 2008); Национальной конференции «Аллергология и клиническая иммунология – междисциплинарные проблемы»

(Москва, 2008); Международном иммунологическом форуме (Санкт-Петербург, 2008, 2011); The 4th International Symposium on Traditional Medicine and Innovative Drugs (Erdos, 2009); Межрегиональном форуме «Актуальные вопросы аллергологии и иммунологии – междисциплинарные проблемы» (Санкт-Петербург, 2010); International scientific conference «Current situation and future trends of drug research and development from natural sources» (Ulaanbaatar, 2010); 5th International symposium on present situation and future development of Mongolian traditional medicine (Ulaanbaatar, 2011);

Национальной конференции «Клиническая иммунология и аллергология – практическому здравоохранению» (Москва, 2012).

Связь задач исследований с проблемным планом НИР. Работа выполнена в Отделе биологически активных веществ ФГБУН ИОЭБ СО РАН в соответствии с комплексной научной программой «Создание информационного банка данных по тибетской медицине и разработка новых лекарственных препаратов» (№ государственной регистрации 01.

9.40003183); интеграционным проектом СО РАН № 54 «Научные основы разработки новых лекарственных средств. Перспективы использования возобновляемого сырья»; проектом № 146 «Разработка лекарственных и профилактических препаратов для медицины. Фундаментальные основы и реализация», утвержденным Президиумом СО РАН; Лаврентьевским конкурсом проектов СО РАН № 6.22 «Структурно-функциональное исследование биополимеров растительного и базидиального происхождения как соединений с иммуностимулирующей, противовоспалительной и антиоксидантной активностью».

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 160 научных работ, из них 56 статей – в периодических изданиях, рекомендованных ВАК МО и науки РФ, в том числе 3 статьи – в зарубежных журналах; 1 монография, получен 1 патент РФ на изобретение.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 280 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследований, результатов собственных исследований (5 глав), обсуждения, заключения, выводов, практических рекомендаций, списка использованной литературы, приложений. Работа иллюстрирована 64 таблицами и 38 рисунками, в том числе 27 микрофотографиями. Список литературы включает 466 источников, из них 338 отечественных и 128 иностранных.

MАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Для проведения экспериментальных исследований использовали 856 половозрелых мышей самцов линии СВА, 1475 гибридов F1 (СВАС57Вl/6) массой 18-20 г. и 480 белых крыс линии Wistar обоего пола массой 150-220 г. Животные находились в стандартных условиях содержания в виварии ФГБУН ИОЭБ СО РАН на обычном для указанных видов животных рационе (Приказ МЗ СССР № 1179 от 10.10.83 г.). Эксперименты проводили в соответствии с «Правилами проведения работ с использованием экспериментальных животных» (Приложение к приказу МЗ СССР № 755 от 12.08.77 г.) и «Правилами Европейской конвенции по защите позвоночных животных, используемых для экспериментальных и иных научных целей». Эвтаназию животных осуществляли методом мгновенной декапитации под легким эфирным наркозом. Протокол исследования согласован с этическим комитетом Института общей и экспериментальной биологии СО РАН (протокол №4 от 19.04.2000).

Экспериментальный иммунодефицит моделировали введением мышам цитостатика азатиоприна (АЗ) и антибиотика канамицина (КН) в дозе 50 мг/кг ежедневно перорально в течение 5 дней; противотуберкулезных препаратов (ПТП) (изониазид, рифампицин вводили в дозе 10 мг/кг, пиразинамид – 25 мг/кг, стрептомицин – 15 мг/кг).

Изониазид, рифампицин, пиразинамид вводили животным в смеси перорально, стрептомицин – внутрибрюшинно. ПТП использовали в виде водного раствора ежедневно в течение 7 дней. Экспериментальный иммунодефицит, вызванный тимэктомией, воспроизводили на белых крысах линии Wistar массой 150-220 г. (Адамян Р.Х., 1975; Анисимова В.П. и др., 1985).

В качестве объектов исследования были использованы моноэкстракты из лекарственных растений и полиэкстракты – многокомпонентные растительные средства, а также индивидуальные соединения из лекарственных растений, полученные в лаборатории химико-фармацевтических исследований Отдела биологически активных веществ ФГБУН ИОЭБ СО РАН по новой щадящей и ресурсосберегающей технологии, позволяющей получить максимальный выход действующих веществ из растительного сырья:

1. Сухой экстракт из побегов пятилистника кустарникового (Pentaphylloides fruticosa (L.) O. Schwarz) (зарегистрирован как БАД к пище «Арура-тан» №8) (ЭПК). В состав экстракта входят флавоноиды, дубильные вещества конденсированного и гидролизуемого типа, фенолкарбоновые кислоты, полисахариды, тритерпеновые сапонины, кумарины, аминокислоты. Содержание суммы флавоноидов в пересчете на рутин – не менее 10%, дубильных веществ – не менее 25%.

2. Сухой экстракт из корней и корневищ сабельника болотного (Comarum palustre L.) (ЭСБ). В составе экстракта сумма полифенольных соединений, аминокислоты, полисахариды. Содержание суммы полифенольных соединений в пересчете на (+)катехин – не менее 40%.

3. Сухой экстракт из корневищ софоры желтоватой (Sophora flavescens Soland.) (ЭСЖ). Полученный экстракт представляет сумму экстрактивных веществ, представленных флавоноидами, тритерпенами и алкалоидами. Флавоноидный состав в основном представлен пренилированными производными флаванона и халкона.

Содержание суммы пренилированных флаванонов в пересчете на кураринон – не менее 10%.

4. Полиэкстракт «Иммунополифит» (условное название) представляет собой восьмикомпонентный сухой экстракт, полученный из корней солодки голой (Glycyrrhiza glabra L.) и вздутоплодника сибирского (Phlojodicarpus sibiricus (Steph.ex Spreng.) K.-Pol., семян льна обыкновенного (Linum usitatissimum L.), плодов лимонника китайского (Schisandra chinensis (Turcz.) Baill.) и шиповника иглистого (Rosa L.), травы горца птичьего (Polygonum aviculare L.) и пустырника сердечного (Leonurus cardiaca L.), соцветий календулы лекарственной (Calendula officinalis L.) в соотношении 2,5:1,0:0,5:1,0:1,5:1,0:1,5:1,0 масс. частей. В составе экстракта идентифицированы флавоноиды (лютеолин, гиперозид, рутин, мирицетин), фенолкарбоновые кислоты (галловая, коричная, кофейная), высшие жирные кислоты, аминокислоты, аскорбиновая

–  –  –

в) полисахариды из аира болотного (Acorus calamus L.), астрагала перепончатого (Astragalus membranaceus (Fisch.) Bunge), софоры желтоватой (Sophora flavescens Soland.), мяты перечной (Mentha piperita L.), зопника клубненосного (Phlomoides tuberosa (L.) Moench), шлемника байкальского (Scutellaria baicalensis Georgi), кардамона настоящего (Elettaria cardamomum (L.) Maton), имбиря лекарственного (Zingiber officinale Roscoe.), лиственницы сибирской (Larix sibirica Ledeb.).

Растительные средства вводили опытным группам мышей в экспериментальнотерапевтических дозах 40-300 мг/кг перорально 1 раз в сутки в течение 14 дней.

Интактная группа животных получала по аналогичной схеме в соответствующем объеме очищенную воду. В качестве препарата сравнения использовали аптечный экстракт элеутерококка колючего жидкий (ЭЭК; ЗАО Вифитех) в объеме 5мл/кг перорально 1 раз в сутки в течение 14 дней после предварительного освобождения от спирта, а также аптечный препарат Иммунал (Sandoz) в объеме 5 мл/кг 1 раз в сутки в течение 14 дней. Препараты сравнения вводили в изоэффективных дозах. Контрольная группа животных с иммунодефицитом получала эквивалентный объем очищенной воды в аналогичном режиме.

Определение относительной массы и клеточности центральных и периферических органов иммунной системы проводили по общепринятой методике (Методические рекомендации..., 1992). Состояние клеточного иммунитета оценивали в реакциях «трансплантат против хозяина» (РТПХ) по В.Тессеневу (1979) и гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ) согласно стандартной методике локальной ГЗТ (Петров Р.В. и др., 1987). Исследование супрессорной активности Тлимфоцитов проводили в соответствии с (Методическими рекомендациями...,1989).

Состояние гуморального иммунитета оценивали по количеству антителообразующих клеток (АОК) (Cunningham A.J, 1965). Фагоцитарную активность перитонеальных макрофагов (ПМ) мышей в отношении Staphyllococcus aureus исследовали in vitro по методике, описанной И.С. Фрейдлин (1976), при этом оценивали фагоцитарный индекс (количество макрофагов, поглотивших S. аureus, из 100 подсчитанных макрофагов) и фагоцитарное число (количество микробных клеток в одном макрофаге); в отношении частиц коллоидной туши – согласно (Руководство…, 2005). Исследование антигенпрезентирующей функции макрофагов проводили согласно методическим рекомендациям (Имельбаева Э.А., 1996). Поглотительную активность фагоцитов оценивали методом цитофлуориметрии на проточном цитофлюориметре Cytomics FC 500 (Beckman Coulter, США), используя в качестве объекта для фагоцитоза St. aureus, меченный зеленым флюорохромом флюоресцеин-5-изотиоцианатом (ФИТЦ).

Вычисляли фагоцитарный индекс – количество фагоцитов, поглотивших меченные микроорганизмы, к общему числу фагоцитов (Пинегин Б.В. и др., 2001). Продукцию активных форм кислорода оценивали цитофлуориметрически в тесте кислородного «взрыва», индуцированного классическим стимулятором – форбол-12-миристат-13ацетатом (ФМА) с флуорогенным субстратом дигидрородамином-123 (ДГР-123).

Активность нейтрофилов анализировали по интенсивности свечения красителя ДГРс помощью проточной цитометрии на проточном цитофлюориметре Cytomics FC

500. Определяли процент активированных нейтрофилов, а также показатели спонтанной и стимулированной интенсивности флуоресценции (Пинегин Б.В. и др., 2001). Пролиферативную активность Т- и В-лимфоцитов селезенки мышей изучали in vitro в реакции бластной трансформации в присутствии митогенов: конканавалина А (Кон А) и липополисахарида (ЛПС) по включению 3Н-тимидина с использованием сцинтилляционного счетчика Triathler (Hidex) согласно (Руководство…, 2005).

Определение влияния экстрактов на экспрессию кластеров дифференцировки на лимфоцитах человека проводили на проточном цитофлуориметре Epics XL-MCL (Beckman Coulter, США) с использованием стандартных наборов Immunotech (Франция). Выявляли следующие субпопуляции Т-лимфоцитов (CD3+): Т-хелперы (CD4+), цитотоксические лимфоциты (ЦТЛ) (CD8+), NK-клетки (CD16+) и B-клетки (CD19+). Продукцию провоспалительных цитокинов (IL-1, IL-6, TNF-) макрофагами периферической крови здоровых доноров, а также содержание провоспалительных (ILIL-8, ФНО-) и противовоспалительных (IL-4, IL-10) цитокинов при экспериментальной иммунодепрессии, вызванной тимэктомией, определяли путем иммуноферментного анализа.

Для оценки влияния ксенобиотиков и фитосредств на процессы перекисного окисления липидов (ПОЛ) и состояние эндогенной антиоксидантной системы (АОС) организма использовали методы in vivo и in vitro. Концентрацию ТБК-активных продуктов определяли спектрофотометрически в сыворотке крови (Темирбулатов Р.А., Селезнев Е.И., 1981) и в гомогенате селезенки (Стальная И.Д., Гаришвили Т.Д., 1977).

Содержание диеновых конъюгатов (ДК) в сыворотке крови определяли спектрофотометрическим методом (Гаврилов В.Б., Мишкорудная М.И., 1983). Для оценки состояния эндогенной АОС в сыворотке крови определяли активность ферментов: супероксиддисмутазы (СОД) (Чевари С. и др., 1985) и каталазы (Королюк М.А. и др., 1988). Оценку антиоксидантной активности фитосредств проводили с использованием ряда методов в условиях in vitro. Определение влияния испытуемых средств на скорость генерации супероксидного анион-радикала O2•-, осуществляли по Chen A.-S. с соавт. (2003). Способность к инактивации молекул NO определяли по методу Govindarajan R. с соавт. (2003). Общую антиоксидантную активность определяли по методу Preito с соавт. (1999). Антирадикальную активность определяли с использованием двух свободных радикалов: нейтрального радикала 1,1-дифенил-2пикрилгидразила (DPPH) и катион-радикала 2,2'-азино-бис(3-этилбензотиазолин-6сульфоновой кислоты) (ABTS•+) спектрофотометрическим методом по Seyoum A. с соавт. (2006) и Ding H. с соавт. (2010). Способность к хелатированию ионов Fe2+ выявляли спектрофотометрическим о-фенантролиновым методом (Оленников Д.Н. и др., 2008).

Гистоморфологические исследования тимуса проводили при помощи общепринятой методики (Коржевский О.Э., Гиляров А.В., 2010). Тимус извлекали спустя 5 дней после введения азатиоприна в дозе 50 мг/кг и на 5, 10, 15 сутки после введения ЭПК. Материал фиксировали в 10% нейтральном формалине с последующей стандартной спиртовой проводкой и заливкой в парафин. Из парафиновых блоков готовили срезы толщиной 4-6 мкм, которые окрашивали гематоксилином и эозином. Исследование микроанатомии тимуса мышей проводили с помощью морфометрического метода. Для этой цели измеряли толщину капсулы, ширину коркового вещества. Мозговое вещество оценивали по 2-м параметрам длина (продольный разрез тимуса) и ширина (поперечный разрез тимуса). Измерения проводили при помощи микроскопа МБИ-3 при увеличении объектива 10, окуляра 10 с использованием окуляр-микрометра (Автандилов Г.Г., 1990), а также цифрового микроскопа DMW B1-223 (Motic, Германия) с использованием программного обеспечения Motic Images-2000.

Результаты исследований статистически обработаны общепринятыми методами для малой выборки с определением средней величины (М) и ошибки (m). Степень достоверности результатов исследований (Р) оценивали с помощью непараметрического критерия Манна-Уитни. Различие между данными контроля и опыта считали достоверным при вероятности 95% (Р 0,05) (Сергиенко В.И., Бондарева И.Б., 2006).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Характеристика иммунодефицитного состояния, вызванного цитостатиком азатиоприном, антибиотиком канамицином и туберкулостатиками

–  –  –

Использование КН приводило к достоверному снижению индексов реакций ГЗТ и РТПХ на 31% и 35% соответственно, абсолютного и относительного числа АОК на 52% и 47% соответственно, фагоцитарного индекса и фагоцитарного числа на 35% и 61% соответственно по отношению к данным в интактной группе (табл.2).

Полученные результаты о подавляющем действии КН на макрофагальное звено иммунного ответа подтверждает работа В.И. Ратникова, Е.А. Трениной (2000), в которой выявлено подавляющее действие -лактамных антибиотиков – тиенама и ретарпена на активность одного из сильнейших агентов микробицидных систем внутри фагоцитирующих клеток – эндогенной окиси азота (NO), дефицит которого является одной из главных причин незавершенности фагоцитоза. По мнению C.J. Pallister, K.L.

Lewis (2000), для большинства антибиотиков характерно угнетающее воздействие на микробицидные системы нейтрофилов и макрофагов. Вместе с тем, вопрос о взаимодействии антибиотиков и иммунной системы недостаточно изучен. В настоящее время выраженные иммуностимулирующие свойства установлены только у одного цефалоспоринового антибиотика III поколения – цефтазидима (прямое стимулирующее воздействие на функциональное состояние нейтрофилов). Некоторые макролиды (эритромицин, рокситромицин, спирамицин, азитромицин) в терапевтических дозах улучшают основные функции нейтрофилов – адгезию и хемотаксис, благодаря которым они проникают в очаг воспаления. Кроме того, макролиды и фторхинолоны снижают продукцию макрофагами цитокинов провоспалительной направленности – ИЛ-1 и ФНО- (Яковлев С.В., 1999). Однако в большинстве работ, посвященных изучению проблемы влияния антибактериальных препаратов на иммунную систему, полученные результаты свидетельствуют о подавляющих эффектах антибиотиков на состояние защитных сил организма (Смирнов В.С., Фрейдлин И.С., 2000; Хаитов Р.М.

и др., 2000; Krzystyniak R. et al., 1995; Pallister C.J., 2000).

Таблица 2 Влияние ЭПК и ЭЭК на состояние основных звеньев иммунного ответа организма при канамициновой иммуносупрессии у мышей Группы АОК Индекс Индекс Фагоцита Фагоцита АОК на 106 животных реакции реакции рный рное на селезенку (n=10) спленоцитов ГЗТ РТПХ индекс число Интактная 758026593 21027 37,32,4 2,6 0,1 85,37,1 9,41,2 Контрольная 365953563 12211 25,82,2 1,70,1 55,24,3 3,71,1 (КН) КН+ЭПК 704086186* 19317* 35,73,2* 2,80,1* 73,52,9* 8,61,2* КН+ЭЭК 666435234* 17814* 33,52,6* 2,30.1* 68,93,7* 7,41,0* Имеющиеся в литературе данные о воздействии ПТП на состояние иммунной системы организма отражают результаты исследований об их влиянии на отдельные звенья иммунитета - без комплексной оценки их действия на функционирование клеточного, гуморального звеньев иммунного ответа, систему фагоцитоза. При этом следует отметить разрозненный, неполный характер исследований: рассматривается действие лишь отдельных туберкулостатиков, данные об их совместном влиянии отсутствуют (Князева Л.И. и др., 1996; Александрова А.Е. и др., 1996). Нами установлено, что введение мышам смеси ПТП также приводило к достоверному снижению индексов реакций ГЗТ и РТПХ на 30% и 25% соответственно, абсолютного и относительного числа АОК на 44% и 32% соответственно, фагоцитарного индекса и фагоцитарного числа на 38% и 63% соответственно по отношению к данным в интактной группе (табл.3).

Таким образом, результаты проведенных исследований свидетельствуют об угнетающем действии АЗ, КН и ПТП на основные звенья системы иммунитета.

Большой теоретический и практический интерес представляют изменения в тимусе

–  –  –

Отсутствие в литературе сведений о влиянии АЗ на структуру тимуса - центрального органа иммуногенеза послужило поводом для исследования микроанатомии данного органа. При морфометрическом исследовании тимуса проводился анализ соотношения структурных компонентов, что, по мнению М.Р. Сапина (1988), позволяет лучше понять строение иммунных структур, сравнивать их между собой и оценивать их в динамике.

Полученные в работе данные убедительно показывают, что тимус обладает высокой чувствительностью к воздействию АЗ и отвечает значительными морфофункциональными перестройками. Морфометрическими исследованиями удалось доказать, что воздействие АЗ вызывает резкие изменения в микроанатомии структурных компонентов тимуса. Так, у мышей после воздействия АЗ наблюдалось значительное уменьшение массы тимуса, что согласуется с исследованиями этого органа после однократного введения циклофосфана в работе Н.В. Масная (1998). Также отмечено значительное изменение на гистологических срезах площадей коркового, и, в особенности, мозгового вещества (рис.2). Это может быть объяснено массовой деструкцией лимфоидных клеток и нарушением процессов миграции лимфоцитов из тимуса. В некоторых случаях также выявлены изменения в плотности распределения клеток в функциональных зонах тимуса, что приводит к инверсии слоев. Подобные морфологические изменения в литературе отмечены при исследовании влияния на тимус мышей однократного гамма-облучения (Ерофеева Л.М. и др., 1998; Sapin et al., 1997). На нескольких гистологических срезах тимуса отмечено стирание границ между корковым и мозговым веществом. Кроме того, наблюдалось усиление процессов разрушения и реутилизации лимфоидных клеток в тимусе, увеличение относительного числа деструктивно измененных лимфоцитов во всех функциональных зонах органа.

Массовая деструкция клеток тимуса после воздействия гидрокортизона и -облучения описана также в работах (Сапин М.Р. и др., 1981; Григоренко Д.Е. и др., 1997; Ерофеева Л.М. и др., 1998). В корковом веществе отмечены крупные разрастания фибробластов, так называемых фибробластических валиков, что является проявлением повреждения лимфоидной ткани действующим агентом - иммунодепрессантом АЗ.

–  –  –

Описанный нами комплекс изменений в микротопографии тимуса сопровождается значительным уменьшением количества и диаметра тимических телец. По мнению некоторых авторов (Калинин В.С., 1979; Одинокова В.А., Смирнов В.Б., 1980), это способствует снижению функциональной активности тимуса. Также отмечено увеличение толщины капсулы за счет ее разрыхления, в некоторых местах наблюдались скопления жировых клеток, что может свидетельствовать о начинающемся жировом перерождении органа. Подобные явления описаны М.Р. Сапиным и др. (1991) в тимусе крыс в условиях стрессовых воздействий, а также Л.М. Ерофеевой (1995) при действии диметилсульфата. Сосудистое русло мозгового вещества занимает на срезе площадь намного большую, чем в контроле, что выражается увеличенными просветами сосудов и их полнокровием. Опираясь на это, можно предположить, что утолщение капсулы и расширение сосудов в тимусе есть неспецифическая реакция и является проявлением общего адаптационного процесса в органах иммунной системы. Однако в органах иммунной системы этот процесс имеет различную функциональную нагрузку.

Так, в лимфатических узлах, по мнению Е.Е. Шаровой (1989), это направлено на повышение барьерно-фильтрационной и «резервуарной» функции. В тимусе же, по нашему мнению, описанные адаптационные преобразования связаны с усилением распада и миграцией лимфоцитов из органа. С учетом данных литературы результаты наших исследований позволяют утверждать, что описанные структурные изменения в тимусе носят неспецифический характер и свидетельствуют о снижении функциональной активности иммунной системы организма при действии АЗ.

Таким образом, введение АЗ, КН и ПТП сопровождается угнетением основных звеньев иммунной системы; использование АЗ приводит к резкому изменению морфофункционального состояния тимуса интактных животных. Установлено, что наиболее выраженное иммунодепрессивное действие оказывает АЗ, в большей степени угнетая гуморальное и макрофагальное звенья иммунного ответа, тогда как КН и ПТП наиболее выраженное иммунодепрессивное действие проявляют в отношении макрофагального звена иммунитета.

Среди причин, вызывающих иммунодефицитные состояния, важное значение имеет интенсификация процессов липидной пероксидации. При различных патологических состояниях организма, когда усилен процесс генерации реакционноспособных, весьма токсичных перекисных радикалов и активных форм кислорода, повреждаются не только те структуры, которые метаболически подлежат инактивации, но и весьма важные структурные и функциональные белки и липиды, ферментные и мембранные системы клеток, приводя к метаболическому хаосу, подавлению функциональной активности иммунокомпетентных клеток, нарушению иммунного ответа, к возникновению иммунопатологических и аутоиммунных процессов (Григорян Л.С.,1987; Конопля Е.Н., Прокопенко Л.Г.,1997). По современным представлениям, свободные радикалы участвуют в регуляции клеточной пролиферации, индуцируют транскрипцию определенных генов и могут служить «триггером» - пусковым моментом апоптоза (Хансон К.П., 1999). В связи с этим особое значение приобретают полученные нами данные о том, что общим молекулярно-клеточным звеном в патогенезе иммунодефицитных состояний, независимо от этиологии, являются нарушения структурной и функциональной целостности биомембран в результате индукции процессов свободнорадикального окисления липидов и снижения активности системы антиоксидантной защиты организма, что было подтверждено фактами увеличения концентрации продуктов свободнорадикального окисления липидов (ДК, МДА) в сыворотке крови и гомогенате селезенки при экспериментальных иммунодефицитах, вызванных АЗ, КН и ПТП. Более выраженная индукция процессов ПОЛ наблюдалась при канамициновой иммуносупрессии, о чем свидетельствует повышение содержания продуктов пероксидации липидов (ДК и МДА) соответственно в 3,5 и 2,1 раза по сравнению с аналогичными показателями у интактных животных. Кроме того, под влиянием КН происходило снижение активности ферментов антиоксидантной защиты организма (каталазы и СОД) на 57 и 42% соответственно по сравнению с данными в интактной группе животных.

Таким образом, полученные данные свидетельствуют о том, что индукция процессов свободнорадикального окисления липидов играет важную роль в патогенезе иммунодефицитных состояний независимо от природы повреждающих факторов.

Коррекция растительными лекарственными средствами экспериментальных вторичных иммунодефицитов В последние годы пристальное внимание исследователей привлекают иммуномодулирующие эффекты, вызываемые препаратами природного происхождения. Они, как правило, нетоксичны и эффективны при длительном применении в небольших дозах. Преимущество лекарственных растений заключается в том, что они действуют на организм всем комплексом содержащихся в них веществ. В связи с этим необходим поиск и создание новых эффективных иммунокорригирующих лекарственных препаратов, полученных с использованием современных технологий, позволяющих извлечь максимальное количество действующих веществ из растительного сырья, примером чего могут являться сухие экстракты, к преимуществу которых относятся стойкость при хранении, удобство при приеме больными. Сухие экстракты представляют собой легкорастворимые в воде или водно-спиртовых смесях комплексы биологически активных веществ, удобные в дозировании и стандартизации.

Отечественные лекарственные растения, характеризующиеся удовлетворительными природными запасами и обладающие широким фармакотерапевтическим эффектом, являются наиболее перспективными для создания на их основе лекарственных препаратов. К таким растениям относятся пятилистник кустарниковый, сабельник болотный, софора желтоватая. Высокая эффективность лекарственных средств, созданных на основе указанных растений, при воспалительных процессах и аллергических заболеваниях (атопических дерматозах), в патогенезе которых существенное значение имеют нарушения иммунологической реактивности организма, предполагает наличие у них иммуномодулирующей активности (Баханова Е.М., 2001;

Евстропов А.Н. и др., 2005; Коровкина Г.В. и др.,1971; Марков П.А., Никитина И.Р., 2005; Николаева И.Г., 1997; Попов С.В. и др., 2007; Cheng H. et al., 2006; Kim D. et al., 2002; Suo Z. et al., 2009). Данные обстоятельства послужили основанием для выбора указанных видов растений в качестве объектов исследования на предмет наличия у них иммунокорригирующих свойств. Кроме того, в предварительных сериях экспериментов из 20 исследованных нами растительных объектов (отвары астрагала перепончатого, лишайника кладины звездчатой, горечавки холодной, поповника сибирского, зопника клубненосного; сока каллизии душистой; настой цветков лилии малорослой; настойка корней молочая Фишера; сухие экстракты пятилистника кустарникового, бадана толстолистного, сабельника болотного, софоры желтоватой, ортилии однобокой, панцерии шерстистой, какалии копьевидной, горечавки холодной, горечавки бородатой, зубчатки обыкновенной, астрагала перепончатого, лапчатки белой) в отношении первичного иммунного ответа в реакции антителообразования указанные средства проявляли наиболее выраженную иммуномодулирующую активность. Также в результате фармакологического скрининга в качестве объектов исследования нами были выбраны многокомпонентные растительные средства: сухие полиэкстракты «Иммунополифит», «Фитоуросепт», «Нефрофит» из 23 изученных многокомпонентных фитосредств (отвары «Диг-да-ши-тан», «Камфора-25», «Арура-тан-7»; настойки «Тантон», «Гум-Брум», «Кардекаим», «Пентафитон», «Иммунофит», сухие экстракты «Семь драгоценных» («Норбу-дун-тан»), «Вентрофит», «Иммунополифит», «Фитоуросепт», «Ши-Жид» («Гастротон»), «Нефрофит», «Гепатон», «Диабефит», «Фитопрост», «Байкальский-7», «Тиреотон», «Трионорм», «Аркосител», «Флаворен», «Адаптон-6»). На основании предварительно проведенного фармакологического скрининга можно заключить, что иммуномодулирующий эффект сухих экстрактов несколько превосходит таковой отваров и настоек, что объясняется особенностями технологий их получения, которые позволяют извлекать большее количество биологически активных веществ из растений в сравнении с отварами и настоями.

Как показали экспериментальные исследования, применение ЭПК, ЭСБ, ЭСЖ, «Иммунополифита», «Фитоуросепта», «Нефрофита» позволило выявить их выраженную иммуномодулирующую активность, выражающуюся в достоверном увеличении массы и клеточности иммунных органов, а также показателей клеточного, гуморального иммунитета и фагоцитоза макрофагов на фоне иммуносупрессии, вызванной введением АЗ.

Использование ЭПК при иммунодепрессиях, вызванных АЗ, КН и ПТП, способствовало восстановлению нарушенных функций иммунной системы организма, о чем свидетельствовало повышение числа АОК, индексов реакций ГЗТ и РТПХ, фагоцитарного индекса и фагоцитарного числа (табл. 1, 2, 3).

Нами определены особенности иммуномодулирующего действия испытуемых средств и их фармакотерапевтическая направленность при иммунодепрессиях.

Показано, что ЭПК наиболее эффективен в отношении клеточного звена, что выражалось в увеличении массы и клеточности тимуса, индексов клеточноопосредованных иммунных реакций ГЗТ и РТПХ в условиях азатиоприновой иммунодепрессии, угнетении супрессорной активности Т-лимфоцитов у иммунизированных животных; увеличении пролиферативной активности Тлимфоцитов у интактных мышей, стимуляции экспрессии маркеров Т-лимфоцитов

–  –  –

При исследовании влияния ЭПК на экспрессию поверхностных молекул лимфоцитов периферической крови здоровых доноров установлено, что данное средство стимулирует экспрессию маркеров Т-лимфоцитов (СD4) (табл.5).

Полученные факты свидетельствуют о том, что компоненты, присутствующие в пятилистнике кустарниковом, вмешиваются в процесс активации Т-лимфоцитов. Нами предполагается, что одним из возможных механизмов подобного действия может являться способность взаимодействовать с рецепторами к IL-2 на мембране лимфоцитов, что приводит к усилению экспрессии соответствующих кластеров дифференцировки. Установленная нами стимуляция клеточного звена иммунной системы мышей под влиянием ЭПК подтверждается исследованиями С.Ч. Гончиковой и др. (2002), в которых установлено выраженное стимулирующее влияние ЭПК на состояние клеточного иммунитета больных туберкулезом.



Pages:   || 2 | 3 |

Похожие работы:

«УДК 595.371.13(268.45) ИККО Наталья Викторовна ОСОБЕННОСТИ БИОЛОГИИ МАССОВЫХ ЛИТОРАЛЬНЫХ ГАММАРИД (CRUSTACEA: AMPHIPODA) В КОЛЬСКОМ ЗАЛИВЕ 25.00.28 – Океанология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Мурманск Работа выполнена на кафедре зоологии и экологии государственного образовательного учреждения высшего профессионального образования...»

«Сафранкова Екатерина Алексеевна КОМПЛЕКСНАЯ ЛИХЕНОИНДИКАЦИЯ ОБЩЕГО СОСТОЯНИЯ АТМОСФЕРЫ УРБОЭКОСИСТЕМ Специальность 03.02.08 – Экология (биологические науки) АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание учной степени кандидата биологических наук Брянск 2014 Работа выполнена на кафедре экологии и рационального природопользования ФГБОУ ВПО «Брянский государственный университет имени академика И.Г. Петровского» Научный руководитель: доктор сельскохозяйственных наук, профессор Анищенко...»

«ГОРЕЛИК Светлана Гиршевна МЕДИКО-СОЦИАЛЬНАЯ РЕАБИЛИТАЦИЯ ПАЦИЕНТОВ ХИРУРГИЧЕСКОГО ПРОФИЛЯ В СТАРЧЕСКОМ ВОЗРАСТЕ 14.01.30 – геронтология и гериатрия Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук Самара 2015 Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном образовательном учреждении дополнительного профессионального образования «Институт повышения квалификации Федерального медико-биологического агентства» доктор медицинских наук, доцент...»

«Герасимов Максим Александрович Аэрозольная санация воздушной среды кролиководческих помещений при профилактике респираторных заболеваний кроликов 06.02.05ветеринарная санитария, экология, зоогигиена и ветеринарносанитарная экспертиза АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание учёной степени кандидата биологических наук Москва 2015 Работа выполнена ФГБОУ ВПО «Московская государственная сельскохозяйственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии им. К.И. Скрябина» на кафедре...»

«ДЕДЕГКАЕВ Александр Тазаретович БИОТЕХНОЛОГИЧЕСКИЕ ОСНОВЫ ФОРМИРОВАНИЯ КАЧЕСТВА СВЕТЛОГО ПИВА Специальность 05.18.07 – Биотехнология пищевых продуктов и биологических активных веществ АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора технических наук Санкт-Петербург Работа выполнена в ФГБОУ ВПО «Санкт-Петербургский национальный исследовательский университет информационных технологий, механики и оптики» Научный консультант: Меледина Татьяна Викторовна, доктор...»

«Фомина Светлана Григорьевна ПЕЙЗАЖ ЭНТЕРОВИРУСОВ У ДЕТЕЙ С ОСТРОЙ КИШЕЧНОЙ ИНФЕКЦИЕЙ 03.02.02. – вирусология Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Москва – 2013 Работа выполнена в Федеральном бюджетном учреждении науки «Нижегородский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. академика И.Н. Блохиной» Роспотребнадзора. Новикова Научный руководитель: доктор биологических наук, профессор Надежда Алексеевна...»

«ЖИРКОВ АЛЕКСЕЙ ДМИТРИЕВИЧ ПРОФИЛАКТИКА МИКОТОКСИКОЗОВ ЛОШАДЕЙ ТАБУННОГО СОДЕРЖАНИЯ С ПРИМЕНЕНИЕМ ПРОБИОТИКА САХАБАКТИСУБТИЛ В УСЛОВИЯХ ЯКУТИИ 06.02.02 – ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук Новосибирск 2015 Работа выполнена в Государственном научном учреждении «Якутский научно-исследовательский институт сельского хозяйства»...»

«РАДУГИНА Елена Александровна РЕГУЛЯЦИЯ МОРФОГЕНЕЗА РЕГЕНЕРИРУЮЩЕГО ХВОСТА ТРИТОНА В НОРМЕ И В УСЛОВИЯХ ИЗМЕНЕННОЙ ГРАВИТАЦИОННОЙ НАГРУЗКИ 03.03.05 – Биология развития, эмбриология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Москва 2015 ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность темы исследования. Исследования в области регенерации, начавшиеся еще в XVIII веке, вновь приобрели актуальность с появлением современных методов исследования....»

«ЖАДАМБАА ДАВААБААТАР ВЛИЯНИЕ ТЕХНОГЕННОГО ЗАГРЯЗНЕНИЯ НА ОКРУЖАЮЩУЮ СРЕДУ ДАРХАНСКОГО АЙМАКА МОНГОЛИИ 03.02.08 – экология (биология) Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Красноярск – 2015 Работа выполнена в ФГБОУ ВПО «Красноярский государственный аграрный университет» Научный руководитель: Цугленок Николай Васильевич доктор технических наук, профессор Официальные оппоненты: Первышина Галина Григорьевна доктор биологических наук,...»

«ПОПОВ Игорь Юрьевич ВЫМИРАНИЕ MARGARITIFERA MARGARITIFERA (L.) НА ЮГЕ АРЕАЛА В РОССИИ И МОДЕЛЬ ПРИРОДОХРАННОГО ИССЛЕДОВАНИЯ 03.02.08 – экология Автореферат диссертации на соискания учёной степени доктора биологических наук Санкт-Петербург Работа выполнена в Санкт-Петербургском государственном университете Официальные оппоненты: Иешко Евгений Павлович, доктор биологических наук, Институт биологии Карельского научного центра РАН заведующий лабораторией паразитологии животных и...»

«БАММАТОВ ДЖАНБОЛАТ МУСАЕВИЧ СОЧЕТАННЫЕ ПРИРОДНЫЕ ОЧАГИ ИНФЕКЦИОННЫХ БОЛЕЗНЕЙ В РАВНИННО-ПРЕДГОРНОЙ ЧАСТИ РЕСПУБЛИКИ ДАГЕСТАН 14.02.02 – эпидемиология 03.02.03 микробиология Автореферат диссертации на соискание учёной степени кандидата медицинских наук Ставрополь – 2013 Работа выполнена в Федеральном казнном учреждении здравоохранения «Дагестанская противочумная станция» и Федеральном казнном учреждении здравоохранения «Ставропольский научно-исследовательский противочумный...»

«ВАГАЙЦЕВА КСЕНИЯ ВАЛЕРЬЕВНА ГЕНЕТИЧЕСКОЕ РАЗНООБРАЗИЕ ПОПУЛЯЦИЙ СЕВЕРНОЙ ЕВРАЗИИ ПО STR И SNP МАРКЕРАМ X-ХРОМОСОМЫ И ИХ ДНКИДЕНТИФИКАЦИОННЫЙ ПОТЕНЦИАЛ 03.02.07 генетика АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Томск – 2015 Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном научном учреждении «Научно-исследовательский институт медицинской генетики», г. Томск Научный руководитель: доктор биологических наук, профессор Степанов Вадим...»

«АЛИМОВА ФАРИДА КАШИФОВНА «Биологическое разнообразие видов рода Trichoderma (Fungi, Ascomycetes, Hypocreales) и их роль в функционировании микробиоты и защите растений в агроценозах различных почвенно климатических зон на территории Республики Татарстан» 03.00.07 микробиология 06.01.11 защита растений Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук КАЗАНЬ 2006 Работа выполнена на кафедрах микробиологии и биохимии Казанского государственного...»

«Курбонов Косим Муродович СОВРЕМЕННЫЕ ЭПИЗООТОЛОГО-ЭПИДЕМИОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ И НАДЗОР ЗА БРУЦЕЛЛЕЗОМ В РЕСПУБЛИКЕ ТАДЖИКИСТАН 14.02.02 – эпидемиология Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Москва – 2015 Работа выполнена в Таджикском научно-исследовательском институте профилактической медицины Министерства здравоохранения и социальной защиты населения Республики Таджикистан Научные руководители: Доктор медицинских наук, профессор...»

«БУХАРОВА Надежда Владимировна АФИЛЛОФОРОВЫЕ ГРИБЫ ГОСУДАРСТВЕННОГО ПРИРОДНОГО ЗАПОВЕДНИКА «БАСТАК» 03.02.01 – ботаника АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Владивосток – 2013 Работа выполнена в лаборатории низших растений Федерального государственного бюджетного учреждения науки Биолого-почвенного института ДВО РАН Научный руководитель: кандидат биологических наук Булах Евгения Мироновна Научный консультант: кандидат биологических...»

«Гузеева Елена Александровна МОЛЕКУЛЯРНАЯ ТАКСОНОМИЯ И МОРФОЛОГИЯ НЕМАТОД НАДСЕМЕЙСТВА THELASTOMATOIDEA, ОБИТАЮЩИХ В НАЗЕМНЫХ ЧЛЕНИСТОНОГИХ 03.02.04 – зоология 03.02.11 – паразитология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук МОСКВА 2010 Работа выполнена в лаборатории фауны и систематики паразитов Центра паразитологии Института проблем экологии и эволюции имени А.Н. Северцова РАН и на кафедре зоологии беспозвоночных Биологического...»

«Хоцкин Никита Валерьевич Пространственная память и обучение у мышей, различающихся по предрасположенности к наследственной каталепсии: влияние нейротрофического фактора мозга BDNF Физиология – 03.03.01 АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: д.б.н., г.н.с. Куликов А.В. Новосибирск, 2015 Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном научном учреждении Федеральный исследовательский центр Институт...»

«Виноградов Илья Игоревич МОРФОЛОГИЧЕСКИЕ И МОЛЕКУЛЯРНО-БИОЛОГИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ ПОГРАНИЧНЫХ ОПУХОЛЕЙ ЯИЧНИКОВ Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук 14.03.02 – патологическая анатомия Рязань – 2015 Работа выполнена на кафедре патологической анатомии с курсом судебной медицины ГБОУ ВПО «Рязанский государственный медицинский университет имени акад. И.П. Павлова» Научные руководители: доктор медицинских наук Андреева Юлия Юрьевна...»

«Головань Екатерина Викторовна Ресурсы декоративных растений для озеленения внутриквартальных территорий (на примере г. Владивостока) 03.02.14 – биологические ресурсы Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: д.б.н., доцент О.В. Храпко Владивосток — 2015 Работа выполнена в лаборатории флоры Дальнего Востока Федерального государственного бюджетного учреждения науки Ботанический сад-институт Дальневосточного отделения Российской...»

«Лысков Дмитрий Федорович СИСТЕМАТИКА РОДА PRANGOS (UMBELLIFERAE, APIOIDEAE) И СБЛИЖАЕМЫХ ТАКСОНОВ: СОПОСТАВЛЕНИЕ МОРФОЛОГОАНАТОМИЧЕСКИХ И МОЛЕКУЛЯРНЫХ ДАННЫХ Специальность 03.02.01 – Ботаника АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Москва — 2015 Работа выполнена на биологическом факультете ФГБОУ ВО «Московский государственный университет имени М.В.Ломоносова» Научный руководитель: Пименов Михаил Георгиевич доктор биологических наук,...»







 
2016 www.konf.x-pdf.ru - «Бесплатная электронная библиотека - Авторефераты, диссертации, конференции»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.