WWW.KONF.X-PDF.RU
БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА - Авторефераты, диссертации, конференции
 


Pages:     | 1 |   ...   | 2 | 3 || 5 | 6 |   ...   | 8 |

«МНОГОУРОВНЕВЫЙ АНАЛИЗ СОСТОЯНИЯ КОРНЕОСКЛЕРАЛЬНОЙ ОБОЛОЧКИ ГЛАЗА В РЕАЛИЗАЦИИ НОВЫХ ПОДХОДОВ К ДИАГНОСТИКЕ И ЛЕЧЕНИЮ ПЕРВИЧНОЙ ОТКРЫТОУГОЛЬНОЙ ГЛАУКОМЫ ...»

-- [ Страница 4 ] --

На микрофотографиях препарата склеры пациента со II стадией ПОУГ отмеченные изменения коллагеновых и эластических структур встречаются чаще и более выражены. Диссоциация коллагеновых пучков сочетается с крайне неравномерным распределением эластических волокон. Существуют значительные области, где эластические волокна практически отсутствуют.

Причем эти области зачастую совпадают с участками диссоциации коллагеновых пучков. Одновременно увеличивается число очагов сгущения измененных эластических структур (рисунок 22).

Рисунок 22 - НЛОМ изображение внешней поверхности склеры глазасо II стадией ПОУГ (совместное представление ГВГ/ДФФ). Область диссоциации коллагенового пучка с отсутствием эластических волокон (звездочка). Стрелками показаны очаги сгущения измененных эластических волокон. Бар 50 мкм.

На препаратах склеры пациентов с III стадией ПОУГ еще более возрастает количество очагов с измененной структурой и несколько меняется их характер.

Участки с разрыхленными пучками коллагена укрупняются, а неравномерность распределения эластических волокон усиливается. Наряду с участками практически полного отсутствия эластических волокон возникают локальные области их сгущения, причем эти сгущения имеют разный вид. В одних случаях это концентрирование беспорядочно переплетенных тонких волокон эластина (рисунок 23). В других случаях эластические волокна скручиваются в спираль, а также образуют завитки и клубки (рисунок 24).

Рисунок 23 - НЛОМ изображениенаружной поверхности склеры глаз с III стадией ПОУГ (совместное представление ГВГ/ДФФ): концентрация беспорядочных эластических волокон (звездочки) и их спирализация (стрелка). Бар 50 мкм.

Рисунок 24 - НЛОМ изображениенаружной поверхности склеры глаз с III стадией ПОУГ (совместное представление ГВГ/ДФФ): «гомогенный» вид концентрирования эластических волокон (стрелка). Бар 50 мкм.

Существуют эластические структуры почти гомогенного вида (рисунок 24).

Помимо этого наблюдается такая интересная особенность как расщепление пучков коллагена на более мелкие субпучки с оплетанием последних эластическими лентами. Такое сочетание искажений коллагенового каркаса и эластической подсистемы продемонстрировано на рисунке 25.

Рисунок 25 - НЛОМ изображение наружной поверхности склеры глаз с III стадией ПОУГ (совместное представление ГВГ/ДФФ): оплетание эластическими лентами коллагеновых субпучков (стрелка). Бар 50 мкм.

3.2. Гистологическое изучение Для верификации результатов, полученных с помощью НЛОМ, было проведено гистологическое изучение образцов склеры тех же глаукомных глаз с использованием световой микроскопии.

Выявлено, что при II стадии ПОУГ пучки коллагеновых волокон и отдельные волокна имеют преимущественно продольное направление (рисунок 26). Отмечается умеренное разрыхление коллагенового каркаса с диссоциацией пучков, одинаковое на всем протяжении биоптата. В некоторых участках выявляется уплотнение каркаса. Местами видны сосуды небольшого калибра (капилляры, артериолы, венулы), а также клетки типа веретеновидных фибробластов. Окраска коллагеновых волокон и пучков по Ван-Гизону остается фуксинофильной, что свидетельствует об отсутствии грубых молекулярнофибриллярных изменений склеры на этой стадии ПОУГ.

Рисунок 26 - Склера при II стадии ПОУГ: умеренное разрыхление коллагеновых структур. Окраска гематоксилином и эозином. Увеличение 400 Эластические волокна тесно прилежат к пучкам коллагеновых волокон и имеют тоже направление, но местами они расположены свободно и беспорядочно, образуя завитки (рисунок 27). Местами обнаруживается фрагментация волокон.

Эта картина совпадает с описанием, полученным с помощью НЛОМ, однако последняя позволила получить более детальную картину дезорганизации подсистемы эластических волокон матрикса.

Рисунок 27 - Склера при II стадии ПОУГ: эластические волокна прилежат к коллагеновым пучкам, местами располагаются свободно и беспорядочно, образуют завитки, имеется слабая фрагментация волокон. Окраска орсеином на эластические волокна по Унна. Увеличение 400 При III стадии ПОУГ пучки коллагеновых волокон склеры в основном ориентированы взаимно параллельно и вдоль (т.е. циркулярно по отношению к передне-задней оси глаза). Часть волокон имеет поперечную ориентацию, а часть

- диагональную, связывая коллагеновые пучки между собой. Однако в отдельных участках коллагеновые пучки расположены уплотненно, в других отмечается их диссоциация, более выраженная, чем при II стадии ПОУГ. Коллагеновые волокна хорошо окрашиваются пикрофуксином по Ван-Гизону и в комбинированной окраске (рисунок 28). Эти наблюдения качественно совпадают с данными, полученными с помощью НЛОМ.

Рисунок 28 - Склера при III стадии ПОУГ: в плотном участке склеры яркая фуксинофилия (коллаген) и тонкие беспорядочные эластические волокна, прилежащие к коллагеновымпучкам. Комбинированная окраска на коллагеновые и эластические волокна. Увеличение 400 Рисунок 29 - Склера при III стадии ПОУГ: на бледном фоне коллагеновых волокон видны прилежащие к ним тонкие эластические волокна, завитки и отдельные клубки этих волокон. Окраска орсеином на эластические волокна по Унна. Увеличение 400 Эластические волокна расположены более неравномерно, чем при II стадии, частично прилежат вплотную к пучкам коллагеновых волокон, частично подвергаются фрагментации, образуют завитки и клубочки (рисунки 28 и 29).

Деструктивные изменения эластических волокон подобного рода выражены значительно сильнее, чем при II стадии глаукомы. Содержание эластических волокон ниже, чем при II стадии глаукомы. Местами видны сосуды небольшого калибра (капилляры, артериолы, венулы). Количество клеток типа веретеновидных фибробластов с сильно вытянутыми ядрами несколько меньше, чем при II стадии ПОУГ. При этом совпадение области концентрирования эластических волокон с областью дезорганизации коллагенового каркаса выявилось только с помощью НЛОМ.

Необходимо подчеркнуть, что деструкция коллагенового каркаса и эластических компонентов склерального матрикса, нарастающая по мере развития глаукомного поражения, обнаруживается как с помощью световой, так и мультифотонной (НЛОМ) микроскопии, что подтверждает адекватность последней. При этом новая технология визуализации более информативна в отношении ряда важных деталей состояния фибриллярных структур экстрацеллюлярного матрикса склеры глаукомных глаз.

Заключение. На основании данных, полученных при изучении образцов методом нелинейно-оптической и световой микроскопии, можно сделать вывод о дезорганизации структуры коллагеновых и эластических волокон в глаукомной склере. Пучки коллагеновых волокон расщепляются (подвергаются диссоциации) на волокна. Однако данные НЛОМ (генерация второй гармоники) и гистологии (фуксинофилия волокон по Ван-Гизону), свидетельствуют о сохранении молекулярной структуры коллагена. Эластические волокна подвергаются более выраженным изменениям: отмечается неравномерность распределения, диссоциация с коллагеновыми волокнами, деструкция, фрагментация, образование клубков, завитков и спиралей. Все эти нарушения, несомненно, изменяют механические свойства, в частности, эластичность соединительной ткани склеры. Обнаружено, что изменения коллагенового каркаса и эластических волокон в склеральном матриксе, нарастающие по мере развития глаукомного поражения, выявляются как с помощью световой, так и нелинейно-оптической микроскопии. Такое совпадение результатов двух методов указывает на корректность использования НЛОМ для адекватного описания структурных особенностей внеклеточного матрикса склеральной ткани. При этом использование новой технологии визуализации позволяет получить более детальную информацию о состоянии волокнистых структур внеклеточного матрикса склеры глаукомных глаз. Проведенное исследование позволяет предположить, что ремоделирование матрикса глаукомной склеры может быть одним из предрасполагающих факторов развития глаукомы, т.к. оно обнаруживается уже на I стадии болезни. В дальнейшем сами структурные изменения могут быть ответом на повышение ВГД выше толерантных значений.

Возможно, таким образом, развивается негативная обратная связь, способствующая прогрессированию глаукомы.

ГЛАВА 4. РЕЗУЛЬТАТЫ СРАВНИТЕЛЬНОГО

ТЕРМОМЕХАНИЧЕСКОГО ИССЛЕДОВАНИЯ И АМИНОКИСЛОТНОГО

АНАЛИЗА ОБРАЗЦОВ СКЛЕРЫ И ТЕНОНОВОЙ КАПСУЛЫ ГЛАЗ

ПАЦИЕНТОВ С РАЗЛИЧНЫМИ СТАДИЯМИ ПЕРВИЧНОЙ

ОТКРЫТУГОЛЬНОЙ ГЛАУКОМЫ

Роль возрастных изменений органа зрения в патогенезе первичной открытоугольной глаукомы (ПОУГ) до конца не определена. В том числе, обсуждается вопрос, может ли патологическое ускорение естественных геронтологических изменений склеры и повышение ее ригидности при отсутствии устойчивой нормализации ВГД предрасполагать к прогрессированию глаукомного процесса или быть фактором, способствующим развитию глаукомного поражения [10, 44, 102, 114, 137, 151, 325, 327].

В то же время при моделированиив эксперименте глаукомного поражения на глазах молодых и старых макак-резус получили более выраженные проявления глаукомного процесса у молодых животных [171, 321]. Эти данные коррелируют с ранее полученными результатами, которые показали, что у старых кроликов в норме модуль упругости выше, чем у молодых, но при этом коэффициент легкости оттока достоверно не отличается в этих группах. Если же искусственно увеличивать модуль упругости склеры за счет повышения уровня поперечной связанности склерального коллагена путем формирования поперечных сшивок не возрастной, а другой природы [245, 255, 322], то отток внутриглазной жидкости (ВГЖ) заметно снижается [158]. По-видимому, процесс старения (пусть даже и ускоренного) отличается от глаукомного ремоделирования склеры тем, что действуют другие механизмы, изменяющие проницаемость склеры и ее демпфирующую способность в результате воздействия повышенного ВГД [205].

Одним из значимых проявлений возрастных изменений склеры как соединительнотканного образования является накопление внутри- и межмолекулярных поперечных связей в фибриллярном коллагене, обеспечивающих в большой степени ее структурную стабильность [332]. Эти связи формируются как за счет окислительного деаминирования под действием лизилоксидазы, так и за счет неферментативной гликации [102]. В результате образуется сшитая сетевая структура, которая обуславливает выполнение специфической механической функции соединительной ткани. В ходе как возрастных, так и патологических процессов сетевая структура может изменяться за счет многих факторов, в том числе за счет локальных и глобальных нарушений конформаций тройной спирали коллагена, способа укладки в коллагеновые фибриллы и волокна и степени их сшивания. Это приводит к отклонению биомеханических характеристик от оптимальных, и как следствие, к нарушению функционирования соединительной ткани [187].

Выполненное недавно экспериментальное исследование [145] подтвердило и развило представление, выдвинутое в работах Е.Н. Иомдиной и др. [68] о роли повышенного уровня поперечной связанности (кросслинкинга) коллагена склеры как фактора, не только повышающего ригидность склеральной оболочки, но и снижающего отток ВГЖ, в развитии глаукомного поражения. У мышей опытной группы увеличивали кросслинкинг коллагена склеры с помощью инъекций сшивающего агента (глицеральдегида), а затем вызвали стойкую гипертензию и развитие специфического поражения зрительного нерва и сетчатки за счет блокады дренажных путей, при этом у мышей группы сравнения индукция глаукомного поражения проводилась на фоне интактной склеры. В результате в опытной группе животных (с избыточным уровнем поперечной связанности коллагена склеры, повышенной жесткостью и сниженной проницаемостью склеральной ткани) потеря ганглиозных клеток была существенно более значительной, чем в группе сравнения, т.е. чувствительность к глаукомному поражению была выражена значительно сильнее [145].

Результаты измерений ВГД в передней камере выделенных свиных глаз, заполненных одинаковым объемом жидкости, показали, что при искусственном повышении уровня поперечной сшитости коллагеновых структур роговицы путем кросслинкинга растет ее жесткость и увеличивается ВГД [253]. При этом более эластичная роговица (кадаверных глаз человека) способна предотвратить колебания ВГД, вызываемые резкими изменениями объема [220]. Повышенная жесткость корнеосклеральной капсулы снижает ее демпфирующую способность, особенно в области решетчатой пластинки (РП) и диска зрительного нерва (ДЗН) при скачках ВГД, свойственных течению данного заболевания [147].

Некоторые авторы отмечают, что с возрастом утолщаются эластические волокна РП склеры, в ней увеличивается содержание I, II и III типов коллагена [214, 229]. Изменяется и состав межклеточного матрикса [205, 214, 229], а также функциональная активность астроцитов [239]. Все эти изменения приводят к возрастному уменьшению эластичности РП и к увеличению ее жесткости. По мнению некоторых авторов, при глаукоме эти процессы сопровождаются ремоделированием РП, по-видимому, вызванным нарушенным синтезом матричных металлопротеиназ [181]. Однако структурная перестройка собственно склеры в процессе развития глаукомного поражения только начинает изучаться [68, 69].

Как было указано в главе 1, для оценки состояния коллагена в соединительной ткани широко используется термический анализ [65].

Термическая стабильность коллагена, характеризующаяся температурой и Hm) теплотой денатурации (соответственно, Tm и зависит от посттрансляционной модификации макромолекул [185, 247, 289], от упаковки макромолекул в фибриллы, волокна и пучки [332], а также от взаимодействия коллагена с другими матриксными макромолекулами [216]. Таким образом, термически индуцированные трансформации коллагена спираль-клубок отражают общее состояние коллагеновой структуры. Для оценки уровня внутри- и межмолекулярной связанности соединительной ткани используют значение температуры пика эндотермического перехода спираль-клубок (Tm). Значение Hm определяется энергией, необходимой для разрушения связей, стабилизирующих тройную спираль нативных макромолекул коллагена. Обе характеристики определяют методом ДСК [216, 243, 247]. С помощью ДСК установлено, что величина Hm и форма кривой денатурации здоровых и патологически измененных коллагенсодержащихтканей (хрящей, сухожилий и других соединительнотканных образований) существенно различаются между собой. Возрастание температуры денатурации, определяемой по значению температуры пика эндотермического процесса денатурации Tm, принято связывать с увеличением степени сшивания коллагенового волокна [65].

Величина Hm отражает количество интактных макромолекул коллагена в ткани и количество стабилизирующих связей [266].

Метод ДСК был использован нами ранее для определения уровня поперечной связанности коллагена склеры глаз с разными стадиями ПОУГ [44].

Термомеханический анализ выявил его существенное повышение по мере прогрессирования глаукоматозного процесса [68]. Очевидно, формирование избыточных поперечных химических связей в коллагеновых структурах глаукомной склеры способствует повышению ее жесткости.

Рост поперечных сшивок в склере может быть вызван накоплением конечных продуктов гликации (КПГ), связанным с активацией процессов патологического старения тканей глаза при глаукоме. Резкое повышение содержания КПГ в экстрацеллюлярном матриксеДЗН, РП и даже в сетчатке глаукомных глаз отмечено в литературе [322]. Однако рост поперечной сшитости склеры может происходить не только за счет возрастного накопления КПГ, но и вследствие патологического дисбаланса ферментативной активности, в частности, за счет увеличенной активности лизилоксидазы или роста уровня трансглутаминазы. Эти ферменты способствуют образованию поперечных сшивок амидной природы между аминокислотными остатками глутамина и (гидрокси) лизина [44, 341].

До настоящего времени возрастные особенности формирования поперечных сшивок в коллагеновых структурах склеры и их влияние на течение глаукомного поражения не изучались. Такое исследование представляется существенным шагом в понимании этиологии заболевания и может служить основанием для разработки новых критериев диагностики и методов патогенетической терапии.

С этой целью мы провели сравнительное изучение возрастных особенностей уровня поперечной связанности коллагена склерыи теноновой капсулы пациентов с разными стадиями ПОУГ, сравнительное изучение связи уровня поперечной связанности коллагена склеры с клинико-функциональными параметрами пациентов с разными стадиями ПОУГ. Для характеристики состояния коллагена в исследуемых образцах отслеживали также их биохимический состав (содержание аминокислот и коллагена в целом) и уровень флуоресценции.

В рамках данного раздела работы были обследованы 75 пациентов в возрасте 50-91 года с различными стадиями ПОУГ, которым планировалось проведение антиглаукоматозной операции - непроникающей глубокой склерэктомии. Пациенты были разделены на три возрастных группы: возрастная группа 50-59 лет состояла из 21 пациента, группа 60-69 лет - из 22 пациентов, группа старше 70 лет - из 32 пациентов; в том числе с 1-ой стадией ПОУГ было 19 глаз, со 2-ой стадией - 24 глаза, с 3-ей стадией - 32 глаза.У всех пациентов во время проведения непроникающей глубокой склерэктомии были взяты образцы склеры для изучения уровня поперечной связанности коллагена склеры.

Поскольку выраженность глаукомной оптиконейропатии наиболее точно отражает характер структурных и функциональных изменений зрительного нерва, то мы оценивали данные стандартной автоматизированной периметрии (MS, MD и PSD (sLV)) и следующие ретинотомографические параметры: площадь НРП (rim area, mm2), вертикальный размер НРП (Rim Area vertical thickness, mm2), вертикальное отношение площади ДЗН к площади экскавации (vertical C/D ratio, mm2), среднюю толщину слоя нервных волокон сетчатки (average RNFL thickness, mm). Для определения уровня поперечной связанности проанализированы ДСК термограммы склеры. Подробное описание использованных методов иссделедования приведено в главе 2.

4.1. Сравнительное изучение возрастных особенностей уровня поперечной связанности коллагена склеры пациентов с разными стадиями ПОУГ Анализ полученных данных показал, что величины Tm, Hm и форма кривых денатурации коллагена (ДСК-термограммы) образцов склеры существенно различаются у больных с начальной (I), развитой (II) и далекозашедшей (III) стадиями ПОУГ, а также зависят от возраста пациентов.

Проведенный корреляционный анализ показал наличие статистически значимых коэффициентов корреляции Tm и Hm с возрастом пациентов (R=0,54, р0,01 и R=0,53, р0,01 соответственно). Положительные значения параметров корреляции свидетельствуют о росте поперечной связанности, а значит, и жесткости склеры с возрастом, что соответствует литературным данным о патологическом изменении матрикса соединительной ткани при старении [187].

Мы получили также положительную корреляционную зависимость между Tm коллагена склеры и стадией ПОУГ (R=0,58, р0,007). Во всех возрастных группах Tm повышалась по мере развития глаукомного поражения, что совпало с выявленной нами ранее закономерностью [44]. Однако термомеханические показатели склеры в выделенных возрастных группах имели некоторые характерные особенности.

Для пациентов в возрастной категории от 50 до 59 лет с начальной стадией глаукомы характерен эндотермический переход со средним температурным пиком Tm=64,80,06°C и энтальпией Hm=8,84,4Дж/г сухого остатка, с развитой Tm=65,20,3°C, Hm=14,05,8Дж/г стадией ПОУГ сухого остатка, с далекозашедшей стадией Tm=66,10,8°C, Hm=14,33,4 Дж/г сухого остатка (таблица 1).

Таблица 1 - Значение термомеханических параметров склеры пациентов в возрасте 50-59 лет в зависимости от стадии ПОУГ

–  –  –

Значения Tm достоверно отличаются в I и II (p0,0007), II и III (p0,03), I и III стадиях (p0,000). Значения Hm также достоверно отличаются в I и II (p0,0001), I и III стадиях (p0,0002), при этом отсутствовала достоверная разница во II и III стадиях (p0,34). Закономерное повышение Tm свидетельствует об изменении термомеханических свойств склеры по мере развития глаукоматозного процесса в этой возрастной группе, т.е. о ее ремоделировании.

На рисунке 30 представлены ДСК-термограммы образцов склеры пациентов с различными стадиями глаукомы в этой возрастной категории.

Рисунок 30 - ДСК-термограммы образцов склеры пациентов с различными стадиями глаукомы в возрастной категории 50-59 лет При анализе образцов склеры пациентов в возрастной категории от 60 до 69 лет получены несколько другие данные, показывающие рост Tm по сравнению с предыдущим возрастным периодом: для начальной стадии глаукомы характерен эндотермический переход со средним температурным пиком Tm=65,60,7°C и Hm=6,82,9 Дж/г сухого остатка, для развитой стадии Tm=66,01,3°C и Hm=12,23,4Дж/г сухого остатка, для далекозашедшей стадии Tm=66,20,8°C и Hm=13,73,2Дж/г сухого остатка (таблица 2).

Таблица 2 - Значение термомеханических параметров склеры пациентов в возрасте 60-69 лет в зависимости от стадии ПОУГ

–  –  –

В этой возрастной группе значения Tm и Hm с высокой достоверностью отличаются в I и II (p0,0007), I и III стадиях (p0,000). Однако, в отличие от пациентов более молодого возраста, у пациентов этой возрастной группы отсутствовала достоверная разница Tm и Hm между II и III стадиями ПОУГ (p0,49).

На рисунке 31 представлены ДСК-термограммы образцов склеры пациентов с различными стадиями глаукомы в этой возрастной категории.

Рисунок 31 - ДСК-термограммы образцов склеры пациентов с различными стадиями глаукомы в возрастной категории 60-69 лет Незначительный дальнейший рост Tm отмечен у пациентов в возрастной категории от 70 лет и старше: при начальной стадии глаукомы выявлен эндотермический переход со средним температурным пиком Tm=65,91,3°C и Hm=10,62,6 Дж/г сухого остатка, при развитой стадии Tm=66,40,8°C и Hm=11,92,9 Дж/г сухого остатка, при далекозашедшей стадии Tm=66,70,9°C и Hm=14,63,1Дж/г сухого остатка (таблица 3).

Таблица 3 - Значение термомеханических параметров склеры пациентов в возрасте 70-91 года в зависимости от стадии ПОУГ

–  –  –

У пациентов этой возрастной группы значения Tm и Hm достоверно отличались только при I и III стадиях ПОУГ (p0,05). На рисунке 32 представлены ДСК-термограммы образцов склеры пациентов с различными стадиями глаукомы в этой возрастной категории.

Рисунок 32 - ДСК-термограммы образцов склеры пациентов с различными стадиями глаукомыв возрастной категории 70-91 год Увеличение Hm по мере развития патологии может быть связано с возрастанием доли коллагена в ткани. Однако этого увеличения содержания коллагена недостаточно для объяснения почти полуторократного роста Hm. Повидимому, в результате патологических изменений глаукомного генеза возрастает количество стабилизирующих тройную спираль связей. Это обуславливает необходимость в затрате дополнительной энергии для перехода макромолекул коллагена из нативной конформации тройной спирали в состояние случайного клубка.

Анализ полученных данных позволяет заключить, что уровень поперечной связанности коллагена склеры глаукомных глаз зависит от возраста. Однако формирование избыточных сшивок, связанное с глаукомным поражением, повидимому, играет более существенную роль в нарушении ее структурнобиомеханических свойств, чем сшивание коллагеновых комплексов, вызванное естественным процессом старения, поскольку различия по показателю Tm и Hm между разными возрастными группами (в пределах 0,8-1,0°С и 0,3-2,1 Дж/г сухого остатка соответственно) оказались менее значительными, чем различия, связанные с прогрессированием глаукомного поражения (в пределах 1,9-2,7°С и 4,0-7,5 Дж/г сухого остатка соответственно). Выявленные структурнобиомеханические изменения корнеосклеральной оболочки глаза у пациентов с ПОУГ не укладываютсяв рамки естественных геронтологических процессов, в их основе, очевидно, лежит нарушение метаболизма соединительной ткани оболочки. По-видимому, процесс старения (пусть даже и ускоренного) отличается от глаукомного ремоделирования склеры тем, что действуют другие механизмы, изменяющие проницаемость склеры и ее демпфирующую способность в результате воздействия повышенного ВГД. Возможно, исходно более выраженныеиндивидуальные возрастные изменения структурно-биомеханических свойств склеры могут способствовать возникновению и прогрессированию глаукомного поражения, однако инволютивные процессы, вызывающие естественную структурную перестройку склеральной ткани, следует рассматривать лишь как фон, на котором развиваются процессы ее патологического глаукомного ремоделирования.

4.2. Взаимоотношения структурно-функциональных параметров и уровня поперечной связанности коллагена склеры глаукомных глаз Результат проведенного корреляционного анализа связи Tm и Hm со структурно-функциональными параметрами обследованных глаукомных пациентов представлен в таблицах 4 и 5.

Таблица 4 - Корреляционный анализ связи Tm образцов склеры с биомеханическими и структурно-функциональными параметрами пациентов с ПОУГ

–  –  –

Обращают на себя внимание корелляционные взаимоотношения Tm и функциональных параметров. Как показывают полученные данные, у пациентов с «жесткой» склерой наблюдаются более низкие значения интегрального показателя среднего отклонения уровня светочувствительности MD и суммарных показателей пороговой чувствительности и более выраженные изменения величины и степени локальных дефектов PSD (таблица 4).

Интересно, что из морфометрических параметров диска зрительного нерва наибольший коэффициент корреляции Tm был получен с вертикальным интегральным параметром НРП и с площадью НРП в целом (таблица 4).

Отрицательный характер корреляции можно расценить как следствие зависимости истончения НРП в темпоральном секторе у пациентов с ПОУГ от структурно-механических свойств корнеосклеральной оболочки глаза.

Корреляционный анализ показал также наличие достоверной отрицательной корреляции между Tm и длиной передне-задней оси глаза (рисунок 33).

–  –  –

Рисунок 33 - Зависимость Tm от длины ПЗО глаза у пациентов с ПОУГ Это свидетельствует об уменьшении количества сшивок при патологическом растяжении глазного яблока вследствие миопии. Этот результат подтверждает представление о том, что биомеханические изменения в корнеосклеральной оболочке при глаукоме и миопии характеризуются разнонаправленной закономерностью [10, 70].Однако при развитии сочетанной патологии проявляются биомеханические изменения, характерные для глаукомы.

Как показывают полученные данные, статистически значимые отрицательные корреляции существуют между КГ и ФРР, характеризующими вязкоэластические свойства роговицы, и энтальпией Hm, то есть у пациентов с высокими тепловыми эффектами отмечаются более выраженные изменения вязко-эластических свойств роговицы. На рисунке 34 преставлена гистограмма корреляционной зависимости КГ и Hm.

–  –  –

Рисунок 34 - Зависимость между КГи Hm у пациентов с ПОУГ Нами не выявлено корреляции Hm с функциональными показателями.

Среди морфометрических параметровДЗН наибольшие коэффициенты Hm были корреляции получены с вертикальными размерами НРП и интегральным показателем площади экскавации ДЗН. Отрицательный характер корреляции показывает, что при низких значениях энтальпии наблюдаются меньшие по размерам линейные и объемные отношения экскавации.

Корреляционные связи температуры денатурации Tm и энтальпии Hm с другими клиническими параметрами были слабыми или статистически недостоверными. Это явилось предпосылкой для разделения пациентов первоначально на группы в зависимости от их возраста, а затем на подгруппы в зависимости от стадии заболевания.

Для пациентов в возрастной категории от 50 до 59 лет получен достоверно более высокий положительный коэффициент корреляции Tm с функциональноструктурным состоянием глаукомного глаза относительно всей группы. Значимая корреляционная зависимость была получена между Tm и периметрическими индексами, Tm и вертикальным отношением площади ДЗНк площади экскавации (R=0,65, р0,015 и R=0,73, р0,009 соответственно), которая представлена на рисунке 35. Можно заключить, что у пациентов с относительно ранней манифестацией глаукомы значимость структурно-механических свойств склеральной ткани в прогрессировании глаукоматозного процесса очень велика.

Это свидетельствует о целесообразности назначения относительно молодым пациентам с ПОУГ препаратов с протеолитической активностью, то есть препаратов, способных уменьшить количество сшивок в склеральном коллагене и сделать склеру менее жесткой.

–  –  –

0,5 0,4 0,3 0,2 0,1 0,0

-0,1

–  –  –

Рисунок 35 - Связь Tm и вертикального отношения площади ДЗН к площади экскавацииу пациентов с ПОУГ в возрастной категории 50-59 лет При анализе образцов склеры пациентов в возрастной категории от 60 до 69 лет получен достоверно высокий коэффициент корреляции Tm с уровнем ВГД операции (R=0,68, р0,05) (рисунок 36). Возможно, патологические изменения биомеханических и биохимических свойств корнеосклеральной оболочки глаза глаукомного происхождения, усугубленные возрастным фактором, становятся более зависимыми от уровня ВГД. Это потверждается значимым корреляционным взаимоотношением Tm и корнеального гистерезиса (R=-0,77, р0,048).

–  –  –

Рисунок 36 - Зависимость ВГД у пациентов с ПОУГ в 1-ые сутки после операции от Tm в возрастной группе 60-69 лет Корреляционный анализ данных, полученных у пациентов в возрастной категории от 70 лет и старше показал появление положительных коэффициентов корреляции между термомеханическими показателямии морфометрическими параметрами ДЗН не только по определенным секторам, но и по всей площади диска. Статистически значимая корреляционная зависимость была получена между Tm, Hm и отношением площади экскавации к площади ДЗН (R=0,53, р0,05 и R=61, р0,04 соответственно). Как видно, в этой возрастной группе получены относительно более низкие коэффициенты корреляции, чем в группах пациентов с ПОУГ более молодого возраста. Однако более равномерный характер зависимости Tm от всех исследованных функционально-структурных параметров и значения Tm при разных стадиях ПОУГ показывают наличие у пациентов этой группы более выраженных возрастных диффузных изменений, которые усугубляются глаукоматозным процессом.

Развитие глаукомного поражения в относительно молодом возрасте характеризуется более высокой, чем у лиц с глаукомой старших возрастных групп, корреляционной связью температуры денатурации (уровня сшивок) с функционально-структурным состоянием глаукомного глаза, в частности, с периметрическии индексами и обьемом НРП. Можно заключить, что у пациентов с ранней манифестацией глаукомы значимость структурно-механических свойств склеральной ткани в прогрессировании глаукоматозного процесса очень велика.

Это свидетельствует о важности назначения относительно молодым пациентам с ПОУГ препаратов с протеолитической активностью, то есть препаратов, способных уменьшить количество сшивок и сделать склеру менее жесткой. При развитии глаукомы в более старшем возрасте глаукомные нарушения, повидимому, накладываются на уже имеющиеся возрастные изменения и происходят на другом метаболическом фоне, при этом дополнительный рост поперечного сшивания коллагена склеры оказывает влияние на уровень ВГД.

4.3. Термомеханические свойства склеры пациентов с ПОУГ в зависимости от получаемой медикаментозной терапии Мы установили, что развитие глаукомного поражения в относительно молодом возрасте характеризуется более высокой, чем у лиц с глаукомой старших возрастных групп, корреляционной связью температуры денатурации (уровня сшивок) с функционально-структурным состоянием глаукомного глаза, в частности, с периметрическими индексами и обьемом НРП. Это свидетельствует о целесообразности назначения относительно молодым пациентам с ПОУГ препаратов с протеолитической активностью, то есть препаратов, способных уменьшить количество сшивок в склеральном коллагене и сделать склеру менее жесткой.

Показано, что воздействие простагландинов и их синтетических аналогов на структуры глаза, как в живых организмах, так и в культуре органов или клеток мягко стимулирует выработку собственных металлопротеиназ [235]. Группа исследователей подвергла культуру клеток цилиарного тела глаза человека действию аналогов простагландинов, а через несколько дней после обработки отмечалось более чем двукратное возрастание уровня металлопротеиназ MMП-1, 2, 3, 9 в жидкой среде, в которой росла эта культура [340]. Другие эксперименты, также проведенные на клетках цилиарной мышцы человека, показывают, что их длительная обработка аналогами простагландинов повышает активность проМMП-1 на 254%, про-МMП-3 на 128% [1]. Группа исследователей закапывала аналоги простагландинов в глаза обезьянам дважды в день и определяла содержание коллагена I, III, IV типа в переднем сегменте глаз. Цилиарное тело и смежная с ним склера демонстрировала падение иммунореактивности коллагена I и III на 40-45% [301].

Последовательность клеточных реакций на действие аналогов простагландинов включает начальную трансдукцию поверхностными рецепторами, индукцию транскрипции ММП кодирующих генов, трансляцию и секретирование про-ММП и далее, активацию ММП с помощью протеолитической трункации, аналогичной превращению «проколлагена». Это означает, что действие простагландинов увеличивает отток влаги главным образом по увеосклеральному пути, поскольку общее содержание металлопротеиназ и изменение их содержания под действием простагландинов выше в цилиарном теле и в склере, нежели в трабекулярной сети [246].

Для проверки этого предположения нами было проведено исследование зависимости температуры денатурации коллагена склеры от получаемой пациентом гипотензивной медикаментозной терапии. Было выявлено отсутствие звисимости Tm от уровня ВГД до операции (R=0,13, р0,43), но была получена зависимость от препаратов гипотензивной терапии. Так, у пациентов, получавших до антиглаукоматозной хирургии терапию аналогами простагландинов (латанопростом 0,005%, травапростом 0,005% или биматопростом), средние значения температуры денатурации составили Tm=65,90,12°C, в то время как у пациентов, находившихся на гипотензивном лечении бета-блокаторами и/или ингибиторами карбоангидразы, средние значения температуры денатурации были несколько выше и составили Tm=66,40,09°C (р0,05). Это согласуется с результатами многочисленных экспериментальных исследований, в которых измерялась транссклеральная проницаемость и скорость диффузии различных соединений, от низкомолекулярных до высокомолекулярных, продемонстрировавших значительное увеличение проницаемости склеры в короткие сроки под действием простагландинов [246].

Полученные результаты показывают, что у пациентов с гипотензивной терапией аналогами простагландинов определяются относительно более низкие значения Tm, что соотвествует менее выраженному уровню поперечной связанности коллагеновых структур склеры. Таким образом, значительная гипотензивная эффективность консервативной терапии ПОУГ аналогами простагландинов в какой-то степени обусловлена деградациейими экстрацеллюлярного матрикса, что приводит к повышению проницаемости склеры и улучшению оттока внутриглазной жидкости.

4.4. Сравнительное изучение возрастных особенностей уровня поперечной связанности коллагена теноновой капсулы пациентов с разными стадиями ПОУГ Как показали исследования теноновой капсулы глаз с прогрессирующей миопией, изменения этой прилежащей к склере соединительнотканной оболочки весьма сходны с изменениями, характерными для миопической склеры, что позволило образцы этой ткани, которые (в отличие от склеры) можно легко и без какого-либо вреда для пациента получить во время различных хирургических вмешательств, использовать для исследования патогенеза данного заболевания [43, 64-66, 71].

Исходя из этого, нами было высказано предположение, что изучение образцов теноновой капсулы, также, как и склеры, можетдать ценную возможность оценки состояния системы соединительной ткани глаза в процессе прогрессирования глаукомы.

Исследований подобного рода, касающихся глаукомного поражения, до сих пор не было.

В связи с этим мы впервые провели сравнительное изучение термического поведения ткани теноновой капсулы в норме и при разных стадиях ПОУГ.

Образцы теноновой капсулы были взяты у 12 пациентов в возрасте 53-58 лет (средний возраст составил 75,01,3 лет) с ПОУГ во время проведения непроникающей глубокой склерэктомии, а также у 8 пациентов в возрасте 43-47 лет (средний возраст 45,52,0 года) без глаукомы во время операции исправления косоглазия или посттравматического вмешательства.

На рисунке 37 представлены ДСК диаграммы образцов теноновой капсулы контрольной группы, которые вполне соответствуют типичным термограммам нормальной соединительной ткани [168, 185, 242, 246].

Рисунок 37 - Типичная ДСК кривая, соответствующая образцу нормальной теноновой капсулы (контрольная группа) Пик температуры в среднем составляет 66,8±0,7°С, а общая энтальпия 21,1±1,8 Дж/г коллагена. В литературе представлены аналогичные данные для других коллагеновых тканей человека, а эндотермический процесс, отраженный в полученных термограммах, является со всей очевидностью процессом денатурации коллагена [185, 255]. Как было показано, высокотемпературное плечо вызвано переходом от трехспиральной структуры к усредненной последовательной цепочке, присутствующей в доменах между неферментными поперечными сшивками [185, 242, 246, 264, 280]. Эти сшивки образуются в процессе старения [185, 241, 242, 246, 257] и по факту соответствует данным работ [241, 258], где значительный рост гликации коллагена в тканях глаза отмечен только после 20 лет.

Кривые ДСК глаукомных образцов существенно отличались от контрольных, а величины Tm и Hm превышали нормальный уровень. Средние значения Tm составили 68±0,77°C, средние значения Hm - 25,42,9 Дж/г сухого остатка. При этом тепмература денатурации и энтальпия теноновой капсулы были стандартно выше температуры денатурации и энтальпии склеральной ткани, что было показано при анализе образцов теноновой капсулы и склеральной ткани одних и тех же пациентов (рисунок 38).

Рисунок 38 - ДСК-термограммы склеры и теноновой капсулы пациентки с III стадией ПОУГ Анализ образцов теноновой капсулы показал, что сохраняется тенденция повышения температуры денатурации и энтальпии по мере увеличения стадии глаукомы, что было ранее нами выявлено при ДСК-анализе склеральной ткани.

Для пациентов с начальной стадией глаукомыхарактерен эндотермический переход со средним температурным пиком Tm=67,30,73°C и Hm=22,61,4 Дж/г сухого остатка, при развитой стадии эти показатели выше: Tm=68,21,29°C и Hm=24,11,9 Дж/г сухого остатка, при далекозашедшей стадии Tm=69,10,8°C и Hm=27,82,1 Дж/г сухого остатка.

На рисунке 39 представлены ДСК-термограммы теноновой капсулы пациентов с различными стадиями ПОУГ.

Рисунок 39 - ДСК-термограммы образцов теноновой капсулы пациентов с различными стадиями глаукомы Таким образом, данные ДСК позволили выявить нарушения коллагеновой структуры теноновой капсулы глаз с глаукомой: повышение температуры денатурации и изменение формы кривой денатурации на ДСК-термограммах отражают деструкцию коллагеновой организации в этой ткани и зависят от стадии глаукомного процесса.

Полученные результаты показывают, что теноновая капсула, как и склеральная ткань, является ценным объектом для in vivo изучения возможных механизмов прогрессирования глаукомы.

4.5. Результаты аминокислотного и аутофлюоресцентного анализа склеральной ткани пациентов с ПОУГ В таблице 6 представлен результат аминокислотного анализа склеры глаз с различными стадиями глаукомы.

–  –  –

Примечание:

1. Количество аминокислот пересчитано на 1000 пептидных остатков.

2. В последней колонке содержатся результаты вычисления аминокислотного состава по приведенным в базе Expasy Molecular Biology Server данным о первичной структуре Коллагена I вида HomoSapiens [191].

Как следует из данных, представленных в таблице 6, склеральная ткань характеризуется значительным уровнем глицина и оксипролина, что однозначно указывает на высокое содержание коллагена. Сравнение аминокислотного состава исследуемой склеральной ткани с аналогичными данными для других тканей человека, содержащих коллаген I, представленные в генетической базе Expasy [191], показывает, что в склере содержание оксипролина понижено, а содержание лейцина, тирозина, фенилаланина и других аминокислот - повышено. Это связано с наличием в ткани и других белковых компонентов, таких, как эластин, межфибриллярные протеогликаны, гликопротеины [336].

В результате аминокислотного анализа обнаружено, что коллаген составляет около 50% от сухой массы ткани и около 70% от общего содержания белка (таблица 7).

Таблица 7 - Изменение биохимических и физико-химических характеристик склеры при развитии ПОУГ

–  –  –

Полученные величины существенно превышают характерное для нормальной склеры взрослого человека содержание коллагена (394%), приведенное в работе Келли и др. [232]. Более того, по мере развития глаукомного процесса прослеживается отчетливая тенденция к росту уровня коллагена. Разница в содержании белка и коллагена между всеми группами образцов является статистически значимой (p0,05).

Данные аминокислотного анализа, на основе ключевых соотношений (OHPro/OH-Lys) [147] и (Gly/Ala) [156], специфичных для каждого типа коллагена (таблица 8), и литературных сведений об ориентировочном содержании коллагенов разных типов в тканях человека, позволяют оценить типовой состав коллагена в образцах, где коллаген является основным компонентом. На сегодняшний день известно 27 генетически различных типов коллагена [235], однако содержание в тканях человека коллагенов с порядковым номером выше III составляет 1% [312], и, следовательно, изменение их количеств в ходе развития глаукомного процесса принципиально не может быть детектировано с помощью аминокислотного анализа. Оценку типового состава можно производить только в рамках представлений о возможном наличии коллагенов I, II, III [102].

Различия в «ключевых отношениях» аминокислот между всеми группами образцов оказались статистически незначимы (таблица 8). Их величины указывают на присутствие в склере глаукомных глаз в основном коллагена I типа и отсутствие детектируемых количеств коллагена типов II и III. Этот результат вполне соответствует данным работ [232, 329], согласно которым в нормальной склере присутствует главным образом коллаген Iтипа. Кроме того, на основе полученных данных можно предположить, что изменения типового состава коллагена в результате прогрессирования глаукомного процесса не происходит.

Соотношение Gly/Ala (2,73-2,76), более низкое, чем соотношение для чистого коллагена I (2,97), легко объясняется наличием в склеральной ткани других компонентов белковой природы с меньшим содержанием глицина [336].

–  –  –

Результаты аутофлуоресцентного анализа.

Все исследуемые образцы характеризовались заметной интенсивностью аутофлуоресценции в диапазоне 420-470 нм, однако статистически значимой разницы между группами выявлено не было.

На рисунке 40 приведен типичный пример спектра папаината глаукомных образцов.

Рисунок 40 - Типичный пример спектра флуоресценции папаината глаукомной склеры человека (возб=370 нм) Характеристики спектра флуоресценцaии (возб/исп=370/441 нм) совпадают с приводимыми в работе N. Malik данными для флуорофоров, образующихся в тканях глаза челоaвека в ходе процессов естественной гликации [157].

Таким образом, нами было установлено, что при развитии ПОУГ происходит увеличение концентрации коллагена и увеличение Tm коллагена, однако уровень флуоресценции не возрастает, т.е. отмечается специфическое изменение состояния основного компонента матрикса склеральной ткани.

Как известно, синтез коллагена в тканях и его деградация матриксными металлопротеиназами протекают одновременно, поддерживая динамическое равновесие матрикса. Полученные результаты свидетельствуют о том, что в ткани склеры при глаукоме происходят патологические изменения, связанные со сдвигом этого тонкого равновесия, в результате скорость деградации коллагена уменьшается по сравнению со скоростью синтеза. Можно предполагать три вероятные причины увеличения содержания коллагена: а) рост активности фибробластов; б) уменьшение активности металлопротеиназ; в) усиление процессов сшивания, мешающего деградации коллагена. Последнее может происходить как за счет накопления продуктов естественной гликации, так и за счет увеличенной активности лизилоксидазы. Возможно наличие как одной из этих трех причин, так и сочетания двух или всех причин в разной степени.

Ферментативная деградация может в принципе затрудняться, если повышена доля поперечных сшивок [316, 348]. Поперечные сшивки стерически затрудняют доступ фермента к сайтам связывания, увеличивают плотность упаковки фибрилл в матриксе, кроме того, имеет место химическое модифицирование этих участков коллагеновых макромолекул. К тому же фрагментированные части матрикса остаются связанными вместе ковалентными поперечными связями, и поэтому намного большее количество разрушений участков полипептидной цепочки требуется для освобождения пептидных блоков в раствор.

Такой рост поперечных сшивок может быть вызван накоплением в склере конечных продуктов гликации (КПГ), связанный с активацией процессов патологического старения тканей глаза при глаукоме. Резкое повышение содержания КПГ в экстрацеллюлярном матриксе диска зрительного нерва, решетчатой мембране и сетчатке глаукомных глаз в последние годы описывалось в литературе [320]. Оно коррелирует с усиленной генерацией активных форм кислорода в сетчатке и ДЗН вследствие каскада процессов, запускаемых повышенным внутриглазным давлением [244, 254, 321]. Активные формы кислорода в присутствии имеющихся в биологических тканях ионов металлов способны ускорять процессы неферментной гликации [256]. Нельзя исключать, что воздействие активных форм кислорода может распространяться и на экстрацеллюлярный матрикс склеры, вплотную прилежащей к сетчатке. В этом случае отмеченное нами существенное накопление склерального коллагена обуславливается повышением протеолитической устойчивости сшитой склеры к действию тканевых матриксных металлопротеиназ. Кажется, что систематическое повышение температуры денатурации при прогрессировании ПОУГ косвенно подтверждает эту гипотезу. Действительно, рост Tm с увеличением числа поперечных сшивок является не только хорошо установленным фактом, но и количественной характеристикой степени сшивания как при приготовлении биоматериалов с заданными характеристиками [327], так и при патологических изменениях матрикса, например при диабете [264] или старении [185].

Однако данные флуорометрического анализа вступают в противоречие с этой гипотезой. При накоплении КПГ уровень флуоресценции возрастает, как это было показано на примере ткани роговицы, где с возрастом наблюдается четко выраженная корреляция между ростом уровня пентозидина и флуоресценции [258]. Мы же не обнаружили статистически значительных различий в уровне флуоресценции образцов всех стадий. Следует отметить и отсутствие статистически значимого возрастания орнитина в аминокислотном составе, более того, имеется тенденция к падению его уровня в образцах, относящихся к терминальной стадии. Орнитин является продуктом гидролиза модификаций аргинина, образующихся в белках под действием продуктов радикальноокислительной деструкции простых сахаров, и поэтому он может служить индикатором уровня гликации [275, 311, 312].

Можно предположить, что возрастание уровня поперечной связанности склеры в основном обусловлено не патологическим ускорением процессов неферментной гликации, а ростом активности лизил-оксидазы, приводящей к образованию в основном нефлуоресцирующих продуктов.

Нельзя отрицать возможность протекания и самой реакции гликации не до конечных продуктов, без образования флуорофоров. Однако между тремя группами образцов не было обнаружено никаких статистически значимых различий по содержанию лизина, оксилизина и их суммы, что дополнительно указывает на непричастность, либо слабое отношение процессов гликации к росту Tm, жесткости и содержания коллагена.

Имеются гипотезы, что при глаукомном процессе в трабекулярной сети больных глаз возрастает уровень транс-глутаминазы и индукторов её синтеза [189, 340]. Очевидно, их действие может легко распространяться и на непосредственно прилегающию к трабекулярной сети области склеры. Этот фермент способствует образованию поперечных сшивок амидной природы между аминокислотными остатками глутамина и (гидрокси)лизина. Подобные сшивки весьма устойчивы к нагреванию и должны оказывать влияние на рост Tm, однако вследствие своей аналогичности белковым пептидным связям будут полностью разлагаться при кислотном гидролизе, в результате чего изменение содержания глутамина и (гидрокси)лизина не будет детектироваться при аминокислотном анализе.



Pages:     | 1 |   ...   | 2 | 3 || 5 | 6 |   ...   | 8 |

Похожие работы:

«Гуськов Валентин Юрьевич МОРФОЛОГИЧЕСКАЯ И ГЕНЕТИЧЕСКАЯ ИЗМЕНЧИВОСТЬ БУРОГО МЕДВЕДЯ URSUS ARCTOS LINNAEUS, 1758 ДАЛЬНЕГО ВОСТОКА РОССИИ 03.02.04 – зоология Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель доктор биологических наук, с.н.с. А.П. Крюков Владивосток – 2015 Оглавление Введение Глава 1. Обзор...»

«МУХА (DIPTERA MUSCIDAE) КАК ПРОДУЦЕНТ КОРМОВОГО БЕЛКА ДЛЯ ПТИЦ НА ВОСТОКЕ КАЗАХСТАНА 16.02.02 – кормление сельскохозяйственных животных и технология кормов Диссертация на соискание ученой степени кандидата сельскохозяйственных наук КОЖЕБАЕВ БОЛАТПЕК ЖАНАХМЕТОВИЧ Научный руководитель – доктор биологических наук профессор Ж.М. Исимбеков...»

«Черкасова Анна Владимировна НОВЫЕ КАРОТИНСОДЕРЖАЩИЕ БАД: ПОЛУЧЕНИЕ, СВОЙСТВА И ПРИМЕНЕНИЕ ДЛЯ ОБОГАЩЕНИЯ МОЛОЧНЫХ ПРОДУКТОВ Специальность: 05.18.07– Биотехнология пищевых продуктов и биологических активных веществ Диссертация на соискание ученой степени кандидата технических наук Научный руководитель: доктор технических наук,...»

«Зубенко Александр Александрович СИНТЕЗ И ФАРМАКО-ТОКСИКОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ВЕТЕРИНАРНЫХ ПРОТИВОПАРАЗИТАРНЫХ И АНТИБАКТЕРИАЛЬНЫХ ПРЕПАРАТОВ В РЯДУ АЗОТСОДЕРЖАЩИХ ГЕТЕРОЦИКЛОВ 06.02.03 – ветеринарная фармакология с токсикологией ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени доктора биологических наук г. Новочеркасск – 2015 Содержание ВВЕДЕНИЕ.. 6 1.Обзор литературы..19 1.1. Проблема лекарственной устойчивости микроорганизмов и пути её преодоления..19 1.2. Проблема...»

«Кириллин Егор Владимирович ЭКОЛОГИЯ ОВЦЕБЫКА (OVIBOS MOSCHATUS ZIMMERMANN, 1780) В ТУНДРОВОЙ ЗОНЕ ЯКУТИИ 03.02.08 – экология Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: д. б. н., профессор Мордосов И. И. Якутск – 2015 Содержание Введение.. Глава 1. Краткая физико-географическая...»

«БУЛГАКОВА МАРИНА ДМИТРИЕВНА КАТАЛЕПТОГЕННАЯ АКТИВНОСТЬ ГАЛОПЕРИДОЛА У КРЫС И ЕЕ ИЗМЕНЕНИЕ В ЗАВИСИМОСТИ ОТ ФУНКЦИОНАЛЬНОГО СОСТОЯНИЯ ЯИЧНИКОВ И НАДПОЧЕЧНИКОВ 14.03.06 Фармакология, клиническая фармакология Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук НАУЧНЫЙ РУКОВОДИТЕЛЬ:...»

«БИТ-САВА Елена Михайловна МОЛЕКУЛЯРНО-БИОЛОГИЧЕСКОЕ ОБОСНОВАНИЕ ЛЕЧЕНИЯ BRCA1/СНЕК2/BLM-АССОЦИИРОВАННОГО И СПОРАДИЧЕСКОГО РАКА МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ Специальности: 14.01.12 – онкология 03.01.04 – биохимия ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени доктора медицинских наук Научный консультант: заслуженный деятель науки РФ, д.м.н., профессор, член-корр. РАН В.Ф. Семиглазов Научный консультант:...»

«Очиров Джангар Сергеевич НАРУШЕНИЯ МИКРОНУТРИЕНТНОГО СТАТУСА ОВЕЦ И ИХ КОРРЕКЦИЯ ВИТАМИННО-МИНЕРАЛЬНЫМИ КОМПЛЕКСАМИ 06.02.01 – диагностика болезней и терапия животных, патология, онкология и морфология животных ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: доктор ветеринарных...»

«Мамалова Хадижат Эдильсултановна БИОЛОГИЧЕСКАЯ И ХОЗЯЙСТВЕННАЯ ОЦЕНКА ПЕРСПЕКТИВНЫХ СОРТОВ ЯБЛОНИ В УСЛОВИЯХ ЧЕЧЕНСКОЙ РЕСПУБЛИКИ специальность: 06.01.08 – Плодоводство, виноградарство диссертация на соискание ученой степени кандидата сельскохозяйственных наук Научный руководитель, доктор сельскохозяйственных наук, доцент Заремук Римма...»

«Степина Елена Владимировна ЭКОЛОГО-ФЛОРИСТИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА СТЕПНОЙ РАСТИТЕЛЬНОСТИ ЮГО-ЗАПАДНЫХ РАЙОНОВ САРАТОВСКОЙ ОБЛАСТИ 03.02.08 – экология (биологические науки) Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: доктор...»

«Вафула Арнольд Мамати РАЗРАБОТКА ЭЛЕМЕНТОВ ТЕХНОЛОГИИ ВЫРАЩИВАНИЯ ПАПАЙИ ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ ЗДОРОВОГО ПОСАДОЧНОГО МАТЕРИАЛА И ЭКСТРАКТОВ С БИОПЕСТИЦИДНЫМИ СВОЙСТВАМИ ДЛЯ ЗАЩИТЫ ЕЕ ОТ ВРЕДНЫХ ОРГАНИЗМОВ Специальности: 06.01.07 – защита растений 06.01.01 – общее земледелие и растениеводство Диссертация на соискание ученой степени кандидата сельскохозяйственных...»

«БРИТАНОВ Николай Григорьевич ГИГИЕНИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ ПЕРЕПРОФИЛИРОВАНИЯ ИЛИ ЛИКВИДАЦИИ ОБЪЕКТОВ ПО ХРАНЕНИЮ И УНИЧТОЖЕНИЮ ХИМИЧЕСКОГО ОРУЖИЯ 14.02.01 Гигиена Диссертация на соискание ученой степени доктора медицинских наук Научный консультант: доктор медицинских наук, профессор...»

«Дандал Али Шебли ПАТОГЕНИТЕЧЕСКИЕ СВОЙСТВА ВИРУСА ИНФЕКЦИОННОГО БРОНХИТА КУР 06.02.02 «ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология» Диссертация на соискание ученой степени кандидата ветеринарных...»

«Фирстова Виктория Валерьевна ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНО-ИММУНОЛОГИЧЕСКОЕ ОБОСНОВАНИЕ ВЫБОРА СТРАТЕГИИ ОЦЕНКИ ПОСТВАКЦИНАЛЬНОГО ИММУНИТЕТА ПРОТИВ ЧУМЫ И ТУЛЯРЕМИИ 14.03.09 – Клиническая иммунология, аллергология Диссертация на соискание ученой степени доктора биологических...»

«РЫЛЬНИКОВ Валентин Андреевич ЭКОЛОГИЧЕСКИЕ ОСНОВЫ И ПОДХОДЫ К УПРАВЛЕНИЮ ЧИСЛЕННОСТЬЮ СИНАНТРОПНЫХ ВИДОВ ГРЫЗУНОВ (на примере серой крысы Rattus norvegicus Berk.) Специальность 03.00.16 – экология Диссертация на соискание ученой степени...»

«Петро ва Ю лия Геннад ь евна «ШКОЛА УХОДА ЗА ПАЦИЕНТАМИ» ПР И ПР ОВЕДЕНИИ МЕДИЦИНСКОЙ Р ЕАБИЛИТАЦИИ ПОСЛЕ ЦЕР ЕБР АЛЬНОГО ИНСУЛЬ ТА 14.01.11 – нервные болезни ДИССЕРТАЦИЯ на соискание учёной степени кандидата медицинских наук Научный руководитель: доктор медицинских наук, Пряников И.В. профессор Москва – 2015 стр ВВЕДЕНИЕ ГЛАВА 1. СПЕЦИФИКА И ОСОБЕННОСТИ ПРОВЕДЕНИЯ МЕДИЦИНСКОЙ...»

«ЯМБОРКО Алексей Владимирович ПОПУЛЯЦИОННАЯ ЭКОЛОГИЯ ЛЕСНЫХ ПОЛЕВОК (род CLETHRIONOMYS) СЕВЕРО-ВОСТОЧНОЙ АЗИИ Специальность 03.02.08 – экология Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: доктор биологических наук Н.Е. Докучаев Магадан – 2015 ОГЛАВЛЕНИЕ ВВЕДЕНИЕ.. Глава 1. МАТЕРИАЛ И...»

«Ульянова Онега Владимировна МЕТОДОЛОГИЯ ПОВЫШЕНИЯ БЕЗОПАСНОСТИ БАКТЕРИАЛЬНЫХ ВАКЦИН НА МОДЕЛИ ВАКЦИННЫХ ШТАММОВ BRUCELLA ABORTUS 19 BA, FRANCISELLA TULARENSIS 15 НИИЭГ, YERSINIA PESTIS EV НИИЭГ 03.02.03 – микробиология Диссертация на соискание ученой степени доктора биологических наук Научный консультант:...»

«Мануйлов Виктор Александрович Генетическое разнообразие вируса гепатита В в группах коренного населения Сибири 03.01.00 – молекулярная биология Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: член-корр. РАН, профессор, д.б.н. С.В. Нетесов...»

«ХОАНГ ЗИЕУ ЛИНЬ ЭКОЛОГИЗАЦИЯ ЗАЩИТЫ КАПУСТНЫХ КУЛЬТУР ОТ ОСНОВНЫХ ЧЕШУЕКРЫЛЫХ ВРЕДИТЕЛЕЙ В УСЛОВИЯХ МОСКОВСКОГО РЕГИОНА Специальность: 06.01.07 – защита растений Диссертация на соискание учёной степени кандидата биологических наук Научный руководитель: Попова Татьяна Алексеевна, кандидат биологических наук, доцент...»







 
2016 www.konf.x-pdf.ru - «Бесплатная электронная библиотека - Авторефераты, диссертации, конференции»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.