WWW.KONF.X-PDF.RU
БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА - Авторефераты, диссертации, конференции
 


Pages:   || 2 |

«Морфо-функциональные и молекулярно-биологические факторы прогноза рака желудка ...»

-- [ Страница 1 ] --

На правах рукописи

Гаганов Леонид Евгеньевич

Морфо-функциональные и молекулярно-биологические

факторы прогноза рака желудка

14.03.02 – патологическая анатомия

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени

доктора медицинских наук

Москва – 2014

Работа выполнена в государственном бюджетном учреждении

здравоохранения Московской области «Московский областной

научно-исследовательский клинический институт имени

М.Ф. Владимирского»

Научный консультант:

Казанцева Ирина Александровна доктор медицинских наук, профессор

Официальные оппоненты:

Делекторская Вера Владимировна, доктор медицинских наук, заведующая лабораторией гистохимии и электронной микроскопии отдела патологической анатомии опухолей человека ФГБУ «РОНЦ им. Н.Н. Блохина» РАМН Андреева Юлия Юрьевна, доктор медицинских наук, профессор кафедры патологической анатомии ГБОУ ДПО РМАПО Минздрава России Бабиченко Игорь Иванович, доктор медицинских наук, профессор, заведующий кафедрой патологической анатомии медицинского факультета ФГБОУ ВПО «Российский университет дружбы народов»

Ведущая организация: ГБОУ ВПО Российский национальный исследовательский медицинский университет имени Н.И. Пирогова Минздрава России (117997, г. Москва, ул. Островитянова, д. 1)

Защита диссертации состоится «26» июня 2014 года в 12.00 часов на заседании диссертационного совета Д 001.004.01 при ФГБУ «Научно-исследовательский институт морфологии человека» РАМН.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГБУ «Научноисследовательский институт морфологии человека» РАМН (117418, г. Москва, ул. Цюрупы, д. 3) или на сайте www.morfolhum.ru.

Автореферат разослан «______» ____________________ 2014 года.

Ученый секретарь диссертационного совета доктор медицинских наук Михайлова Лилия Петровна

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ДИССЕРТАЦИИ

Актуальность темы Рак желудка представляет собой гетерогенную группу опухолей с высоким злокачественным потенциалом и неблагоприятным прогнозом. Хотя доля рака желудка в структуре общей онкологической заболеваемости и смертности населения России за последние десятилетия сократилась (Чиссов В.И. и соавт., 1997;

Каприн А.Д. и соавт., 2014), эта проблема сохранила ряд не решенных вопросов, требующих дальнейшего углубленного изучения.

Противоречивы и малочисленны результаты исследований, посвященных изучению злокачественного потенциала рака желудка с различным функциональным иммунофенотипом по набору экспрессируемых муцинов (MUC) и гликопротеина CD10.

Недостаточны знания о закономерностях клеточного обновления карцином желудка, определяемых по показателям пролиферативной активности опухолевых клеток (индекс KI67 и митотический индекс), а также гибели клеток по типу апоптоза (апоптотический индекс).

Недостаточно изучены при раке желудка особенности иммуногистохимической экспрессии молекулярно-биологических маркеров, ассоциированных с опухолевым ростом (Е-кадхерина (ECAD), галектина-3 (GAL3), матриксных металлопротеиназ 2 и 3 типа (MMP2, MMP3), коллагена 4 типа (COL4), тенасцина-С (TN-С)).

Высказывается предположение о существовании зависимости злокачественного потенциала карциномы желудка от функционального иммунофенотипа опухолевых клеток, вместе с тем выводы авторов публикаций по этой проблеме неоднозначны (Wakatsuki K. et al., 2008; Krsti M. et al., 2008; Namikawa T. et al., 2010; Shin N. et al., 2011).

Прогностическая значимость митотического и апоптотического индексов при опухолевом росте проверена на достаточно большом числе наблюдений (Staunton M.J. et al., 1995; Лушников Е.Ф. и соавт., 2001), однако, подобные исследования, выполненные на материале карциномы желудка малочисленны и фрагментарны (Казанцева И.А., 1981; Saragoni L. et al., 2003), а сопоставления указанных показателей с иммунофенотипической характеристикой рака желудка не проводились.

Традиционно индекс пролиферации по KI67 предлагают использовать для рака желудка в качестве показателя потенциала злокачественности, расценивая высокие показатели иммуногистохимической экспрессии этого белка как неблагоприятный прогностический признак (Tzanakis N.E. 2009).

Вместе с тем, в ряде исследований показано, что в карциномах желудка прогностическая значимость этого маркера сомнительна (Joo Y.E. et al., 2006; Lazr D. et al., 2010; Roh J.H. et al., 2010 Lee H.E.

et al., 2010) и требует уточнения.

Полагают, что снижение экспрессии E-кадхерина и коллагена 4 типа сопровождается увеличением подвижности и миграционной способности клеток, являясь важными механизмами инвазии (Lazaris A. et al., 2003; Франк Г.А. и соавт., 2005; Chan A.O.O. et al., Zali M.R. et al., 2009; Кушлинский Н.Е. и соавт., 2010).

2006;

Повышение инвазивного потенциала опухолевых клеток в определенной степени может быть обусловлено нарушением экспрессии регуляторного белка галектина-3, уровнем экспрессии матриксных металлопротеиназ и изменением состояния гликопротеинов внеклеточного матрикса, в том числе тенасцина-C (Wiksten J.P. et al., 2003; Kim S.J. et al., 2010; Zhou Y. et al., 2010).

Высказывается предположение, что уровень и варианты иммуногистохимической экспрессии перечисленных маркеров могут иметь определенное значение для уточнения злокачественного потенциала рака желудка и прогноза (Bozzuto G. et al., 2010).

Размеры опухоли являются важной клинической характеристикой рака желудка, однако определение их при лучевом исследовании ограничено возможностями метода, в том числе и магнитно-резонансной томографии. Для более точной оценки протяженности раковой инфильтрации на этапе дооперационной диагностики мы посчитали необходимым провести сопоставление протяженности опухолевой инфильтрации при «проксимальных»

карциномах желудка гистологической стадии T2-T3, полученной методом магнитно-резонансной томографии, с подлинными размерами новообразования в операционном материале. В качестве объектов исследования выбраны карциномы кардиального отдела и дна желудка, как наиболее сложные для клинической диагностики (Derakhshan, M.H. et al., 2008).

Мы полагаем, что поиск дополнительных морфофункциональных и молекулярных маркеров биологической агрессивности опухоли с изучением их влияния на прогноз, а также уточнение распространенности опухоли на этапе дооперационной диагностики необходимы для повышения эффективности лечения рака желудка.

–  –  –

Совершенствование патоморфологической диагностики рака желудка на основе комплексной оценки злокачественного потенциала новообразования с разработкой дополнительных критериев прогноза.

–  –  –

1. Изучить закономерности иммуногистохимической экспрессии маркеров функциональной активности – муцинов MUC1, MUC2, MUC5АС, MUC6 и гликопротеина CD10 в неопухолевой слизистой оболочке и карциномах желудка и выделить иммунофенотипические варианты рака желудка, определив возможную взаимосвязь этих факторов с локализацией, гистологическим типом и глубиной инвазии опухоли.

2. На основе изучения скорректированной безрецидивной выживаемости больных раком желудка после радикальных операций оценить зависимость злокачественного потенциала карциномы от ее функционального иммунофенотипа.

3. Провести комплексную оценку пролиферативной активности опухолевых клеток рака желудка по индексу KI67 и митотической активности, а также выраженности гибели клеток по типу апоптоза в сравнении с неопухолевым эпителием желудка, определив возможную взаимосвязь их количественных показателей с морфофункциональной характеристикой карциномы и послеоперационной выживаемостью.

4. Изучить закономерности иммуногистохимической экспрессии молекулярно-биологических маркеров, ассоциированных с опухолевым ростом Е-кадхерина, галектина-3, коллагена 4 типа, тенасцина-С, матриксных металлопротеиназ 2 и 3 типа в эпителии неопухолевой слизистой оболочки желудка и клетках карциномы, определить их возможную взаимосвязь с морфо-функциональной характеристикой карциномы и послеоперационной выживаемостью.

5. Установить возможность использования функционального иммунофенотипа карциномы, показателей клеточного обновления и иммуногистохимической экспрессии перечисленных молекулярнобиологических маркеров в качестве независимых факторов прогноза при раке желудка.

6. Оценить объективность протяженности опухолевой инфильтрации при «проксимальном» раке желудка, полученной методом магнитно-резонансной томографии на этапе дооперационной диагностики и разработать методику, уточняющую размеры опухоли при карциномах этой локализации.

Научная новизна

Заключается в комплексном патоморфологическом и иммуногистохимическом исследовании показателей клеточного обновления, функциональных свойств и инвазивного потенциала опухолевых клеток, а также состояния внеклеточного матрикса карциномы желудка. Разработаны дополнительные морфофункциональные критерии злокачественного потенциала рака желудка, имеющие высокую прогностическую значимость. Уточнена протяженность опухолевой инфильтрации при дооперационной диагностике «проксимальных» карцином желудка.

Установлено, что функциональный иммунофенотип рака желудка, определяемый по иммуногистохимической экспрессии опухолевыми клетками муцинов MUC1, MUC2, MUC5АС, MUC6 и гликопротеина CD10, не связан с локализацией, гистологической стадией и гистологическим вариантом опухоли.

Показано, что карциномам смешанного иммунофенотипа свойственен более высокий злокачественный потенциал и худшая выживаемость, по сравнению с раками желудочного иммунофенотипа, что позволяет использовать функциональный иммунофенотип в качестве дополнительного фактора прогноза.

Установлено, что параметры клеточного обновления карциномы желудка, определяемые по совокупности митотического и апоптотического индексов, а также показатели индекса KI67 статистически значимо ассоциированы с гистологическим вариантом и функциональным иммунофенотипом опухоли. Предложен условный количественный «коэффициент клеточного обновления» (ККО) рака желудка, имеющий прогностическое значение.

Впервые в карциномах желудка изучена иммуногистохимическая экспрессия матриксной металлопротеиназы 3 типа и определено ее прогностическое значение, а также уточнено прогностическое значение галектина-3.

Показано, что количественные показатели иммуногистохимической экспрессии молекулярно-биологических маркеров инвазивного потенциала галектина-3, матриксных металлопротеиназ 2 и 3 типа статистически значимо ассоциированы только с гистологическим вариантом и функциональным иммунофенотипом рака желудка.

Перечисленные критерии, а также митотический и апоптотический индексы, «коэффициент клеточного обновления» и количественные показатели экспрессии E-кадхерина статистически значимо ассоциированы с выживаемостью и поэтому могут быть использованы в качестве независимых факторов прогноза.

На основании исследования операционного материала показано, что протяженность опухолевой инфильтрации при «проксимальном»

раке желудка гистологической стадии T2-T3, определяемая методом магнитно-резонансной томографии, превышает действительные размеры новообразования и нуждается в коррекции.

Теоретическая и практическая значимость Проведенное исследование подтвердило предположение о возможности влияния функционального иммунофенотипа опухолевых клеток на злокачественный потенциал рака желудка.

Внесен определенный вклад в изучение параметров клеточного обновления, а также иммуногистохимической экспрессии опухолевыми клетками ряда молекулярно-биологических маркеров, ассоциированных с опухолевым ростом, в карциномах этой локализации.

Показано, что злокачественный потенциал карциномы желудка обусловлен не только гистологическим вариантом и показателями пролиферативной активности опухолевых клеток, но и другими важными регуляторными механизмами: интенсивностью гибели клеток по типу апоптоза, морфо-функциональной дифференцировкой клеток опухоли и уровнем экспрессии белков и протеиназ, участвующих в межклеточных и клеточно-матриксных взаимодействиях. Комплексный анализ результатов позволил разработать дополнительные объективные количественные критерии индивидуального прогноза при раке желудка, доступные для применения в повседневной практике, что может быть использовано для оптимизации лечебной тактики.

Установлено, что индекс KI67 в раке желудка не имеет прогностического значения, что по всей вероятности объясняется неадекватностью этого показателя для оценки биологического потенциала опухолей, развивающихся в тканях с непрерывно обновляющимися клеточными популяциями, что присуще эпителию слизистой оболочки желудка, особенно шеек желез, с которыми гистогенетически связано большинство карцином этой локализации.

Даны практические рекомендации по уточнению протяженности опухолевой инфильтрации, выявляемой методом магнитнорезонансной томографии на этапе дооперационной диагностики «проксимальных» карцином желудка.

Методология и методы исследования

Заключалась в системном подходе и комплексном анализе научных трудов отечественных и зарубежных ученых в области патоморфологии, молекулярной биологии, хирургии, лучевой диагностики, которые занимались проблемой рака желудка и сформировали ряд морфо-функциональных моделей биологической агрессивности опухоли, разработали или усовершенствовали диагностические методики и прогностические схемы, проследили динамику заболеваемости и смертности. В исследовании использованы гистологический, иммуногистохимический, описательный, системно-структурный и статистический методы.

–  –  –

1. Иммунофенотипические варианты рака желудка, выделяемые по набору экспрессируемых муцинов, имеют различный злокачественный потенциал и не связаны с локализацией в желудке, гистологическим вариантом и глубиной инвазии опухоли.

Карциномам желудка смешанного иммунофенотипа, по сравнению с раком желудка желудочного иммунофенотипа свойственен более высокий злокачественный потенциал и худший прогноз.

2. Пролиферативный потенциал рака желудка может быть оценен по условному количественному показателю – «коэффициенту клеточного обновления» (ККО), равному соотношению митотического и апоптотического индексов.

3. Показатели коэффициента клеточного обновления, митотического и апоптотического индексов, а также иммуногистохимической экспрессии E-кадхерина, галектина-3, матриксных металлопротеиназ 2 и 3 типа в карциномах желудка статистически значимо ассоциированы с выживаемостью.

Признаками неблагоприятного прогноза являются: коэффициент клеточного обновления 0,7, митотический индекс 30‰, апоптотический индекс 40‰; 50% опухолевых клеток, иммунопозитивных к E-кадхерину и галектину-3, 40% – иммунопозитивных к матриксной металлопротеиназе 2 типа и 50% – к матриксной металлопротеиназе 3 типа.

4. Протяженность опухолевого инфильтрата, полученная при дооперационной диагностике «проксимального» рака желудка гистологической стадии T2-T3 методом магнитно-резонансной томографии, статистически значимо превышает подлинную протяженность, определяемую при патоморфологическом исследовании операционного материала и нуждается в коррекции с коэффициентом поправки, равным 0,4.

Достоверность и апробация результатов исследования

Основные результаты исследования обсуждались на научных и научно-практических форумах с участием ведущих специалистов и представлены в устных, постерных и интернет докладах на:

Республиканской научно-практической конференции (Беларусь, Витебск, 2010); XVI Российской гастроэнтерологической неделе (Москва, 2010, отмечен дипломом за 2 место в постерной сессии); III Всероссийской конференции по патологии клетки (Москва, 2010);

Всероссийской научной конференции (Стерлитамак, 2010); Заседании Московского областного общества патологоанатомов (Москва, 2010);

37 сессии ЦНИИ Гастроэнтерологии и XI съезде Научного общества гастроэнтерологов России (Москва, 2011, отмечен дипломом за 2 место в постерной сессии); II съезде патологоанатомов республики Беларусь (Гомель, 2011); Всероссийской научно-практической конференции с международным участием (Санкт-Петербург, 2011);

Межрегиональной научно-практической конференции (Ижевск, 2011); Международной заочной научно-практической конференции (Новосибирск, 2011); II заочной Международной научнопрактической конференции (Екатеринбург, 2011).

Результаты исследования внедрены в практическую работу патологоанатомических отделений ГБУЗ МО МОНИКИ им.

М.Ф. Владимирского, МБЛПУ «Лобненская центральная городская больница», МБУЗ «Долгопрудненская центральная городская больница», МБУЗ «Наро-Фоминская районная больница №1», а также в педагогический процесс кафедры лучевой диагностики ФУВ ГБУЗ МО МОНИКИ им. М. Ф. Владимирского и кафедры патологической анатомии ИПО ГБОУ ВПО Первый МГМУ им. И.М. Сеченова Минздрава России.

–  –  –

Результаты исследования отражены в 14 печатных работах, опубликованных в рецензируемых научных изданиях, рекомендованных ВАК РФ и 77 работах, опубликованных в зарубежных и отечественных монографиях, руководстве, журналах и сборниках материалов научных форумов.

–  –  –

Диссертация изложена на 308 страницах, состоит из введения, обзора литературы, описания материала и методов исследования, результатов собственных исследований, обсуждения, выводов, практических рекомендаций и заключения. Библиографический указатель включает 42 отечественных и 303 зарубежных источников.

Иллюстративный материал представлен 57 таблицами и 264 рисунками.

СОДЕРЖАНИЕ ДИССЕРТАЦИИ

–  –  –

Объектом исследования был текущий операционный материал удаленных желудков 55 пациентов оперированных по поводу рака.

Отбирали карциномы с железистой дифференцировкой, гистологической стадии T1-T3 (по системе TNM, 2011), удаленные в пределах здоровых тканей. Мужчин было 30 (55%), женщин – 25 (45%), соотношение полов – 1,2:1, возраст 27-71 год (в среднем – 57,3±7,6 лет), медиана – 58,0.

Операционный материал описывали в день операции, вырезали на следующий день после фиксации в 10% нейтральном забуференном формалине при pH 7,2-7,4, при этом кусочки, вырезанные для микроскопического исследования, фиксировали дополнительно еще на протяжении 12-24 часов. Проводку материала, заключение в парафин и приготовление гистологических препаратов, окрашенных гематоксилином и эозином и пикрофуксином по Ван Гизону, проводили по общепринятой методике (Меркулов Г.А., 1961).

Исследование проводили при увеличении микроскопа х20, х50, х100, х200, х400 и х1000.

Карциномы желудка и сопутствующие раку метапластические, диспластические и гиперпластические изменения неопухолевой слизистой оболочки выделяли согласно номенклатуре и критериям Гистологической классификации опухолей пищеварительной системы ВОЗ (Женева, 2010), а гистологическую стадию опухоли и метастазы в регионарные лимфатические узлы – TNM классификации злокачественных опухолей (7-я редакция). Оценивали тип роста карциномы, выраженность стромального опухолевого компонента, наличие сопутствующего склероза подслизистого слоя.

Выраженность атрофии неопухолевой слизистой оболочки желудка определяли по Российскому варианту визуально-аналоговой шкалы Международной классификации хронического гастрита (Аруин Л.И. и соавт., 2009). Оценку изменений проводили по участку с наиболее выраженными атрофическими изменениями.

Для иммуногистохимического исследования отбирали блоки с репрезентативными участками опухоли. Готовили серийные парафиновые срезы толщиной 5 мкм на 15-20 предметных стеклах.

Реакцию проводили пероксидазно-антипероксидазным методом по стандартному протоколу с применением моноклональных антител представленных в таблице 1, инкубацию с которыми проводили по методике Л.Е. Гуревич и соавт. (1999).

Таблица 1 Моноклональные антитела, используемые в исследовании Маркер Производитель Клон Разведение MUC1 Thermo Scientific Rabbit 1:100 MUC5AC NeoMarkers MS-145-P1 1:100 MUC6 Novocastra NCL-MUC6 1:50 MUC2 Novocastra NCL-MUC2 1:100 CD10 CellMarkers 56C6 1:75 KI67 DAKO MIB1 1:75 E-CAD CellMarkers EP700Y 1:50 GAL3 NeoMarkers Ab-1 (9C4) mouse MS-1756-S1 1:100 COL4 Thermo AB-3 1:50 TN-С NeoMarkers Ab-1 (T2H5) 1:25 MMP2 DBS A-Gel VC2 1:25 MMP3 Epitomics EP1186Y 1:100 На следующих этапах применяли KIT (EnVision, Mouse/Rabbit) и хромоген диаминобензидин фирмы DAKO, ядра клеток докрашивали гематоксилином Майера. Реакцию оценивали в опухолевых клетках и эпителии неопухолевой слизистой оболочки желудка, которую использовали так же в качестве позитивного контроля, а параллельные срезы с того же блока, применяя вместо антител буферный раствор – в качестве негативного контроля. Экспрессию маркеров оценивали по числу иммунопозитивных опухолевых клеток на 1000 учтенных в репрезентативных полях зрения при увеличении микроскопа х400, выраженному в промилле. Реакцию считали положительной при окрашивании 50‰ опухолевых клеток или единичных для CD10.

Для полуколичественной оценки иммуногистохимической экспрессии муцинов и CD10 карциномы условно подразделили на опухоли с высокой, умеренной и слабой иммунореактивностью. К первой группе относили карциномы с количеством иммунопозитивных к маркерам опухолевых клеток 50 но 250‰, ко второй – 250 и 500‰, к третьей – 500‰. Для оценки экспрессии E-CAD и GAL3 карциномы условно подразделяли на опухоли с пониженной и умеренной иммунореактивностью, при этом количество иммунопозитивных к этим маркерам опухолевых клеток было 500‰ в первой группе и 500‰ во второй. При оценке экспрессии MMP2 и MMP3 выделяли умеренную и повышенную иммунореактивность. Первая включала карциномы, в которых количество иммунопозитивных к MMP2 опухолевых клеток было 400‰, вторая – 400‰; к MMP3 соответственно – 500‰ и 500‰.

Экспрессию COL4 в карциномах желудка оценивали по отчетливой иммуногистохимической реакции этого белка в базальных мембранах эпителиальных структур, а TN-C компонентами внеклеточного матрикса.

Параметры клеточного обновления карцином желудка и внеопухолевой слизистой оболочки изучали по количественным показателям пролиферативной активности и клеточной гибели, используя методики определения митотического и апоптотического индексов (МИ и АИ), а также индекса KI67. Подсчет ядер меченых KI67, фигур митоза и апоптотических телец осуществляли при увеличении микроскопа х1000 с учетом не менее 1000 опухолевых клеток в максимальном количестве репрезентативных полей зрения.

Результат выражали в промилле. Как известно, апоптотический индекс, определяемый путем подсчета апоптотических телец в рутинных гистологических препаратах, окрашенных гематоксилином/эозином, статистически значимо положительно коррелирует с показателями индекса метки апоптотических клеток, идентифицируемых методом TUNEL (Shinohara T. et al., 1996;

Лушников Е.Ф. и соавт., 2001), который является оптимальным для этой цели (Цыган В.Н. и соавт., 2010) и достоверно ассоциирован с уровнем экспрессии ряда молекулярно-биологических маркеров апоптоза, в том числе каспазы-3 (Sohn J.H., 2000).

В качестве наиболее точного показателя выживаемости была использована скорректированная безрецидивная выживаемость. За стартовое событие принимали дату оперативного вмешательства, а за мониторируемое – дату диагностики рецидива или смерти от прогрессирования основного заболевания. Опрос пациентов проводили через 1, 3 и 4 года после операции, а в случае смерти больного – его родственника, при этом запрашивали протокол вскрытия. Пациенты, умершие в ближайшем послеоперационном периоде и/или от интеркуррентных заболеваний не учитывались.

В зависимости от локализации новообразования карциномы подразделяли на 3 группы: опухоли кардии, тела и пилорического отдела желудка, пользуясь анатомической номенклатурой Войленко В.Н. и соавт. (1965). Отдел желудка определяли по гистологическому строению слизистой оболочки, прилежащей к опухоли в соответствии с критериями монографии В.Л. Быкова (1997).

Для проведения сопоставлений протяженности опухолевой инфильтрации, полученной методом магнитно-резонансной томографии с данными патоморфологического исследования, карциномы кардии и дна желудка объединили в одну группу «проксимального» рака. Сопоставление проводили путем сличения протяженности ракового инфильтрата, выявленного указанным методом лучевой диагностики с топографической схемой внутристеночного роста опухоли, составленной в масштабе 1:1 после проведения гистологического исследования операционного материала (Патент RU 2140635 С1).

Статистическая обработка проведена методами описательной статистики, вариационной статистики и анализа таблиц сопряжнности. Вариационные ряды проверялись по методу Смирнова-Колмогорова. Непараметрические методы включали критерий Пирсона, U критерий Манна-Уитни и точный критерий Фишера; параметрические – t-тест и z-тест; корреляционный анализ – коэффициент ранговой корреляции Спирмена; анализ выживаемости

– метод Каплан-Мейера (лог-ранговый критерий). Уровень статистической значимости различий принят равным 0,05.

Результаты исследования и их обсуждение

Исследование начато с изучения иммуногистохимической экспрессии молекулярно-биологических маркеров функциональной активности опухолевых клеток карцином желудка и эпителия внеопухолевой слизистой оболочки.

Установлено, что MUC1 экспрессируют покровно-ямочный эпителий всех анатомических отделов желудка, париетальные и главные клетки желез тела; MUC5AC – покровно-ямочный эпителий кардии и тела; MUC6 – эпителий пилорических, кардиальных желез и эпителий шеек желез всех анатомических отделов. Эти муцины, а также MUC2 и CD10 экспрессировал эпителий очагов кишечной метаплазии, при этом бокаловидные клетки экспрессировали MUC2, MUC5AC и MUC6, цилиндрические – MUC1, MUC2, MUC5AC и MUC6, каемчатые энтероциты – MUC1 и CD10.

В зависимости от типа эпителия встречались 5 вариантов экспрессии: апикальная (свойственная и MUC1 CD10), цитоплазматическая (MUC1 и MUC6), мембранная (MUC2), апикально-цитоплазматическая (MUC1) и мембранноцитоплазматическая (MUC1, MUC2 и MUC5AC). Кишечная метаплазия и интраэпителиальная неоплазия в ряде случаев сопровождалась изменением варианта экспрессии части маркеров, при этом экспрессия MUC6 и CD10 не изменялась, что в целом согласуется с данными D. Lazr et al. (2011).

В аденокарциномах (АК) низкой степени злокачественности (НСЗ), как правило, выявлялась апикальная и апикальноцитоплазматическая экспрессия MUC1 и CD10, в аденокарциномах высокой степени злокачественности (ВСЗ) и слабо когезивных карциномах – цитоплазматическая и мембранно-цитоплазматическая, гораздо реже – мембранная экспрессия. В смешанных раках встречались все перечисленные варианты экспрессии. Экспрессия MUC2, MUC5AC, MUC6 во всех гистологических типах рака, как правило, была цитоплазматической, редко – мембранной или мембранно-цитоплазматической.

Частота экспрессии не зависела от локализации, гистологической стадии и гистологического варианта опухоли, при этом иммунореактивность карцином была выше к желудочным маркерам (MUC1, MUC5AC, MUC6) и ниже – к кишечным (MUC2, CD10). В слабо когезивных, смешанных карциномах и аденокарциномах высокой степени злокачественности содержание иммунопозитивных опухолевых клеток было ниже, чем в слизистой, папиллярных и тубулярных аденокарциномах низкой степени злокачественности.

В зависимости от набора экспрессируемых муцинов и CD10 опухоли разделены на карциномы с желудочным, кишечным и смешанным функциональным иммунофенотипом. К желудочному иммунофенотипу нами отнесены карциномы, опухолевые клетки которых экспрессировали MUC1, MUC5АС и MUC6, к кишечному иммунофенотипу – MUC2 и CD10, смешанному иммунофенотипу – все перечисленные маркеры в различных сочетаниях (Рисунок 1).

Рис. 1 – Принцип классифицирования карцином желудка на иммунофенотипы по набору экспрессируемых муцинов и CD10.

Карциномы желудочного иммунофенотипа составили 56% наблюдений, кишечного – 4% случаев, смешанного – 40%, что согласуется с данными Y.Wu et al. (2009), W.G.Kim et al. (2011), D.Lazr et al. (2011), N.Shin et al. (2011).

Мы не обнаружили достоверной зависимости функционального иммунофенотипа рака желудка от возраста и пола пациентов, а также от локализации, гистологической стадии и гистологического варианта карциномы, что соотносится с результатами исследований M.M.Tian et al. (2007), однако отчасти противоречит выводам V.Barresi et al.

(2006) и L.Xue et al. (2011).

Учитывая высказанное рядом исследователей предположение о существовании зависимости злокачественного потенциала карциномы желудка от функционального иммунофенотипа ее

–  –  –

проведено исследование пролиферативной активности опухолевых клеток и выраженности клеточного отсева, которые мы исследовали по показателям митотического и апоптотического индексов, а так же индекса KI67. Установлено, что количественные показатели клеточного обновления в карциномах желудка значительно варьируют, при этом достоверной корреляции между величинами индекса KI67, митотического и апоптотического индексов мы не выявили.

Значения перечисленных показателей были сгруппированы в зависимости от локализации, гистологической стадии, гистологического варианта и функционального иммунофенотипа карциномы, при этом достоверные различия были обнаружены только между группами опухолей, различающихся по гистологическому варианту и иммунофенотипическим особенностям.

Установлено, что наиболее высокие показатели индекса Ki67 были свойственны слабо когезивным, смешанным карциномам и тубулярным аденокарциномам высокой степени злокачественности, низкие – слизистой карциноме, папиллярным и тубулярным аденокарциномам низкой степени злокачественности. Высокие значения митотического индекса были свойственны тубулярным аденокарциномам низкой и высокой степени злокачественности и смешанным карциномам, низкие – слизистой карциноме, папиллярным аденокарциномам и слабо когезивным карциномам.

Высокие показатели индекса апоптоза выявлены в папиллярных и тубулярных аденокарциномах низкой степени злокачественности, низкие – в смешанных и слабо когезивных карциномах, слизистой карциноме и тубулярных аденокарциномах высокой степени злокачественности. Полученные результаты в целом согласуется с данными И.А.Казанцевой (1981), Е.Ф.Лушникова и соавт. (2001), L.Saragoni et al. (2003) и D.Lazr, et al. (2010).

Похожая закономерность нами выявлена и в различных функциональных иммунофенотипах рака желудка: в карциномах с желудочным иммунофенотипом показатели митотического и апоптотического индексов и индекса KI67, как правило, были выше, чем в раках со смешанным иммунофенотипом, что частично соотносятся с данными M.Matsuoka et al. (2003), M.Yamagishi et al. (2004), R.Aoki et al. (2007) и T.Sugai et al. (2010), при этом, данных об исследованиях индекса апоптоза в различных иммунофенотипах рака желудка нами обнаружено не было.

Для объективной оценки соотношения долей пролиферирующих и гибнущих опухолевых клеток в карциноме желудка в исследование введен условный обобщающий количественный показатель – «коэффициент клеточного обновления» (ККО) опухоли, вычисляемый по формуле:

ККО= МИ, где МИ – митотический индекс, АИ – индекс апоптоза.

АИ Как показало исследование, величина ККО варьировала от 0,2 до 2,5, составляя в среднем 1,06±0,48, Me – 1,0 (0,6;1,3) при этом статистически значимые различия в значениях этого показателя нами были обнаружены только между опухолями, различающимися по гистологической структуре и иммунофенотипическим особенностям.

Высокие значения ККО были свойственны смешанным, слабо когезивным карциномам и тубулярным аденокарциномам высокой степени злокачественности, при этом ККО этих опухолей был статистически значимо выше, чем ККО папиллярных, тубулярных аденокарцином низкой степени злокачественности и слизистой карциномы (Таблица 2).

Индексы клеточной кинетики и условный «коэффициент Таблица 2 клеточного обновления» Me (QL;QU) Гистологический МИ (‰) АИ (‰) ККО Индекс KI67 (%) вариант карциномы Папиллярная АК 23,2 (11,2;31,0) 24,0 (17,1;33,9) 54,0 (47,0;57,0) 0,5 (0,4;0,5) Тубулярная АК НСЗ 28,8 (16,5;30,9) 36,1 (28,3;44,9) 45,5 (37,5;49,5) 0,8 (0,6;0,8) Тубулярная АК ВСЗ 44,6 (36,6;51,6) 43,5 (38,2;48,8) 35,5 (33,5;38,5) 1,25 (1,0;1,5) Слабо когезивная 30,6 (21,1;35,6) 22,2 (17,3;29,3) 22,7 (16,3;33,7) 1,3 (1,0;1,5) Смешанная 43,0 (19,2;64,9) 38,7 (31,1;44,6) 33,5 (26,5;44,5) 1,2 (0,7;1,3) Слизистая 17,3 (17,0;17,0) 17,0 (17,0;17,0) 35,0 (35,0;35,0) 0,5 (0,5;0,5) Иммунофенотип карциномы Желудочный 41,5 (26,8;54,9) 39,6 (34,1;46,9) 48,9 (22,6;58,4) 0,8 (0,6;1,2) Кишечный 21,4 (17,0;25,8) 19,5 (15,3;23,7) 36,5 (29,3;43,7) 0,7 (0,4;0,9) Смешанный 33,7 (19,2;48,8) 32,7 (25,5;42,5) 34,3 (19,5;36,5) 1,3 (0,8;1,5) Таким образом, несмотря на высокую пролиферативную активность, наблюдаемую в высокодифференцированных карциномах желудка, интенсивность обновления/прироста опухолевых клеток статистически значимо выше в менее дифференцированных раках, что объясняется меньшей выраженностью апоптоза.

Группировка карцином в зависимости от функционального иммунофенотипа выявила достоверно более высокие показатели клеточного обновления/прироста в карциномах со смешанным иммунофенотипом, по сравнению с желудочным, т.е. смешанный иммунофенотип рака желудка, вероятно, обладает более высоким злокачественным потенциалом, по сравнению с желудочным.

Как известно, в настоящее время рядом исследователей предлагается использовать индекс KI67 в качестве основного и даже единственного критерия при построении прогностической схемы и у больных раком желудка, традиционно расценивая высокие показатели этого маркера как неблагоприятный прогностический признак (Tzanakis N.E. et al., 2009). Вместе с тем, как показано в ряде работ диагностическая и прогностическая ценность этого показателя в карциномах желудка вызывает сомнение (Lazr D. et al., 2010;

Lee H. et al., 2010).

Мы провели сопоставление показателей пролиферативной активности опухолевых клеток рака желудка, определяемой по индексу KI67 с данными выживаемости и не обнаружили статистически значимых различий в значениях этого критерия, выявляемых в группах живых и умерших на момент мониторирования. Этот результат согласуется с данными Y.E.Joo et al. (2006), J.H.Roh et al. (2010), C.A.Arciero et al. (2010), H.E.Lee et al. (2010) и D.Lazr et al. (2010). Вместе с тем, следует отметить, что в целом в группе живых пациентов значения индекса KI67 были несколько ниже, чем в группе умерших.

Кроме того, исследование выявило статистически значимые различия в показателях индекса KI67 между карциномами желудка, сгруппированными в зависимости от функционального иммунофенотипа, при этом его значения имели обратную связь с показателями выживаемости. В карциномах с желудочным иммунофенотипом, имеющих лучший прогноз, показатели экспрессии этого белка были статистически значимо выше, чем в опухолях со смешанным иммунофенотипом, прогностически менее благоприятных, что согласуется с данными M.Matsuoka et al. (2003), M.Yamagishi et al. (2004), R.Aoki et al. (2007), T.Sugai et al. (2010).

Наше исследование показало, что показатели пролиферации карциномы, определяемые только по экспрессии KI67 в раке желудка, не могут считаться достаточными прогностическими критериями. Это по всей вероятности объясняется неадекватностью этого показателя для оценки злокачественного потенциала опухолей, развившихся в тканях с постоянно обновляющимися клеточными популяциями, что свойственно эпителию слизистой оболочки желудка, особенно шеек желез, с которыми гистогенетически ассоциировано большинство карцином этой локализации.

Аналогичное сопоставление с выживаемостью проведено и для митотического и апоптотического индексов, которое показало, что в группе живых на момент мониторирования пациентов значения первого были статистически значимо ниже, а второго – выше, чем в группе умерших, что в целом соотносится с результатами M.J.Staunton et al. (1995). Среди пациентов, в карциномах которых митотический индекс был 30‰ (повышенная митотическая активность), выживаемость составила 4%, медиана выживаемости – 18 мес., 30‰ (умеренная митотическая активность) – 43%, медиана выживаемости – 26 мес. У пациентов с карциномами, имеющими апоптотический индекс 40‰ (повышенная выраженность апоптоза), выживаемость составила 38%, медиана выживаемости – 29 месяцев, 40‰ (умеренная выраженность апоптоза) – 5% и 16 мес.

соответственно (Рисунок 3 и 4).

–  –  –

дифференцированных карциномах количество иммунопозитивных к E-CAD опухолевых клеток имело тенденцию к увеличению, по сравнению с менее дифференцированными раками. Эти результаты согласуются с данными H.Zhang et al. (2004) и Y.Zhou et al. (2010).

Аналогичное сопоставление, проведенное с GAL3, выявило статистически значимые различия между карциномами в зависимости от морфологии и функциональной характеристики. В папиллярных, тубулярных аденокарциномах низкой степени злокачественности и слизистой карциноме количество иммунопозитивных к GAL3 опухолевых клеток было выше, чем в тубулярных аденокарциномах высокой степени злокачественности, смешанных и слабо когезивных карциномах, что согласуется с результатами исследований R.Lotan et al. (1994), T.Shimamura et al. (2002), J.Miyazaki et al. (2002), W.G.Dong et al. (2008) и K.Okada et al. (2009).

При разделении рака желудка по функциональному иммунофенотипу нами было установлено, что в карциномах с желудочным иммунофенотипом количество иммунопозитивных клеток к E-CAD и GAL3 было выше, чем в раках со смешанным иммунофенотипом, причем для GAL3 эти различия были статистически значимыми. Полученные результаты трудно сопоставимы с немногочисленными публикациями о связи экспрессии E-CAD и функциональной характеристикой рака желудка.

Аналогичных исследований с GAL3 не проводилось. В одном из исследований не было выявлено ассоциации между иммунореактивностью опухолевых клеток к и E-CAD функциональным иммунофенотипом (Sun G.Y. et al., 2012), в другом

– была обнаружена более высокая иммунореактивность карцином с желудочным иммунофенотипом, по сравнению с кишечным (Motoshita J. et al., 2006).

В связи с отсутствием статистически значимой связи между иммунореактивностью к E-CAD и морфо-функциональной характеристикой рака желудка, мы посчитали необходимым провести поиск возможной ассоциации последней с морфологическими типами экспрессии этой адгезивной молекулы. Установлено, что в папиллярных и тубулярных аденокарциномах низкой степени злокачественности достоверно чаще выявлялась мембранная экспрессия E-CAD, а в слабо когезивных, смешанных карциномах и аденокарциномах высокой степени злокачественности – аномальная (мембранно-цитоплазматическая или цитоплазматическая), что согласуется с данными D.Lazr et al. (2008), M.R.Zali et al. (2009) и Y.Zhou et al. (2010).

Группировка наблюдений в зависимости от функционального иммунофенотипа рака желудка выявила достоверные различия морфологического типа иммуногистохимической экспрессии E-CAD между карциномами с желудочным и смешанным иммунофенотипом, при этом в первых чаще выявлялась мембранная экспрессия этого белка, в последних – аномальная. Полученные результаты трудно сопоставимы с одной имеющейся публикацией о более частой аномальной экспрессии E-CAD в карциномах со смешанным иммунофенотипом, по сравнению с кишечным (Morohara K. et al., 2006).

Аналогичное сопоставление было проведено и для GAL3, при этом статистически значимой связи между вариантами экспрессии этого белка и морфо-функциональной характеристикой рака желудка нами обнаружено не было, что согласуется с данными S.E.Baldus et al (2000).

Для уточнения возможного влияния различий в иммуногистохимической экспрессии E-CAD и GAL3 на прогноз рака желудка мы сопоставили количественные показатели экспрессии этих маркеров с данными выживаемости. Установлено, что в карциномах живых на момент мониторирования пациентов число иммунопозитивных к E-CAD и GAL3 опухолевых клеток было достоверно выше, чем в группе умерших, при этом неблагоприятный прогноз отмечался у больных, в карциномах которых количество иммунопозитивных к E-CAD и GAL3 опухолевых клеток было 500‰ (50%).

В частности, при количестве иммунопозитивных к E-CAD опухолевых клеток 500‰ (умеренная иммунореактивность), выживаемость составила 37%, медиана выживаемости – 26 мес., 500‰ (пониженная иммунореактивность) выживаемость – 0%, медиана – 13 мес. При количестве иммунопозитивных к GAL3 опухолевых клеток 500‰ (умеренная иммунореактивность) выживаемость составила 36%, медиана – 29 мес., ниже указанного значения (пониженная иммунореактивность) выживаемость – 9% и 17 мес. соответственно (Рисунок 6 и 7).

Рис. 6 – Выживаемость в зависимости Рис. 7 – Выживаемость в зависимости от от иммунореактивности к E-кадхерину иммунореактивности к галектину-3 (p0,05). (p0,05).

Полученные результаты в целом согласуется с данными J. Miyazaki et al. (2002), K. Okada et al. (2006), M.R. Zali et al. (2009) и T. Cheong et al. (2010) и X. Xing et al. (2013). Таким образом, мы согласны с R.Aoki et al. (2007), Y.Zhou et al. (2010), X.Xing et al.

(2013) и G.Corso et al. (2013), которые предложили использовать количественные показатели иммунореактивности опухолевых клеток к E-CAD и GAL3 в качестве дополнительных факторов прогноза при раке желудка.

Исследование выживаемости в группах пациентов, карциномы которых различались по морфологическому типу экспрессии E-CAD, не выявило прогностической ценности этого критерия. Мы не можем согласиться с данными D. Lazr et al. (2008) и M.R. Zali et al. (2009), которые обнаружили зависимость худшего прогноза рака желудка от аномальной экспрессии E-CAD.

Как известно, мембранная иммуногистохимическая экспрессия E-CAD более свойственна карциномам высокой степени дифференцировки и традиционно считается благоприятным прогностическим признаком. Вместе с тем, высказано предположение, что в карциномах желудка экспрессия E-CAD сопровождается нарушением адгезивных свойств этого белка, в том числе и при мембранном варианте экспрессии. Полагают, что это обусловлено точечными мутациями или частичным метилированием e-cad, а также может быть связанно с гиперэкспрессией опухолевыми клетками MUC1 и MUC2 (Zhang H.K. et al., 2004; Zali M.R. et al., 2009), которые принимают участие в регуляции межклеточной и клеточно-матриксной адгезии, блокируя, в том числе, формирование комплекса E-CAD–CAT- (Wesseling J. et al., 1996; Yamamoto M.

et al., 1997; Kondo K. et al., 1998; Rakha E.A. et al., 2005; Ohno T. et al., 2006).

Эти данные помогают понять, почему частая мембранная экспрессия E-CAD в раке желудка со смешанным иммунофенотипом сочетается с более высоким злокачественным потенциалом этих опухолей, по сравнению с карциномами с желудочным иммунофенотипом, в которых мембранная экспрессия E-CAD нами выявлялась реже. Мы предположили, что наличие мембранной иммуногистохимической экспрессии опухолевыми клетками E-CAD не может считаться достоверным и достаточным признаком лучшего прогноза рака желудка.

Таким образом, мы полагаем, что иммуногистохимическая экспрессия молекулярных маркеров E-CAD и GAL3 может служить достоверным критерием потенциала злокачественности рака желудка, а ее количественные показатели могут быть использованы в алгоритме построения прогноза. Кроме того, иммунореактивность к GAL3 и тип экспрессии E-CAD ассоциированы со структурной и функциональной характеристикой опухоли, при этом значимость мембранной иммуногистохимической экспрессии E-CAD, как благоприятного прогностического признака, по-видимому, переоценена.

В качестве предположительных маркеров инвазивного потенциала рака желудка, нами была исследована иммуногистохимическая экспрессия коллагена 4 типа базальных мембран и тенасцина-C, которую мы обнаружили в 38% и 89% наблюдений соответственно. По данным литературы экспрессия COL4 была выявлена в 46% наблюдений (Wang Z.N. et al., 2000), а TN-C – в 30-70% случаев (Yano S. et al., 1993; Zirbes T.K. et al., 1999;

Wiksten J.P. et al., 2003; Juuti A. et al., 2004; Франк Г.А. с соавт., 2005).

Иммуногистохимическая экспрессия COL4 базальных мембран вокруг эпителиальных структур карциномы была непрерывной, прерывистой или не выявлялась, что, по-видимому, отражает разную степень снижения дифференцировки железистого эпителия. В высоко дифференцированных карциномах базальные мембраны, как правило, выявлялись, хотя были фрагментированными, а в низкодифференцированных раках – практически отсутствовали, что согласуется с данными Z.N.Wang et al. (2000). Мы не обнаружили зависимости между способностью карциномы строить базальные мембраны, локализацией, гистологической стадией опухоли и ее функциональным иммунофенотипом. Кроме того, экспрессия TN-C внеклеточного матрикса в нашем материале не зависела от локализации, гистологической стадии и морфо-функциональных показателей карциномы, что согласуется с данными B.Sis et al. (2004).

Анализ выживаемости в группах пациентов, сформированных в зависимости от показателей экспрессии TN-C внеклеточного матрикса, не обнаружил достоверных различий, однако при карциномах, экспрессирующих TN-C, выживаемость была несколько ниже, чем при отсутствии экспрессии этого белка. Полученный результат согласуется с данными большинства исследований (Zirbes T.K. et al., 1999; Sis B. et al., 2004), имеется лишь одно сообщение о лучшей выживаемости при высоких показателях экспрессии этого маркера (Wiksten J.P. et al., 2003).

Аналогичные результаты были получены нами и при изучении возможного прогностического значения показателей экспрессии COL4 базальных мембран. Вместе с тем, нельзя не отметить, что выживаемость была несколько выше при карциномах, в которых экспрессия COL4 базальных мембран была непрерывной, что не противоречит данным тех авторов, которые выявили достоверную корреляцию между низким уровнем экспрессии COL4 и высоким инвазивно-метастатическим потенциалом опухоли (Lazaris A. et al., 2003; Ando H. et al., 2009; Кушлинский Н.Е. и соавт., 2010).

Таким образом, мы пришли к заключению, что способность карциномы строить базальные мембраны, ассоциирована только с гистологическим вариантом опухоли, а иммуногистохимическая экспрессия TN-C внеклеточного матрикса не ассоциирована ни с одним из исследованных морфо-функциональных параметров, а также выживаемостью. По-видимому, в раке желудка показатели иммуногистохимической экспрессии COL4 базальных мембран и TNC имеют низкую прогностическую ценность.

Другими возможными молекулярными маркерами инвазивного потенциала рака желудка были матриксные металлопротеиназы 2 и 3 типа. Как известно, это тканевые протеиназы, разрушающие белковые компоненты внеклеточного матрикса и принимающие участие в механизмах регуляции морфогенеза, репарации тканей и ангиогенеза.

Основным субстратом для MMP2 является коллаген 4 типа, галектинжелатин, эластин и фибронектин, а для MMP3 – коллаген 4 типа, тенасцин-C и ряд протеогликанов.

Иммуногистохимическая экспрессия MMP2 и MMP3 была обнаружена нами в 53% и 93% карцином. По данным литературы экспрессия MMP2 была выявлена в 50,5-70% наблюдений рака желудка (Wu Z.Y. et al., 2006; He Q. et al., 2007; Зенюков А.С. и соавт., 2010), при этом сообщений об изучении экспрессии MMP3 в карциномах желудка нам не встретилось.

В опухолевых клетках выявлялась цитоплазматическая экспрессия MMP2, что соответствует данным He Q. et al. (2007), экспрессия MMP3 была цитоплазматической, мембранной и мембранно-цитоплазматической.

Сравнение показателей иммуногистохимической экспрессии MMP2 и MMP3 в карциномах, различающихся по локализации, гистологической стадии, гистологическому варианту и функциональному иммунофенотипу, выявило статистически значимые различия только в зависимости от морфо-функциональной характеристики опухоли.

В папиллярных и тубулярных аденокарциномах количество иммунопозитивных к MMP2 и MMP3 клеток было достоверно выше, чем в смешанных и слабо когезивных карциномах, что согласуются с данными G.Feng et al. (2000) и L.Y.Lee et al. (2008). Следует отметить, что в слизистой карциноме иммуногистохимическая экспрессия MMP2 нами не выявлена.

В карциномах со смешанным иммунофенотипом количество иммунопозитивных клеток к MMP2 и MMP3 было достоверно выше, чем в раке с желудочным иммунофенотипом. Следует подчеркнуть, что сведения о сопоставлении показателей иммуногистохимической экспрессии и с иммунофенотипической MMP2 MMP3 характеристикой рака желудка противоречивы и малочисленны (Mrena J. et al., 2006; Wu Z.Y. et al., 2006; He Q. et al., 2007; Zhou Y.

et al., 2010), а изучение MMP3 в раках этой локализации не проводилось.



Pages:   || 2 |

Похожие работы:

«УДК 597.5:639.216.1(261)(268) МЕЛЬНИКОВ Сергей Петрович ОКУНЬ-КЛЮВАЧ SEBASTES MENTELLA АТЛАНТИЧЕСКОГО И СЕВЕРНОГО ЛЕДОВИТОГО ОКЕАНОВ (ПОПУЛЯЦИОННАЯ СТРУКТУРА, БИОЛОГИЯ, ПРОМЫСЕЛ) Специальность: 03.02.06 – ихтиология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук МОСКВА – 2013 Работа выполнена во Всероссийском научно-исследовательском институте рыбного хозяйства и океанографии (ФГУП «ВНИРО») Научный консультант: доктор биологических наук Булатов...»

«ПЕТРОВ ВАДИМ ВИТАЛЬЕВИЧ КЛЕТКИ И КРОВЕНОСНЫЕ СОСУДЫ ДЕРМЫ ЧЕЛОВЕКА В ОНТОГЕНЕЗЕ 03.03.04 – клеточная биология, цитология, гистология Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Казань – 2015 Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Чувашский государственный университет имени И.Н. Ульянова» Научный руководитель: доктор медицинских наук, профессор Гунин Андрей...»

«Бирюкова Лидия Игоревна Диагностика, клинико-морфологическая характеристика и лечение накожного папилломатоза и дерматоза внутренней поверхности ушной раковины у лошадей 06.02.04 – ветеринарная хирургия Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук Москва 2015 Работа выполнена в ФГБОУ ВО «Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии МВА имени К.И. Скрябина» Научный руководитель: Сотникова Лариса Федоровна, доктор...»

«ЗЕМЛЕМЕРОВА ЕЛЕНА ДМИТРИЕВНА МОЛЕКУЛЯРНАЯ ФИЛОГЕНИЯ И ФИЛОГЕОГРАФИЯ КРОТОВ ТРИБЫ TALPINI (MAMMALIA: TALPIDAE) 03.02.04 – зоология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Москва – 2015 Работа выполнена на кафедре зоологии позвоночных биологического факультета Московского государственного университета имени М.В.Ломоносова Научный руководитель: кандидат биологических наук Банникова Анна Андреевна Официальные оппоненты: доктор...»

«ЩЕПИТОВА НАТАЛЬЯ ЕВГЕНЬЕВНА БИОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА ФЕКАЛЬНЫХ ИЗОЛЯТОВ ЭНТЕРОКОККОВ, ВЫДЕЛЕННЫХ ОТ ЖИВОТНЫХ 06.02.02 – ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Уфа –2015 Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Оренбургский государственный аграрный...»

«ВАХРОМЕЕВА Ксения Александровна ПОЛИМОРФНЫЕ ГЕНЕТИЧЕСКИЕ МАРКЕРЫ САХАРНОГО ДИАБЕТА 2-го ТИПА И ИХ АССОЦИАЦИИ С КЛИНИКО-МЕТАБОЛИЧЕСКИМИ ПОКАЗАТЕЛЯМИ В РУССКОЙ ПОПУЛЯЦИИ 14.01.02 – эндокринология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Тюмень 2015 –2– Работа выполнена в государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Тюменская государственная медицинская академия» Министерства здравоохранения...»

«Калякин Евгений Александрович ПОЗДНЕМЕЛОВЫЕ МОРСКИЕ ЕЖИ СРЕДНЕГО И НИЖНЕГО ПОВОЛЖЬЯ: ТАКСОНОМИЧЕСКОЕ РАЗНООБРАЗИЕ, СТРАТИГРАФИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ Специальность: 25.00.02 – палеонтология и стратиграфия Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата геолого-минералогических наук Саратов – 2015     Работа выполнена на кафедре исторической геологии и палеонтологии ФГБОУ ВПО «Саратовский государственный университет имени Н.Г. Чернышевского» Евгений Михайлович Первушов,...»

«ГРИГОРЬЕВА ЛЮДМИЛА ВИКТОРОВНА АГРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ ПОВЫШЕНИЯ ПРОДУКТИВНОСТИ ЯБЛОНИ В НАСАЖДЕНИЯХ ЦЧР РФ Специальность 06.01.08 – плодоводство, виноградарство АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание учёной степени доктора сельскохозяйственных наук Краснодар, 2015 Диссертационная работа выполнена в ФГБОУ ВО «Мичуринский государственный аграрный университет» Министерства сельского хозяйства РФ доктор сельскохозяйственных наук, профессор Научный консультант: Бобрович Лариса...»

«КРЮЧКОВА ЕЛЕНА НИКОЛАЕВНА НАУЧНО-МЕТОДИЧЕСКИЕ ПОДХОДЫ ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКИ К ИЗУЧЕНИЮ ФУНКЦИОНАЛЬНОГО ПОТЕНЦИАЛА РАБОТАЮЩЕГО НАСЕЛЕНИЯ 14.02.01 Гигиена АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук Москва-2012 Работа выполнена в ФБУН «Федеральный научный центр гигиены им.Ф.Ф.Эрисмана» Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека Научные консультанты: доктор биологических наук, профессор Юдина...»

«АФГОНОВ МУХАММАДАЛИ МИРАЛИЕВИЧ Системно-деятельностный подход к гуманитарно-краеведческой воспитательной деятельности в общеобразовательных учреждениях Республики Таджикистан 13.00.01 общая педагогика, история педагогики и образования (педагогические науки) АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора педагогических наук Душанбе 2015 Работа выполнена на общеуниверситетской кафедре педагогики Таджикского национального университета доктор педагогических наук,...»

«Гармаева Татьяна Цыреновна ВИРУСНЫЕ ГЕПАТИТЫ В И С У БОЛЬНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЯМИ СИСТЕМЫ КРОВИ 14.01.21 – Гематология и переливание крови АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук Москва 2012 Работа выполнена в Федеральном Государственном Бюджетном Учреждении «Гематологический научный центр» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации Научный консультант: д.м.н., профессор, академик РАМН Савченко Валерий Григорьевич...»

«ЕВТУШЕНКО АНАТОЛИЙ МИХАЙЛОВИЧ ЗАЩИТНЫЕ ПОЛИМЕРНЫЕ ПОКРЫТИЯ СО СПЕЦИАЛЬНЫМ КОМПЛЕКСОМ СВОЙСТВ ДЛЯ БИОЛОГИЧЕСКИХ ОБЪЕКТОВ 05.17.06 – Технология и переработка полимеров и композитов АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора химических наук Москва 2008 www.sp-department.ru Работа выполнена в Московской государственной академии тонкой химической технологии им. М.В.Ломоносова на кафедре «Химия и технология высокомолекулярных соединений» им. С.С.Медведева...»

«Нгуен Тхи Тху Ха МЕДОНОСНЫЕ РЕСУРСЫ ЛЕСНОГО ФОНДА ЛЕНИНГРАДСКОЙ ОБЛАСТИ И ЦЕНТРАЛЬНОГО ВЬЕТНАМА 06.03.02 Лесоведение, лесоводство, лесоустройство и лесная таксация АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Санкт-Петербург 2015 ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность темы исследования. Использование недревесных ресурсов вносит существенный вклад в улучшение качества жизни населения многих стран, включая Россию и Вьетнам. До настоящего...»

«Гуляева Анастасия Юрьевна ФАРМАКО-ТОКСИКОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА И ТЕРАПЕВТИЧЕСКАЯ ЭФФЕКТИВНОСТЬ ЛЕКАРСТВЕННОГО ПРЕПАРАТА ДЛЯ ИНТРАЦИСТЕРНАЛЬНОГО ВВЕДЕНИЯ НА ОСНОВЕ ЭНРОФЛОКСАЦИНА И КЕТОПРОФЕНА 06.02.03 ветеринарная фармакология c токсикологией АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Москва 2014 Работа выполнена в отделе качества и стандартизации фармакологических лекарственных средств федерального государственного бюджетного учреждения...»

«СЕЛИФОНОВА Жанна Павловна СТРУКТУРНО-ФУНКЦИОНАЛЬНАЯ ОРГАНИЗАЦИЯ ЭКОСИСТЕМ ЗАЛИВОВ И БУХТ ЧЕРНОГО И АЗОВСКОГО МОРЕЙ (РОССИЙСКИЙ СЕКТОР) Специальность 25.00.28 – Океанология Д 002.140.01 Диссертация на соискание ученой степени доктора биологических наук Мурманск, 2015 Работа выполнена в ФГБУН Мурманском морском биологическом институте КНЦ РАН и ФГБОУ...»

«НИКУЛИНА Неля Шамилевна ПРОДУКТИВНЫЕ КАЧЕСТВА И БИОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ КОРОВ ЧЕРНО-ПЕСТРОЙ ПОРОДЫ ПРИ ИСПОЛЬЗОВАНИИ ПРОБИОТИЧЕСКОЙ ДОБАВКИ «БИОГУМИТЕЛЬ-Г» 06.02.10 – частная зоотехния, технология производства продуктов животноводства АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Уфа – 2015 Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном образовательном учреждении высшего образования «Башкирский государственный аграрный...»

«Жукова Дарья Григорьевна Диагностика и прогнозирование реакций гиперчувствительности к лекарственным препаратам у больных в периоперационном периоде в условиях многопрофильного стационара 14.03.09 – клиническая иммунология, аллергология Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Москва, 2015 Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном учреждении «Государственный научный центр «Институт иммунологии» Федерального...»

«Шилкова Татьяна Аркадьевна АГАРИКОИДНЫЕ БАЗИДИОМИЦЕТЫ ГОРОДА ПЕРМИ: ТАКСОНОМИЧЕСКОЕ РАЗНООБРАЗИЕ И ЭКОЛОГИЯ 03.02.08 – экология (биология) Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Пермь – 2015 Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Пермский государственный национальный исследовательский университет» Научный руководитель: доктор биологических наук,...»

«УЛАНОВА Светлана Андреевна НАУЧНЫЕ ОСНОВЫ МУНИЦИПАЛЬНЫХ МОДЕЛЕЙ ДЕЯТЕЛЬНОСТИ ШКОЛ В СФЕРЕ ЗДОРОВЬЕСБЕРЕЖЕНИЯ ОБУЧАЮЩИХСЯ В УСЛОВИЯХ КРАЙНЕГО СЕВЕРА 14.02.01 – гигиена АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук Москва Работа выполнена в ГБОУ ВПО «Сыктывкарский государственный университет» Министерства образования и науки Российской Федерации и НИИ гигиены и охраны здоровья детей и подростков ФГБНУ «Научный центр здоровья детей» Научный...»

«Рейф Ольга Юрьевна БИОЛОГИЧЕСКИЕ РЕСУРСЫ ОРЕХА МАНЬЧЖУРСКОГО (JUGLANS MANDSHURICA MAXIM.) В ПРИМОРСКОМ КРАЕ 03.02.14 – биологические ресурсы Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Владивосток 2015 Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Приморская государственная сельскохозяйственная академия». Научный руководитель: Гуков Геннадий Викторович, доктор...»







 
2016 www.konf.x-pdf.ru - «Бесплатная электронная библиотека - Авторефераты, диссертации, конференции»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.