WWW.KONF.X-PDF.RU
БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА - Авторефераты, диссертации, конференции
 


Pages:     | 1 || 3 |

«РАЗРАБОТКА ЭЛЕМЕНТОВ ТЕХНОЛОГИИ ВЫРАЩИВАНИЯ ПАПАЙИ ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ ЗДОРОВОГО ПОСАДОЧНОГО МАТЕРИАЛА И ЭКСТРАКТОВ С БИОПЕСТИЦИДНЫМИ СВОЙСТВАМИ ДЛЯ ЗАЩИТЫ ЕЕ ОТ ВРЕДНЫХ ОРГАНИЗМОВ ...»

-- [ Страница 2 ] --

PRSV стал лимитирующим фактором возделывания папайи во многих регионах мира, он значительно снижает выход плодов в странах Африки, на Гавайях, в Карибском регионе, в Бразилии, Центральной Азии и других регионах возделывания папайи (Thomas, Dodman, 1993, Purcifull et al, 1984, Yeh et al., 1984, 1988, Dahal, 1990, 1992, Cook, 1975, Bayot et al., 1990, Giordani, Siepai, 1991). В настоящее время Gonsalves, 1994, Ooka, 1994, нераспространение этого вируса дальше стало возможным благодаря созданию карантинных зон и предотвращению завоза папайи из регионов распространения вирусной инфекции. При вспышке данного заболевания больные растения выкорчевываются и уничтожаются (Litz, 1984, Manshardt, 1992, Shukla et al., 1994; Manshardt, Drew, 1998, Dahal, Shrestha, 1991, NoaCarrazana, et al., 2006, Conover et al.,1986). В качестве меры борьбы в настоящее предлагается использовать здоровый посадочный материал, полученный методом культуры ткани.

II. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ

–  –  –

В отдельные месяцы возможны незначительные отклонения от среднегодовых температур.

Температура воздуха. Средняя температура воздуха в Кении, тесно связаны с высотой над уровнем моря. Различные температуры воздуха также могут быть оценены на местном уровне на основе имеющихся метеорологических данных с учетом того, что они уменьшаются с увеличением высоты примерно на 1,7°С на каждые 305 м. Годовые колебания температур в целом менее 5°С.

–  –  –

Количество 41,3 27,2 111,3 269,1 205,8 27,6 60,3 42,1 28,8 163,3 229,4 74,0 1280,2 осадков * таблица составлена по материалам http://www.worldweatheronline.com.

В Кении плантации папайи формируются либо прямым посевом семян, либо высадкой сеянцев (150 - 200мм. высотой). Поскольку пол растения трудно определять до начала цветения, в каждую лунку сажают 3 - 4 растения. Когда становится возможным определять пол папайи, плантацию прореживают, удаляя лишние растения. Для двудомных разновидностей рекомендовано соотношение 1 мужской на 8-10 женских, что обеспечивает оптимальный урожай. Для гермафродитных разновидностей рекомендуют оставлять по одному растению в лунке.

Биотехнология в выращивании папайи используется с целью получения безвирусного посадочного материала, а также растений заданного пола. Прививки на папайе практикуются и в открытом грунте (Cheah et al., 1993), однако подобные технологии в открытом грунте мало эффективны изза поражения растений бактериальной и грибной инфекцией.

Микроклонирование in vitro, выполненное в лабораторных условиях, позволяет получить безвирусный посадочный материал, обеспечивает одновременный выход большого количества растений заданного размера и требует гораздо меньших площадей для работы.

Материал и методы Были выбраны 3 линии местного сорта папайи «Санрайз Соло» (Carica papaya), исходя из показателей урожайности, высоты растений и время первого цветения. Семена из отобранных образцов были высеяны в теплице.

В возрасте трех месяцев у саженцев отрезали 1-сантиметровую верхушечную точку роста. Верхушечные побеги промывались дистиллированной водой, после чего в условиях ламинара помещались на 3 секунды в 70% этиловый спирт и снова трижды промывались в стерилизованной дистиллированной воде. Затем стерилизовались в 20%-ном растворе домашней белизны, содержащей 3,85% гипохлорида натрия, в течение 20 минут, после чего трижды промывались в стерилизованной дистиллированной воде. После поверхностной стерилизации побег обрезали с обеих концов до размера 0,7 см и культивировали на среде Мурасиге – Скуга (МС) (1962) с добавлением для получения твердой среды 2,5 г/л агара и обогащенной бензил аминопурином (БАП) (0,5 мг/л) в сочетании с 1 мг/л нафтилуксусной кислоты (НУК) для размножения побегов. Впоследствии побеги пересаживались на МС, обогащенную 0,1 мг/л БАП и 0,05 мг/л НУК для удлинения побегов.

РН среды устанавливалась на уровне 5,7 – 5,8 перед автоклавированием при 1 атм и 1200 С в течение 20 мин.

Культивировали при температуре +250С с 16-ти часовым световым периодом под лампами дневного света.

В стерильных условиях отбирались побеги одинаковой длины и диаметра и использовались для прививки in vitro. Когда стебель побегов достигал размера около 2 см, верхняя часть (1 см) отрезалась и использовалась как привой, а оставшаяся часть служила в качестве подвоя для других побегов. Применялся метод прививки «в расщеп». Привой и подвой фиксировались с помощью стерильных кактусовых колючек.

Привитые микрорастения культивировали на среде МС, с добавлением агара (2,5 г/л агара) и содержащей 30 г/л сахарозы и 0,1 мг/л БАП в сочетании с 0,05 мг/л НУК. Контролем служил привой, сделанный на подвой растений той же линии.

Эксперимент был заложен рандомизорованно в 3 повторностях.

В течение месяца через каждую неделю подсчитывали количество новых листьев и замеряли длину побегов. Через 4 недели подсчитывали количество выживших привитых растений. Данные по числу новых листьев и длине побегов обрабатывали статистически. Для статистической обработки полученных результатов использовали метод статистического анализа, установленный международным институтом статистики (Доспехов Б.А., 1985; SAS Institute (SAS Institute, 2002) с использованием компьютерных программ.

2.2. Результаты исследований Через 7 дней после прививки в местах соединения привоя и подвоя образовался каллус. Интенсивность формирования каллусной ткани была неодинакова и варьировала от более интенсивной (чашка 3а) к менее интенсивной (чашки 3б, 3в).

–  –  –

3в Рисунок 3. Формирование каллуса на саженцах (на питатеьную среду) интенсивное (3а) и мало интенсивное (3б, 3в) Новые точки роста стали образовываться через 7 дней после прививки (чашка 3а) и через 28 дней наблюдался полностью сформировавшийся побег (чашка 3в).

Количество прижившихся привоев варьировало от 45 до 80%. Успех прижившихся привоев в контроле 1 (растения 1-й линии, привитые на подвой из той же линии) и контроле 2 (растения 2-й линии, привитые на

–  –  –

4б Рисунок 4. Формирование новых листьев саженцах (на питатеьную среду) через 7 дней после прививки (4а - интенсивное и 4б – мало интенсивное) подвой из той же линии) был значительно выше и через 4 недели составил 75 и 80% (табл.4). Напротив, папайя линии 2, привитая на папайю

–  –  –

концентраций 6-бензиламинопурина (БАП) в сочетании с различными концентрациями нафтил уксусной кислоты (НУК) на длину побега и образование новых ростовых почек.

Полученные аналогичным образом экспланты культивировались на среде МС с добавлением 30 г/л сахарозы и 6-бензиламинопурина в концентрации 0,1; 0,5; 1,0 и 2,0 мг/л в сочетании с нафтилуксусной кислотой в концентрации 0,05; 0,1, 0,5 и 1,0 мг/л. Контролем служили растения, культивируемые на МС без добавления БАП и НУК.

В течение трех месяцев через каждые 3 недели замеряли длину экспланта и подсчитывали количество новых ростовых почек на каждом экспланте. Экспланты пересаживались на свежую среду через каждые три недели.

Результаты исследований Через 7 дней после начала культивирования на верхушечной почке стали появляться новые побеги (рис. 5).

Рисунок 5. Верхушечный побег через 7 дней после посадки на среду Через 28 дней культивирования появились пазушные придаточные почки, впоследствии многие из них сформировались в молодые побеги (рис.

6) и через 12 недель имели полностью сформировавшийся вид (рис. 7).

–  –  –

Рисунок 7. Формирование множественных побегов через 12 недель культивирования Увеличение концентрации БАП до 0,5 мг/л и НУК до 0,1 мг/л способствовало увеличению среднего числа побегов на одной посаженной почке (табл.

8).

–  –  –

Средние значения в колонке, отмеченные одинаковой буквой, не имеют существенных различий согласно SNK (P 0,05).

Однако среднее число побегов на посаженную почку уменьшилось при увеличении концентрации БАП до 1,0 мг/л и НУК до 0,5 мг/л (табл. 8). В вариантах без добавления БАП и НУК экспланты либо вообще не формировали побегов, либо формировали в среднем один побег на всю линию.

Растения папайи 1-й линии, культивируемые на среде МС, обогащенной 0,5 мг/л БАП + 0,1 мг/л НУК, формировали наибольшее число побегов 24,5 через 12 недель культивирования, а на МС с содержанием 0,5 мг/л БАП + 0,05 мг/л НУК формировали в среднем 13,8 побегов (табл. 8). В контроле без добавления БАП и НУК растения 1-й линии в среднем сформировали 0.8 побегов.

Растения 2-й линии также сформировали наибольшее число побегов (25,8) в варианте с 0,5 мг/л БАП + 0,1 мг/л НУК и в варианте с 0,5 мг/л БАП + 0,05 мг/л НУК дали второе по значению количество побегов – 13,6; в варианте с 0,1 мг/л БАП + 0,1 мг/л НУК было образовано в среднем 12,3 побега. В контроле среднее число побегов составило 1 (табл. 8).

У растений 3-й линии также максимальное число сформировавшихся побегов (19,3) было отмечено в варианте с 0,5 мг/л БАП + 0,1 мг/л НУК.

Вслед за этим результатом следовали варианты с 0,1 мг/л БАП + 0,05 мг/л НУК и 0,5 мг/л БАП + 0,05 мг/л НУК, где число сформировавшихся побегов составило 16,5 и 16,8 соответственно. В контроле наблюдалось минимальное количество побегов – 0,6 (табл. 8).

Что касается длины побегов, то растений папайи линии 1 максимальная длина побега 3,25 см была отмечена при культивировании на среде МС с добавлением 0,1 мг/л БАП + 0,05 мг/л НУК. Далее следовали значения, полученные на МС с добавлением с 0,1 мг/л БАП + 0,1 мг/л НУК и 0,5 мг/л БАП + 0,05 мг/л НУК, где средняя длина сформировавшихся побегов составляла 2,71 2,63 см соответственно. Наименьшая длина побега 1,31 см наблюдалась в контрольном варианте (табл. 9).

–  –  –

Средние значения в колонке, отмеченные одинаковой буквой, не имеют существенных различий согласно SNK (P 0,05) Среди растений папайи 2-й линии максимальная длина побега 3,3 см также была отмечена в варианте с 0,1 мг/л БАП + 0,05 мг/л НУК. Сразу за этим следовал вариант с 0,5 мг/л БАП + 0,05 мг/л НУК, где средняя длина побегов составила 3,0 см. Наименьшая длина побега 1,38 см была получена в контрольном варианте.

Растения 3-й линии также сформировали побеги максимальной длины 3,28 см в варианте с 0,1 мг/л БАП + 0,05 мг/л НУК. Вслед за этим шел вариант с 0,5 мг/л БАП + 0,05 мг/л НУК, где средняя длина побегов составила 3,01 см. Наименьшая длина побегов 1,5 см отмечалась в контроле (табл. 9).

Таким образом, концентрация БАП 0,5 мг/л + НУК 0,1 мг/л оказалась оптимальной для формирования новых побегов.

Все три линии папайи существенно отличались по числу сформировавшихся новых побегов и их длине. Неодинаковая реакция растений папайи различных линий на изменение гормонального баланса среды отмечена и в работах (Litz, Conover, 1977).

2.3. Испытание биологических средств защиты папайи в Кении для борьбы с плодовой мухи Bactrocera invadens Оздоровленный посадочный материал дает возможность получить более жизнеспособные растения и избежать поражения на ранних этапах развития, однако, в последующем при культивировании папайи в условиях открытого грунта существует ряд вредителей и болезней, значительно снижающих урожайность культуры, среди которых наиболее вредоносными считаются плодовая муха Bactrocera invadens (Copeland et al., 2006, Ekesi et al., 2014) и антракноз на плодах.

Особенности жизненного цикла плодовой мухи, Bactrocera invadens, делают крайне затруднительным применение химических препаратов для контроля данного вредителя, в связи с чем ведется активный поиск нехимических мер борьбы с ним (Lux et al., 2003, Copeland et al., 2004).

Рисунок 8. Жизненный цикл плодовой мухи Bactrocera invadens на папайе (источник:www.

agrieco.net, www.mdpi.com) Систематическое положение: класс Insecta, отряд Diptera, семейство Tephritidae.

Плодовая муха представляет опасность для плодов папайи (Mossler, Nesheim, 2002), когда они достигают половины от положенного размера, поэтому применение опрыскиваний целесообразно начинать уже с этой стадии развития растения. Поскольку самки плодовой мухи после выхода из почвы еще не достигли половозрелости, они усиленно питаются в среднем в течение 7 дней, после чего они будут способны откладывать яйца в плоды папайи. Именно эта особенность жизненного цикла Bactrocera invadens делает необходимым проводить обработки с интервалом в 7 дней, вплоть до окончательного сбора урожая.

Подавление численности плодовой мухи Bactrocera invadens при выращивании различных видов сельскохозяйственной продукции основано на использовании разлчных пищевых приманок в сочетании с инсектицидом, причем, инсектицид может быть как химическим соединением, иак и биологическим препаратом. Пищевая приманка на расстоянии привлекает взрослых особей плодовой мухи, которые, питаясь смесью приманки и инсектицида, погибают, не успев отложить яйца в плоды папайи.

Подавляющее число пищевых приманок производится западными компаниями и их приходится импортировать в страны Африки, что ведет к существенному удорожанию конечной продукции. В Кении использование приманок для борьбы с плодовой мухой Bactrocera invadens успешно практикуется, в основном, при возделывании манго, однако на папайе, которая до недавнего времени выращивалась лишь мелкими фермерами для внутреннего рынка, со взрослыми особями плодовой мухи боролись, главным образом, доступными химическими инсектицидами, и только современное производство поставило задачу получения экологически чистой продукции с применением биологических средств защиты.

2.3.1. Материал и методы В течение всего периода созревания плодов папайи сорта «Санрайз Соло» на опытной плантации Кенийского университета Сельского-хозяйства и Технологии им. Джомо Кениатта. (JKUAT) и на фермерских полях при Кенийского аграрного научно-исследовательский института (KARI) в 2010гг. нами был заложен опыт по изучению влияния пищевых приманок GFпроизводство ЮАР) и Мазоферм (производство Кенийской зерновой компании) в сочетании с биопестицидом Спиносад (производство Кенийской зерновой компании) и биопестицидом на основе почвообитающего гриба Metarrhizium anisopliae (производства лаборатории Кенийского университета Сельского-хозяйства и Технологии им. Джомо Кениатта)на численность плодовой мухи Bactrocera invadens. Эксперимент проводили с 25.10.2010 года по 07.02.2011 года.

Компоненты в составе препарата GF-120:

- сахар

- кукурузный протеин

- спиносад – активный компонент, который представляет собой продукт жизнедеятельности почвенного актиномицета Saccharopolyspora spinosa.

Мазоферм представляет собой протеиновый гидролизат, который служит пищевой приманкой для взрослых особей плодовой мухи. Его смещивают с биоинсектицидом спиносад (в отличие от GF-120, куда он уже входит как активный компонент).

Обработки начинали, когда сформировавшиеся плоды папайи достигали половины своего размера и проводили через каждые 7 дней.

Опрыскивали точечно 1 м2 кроны растения (50 мл на 1 растение).

Биопестицид на основе почвообитающего гриба Metarrhizium anisopliae вносили одноразово перед образованием плодов.

Для учета численности плодовой мухи использовали метил-евгенол, который производится в виде специальных пластин размером 1 см х 1 см.

Одна пластина помещается в одну ловушку для учета и меняется через каждые 7 дней. В качестве ловушки использовались пластиковые банки с вырезанными отверстиями для лета мух, которые развешивались на высоте 2 м из расчета 1 ловушка на 1 дерево. Ловушки перемещались в кроне дерева через каждые 7 дней, при этом еженедельно подсчитывали количество пойманных мух. Количество особей плодовой мухи на одну ловушку в сутки определялось по следующей формуле:

F = F1 / N x D, где F – количество особей плодовой мухи на одну ловушку в сутки;

F1 – общее количество пойманных мух;

N – количество установленных ловушек;

D – количество суток, в течение которых стояли ловушки Опыт был заложен рандомизировано блочно в четырех повторностях.

В каждом варианте обрабатывали по 5 растений папайи.

Препараты распыляли с помощью ранцевого опрыскивателя с диаметром распыления 1-4 мм.

–  –  –

Полученные результаты по эффективности опрыскиваний двумя препаратами GF-120 и Мазоферм + спиносад показывают, что GF-120 оказался более эффективным и, начиная с шестого опрыскивания, обеспечил снижение численности имаго плодовой мухи почти в два раза по сравнению с контролем, а концу обработок разница была десятикратной (табл. 10).

Препарат Мазоферм + спиносад оказался чуть менее эффективным, чем GF

–  –  –

Анализ урожайности папайи сорта «Санрайз Соло» при использовании различных биопрепаратов против плодовой мухи Bactrocera invadens (табл.

13) свидетельствует о том, что наибольшая прибавка урожая (51,9 %) была получена при применении препарата GF-120 с одноразовым внесением в почву актиномицета Metarrhizium anisopliae, что позволяет рекомендовать данную схему обработки как наиболее эффективную.

–  –  –

- закупочная цена 1 тонны папайи в Кении составляет 600 $.

Оценка экономической эффективности проводилась по двум наиболее оптимальным вариантам обработок, обеспечившим в опытах максимальную прибавку урожая: GF-120 + Metarrhizium anisopliae и Мазоферм + спиносад + (табл. 14). Наибольшую экономическую Metarrhizium anisopliae эффективность показал вариант с применением GF-120 + Metarrhizium anisopliae (207,9 %), хотя и вариант с Мазофермом + спиносад + Metarrhizium anisopliae оказался тоже высокоэффективным (182,3 %).

Испытание биофунгицидной активности растительных 2.4.

экстрактов для подавления антракноза на плодах папайи Зрелые плоды папайи поражаются многочисленными заболеваниями, среди которых, как уже отмечалось выше, одним из наиболее вредоносных является антракноз, вызываемый грибом Colletotrichum gloeosporioides (Dickman, Alvarez, 1983, Nishijima, 1998a, Uchida et al.,1996). Эта болезнь причиняет большой урон во время транспортировки плодов, их хранении и продвижении на рынок. В целом потери от антракноза в послеуборочный период в развивающихся странах составляют от 40 до 100%(Sankat, Maharaj, 1997). Химические фунгициды, применяемые для борьбы с данным заболеванием, не достаточно эффективны, поскольку болезнь наносит ущерб после сбора урожая, когда применение химии уже недопустимо. Все это делает крайне актуальным поиск новых биопестицидов, способных подавлять возбудителей грибных болезней, как во время вегетации растений, так и после сбора урожая (Alvarez, Nishijima, 1987, Couey et al.,1984, Gibb et al., 1996).

Водные экстракты из различных видов растений уже зарекомендовали себя в качестве эффективных средств борьбы с такими патогенами как Alternaria carthami (Ranaware et. al., 2010), Fusarium oxysporum (Dwivedi, Shukla, 2000, Tripathi, Shukla, 2010 и др.).

2.4.1. Материал и методы В лаборатории Кенийского университета Сельского-хозяйства и Технологии им. Джомо Кениатта. (JKUAT) в 2010-11 гг. были проведены эксперименты по испытанию фунгицидной активности некоторых растительных экстрактов in vitro для подавления гриба Colletotrichum gloeosporioides, который вызывает антракноз (Dickman, 1994), причиняющий существенный урон при хранении плодов папайи Carica papaya. (Paull et al., 1997) Патоген Colletotrichum gloeosporioides был выделен в чистую культуру из собранных плодов папайи с признаками антракноза.

Экстракты были получены из 7 видов растений, произрастающих в Кении и собранных в 2010 г. Листья собранных растений высушивали при комнатной температуре и впоследствии измельчали в порошок. 50 г полученного растительного порошка каждого вида экстрагировали в 250 мл этилацетата в течение двух часов на магнитной мешалке. Полученный экстракт отфильтровывали через бумажный фильтр в 500 – миллиметровые круглые колбы и выпаривали при 400 С во вращающейся водяной бане. По 50 мг полученных экстрактов каждого вида растений растворяли в 1 мл растворителя и затем тестировали на антигрибную активность.

Подготавливали диски фильтровальной бумаги диаметром 6 мм и стерилизовали сухим паром в муфельной печи при температуре 160 0 С в течение 1 часа. Затем на каждый диск пипеткой наносили по 10 мл растительных экстрактов.

Суспензию спор Colletotrichum gloeosporioides, помещали в чашки Петри с твердой искусственной питательной средой. После того, как диски фильтровальной бумаги с растительными экстрактами предварительно просушивали, их помещали на среду в чашках Петри с колонией гриба Colletotrichum gloeosporioides и оставляли инкубировать в течение 4 дней.

Диаметр зоны ингибирования измеряли в мм по 4-х бальной шкале, где 0 – отсутствие зоны ингибирования;

1 – зона ингибирования слабо различима, рост гриба и споруляция слегка подавляются;

2 – зона ингибирования четко обозначена, рост колонии гриба составляет около 50 % по сравнению с контролем, споруляция слабая;

3 – четкая зона ингибирования, рост гриба составляет 25% от контроля;

4 – зона ингибирования без видимого роста колонии гриба.

Концентрация конидий гриба Colletotrichum gloeosporioides была доведена до 105 конидий/мл с помощью гемацитометра. 10 мл растительного экстракта смешивали с 90 мл суспензии конидий гриба и наносили на предметное стекло. Предметные стекла помещали в чашки Петри и во влажных условиях ингибировали при температуре 250 С в течение 24 часов.

После периода инкубации предметные стекла просматривали в микроскопе, где подсчитывали количество проросших спор. Эксперимент был заложен рандомизировано в трех повторностях.

Антигрибная активность растительных экстрактов in vivo Изучали действие водных экстрактов из различных растений (Amadioha, 2000; Anthony et al., 2003) на развитие антракноза на собранных плодах папайи сорта «Санрайз Соло». Были отобраны плоды одинакового размера и окраски с плантации, где не применялись никакие химические препараты. Водные растворы отобранных растений исследовались на фунгицидную активность в концентрациях 10 и 25%. Суспензия конидий гриба Colletotrichum gloeosporioides использовались в концентрациях 105 конидий/мл. Для поверхностной стерилизации плодов папайи использовали 1%-ный раствор гипохлорида натрия, в который помещали плоды папайи на 10 минут, после чего их промывали в стерильной дистиллированной воде и помещали в пластиковый контейнер с раствором, содержащим конидии гриба Colletotrichum gloeosporioides. В растворе гипохлорида натрия плоды выдерживали в течение 15 часов, после чего опускали в раствор растительных экстрактов, а контрольную партию – в стерильную дистиллированную воду. В каждый из растительных экстрактов опускали по пять плодов, каждый из которых принимали за отдельную повторность в опыте.

После появления первых симптомов антракноза проводили учет и определяли процент пораженных плодов. Степень развития болезни определяли по пятибалльной шкале, где 1 – 0 % пораженной поверхности плода 2 – 1 – 25 % пораженной поверхности плода 3 – 26 – 50 % пораженной поверхности плода 4 – 51 – 75 % пораженной поверхности плода 5 – 76 – 100 % пораженной поверхности плода

–  –  –

В результате исследований наблюдалась существенная разница в антигрибной активности экстрактов из различных растительных образцов при ингибировании роста гриба на искусственной питательной среде. Среди испытанных экстрактов наиболее сильно рост патогена ингибировали экстракты из Lantana camara и Carica papaya. Экстракт листьев Lantana camara давал максимальную зону ингибирования (таблица 15). Тот факт, что экстракт из Carica papaya показал второй по эффективности результат, вполне согласуется со многими литературными источниками, указывающими на инсектицидную и фунгицидную активность данного растения (Satrija et al., 1994, Bernice, 1997, Abd-El-Khair, Omima, 2006, Bautista-Banos et al., 2002, Anibijuwon, Udeze, 2009, Al-Samarrai et al., 2013, Oyagade et al., 1999, Nashwa et al., 2012).

–  –  –

Неодиноково влияли водные экстракты на развитие антракноза на искусственно зараженных плодах папайи. Наименьшее развитие болезни отмечалось при обработке экстрактами из Lantana camara, при этом эффективность 25%-ный экстракта была существенно выше, чем 10%-ного (табл. 16).

Водные экстракты из Carica papaya были близки по эффективности к таковым из Lantana camara, хотя 25%-ный экстракт оказался чуть менее эффективным. В целом по всем вариантам опыта, 25%ные водные экстракты оказались более эффективными, хотя в ряде случаев (Lantana viburnoides и Nicotina tabacum) разница в действии 10%-ных и 25%- ных экстрактов мало различалось.

2.5. Особенности культивирования папайи в России в условиях защищенного грунта Папайя включена в международный фонд исследований тропических растений, так как обладает особо ценными лечебными и общеукрепляющими свойствами.

На данный момент, исследования по данной культуре, РУДН проводит в трех тепличных комплексах находящихся в Рязанской, Саратовской и Московской областях Российской Федерации.

В РФ выращивание папайи производится с целью получения экстракта, необходимого для производства лекарственных препаратов.

Начиная с 2009 года нами успешно осуществляется выращивание папайи в условиях защищенного грунта: в 2010 – 2011 гг. – в агрокомбинате «Нива» в г. Железнодорожный Московской области и с 2010 г. по настоящее время в условиях частных тепличных комбинатов в Пронском районе Рязанской области и в г. Саратов.

Первоначально нами были проведены исследования по изучению всхожести семян папайи различного происхождения и приживаемости саженцев различных сортов (из Анголы, Ганы, Бразилии, Доминиканской республики, Кении и Таиланда), в результате чего для культивирования в условиях защищенного грунта был выбран сорт Сан Голд таиландского происхождения.

Посадка папайи производится семенами, прорастание может занять 3-5 недель. После получения сеянцев производили высадку их в горшки, необходимо высаживать лишь крепкие сеянцы, иначе, примерно 20% рассады погибнет в течение нескольких недель.

Выращивание производится на легких, пористых почвах, богатых органическим веществом. pH почвы должно колебаться от 5.5 до 6.7. (Marler, 1998, Marler, 2007) Через 3 месяца после пересадки сеянцев в горшки, необходимо произвести прореживание растений, что бы избежать затенения, для этого мы прибегали к методу обрезки корней.

Растет папайя непрерывно. В основании черешков ее листьев появляются сначала соцветия, а затем после опыления начинают расти завязи — маленькие зеленые «дыньки», которые по мере созревания превращаются в большие оранжевые плоды.

В уходе за растениями существенен частый полив малыми дозами и подкормка (Нитроаммофоска N-16%; P-16%; K-16%) каждые две-три недели.

В течение всего периода исследований с 2010 по 2014 г. нам удалось успешно культивировать папайю в условиях защищенного грунта и получать плоды.

–  –  –

Рисунок 11. Подготовленные к высадке растения Рисунок 12. Взрослые растения в теплице в Рязанской области Рисунок 13. Плодоносящие растения в теплице в Рязанской области При выращивании растений папайи в условиях защищенного грунта за все годы исследований мы наблюдали лишь поражения щитовкой и паутинным клещом. Это можно объяснить тем, что в контролируемых условиях нет такого количества патогенов, как в открытом грунте, а также тем, что поражение папайи значительным количеством вредителей и болезней отмечается в странах ее естественного произрастания, где вредителей и возбудителей болезней гораздо больше.

Рисунок 14. Поражение щитовкой в условиях защищенного грунта

Поскольку выращивание папайи в условиях защищенного грунта ведется в основном для получения растительных экстрактов для фармацевтической и пищевой промышленности, использование химических пестицидов не допустимо. В связи с этим для контроля паутинного клеща мы производили выпуск хищного клеща фитосейулюса, а для борьбы со щитовкой использовали концентрированный мыльный раствор.

Основная цель выращивания папайи в условиях защищенного грунта – сбор латекса из зеленых незрелых плодов, из которого впоследствии путем ферментации получают один из самых эффективных антираковых прапаратов папаин, цена которго составляет 500 $ США за грамм. При столь высокой цене конечного продукта расходы на содержание теплицы экономически себя оправдывают, хотя производство папайи в условиях защищенного грунта может приближаться к безотходному, т.к. листья данного растения также содержат небольшие количества ферментов, близких к папаину, что делает их хорошим сырьем для производства функциональных продуктов питания, в частности, иммуностимулирующего фиточая. Кроме того, как было показано в нашем исследовании, семена плодв папайи содержат ценные масла, которые с успехом могут использоваться как в фармацевтической, так и в косметической

–  –  –

III. ИЗУЧЕНИЕ ХИМИЧЕСКОГО СОСТАВА СЕМЯН ПАПАЙИ

ИЗ РАЗНЫХ МЕСТ ЕЕ ПРОИЗРАСТАНИЯ

Объектами исследования служили:

1. 8 образцов семян папайи. Они были получены из разных источников урожая разных лет от растений, произрастающих в Кении, Бразилии, Анголы, Ганы, а также выращенных в тепличных условиях под Саратовым, под Рязанью, в агрохолдинге «Нива»

(Московская область, Дзержинский район). Некоторые образцы семян были выделены из плодов папайи, приобретенных в торговой сети поставщики из Аргентины, Таиланда;

2. Липидные фракции из измельченных семян папайи.

3. Листья, стебли и корни папайи урожая 2010 г из теплицы.

3.1. Материал и методы 3.1.1. Изучение морфологии семян и плодов папайи Сушку семян, извлеченных из свежих плодов проводили при комнатной температуре в тонком слое при периодическом перемешивании (ГФ ХI вып. 1 стр. 29 – 30). Внешние признаки семян, а так же микроскопию цельных, измельченных и обезжиренных семян папайи проводили, используя методики (ГФXI вып 1,2, т.1 стр. 260).

Для микроскопии готовили временные препараты: из поперечных срезов семян папайи, из измельченного сырья и обезжиренного шрота.

Микропрепараты исследовали с помощью микроскопа «Ломо, МИКМЕД – 1» с объективами 10, 20 и окулярами 10х,8х. Микрофотосъемку выполняли с помощью цифрового фотоаппарата Canon (power shot A95 – Ai AF) zoom lens 3x-7,8-23,4mm, 5.0 mega pixels 167 на микроскопе с различными объективами.

Внешний вид семян изучали при дневном свете. Дисперсный состав семян проводили с помощью проволочных сит с отверстиями размером 5 мм, 3 мм и 2 мм из навески 13-19 г; массу 1000 семян определяли по общепринятой методике.

3.1.2. Получение липидного комплекса из семян папайи В литературе описаны различные методы получения жирных масел медицинского назначения: методом прессования (холодного или горячего), методом экстракции (статичной или динамичной) органическими растворителями или сжиженными газами. В случае экстракции органическими растворителями, в качестве экстрагента используют индивидуальные вещества либо смешанные экстрагенты (Godin,Spensley, 1971).

К наиболее распространенным экстрагентам, применяемым для экстракции жирных масел с различными целями, относятся: ацетон, бензин, растворитель типа Нефракс, гексан, хлороформ, дихлорэтан (Васильев, 2013).

В нашем случае, получение липидного комплекса проводилось методом циркуляционной экстракции измельченных семян папайи в аппарате Сокслета легко летучим органическим растворителем – н-гексаном Т. кип. - 69°С. Экстрагирование осуществляется в замкнутом цикле в аппарате Сокслета.

–  –  –

Во избежание засорения трубопровода, измельченный материал поместили в патрон из фильтровальной бумаги в экстрактор 2, залили нгексаном немного ниже петли сифонной трубки 5 и оставили для настаивания на несколько часов. Затем в куб 1 и сборник 4 залили небольшое количество н-гексана. По окончании настаивания из сборника спустили в экстрактор столько н-гексана, чтобы вытяжка достигла верхнего уровня петли сифона и начала переливаться в куб. Куб начали обогревать паром.

Испаряющийся н-гексан поднимается в конденсатор 3 и стекает в сборник. Далее н-гексан поступает на сырье в экстрактор. Насыщенная вытяжка вновь поступает в куб. Циркуляция н-гексан повторялась 10-15 раз до истощения растительного материала. Полученную вытяжку концентрировали отгонкой экстрагента в приемник. В кубе остается концентрированный раствор масла в н-гексане.

3.1.3. Определение показателя преломления жирного масла семян папайи Показатель преломления жирного масла семян папайи определялся по ГФ ХI вып. 1 стр. 29 – 30 при помощи рефрактометра ИРФ – 454Б2М № 051092, с последующей статистической обработкой полученных результатов измерения.

Для сравнения результатов определения показателя преломления жирного масла, полученного из семян папайи, было проведено в этих же условиях определение показателей преломления Масла персикового (пр-во Галено Фармтм ОАО «Фармацевтическая фабрика Санкт-Петербурга»; ТУ 9158-005-01899557-01) и Масла расторопши (Серия 0806 Натуральное масло из расторопши пятнистой БАД к пище; пр-ль ООО «Иван-да-Марья» Россия Пензенская область г Кузнецк ул. Гагарина 55). Кроме этого были использованы данные литературы по этому показателю для широко используемых в медицине жирных масел. Результаты исследования и данные литературы сведены в приложение № 1a.

3.1.4. Анализ состава липидного комплекса семян папайи с помощью ЯМР – спектроскопии Проводили экспрессным гравиметрическим методом, после измельчения семян до размера частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 1 мм, в пересчете на воздушно - сухое сырье из навески 2 г методом элюирования гидрофобных веществ с навески сырья нгексаном при комнатной температуре.

Спектроскопия ядерного магнитного резонанса (ЯМР-спектроскопия) — физический метод, основанный на регистрации индуцированных радиочастотным полем переходов между ядерными магнитными энергетическими уровнями молекул вещества, помещенного в постоянное магнитное поле. Переходы между ядерными магнитными уровнями возможны для ядер, обладающих магнитным моментом, т. е. имеющих спиновое квантовое число 1, не равное нулю. Такими свойствами обладают ядра 1Н, 13 19 31 С, P, у которых 1 = 1/2, и др. Совокупность сигналов F, переходов между энергетическими уровнями ядер составляет спектр ЯМР, который является специфичным для каждого вещества ГФ ХI вып. 1 стр. 29 – 30.

Спектры ЯМР высокого разрешения регистрируют для легкоподвижных жидкостей в определенных растворителях. Выбор растворителя определяется растворимостью анализируемого вещества и наиболее полным разделением сигналов резонанса вещества и растворителя, если последний содержит ядра, по которым проводится регистрация спектра ЯМР. Для уменьшения интенсивности сигналов растворителей в спектрах ЯМР используют дейтерированные, или апротонные, растворители (ГФ ХI вып. 1 стр. 29 – 30).

Спектры ЯМР Ни С представляют обширную информацию о молекулярной структуре анализируемого вещества.

Положение сигналов резонанса в спектре, их тонкая структура и площади позволяют определять число атомов водорода и углерода в отдельных группах, ближайшее химическое окружение, сочленение отдельных структурных фрагментов молекулы, наличие примесей. Полное совпадение спектров указывает на идентичность анализируемого вещества и стандартного образца (ГФ ХI вып. 1 стр. 29 – 30).

Определение подлинности и характеристика показателей качества жирных масел по принятым в действующей нормативной документации на жирные масла методикам является трудомким процессом и требуют значительных количеств масла для анализов, затрат времени на подготовку нужных реактивов, предварительную обработку масел (омыление масла, метилирование кислот), наличия достоверных стандартных образцов кислот или метиловых эфиров этих кислот.

Эффективность метода ЯМР в анализе лекарственных средств обусловлена тем обстоятельством, что для получения аналитического сигнала от органических веществ достаточно наличия в молекулах или атомов водорода (спектроскопия Н ЯМР) или атомов углерода (спектроскопия С ЯМР). В спектрах ЯМР проявляется атомы водорода и углерода всех веществ, находящихся в анализируемой пробе. В зарубежной и отечественной научной литературе имеются данные о применении метода ЯМР—спектроскопии для изучения и характеристики жирных растительных масел (Нифантьев, Ивченко, 2008). Этот инструментальный способ исследования масел привлекает возможностью получать информацию о составе жирного масла из сравнительно небольшой навески (100-200 мг) липидной фракции. Таким образом, данный метод можно применять, в качестве инструментального, информативного и неразрушающего метода для определения подлинности, установления качественного состава и определения ряда характеристик жирного масла. (Стихин и др., 1991) Для регистрации спектров ЯМР использовали спектрометр Gemini фирмы Varian с рабочей частотой 200 МГц.

3.1.5. Определение типа жирного масла семян папайи из Кении.

Использовали рефрактометр ИРФ- 454Б2М и Н -1ЯМР - спектр, снятый в растворе дейтерированного хлороформа на спектрометре Jeol «JNM-ECS 400» с рабочей частотой 400 Мгц в Центре коллективного пользования Научно-образовательного центра РУДН.

На основании известных формул (Стихин и др. 1991; Вандышев и др.

2009), были вычислены некоторые характеристики ТАГ в семенах, которые приведены в таблице 20.

3.2. Результаты исследований 3.2.1. Морфология семян плодов папайи Сухие семена папайи разного происхождения имеют овальную, яйцевидную форму, коричневый или темно-коричневый цвет, своеобразную семенную кожуру (Finneseth et al., 1998)., которая с поверхности продольноморщинистая, иногда блестящая из-за неудаленной высохшей саркотесты, чаще матовая, на узком конце семени иногда видны небольшой остаток желтой или оранжевой мякоти плода.

Таблица 18.

Дисперсный состав семян различного происхождения.

Происхождение Осталось семян на сите, % семян с отверстиями с отверстиями c отверстиями размером 5 мм размером 3 мм размером 2 мм Кения, урожай 21,5 78,2 0,34 2008 г.

Саратов,(РФ) 18,3 81,5 0,24 урожай 2008 г Семенная кожура толстая. Масса 1000 семян находится в интервале от 1446 мг до 1751 мг. Дисперсный состав семян папайи, культивируемой в Кении, и семян из плодов, выращенных в защищенном грунте (Саратов), судя по таблице 18, имеет небольшие различия. Семена из плодов растений, выращиваемых в открытом грунте, несколько крупнее, чем таковые в плодах,

–  –  –

3.2.3. Определение показателя преломления жирного масла семян папайи Жирное масло семян папайи подвижная, маслянистая жидкость.

Образцы жирного масла имели коэффициент рефракции в интервале 1,4667 – 1,4678. Такие значения характерны для жидких растительных масел, относящимся к невысыхающим.

Анализ состава триацилглицеринов семян папайи с 3.2.4.

помощью ЯМР –спектроскопии Из Н1_ЯМР – спектров всех образцов жирного масла семян папайи следует, что в области 2,7—2,9 м.д. интенсивность триплета метиленовых протонов, находящихся между двойными связями, очень мала. Это указывает на преобладание в составе триациглицеринов жирного масла семян папайи, независимо от района культивирования, эфиров глицерина с мононенасыщенной кислотой. Жирное масло всех изученных образцов семян папайи относится к невысыхающим ( к типу олеиновой кислоты).

–  –  –

Номенклатура таких растительных масел для медицинского использования на сегодняшний день немногочисленна (Шиков, 2004).

Известно, что на метаболизм жирных масел в растениях влияют климатические факторы (Муравьева, 2002), в связи с этим изучение некоторых характеристик триацилглицеридов в жирном масле семян папайи различного происхождения является актуальной задачей.

Выводы: 1. Среди внешних признаков 8 образцов семян папайи разного происхождения выявлены наиболее значимые для идентификации признаки: овальная, яйцевидная форма семян, продольно - глубокоморщинистая матовая, реже блестящая, поверхность семенной кожуры, имеющая коричневый или темно-коричневый цвет.

2. Установлено, что основная фракция семян имеет диаметр около 4 мм и длину 6 мм, масса 1000 семян разного происхождения от 1446 мг до 1751 мг.

3. Содержание липидного комплекса в образцах семян папайи разного происхождения (от 18% до 27,0%) позволяет отнести семена папайи к ценным жиро-масличным видам сырья, содержащим невысыхающее жирное масло, такого же типа как оливковое, персиковое и миндальное масла.

4. По данным 1Н - ЯМР-спектрам состав ТАГ в жирном масле семян различного происхождения практически одинаков.

5. Масло семян папайи можно охарактеризовать следующим образом:

аналог йодного числа равен - 68,1 ±; содержание жирных кислот:

ненасыщенных - 77,0 % ±; полиненасыщенных - 4,7%±; насыщенных - 23,0 %.

ИЗУЧЕНИЕ НАЛИЧИЯ НЕКОТОРЫХ ГРУПП

IV.

БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ ВЕЩЕСТВ И ЭФИРНОГО МАСЛА В

ПОДЗЕМНЫХ ОРГАНАХ CARICA PAPAYA L., КУЛЬТИВИРУЕМОЙ В

ЗАЩИЩЕННОМ ГРУНТЕ

Объектом исследований для определения наличия групп БАВ объектом явились корневища, боковые и придаточные корни 2-х годичного растения, выращенного в закрытом грунте под Рязанью в 2012 году. Подземные органы папайи (рис.18) в этом возрасте растения представляют собой относительно крупные корневища с отходящими от них многочисленными тонкими боковыми и мелкими придаточными корнями.

4.1. Материал и методы Для определения наличия групп БАВ в подземных органах папайи была использована следующая методика: около 2,0 г сырья, измельченного до размера частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями диаметром 1 мм, помещали в коническую колбу, прибавляли 40 мл воды (1:20) и при слабом кипении на плитке проводили экстракцию в течение 30 минут с обратным холодильником. Затем теплое водное извлечение профильтровали через складчатый бумажный фильтр (красная полоса). Фильтрат после охлаждения при комнатной температуре подвергали анализу на наличие некоторых групп биологически активных веществ. Выявление в водном извлечении из подземных органов групп БАВ проводилось с использованием методик, описанным Фитохимический анализ лекарственного растительного сырья:

Методические указания к лабораторным занятиям. / Под ред. К. Ф. Блиновой.

Репринтное издание – СПб.: СПХФА, 1998 – 60 с.. Обнаружение наличия крахмала проводили по реакции с раствором Люголя. Тест на наличие запасного углевода - инулина (в широком смысле фруктозанов) проводили, помещая тонким слоем порошок сырья на предметное стекло, прибавляя к нему 15% спиртовый раствор тимола, после удаления избытка раствора на влажный порошок сырья наносили каплю концентрированной серной кислоты. Для обнаружения в растворе фенольных соединений проводили реакцию с хлоридом железа (III). Реакция основана на способности фенольных соединений образовывать окрашенные комплексы с катионом Fe3+. Наличие слизи (полисахаридов) устанавливали по реакции образования аморфного осадка после добавлении к 1 мл водного извлечения 3 мл спирта этилового 96%.

Наличие флавоноидов определяли прибавляя к порциям извлечения 2,5% водного раствора натра едкого и 3% раствор алюминия хлорида в спирте. Наличие сапонинов устанавливали с помощью теста пенообразования за счт энергичного встряхивания водного извлечения в пробирке в течение минуты, наблюдая появление обильной и стойкой пены.

Определение вероятного типа сапонинов проводили на основании результатов теста пенообразования при установлении щелочной и кислой среды в порциях водного извлечения. (Коморова с соавт., 1998).

4.1.1. Определение содержания эфирного масла в подземных органах Был использован метод 1 по Государственная Фармакопея СССР ХI издание, вып. 1. М.: Медицина.-1987. со следующими дополнениями:

Навеска измельченного сырья составила 45,0 г, вместимость конической колбы 1000 мл, объем воды 500 мл, время перегонки масла - 2 часа.

Состав эфирного масла определяли с помощью хромато-массспектрометра JMS GСmate II (JEOL, Япония, метод ионизации — ионизация электронами, ИЭ, диапазон измеряемых масс 40-600 Да, скорость регистрации спектров 2 скан/сек. Режим работы хроматографа: температура инжектора 270 0С, начальная температура колонки — 60 0 С,выдержка в течение 3 мин, затем подъем температуры со скоростью 10 0С/мин до 290 0С, выдержка в течение 10 минут). Идентификацию соединений в нм проводили с помощью масс-спектральной базы Степень совпадения NIST‘11.

полученных спектров с представленными в базе составляла не менее 90%. В качестве дополнительного параметра для идентификации привлекали данные об индексах удерживания (ИУ) веществ, которые рассчитывали с помощью программного комплекса AMDIS‘32 по калибровке, полученной в результате анализа смеси нормальных углеводородов в тех же хроматографических условиях.( Энциклопедический словарь лекарственных растений и продуктов животного происхождения / под ред. Г.П.Яковлева и К.Ф.Блиновой. СПб.:

Специальная литература.-1999.- C. 215 – 216.) Содержание компонентов в таблице 2 вычислено по высоте пиков на хроматограмме.

4.2. Результаты исследований Общий вид подземных органов папайи показан на рис. 18. Они представлены крупным корневищем и достаточно мощными боковыми и придаточными корнями.

A Б

–  –  –

частности, принадлежащих семейству Asteraceae (одуванчик – Taraxacum, топинамбур - Helianthus tuberosus L., цикорий - chorium intybus., девясил – Inula) и Колокольчиковые - Букашник гладкий) как запаcной углевод накапливается фруктозан - инулин (Машковский, 1984). Фруктозаны с более короткой цепью леваноподобного типа, у которых мономеры (фруктоза) соединены 2 - 6 гликозидными связями, а не 2-1 связями, как в молекуле инулина, также обнаружены в листьях, стеблях и корнях некоторых представителей семейства злаковых – Poaceae (Филипцова, 2004). При анализе порошка корневищ и корней папайи с помощью модифицированной реакции Молиша наблюдалось образование красно-оранжевого окрашивания, которое появляется при проведении аналогичной реакции с порошками корней одуванчика лекарственного и корневищ девясила высокого, т.е. в видах лекарственного растительного сырья достоверно содержащих инулин (рис. 19).

–  –  –

04_05_201 90 2_1781 Relative Abundance 5 11.12 11.40 5.78 6.65 7.06 7.28 7.83 8.79 9.22 11.82 12.95 13.17 14.63 16.12 17.01 17.47 14.81 18.34

–  –  –

Отдельные группы соединений из подземных и наземных органов папайи были в дальнейшем изучены на наличия возможной антибактериальной и антигрибной активности.

ГЛАВА ИЗУЧЕНИЕ БАКТЕРИЦИДНОЙ АКТИВНОСТИ

V.

ЭКСТРАКТОВ ИЗ РАЗЛИЧНЫХ ЧАСТЕЙ ПАПАЙИ

Объектом исследований служили водные экстракты из листьев, стеблей и корней папайи, выращенной в условиях защищенного грунта. При анализе водных вытяжек из различных частей растения папайи была выделена в большом количестве флюоресцирующая бактерия Pseudomonas fluorescens, которая была исследована на возможные антагонистические свойства.против штаммов фитопатогенных бактерий.

Оценка антибактериального действия сока папайи на зараженных семенах трех культурных растений Материал и методы Семена растений были предоставлены ВНИИССОК, ВНИИСХ «Немчиновка», ВИК. Штаммы патогенов были получены из коллекции ФГНУ ВНИИ фитопатологии (Московская обл. п. Большие Вяземы).

Растения капусты белокочанной (Brassica oleracea var. capitata L., сорт Амагер 611), рапса (Brassica napus L., сорт «Северянин») и пшеницы (Triticum aestivum L., сорт «Московская-39») искусственно заражали тремя различными патогенами: Xanthomonas campestris pv. campestris (штамм 1368), Xanthomonas arboricola (штамм 3004) и Pseudomonas syringae pv.

syringae, штаммS-38). Действие растительных экстрактов изучали по общепринятым микробиологическим методикам общей (Методы бактериологии : Пер. с англ./Под ред. Ф. Герхардта и др. — М.: Мир,1984. — 264 с.).

Эксперимент был заложен рандомизированно в четырех повторностях.

Семена исследуемых растений предварительно стерилизовали и в растворе перманганата калия, промывали трижды и замачивали их в дистиллированной воде в течение 1,5 часа. Затем семена замачивали в суспензии с содержанием 108 КОE/мл трех различных патогенов (Xanthomonas campestris, Xanthomonas arboricola и Pseudomonas syringae), после чего семена помещали в чашки Петри с растворами растительных экстрактов в разных концентрациях, где их выдерживали в течение 45 мин.

По 15 обработанных семян на повторение помещали в чашки Петри с влажной фильтровальной бумагой и инкубировали при комнатной температуре и искусственном освещении.

Физиологические изменения начинали учитывать на 4-й день эксперимента. Доля проросших семям и морфометрические показатели проростков использовали для последующей статистической обработки.



Pages:     | 1 || 3 |

Похожие работы:

«Сухарьков Андрей Юрьевич РАЗРАБОТКА МЕТОДОВ ОЦЕНКИ ОРАЛЬНОЙ АНТИРАБИЧЕСКОЙ ВАКЦИНАЦИИ ЖИВОТНЫХ 03.02.02 «Вирусология» Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: кандидат ветеринарных наук, Метлин Артем Евгеньевич Владимир 2014 ОГЛАВЛЕНИЕ 1 ВВЕДЕНИЕ 2 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 2.1 Характеристика возбудителя бешенства 2.2 Эпизоотологические...»

«СЕРГЕЕВА ЛЮДМИЛА ВАСИЛЬЕВНА ПРИМЕНЕНИЕ БАКТЕРИАЛЬНЫХ ЗАКВАСОК ДЛЯ ОПТИМИЗАЦИИ ФУНКЦИОНАЛЬНО-ТЕХНОЛОГИЧЕСКИХ СВОЙСТВ МЯСНОГО СЫРЬЯ И УЛУЧШЕНИЯ КАЧЕСТВА ПОЛУЧАЕМОЙ ПРОДУКЦИИ Специальность 03.01.06 – биотехнология ( в том числе бионанотехнологии) Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель Доктор биологических наук, профессор Кадималиев Д.А. САРАНСК 2014 ОГЛАВЛЕНИЕ ВВЕДЕНИЕ.....»

«Цвиркун Ольга Валентиновна ЭПИДЕМИЧЕСКИЙ ПРОЦЕСС КОРИ В РАЗЛИЧНЫЕ ПЕРИОДЫ ВАКЦИНОПРОФИЛАКТИКИ. 14.02.02 – эпидемиология ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени доктора медицинских наук Научный консультант: заслуженный деятель науки РФ, лауреат Государственной премии СССР профессор, доктор медицинских наук Ющенко Галина Васильевна Москва – 20 Содержание...»

«АБДУЛЛАЕВ Ренат Абдуллаевич ГЕНЕТИЧЕСКОЕ РАЗНООБРАЗИЕ МЕСТНЫХ ФОРМ ЯЧМЕНЯ ИЗ ДАГЕСТАНА ПО АДАПТИВНО ВАЖНЫМ ПРИЗНАКАМ Шифр и наименование специальности 03.02.07 – генетика 06.01.05 – селекция и семеноводство сельскохозяйственных растений ДИССЕРТАЦИЯ на соискание учёной степени кандидата...»

«БРИТАНОВ Николай Григорьевич ГИГИЕНИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ ПЕРЕПРОФИЛИРОВАНИЯ ИЛИ ЛИКВИДАЦИИ ОБЪЕКТОВ ПО ХРАНЕНИЮ И УНИЧТОЖЕНИЮ ХИМИЧЕСКОГО ОРУЖИЯ 14.02.01 Гигиена Диссертация на соискание ученой степени доктора медицинских наук Научный консультант: доктор медицинских наук, профессор...»

«Ульянова Онега Владимировна МЕТОДОЛОГИЯ ПОВЫШЕНИЯ БЕЗОПАСНОСТИ БАКТЕРИАЛЬНЫХ ВАКЦИН НА МОДЕЛИ ВАКЦИННЫХ ШТАММОВ BRUCELLA ABORTUS 19 BA, FRANCISELLA TULARENSIS 15 НИИЭГ, YERSINIA PESTIS EV НИИЭГ 03.02.03 – микробиология Диссертация на соискание ученой степени доктора биологических наук Научный консультант:...»

«Якимова Татьяна Николаевна Эпидемиологический надзор за дифтерией в России в период регистрации единичных случаев заболевания 14.02.02 эпидемиология диссертация на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Научный руководитель: доктор...»







 
2016 www.konf.x-pdf.ru - «Бесплатная электронная библиотека - Авторефераты, диссертации, конференции»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.