WWW.KONF.X-PDF.RU
БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА - Авторефераты, диссертации, конференции
 


Pages:     | 1 |   ...   | 2 | 3 || 5 |

«ВЛИЯНИЕ ФАКТОРОВ ВНЕШНЕЙ СРЕДЫ НА ПЕРВЫЕ ЭТАПЫ ОБРАЗОВАНИЯ БИОПЛЕНОК БАКТЕРИЯМИ STAPHYLOCOCCUS EPIDERMIDIS ...»

-- [ Страница 4 ] --

Таким образом, можно предположить, что торможение развития биопленок бактериями S. epidermidis 33, скорее всего, связано не с бактерицидным действием изученных антибактериальных пептидов, а их способностью регулировать синтез белков, необходимых для образования биопленок. Так, показано, что пептид LL-37 ингибирует образование биопленок за счет изменения экспрессии генов, необходимых для формирования биопленок (Overhage et al., 2008). Возможно, такой механизм связан с управлением, например, agr системой, способной активироваться короткими аутоиндукторными пептидами (Ji et al., 1997). Подобный длительный эффект ингибирования образования биопленок бактерий S. epidermidis так же обнаружен у пептида гепцидин 20, выделенного из гепатоцитов человека (Brancatisano et al., 2014).

Для изучения действия катионных пептидов на зрелые биопленки к сформировавшимся в течение 24 ч в питательной среде LB биопленкам добавляли растворы катионных пептидов в концентрации 0,5 и 2,0 мг/мл. Кроме варнерина и хоминина был проанализирован катионный пептид низин, выделенный из лактобактерий Lactococcus lactis subsp. lactis (Mattick and Hirsch, 1947) и используемый в качестве стандарта при проведении аналогичных исследований.

В результате экспериментов для большинства использованных штаммов бактерий было выявлено S. epidermidis характерное снижение уровня биомассы пленок при всех использованных концентрациях пептидов (Рисунок 38). Данный эффект был характерен для всех исследованных пептидов, однако, низин оказывал минимальное разрушающее действие на биопленки стафилококков по сравнению с варнерином и хоминином.

* различия статистически значимы при сравнении с контролем (p0,05) Рисунок 38. Концентрационная зависимость действия АМП (варнерина, хоминина, низина) на суточные биопленки бактерий S. epidermidis.

Имеющиеся в литературе данные указывают на способность многих катионных пептидов проявлять свое литическое действие в отношении планктонных культур бактерий или предотвращать развитие биопленок при внесении одновременно с инокулируемыми бактериями. И лишь некоторые антибактериальные пептиды обладают способностью разрушать сформировавшиеся биопленки, причем, чаще всего, образованные грамотрицательными бактериями (Jorge et al., 2012). Разрушающее действие этих катионных пептидов в отношении биопленок, по-видимому, связано с их способностью, в отличие от традиционных антибиотиков, убивать медленно растущие и покоящиеся клетки, которые преобладают в этих особых бактериальных сообществах (Jorge et al., 2012).

Таким образом, нами показано, что низкомолекулярные катионные пептиды варнерин и хоминин обладают не только антиадгезионной активностью в отношении бактерий S. epidermidis, но и выраженным литическим действием на сформированные биопленки этих бактерий, в том числе штамма с устойчивостью к метициллину (S. epidermidis ATCC®29887).

ГЛАВА 7. ИЗУЧЕНИЕ АДГЕЗИИ БАКТЕРИЙ S. EPIDERMIDIS В

ПРИСУТСТВИИ КОМПОНЕНТОВ КРОВИ

Известно, что после контакта с кровью поверхность полимера практически мгновенно покрывается белками плазмы (Cottonaro et al., 1981) с достижением полного насыщения через 15 – 60 мин (Cottonaro et al., 1981; Ishiguro et al., 2005).

Исследование краевого угла смачивания поверхности полистирола, предобработанной различными белками плазмы крови, показало, что наслоение растворов плазмы и альбумина приводит к тому, что поверхность становится гидрофильной по сравнению с контролем, тогда как в случае предобработки поверхности полистирола фибронектином контактный угол смачивания практически не изменяется (Таблица 16).

Таблица 16 Физико-химическая характеристика поверхности полистирола после наслоения белковых компонентов крови в течение 1 ч.

Средняя Cредняя Адгезия к Контактный Компонент шероховатость, разница в кантилеверу, угол крови Ra, нм высоте, Rz, нм nN смачивания, ° Контроль 2,9±0,4 2,4±3,5 0,47±0,02 78±2 Плазма 4,9±1,5* 3,4±3,8 0,96±0,02* 18±2* БСА 2,6±0,5 2,1±0,4 0,34±0,002* 21±3* Фн 3,6±0,3 2,9±0,4 0,64±0,002* 73±4 * различия статистически значимы при сравнении с контролем (p0,05) Из результатов, полученных с помощью атомно-силовой микроскопии, видно (Рисунок 39), что предобработка поверхности полистирола 10% раствором плазмы крови приводит к повышению шероховатости поверхности почти в 2 раза по сравнению с контролем (Таблица 16). Так же отмечается, что сила адгезии кантилевера к предобработанным белковыми компонентами поверхностям полистирола изменялась в случае наслоения всех содержащих белок растворов (Таблица 16). Максимальный эффект оказывает раствор плазмы (повышение сил адгезии в 2 раза), меньшее – Фн (в 1,5 раза) и, наконец, альбумин вызывает ослабление сил адгезии между кантилевером и поверхностью полистирола практически в 1,3 раза.

Рисунок 39. АСМ изображения поверхностей полистирола после предобработки белковыми компонентами крови. a – без обработки; b – плазма крови человека, 10%; c – БСА, 0.5%; d – Фн, 25 мкг/мл.

Многочисленными исследованиями установлена тесная связь между ранними этапами бактериальной адгезии и шероховатостью атакуемых поверхностей (Scheuerman et al., 1998). Результаты наших экспериментов показали, что более гладкая (среднее Ra=2,9 нм) необработанная поверхность полистирола характеризуется большей адгезией бактерий по сравнению с таковой после обработки препаратами плазмы (среднее Ra=4,9 нм) (Рисунок 40А).

Интересно отметить, что поверхности полистирола после обработки альбумином (Ra=2,6 нм) и фибронектином (Ra=3,6 нм) обладают близкой топологией с необработанной поверхностью (Ra=2,9 нм), но различаются по способности сорбировать бактерии S. epidermidis (Рисунок 40А). Так, адгезия клеток стафилококков к поверхности после обработки альбумином снижается в 2-3 раза по сравнению с контролем. В недавней работе Shida с соавт. показано, что шероховатость поверхности менее чем 10 нм Ra имеет незначительное влияние на адгезию бактерий S. epidermidis (Shida et al., 2013). Это подтверждает более раннее предположение о том, что in vivo шероховатость поверхности ниже пороговой величины (Ra=200 нм) не влияет на бактериальную адгезию (Bollen et al., 1997). Полученные нами экспериментальные данные подтверждают вышеупомянутые утверждения, и позволяют сделать вывод о том, что при сравнении значения шероховатости и гидрофобности полимерной поверхности в процессах адгезии бактерий, последняя характеристика поверхности имеет наибольшее значение.

–  –  –

как псевдомонады и стафилококки (Brokke et al., 1991; Fletcher and Marshall, 1982;

Hogt et al., 1985a; Kinnari et al., 2005). Показано также, что бактерии штамма S. epidermidis ATCC®12228, использованного и в нашем исследовании, в меньшей степени способны к адгезии на разнообразных полимерных материалах, включая полиэтилентерефталат, фторэтиленпропилен, полиэтиленуретан, силикон, а так же боросиликатное стекло, после иммобилизации на них альбумина (Linnes et al., 2012).

Одновременно с этим, выявлена связь между ослаблением адгезии всех исследованных штаммов S. epidermidis (Рисунок 40) и снижением контактного угла смачивания (Таблица 16) в случае преадсорбции альбумина и плазмы крови на поверхности полистирола. Данный факт позволяет сделать вывод о выраженной зависимости адгезии использованных в настоящей работе штаммов стафилококков к полимерной поверхности от степени её гидрофобности. Это согласуется с утверждением о том, что основные механизмы действия альбумина и плазмы на адгезию бактериальных клеток обусловлены сорбцией белковых соединений на поверхностях полимеров, сопровождающейся снижением свободной энергии этих поверхностей. В дополнение к этому было показано, что макромолекулы, связанные с поверхностями, снижают и их гидрофобность, что было выявлено по измерениям контактных углов смачивания полистирола (Fletcher, 1976) и фторэтиленпропилена (Hogt et al., 1985a) и полиэтилена (Brokke et al., 1991).

Как показано в наших экспериментах, предобработка поверхности полистирола Фн могла оказывать как стимулирующее действие на сорбцию бактериальных клеток (S. epidermidis 12228 и 29887), так и не проявлять никакого видимого эффекта (S. epidermidis 33) (Рисунок 40). Аналогичные данные были получены так же Brokke с соавт. при иммобилизации Фн на поверхностях полиэтиленовых катетеров, выявивших значительное снижение количества сорбированных бактерий трех из пяти штаммов S. epidermidis и адгезию на уровне контроля бактерий оставшихся двух штаммов (Brokke et al., 1991).

Данный эффект, по-видимому, не связан с изменением гидрофобности поверхности полистирола, так как иммобилизация Фн не изменяла контактный угол смачивания полистирола, в отличие от плазмы и альбумина (Таблица 16) или различием в гидрофобных характеристиках исследованных штаммов S. epidermidis, так как они все обладали схожей адгезией к гексадекану (Таблица 5). Скорее всего, выявленная гетерогенность связывания бактерий различных штаммов стафилококков с предобработанными Фн поверхностями связана с уровнем специфичности взаимодействия между бактериальными клетками отдельных штаммов и данным белком. В работе Linnes с соавт. с помощью вестерн-блота экстрактов клеточных стенок определен уровень синтеза и продукции Фн-связывающего белка Embp нескольких штаммов S. epidermidis, включая S. epidermidis ATCC®12228 (Linnes et al., 2013).

Таким образом, повышение адгезии бактерий S. epidermidis 12228 и 29887 к поверхностям полистирола с адсорбированным Фн позволяет предполагать наличие на поверхностях бактериальных клеток белка, подобного Embp, и отсутствие подобных структур на поверхности бактерий S. epidermidis 33.

Уровень бактериальной адгезии в растворах плазмы и БСА, а так же покрытия ими поверхности полистирола был практически одинаков для всех изученных штаммов S. epidermidis (Рисунок 40). Данный факт может быть обусловлен тем, что после контакта крови с поверхностью, альбумин адсорбируется на ней в первую очередь (Vroman et al., 1980). В то же время отмечалась разница между адгезией бактерий S. epidermidis 29887 в растворе Фн при сравнении с количеством сорбированных клеток на предобработанной Фн поверхности (Рисунок 40). Обнаруженное отличие, вероятнее всего, отражает конформационные изменения, которые происходят с молекулой Фн после иммобилизации. Так, показано, что в глобулярном белке Фн после его иммобилизации на поверхности полистирола доступным для связывания становится его N-терминальный домен (Proctor, 1987), обладающий высоким сродством к поверхностям бактерий S. epidermidis (Jarvis and Bryers, 2005).

ГЛАВА 8. ИЗУЧЕНИЕ РЕГУЛЯЦИИ ПРОЦЕССОВ АДГЕЗИИ БАКТЕРИЙ

S. EPIDERMIDIS

Известно, что в биопленках бактерии обмениваются информацией с помощью сигналов системы QS, которые являются молекулами особых соединений, способными регулировать экспрессию генов, чувствительных к плотности бактериальных популяций (Kong et al., 2006). В настоящее время нарушение этих межклеточных коммуникаций рассматривается как перспективный подход борьбы с бактериальными пленками (Романова и Гинцбург, 2011).

Сигнальные молекулы QS грамположительных бактерий, чаще всего, являются пептидами, сравнимыми по функциям с феромонами и гормонами, которые состоят из 8 или 12 аминокислотных остатков и имеют в своем составе тиолактоновое кольцо (Olson et al., 2014). Наибольшую роль сигнальные молекулы играют на поздних стадиях развития биопленок, в частности, они участвуют в регуляции клеточного деления, уровня плотности биопленки, продукции экзополимерного матрикса, а также процессов диссеминации зрелых биопленок (Otto, 2012). действие этих соединений показано и на первых этапах формирования бактериальных пленок (Vuong et al., 2000).

Вместе с тем, реакция на встречу бактерий с поверхностями различных материалов, по-видимому, так же может сопровождаться синтезом специфических соединений, способствующих их сорбции и индукции заселения.

В связи с этим, нами был проведен поиск подобных соединений, продуцируемых во внешнюю среду атакующими поверхность полистирола бактериями S. epidermidis в процессе адгезии и первых этапов роста биопленок, и оценка их влияния на адгезию и образование бактериальных пленок Действительно, использование фильтратов сред, полученных в разные периоды времени развития «прикрепленной» популяции, как инкубационной среды роста другой части бактериальных клеток того же инокулума, позволило выявить значительное повышение интенсивности адгезии бактерий и формирования ими биопленок по сравнению с подобными показателями на

–  –  –

Показано, что стимулирующий адгезию эффект был обнаружен только для фильтратов, полученных после 60 мин взаимодействия бактерий S. epidermidis 33 с поверхностью полистирола. При этом фильтраты, полученные после контакта бактерий с поверхностью стекла, практически не оказывали влияния на адгезию бактерий (Рисунок 41).

*

–  –  –

* различия статистически значимы при сравнении с данными при 0 мин (p0,05) Рисунок 41. Адгезия бактерий S. epidermidis 33 на поверхности полистирола в фильтратах среды, полученных после адгезии бактерий того же штамма в ФБ на поверхности полистирола и стекла.

Масс-спектрометрический анализ полученных фильтратов с помощью метода MALDI-TOF показал, что инкубация клеток S. epidermidis 33 в ФБ на различных типах поверхностей приводит к выделению в среду некоторых соединений (Рисунок 43). При этом адгезия как на гидрофильной, так и на гидрофобной поверхности клетки сопровождается выделением в среду низкомолекулярных соединений с отношением массы к заряду от 264 до 684.

Однако, при сорбции на полистироле, поверхность которого более благоприятна для адгезии клеток стафилококков, содержание этих соединений в среде значительно выше, чем при адгезии на стекле (Рисунок 42). С увеличением времени инкубации содержание всех соединений, в основном, увеличивается практически на порядок, независимо от типа поверхности. Кроме того, дополнительно обнаруживаются три соединения с мол. массами 552, 574 и 596 Да.

Появление этих соединений по времени совпадает с периодом увеличением числа связанных с поверхностью полистирола бактериальных клеток (Рисунок 41). Это дает основание предполагать возможное наличие у данных соединений функций «агентов кворума».

Рисунок 42. Масс-спектры фильтратов, полученных после адгезии бактерий S. epidermidis 33 в ФБ на поверхностях полистирола и стекла: 1 – фильтрат после адгезии на стекле, 30 мин; 2 – фильтрат после адгезии на полистироле, 30 мин; 3 – фильтрат после адгезии на стекле, 60 мин; 4 – фильтрат после адгезии на полистироле, 60 мин.

В связи с тем, что регуляторными молекулами систем QS у бактерий рода Staphylococcus выступают короткие пептиды (Vuong et al., 2000; Olson et al., 2014), было высказано предположение, что обнаруженные соединения также могут относиться к группе пептидных молекул. Для этого бесклеточные фильтраты (0,20 мкм), полученные после контакта бактерий с поверхностью полистирола в течение 60 мин, были проинкубированы с протеазами (трипсином и протеиназой К), а затем после удаления ферментов ультрафильтрацией (10 кДа) были вновь использованы в качестве адгезионной среды.. Результаты этих исследований показали, что обработка фильтратов протеолитическими ферментами приводила к потере их стимулирующего действия на адгезию S. epidermidis 33 (Рисунок 43), одновременно выявляя пептидную природу этих соединений.

* различия статистически значимы при сравнении с контролем (p0,05) Рисунок 43. Адгезия бактерий S. epidermidis 33 на поверхности полистирола в фильтратах, полученных после адгезии бактерий того же штамма в ФБ на поверхности полистирола в течение 60 мин и обработанных трипсином и протеиназой К.

Таким образом, результаты наших исследований процессов адгезии бактерий S. epidermidis выявляют возможность функционирования ауторегуляции процесса сорбции клеток при освоении бактериальной популяцией свободных поверхностей на границах раздела фаз. Кроме того, полученные данные позволяют рассматривать в качестве важных участников этих событий низкомолекулярные соединения, которые, по данным масс-спектрометрии обладают мол. массой 550 – 600 Да и, по-видимому, имеют пептидную природу.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Исследования последних лет свидетельствуют о том, что сапрофитные бактерии S.
epidermidis являются одной из главных причин внутрибольничных инфекций, сопутствующих имплантациям различных медицинских устройств (Vuong, Otto, 2002; Sievert et al., 2013). Распространение ассоциированных со стафилококками инфекций обусловлено способностью этих бактерий колонизировать атакуемые поверхности устройств с образованием на них биопленок – особых структурированных сообществ бактериальных клеток, функционирующих в формируемом ими полимерном матриксе (O’Toole et al., 2000). В таком состоянии бактерии проявляют значительно более выраженную устойчивость к различным физико-химическим воздействиям, антибиотикам и факторам иммунной защиты хозяина (von Eiff et al., 1999).

Процессы образования бактериальных пленок, в общем, могут быть представлены в виде последовательных этапов, включающих в себя первичную адгезию бактерий к поверхности, адаптацию к ней путем формирования микроколоний и последующее освоение свободных зон поверхности, благодаря выделению в среду особых высокомолекулярных полимерных соединений. Эти полимеры углеводной и пептидной природы способствуют закреплению адгезированных к данной поверхности бактерий, а затем, заполняя окружающее межклеточное пространство, способствуют удержанию делящихся клеток на поверхности либо распространению их в окружающем пространстве (O’Toole et al., 2000).

Известно, что адгезия микроорганизмов в значительной степени определяется как физико-химическими свойствами поверхностей атакуемого материала: гидрофобностью, зарядом, шероховатостью и химическим составом (An, Friedman, 2000), так и физико-химическими характеристиками бактериальных клеток (von Eiff et al., 2002), в частности, уровнем гидрофобности клеточной поверхности (Oliveira et al., 2001) и величиной их поверхностного заряда (van Loosdrecht et al., 1990). Бактериальная адгезия, во многом, зависит и от факторов среды – состава (Hussain et al., 1992), гидродинамических условий (Neu, Marshall, 1990), температуры (Fitzpatrick et al., 2005; da Silva Meira et al., 2012), присутствия антибиотиков и дезинфектантов (Cerca et al., 2005a; Стрелкова и др., 2012).

В проведенных нами исследованиях показано, что динамика адгезии бактерий к абиотическим поверхностям, помимо приведенных факторов, зависит и от физиологического состояния бактериальных клеток. При этом, клетки логарифмической фазы роста бактериальной культуры характеризуются как более высокими показателями адгезии (Рисунок 5), так и большей чувствительностью к изменению физико-химических параметров среды (Рисунки 7, 9, 10, 12) по сравнению с клетками стационарной фазы развития бактериальной популяции.

Полученные нами данные свидетельствуют о том, что повышение сдвигающих усилий, понижение температуры и закисление среды инкубации приводят к снижению адгезии бактерий S. epidermidis к поверхности полистирола.

Кроме того, адгезия бактерий к поверхностям стекла и полистирола так же снижается при возрастании осмолярности среды, и при увеличении ионной силы раствора (1,0–2,0 М NaCl) различия в количестве сорбированных клеток на разных типах поверхностей практически нивелируются (Рисунок 12). Вместе с тем, внесение в среду роста 0,5% глюкозы не приводит к значимым изменениям ни в количестве сорбированных на поверхности полистирола клеток, ни в биомассе образованных пленок (Рисунок 14).

Имеющиеся в литературе данные свидетельствуют о том, что двухвалентные катионы способны ингибировать образование биопленок бактериями S. aureus (Shukla, Rao, 2013), но усиливать образование этих структур бактериями S. epidermidis (Dunne Jr, Burd, 1992; Ozerdem Akpolat et al., 2003).

Однако, результаты наших исследований показали, что влияние двухвалентных катионов как на сорбцию, так и на образование биопленок использованными в работе штаммами стафилококков в значительной степени зависит от их концентрации в среде инкубирования (Рисунок 18). При повышении содержания в среде каждого из катионов Ca2+, Mg2+, Zn2+ или Mn2+ до 2,5 мМ, как правило, наблюдалось ингибирование процессов бактериальной колонизации. Возможно, S. epidermidis подобное действие ионов металлов на адгезию бактерий обусловлено их влиянием на дзета-потенциал клеток (Таблица 7).

Кроме того, впервые установлено, что внесение в среду мембранотропных соединений также оказывает значительное влияние на интенсивность бактериальной сорбции, вероятно, за счет изменения общего заряда бактериальных клеток. При этом наибольшая роль в адгезии и формировании S. epidermidis биопленок бактериями принадлежит – электрической составляющей их мембранного потенциала (Рисунок 24).

Согласно данным литературы, внесение в среду экзогенной ДНК сдвигает дзета–потенциал бактериальных клеток, в том числе вида S. epidermidis, в более отрицательную зону (Das et al., 2011). Результаты наших исследований указывают на то, что введение в среду инкубации аутологичной ДНК приводит к увеличению числа сорбированных клеток практически в 1,5 раза. При этом действие экзДНК на сорбцию бактерий S. epidermidis обладает видовой специфичностью, поскольку внесение чужеродной ДНК как бактериального, так и животного происхождения, не вызывало значительных изменений количества связавшихся с поверхностью полистирола клеток (Рисунок 28).

Известно, что первичное прикрепление бактерий к поверхностям различных материалов, во многом зависит от некоторых поверхностных белков сорбирующихся клеток, которые необходимы для первоначального контакта микроорганизмов с поверхностью (Navarre, Schneewind, 1999). Поэтому изменение поверхности бактериальной клетки путем обработки препаратами, способными влиять на структуру локализованных на внешней поверхности белковых молекул, приводит к изменению сорбционных свойств бактерий.

Действительно, внесение в среду инкубации детергентов, солюбилизирующих поверхностные белковые компоненты, приводит к значительному снижению численности сорбированных на поверхностях бактерий (Рисунок 21).

В специальных экспериментах показано негативное влияние лизоцима на адгезию использованных в работе штаммов стафилококков, которое, возможно, обусловлено со снижением содержания количества пептидогликана и, как следствие, его отрицательно заряженных группировок в клеточных стенках бактерий (Рисунки 25 и 27Б).

Представляют интерес данные сравнительного анализа действия ферментов на различные этапы образования биопленок стафилококков. Показано, что зависимость между чувствительностью зрелых биопленок к действию гидролаз и влиянием этих же факторов на процессы образования биопленок не является жесткой. В свою очередь, снижение количества сорбированных клеток под действием тех же литических ферментов приводит к торможению процесса формирования биопленок (Таблица 11).

Согласно данным литературы, сублетальные дозы антибиотиков способны как подавлять (Cerca et al., 2005a; Stewart et al., 2013), так и стимулировать (Rachid et al., 2000) адгезию стафилококков. В то же время, показано, что низкомолекулярные катионные пептиды, рассматривающиеся в качестве перспективной альтернативы современным антибиотикам (Vaara, 2009), обладают ингибирующим действием на начальных этапов образования биопленок стафилококками (Overhage et al., 2008, Sandiford and Upton, 2012).

Действительно, нами обнаружено, что низкомолекулярный катионный пептид варнерин в концентрациях 0,1 – 10хМПК оказывал выраженное ингибирующее действие на адгезию стафилококков к полистиролу, в том числе бактерий антибиотикоустойчивого штамма S. epidermidis ATCC®29887 (Рисунок 33). Важно отметить, что оба использованных в экспериментах катионных пептида (варнерин и хоминин) проявляли антиадгезионную активность как в растворенном, так и в сорбированном на поверхности полистирола состояниях (Рисунок 35). Показано, что предобработка бактерий S. epidermidis 33 варнерином значительно, практически, в 5 раз снижает их сорбционную активность (Рисунок 36). При изучении продолжительности ингибирующих эффектов варнерина и хоминина на развитие биопленок бактерий S.

epidermidis обнаружено, что длительность постантибактериального эффекта обоих пептидов зависит от штамма бактерий и может составлять от 2 до 5,5 ч (Рисунок 37). Можно предполагать, что торможение развития биопленок бактерий S. epidermidis, скорее всего, связано не с прямым бактерицидным действием изученных катионных пептидов, а с их способностью влиять на синтез белков, необходимых для образования биопленок. Подобный эффект был показан в отношении выделенного из лейкоцитов человека пептида LL-37 (Overhage et al., 2008), и гепцидина 20, изолированного из гепатоцитов человека (Brancatisano et al., 2014).

Известно, что в условиях in vivo, вероятнее всего, не существует непосредственного взаимодействия между бактериальными клетками и свободными стерильными абиотическими поверхностями, поскольку, контактирующие с кровью поверхности вводимых имплантатов, практически, мгновенно покрываются белками сыворотки крови (Herrmann et al., 1988; Ishiguro et al., 2005). Эта, так называемая, «кондиционная пленка» способна существенно изменять физико-химические свойства поверхности, влияющие на бактериальную адгезию (Fletcher, 1976).

Действительно, полученные в работе данные свидетельствуют о том, что предобработка поверхностей полистирола, широко используемого для изготовления различных изделий медицинского назначения, плазмой крови или альбумином снижает уровень её гидрофобности (Таблица 16) и, в связи с этим, ингибирует адгезию бактерий S. epidermidis. В то же время иммобилизация на поверхности полистирола фибронектина способствует стимуляции адгезии S. epidermidis, некоторых штаммов бактерий по-видимому, за счет его специфических взаимодействий с поверхностными белками бактериальных клеток (Рисунок 40). Следует отметить, что наблюдаемое изменение шероховатости поверхности полистирола за счет адсорбции на ней плазмы, альбумина или фибронектина не коррелирует с изменением связывания бактерий S. epidermidis (Таблица 16, Рисунок 40).

Анализ возможности ауторегуляции адгезионных процессов при освоении бактериальной популяцией свободных поверхностей на границе раздела фаз показал, что начальные периоды колонизации поверхности полистирола бактериями S. epidermidis сопровождаются выделением в окружающую среду низкомолекулярных соединений, появление которых установлено массспектрометрическим методом (Рисунок 42). В связи с тем, что внесение бактерий в среду инкубации, содержащую эти соединения, вызывало значительное ускорение адгезии бактериальных клеток (Рисунок 41), можно предполагать наличие у них функций факторов регуляции освоения поверхностей по типу систем кворума. Кроме того, чувствительность данных соединений к действию протеаз (Рисунок 43) согласуется с тем, что сигнальными молекулами системы QS грамположительных бактерий, чаще всего, являются пептиды небольшого размера (Olson et al., 2014).

ВЫВОДЫ

1. Повышение сдвигающих усилий и осмотического давления среды, понижение температуры и закисление среды сопровождаются снижением адгезии бактерий исследованных штаммов S. epidermidis к поверхностям стекла и полистирола.

2. Увеличение концентрации ионов кальция, магния, цинка и марганца в среде формирования бактериальных пленок приводит к ингибированию процессов сорбции и формирования биопленок бактерий S. epidermidis на поверхностях полистирола, по-видимому, вследствие изменения дзета-потенциала бактериальных клеток.

3. Детергенты и гидролитические ферменты, изменяющие поверхностные характеристики бактериальных клеток, снижают адгезию S. epidermidis к гидрофобной поверхности полистирола.

4. Присутствие в среде аутологичной ДНК оказывает стимулирующий эффект на сорбцию бактерий S. epidermidis, в то время как введение в среду чужеродной ДНК как бактериального, так и животного происхождения, не вызывает каких-либо значительных изменений интенсивности этого процесса.

5. Низкомолекулярные катионные пептиды семейства лантибиотиков варнерин и хоминин снижают адгезию и интенсивность образования биопленок бактерий S. epidermidis, в том числе обладающих устойчивостью к метициллину, как на гидрофобной, так и гидрофильной поверхностях.

6. Обработка поверхности полистирола сывороточным альбумином или плазмой крови ингибирует адгезию к ней бактерий S. epidermidis за счет снижения её гидрофобности, тогда так обработка фибронектином повышает их адгезию, повидимому, за счет специфических взаимодействий этого белка с поверхностными структурами бактериальных клеток.

7. Адгезия бактерий S. epidermidis 33 на поверхности полистирола сопровождается выделением в среду низкомолекулярных соединений, повидимому, пептидной природы, стимулирующих сорбцию бактерий на начальных этапах освоения ими поверхностей, возможно, в качестве факторов кворума.

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Афиногенова, А.Г. Микробные биопленки ран: состояние вопроса/ А.Г.

Афиногенова, Е.Н. Даровская. // Травматология и ортопедия России. – 2011. Т. 3.

№ 61. – С. 119–125.

2. Бухарин, О.В. Влияние активных форм кислорода на адгезивные характеристики и продукцию биопленок бактериями/ О.В. Бухарин, А.А. Сгибнев.

// Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. – 2012. – № 3. – С.

70–73.

3. Грызунов, Ю.А. Альбумин сыворотки крови в клинической медицине / Ю.А.

Грызунов, Г.Е. Добрецов / М.: Ириус, 1994. – 226 c.

4. Дерябин, Д.Г. Стафилококки: экология и патогенность / Д.Г. Дерябин / Екатеринбург: УрО РАН, 2000. – 239 c.

5. Ильина, Т.С. Системы коммуникаций у бактерий и их роль в патогенности / Т.С. Ильина, Ю.М. Романова, А.Л. Гинцбург // Мол. генетика, микробиол.

вирусол. – 2006. – № 3. – С. 22–29.

6. Выделение и характеристика нового низкомолекулярного антибактериального пептида семейства лантибиотиков/ В.П. Коробов [и др.] // Микробиология. – 2010. – Т. 79. – №2. – С. 228–238.

7. Коробов, В.П. Патент РФ № 2528055. – 2014.

8. Николаев, Ю.А. Биопленка - “город микробов” или аналог многоклеточного микроорганизма?/ Ю.А. Николаев, В.К. Плакунов. // Микробиология. – 2007. – Т.

76. – № 2. – С. 149–163.

9. Определение чувствительности микроорганизмов к антибактериальным препаратам (Методические указания МУК 4.2.1890-04) // Клиническая микробиология и антимикробная химиотерапия. – 2004. – Т. 6. – № 4. – С. 306– 359.

10. Потехина, Н.В. Тейхоевые кислоты акиномицетов и других грамположительных бактерий/ Н.В. Потехина. // Успехи биологической химии. – 2006.

– Т. 46. – С. 225–278.

11. Романова, Ю.М. Бактериальные биопленки как естественная форма существования бактерий в окружающей среде и организме хозяина / Ю.М.

Романова, А.Л. Гинцбург // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. – 2011. – №3: – С. 100–110.

12. Стимуляция антибиотиками процесса формирования бактериальных биопленок/ Е.А. Стрелкова [и др.] // Микробиология. – 2012. – Т. 81. – № 2. – С.

282–285.

13. Образование биопленок стафилококков на поверхности титана и титана с углеродной алмазоподобной пленкой и действие на них низкомолекулярного катионного пептида варнерина/ И.Ш. Трахтенберг [и др.]. // Перспективные материалы. – 2013. – № 4. – С. 39–44.

14. Новый метод исследования антибиотикорезистентности бактериальных биоплёнок / И.В. Чеботарь [и др.]. // Клиническая микробиология и антимикробная химиотерапия. – 2012. – Т. 14. – № 4. – С. 303–308.

15. Фалова, О.Е. Влияние углеводов на интенсивность адгезии золотистого стафилококка/ О.Е. Фалова. // Вестник новых медицинских технологий. – 2011. – Т. 18. – № 1. – С. 11–12.

16. Определитель бактерий Берджи. В 2-х т. Т. 2: Пер. с англ. // под ред. Д. Хоулт и др. М.: Мир, 1997. – 432 c.

17. In vitro oxidant effects of D-glucosamine reduce adhesin and biofilm formation of Staphylococcus epidermidis./ V. Aiassa [et al.] // Rev. Argent. Microbiol. – 2012. – V. 44. – № 1. – P. 16–20.

18. Rapid quantification of staphylococci adhered to titanium surfaces using image analyzed epifluorescence microscopy/ Y.H. An [et al.] // J. Microbiol. Methods. – 1995.

– V. 24. – P. 29–40.

19. The prevention of prosthetic infection using a cross-linked albumin coating in a rabbit model./ Y.H. An [et al.] // J. Bone Joint Surg. Br. – 1997. – V. 79. – № 5. – P.

816–9.

20. An, Y.H. Handbook of Bacterial Adhesion / Y.H. An, R.J. Friedman / New Jersey:

Humana Press, 2000. – 644 p.

21. The inhibitory activity of serum to prevent bacterial adhesion is mainly due to apotransferrin./ R. Ardehali [et al.] // J. Biomed. Mater. Res. A. – 2003. – V. 66. – № 1. – P. 21–8.

22. SdrF, a Staphylococcus epidermidis surface protein, binds type I collagen./ C.

Arrecubieta [et al.] // J. Biol. Chem. – 2007. – V. 282. – P. 18767–18776.

23. SdrF, a Staphylococcus epidermidis surface protein, contributes to the initiation of ventricular assist device driveline-related infections./ C. Arrecubieta [et al.] // PLoS Pathog. – 2009. – V. 5. – № 5. – P. 1–13.

24. Calcium inhibits bap-dependent multicellular behavior in Staphylococcus aureus./ M.J. Arrizubieta [et al.] // J. Bacteriol. – 2004. – V. 186. – № 22. – P. 7490–7498.

25. Atlas, R.M. Handbook of Microbiological Media / R.M. Atlas // by ed. L.C. Parks.

CRC press, 1993. 3th ed – 1079 p.

26. Impact of the accessory gene regulatory system (Agr) on extracellular proteins, codY expression and amino acid metabolism in Staphylococcus epidermidis/ C.F.

Batzilla [et al.] // Proteomics. – 2006. – V. 6. – P. 3602–3613.

27. Furanones as potential anti-bacterial coatings on biomaterials./ J.K. Baveja [et al.] // Biomaterials. – 2004. – V. 25. – № 20. – P. 5003–12.

28. Comparison of surface roughness of oral hard materials to the threshold surface roughness for bacterial plaque retention: a review of the literature./ C.M. Bollen [et al.] // Dent. Mater. – 1997. – V. 13. – P. 258–269.

29. Protein antimicrobial barriers to bacterial adhesion./ C.K. Bower [et al.] // J. Dairy Sci. – 1998. – V. 81. – № 10. – P. 2771–8.

30. Use of the atomic force microscope to determine the effect of substratum surface topography on bacterial adhesion/ R.D. Boyd [et al.] // Langmuir. – 2002. – V. 18. – P.

2343–2346.

31. Inhibitory effect of the human liver-derived antimicrobial peptide hepcidin 20 on biofilms of polysaccharide intercellular adhesin (PIA)-positive and PIA-negative strains of Staphylococcus epidermidis./ F.L. Brancatisano [et al.] // Biofouling. – 2014. – V.

30. – № 4. – P. 435–46.

32. Control of staphylococcal adhesion to polystyrene surfaces by polymer surface modification with surfactants./ M.J. Bridgett [et al.] // Biomaterials. – 1992. – V. 13. – P. 411–416.

33. Adherence of coagulase-negative staphylococci onto polyethylene catheters in vitro and in vivo: a study on the influence of various plasma proteins/ P. Brokke [et al.] // J.

Biomater. Appl. – 1991. – V. 5. – № 3. – P. 204–226.

34. The relationship between inhibition of bacterial adhesion to a solid surface by subMICs of antibiotics and subsequent development of a biofilm. / N. Cerca [et al.] // Res.

Microbiol. – 2005a. – V. 156. – № 5-6. – P. 650–655.

35. Quantitative analysis of adhesion and biofilm formation on hydrophilic and hydrophobic surfaces of clinical isolates of Staphylococcus epidermidis./ N. Cerca [et al.] // Res. Microbiol. – 2005b. – V. 156. – № 4. – P. 506–514.

36. The Calgary Biofilm Device: New technology for rapid determination of antibiotic susceptibilities of bacterial biofilms/ H. Ceri [et al.] // J. Clin. Microbiol. – 1999. – V.

37. – P. 1771–1776.

37. XTT assay for evaluating the effect of alcohols, hydrogen peroxide and benzalkonium chloride on biofilm formation of Staphylococcus epidermidis./ K. Chaieb [et al.] // Microb. Pathog. – 2011. – V. 50. – № 1. – P. 1–5.

38. Low concentration of ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA) affects biofilm formation of Listeria monocytogenes by inhibiting its initial adherence./ Y. Chang [et al.] // Food Microbiol. – 2012. – V. 29. – № 1. – P. 10–7.

39. Response to alkaline stress by root canal bacteria in biofilms./ L.E. Chvez de Paz [et al.] // Int. Endod. J. – 2007. – V. 40. – № 5. – P. 344–55.

40. Chmielewski, R.A.N., Biofilm Formation and Control in Food Processing Facilities/ R.A.N. Chmielewski, J.F. Frank. // Compr. Rev. Food Sci. Food Saf. – 2003.

– V. 2. – № 1. – P. 22–32.

41. A zinc-dependent adhesion module is responsible for intercellular adhesion in staphylococcal biofilms./ D.G. Conrady [et al.] // Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. – 2008.

– V. 105. – № 49. – P. 19456–61.

42. Covalent immobilization of antimicrobial peptides (AMPs) onto biomaterial surfaces./ F. Costa [et al.] // Acta Biomater. – 2011. – V. 7. – № 4. – P. 1431–40.

43. Bacterial bioflims: a common cause of persistent infections/ J.W. Costerson [et al.] // Science. – 1999. – V. 284. – P. 1318–1322.

44. How bacteria stick./ J.W. Costerton [et al.] // Sci. Am. – 1978. – V. 238. – P. 86– 95.

45. Costerton, J.W. Overview of microbial biofilms/ J.W. Costerton // J. Ind.

Microbiol. – 1995. – V. 15. – P. 137–140.

46. Quantitation and characterization of competitive protein binding to polymers./ C.N.

Cottonaro [et al.] // Trans. Am. Soc. Artif. Intern. Organs. – 1981. – V. 27. – P. 391–5.

47. Bap, a Staphylococcus aureus surface protein involved in biofilm formation./ C.

Cucarella [et al.] // J. Bacteriol. – 2001. – V. 183. – № 9. – P. 2888–96.

48. Role of extracellular DNA in initial bacterial adhesion and surface aggregation./ T.

Das [et al.] // Appl. Environ. Microbiol. – 2010. – V. 76. – № 10. – P. 3405–8.

49. DNA-mediated bacterial aggregation is dictated by acid – base interactions/ T. Das [et al.] // Soft Matter. – 2011. – P. 2927–2935.

50. Davey, M.E. Microbial Biofilms: from Ecology to Molecular Genetics/ M.E.

Davey, G.A. O’ Toole. // Microbiol. Mol. Biol. Rev. MMBR. – 2000. – V. 64. – № 4.

– P. 847–867.

51. Community-associated meticillin-resistant Staphylococcus aureus./ F.R. DeLeo [et al.] // Lancet. – 2010. – V. 375. – № 9725. – P. 1557–68.

52. Quantitative comparison of shear-dependent Staphylococcus aureus adhesion to three polyurethane ionomer analogs with distinct surface properties./ R.B. Dickinson [et al.] // J. Biomed. Mater. Res. – 1997. – V. 36. – № 2. – P. 152–162.

53. Donlan, R.M. Biofilms: microbial life on surfaces./ R.M. Donlan. // Emerg. Infect.

Dis. – 2002. – V. 8. – № 9. – P. 881–90.

54. Donlan, R.M. Biofilms: Survival Mechanisms of Clinically Relevant Microorganisms/ R.M. Donlan, J.W. Costerton. // Clin. Microbiol. Rev. – 2002. – V.

15. – № 2. – P. 167–193.

55. Dunne Jr, W. The effects of magnesium, calcium, EDTA, and pH on the in vitro adhesion of Staphylococcus epidermidis to plastic./ W. Dunne Jr, E. Burd. // Microbiol.

Immunol. – 1992. – V. 36. – № 10. – P. 1019–1027.

56. Dunne, W.M. Bacterial Adhesion: Seen Any Good Biofilms Lately?/ W.M. Dunne.

// Clin. Microb. Rev. – 2002. – V. 15. – № 2.

57. New aspects in the molecular basis of polymer-associated infections due to staphylococci./ C. von Eiff [et al.] // Eur. J. Clin. Microbiol. Infect. Dis. Off. Publ. Eur.

Soc. Clin. Microbiol. – 1999. – V. 18. – № 12. – P. 843–846.

58. Pathogenesis of infections due to coagulase-negative staphylococci / C. von Eiff [et al.] // Lancet Infect. Dis. – 2002. – V. 2. – P. 677–685.

59. Infections associated with medical devices: pathogenesis, management and prophylaxis./ C. von Eiff [et al.] // Drugs. – 2005. – V. 65. – № 2. – P. 179–214.

60. Elliott, T.S. Line-associated bacteraemias./ T.S. Elliott. // Commun. Dis. Rep. CDR Rev. – 1993. – V. 3. – P. R91–R96.

61. Fang, H. Rapid Screening and Identification of Methicillin-Resistant Staphylococcus aureus from Clinical Samples by Selective-Broth and Real-Time PCR Assay/ H. Fang, G. Hedin. // J. Clin. Microbiol. – 2003. – V. 41. – № 7. – P. 2894– 2899.

62. Evidence for low temperature regulation of biofilm formation in Staphylococcus epidermidis./ F. Fitzpatrick [et al.] // J. Med. Microbiol. – 2005. – V. 54. – № Pt 5. – P. 509–10.

63. Bacterial colonization of functionalized polyurethanes/ R.G. Flemming [et al.] // Biomaterials. – 2000. – V. 21. – P. 273–281.

64. Fletcher, M. The effects of proteins on bacterial attachment to polystyrene./ M.

Fletcher. // J. Gen. Microbiol. – 1976. – V. 94. – № 2. – P. 400–404.

65. Fletcher, M. Bubble contact angle method for evaluating substratum interfacial characteristics and its relevance to bacterial attachment./ M. Fletcher, K.C. Marshall. // Appl. Environ. Microbiol. – 1982. – V. 44. – № 1. – P. 184–192.

66. Bacteriocins Pep5 and epidermin inhibit Staphylococcus epidermidis adhesion to catheters./ M.B.C. Fontana [et al.] // Curr. Microbiol. – 2006. – V. 52. – № 5. – P. 350– 3.

67. Frank, J.F. Microbial attachment to food and food contact surfaces/ J.F. Frank. // Adv. Food Nutr. Res. – 2001. – V. 43. – P. 319–370.

68. New method for detecting slime production by coagulase negative staphylococci/ D.J. Freeman [et al.] //J..Clin. Pathol. – 1989. – P. 872–874.

69. Is the GehD lipase from Staphylococcus epidermidis a collagen binding adhesin?/ M. Gabriela Bowden [et al.] // J. Biol. Chem. – 2002. – V. 277. – P. 43017–43023.

70. Early adhesion of bacteremic strains of Staphylococcus epidermidis to polystyrene:

influence of hydrophobicity, slime production, plasma, albumin, fibrinogen, and fibronectin./ S. Galliani [et al.] // J. Lab. Clin. Med. – 1994. – V. 123. – P. 685–692.

71. Genetic classification and distinguishing of Staphylococcus species based on different partial gap, 16S rRNA, hsp60, rpoB, sodA, and tuf gene sequences./ B.

Ghebremedhin [et al.] // J. Clin. Microbiol. – 2008. – V. 46. – № 3. – P. 1019–25.

72. Effectiveness of cleaning techniques used in the food industry in terms of the removal of bacterial biofilms./ H. Gibson [et al.] // J. Appl. Microbiol. – 1999. – V. 87

– № 1. – P. 41–8.

73. Gilan, I. Extracellular DNA Plays an Important Structural Role in the Biofilm of the Plastic Degrading Actinomycete Rhodococcus ruber/ I. Gilan, A. Sivan. // Adv.

Microbiol. – 2013. – V. 3. – P. 543–551.

74. Surface characteristics and adhesion of Escherichia coli and Staphylococcus epidermidis./ P. Gilbert [et al.] // J. Appl. Bacteriol. – 1991. – V. 71. – P. 72–77.

75. Biofilm susceptibility to antimicrobials./ P. Gilbert [et al.] // Adv. Dent. Res. – 1997. – V. 11. – P. 160–167.

76. Insights on Evolution of Virulence and Resistance from the Complete Genome Analysis of an Early Methicillin-Resistant Staphylococcus aureus Strain and a Staphylococcus epidermidis Strain / S.R. Gill [et al.] // J. Bacteriol. – 2005. – V. 187. – № 7. – P. 2426–2438.

77. Antimicrobial peptides: the LPS connection./ A. Giuliani [et al.] // Methods Mol.

Biol. – 2010. – V. 618. – P. 137–154.

78. Goldsmith, H.L. Rheological aspects of thrombosis and haemostasis: basic principles and applications. ICTH-Report--Subcommittee on Rheology of the International Committee on Thrombosis and Haemostasis./ H.L. Goldsmith, V.T.

Turitto. // Thromb. Haemost. – 1986. – V. 55. – P. 415–435.

79. Gordon, A.S. Electrolyte effects on attachment of an estuarine bacterium./ A.S.

Gordon, F.J. Millero. // Appl. Environ. Microbiol. – 1984. – V. 47. – P. 495–499.

80. Gossas, T. Characterization of Ca2+ interactions with matrix metallopeptidase-12:

implications for matrix metallopeptidase regulation./ T. Gossas, U.H. Danielson. // Biochem. J. – 2006. – V. 398. – P. 393–398.

81. Gtz, F. Staphylococcus and biofilms/ F. Gtz. // Mol. Microbiol. – 2002. – V. 43.

– № 6. – P. 1367–1378.

82. The Genera Staphylococcus and Macrococcus / F. Gtz [et al.] // The Prokaryotes / by ed. M. Dworkin [et al.] New York, NY: Springer US, 2006. – P. 5–75.

83. Biomaterial specificity, molecular mechanisms, and clinical relevance of S. epidermidis and S. aureus infections in surgery / A. Gristina [et al.] // Pathogenesis and Clinical Significance of Coagulase-negative Staphylococci / by ed. G. Pulverer [et al.] Starttgart: Fisher Verlag, 1987. – P. 143–157.

84. Antimicrobial peptides: general overview and clinical implications in human health and disease./ E. Guan-Guerra [et al.] // Clin. Immunol. – 2010. – V. 135. – P. 1–11.

85. Bacterial biofilms: from the natural environment to infectious diseases./ L. HallStoodley [et al.] // Nat. Rev. Microbiol. – 2004. – V. 2. – P. 95–108.

86. Hall-Stoodley, L. Evolving concepts in biofilm infections / L. Hall-Stoodley, P.

Stoodley // Cell. Microbiol. – 2009. – V. 11. – P. 1034–1043.

87. Harden, V. The isoelectric point of bacterial cells/ V. Harden, J. Harris. // J.

Bacteriol. – 1953. – V. 65. – № 2. – P. 198–202.

88. The Fbe (SdrG) protein of Staphylococcus epidermidis HB promotes bacterial adherence to fibrinogen./ O. Hartford [et al.] // Microbiology. – 2001a. – V. 147. – P.

2545–2552.

89. Identification of residues in the Staphylococcus aureus fibrinogen-binding MSCRAMM clumping factor A (ClfA) that are important for ligand binding./ O.M.

Hartford [et al.] // J. Biol. Chem. – 2001b. – V. 276. – P. 2466–2473.

Staphylococcus

90. Evidence for autolysin-mediated primary attachment of epidermidis to a polystyrene surface./ C. Heilmann [et al.] // Mol. Microbiol. – 1997. – V. 24. – № 5. – P. 1013–1024.

91. Spontaneous switch to PIA-independent biofilm formation in an ica-positive Staphylococcus epidermidis isolate./ S. Hennig [et al.] // Int. J. Med. Microbiol. – 2007.

– V. 297. – № 2. – P. 117–22.

92. How to optimize the drop plate method for enumerating bacteria./ B. Herigstad [et al.] // J. Microbiol. Methods. – 2001. – V. 44. – № 2. – P. 121–9.

93. Fibronectin, fibrinogen, and laminin act as mediators of adherence of clinical staphylococcal isolates to foreign material./ M. Herrmann [et al.] // J. Infect. Dis. – 1988. – V. 158. – № 4. – P. 693–701.

94. NHSN annual update: antimicrobial-resistant pathogens associated with healthcareassociated infections: annual summary of data reported to the National Healthcare Safety Network at the Centers for Disease Control and Prevention, 2006-2007./ A.I.

Hidron [et al.] // Infect. Control Hosp. Epidemiol. – 2008. – V. 29. – № 11. – P. 996– 1011.

95. Adhesion of Staphylococcus epidermidis and Staphylococcus saprophyticus to a hydrophobic biomaterial./ A.H. Hogt [et al.] // J. Gen. Microbiol. – 1985a. – V. 131. – № 9. – P. 2485–2491.

96. Adhesion of coagulase-negative staphylococci with different surface characteristics onto a hydrophobic biomaterial/ A.H. Hogt [et al.] // Antonie Van Leeuwenhoek. – 1985b. – V. 51. – № 5-6. – P. 510–512.

97. The dynamics of Staphylococcus epidermis biofilm formation in relation to nutrition, temperature, and time/ V. Hol [et al.] // Scripta Medica. – 2006. – V. 79. – P.

169–174.

98. Hood, S.K. Adherence to stainless steel by foodborne microorganisms during growth in model food systems/ S.K. Hood, E.A. Zottola. // Int. J. Food Microbiol. – 1997. – V. 37. – P. 145–153.

99. Importance of medium and atmosphere type to both slime production and adherence by coagulase-negative staphylococci./ M. Hussain [et al.] // J. Hosp. Infect. – 1992. – V. 20. – P. 173–184.

100. A 140-kilodalton extracellular protein is essential for the accumulation of Staphylococcus epidermidis strains on surfaces./ M. Hussain [et al.] // Infect. Immun. – 1997. – V. 65. – № 2. – P. 519–24.

101. Teichoic acid enhances adhesion of Staphylococcus epidermidis to immobilized fibronectin./ M. Hussain [et al.] // Microb. Pathog. – 2001. – V. 31. – P. 261–270.

102. Modes of conformational changes of proteins adsorbed on a planar hydrophobic polymer surface reflecting their adsorption behaviors/ R. Ishiguro [et al.] // J. Colloid Interface Sci. – 2005. – V. 290. – P. 91–101.



Pages:     | 1 |   ...   | 2 | 3 || 5 |

Похожие работы:

«Сигнаевский Воладимир Дмитриевич МОРФОГЕНЕТИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ ПРОДУКТИВНОСТИ ЯРОВОЙ МЯГКОЙ ПШЕНИЦЫ СОРТОВ САРАТОВСКОЙ СЕЛЕКЦИИ Специальность 03.02.01 — ботаника Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: д.б.н.,...»

«ВУДС ЕКАТЕРИНА АНАТОЛЬЕВНА Фармакогенетические аспекты антиангиогенной терапии экссудативной формы возрастной макулярной дегенерации» 14.01.07 – Глазные болезни ДИССЕРТАЦИЯ на соискание учёной степени кандидата медицинских наук Научные руководители: доктор медицинских наук Будзинская Мария Викторовна кандидат биологических наук Погода Татьяна Викторовна Москва – 2015...»

«Степина Елена Владимировна ЭКОЛОГО-ФЛОРИСТИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА СТЕПНОЙ РАСТИТЕЛЬНОСТИ ЮГО-ЗАПАДНЫХ РАЙОНОВ САРАТОВСКОЙ ОБЛАСТИ 03.02.08 – экология (биологические науки) Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: доктор...»

«Ядрихинская Варвара Константиновна ЭКОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ РАСПРОСТРАНЕНИЯ ОСТРЫХ КИШЕЧНЫХ ИНФЕКЦИЙ В Г. ЯКУТСКЕ И РЕСПУБЛИКЕ САХА (ЯКУТИЯ) 03.02.08 – экология Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель кандидат биологических наук, доцент М.В. Щелчкова Якутск 2015...»

«Чечулова Анна Васильевна ПРОГНОСТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ НАСЛЕДСТВЕННЫХ И ПРИОБРЕТЕННЫХ ФАКТОРОВ РИСКА ВЕНОЗНОГО ТРОМБОЭМБОЛИЗМА У ПАЦИЕНТОВ МОЛОДОГО ВОЗРАСТА 14.01.21 – гематология и...»

«Абдуллоев Хушбахт Сатторович ИММУНОБИОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА ВИРУСА ИНФЕКЦИОННОГО БРОНХИТА КУР ГЕНОТИПА QX 06.02.02 «ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология» Диссертация на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук Научный руководитель: доктор биологических наук, профессор Макаров Владимир Владимирович...»

«МИХАЙЛОВ РОМАН АНАТОЛЬЕВИЧ ЭКОЛОГО-ФАУНИСТИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ ПРЕСНОВОДНЫХ МОЛЛЮСКОВ СРЕДНЕЙ И НИЖНЕЙ ВОЛГИ Специальность 03.02.08 – экология (биология) (биологические науки) Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: доктор биологических наук, профессор И.А. Евланов Тольятти – 2015 ОГЛАВЛЕНИЕ Стр. ВВЕДЕНИЕ...»

«БАРИНОВА Ирина Владимировна Патогенез и танатогенез плодовых потерь при антенатальной гипоксии 14.03.02 – Патологическая анатомия ДИССЕРТАЦИЯ на соискание учёной степени доктора медицинских наук Научные консультанты: Заслуженный деятель науки РФ Доктор биологических наук, доктор медицинских наук, профессор профессор САВЕЛЬЕВ...»

«БАДМАЕВА АЛИЯ АЗАТОВНА ИММУНОЛОГИЧЕСКОЕ И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОЕ ОБОСНОВАНИЕ ПРИМЕНЕНИЯ АДАПТОГЕНОВ НА ФОНЕ ДЕБИКИРОВАНИЯ ПТИЦ Специальность: 06.02.02ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: доктор биол. наук, профессор Р.Т. Маннапова Москва 2014 Оглавление ВВЕДЕНИЕ ГЛАВА I. ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР 1.1 Влияние дебикирования на организм...»

«ТУРТУЕВА ТАТЬЯНА АНАТОЛЬЕВНА РАЗРАБОТКА СБОРА НЕЙРОПРОТЕКТИВНОГО И ЭКСТРАКТА СУХОГО НА ЕГО ОСНОВЕ 14.04.02 фармацевтическая химия, фармакогнозия ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук Научный руководитель: доктор фармацевтических наук, профессор НИКОЛАЕВА ГАЛИНА ГРИГОРЬЕВНА Улан-Удэ – 2015 ОГЛАВЛЕНИЕ...»

«Борисов Станислав Юрьевич Морфологические изменения во внутренних органах крыс при воздействии нано-, микрои мезоразмерных частиц цеолитовых туфов 06.02.01 – диагностика болезней и терапия животных, патология, онкология и морфология животных Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель:...»

«ХОАНГ ЗИЕУ ЛИНЬ ЭКОЛОГИЗАЦИЯ ЗАЩИТЫ КАПУСТНЫХ КУЛЬТУР ОТ ОСНОВНЫХ ЧЕШУЕКРЫЛЫХ ВРЕДИТЕЛЕЙ В УСЛОВИЯХ МОСКОВСКОГО РЕГИОНА Специальность: 06.01.07 – защита растений Диссертация на соискание учёной степени кандидата биологических наук Научный руководитель: Попова Татьяна Алексеевна, кандидат биологических наук, доцент...»

«Калинка Ольга Петровна ОЦЕНКА УЯЗВИМОСТИ АКВАТОРИИ КОЛЬСКОГО ЗАЛИВА И ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ ЕГО БЕРЕГОВ ПРИ РАЗЛИВАХ НЕФТИ Специальность 25.00.28 – Океанология диссертация на соискание ученой степени кандидата географических наук Научный руководитель кандидат технических наук Шавыкин Анатолий Александрович Мурманск, 2015 ОГЛАВЛЕНИЕ ВВЕДЕНИЕ ГЛАВА 1....»

«КОЖАРСКАЯ ГАЛИНА ВАСИЛЬЕВНА КЛИНИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ МАРКЕРОВ КОСТНОГО МЕТАБОЛИЗМА У БОЛЬНЫХ РАКОМ МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ 14.01.12 онкология Диссертация на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Научные руководители: доктор биологических наук, Любимова Н.В. доктор медицинских наук, Портной С.М. Москва, 2015 г....»

«Баранов Михаил Евгеньевич Экологический эффект биогенных наночастиц ферригидрита при ремедиации нефтезагрязненных почвенных субстратов Специальность (03.02.08) – Экология (биология) Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: кандидат...»

«Минаева Наталья Викторовна Отдаленные последствия высокодозной химиотерапии и аутологичной трансплантации гемопоэтических стволовых клеток у больных гемобластозами 14.01.21 – гематология и переливание крови ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Научный руководитель...»

«СЕРГЕЕВА ЛЮДМИЛА ВАСИЛЬЕВНА ПРИМЕНЕНИЕ БАКТЕРИАЛЬНЫХ ЗАКВАСОК ДЛЯ ОПТИМИЗАЦИИ ФУНКЦИОНАЛЬНО-ТЕХНОЛОГИЧЕСКИХ СВОЙСТВ МЯСНОГО СЫРЬЯ И УЛУЧШЕНИЯ КАЧЕСТВА ПОЛУЧАЕМОЙ ПРОДУКЦИИ Специальность 03.01.06 – биотехнология ( в том числе бионанотехнологии) Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель Доктор биологических наук, профессор Кадималиев Д.А. САРАНСК 2014 ОГЛАВЛЕНИЕ ВВЕДЕНИЕ.....»

«ПОДОЛЬНИКОВА ЮЛИЯ АЛЕКСАНДРОВНА ОСОБЕННОСТИ СВОБОДНОРАДИКАЛЬНОГО СТАТУСА МОЛОКА КОРОВ УРБАНИЗИРОВАННОЙ ТЕРРИТОРИИ (НА ПРИМЕРЕ ОМСКОЙ ОБЛАСТИ) Специальность: 03.02.08 – экология ДИССЕРТАЦИЯ на соискание степени кандидата биологических наук Научный руководитель: Заслуженный работник высшей школы РФ доктор...»

«Шемякина Анна Викторовна БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫЕ ВЕЩЕСТВА ДАЛЬНЕВОСТОЧНЫХ ПРЕДСТАВИТЕЛЕЙ РОДА BETULA L. 03.02.14 – Биологические ресурсы Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: доктор биологических наук, профессор Колесникова Р.Д. Хабаровск – 20 СОДЕРЖАНИЕ ВВЕДЕНИЕ.. ГЛАВА 1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ ПО ТЕМЕ ИССЛЕДОВАНИЙ. 1.1 Общие...»

«ЛИТВИНЮК ДАРЬЯ АНАТОЛЬЕВНА МОРСКОЙ ЗООПЛАНКТОН И МЕТОДИЧЕСКИЕ ПРОБЛЕМЫ ЕГО ИЗУЧЕНИЯ Специальность 03.02.10. – Гидробиология Диссертация на соискание учной степени кандидата биологических наук Научный руководитель: доктор биологических наук, профессор Самышев Эрнест Зайнуллинович МОСКВА 2015 СОДЕРЖАНИЕ Стр. ПЕРЕЧЕНЬ УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ ВВЕДЕНИЕ РАЗДЕЛ 1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 1.1. История изучения и методологические аспекты оценки...»







 
2016 www.konf.x-pdf.ru - «Бесплатная электронная библиотека - Авторефераты, диссертации, конференции»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.