WWW.KONF.X-PDF.RU
БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА - Авторефераты, диссертации, конференции
 


«ВлИянИе модИфИцИроВанного клеточного ксенотрансплантата на ИндукцИю защИтных БелкоВ В поВрежденном мИокарде (экспериментальное исследование) ...»

На правах рукописи

Бабушкина Инна Викторовна

ВлИянИе модИфИцИроВанного клеточного

ксенотрансплантата на ИндукцИю

защИтных БелкоВ В поВрежденном мИокарде

(экспериментальное исследование)

06.02.01 – диагностика болезней и терапия животных,

патология, онкология и морфология животных

автореферат

диссертации на соискание ученой степени

кандидата биологических наук

Благовещенск – 2011

Работа выполнена в ФГОУ ВПО «Иркутская государственная сельскохозяйственная академия» (г. Иркутск) и Учреждении Российской академии медицинских наук Научном центре реконструктивной и восстановительной хирургии Сибирского отделения РАМН (г. Иркутск).

научный руководитель: доктор ветеринарных наук, профессор Ильина ольга петровна официальные оппоненты: доктор биологических наук, профессор сиразиев рамазан закарьянович кандидат ветеринарных наук, доцент курятова елена Вячеславовна

Ведущая организация: ФГОУ ВПО «Красноярский государственный аграрный университет»

Защита диссертации состоится «____» ______________ 2011 г. в «___» часов на заседании Диссертационного совета Д 220.027.02 при ФГОУ ВПО «Дальневосточный государственный аграрный университет» по адресу: 675005, г. Благовещенск, ул. Политехническая, 86.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ДальГАУ.

Автореферат опубликован на официальном сайте ФГОУ ВПО ДальГАУ www.dalgau.ru Автореферат разослан ____ _______________ 2011 г.

Ученый секретарь диссертационного совета Перепелкина Л.И.

1. оБщая характерИстИка раБоты актуальность проблемы Непрерывное нарастание в современном мире стрессовых воздействий на организм приводит к изменению функции сердца, состояние которой определяет здоровье и работоспособность как человека, так и животных (Пшенникова М.Г., 2000; Меерсон Ф.З., 2001; Колесниченко И.С. с соавт., 2008; Никольская В.М., 2011), в связи с чем поиск новых способов защиты миокарда от ишемического повреждения остается актуальным на протяжении многих десятилетий.

В экспериментах на животных были продемонстрированы лечебные эффекты органоспецифической трансплантации клеток. Однако саногенетические механизмы влияния этого трансплантата исследованы недостаточно.

По данным литературы, известно, что клеточная органоспецифическая трансплантация ограничивает повреждение органов при стрессе (Репин В.С. с соавт., 1998; Сухих Г.Т., 1998; Берсенев А.В., 2003; Потапов И.В. с соавт., 2003;

Онищенко Н.А. с соавт., 2004). Обсуждаются разные теории механизмов действия клеточного трансплантата: трансдифференцировка, или слияние с клетками хозяина, мобилизация клеток-предшественниц, находящихся в самом миокарде, ангиогенез, стабилизация внеклеточного матрикса (Лазарев С.М. с соавт., 2007;

Беленков Ю.Н. с соавт., 2008; Кругляков П.В. с соавт., 2008; Шумаков В.И. с соавт., 2009).

Кроме того, установлено, что одним из таких механизмов является стимуляция регенерации поврежденных тканей реципиента ростовыми факторами эмбриональных и неонатальных органоспецифических клеток, среди которых наиболее изученными являются фактор роста гепатоцитов и фактор роста эндотелия сосудов (Шваб О.В. с соавт., 1998; Lee M.S. et al., 2004; Рунович А.А. с соавт., 2005; Лепехова С.А., 2009; Liu K.X. et al., 2009). С другой стороны, известно, что трансплантация ксеногенных клеток сердца сопровождалась опережающим приростом внутриклеточных стресс-белков в поврежденном органе (Рунович А.А. с соавт., 2005; Бадуев Б.К. с соавт., 2009).

Вместе с тем в ряде экспериментальных исследований показано, что увеличение уровня белков теплового шока (БТШ) в органах может защищать их от повреждений. Защитная роль БТШ была выявлена в исследованиях как на культурах клеток, так и in vivo. На уровне сегодняшних представлений белки теплового шока многими авторами расцениваются как часть внутриклеточной стресс-лимитирующей системы, способствующей защите клетки от повреждения (Малышев И.Ю. с соавт., 1998; Меерсон Ф.З., 2001; Hut H.M. et al., 2005; Yao S.

et al., 2007).

Существует предположение, что позитивный эффект клеточной трансплантации при патологии определяется в том числе и содержанием в трансплантате белков с шаперонной активностью. В пользу этой гипотезы свидетельствует ряд исследований, который демонстрирует способность БТШ70 проникать через модельные мембраны (gula Y.. t al., 1996; Harada Y. t al., 2007). кзогенgula...

..,.., ные БТШ участвуют в целом ряде важных регуляторных каскадов в организме и выполняют сигнальные функции (Edonin.L. et al., 2006; Caldrwood S.K.

et al., 2007; Евдонин А.Л. с соавт., 2009; Pockl.C. et al., 2009). В ряде работ был выявлен защитный эффект экзогенных белков теплового шока (Guzhoa I.V.

et al., 1998; oosloa T.V. et al., 2005). Кроме того, в работе С.А. Афанасьева было показано, что интрамиокардиальная трансплантация модифицированных мезенхимальных стволовых клеток с повышенным пулом БТШ70 и БТШ60 оказывала положительный эффект при постинфарктном ремоделировании за счет увеличения количества выживших клеток трансплантата (Афанасьев С.А.

с соавт., 2008).

Мы предполагаем, что белки теплового шока, содержащиеся в клеточном трансплантате, могут являться важными агентами, определяющими восстановление функций поврежденного органа.

Однако не исключается и другой вариант: специфическая активация собственной системы синтеза стрессовых белков трансплантируемыми клетками или выделяемыми ими агентами.

В связи с этим целью исследования явилось изучение влияния модифицированного клеточного трансплантата с разным уровнем БТШ для выяснения их роли в механизмах защиты поврежденного сердца.

Для достижения этой цели решались следующие задачи:

1. Исследовать разные способы модификации клеточного трансплантата, оказывающие влияние на содержание БТШ в суспензиях клеток сердца неонатального кролика in vitro.

2. Изучить влияние трансплантации суспензий неонатальных клеток сердца с низким и высоким уровнем БТШ на динамику развития патологического процесса в сердце и содержание стресс-белков в поврежденном миокарде.

3. Изучить особенности течения адреналинового повреждения миокарда у экспериментальных животных при трансплантации суспензий неонатальных клеток сердца в условиях системной блокады белкового синтеза при помощи циклогексимида.

научная новизна Впервые показано, что добавление ампициллина в дозе 0,003 мг/мл в среду инкубации суспензий неонатальных клеток сердца приводит к снижению базового уровня белков теплового шока в клетках.

Трансплантация ксеногенных неонатальных клеток сердца с повышенным содержанием белков теплового шока приводит к существенному увеличению уровня цитозольного пула БТШ70 в поврежденном миокарде по сравнению с опытами в контрольной группе и экспериментами с использованием немодицифированного трансплантата.

Сниженное содержание белков теплового шока в трансплантате сопровождается значимым падением уровня БТШ70 в поврежденном миокарде экспериментальных животных по сравнению с другими исследуемыми группами.

Введение трансплантата с повышенным содержанием БТШ обеспечивает более значительную защиту миокарда от повреждения, что проявляется в виде сохраненной активности ЛДГ-1 и КК и меньшим некротическим поражением миокарда.

В условиях предварительного системного подавления белкового синтеза путем введения циклогексимида трансплантация немодифицированных неонатальных клеток сердца сопровождается более ранним восстановлением продукции БТШ и ограничением деструктивных процессов в миокарде, наблюдаемых в модельных экспериментах в этих условиях.

теоретическая и практическая значимость работы Клеточный трансплантат с разным уровнем метаболической активности, отражением которого может быть содержание белков теплового шока, оказывает различное по своей выраженности влияние на один и тот же патологический процесс в организме реципиента. Трансплантат с заведомо высоким уровнем белков теплового шока оказывает более выраженный протекторный эффект, чем трансплантат с низким уровнем данных белков.

При разной исходной реактивности миокарда один и тот же трансплантат оказывает различное действие на защитные внутриклеточные стресс-белки и ферменты, но обеспечивают одинаковый характер выраженности воспалительного процесса, что свидетельствует о том, что кроме белков теплового шока, в клеточном трансплантате имеются другие вещества, оказывающие протекторный эффект.

то свойство органоспецифического трансплантата, имеющего разный уровень метаболической активности, может быть использовано в экспериментальной практике на различных моделях повреждения органов.

основные положения, выносимые на защиту:

1. Инкубация суспензий клеток сердца при 42 °С повышает содержание белков теплового шока, а добавление в среду инкубации антибиотика снижает содержание этого белка.

2. Введение модифицированного трансплантата с повышенным содержанием БТШ приводит к существенному увеличению уровня общего пула БТШ70, большей сохранности активности ферментов и меньшему повреждению миокарда у экспериментальных животных. ти явления отмечались как при сравнении результатов трансплантации немодифицированных суспензий клеток сердца, так и в опытах без трансплантации. Трансплантация суспензий клеток сердца с пониженным содержанием БТШ70 отличалась от групп сравнения только падением уровня стресс-белков в миокарде.

3. В условиях исходно подавленного белкового синтеза трансплантация немодифицированных клеток у экспериментальных животных с повреждением сердца обеспечивает более ранний подъем уровня БТШ в миокарде и меньшее повреждение в данной группе, в сравнении с опытами, проведенными в тех же условиях без трансплантации.

апробация работы Материалы диссертации представлены на II съезде кардиологов Сибирского федерального округа (Томск, 2007); международной конференция «Фундаментальные науки – медицине» (Новосибирск, 2007); ежегодной научной конференции «Фундаментальные науки – медицине» и научно-практической конференции «Новые материалы и методы для медицины» (Новосибирск, 2008); Всероссийской конференции «Устойчивость организмов к неблагоприятным факторам внешней среды» (Иркутск, 2009); IV Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Фундаментальные аспекты компенсаторноприспособительных процессов» (Новосибирск, 2009); II научно-практической конференции молодых ученых Сибирского и Дальневосточного федеральных округов (Иркутск, 2010).

публикации По материалам диссертации опубликовано 12 научных работ, в том числе 4 статьи в рецензируемых журналах, рекомендованных ВАК РФ для публикации результатов диссертации на соискание степени кандидата наук.

объем и структура диссертации Диссертация изложена на 125 страницах машинописного текста и состоит из введения, четырех глав, включающих обзор литературы, описание методов исследования и общей характеристики эксперимента, две главы результатов собственных исследований и их обсуждение, заключения, выводов и указателя литературы; иллюстрирована 22 таблицами и 11 рисунками. Указатель литературы включает 116 работ отечественных и 72 – зарубежных авторов.

2. матерИалы И методы ИсследоВанИя Работа является итогом научных исследований, выполненных автором в соответствии с планом научно-исследовательской работы, проводимой сотрудниками ФГОУ ВПО ИрГСХА и НЦРВХ СО РАМН (номер Государственной регистрации 01200602837).

В соответствии с решаемыми задачами работа состояла из двух этапов:

модификация суспензий клеток сердца неонатального кролика и экспериментальные исследования на животных. Модификация клеточного трансплантата осуществлялась путем воздействия на неонатальные клетки сердца высокой температуры или добавления в среду инкубации ампициллина в дозе 0,003 мг/ мл среды инкубации.

ксперименты проведены на 197 беспородных белых крысах-самцах массой тела 180–250 г в осенне-зимний период. Возраст животных был не менее 6 месяцев. Животных содержали в условиях вивария при свободном доступе к воде и пище соответственно нормативам ГОСТа «Содержание экспериментальных животных в питомниках НИИ», все документы, регламентирующие работу вивария, имелись на протяжении всего времени исследования (виварий категории, вет. удостоверение 238 № 0015220 от 25 марта 2009 г., служба ветеринарии Иркутской области).

Опыты на животных выполнялись в соответствии с правилами гуманного обращения с животными, которые регламентированы «Правилами проведения работ с использованием экспериментальных животных», утвержденных Приказом МЗ СССР № 742 от 13.11.84 г. «Об утверждении правил проведения работ с использованием экспериментальных животных» и № 48 от 23.01.85 г. «О контроле за проведением работ с использованием экспериментальных животных», а также основывались на положениях Хельсинской декларации Всемирной медицинской ассоциации от 1964 г., дополненной в 1975, 1983 и 1989 гг.

При проведении первой части эксперимента мы решали следующую задачу:

изучить влияние ксенотрансплантата с низким и высоким уровнем БТШ на динамику развития патологического процесса в сердце и содержание стресс-белков в поврежденном миокарде. Распределение животных на группы в зависимости от характера воздействия представлено в таблице 1.

Контрольной группой исследования являлась группа адреналинового повреждения миокарда (КГА). По методике Грабара – Ольха – Бледиса (1961) крысам подкожно вводили Solutio drnalini hdrohloridi 0,1% pro injectionibus из расчета 0,5 мл 0,1% раствора однократно в область правого бедра. Через 10 минут после инъекции адреналина подкожно в область левого бедра вводили физиологический раствор в объёме 0,5 мл.

кспериментальным животным, которые вошли в опытные группы (ОГ), также моделировали адреналиновое повреждение миокарда и через 10 минут после инъекции адреналина подкожно в область левого бедра вводили неонатальные клеточные суспензии сердца кролика (скс) в дозе 500 тыс. клеток в 0,5 мл физиологического раствора: немодифицированные скс (ОГНК), скс инкубированные 3 часа при 37 °С (ОГ37), скс инкубированные 1,5 часа при 42 °С, затем еще 1,5 часа при 37 °С (ОГ42), скс инкубированные 1,5 часа при 37 °С с добавлением ампициллина в дозе 0,003 мг/мл среды инкубации (ОГАМП).

–  –  –

( ) 3 37 ° 1 1,5 42 °, 1,5 37 ° 1,5 37 ° 0,003 / : 1- 3

–  –  –

: 8, 16, 1 3 Во второй части экспериментальной работы исследуемые параметры изучались на фоне блокады белкового синтеза, что позволит изучить влияние ксенотрансплантации на индукцию внутриклеточных механизмов защиты на фоне исходно подавленного синтеза белков в поврежденном органе. Во всех случаях использовалась модель адреналинового повреждения миокарда. Для подавления синтеза белка, как было уже сказано выше, животным за 3 ч до введения адреналина проводилась однократная внутрибрюшинная инъекция циклогексимида в дозе 0,15 мг/100 г веса животного.

Животным ОГЦА подкожно вводился адреналин на фоне предварительной блокады синтеза белка, ОГЦАТ – подкожное введение адреналина и суспензии неонатальных клеток сердца в тех же условиях, т.е. на фоне подавленного синтеза белка.

Циклогексимид в используемой дозе вводился здоровым животным (ОГЦ) Группа животных, которая была выведена через 3 часа после инъекции циклогексимида, являлась исходной точкой данного этапа исследования.

Выведение животных из эксперимента в условиях стандартной модели повреждения миокарда осуществлялось через 24 и 72 часа (ОГНК, ОГ37, ОГ42, ОГАМП), при исследованиях на фоне подавленного синтеза белка – через 8, 16, 24 и 72 часа после введения адреналина (КГА, ОГЦ, ОГЦА, ОГЦАТ).

8 метод получения суспензий неонатальных клеток сердца Суспензии клеток получали из сердца новорожденных кроликов (1–2 суток от момента рождения) по методике А.Б. Борисова (1988). Сердце перед извлечением перфузировали бескальциевым раствором Кребса – Рингера с добавлением 0,1% коллагеназы (тип, orthington), 0,1% гиалуронидазы и 1% бычьего сывороточного альбумина. Препарированный орган фрагментировали и ресуспендировали в растворе ферментов 0,1% коллагеназы и 0,1% гиалуронидазы.

Полученную клеточную суспензию сердца оценивали на жизнеспособность (витальность) по окраске трипановым синим в камере Горяева. Оставшуюся суспензию подвергали центрифугированию, ресуспендировали в среде Игла с 10% эмбриональной телячьей сывороткой (Германия) и инкубировали в чашках Петри в СО2-инкубаторе фирмы «Forma Scintific» (США). При этом применяли различные режимы инкубации в зависимости от поставленных задач.

Уровень БТШ70 и БТШ72 определяли в суспензиях клеток сердца контрольных серий эксперимента: в немодифицированных суспензиях клеток сердца (НСКС) и в суспензиях клеток сердца, инкубированных 3 часа при 37 °С (СКС37) (данная серия эксперимента введена в качестве температурного контроля).

Также был определен уровень данных стресс-белков в суспензиях клеток сердца, подвергнутых температурной модификации: при инкубации суспензий клеток сердца в течение 1,5 часов при 42 °С (СКС42) и при инкубации суспензий клеток сердца в течение 1,5 часов при 42 °С, а затем при дальнейшей инкубации 1,5 часа при 37 °С (СКС4237). В качестве второго модифицирующего воздействия мы использовали антибиотик – суспензии неонатальных клеток сердца инкубировали с ампициллином в дозе 0,003 мг/мл среды инкубации в течение 1,5 часов при 37 °С (СКСАМП).

Перед проведением процедуры трансплантации производилась отмывка суспензии клеток сердца от культуральной среды раствором 0,9% aCl и осуществлялась дополнительная оценка жизнеспособности клеток сердца. На этом этапе витальность клеточного трансплантата составляла 60 % (количество целых клеток). Количество клеток в инъецированной дозе определялось из расчета 2,5 105 кл/кг веса животного.

Биохимические исследования В сердечной ткани экспериментальных животных изучали содержание общего пула цитозольных белков теплового шока с молекулярной массой 70 кДа (включает БТШ72 и БТШ73 – индуцибельную и конститутивную формы БТШ70), индуцибельную форму БТШ72, активность креатинкиназы (КК) и лактатдегидрогеназы 1-го типа (ЛДГ-1), содержание пирувата и лактата.

Cодержание БТШ70 и БТШ72 определялось с использованием электрофореза по методу Лэммли (Lammli, 1970) с помощью прибора Mini-PROTE («Bio-Rad», США), согласно инструкции производителя, для чего суммарный белок переносили на нитроцеллюлозную мембрану (иммуноблоттинг) и в последующем для выявления БТШ70 и БТШ72 применяли первичные антитела («Sigma» и «StrssGn») на консервативную для белков этого семейства последовательность. Для последующей детекции этих антител применяли вторичные антитела (Sigma), конъюгированные с щелочной фосфатазой, и окрашивали мембраны в растворе BCP/ BT.

Полуколичественный анализ содержания белка на мембранах проводили с помощью программы Gl nalsis (Россия). Для определения достоверной картины изменения уровня содержания БТШ рассчитывался коэффициент изменения интенсивности окраски (у.е.), определяющий, во сколько раз интенсивность окраски белкового пятна в опытном варианте больше средней интенсивности окраски пятна контрольного варианта. При определении содержания БТШ70 и БТШ72 в неонатальных клетках сердца использовали среднюю интенсивность пятен белка в нативных клетках сердца (БТШ70 – 0,98 (0,93–1,06); БТШ72 – 0,96 (0,93–1,07)). Для аналогичного расчета в тканях сердца крыс опытных групп в качестве контроля использовали среднюю интенсивность окраски белковых пятен у интактных животных (БТШ70 – 1,00 (0,98–1,02); БТШ72 – 1,04 (0,65–1,30)).

Активность ферментов КК, ЛДГ-1 оценивали кинетическими экспрессметодами на спектрофотометре ROK («Ольвекс», Россия) с помощью готовых наборов реактивов (P.. CORMY (Польша, Германия) и Biocon iagnostik (ГермаP..

..

.

.

ния)) по методикам, рекомендованным Немецким обществом клинической химии (Olir I.T., 1955; roblwski F. et al., 1955). Содержание пирувата определяли по Умбрайту (Камышников В.С., 2004), содержание лактата определяли с помощью стандартных наборов реактивов «Biocon» (Германия) (Bablok. et al., 1988).

морфологическое исследование Для изучения морфометрических показателей использовали стандартные серийные срезы миокарда левого желудочка, перпендикулярные продольной оси сердца, с помощью видеосистемы «Quantimt 550» фирмы «Lica Qin16» и программного пакета «Lica Qin16».

Для контроля морфометрических изменений в сердце рассчитывались: сосудистый индекс (рассчитывали в 10 срезах, исходя из средней суммарной площади просвета сосудов – S среза 10000 мкм2); клеточный индекс (рассчитывали в срезах, исходя из среднего суммарного количества клеток инфильтрата при той же площади одного среза); площадь поперечного сечения мышечных волокон (мкм2 в 30 полях зрения каждого из 10 срезов) и площадь некроза (мкм2 в 30 полях зрения каждого из 10 срезов).

методы статистической обработки результатов Полученные данные в сравниваемых группах анализировали непараметрическим методом с использованием U-критерия Манна – Уитни и критерия Крускала – Уоллиса, коэффициента ранговой корреляции Спирмена. Различия считались достоверными при р 0,05. Данные представляли в виде медианы с верхним и нижним квартилями (25-й и 75-й процентили). Статистическая обработка результатов проводилась с помощью статистического пакета программ.

10

3. результаты соБстВенных ИсследоВанИЙ

3.1. содержание белков теплового шока в суспензиях неонатальных клеток сердца при их модификации Основной задачей, которую мы решали на данном этапе исследований, была оценка различных способов модификации, оказывающих влияние на содержание белков теплового шока в суспензии клеток сердца неонатального кролика.

С нашей точки зрения, модификация клеточного трансплантата позволит использовать суспензии клеток сердца с разным содержанием белков теплового шока в эксперименте in vivo и в ходе дальнейшего исследования ответить на вопрос о том, влияет ли содержание стресс-белков в трансплантате на механизмы защиты поврежденного сердца. В связи с этим было проведено исследование влияния различных температурных режимов и инкубации с добавлением антибиотика на содержание БТШ70 в суспензиях клеток сердца новорожденных кроликов.

Анализ содержания цитозольного пула БТШ70 (включающего конститутивную и индуцибельную формы) в суспензиях клеток контрольных серий экспериментов показал, что количество данных белков не отличалось между собой и составляло 0,98 и 1,04 у.е. соответственно (табл. 2).

Таблица 2 – Содержание БТШ70 в суспензиях неонатальных клеток сердца при температурной модификации и добавлении в среду инкубации антибиотика

–  –  –

В суспензиях клеток сердца, подвергнутых температурной модификации, наблюдалось достоверное увеличение уровня БТШ70 практически в два раза в сравнении с базовым уровнем в клетках контрольных серий экспериментов.

Напротив, добавление в среду инкубации суспензий клеток сердца сопровождалась значительным снижением уровня БТШ70 в сравнении с контролем (табл. 2).

Как видно из таблицы 3, уровень индуцибельной формы БТШ70 (БТШ72) был достоверно выше в первой серии в немодифицированных суспензиях клеток сердца (0,96 у.е.), в сравнении с суспензиями клеток сердца, инкубированными при 37 °С (0,64 у.е.).

Максимальное содержание БТШ72 обнаружено в суспензиях клеток сердца, подвергнутых дозированному тепловому воздействию. При этом в клетках четвертой серии экспериментов уровень БТШ72 повышался наиболее значимо и составлял 1,95 у.е.

Уровень данных стресс-белков в суспензиях клеток сердца, инкубированных с антибиотиком, был также значительно ниже, чем в контроле (табл. 3).

Таблица 3 – Содержание БТШ72 в суспензиях неонатальных клеток сердца при температурной модификации и добавлении в среду инкубации антибиотика

–  –  –

Таким образом, инкубация суспензий клеток сердца при высокой температуре или в присутствии ампициллина позволяет направленно изменять содержание стресс-белков в клетках. Полученные данные позволили дифференциально подойти к решению второй задачи и использовать в дальнейших экспериментах in vivo клеточные трансплантаты с повышенным, пониженным и базовым уровнями белков теплового шока.

3.2. Влияние модифицированного клеточного трансплантата на механизмы защиты миокарда при повреждении Существующие литературные данные, свидетельствующие о защитной роли белков теплового шока, как на культурах клеток, так и в эксперименте, и данные о высоком базовом содержании этих белков в суспензиях неонатальных клеток сердца позволили нам выдвинуть гипотезу о том, что позитивный эффект клеточной трансплантации при патологии определяется в том числе и содержанием в трансплантате белков с шаперонной активностью.

В эксперименте на модели адреналинового повреждения миокарда мы провели исследование модифицированных клеточных суспензий сердца с повышенным, пониженным и базовым содержанием белков теплового шока.

Исследование содержания эндогенного уровня БТШ70 в миокарде опытных животных показало, что максимальное значение фиксировалось к первым суткам наблюдения в группе с трансплантацией клеток, модифицированных высокой температурой, в сравнении как с контролем, так и с животными с трансплантацией немодифицированных клеток (рис. 1).

К третьим суткам наблюдалось достоверное снижение БТШ70 во всех группах по сравнению с группой контроля. Однако самый низкий уровень БТШ70 был выявлен у экспериментальных животных с трансплантацией клеток, модифицированных нагреванием. По-видимому, необходимость в большой продукции стресс-белков в этой группе утрачивалась в связи с тем, что они выполнили свою защитную функцию.

Напротив, в миокарде животных с введением клеток, инкубированных с ампициллином (ОГАМП), уровень БТШ70 был значимо ниже, чем в контроле (КГА), и составлял 2,89 (2,79–2,95) у.е. (p 0,05). Возможно, добавление в среду инкубации суспензий клеток сердца ампициллина приводит к накоплению регуляторных пептидов, оказывающих влияние на снижение эндогенного уровня БТШ70. Однако механизм данного явления не ясен и требует дальнейшего изучения.

Рис. 1 – Cодержание БТШ70 (а) и БТШ72 (б) в миокарде крыс в условиях трансплантации модифицированных суспензий клеток сердца.

В контрольной точке трое суток содержание данного белка в исследуемой группе не отличалось от группы с трансплантацией немодифицированных клеток.

Содержание БТШ72 в группах с трансплантацией клеток на первые сутки ниже по сравнению с контролем. Тем не менее, сравнительный анализ показал, что в группе с трансплантацией клеток, модифицированных высокой температурой, содержание БТШ72 на первые сутки было выше, чем в группах с базовым и пониженным уровнями БТШ (рис. 1). К третьим суткам содержание этих белков во всех группах с трансплантацией ниже, чем в контроле.

При этом в группе с введением клеток с повышенным уровнем БТШ уровень эндогенных индуцибельных стресс-белков был минимальным и составлял 3,82 у.е. (pU 0,05).

Как видно из таблицы 4, во всех группах с трансплантацией клеточного материала активность креатинкиназы и лактатдегидрогеназы-1 в миокарде была достоверно выше, чем в группе контроля (адреналиновое повреждение миокарда) (p 0,05).

Таблица 4 – Влияние модифицированного клеточного ксенотрансплантата на активность лактатдегидрогеназы-1 и креатинкиназы (мкмоль/мг белка в мин) в миокарде крыс

-1 1- 3- 1- 3

–  –  –

Примечание: КГА – группа с адреналиновым повреждением миокарда; ОГНК – трансплантация немодифицированных суспензий клеток сердца;

ОГ42 – трансплантация суспензий клеток сердца с повышенным содержанием БТШ; ОГАМП – трансплантация суспензий клеток сердца с пониженным содержанием БТШ; k – p 0,05 в сравнении с группой КГА; * – p 0,05 в сравнении с группой ОГНК; – p 0,05 в сравнении с ОГ37; 0 – p 0,05 в сравнении с группой «интактные животные» (по критерию Манна – Уитни).

Самая высокая активность КК и ЛДГ1 наблюдалась в группе с температурной модификацией, что свидетельствовало о большей сохранности активности этих ферментов у экспериментальных животных (табл. 4). В то же время в условиях трансплантации клеток, инкубированных с ампициллином, и в группе с трансплантацией немодифицированных клеток активность данных ферментов не имела существенных различий.

В группе контроля отмечалась наибольшая степень повреждения миокарда, о чем свидетельствовали выраженная клеточная инфильтрация, увеличение сосудистого индекса, отека миокардиальных волокон и площадь некроза. В первые сутки эксперимента в данной группе отмечались острые расстройства кровообращения в виде полнокровия сосудов, небольшие группы кардиомиоцитов были с признаками некроза, отмечались очаговая фрагментация клеток, выраженная очаговая эозинофилия цитоплазмы, очагово – «тени» или отсутствие ядер. Площадь зон некроза составила 563,24 (493,14–626,35) мкм2. Некроз в миокарде левого желудочка носил более распространенный характер. Клеточный индекс составлял 41,67 (32,94-69.28) у.е., при этом количество нейтрофилов в воспалительном клеточном инфильтрате преобладало над мононуклеарным компонентом.

У животных через трое суток после введения адреналина степень расстройства кровообращения в сравнении с предыдущим сроком не отличалась.

Гемодинамические расстройства носили преимущественно перифокальный характер вокруг множественных зон некроза и заключались в расширении капилляров, венозном и капиллярном полнокровии и точечных очаговых кровоизлияниях. Среди клеток инфильтрата также преобладают нейтрофилы, значительную часть по-прежнему составляют мононуклеарные клеточные элементы – лимфоциты и макрофаги. Площадь сформированных некрозов контрактурного и цитолизного типа составила 2115,59 (2054,34– 2205,18) мкм2.

Развитие адреналинового повреждения у животных, которым введение адреналина сочеталось с трансплантацией неонатальных кардиомиоцитов, по своему качеству мало чем отличалось от результатов в контрольной группе.

Однако интенсивность воспаления при трансплантации была значительна меньше.

Важно отметить, что в группе с трансплантацией клеточных суспензий сердца, модифицированных высокой температурой, наблюдался меньший отек миокардиальных волокон в сравнении с группой контроля (p 0,05). Площадь поперечного сечения кардиомиоцитов в данной группе в первые сутки эксперимента составляла 286,25 (225,55–319,09) мкм2, в третьи сутки – 303,99 (260,82–314,51) мкм2, в группе контроля в исследуемые сроки – 381,56 (314,20–410,02) мкм2 и 410,20 (326,35–436,17) мкм2 соответственно.

Следует отметить, что площадь очагов некроза в миокарде у животных при введении им клеток сердца с повышенным содержанием белков теплового шока при повреждении миокарда была в 1,27 раза ниже, чем в контрольной группе, и в 1,15 раза ниже, чем в группе с трансплантацией немодифицированных клеток (p 0,05) (рис. 2).

Рис. 2 – Площадь некроза в миокарде экспериментальных животных при трансплантации модифицированных суспензий клеток сердца.

Степень повреждения миокарда в условиях трансплантации клеток, инкубированных с ампициллином, и в группе с трансплантацией немодифицированных клеток не имела существенных различий.

Таким образом, трансплантация суспензий клеток сердца с повышенным уровнем белков теплового шока экспериментальным животным оказывала больший протекторный эффект в сравнении с трансплантацией клеток с базовым содержанием данных белков и сопровождалась значимым повышением эндогенного пула цитозольных БТШ70.

Мы предполагаем, что своевременное повышение уровня этих защитных белков способствовало более эффективной защите миокарда от повреждения, что проявлялось в большей сохранности ферментной системы миокарда, отвечающей за энергообеспечение миокарда, и ограничении площади очагов некроза.

Напротив, сниженное содержание белков теплового шока в трансплантате сопровождалось значимым падением уровня БТШ70 в поврежденном миокарде, по сравнению с опытами на животных с трансплантацией суспензий клеток сердца с повышенным и базовым содержанием БТШ и контрольными опытами.

Тем не менее, показатели, характеризующие повреждение сердечной мышцы свидетельствуют о том, что снижение содержания БТШ в клетках трансплантата уменьшает, но не снимает полностью положительный эффект трансплантации клеток. Следовательно, в реализации защитных механизмов трансплантации суспензий сердечных клеток важную роль играют и другие механизмы, кроме экзогенных белков теплового шока. Для выяснения этого механизма необходимо исследование содержания в суспензиях клеток сердца веществ белковой природы, оказывающих регуляторное воздействие на поврежденный орган.

3.3. трансплантация суспензий клеток сердца неонатального кролика при повреждении сердца в условиях заблокированных внутриклеточных механизмов защиты миокарда Чтобы выяснить, какую роль в защите клеток поврежденного органа играют внутриклеточные защитные механизмы миокарда и экзогенные БТШ трансплантата, было важно отделить влияние этих двух механизмов. На данном этапе исследования было важно оценить влияние клеточного трансплантата на внутриклеточные механизмы защиты поврежденного органа в условиях системного подавления белкового синтеза в миокарде.

В миокарде животных опытной группы с подавленным синтезом белка (ОГЦ) содержание стресс-белков было ниже, чем у интактных животных в первые часы эксперимента (p 0,05) (рис. 3). Самый низкий уровень БТШ70 наблюдался к 3 часам наблюдения и составлял 0,89 (0,88–0,90) у.е., у интактных животных уровень БТШ70 составлял 1,00 (0,98–1,02) у.е.

Рис. 3 – Содержание БТШ70 в миокарде здоровых животных с подавленным синтезом белка.

Точка 3-го часа являлась исходной в нашем исследовании, поскольку в других опытных группах моделирование повреждения миокарда и ксенотрансплантация суспензий клеток сердца проводилась на фоне подавленного белкового синтеза.

Через 8 часов от исходной точки в миокарде животных данной группы содержание БТШ70 не изменилось и было ниже уровня стресс-белков у интактных животных, восстановление уровня БТШ70 произошло к 16 часам эксперимента и имело тенденцию к увеличению в последующие сроки исследования.

Предварительное подавление белкового синтеза с помощью циклогексимида у животных с адреналиновым повреждением миокарда существенно ухудшало течение данного процесса. Об этом свидетельствовали еще более низкий коэффициент отношения пируват/лактат и существенно менее выраженная активность ферментов ЛДГ1 и КК в миокарде во все сроки исследования, чем в контроле (адреналиновое повреждение миокарда) (p 0,05) (рис. 4, 5).

Рис. 4 – Динамика активности ЛДГ-1 (а) и соотношения пируват/лактат в миокарде экспериментальных животных при трансплантации суспензий клеток сердца в условиях подавленного синтеза белка: КГА – адреналиновое повреждение миокарда; ОГЦА – адреналиновое повреждение миокарда в условиях подавленного синтеза белка; ОГЦАТ – трансплантация суспензий немодифицированных клеток сердца при повреждении миокарда в условиях подавленного синтеза белка. Далее обозначения групп те же.

Рис. 5 – Динамика активности КК в миокарде экспериментальных животных при трансплантации суспензий клеток сердца в условиях подавленного синтеза белка.

В то же время трансплантация неонатальных клеток сердца животным на фоне предварительного подавления синтеза белка оказывала иной эффект. В этом случае выявлялась более высокая активность ферментов ЛДГ1 и КК в миокарде к 16 часам в сравнении с вышеуказанными группами (рис. 4, 5). В последующие сроки активность ферментов была ниже, чем в контроле, но выше, чем в аналогичной группе без трансплантации.

Кроме того, в миокарде животных с повреждением миокарда, как и следовало ожидать, циклогексимид блокировал синтез белков теплового шока, о чем свидетельствуют данные, приведенные на рисунке 6. На всех контрольных точках исследования уровень содержания стресс-белков в данной группе значимо ниже, чем в контроле. При трансплантации суспензий клеток сердца к 16 часам наблюдался больший уровень содержания БТШ70 в сравнении с аналогичной группой без трансплантации (p 0,05) (рис. 6), что свидетельствует о более ранней индукции защитных механизмов в миокарде животных этой группы.

Рис. 6 – Содержание БТШ70 в миокарде экспериментальных животных при трансплантации суспензий клеток сердца в условиях подавленного синтеза белка.

Установлено, что предварительное подавление синтеза белка приводило к более выраженному повреждающему действию адреналина на миокард, о чем свидетельствовали морфологические изменения в миокарде (рис. 7).

Так, площадь очагов некроза к 16 часам была значимо выше, а в последующие сроки имелась тенденция к дальнейшему увеличению некротического повреждения, которое к 72 часам сопровождалось существенно выраженным отеком миокардиальных волокон в сравнении с группой животных с адреналиновым повреждением миокарда (p 0,05).

Таким образом, полученные нами данные свидетельствуют о том, что в условиях предварительного подавления синтеза белка в клетках сердца введение адреналина сопровождалось значительным ухудшением патологического процесса в миокарде.

Важно отметить, что у экспериментальных животных с трансплантацией клеток определялись меньшие площадь повреждения и отек миокардиальных волокон, чем в сравниваемых группах (рис. 7). Наиболее существенно эти эффекты проявлялись через 72 часа от начала эксперимента, в этот срок площадь некроза в миокарде была на 15,4 %, а отек миокардиальных волокон – на 27,4% ниже, чем в группе без трансплантации (p 0,05).

Рис. 7 – Динамика изменения площади кардиомиоцитов (а) и площади очагов некроза (б) в миокарде экспериментальных животных при трансплантации суспензий клеток сердца в условиях подавленного синтеза белка.

Таким образом, трансплантация немодифицированных суспензий клеток сердца в условиях предварительного подавления белка сопровождалась более ранним восстановлением содержания БТШ70 (к 16-му часу эксперимента) до значений у интактных животных. Также при трансплантации суспензий клеток сердца в условиях подавленного белкового синтеза отмечались меньшая площадь некрозов и отек миокардиальных волокон, более сохранная активность ЛДГ1, в сравнении с группой без трансплантации.

ВыВоды

1. Инкубация суспензий клеток сердца неонатального кролика при повышенной температуре (42 °С) позволяет повысить уровень БТШ70 и БТШ72 в 2 раза.

Инкубация суспензии клеток сердца с добавлением в питательную среду антибиотика (mpicillin) снижает уровень БТШ70 и БТШ72 в 2,5 и 4,2 раза соответственно, по сравнению с базовым содержанием изучаемых белков.

2. Применение трансплантата с повышенным содержанием уровня БТШ (температурная модификация) снизило площадь очагов некроза в среднем на 10 % в сравнении с немодифицированным трансплантатом и опытами с введением клеток сердца с пониженным содержанием БТШ (модификация ампициллином) через трое суток от начала эксперимента. Кроме того, в опытах с температурной модификацией трансплантата отмечался меньший отек кардиомиоцитов в сравнении с адреналиновым повреждением миокарда (на 34,9 %; р 0,05).

3. Полученный кардиопротекторный эффект в группе с трансплантацией сердечных клеток с температурной модификацией был связан с более высоким уровнем накопления БТШ70 в миокарде животных через сутки от начала эксперимента, чем в других группах (в группе с температурной модификацией уровень БТШ70 составил 3,68 (3,58–3,75) у.е., в группе с базовым содержанием стресс-белков – 3,52 (3,41–3,57) у. е., с пониженным – 2,89 (2,79–2,95) у.е. (р 0,05)).

4. В группе с трансплантацией клеток сердца с повышенным содержанием белков теплового шока течение патологического процесса в сердце сопровождалось более высокой активностью ферментов в миокарде на третьи сутки:

активность ЛДГ1 была выше в сравнении с группами с базовым и пониженным содержанием белков теплового шока на 1,27 и на 0,85 мкмоль/мг белка в мин; активность КК была выше на 2,14 и 2,26 мкмоль/мг белка в мин, чем у отмеченных групп (р 0,05), и восстановлением соотношения пируват/лактат до нормальных значений, что не наблюдалось в сравниваемых группах.

5. Трансплантация немодифицированных суспензий клеток сердца в условиях предварительного подавления белкового синтеза (циклогексимид) у животных при повреждении сердца сопровождалась менее выраженной альтерацией миокарда к третьим суткам эксперимента, чем у животных без трансплантации (площадь некроза была на 15,4 % ниже, чем у животных без трансплантации (р 0,05)).

При этом активность ферментов в миокарде и уровень БТШ70 в нем были выше чем у животных сравниваемой группы уже к 16 часу наблюдения (ЛДГ1 – на 8,1 %, КК – на 30,3 %, БТШ70 – на 9,4 % соответственно (р 0,05)).

предложенИя И рекомендацИИ

1. Полученные результаты исследований можно использовать при написании учебников, учебных пособий и монографий. В учебном процессе на ветеринарных факультетах при изучении хирургии, терапии, анатомии, гистологии, морфологии и патофизиологии животных, а также в вузах при изучении циклов биологических наук.

2. Результаты исследований могут быть использованы в экспериментальной и ветеринарной практике для разработки способа коррекции ишемических и реперфузионных повреждений миокарда.

спИсок раБот, опуБлИкоВанных по теме дИссертацИИ

1. Изменение содержания белков теплового шока при трансплантации ксеногенных неонатальных клеток в условиях адреналинового миокардита / Б.К. Бадуев, А.А. Рунович, Ю.И. Пивоваров, Т.Е. Курильская, Г.Б. Боровский, В.К. Войников, А.С. Сергеева, И.В. Бабушкина // «Фундаментальные науки - биотехнологии и медицине»: матер. междунар. конф. – Новосибирск, 2006 – С. 67.

*2. ндогенная защита миокарда: роль белков теплового шока в механизмах прекондиционирования / И.В. Бабушкина, А.А. Рунович, Г.Б. Боровский, В.К. Войников и др. // Бюллетень Восточно-Сибирского научного центра СО РАМН. – 2006. – № 5. – С. 27–31.

3. Бабушкина И.В. Индукция синтеза белков теплового шока в суспензии неонатальных клеток сердца / И.В. Бабушкина, А.А. Рунович, Г.Б. Боровский, Т.Е. Курильская и др. // Материалы II съезда кардиологов Сибирского федерального округа. – Томск, 2007. – С. 13.

4. Влияние трансплантации ксеногенных неонатальных клеток на изменение содержания белков теплового шока при остром повреждении миокарда / Б.К. Бадуев, А. А. Рунович, Г.Б. Боровский, В.К. Войников, И.В. Бабушкина и др. // III международная конференция «Фундаментальные науки – медицине»: сб. тез.

науч-практ. конф. – Новосибирск, 2007 – С. 100.

5. Оценка влияния гипертермии и антибиотика на содержание белков теплового шока в суспензии неонатальных клеток / И.В. Бабушкина, Б.К. Бадуев, А.С. Сергеева, Г.Б. Боровский // международная конференция «Фундаментальные науки – медицине»: сб. тез. науч-практ. конф. – Новосибирск, 2007 – С. 99.

6. Влияние трансплантации ксеногенных неонатальных клеток сердца с измененным содержанием белков теплового шока на степень защиты поврежденного сердца / И.В. Бабушкина, Б.К. Бадуев, Г.Б. Боровский Т.Е. Курильская и др. // Сб. трудов ежегод. науч. конф. «Фундаментальные науки – медицине» и науч.-практ. конф. «Новые материалы и методы исследования». – Новосибирск, 2008 – С. 189–190.

7. Исследование роли БТШ при действии трансплантации на репаративные процессы в условиях патологии сердца и печени / В.К. Войников, Б.К. Бадуев, Г.Б.

Боровский, С.С. Голубев, И.В. Бабушкина и др. // Сб. трудов ежегод. науч. конф.

«Фундаментальные науки – медицине» и науч.-практ. конф. «Новые материалы и методы исследования». – Новосибирск, 2008. – С. 191–196.

*8. Влияние клеточной трансплантации на индукцию белков теплового шока в поврежденном сердце / Б.К. Бадуев, Г.Б. Боровский, В.К. Войников, С.С. Голубев, И.В. Бабушкина и др. // Клеточные технологии в биологии и медицине. – 2009. – № 3. – С. 149–153.

9. Роль белков теплового шока в адаптации миокарда к повреждению / И.В. Бабушкина, Т.Е. Курильская, Ю.И. Пивоваров, Г.Б. Боровский и др. // Всероссийская конференция «Устойчивость организмов к неблагоприятным факторам внешней среды»: мат. Всерос. науч. конф. – Иркутск, 2009. – С. 45–49.

10. Течение адреналинового миокардита в условиях трансплантации неонатальных клеток сердца с повышенным содержанием белков теплового шока / И.В. Бабушкина, Г.Б. Боровский, Т.Е. Курильская, Ю.И. Пивоваров и др. // Четвертая Всероссийская научно-практическая конференция с международным участием «Фундаментальные аспекты компенсаторно-приспособительных процессов»: сб. тез. науч-практ. конф. – Новосибирск, 2009. – С. 19–20.

*11. Воздействие модифицированного клеточного трансплантата на течение адреналинового повреждения миокарда / И.В. Бабушкина, Т.Е. Курильская, Ю.И. Пивоваров, Г.Б. Боровский и др. // Бюллетень Восточно-Сибирского научного центра СО РАМН. – 2010. – № 5 (75). – С. 217–221.

*12. Характер влияния клеточной трансплантации на течение патологического процесса в условиях подавления белкового синтеза в организме / И.В. Бабушкина, Т.Е. Курильская, Ю.И. Пивоваров, Г.Б. Боровский и др. // Бюллетень Восточно-Сибирского научного центра СО РАМН. – Иркутск. – 2010. – № 6 (76), Ч. 1. – С. 156–160.

Примечание: * – издания, рекомендованные ВАК для публикации результатов исследований

–  –  –




Похожие работы:

«Вайсвалавичене Валентина Юрьевна СТРУКТУРА СРЕДСТВ, МЕТОДОВ И УСЛОВИЙ РАЗВИТИЯ ДВИГАТЕЛЬНЫХ СПОСОБНОСТЕЙ У ДЕТЕЙ СТАРШЕГО ДОШКОЛЬНОГО ВОЗРАСТА 5-7 ЛЕТ 13.00.04 – теория и методика физического воспитания, спортивной тренировки, оздоровительной и адаптивной физической культуры АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата педагогических наук Москва – 2015 Диссертационная работа выполнена на кафедре теории и методики базовых видов физического воспитания...»

«ГРИГОРЬКИНА ЕВГЕНИЯ СЕРГЕЕВНА УЧЕТ ВОЗРАСТНЫХ ОСОБЕННОСТЕЙ ВЕРХНЕЧЕЛЮСТНОЙ ПАЗУХИ В ДИАГНОСТИКЕ И ЛЕЧЕНИИ СИНУСИТА Специальность 14.01.03 – болезни уха, горла и носа АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Пенза 2016 Работа выполнена на кафедре стоматологии Федерального государственного бюджетного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Пензенский государственный университет» Министерства Образования и науки...»

«Семенова Наталья Юрьевна МОРФОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ ИНТРАМЕДУЛЛЯРНЫХ СТРОМАЛЬНЫХ СТРУКТУР ГЕМОПОЭТИЧЕСКОЙ НИШИ И ЭЛЕМЕНТОВ ЛИМФОИДНОЙ СТРОМЫ ПРИ ХРОНИЧЕСКОМ ЛИМФОЛЕЙКОЗЕ 14.01.21 – гематология и переливание крови АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Санкт-Петербург Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном учреждении «Российский научно-исследовательский институт гематологии и трансфузиологии Федералного...»

«Каганович Евгения Николаевна ИССЛЕДОВАНИЕ РОЛИ ГЕНЕТИЧЕСКИХ ПОЛИМОРФИЗМОВ ЦИТОКИНОВ В РАЗВИТИИ ПРЕЭКЛАМПСИИ 03.02.07 – генетика АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Белгород – 2014 Работа выполнена в Федеральном государственном автономном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Белгородский государственный национальный исследовательский университет» Министерства образования и науки Российской Федерации...»

«Бондакова Марина Валерьевна РАЗРАБОТКА РЕЦЕПТУРЫ И ТЕХНОЛОГИИ ПРОИЗВОДСТВА КОСМЕТИЧЕСКИХ ИЗДЕЛИЙ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ЭКСТРАКТА ВИНОГРАДА Специальность 05.18.06 – Технология жиров, эфирных масел и парфюмерно-косметических продуктов (технические науки) АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата технических наук Москва – 2014 Работа выполнена на кафедре «Биотехнология и технология продуктов биоорганического синтеза» Федерального государственного бюджетного...»

«Подсвирова Ирина Александровна Микробиологический мониторинг патогенов гнойновоспалительных заболеваний в хирургических отделениях и отделении реанимации и интенсивной терапии в многопрофильном стационаре 03.02.03 – микробиология Автореферат диссертации на соискание учёной степени кандидата медицинских наук Москва — 2014 Работа выполнена в ГБОУ ВПО Ставропольский государственный медицинский университет Минздрава Российской Федерации Научные руководители: Миронов Андрей...»

«ДОБРЕНЬКОВ ДМИТРИЙ СЕРГЕЕВИЧ ХАРАКТЕРИСТИКА БИОЦЕНОТИЧЕСКИХ ОТНОШЕНИЙ БАКТЕРИАЛЬНЫХ СООБЩЕСТВ ПОЛОСТИ РТА И МИКРОЭКОЛОГИЧЕСКОЕ ОБОСНОВАНИЕ ПРИНЦИПОВ БИОКОРРЕКЦИИ 03.02.03 – Микробиология Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Волгоград Работа выполнена в Государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Волгоградский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения...»

«ТЕРНОВСКОЙ ГРИГОРИЙ ВАЛЕРЬЕВИЧ РАЗРАБОТКА ТЕХНОЛОГИЙ И АССОРТИМЕНТА ХЛЕБОБУЛОЧНЫХ ИЗДЕЛИЙ ПОВЫШЕННОЙ БИОЛОГИЧЕСКОЙ ЦЕННОСТИ И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОЙ СТОЙКОСТИ ДЛЯ ДИЕТОТЕРАПИИ ПРИ ХРОНИЧЕСКОЙ БОЛЕЗНИ ПОЧЕК Специальность 05.18.01 – Технология обработки, хранения и переработки злаковых, бобовых культур, крупяных продуктов, плодоовощной продукции и виноградарства АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата технических наук Москва – 2012 Работа выполнена в...»

«УДК 572 КАРАПЕТЯН Марина Кареновна АНТРОПОЛОГИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ МОРФОЛОГИЧЕСКОЙ ИЗМЕНЧИВОСТИ КОСТНОГО ПОЗВОНОЧНИКА (ПО МЕТРИЧЕСКИМ И ОСТЕОСКОПИЧЕСКИМ ДАННЫМ) 03.03.02 – «антропология» по биологическим наукам АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Москва – 2015 Работа выполнена в НИИ и Музее антропологии...»

«ЗАХАРОВА МАРИНА АЛЕКСАНДРОВНА ИССЛЕДОВАНИЕ СОДЕРЖАНИЯ НУКЛЕИНОВЫХ КИСЛОТ И ПОЛУЧЕНИЕ НИЗКОМОЛЕКУЛЯРНОЙ ДНК ИЗ ГОНАД ПРЕСНОВОДНЫХ РЫБ БАЙКАЛЬСКОГО РЕГИОНА Специальность 03.01.06 – Биотехнология (в том числе бионанотехнологии) АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Улан-Удэ – 2012 Работа выполнена на кафедре «Биотехнология» ФГБОУ ВПО «Восточно-Сибирский государственный университет технологий и управления» (ФГБОУ ВПО «ВСГУТУ») Доктор...»

«Десятова Олеся Александровна АГАРИКОИДНЫЕ БАЗИДИОМИЦЕТЫ ОРЕНБУРГСКОЙ ОБЛАСТИ Специальность 03.00.24 – «Микология» Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Москва 2008 Работа выполнена на кафедре микологии и альгологии Биологического факультета Московского государственного университета им. М.В. Ломоносова Научный руководитель доктор биологических наук,...»

«ДОРОНИН Игорь Владимирович Cистематика, филогения и распространение скальных ящериц надвидовых комплексов Darevskia (praticola), Darevskia (caucasica) и Darevskia (saxicola) 03.02.04 – зоология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Санкт-Петербург Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном учреждении науки Зоологическом институте Российской академии наук доктор биологических наук, заслуженный эколог РФ Научный...»

«Разумова Дина Владимировна МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЙ МОНИТОРИНГ В КОМПЛЕКСЕ МЕРОПРИЯТИЙ ПО ОБЕСПЕЧЕНИЮ ИНФЕКЦИОННОЙ БЕЗОПАСНОСТИ В МНОГОПРОФИЛЬНОМ СТАЦИОНАРЕ 03.02.03 – микробиология 14.02.02 – эпидемиология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Санкт-Петербург – 2015 Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном военном образовательном учреждение высшего профессионального образования «Военно-медицинская академия имени С.М. Кирова»...»

«Скородумова Любовь Олеговна АНАЛИЗ СТАТУСА ЭКСПРЕССИИ РАКОВО-ТЕСТИКУЛЯРНЫХ ГЕНОВ КАК МИШЕНЕЙ ДЛЯ ТЕРАПИИ И ПРОФИЛАКТИКИ ОНКОЛОГИЧЕСКИХ ЗАБОЛЕВАНИЙ Специальность 03.01.03 – молекулярная биология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук МОСКВА Работа выполнена в лаборатории генной терапии Федерального государственного бюджетного учреждения науки Института биологии гена Российской академии наук Научный Ларин Сергей Сергеевич, кандидат...»

«Авилова Екатерина Анатольевна Роль протеинкиназы PAK1 в регуляции роста эстрогензависимого и эстрогеннезависимого рака молочной железы Специальность 14.01.12 – онкология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Москва – 2015 Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном научном учреждении «Российский онкологический научный центр имени Н.Н.Блохина» (директор – д.м.н., проф., академик РАН М.И. Давыдов). Научный руководитель:...»

«Фирстова Виктория Валерьевна Экспериментально-иммунологическое обоснование выбора стратегии оценки поствакцинального иммунитета против чумы и туляремии 14.03.09 Клиническая иммунология, аллергология АВТОРЕФЕРАТ диссертация на соискание ученой степени доктора биологических наук Оболенск 2015 Работа выполнена в ФБУН «Государственный научный центр прикладной микробиологии и биотехнологии» Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека...»

«АСКАРОВ АЙБУЛАТ ДАМИРОВИЧ ОЦЕНКА СОСТОЯНИЯ И ЗАЩИТНЫХ ХАРАКТЕРИСТИК ДРЕВЕСНО-КУСТАРНИКОВЫХ НАСАЖДЕНИЙ В УСЛОВИЯХ Г. УФЫ ПРИ ДЕЙСТВИИ ИОНИЗИРУЮЩЕГО ИЗЛУЧЕНИЯ Специальности: 03.02.01. – Ботаника (биология), 03.02.08 – Экология (биология) Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Оренбург – 2015 Диссертационная работа выполнена на кафедре экологии и природопользования ФГБОУ ВПО «Башкирский государственный педагогический университет...»

«Овчинникова Зинаида Алексеевна ГИГИЕНИЧЕСКАЯ ОЦЕНКА ВЛИЯНИЯ УСЛОВИЙ ОБУЧЕНИЯ НА ЗДОРОВЬЕ ШКОЛЬНИКОВ МЕДИКО-БИОЛОГИЧЕСКИХ КЛАССОВ 14.02.01 – гигиена Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Москва 2015 Работа выполнена на кафедре гигиены государственного бюджетного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Российский национальный исследовательский медицинский университет им. Н. И. Пирогова» Минздрава России Научный...»

«Голиков Алексей Валентинович РАСПРОСТРАНЕНИЕ И РЕПРОДУКТИВНАЯ БИОЛОГИЯ ДЕСЯТИРУКИХ ГОЛОВОНОГИХ МОЛЛЮСКОВ (SEPIOLIDA, TEUTHIDA) В БАРЕНЦЕВОМ МОРЕ И ПРИЛЕГАЮЩИХ АКВАТОРИЯХ Специальность 03.02.04 – Зоология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Казань – 2014 Работа выполнена в ФГАОУ ВПО «Казанский (Приволжский) федеральный университет» (КФУ) и ФГУП «Полярный НИИ морского рыбного хозяйства и океанографии им. Н. М. Книповича» (ПИНРО, г....»

«ГРИГОРЬЕВА ЛЮДМИЛА ВИКТОРОВНА АГРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ ПОВЫШЕНИЯ ПРОДУКТИВНОСТИ ЯБЛОНИ В НАСАЖДЕНИЯХ ЦЧР РФ Специальность 06.01.08 – плодоводство, виноградарство АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание учёной степени доктора сельскохозяйственных наук Краснодар, 2015 Диссертационная работа выполнена в ФГБОУ ВО «Мичуринский государственный аграрный университет» Министерства сельского хозяйства РФ доктор сельскохозяйственных наук, профессор Научный консультант: Бобрович Лариса...»







 
2016 www.konf.x-pdf.ru - «Бесплатная электронная библиотека - Авторефераты, диссертации, конференции»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.