WWW.KONF.X-PDF.RU
БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА - Авторефераты, диссертации, конференции
 


Pages:     | 1 |   ...   | 2 | 3 || 5 |

«РАЗРАБОТКА МЕТОДОВ ОЦЕНКИ ОРАЛЬНОЙ АНТИРАБИЧЕСКОЙ ВАКЦИНАЦИИ ЖИВОТНЫХ ...»

-- [ Страница 4 ] --

С этой целью приготовили 100 образцов 30% суспензий головного мозга, полученных от разных видов животных. Из них 70 проб головного мозга содержали ВБ, а 30 не содержали. Диагноз на бешенство был поставлен с использованием РИФ, дополнительно для подтверждения диагноза использовали биопробу на мышах и ПЦР.

Суспензии готовили с использованием разных отделов головного мозга.

Затем суспензии заморозаживали при минус 20°С, вновь размораживали, гомогенизировали и разливали по пластиковым пробиркам объемом 1,5 мл.

Приготовленные аликвоты храненили при минус 20°С до использования.

В сенсибилизированные планшеты вносили пробы и контроли, которые предварительно центрифугировали при 1000g в течение 20 минут. После промывки планшета вносили конъюгат в разведении 1/1500, приготовленный на промывочном буферном растворе с добавлением неиммунной сыворотки лошади до концентрации 5%. После инкубации с коньюгатом проводили промывку и вносили субстрат-хромогенную смесь. Останавливали реакцию 3Н раствором серной кислоты, реакцию учитывали при длине волны 492 нм. Результаты исследований представлены в таблице 26.

Из таблицы 26 видно, что из 70 проб головного мозга от различных видов диких, домашних и с/х животных, положительных в РИФ в прямом сэндвич варианте ИФА было выявлено 68 проб, что составило 97,14%. Две пробы,

–  –  –

в 2008 году от собаки и лисицы (экспертизы 1540/08 и 1542/08) оказались отрицательными. При постановке РИФ в отпечатках ткани головного мозга указанных проб находили единичные клетки со специфичными включениями. В ПЦР эти пробы оказались также положительные. Все пробы, отрицательные в РИФ оказались так же отрицательными в прямом сэндвич варианте ИФА.

Для сравнения результатов разработанного прямого сэндвич варианта ИФА с непрямым сэндвич вариантом ИФА, разработанным ранее, исследовали приготовленные суспензии головного мозга в непрямом методе. Результаты исследований в прямом и непрямом сэндвич вариантах ИФА полностью совпали.

Использование разработанного теста для оценки эпизоотической ситуации по бешенству. Чтобы определить возможность использования разработанного нами прямого сэндвич варианта ИФА для оценки эпизоотической обстановки по бешенству, нами было проведены мониторинговые исследования.

С этой целью пробы головного мозга, отобранные в ходе мониторинга в Калининградской области в 2010 году, исследовали в ИФА. Результаты сравнили с результатами, полученными при использовании РИФ (таблица 27).

–  –  –

Из таблицы 27 видно, что из 146 исследованных проб головного мозга от лис и енотовидных собак вирус бешенства был обнаружен в пяти, что составило 3,4%. Результаты, полученные в прямом сэндвич варианте ИФА, полностью совпали с результатами РИФ.

Подобным образом оценивали эпизоотическую ситуацию в других регионах. Исследовали в РИФ и ИФА в конце 2011 года 15 проб и в начале 2012 года 30 проб головного мозга из Республики Карелия от различных видов животных, а также в 2012 году 13 проб головного мозга от волков, лис и куницы из Ленинградской области. Результаты представлены в таблицах 28 и 29.

–  –  –

Из таблицы 28 видно, что при исследовании 45 проб головного мозга от волков, лис, собак, медведей, лосей и барсуков, доставленных из Республики Карелия, вирус бешенства выявлен не был. Результаты прямого сэндвич варианта ИФА полностью совпали с результатами РИФ.

–  –  –

Из таблицы 29 видно, что при исследовании 13 проб головного мозга от волков, лис и куницы из Ленинградской области вирус бешенства также не обнаружен. Результаты прямого сэндвич варианта ИФА полностью совпали с результатами РИФ.

На основании полученных результатов были разработаны «Методические указания по выявлению антигенов вируса бешенства в головном мозге животных в твердофазном прямом сэндвич-варианте иммуноферментного анализа» и утверждены заместителем директора ФГБУ «ВНИИЗЖ» (см. Приложение Г).

3.3 Обсуждение результатов Во многих странах мира бешенство остается одной из важнейших проблем ветеринарии. Оральная вакцинация является основным способом борьбы с бешенством в дикой природе. Однако в результате различных нарушений применение антирабических вакцин может быть не всегда эффективно, поэтому мониторинг - важнейшая составляющая программы оральной вакцинации. Он позволяет оценить эпизоотическую обстановку по бешенству в зоне вакцинации, а также эффективность проводимых мероприятий.

Для проведения диагностических исследований на бешенство важным фактором является качество используемых проб патологического материала. С этой целью нами были разработаны «Методические указания по отбору и пересылке проб головного мозга сывороток крови и костной ткани с целью диагностики бешенства животных и оценки эффективности оральных антирабических вакцин». В них подробно описаны способы отбора патологического материала для проведения диагностических исследований и требования предьявляемые к его транспортировке и хранению.

Одной из составляющих маниторинга является оценка поедаемости оральных вакцин. Учет поедаемости вакцинных приманок при ручном способе их распространения возможно проводить визуально [148]. Данным методом проводили оценку поедаемости оральной антирабической вакцины РабивакО/333, изготовленной из штамма ERA G333 вируса бешенства, в Краснодарском крае и Владимирской обл. Испытания вакцины проводили осенью. В большинстве районов Европы успех борьбы с бешенством лис достигался проведением кампании по оральной вакцинации весной (март-май) и осенью (сентябрьоктябрь) [211].

В условиях Краснодарского края 93,9% приманок были съедены в течение четырех суток. В первые сутки наблюдения целевыми видами животных (лисицы, енотовидные собаки) были съедены 27,2% всех приманок с вакциной. Во Владимирской области в первые сутки было съедено 61,5% вакцины, на третьи сутки – поедаемость составила 84,6%. Большинство исследований показали, что более 50% приманок потребляется за первую неделю и более 80% на 1-3 неделе [81, 111, 148, 220]. В наших исследованиях на первой неделе потреблялось более 80% приманок, что свидетельствует о высокой привлекательности приманок Рабивак-О/333 для целевых видов животных.

При проведении испытаний в местах раскладки приманок были обнаружены блистеры с нарушенной целостностью и следами зубов лисиц и енотовидных собак (вакцинная суспензия в них отсутствовала), что свидетельствует о попадании вакцины в организм целевых видов животных. Однако остается вероятность поедания животным приманки без потребления вакцинной суспензии, о чем свидетельствуют сообщения из некоторых регионов России.

В ряде случаев, на приманках обнаруживали следы зубов мелких мышевидных млекопитающих, которые локализовались по краям. Некоторые вакцинные штаммы опасны для грызунов [2], но как показали исследования, обнаруженные повреждения не достигали капсулы с вакциной. Тем не менее, безопасность вакцинного вируса должна быть проверена на целевых и нецелевых видах, которые могут присутствовать в районе вакцинации [89, 178]. В отношении штамма ERA G333 установлена его апатогенность для взрослых лабораторных мышей при внутримозговом введении [2].

Метод визуального контроля позволяет оценить качество и время поедания приманок, а также определить оптимальные места распределения приманок и погодные условия для их распространения. Однако он довольно трудоемок, что ограничивает применение при проведении широкомасштабных кампаний по оральной вакцинации диких животных.

Чаще для учета поедаемости вакцинных приманок используют биомаркеры, которые включают в состав приманок. Обычно в качестве биомаркера используют антибиотики тетрациклинового ряда [143]. Данный метод использовали для оценки оральных вакцинаций проводимых в ряде регионов нашей страны и за рубежом.

На основании полученных результатов были разработаны «Методические указания по обнаружению флуоресцентным методом антибиотиков тетрациклинового ряда в тканях зубов и костей животных для контроля поедаемости оральных антирабических вакцин» рекомендованые к применению для оценки поедаемости оральных антирабических и других вакцин, содержащих в своем составе в качестве маркера тетрациклины.

В результате проводимого мониторинга в Калининградской области была изучена поедаемость антирабической вакцины в период с 2007 до 2010 года.

Перед проведением оральной вакцинации обычно устанавливают фоновую долю тетрациклин-позитивных животных [28, 36, 79, 168, 170] в популяции целевых видов. В нашем случае поедаемость составила 3,9%. Фоновый уровень тетрациклинов, обнаруживаемый у животных в дикой природе, которые они получают, как правило, из сельскохозяйственных источников, составляет менее 5% [36]. Таким образом, полученные нами данные укладываются в рамки международно признаных показателей.

В 2008 году процент проб содержащих тетрациклин повысился и составил более 50%. Затем уровень поедаемости стал ежегодно снижаться и оказался ниже 40%. Снижение уровня поедаемости может быть связано с трехкратным увеличением выборки в 2009 году, до 150 проб, что позволило более качественно оценить ситуацию. Вакцинация считается качественно проведенной при достижении уровня поедаемости в 70%. Поэтому поедаемость 52,9% в 2008 году представляет собой не высокий результат. Поедаемость вакцины на уровне ниже 70% свидетельствует об ошибках при проведении вакцинации либо мониторинга поедаемости вакцины.

Анализ, проведенный в 2009-2010 годах, показал низкие результаты поедаемости по большинству районов Калининградской области. 70%-ный уровень поедаемости был достигнут только в Краснознаменском районе в 2009 году и в Полесском в 2010 году. Следует отметить, что в Краснознаменском районе в 2010 году тетрациклин-положительных проб оказалось 45%. Выборка в этом году по сравнению с 2009 годом была увеличена в два раза, и пробы отбирались в двух разных квадратах (по 10 проб в каждом), в которых поедаемость составила 40% и 50%. В 2009 году 10 проб были отобраны в одном квадрате. Следовательно, понижение процента тетрациклин-положительных проб может быть связано не только с увеличением количества отбираемых проб, но и с неоднородностью отбора проб, что приводит к повышению вероятности ошибки при определении общей поедаемости по району. В Полесском районе в 2010 году наблюдалось увеличение числа тетрациклин-положительных проб до 70% с 33,3% в 2009 году, что также может быть связано с неоднородностью при отборе проб. В остальных районах количество тетрациклин-положительных проб составило менее 70%. Особенно низкими показатели поедаемости были в Багратионовском, Гвардейском, Гурьевском, Гусевском, Неманском, Нестеровском, Правдинском, Славском и Черняховском районах.

Вакцинация в Калининградской области проводится с использованием малой авиации. Поедаемость на уровне ниже 70% указывает на ошибки при ее проведении. Связано это вероятно с тем, что в Калининградской области до 2010 года вакцинацию проводилась один раз в год, хотя рекомендуют проводить двукратно. Возможно, разбрасывается недостаточное количество вакцинных приманок. Если тетрациклин обнаруживают менее чем у 70% животных, и среднее количество тетрациклиновых полос менее двух, то плотность распределения приманок признается недостаточной и требует увеличения [30]. У большинства тетрациклин-положительных проб, поступивших из Калининградской области обнаруживали только одну полосу, что свидетельствует об однократном потреблении животными тертрациклин-содержащей субстанции.

В 2009 году нами были проведены исследования на наличие тетрациклина в пробах костей полученных из 11 регионов Российской Федерации, где проводились мероприятия по оральной антирабической вакцинации диких животных. Вакцину в этих регионах распространяли ручным способом. Были исследованы 242 пробы костей диких плотоядных животных. Для проведения полноценного мониторинга необходимо отстреливать не менее четырех животных на 100 км2 зоны вакцинации в год [11], исключая площадь населенных пунктов и водоемов. Большое значение имеет однородность сбора проб на территории проведения оральной вакцинации, так как при неравномерном отборе, происходит существенное искажение результатов. Несмотря на то, что из ряда регионов поступило недостаточное число проб, полученные данные дают определенное представление о качестве проводимой вакцинации на местах.

Общая поедаемость составила 28,5%, что является очень низким результатом.

Поедаемость на уровне выше 70% не наблюдалась ни в одном из исследуемых регионов. Наибольшее количество тетрациклин-положительных проб было выявлено в Воронежской и Челябинской областях 53,3% и 50% соответственно. Однако из этих областей было получено небольшое количество проб, а значит, велика вероятность ошибки. Особенно мало проб (менее 10) было получено из Волгоградской и Челябинской областей, что делает невозможным проведение качественной оценки. Наибольшее количество проб прислали из Московской, Тульской и Нижегородской областей (более 30 проб), где поедаемость не превысила 30%.

Отсутствие или низкий уровень выявляемости тетрациклинов в костной ткани диких плотоядных животных в зоне проведения оральной иммунизации может свидетельствовать о некорректном применении вакцины. В результате доступность приманок для целевых видов животных резко снижается (раскладка приманок без использования перчаток и распределение вакцины при температуре ниже 0°С, несоблюдении кратности ее применения (два раза в год)). Низкая поедаемость на исследованных территориях так же может быть связана с недостаточным количеством разбрасываемой вакцины и с неравномерным ее распределением. Наличие в зоне иммунизации плотной популяции нецелевых видов, прежде всего диких кабанов, может так же корректировать уровень поедаемости оральных антирабических вакцин целевыми видами (лисицы, енотовидные собаки). Кроме того, для широкомасштабной вакцинации наиболее подходит распространение вакцины с использованием авиации [220] нежели ручная раскладка. Возможны ошибки при производстве вакцинных приманок.

Деградация и неравномерное распределение тетрациклина в приманках может негативно сказаться на эффективности маркировки. Если эффективность маркировки тетрациклина в приманке меньше 100%, то наблюдается снижение показателя поедаемости по сравнению с действительным.

Оценку поедаемости антирабических вакцин проводили не только в Российской Федерации, но и в Республике Беларусь, где с 2011 года проводят оральную вакцинацию приграничных с Латвией, Литвой и Польшей территорий.

Вакцинацию проводят преимущественно с использованием авиации. В результате проведенного мониторинга в 2011 году поедаемость вакцины составила 59,9%, а в 2012 году 58,1%, т.е. менее 70%. Следовательно, имеются некоторые ошибки при ее проведении. В 2012 году выборка была увеличена по сравнению с 2011 годом с 444 до 1176 проб, что увеличивает точность оценки.

Приманки разбрасывались на территории трёх областей: Гродненской, Витебской и Минской. Поедаемость в этих областях в 2011 году составила 61,7%, 62,2% и 49,2%, а 2012 году 57,2%, 61,5% и 64,9% соответственно. Сильная разница в показателе поедаемости в Минской области в 2011 и 2012 годах, вероятно, связана с небольшим количеством исследованных проб по сравнению с остальными областями. Всего из Минской области было исследованно в 2011 году 65 проб, в 2012 году 57 проб. Во многих районах за два года исследований поедаемость была на уровне 60% и выше, поедаемость выше 70% за два года сохранялась лишь в Браславском и Вилейском районах. Результаты поедаемости выше 60% можно признать близкими к удовлетворительным, однако, следует стремиться к достижению 70%-ого уровня.

В результате проведенных исследований были определены районы с наиболее низким процентом тетрациклин-положительных проб. Очень низкие результаты наблюдаются в Зельвенском, Кореличском, Слонимском и Верхнедвинском районах, где уровень поедаемости не поднимался выше 40%. В Волковысском, Новогрудском, Островецком, Ошмянском, Свислочском и Сморгонском, Глубокском, Миорском, Мядельском и Столбцовском районах в среднем за два года поедаемость была ниже 60%. Из Минского района в 2011 году было прислано всего четыре пробы, а в 2012 году проб не присылали, что не дает возможность оценить поедаемость в этом районе. В результате в 2011 и 2012 году ни в одной из исследуемых областей уровень поедаемости не достиг 70%. При проведении исследований в значительном количестве проб выявляли более одной полосы скопления тетрациклина, что говорит о неоднократном поедании вакцины.

Низкий показатель поедаемости в регионах связан с малым количеством тетрациклин-положительных проб в некоторых районах. Повышение качества вакцинации в этих районах приведет к значительному улучшению общего показателя поедаемости. Возможной причиной низкой поедаемости является недостаточное количество вакцины в этих районах. Большинство авторов рекомендуют применять 15-20 вакцинных приманок на км2, однако, в ряде случаев применялось до 185 приманок на км2 [145, 146], так как плотность распределения должна коррелировать с плотностью целевых и нецелевых (прежде всего кабанов) видов животных на вакцинированной территории [170]. При этом учитывают плотность всех животных поедающих приманки.

В Беларуссии вакцинация проводилась с использованием авиации, и были достигнуты более высокие показатели поедаемости по сравнению с регионами РФ, в которых использовался ручной способ раскладки вацины. Использование авиации при оральной вакцинации позволяет более равномерно производить раскладку вакцины, а так же менее значимым является человеческий фактор, так как выброс вакцины производится автоматически, а маршрут фиксируется приборами, кроме того, более просто контролировать плотность распределения вакцинных приманок.

Важным критерием оценки антирабической вакцинации является наличие в крови животного ВНА. Основным методом оценки количества ВНА на сегодняшний день является РН в культуре клеток [142]. Однако в связи с трудоемкостью и дороговизной постановки РН в культуре клеток для определения уровней антирабических ВНА, была поставлена задача разработать метод оценки уровней антирабических антител на основе ИФА.

В качестве улавливающего антигена использовали гликопротеин, полученный путем деструкции вирионов ВБ. При использовании гликопротеина ВБ достигается наиболее высокая корреляция между РН и ИФА [95], так как большинство ВНА вырабатываются к сайтам на гликопротеине. Полученный нами гликопротеин содержал следовые количества других вирусных белков. По сравнению с гликопротеином их количество было не значительным, и не оказывало влияния на результат анализа.

В реакции в качестве конъюгата использовали стафилококковый белок А, меченый пероксидазой. Использование стафилококкового белка А вместо антивидовых антител повышает универсальность ИФА, позволяя выявлять антитела от разных видов животных [40, 132].

Проведенные исследования показали целесообразоность использования блокирующего раствора. Для блокирования свободных сайтов на твердой фазе использовали промывочный буферный раствор с добавлением казеина натриевой соли, свободный от примеси факторов сыворотки крови.

При определении разведения сывороток пришли к выводу о том, что оптимальными являются разведения 1/200 и 1/400 при исследовании сывороток от диких животных и разведения 1/100 и 1/200 при исследовании сывороток от домашних животных. Нами было принято для проведения дальнейших исследований разведение 1/200. Данное разведение позволяет исследовать очень малое количество сыворотки (5 мкл), по сравнению с РН, что в отдельных случаях дает разработанному нами ИФА преимущество перед РН.

При исследовании разработанным методом 78 сывороток крови собак, поступивших из региональных ветеринарных лабораторий, 53 из которых были положительными в РН, т. е. титр ВНА в них был 0,5 МЕ/мл, нами были получены следующие результаты. В ИФА положительными были так же 53 сыворотки. Однако из 53 положительных в РН только 48 было выявлено в ИФА (90,6%), а из 25 отрицательных только 20 были отрицательными в ИФА (80%).

Вероятно, расхождение результатов между ИФА и РН связано с принципиальными различиями между этими методами. Количество антител, которые связываются с гликопротеином ВБ, не будет точно соответствовать уровню ВНА присутствующих в сыворотке крови, т. к. с гликопротеином реагируют антитела, обладающие и не обладающие вируснейтрализующими свойствами, токгда как в РН определяются преимущественно пул антител с нейтрализующими свойствами.

Проведенные исследования показывают возможность использования разработанного нами ИФА в качестве скринингового для определения антител к гликопротеину ВБ в сыворотках крови животных для оценки эффективности проводимой антирабической вакцинации домашних (собак, кошек) и диких плотоядных животных. На основании полученных данных были разработаны «Методические указания по определению антител к гликопротеину вируса бешенства в сыворотках крови животных в иммуноферментном анализе».

По результатам исследования референтных сывороток разработанный тест можно определить, как специфичный, но уровень специфичности данного теста по отношению к полевым сывороткам крови разных видов животных требует дополнительного изучения. Предлагаемый метод может быть использован в качестве базового для дальнейшей разработки научно-методических подходов мониторинга эффективности антирабической иммунизации животных на основе ИФА.

Важной составляющей программы оральной вакцинации является оценка эпизоотической обстановки по бешенству в зоне вакцинации. Хотя основным референтным методом диагностики бешенства является РИФ, как альтернативный вариант для этой цели отлично подходит ИФА, который позволяет быстро исследовать большое количество проб.

С этой целью нами был разработан прямой сэндвич вариант ИФА для выявления антигенов ВБ в головном мозге животных. Для выявления ВБ нами был получен антирабический иммуноглобулин меченый пероксидазой.

Конъюгирование проводили по методу Никане [19] с некоторыми модификациями. При конъюгировании использовали поликлональные антитела морской свинки к ВБ.

Аналитическая чувствительность разработанного метода составила 15 нг/мл. При исследовании отрицательных в РИФ проб головного мозга в ИФА все пробы оказались также отрицательными. Расчетная оптическая плотность отрицательных проб при этом была на низком уровне 0,013 ± 0,0004, что свидетельствуют о высокой специфичности разработанного ИФА, которая в данном исследовании составила 100%. При исследовании 70 проб головного мозга от различных видов животных инфицированных вирусом бешенства 68 проб были положительными в ИФА, т.е. чувствительность метода определили на уровне 97,14%. Это свидетельствует о возможности применения данного метода для диагностики бешенства. Получение в ИФА отрицательных результатов для положительных в РИФ проб связано с низкой концентрацией антигена ВБ в мозговой ткани, ниже предела чувствительности метода. Однако такие пробы в случае клинического бешенства практически не встречаются.

При исследовании разработанным методом ИФА 100 проб головного мозга 70, из которых содержали ВБ, получены те же результаты, что и при исследовании разработанным ранее непрямым вариантом ИФА. Однако для постановки прямого варианта ИФА требуется меньше времени, вследствие использования антирабического конъюгата вместо антивидового и отказа от использования блокирующего раствора.

Разработанный метод использовали для оценки эпизоотической обстановки по бешенству в Калининградской области в 2010 году, а так же в Республике Карелия и Ленинградской области в 2011 и 2012 годах.

Из Калининградской области для оценки эпизоотической обстановки в рамках мониторинга антирабической вакцинации в 2010 году было прислано 146 проб головного мозга. С использованием разработанного нами метода было выявлено пять проб головного мозга, полученных от лис, содержащих ВБ.

Результаты были также подтверждены в РИФ. В Республике Карелия и Ленинградской области положительных по бешенству проб выявлено не было, ни в ИФА, ни в РИФ.

Проведенные исследования проб головного мозга полученных в ходе мониторинга на бешенство в Калининградской области, а также в Ленинградской области и Республике Карелия показывают возможность использования разработанного нами прямого варианта ИФА для оценки эпизоотической ситуации по бешенству животных. На основании полученных результатов были разработаны «Методические указания по выявлению антигенов вируса бешенства в головном мозге животных в твердофазном прямом сэндвич-варианте иммуноферментного анализа».

Разработанный ИФА может также использоваться как альтернативный вариант для диагностики бешенства при исследовании разложившегося материала. Паталогический материал может оказаться непригодным для диагностики методом биопробы на мышах и выделения вируса в культуре клеток вследствие своей токсичности, а в РИФ при исследовании разложившегося материала чувствительность ниже, чем в ИФА.

4 ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Во многих странах мира бешенство остается одной из важнейших проблем ветеринарии. Оральная вакцинация является основным способом борьбы с бешенством в дикой природе. Однако в результате различных нарушений применение антирабических вакцин может быть не всегда эффективно, поэтому мониторинг – важнейшая составляющая программы оральной вакцинации. Он позволяет оценить эпизоотическую обстановку по бешенству в зоне вакцинации, а также эффективность проводимых мероприятий. В связи с этим, целью наших исследований являлась разработка методов, позволяющих оценить качество мероприятий по оральной антирабической вакцинации диких животных и провести диагностический мониторинг по бешенству в зоне вакцинации.

В ходе проведенных исследований получены следующие результаты:

1. Усовершенствован метод отбора и пересылки проб патологического материала с целью диагностики бешенства животных и оценки качества проведения оральной антирабической вакцинации, позволяющий быстро и качественно производить отбор проб головного мозга, крови и костной ткани.

2. Освоен и внедрен в лабораторную практику метод определения тетрациклина в тканях костей и зубов.

3. Разработан непрямой ИФА для определения уровня антител к гликопротеину вируса бешенства в сыворотках крови животных.

Чувствительность и специфичность метода составила 90,6% и 80%, соответственно. Проведенные исследования показали возможность использования данного метода в качестве скринингового при оценке эффективности проводимой антирабической вакцинации.

4. Разработан прямой сэндвич-вариант ИФА для обнаружения РНП ВБ в головном мозге животных. Чувствительность и специфичность метода составила 97,14% и 100%, соответственно. Показана возможность использования разработанного прямого сэндвич-варианта ИФА для проведения диагностического мониторинга на бешенство.

5. С помощью метода определения тетрациаклина в тканях костей и зубов проведена оценка поедаемости оральных антирабических вакцин в ряде регионов. В Калининградской области уровень поедаемости вакцинных приманок за период наблюдения 2007-2010 годы не превысил 52,9%. Общий уровень поедаемости вакцинных приманок в исследованных регионах Российской Федерации в 2009 году составил 28,5%, в Республике Беларусь в 2011 году – 59,9%, а в 2012 году – 58,1%.

6. С помощью разработанного ИФА проведен диагностический мониторинг по бешенству в Калининградской, Ленинградской областях и Республике Карелия. В Калининградской области из 146 исследованных проб патологического материала выявлено пять положительных, что составило 3,4%. В Ленинградской области и Республике Карелия ВБ обнаружен не был. Результаты ИФА полностью совпали с результатами РИФ.

Таким образом, в результате проделанной работы поставленные задачи были выполнены. Разработанные в ходе проведенных исследований методы применяются в ФГБУ «ВНИИЗЖ» и в других научных учреждениях и лабораториях ветеринарного профиля.

5 СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВБ – вирус бешенства ВНА – вируснейтрализующие антитела ВОЗ – Всемирная организация здравоохранения ДНК – дезоксирибонуклеиновая кислота ИГХМ – иммуногистохимический метод ИФА – иммуноферментный анализ ИХА – иммунохроматографический анализ МЕ – международная единица МЭБ – Международное Эпизоотическое Бюро ОП – оптическая плотность ОФД – ортофенилендиамин ПЦР – полимеразная цепная реакция ПЦР-РВ – полимеразная цепная реакция в режиме реального времени РАЛ – реакция агглютинации латекса РДП – реакция диффузной преципитации РИФ – реакция иммунофлуоресценции РН – реакция нейтрализации вируса РНК – рибонуклеиновая кислота РНП – рибонуклеопротеин ФИТЦ-иммуноглобулин – антирабический иммуноглобулин, меченый флуоресцеинизотиоцианатом FAVN – fluorescent antibody virus neutralization test GPS – Global Positioning System, система глобального позиционирования IgG – иммуноглобулины класса G RFFIT – rapid fluorescent focus inhibition test VRG – vaccina rabies-glycoprotein, рекомбинантная антирабическая вакцина на основе гликопротеина ВБ

6 СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Алимов, Д.В. Бешенство животных / Д.В. Алимов. Душанбе: Дониш, 1984.

92 с.

2. Баньковский, Д.О. Иммунобиологические свойства штамма ERA G333 вируса бешенства для изготовления оральной антирабической вакцины:

автореф. дис. … канд. вет. наук / Д.О. Баньковский. – Щелково, 2010. – 22 с.

3. Ветеринарные правила ВП 13.3.1103-96. Профилактика и борьба с заразными болезнями, общими для человека и животных [Электронный ресурс]. – URL: http://www.fsvps.ru/fsvps/laws/177.html#1. – 13.11.2013.

4. Груздев, К.Н. Бешенство животных / К.Н. Груздев, В.В. Недосеков. – М.:

Аквариум, 2001. – 304 с.

5. Гулюкин, А.М. Эпизоотологический мониторинг и совершенствование серологического контроля эффективности вакцинопрофилактики бешенства: дис. … канд. биол. наук / А.М. Гулюкин. – Казань, 2011. – 216 с.

6. Жестерев, В.И. Штаммы вируса бешенства и их практическое значение / В.И. Жестерев, О.Г. Лаптева // Болезни диких жив-х.: труды междунар.

науч.-практ. конф. Покров, 2004. С. 35-37.

7. Идентификация арктических и классических вирусов в ПЦР / В.В. Недосеков, М.С. Пантюшенко, Я.С. Цыбанов [и др.] // Вет. газета.

2002. № 21. С. 4.

8. Истомина, М.А. Совершенствование методов диагностики и оценки эффективности вакцинопрофилактики бешенства животных: дис. … канд.

биол. наук / М.А. Истомина. – Щелково, 2011. – 120 с.

9. Ковалев, Н.Н. Новые подходы к профилактике бешенства / Н.Н. Ковалев, М.М. Усеня // Биол-экол. пробл. заразных болезней диких жив-х. и их роль в патологии с.-х. жив-х. и людей: матер. междунар. науч.-практ. конф.

Покров, 2002. С. 124-127.

10. Метлин, А.Е. Бешенство животных: эпизоотология меры борьбы и перспективы / А.Е. Метлин, Е.В. Чернышова, С.С. Рыбаков // Ветеринария Кубани. – 2009. – № 6. – С. 2-4.

11. Метлин, А.Е. Меры борьбы с бешенством животных / А.Е. Метлин // Ветеринария Кубани. – 2008. – № 1. – С. 4-7.

12. Обстановка по рабической инфекции в Новосибирской области / А.М. Шестопалов, В.И. Аксёнов, Ю.Н. Рассадкин [и др.] // Журн.

микробиол. – 1999. – № 6. – С. 83-84.

13. Перспективы использования штамма ТС-80 вируса бешенства для пероральной иммунизации животных / Е.М. Хрипунов, В.В. Недосеков, В.И. Жестерев [и др.] // Диагностика, профилактика и меры борьбы с особо опасными, экзотическими и зооантропонозными болезнями животных:

матер. междунар. науч.-практ. конф. – Покров, 2000. – С. 88-90.

14. Разработка антирабической вакцины для перорального применения / Е.М. Хрипунов, Н.Б. Исакова, С.Д. Евсеева [и др.] // Диагностика, профилактика и меры борьбы с особо опасными, экзотическими и зооантропонозными болезнями животных: матер. междунар. науч.-практ.

конф. – Покров, 2000. – С. 85-88.

15. Разработка твердофазного непрямого сэндвич-варианта иммуноферментного анализа для диагностики бешенства животных / Н.А. Назаров, Н.М. Михайлина, С.С. Рыбаков [и др.] // Труды Федерального центра охраны здоровья животных. – Владимир, 2006. – Т. 4 – С. 117-124.

16. Санитарно-эпидемиологические правила СП 3.1.7.2627-10. Профилактика бешенства среди людей [Электронный ресурс]. – URL:

http://89.rospotrebnadzor.ru/documents/ros/33318/. – 13.11.2013.

17. Совершенствование метода очистки и концентрирования вируса бешенства / А.П. Пономарёв, Н.А. Назаров, С.С. Рыбаков [и др.] // Нейроинфекции:

бешенство, губкообразная энцефалопатия КРС, Крейтцфельда-Якоба и др.

прионные болезни; листериоз, болезнь Ауески, болезнь Тешена: матер.

междунар. конф. – Покров, 2001. – С. 49-51.

18. Таршис, М.Г. Болезни животных опасные для человека / М.Г. Таршис, Б.Л. Черкасский. – М.: Колос, 1997. – С. 34-39.

19. Теория и практика иммуноферментного анализа / А.М. Егоров, А.П.Осипов, Б.Б. Дзантиев [и др.]. – М.: Высшая школа, 1991. – 288 с.

20. Черкасский, Б.Л. Эпидемиология и профилактика бешенства / Б.Л. Черкасский. – М.: Медицина, 1985. – 287 с.

21. Эпизоотология и инфекционные болезни сельскохозяйственных животных / А.А. Конопаткин, И.А. Бакулов, Я.В. Нуйкин [и др.]. – М.: Колос, 1984. – 544 с.

22. Эргашев, И.Э. Применение биологической пробы для подтверждения диагноза бешенства / И.Э. Эргашев, З.Б. Холматов // Судебно-медицинская экспертиза. – 1990. – № 1. – С. 55-56.

23. A change in sampling methodology at the Kansas State University Rabies Diagnostic Laboratory / K. Willis, T. Tims, K. Schweitzer [et al.] // International Meeting on Research Advances and Rabies Control in the Americas. – Lima, Peru, 2000.

24. A comparison of complete sequences of the attenuated RC-HL strain of rabies virus used for production of animal vaccine in Japan, and the parental Nishigahara strain / N. Ito, M. Kakemizu, K. Ito [et al.] // Microbiol. Immunol. – 2001. – Vol. 45. – P. 51-58.

25. A field trial in Belgium to control fox rabies by oral immunization / B. Brochier, I. Thomas, A. Iokem [et al.] // Vet. Rec. – 1988. – Vol. 123. – P. 618-621.

26. A new quantitative method for rabies virus by detection of nucleoprotein in virion using ELISA / S. Katayama, M. Yamanaka, S. Ota [et al.] // J. Vet. Med. Sci. – 1999. – Vol. 61. – P. 411-416.

27. A simple and rapid immunochromatographic test kit for rabies diagnosis / A. Nishizono, P. Khawplod, K. Ahmed [et al.] // Microbiol. Immunol. – 2008. – Vol. 52. – P. 243-249.

28. A vaccinia-vectored rabies vaccine field trial: ante- and post-mortem biomarkers / C.A. Hanlon, J.R. Buchanan, E. Nelson [et al.] // Rev. Sci. Tech. Off. Int. Epiz. – 1993. – Vol. 12. – P. 99-107.

29. Acceptance of simulated oral rabies vaccine baits by urban raccoons / J.Hadidian, S.R. Jenkins, D.H. Johnston [et al.] // J. Wildl. Dis. – 1989. – Vol. 25. – P. 1-9.

30. Aging furbearers using tooth structure and biomarkers / D.H. Johnston, D.G. Joachim, P. Bachmann [et al.] // Wild Furbearer Management and Conservation in North America / Ed. M. Novak, J.A. Baker, M.E. Obbard [et al.]

– Sault Ste Marie, Ontario: Ontario Fur Managers Federation, 1999. – P. 228-243.

31. An epidemic of sylvatic rabies in Finland – descriptive epidemiology and results of oral vaccination / M. Nyberg, K. Kulonen, E. Neuvonen [et al.] // Acta. Vet.

Scand. – 1992. – Vol. 33. – P. 43-57.

32. Andrulonis, J.A. Effect of acetone fixation on rabies immunofluorescence in glycerin-preserved tissues / J.A. Andrulonis, J.G. Debbie // Health Lab. Sci. – 1976. – Vol. 13. – P. 207-208.

33. Antigenic and molecular characterization of bat rabies virus in Europe / H. Bourhy, B. Kissi, M. Lafon [et al.] // J. Clin. Microbiol. – 1992. – Vol. 30. – P. 2419-2426.

34. Artois, M. Transmission of rabies and impact on a population of foxes (mammalian, Vulpes vulpes L.) / M. Artois // Mesogil. – 1992. – Vol. 52. – P. 82.

35. Aubert, M.F.A. Oral vaccination of foxes against rabies: trials with inactivated virus in enteric coated tablets / M.F.A. Aubert, J. Blancou, M. Hofmann // Rabies Information Exchange. – 1982. – Vol. 5. – P. 37-38.

36. Background prevalence of tetracycline-like fluorescence in teeth of free ranging red foxes (Vulpes vulpes), striped skunks (Mephitis mephitis) and raccoons (Procyon lotor) in Ontario, Canada / C.P. Nunan, C.D. MacInnes, P. Bachmann [et al.] // J. Wildl. Dis. – 1994. – Vol. 30. – P. 112-114.

37. Bacon, P.J. To control rabies: vaccinate foxes / P.J. Bacon, D.W. Macdonald // New Sci. – 1980. – Vol. 87. – P. 640-645.

38. Baer, G.M. Oral vaccination of foxes against rabies / G.M. Baer, M.K. Abelseth, J.G. Debbie // Am. J. Epidemiol. – 1971. – Vol. 93. – P. 487-490.

39. Barrat, J. Simple technique for the collection and shipment of brain specimens for rabies diagnosis / J. Barrat // Laboratory Techniques in Rabies. – 4th edn / Ed.

F.-X. Meslin, M.M. Kaplan, H. Koprowski. – Geneva: WHO, 1996. – P. 425-432.

40. Barton, L.D. Measurement of rabies-specific antibodies in carnivores by an enzyme-linked immunosorbent assay / L.D. Barton, J.B. Campbell // J. Wildl.

Dis. – 1988. – Vol. 24. – P. 246-258.

41. Bat lyssaviruses (Aravan and Khujand) from Central Asia: phylogenetic relationships according to N, P and G gene sequences / I.V. Kuzmin, L.A. Orciari, Y.T. Arai [et al.] // Virus Res. – 2003. – Vol. 97. – P. 65-79.

42. Bingham, J. Distribution of rabies antigen in infected brain material: determining the reliability of different regions of the brain for the rabies fluorescent antibody test / J. Bingham, M. Van der Merwe // J. Virol. Methods. – 2002. – Vol. 101. – P. 85-94.

43. Biological function of the low-pH, fusion-inactive conformation of rabies virus glycoprotein (G): G is transported in a fusion-inactive state-like conformation / Y. Gaudin, C. Tuffereau, P. Durrer [et al.] // J. Virol. – 1995. – Vol. 69. – P. 5528-5534.

44. Blancou, J. Modified live-virus rabies vaccines for oral immunization of carnivores / J. Blancou, F.-X. Meslin // Laboratory Techniques in Rabies. – 4th edn / Ed. F.-X. Meslin, M.M. Kaplan, H. Koprowski. – Geneva: WHO, 1996. – P. 324-337.

45. Both the N- and the C-terminal domains of the nominal phosphoprotein of rabies virus are involved in binding to the nucleoprotein / Z.F. Fu, Y. Zheng, W.H. Wunner [et al.] // J. Virol. – 1994. – Vol. 200. – P. 590-597.

46. Bourhy, H. Molecular diversity of the Lyssavirus genus / H. Bourhy, B. Kissi, N. Tordo // J. Virol. – 1993. – Vol. 194. P. 70-81.

47. Bourhy, H. Rapid rabies enzyme immunodiagnosis (RREID) for rabies antigen detection / H. Bourhy, P. Perrin // Laboratory Techniques in Rabies. – 4th edn / Ed. F.-X. Meslin, M.M. Kaplan, H. Koprowski. – Geneva: WHO, 1996. – P. 105-112.

48. Brzozka, K. Identification of the rabies virus alpha/beta interferon antagonist:

phosphoprotein P interferes with phosphorylation of interferon regulatory factor 3 / K. Brzozka, S. Finke, K.K. Conzelmann // J. Virol. – 2005. – Vol. 79. – P. 7673-7681.

49. Carpenter, A.B. Enzyme linked immuno-sorbent assay / A.B. Carpenter // Manual of Clinical Laboratory Immunology. – 5th edn / Ed. N.R. Rose, E.C. De Macario, J. Fahey [et al.]. – Boston: Little Brown, 1997. – P. 2-9.

50. Chance and risk of controlling rabies in large-scale and long-term immunized fox populations / L. Tischendorf, H. Thulke, C. Staubach [et al.] // Proc. Biol. Sci. – 1998. – Vol. 265. – P. 839-846.

51. Characterisation of a novel lyssavirus isolated from Pteropid bats in Australia / A.R. Gould, A.D. Hyatt, R. Lunt [et al.] // Virus Res. – 1998. – Vol. 54. – P. 165-187.

52. Characterization of a slow-migrating component of the rabies virus matrix protein strongly associated with the viral glycoprotein / T. Nakahara, H. Toriumi, T. Irie [et al.] // Microbiol. Immunol. – 2003. – Vol. 47. – P. 977-988.

53. Characterization of rabies virus nucleocapsids and recombinant nucleocapsid-like structures / F. Iseni, A. Barge, F. Baudin [et al.] // J. Gen. Virol. – 1998. – Vol. 79. – P. 2909-2919.

54. Clinically silent rabies infection in (zoo) bats / L. Ronsholt, K.J. Sorensen, C.J. Bruschke [et al.] // Vet. Rec. – 1998. – Vol. 142. – P. 519-520.

55. Cliquet, F. Development of a fluorescent antibody virus neutralization test (FAVN test) for the quantitation of rabies-neutralising antibody / F. Cliquet, M. Aubert, L. Sagne // J. Immunol. Methods. – 1998. – Vol. 212. – P. 79-87.

56. Collaboration of antibody and inflammation in clearance of rabies virus from the central nervous system / D.C. Hooper, K. Morimoto, M. Bette [et al.] // J. Virol. – 1998. – Vol. 72. – P. 3711-3719.

57. Comparative field evaluation of the fluorescent-antibody test, virus isolation from tissue culture, and enzyme immunodiagnosis for rapid laboratory diagnosis of rabies / H. Bourhy, P.E. Rollin, J. Vincent [et al.] // J. Clin. Microbiol. – 1989. – Vol. 27. – P. 519-523.

58. Comparative sequence analysis of the M gene among rabies virus strains and its expression by recombinant vaccinia virus / K. Hiramatsu, K. Mannen, K. Mifune [et al.] // Virus Genes. – 1993. – Vol. 7. – P. 83-88.

59. Completion of the rabies virus genome sequence determination: highly conserved domains among the L (polymerase) proteins of unsegmented negative-strand RNA viruses / N. Tordo, O. Poch, A. Ermine [et al.] // J. Virol. – 1988. – Vol. 165. – P. 565-576.

60. Davis, C. Microwave fixation of rabies specimens for fluorescent antibody testing / C. Davis, S. Neill, P. Raj // J. Virol. Methods. – 1997. – Vol. 68. – P. 177-182.

61. Dean, D.J. The fluorescent antibody test / D.J. Dean, M.K. Abelseth, P. Atanasiu // Laboratory Techniques in Rabies. – 4th edn / Ed. F.-X. Meslin, M.M. Kaplan, H. Koprowski. – Geneva: WHO, 1996. – P. 88-93.

62. Demonstration of rabies viral antigen in paraffin tissue sections: Comparison of immunofluorescence technique with the unlabeled antibody enzyme method / D.G. Palmer, P. Ossent, M.M. Suter [et al.] // Am. J. Vet. Res. – 1985. – Vol. 46, № 1. – P. 283-286.

63. Detection of rabies virus antigen in dog saliva using a latex agglutination test / S. Kasempimolporn, W. Saengseesom, B. Lumlertdacha [et al.] // J. Clin.

Microbiol. – 2000. – Vol. 38. – P. 3098–3099.

64. Development of a hemi-nested RT-PCR method for the specific determination of European bat lyssavirus 1: Comparison with other rabies diagnostic methods / E. Picard-Meyer, V. Bruyere, J. Barrat [et al.] // Vaccine. – 2004. – Vol. 22. – P. 1921-1929.

65. Dietzschold, B. Antibody-mediated clearance of viruses from the mammalian central nervous system / B. Dietzschold // Trends Microbiol. – 1993. – Vol. 1. – P. 63-66.

66. Duration of immunity in foxes vaccinated orally with ERA vaccine in a bait / K.F. Lawson, H. Chiu, S.J. Crosgrey [et al.] // Can. J. Vet. Res. – 1997. – Vol. 61.

– P. 39-42.

67. Effect of maternal immunity on the immune response to oral vaccination against rabies in young foxes / T.F. Muller, P. Schuster, A.C. Vos [et al.] // Am. J. Vet.

Res. – 2001. – Vol. 62. – P. 1154-1158.

68. Efficacy of an oral vaccinia-rabies glycoprotein recombinant vaccine in controlling epidemic raccoon rabies in New Jersey / D.E. Roscoe, W.C. Holste, F.E. Sorhage [et al.] // J. Wildl. Dis. – 1998. – Vol. 34. – P. 752-763.

69. Efficacy of rabies biologics against new lyssaviruses from Eurasia / C.A. Hanlon, I.V. Kuzmin, J.D. Blanton [et al.] // Virus Res. – 2005. – Vol. 111. – P. 44–54.

Efficacy of SAG2 oral rabies vaccine in two species of jackal (Canis adustus and 70.

Canis mesomelas) / J. Bingham, C.L. Schumacher, F.W. Hill [et al.] // Vaccine. – 1999. – Vol. 17. – P. 551-558.

71. Elimination of arctic variant rabies in red foxes, metropolitan Toronto / R.C. Rosatte, M. Power, D. Donovan [et al.] // Emerg. Infect. Dis. – 2007. – Vol. 13. – P. 25-27.

72. Elimination of rabies from red foxes in eastern Ontario / C.D. Maclnnes, S.M. Smith, R.R. Tinline [et al.] // J. Wildl. Dis. – 2001. – Vol. 37. – P. 119-132.

73. Elimination of rabies from the island of Newfoundland: 2002-2004 / H. Whitney, D.H. Johnston, A. Wandeler [et al.] // Rabies in the Americas Conference abstract. – Ottawa, 2005.

74. Emergency response to raccoon rabies introduction in Ontario / R.C. Rosatte, D. Donovan, M. Allan [et al.] // J. Wildl. Dis. – 2001. – Vol. 37. – P. 265-279.

75. Encephalitis caused by a Lyssavirus in fruit bats in Australia / G.C. Fraser, P.T. Hooper, R.A. Lunt [et al.] // Emerg. Infect. Dis. – 1996. – Vol. 2. – P. 327-331.

76. Epidemiology of dog bites / H.M. Parrish, F.B. Clack, D. Brobst [et al.] // Public Health Reports. – 1959. – Vol. 74. – P. 891-903.

77. Epidemiology of human rabies in the United States, 1980 to 1996 / D.L. Noah, C.L. Drenzek, J.S. Smith [et al.] // Ann. Intern. Med. – 1998. – Vol. 128. – P. 922-930.

78. Epizootic canine rabies transmitted by coyotes in south Texas / K.A. Clark, S.U. Neil, J.S. Smith [et al.] // J. Am. Vet. Med. Assoc. – 1994. – Vol. 204. – P. 536-540.

79. Evaluation of oral rabies vaccination programs for control of rabies epizootics in coyotes and gray foxes: 1995-2003 / T. Sidwa, P. Wilson, G. Moore [et al.] // J.

Am. Vet. Med. Assoc. – 2005. – Vol. 227. – P. 785-792.

80. Evidence of two Lyssavirus phylogroups with distinct pathogenicity and immunogenicity / H. Badrane, C. Bahloul, P. Perrin [et al.] // J. Virol. – 2001. – Vol. 75. – P. 3268-3276.

81. Exposure time of oral rabies vaccine baits relative to baiting density and raccoon population density / B. Blackwell, T. Seamans, R. White [et al.] // J. Wildl. Dis. – 2004. – Vol. 40. – P. 222-229.

82. Expression of rabies virus glicoprotein from a recombinant vaccina virus / M.P. Kieny, R. Lathe, R. Drillien [et al.] // Nature. – 1984. – Vol. 312. – P. 163-166.

83. Fatal human rabies caused by European bat Lyssavirus type 2a infection in Scotland / D. Nathwani, P.G. McIntyre, K. White [et al.] // Clin. Infect. Dis. – 2003. – Vol. 37. – P. 598-601.

84. Field use of a vaccina-rabies recombinant vaccine for the control of sylvatic rabies in Europe and North America / B. Brochier, M.F. Aubert, P.P. Pastoret [et al.] // Rev. Sci. Tech. Off. Int. Epiz. – 1996. – Vol. 15. – P. 947-970.

85. Flamand, A. Transcriptional mapping of rabies virus in vivo / A. Flamand, J.F. Delagneau // J. Virol. – 1978. – Vol. 28. – P. 518-523.

86. Flamand, A. Use of hybridoma monoclonal antibodies in the detection of antigenic differences between rabies and rabies-related virus proteins. I. The nucleocapsid protein / A. Flamand, T.J. Wiktor, H. Koprowski // J. Gen. Virol. – 1980. – Vol. 48. – P. 97-104.

87. Follmann, E.H. Evaluation of the safety of two attenuated oral rabies vaccines, SAG1 and SAG2, in six Arctic mammals / E.H. Follmann, D.G. Ritter, G.M. Baer // Vaccine. – 1996. – Vol. 14. – P. 270-273.

88. Follmann, E.H. Oral vaccination of captive arctic foxes with lyophilized SAG2 rabies vaccine / E.H. Follmann, D.G. Ritter, D.W. Hartbauer // J. Wildl. Dis. – 2004. – Vol. 40. – P. 328-334.

89. Follmann, E.H. Safety of lyophilized SAG2 oral rabies vaccine in collared lemmings / E.H. Follmann, D.G. Ritter, D.W. Hartbauer // J. Wildl. Dis. – 2002.

– Vol. 38. – P. 216-218.

90. Fooks, A.R. Two imported human rabies cases in the United Kingdom / A.R. Fooks // Rabies Bulletin Europe. – 2001. – Vol. 2. – P. 11.

91. Further studies on the hyperphosphorylated form (p40) of the rabies virus nominal phosphoprotein (P) / H. Toriumi, Y. Eriguchi, F. Takamatsu [et al.] // Microbiol. Immunol. – 2004. – Vol. 48. – P. 865-874.

92. Gaudin, Y. Folding of rabies virus glycoprotein: epitope acquisition and interaction with endoplasmic reticulum chaperones / Y. Gaudin // J. Virol. – 1997. – Vol. 71. – P. 3742-3750.

93. Gaudin, Y. Low-pH induced conformational changes in viral fusion proteins:

implications for the fusion mechanism / Y. Gaudin, R.W. Ruigrok, J. Brunner // J.

Gen. Virol. – 1995. – Vol. 76. – P. 1541-1556.

94. Genetic restriction and fine specificity of human T cell clones reactive with rabies virus / E. Celis, R.W. Karr, B. Dietzschold [et al.] // J. Immunol. – 1988. – Vol. 141. – P. 2721-2728.

95. Grassi, M. Enzyme-linked immunosorbent assay for determination of antibodies to the envelope glycoprotein of rabies virus / M. Grassi, A.I. Wandeler, E. Peterhans // J. Clin. Microbiol. – 1989. – Vol. 27. – P. 899-902.

96. Hauschildt, P. Outfoxing rabies in Ontario / P. Hauschildt, R.R. Tinline, D.G.A. Ball // GPS World. – 2001. – P. 34-39.



Pages:     | 1 |   ...   | 2 | 3 || 5 |

Похожие работы:

«Палаткин Илья Владимирович Подготовка студентов вуза к здоровьесберегающей деятельности 13.00.01 общая педагогика, история педагогики и образования Диссертация на соискание ученой степени кандидата педагогических наук Научные руководители: доктор биологических наук, профессор,...»

«АБДУЛЛАЕВ Ренат Абдуллаевич ГЕНЕТИЧЕСКОЕ РАЗНООБРАЗИЕ МЕСТНЫХ ФОРМ ЯЧМЕНЯ ИЗ ДАГЕСТАНА ПО АДАПТИВНО ВАЖНЫМ ПРИЗНАКАМ Шифр и наименование специальности 03.02.07 – генетика 06.01.05 – селекция и семеноводство сельскохозяйственных растений ДИССЕРТАЦИЯ на соискание учёной степени кандидата...»

«Ульянова Онега Владимировна МЕТОДОЛОГИЯ ПОВЫШЕНИЯ БЕЗОПАСНОСТИ БАКТЕРИАЛЬНЫХ ВАКЦИН НА МОДЕЛИ ВАКЦИННЫХ ШТАММОВ BRUCELLA ABORTUS 19 BA, FRANCISELLA TULARENSIS 15 НИИЭГ, YERSINIA PESTIS EV НИИЭГ 03.02.03 – микробиология Диссертация на соискание ученой степени доктора биологических наук Научный консультант:...»

«Цвиркун Ольга Валентиновна ЭПИДЕМИЧЕСКИЙ ПРОЦЕСС КОРИ В РАЗЛИЧНЫЕ ПЕРИОДЫ ВАКЦИНОПРОФИЛАКТИКИ. 14.02.02 – эпидемиология ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени доктора медицинских наук Научный консультант: заслуженный деятель науки РФ, лауреат Государственной премии СССР профессор, доктор медицинских наук Ющенко Галина Васильевна Москва – 20 Содержание...»

«ХАПУГИН Анатолий Александрович РОД ROSA L. В БАССЕЙНЕ РЕКИ МОКША 03.02.01 – ботаника Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель Силаева Татьяна Борисовна д.б.н., профессор САРАНСК ОГЛАВЛЕНИЕ ВВЕДЕНИЕ Глава 1. ИСТОРИЯ ИЗУЧЕНИЯ РОДА ROSA L. В БАССЕЙНЕ МОКШИ. Глава 2. КРАТКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РОДА ROSA L. 2.1. Характеристика рода Rosa L. 2.2. Систематика рода Rosa L. Глава 3....»

«Якимова Татьяна Николаевна Эпидемиологический надзор за дифтерией в России в период регистрации единичных случаев заболевания 14.02.02 эпидемиология диссертация на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Научный руководитель: доктор...»







 
2016 www.konf.x-pdf.ru - «Бесплатная электронная библиотека - Авторефераты, диссертации, конференции»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.