WWW.KONF.X-PDF.RU
БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА - Авторефераты, диссертации, конференции
 


Pages:     | 1 | 2 || 4 | 5 |   ...   | 8 |

«МНОГОУРОВНЕВЫЙ АНАЛИЗ СОСТОЯНИЯ КОРНЕОСКЛЕРАЛЬНОЙ ОБОЛОЧКИ ГЛАЗА В РЕАЛИЗАЦИИ НОВЫХ ПОДХОДОВ К ДИАГНОСТИКЕ И ЛЕЧЕНИЮ ПЕРВИЧНОЙ ОТКРЫТОУГОЛЬНОЙ ГЛАУКОМЫ ...»

-- [ Страница 3 ] --

Это биосовместимый склеропластический материал Ксенопласт представляет собой костный коллаген типа I животного происхождения (ксеноткань), изготовленный в виде пластин размером 10110 мм. Он имеет пористую структуру, которая обеспечивает надежный контакт склеры и имплантируемого коллагена. Имплантат биологически инертен за счет отсутствия неколлагеновых белков. Полученные авторами данные показывают, что только снижение ВГД до толерантного уровня и низкий уровень флюктуации недостаточны для стабилизации зрительных функций.

Улучшение зрительных функций, связаное с введением биологического материала Ксенопласт в субтеноновое пространство к заднему полюсу глаза улучшает микрогемодинамику и биомеханические характеристики склеры в зоне решетчатой пластинки диска зрительного нерва. Этот факт, наряду с хорошим гипотензивным эффектом операции, способствует сохранению и улучшению зрительных функций. Механическое воздействие биологического материала Ксенопласт на склеру в перипапиллярной зоне в раннем послеоперационном периоде приводит к «утолщению» слоя нервных волокон за счет «сжатия»

склеры. В отдаленном послеоперационном периоде данный эффект закрепляется за счет интеграции биологического коллагена и подлежащей склеры [15-20].

Представление о механическом повреждении структур зрительного нерва при повышении внутриглазного давления при глаукоме привело к появлению нагрузочных проб, основанных на создании искусственной гипертензии и сравнении параметров, полученных до и во время такой нагрузки. В разные годы были разработаны пробы в сочетании с компрессионной нагрузкой [172, 322, 323]. Многие пробы основанны на регистрации кампиметрических или периметрических данных: водно-питьевая кампиметрическая проба П.Е.

Тихомирова - Е.И. Устиновой [115], кампиметрическая проба А.Н. Добромыслова с повышением венозного давления (опыт Вальсальвы) [45], компрессионнокампиметрическая проба А.М. Водовозова и С.В. Балалина [28, 29] и другие. Уже более тридцати лет в клинической практике широко применяется вакуумпериметрическая проба (ВПП) В.В. Волкова, Л.Б. Сухинина, Э.Л. Тер-Андриасова [36]. В 2001 г. Ю.С. Астахов и Н.Ю. Даль [23] предложили повышать ВГД с помощью вакуумной склеральной чашечки-присоски, то есть герметичная очковая оправа была заменена на чашечку-присоску. Это позволило контролировать уровень офтальмотонуса при помощи аппланационной тонометрии по Гольдману и дозировать нагрузку [23, 24]. Количество исследуемых точек центрального поля зрения (ЦПЗ) было увеличено, а для контроля за его состоянием в условиях индуцированной офтальмогипертензии стали использовать автоматический статический периметр "Периком", выпускаемый отечественной промышленностью серийно. Эта модицирванная проба получила название вакуум-компрессионный автоматизированный тест (ВКАТ). Исследования показали, что ВКАТ по ряду параметров превосходит вакуум-периметрическую пробу. Результаты проб, основанных на регистрации периметрических или капиметрических данных в той или иной мере носят субъективный характер, так как зависят от показаний обследуемых [21].

Многие авторы указывают на то, что при глаукоме наблюдаются изменения амплитудно-временных характеристик электрического ретинального ответа [35, 126, 197, 283, 309, 338, 349]. Так, в 1974 г. O. Benedikt и G. Bartl установили, что в условиях повышенного офтальмотонуса в ответ на вспышку света снижаются амплитудные показатели (ЗВКП) [143, 144]. R. Stodtmeister, L. Pillunat (1988) количественно оценивали сдвиги показателей ЗВКП вусловиях дозированной компрессии с использованием эпибульбарной вакуумной чашечки-присоски [284, 285]. Снижение амплитуды зрительных потенциалов авторы рассматривали как результат нарушения ауторегуляции кровотока в зрительном нерве и подтвердили, что именно компрессия глазного яблока является адекватной нагрузкой при предрасположенности к глаукоме [343].

Впервые Н.В. Морозова и др. в 1999 году предложила в качестве модификации ВПП вакуум-компрессионную пробу с контролем зрительных вызванных корковых потенциалов [93]. Такой вариант пробы носит объективный характер, то есть не зависит от показаний пациента.

В 2003 году была разработана объективная, высокоинформативная вакуумкомпрессионная проба с электрофизиологическим контролем [94]. Проба позволяет оценить толерантность зрительного нерва к повышению внутриглазного давления с помощью зрительных вызванных корковых потенциалов и применяется для диагностики глаукомы и оценки ее стабилизации при низкой остроте зрения и непрозрачных оптических средах и обладает высокой информативностью. В этой связи логично предположить, что изменение зрительных вызванных корковых потенциалов (ЗВКП) на повышение ВГД может служить объективным критерием для оценки стабилизации глаукомы.

Особый интерес представляют работы, посвященные оценке поведения решетчатой пластинки при искусственном повышении ВГД in vivo, в частности, проба, предложенная Ю.С. Астаховым и E.JI. Акоповым, которая позволяет с помощью ретинальной томографии (HRT) оценить изменение глубины экскавации ДЗН при дозированном искусственном повышении ВГД [24].

Результаты этой пробы показывают, что, в отличие от здоровых лиц, у пациентов с глаукомой при вакуумной нагрузке наблюдается существенное увеличение экскавации ДЗН по глубине и площади. Это можно расценивать как подтверждение того, что вакуумная компрессия является адекватной нагрузкой для оценки глаукоматозного процесса и обоснованной для проведения нагрузочных проб.

Появление возможности наблюдать за изменениями диска зрительного нерва при дозированной вакуумной нагрузке позволяет перейти на качественно новый уровень диагностики. Такой вариант пробы позволяет получать более объективные данные. Интересное исследование провели C. Leydolt et al. в 2008 г.

Они определили изменение переднезадней оси глаза (ПЗО) и глубины передней камеры в результате механического повышения давления в естественных условиях. Биометрические измерения проводили с помощью лазерной интерферометрии. В результате повышения ВГД на 10 и 20 мм рт.ст. ПЗО увеличилась на 0,23 и 0,39 мм, соответственно. После механической окулокомпрессии ВГД уменьшилось на 5,1 мм рт.ст. и соответственно уменьшилась ПЗО на 0,7 мм, то есть наблюдалась значимая корреляция между этими параметрами. Глубина передней камеры при повышении ВГД не изменялась, но при уменьшении давления увеличивалась на 0,3 мм [248]. Таким образом, накопленные данные говорят о возможности использования компрессионных проб для диагностики глаукомы и для прижизненного изучения биомеханических особенностей глаз, пораженных глаукомой. Можно предположить, что правильная оценка изменений параметров ДЗН и биомеханики глаза на фоне компрессионной гипертензии может иметь диагностическую значимость у лиц с подозрением на глаукому. Информация об особенностях деформаций в области ДЗН при компрессионной нагрузке может расширить наши представления о механизмах развития экскавации ДЗН и позволит обосновать некоторые новые методы ее лечения.

Таким образом, несмотря на широкое изучение актуальных проблем диагностики и лечения ПОУГ, проблема комплексного исследования состояния корнеосклеральной оболочки глаза в контексте обоснования новых подходов к патогенезу, диагностике и лечению ПОУГ несомненно может явиться предметом отдельного научного исследования.

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Для решения поставленных задач комплексом методов (мультифотонной микроскопии,термомеханического, биохимического ифлуоресцентного анализа, микроэлементного анализа,вакуум- компрессионной нагрузочной пробы, клинико-инструментального исследования офтальмологического статуса) было обследовано 426 пациентов, исследовано 182 образца.

2.1. Материал, исследованный с помощью мультифотонной микроскопии

В рамках данного исследования изучены 22 образца склеры, полученные во время проведения непроникающей глубокой склерэктомии (НГСЭ) у пациентов в возрасте 61-64 лет (средний возраст 62,7±1,2 года) с I, II и III стадией ПОУГ.

Контролем служили образцы склеры 6 глаз в возрасте 52-57 лет (средний возраст 55,2±1,3 года), которые были получены при хирургическом лечении острой травмы глазного яблока у больных, которые ранее не имели никакой офтальмопатологии.

Для получения ГВГ и ДФФ изображений склеральные лоскуты фиксировали в 10% растворе нейтрального формалина. Перед съемкой препараты ткани помещались между покровными стеклами.

Изображения получали с помощью системы лазерной сканирующей микроскопии LSM 510 META (Carl Zeiss, Германия). Нелинейное возбуждение осуществлялось импульсным (100 фс) излучением Ti: сапфир-лазера (Mai Tai HP, Spectra Physics, США) с длиной волны 800 нм и частотой повторения импульсов 80 MГц. Два сигнала регистрировались одновременно на двух спектральных детекторах: с фильтрами 362-415 нм для сигнала второй гармоники и ГВГ изображения и 512-576 нм для сигнала автофлуоресценции и формирования ДФФ изображения. Изображение среза получалось с помощью объектива типа Plan-Neofluar (Carl Zeiss) с увеличением 40 и представляло поле 225225 мкм. Каждая линия изображения усреднялась по 8 сканам для улучшения отношения “сигнал-шум”. Изображения анализировали с помощью программного обеспечения Zeiss LSM Image Browser (Carl Zeiss Micro Imaging, Inc.) Для верификации полученных результатов путем сравнения их с данными гистологии после обезвоживания и заливки ткани в парафин срезы склеры 4-5 мкм толщиной исследовали также методом световой микроскопии с окраской гематоксилин-эозином, пикрофуксином по Ван-Гизону на коллагеновые волокна, орсеином по методу Унна на эластические волокна и методом комбинированной окраски коллагеновых и эластических волокон. Изучение и анализ гистологических препаратов проводили с использованием светового микроскопа Olympus BX51, оснащенного цифровой видеокамерой «SDU-252»

(«Спецтелетехника», Россия). Микрофотографирование препаратов проводилось помощью этой камеры и программы Launch Cam View.

2.2. Материал, исследованный с помощью термомеханического, биохимического и флуоресцентного анализа С целью изучения структурно-биомеханических особенностей склеральной ткани глаукомных глаз у 75 пациентов в возрасте 50-91 года (средний возраст 67,4±7,5 лет) с различными стадиями ПОУГ во время проведения НГСЭ были взяты образцы склеры и у 12 пациентов в возрасте 53-58 лет (средний возраст 55,8±1,7 лет) - образцы теноновой капсулы. Всем пациентам проведено поперечное клинико-инструментальное исследование офтальмологического статуса. У 8 пациентов без глаукомы (группа контроля) в возрасте 43-47 лет (средний возраст 45,1±0,9 лет) были взяты образцы теноновой капсулы во время операции исправления косоглазия или посттравматического вмешательства.

Первым этапом хирургии выполнялось формирование конъюнктивального лоскута по лимбу основанием к своду, вторым этапом формировалсяповерхностный склеральный лоскут размером 4х4 мм и третьим этапом удалялся глубокий лоскут склеры вместе с наружной стенкой шлеммова канала и полоской стромы роговицы с обнажением трабекулы и десцеметовой мембраны. Анализировался удаленный склеральный лоскут. На рисунке 5 представлены этапы проведения НГСЭ.

Рисунок 5 - Этапы проведения НГСЭ Пациенты были разделены на три возрастных группы: возрастная группа 50лет состояла из 21 пациента, группа 60-69 лет - из 22 пациентов, группа старше 70 лет - из 32 пациентов; в том числе с 1-ой стадией ПОУГ было 19 глаз, со 2-ой стадией - 24 глаза, с 3-ей стадией - 32 глаза.

Для оценки структурных (термомеханических) показателей склеры использовали современный высокотехнологичный метод дифференциальной сканирующей калориметрии (ДСК). Термическая стабильность коллагена характеризуется температурой и теплотой денатурации (соответственно, Tm и Hm). Для оценки уровня внутри- и межмолекулярной связанности соединительной ткани мы использовали значение температуры пика эндотермического перехода спираль-клубок (Tm). Значение Hm определяется энергией, необходимой для разрушения связей, стабилизирующих тройную спираль нативных макромолекул коллагена. Обе характеристики определяют методом ДСК. Величина Hm отражает количество интактных макромолекул коллагена в ткани и количество стабилизирующих связей. Для определения уровня поперечной связанности проанализированы ДСК термограммы склеры, полученные с помощью калориметра «Phoenix DSC 204» (Netzsch, Германия).

Образцы склеры массой 5-10 мг герметично закрывали в стандартных алюминиевых чашках (40µl), образцом сравнения служила аналогичная пустая чашка. Начальная и конечная температуры, а также скорость нагрева для калориметрического исследования склеральной ткани составляли 0С, 100С, 10 K/мин, соответственно. Энтальпию перехода рассчитывали на 1 грамм коллагена.

Содержание коллагена в образцах определяли путем измерения гидроксипролина в кислотном гидролизате ткани, используя модификацию метода J.Wossner[343] и коэффициент пересчета 7,5. Установлено, что коллаген насчитывает около 70% сухого веса ткани. Тепловые эффекты пересчитывали на содержание коллагена в образце.

Аминокислотный состав упаренного гидролизата склеры определяли с помощью аминокислотного анализатора (Hitachi-835, Япония) (рисунок 6) с предварительным катионообменным разделением и последующей фотометрической реакцией с нингидрином. Данные исследования проведены совместно с сотрудником МГУ им. М.В. Ломоносова канд. хим. наук Н.Ю.

Игнатьевой.

Рисунок 6 - Аминокислотный анализатор (Hitachi-835, Япония)

После термического анализа образцы использовались для флуоресцентного анализа. Их растворяли в 0,4 мл 0.2% раствора папаина (Sigma; 2.4 U/mg, №EC 3.4.22.2) при 60°С в течение 1 ч. Спектры флуоресценции регистрировали на спектрофлюорофотометре СМ2203 («Солар», Белоруссия) при ex = 370 нм в диапазоне 400-470 нм (щель монохроматоров возбуждения/испускания 5 нм).

Интенсивность флуоресценции нормировали на массу коллагена в образцах. Для этого аликвоту папаината (0,2 мл) гидролизовали согласно A. Tsugita [324] и определяли гидроксипролин по модифицированному методу J. Wossner [343].

Наличие продуктов гидролиза папаина не оказывает влияния на точность измерений [326].

2.3. Материал, исследованный с помощью микроэлементного анализа

В первой части работы проведено одномоментное (поперечное) клиникоинструментальное исследование офтальмологического статуса и микроэлементный анализ проб водянистой влаги (0,1-0,2 мл) и образцов склеральной ткани 23 пациентов в возрасте 53-79 лет (средний возраст 64,2±7,8 года) с различными стадиями ПОУГ. Образцы склеры были получены при синустрабекулэктомии с профилактической задней трепанацией склеры. Был также проведен анализ 10 образцов сетчатки, полученных в результате эвисцерации глаз с терминальной стадией глаукомы. Контролем служили пробы камерной влаги, полученные при экстракции незрелой сенильной катаракты у 18 пациентов в возрасте 54-70 лет (средний возраст 62,3±4,9 лет), а также ткани глаз без глаукомы той же возрастной группы, удаленных вследствие тяжелой глазной травмы.

Микроэлементный анализ слезной жидкости, влаги и склеры проводили на масс-спектрометре с ионизацией в индуктивно-связанной плазме фирмы “Перкин Элмер” ELANDRCII (США) (рисунок 7).

Рисунок 7 - Масс-спектрометр с ионизацией в индуктивно-связанной плазме фирмы “Перкин Элмер” ELANDRCII (США) Для пробоподготовки образцы водянистой влаги отбирались микродозатором в объеме 60-100 мкл в зависимости от количества исходного образца и помещались в тефлоновый автоклав типа “тефлоновая бомба”, в который добавлялось 0,5 мл 70% HNO3 (ОСЧ) и 0,1 мл 30% Н2О2. Затем автоклав помещали в микроволновую систему пробоподготовки, аналогичную MD-2000 (CEM, США) обеспечивающую более высокие давление и температуру кипения HNO3. Разложение образцов производилось в течение 15 мин в три этапа по схеме нагрев-охлаждение. После охлаждения в течение 10-15 мин полученные растворы разбавлялись в 5 раз бидистиллированной и деионизированной водой. Отдельно был приготовлен “холостой раствор” с содержанием HNO 3, Н2О2 и Н2О (бидистиллированной и деионизированной) в пропорциях, идентичных их содержанию в исследуемых образцах. В качестве внутреннего стандарта в растворы вводили индий в концентрации 25 мкг/л. Калибровочные растворы были приготовлены из стандартных растворов фирмы VTRC с известным содержанием в диапазоне 5-1000 мкг/л (10-7%).

Анализ содержания 11 микроэлементов (Zn, Cu, Fe, Al, B, Ba, Si, Ca, Mg, Mn, Ti) проводился с использованием атомноабсорбционного спектрофотометра AS-3 и хроматомасспектрометра с источником ионов в виде индуктивно-связанной плазмы ELAN 6100-ICP (Perkin-Elmer), рабочая мощность СВЧ генератора 1,3 кВт, расход плазмообразующего газа (аргон) 14 л/мин, расход транспортирующего газа 0,89 мл/мин. Проводилось 3 экспозиции каждого образца, время интегрирования сигнала 60 с. Результаты анализа “холостой пробы” автоматически вычитались в анализе. Единицы измерения исследованных элементов - мкг/кг (ppb).

Во второй части работы проведен анализ результатов динамического исследования 61 пациента (69 глаз) с различными стадиями компенсированной ПОУГ, из них 32 пациента (38 неоперированных глаз) в возрасте 48-74 лет (средний возраст 61,1±3,5 года) составили основную группу и 29 пациентов (31 неоперированный глаз) в возрасте 49-79 лет (средний возраст 63,7±3,7 года) группу контроля. Пациентам основной группы на фоне инстилляционного гипотензивного режима (включавшего в зависимости от индивидуального состояния бета-блокаторы, ингибиторы карбоангидразы, аналоги простагландинов) для коррекции дефицита магния в качестве дополнительного средства назначали перорально препарат магнерот в соответствии с инструкцией по его применению: ежедневно по 2 табл. 3 раза в день в течение 7 дней, затем по 1 табл. 2-3 раза в день. Общая продолжительность приема препарата составляла 8 недель. Магнерот (ВЕРВАГ ФАРМА ГмбХ и КоКг, ФРГ) содержит магний в биодоступной форме - в виде магния оротата дигидрата (32,8 мг в пересчете на чистый магний), что усиливает его абсорбцию и транспорт в клетку (А.Ю.

Гоголев и др., 2010). Препарат Магнерот содержит оротовую кислоту, в связи с этим обладает не только высокой биодоступностью, но и рядом дополнительных (синергичных) эффектов, связанных с ее биологической ролью. Важным преимуществом этого препарата является его самостоятельное кардиопротекторное и антисклеротическое действие, что, безусловно, важно для пациентов старшего возраста с ПОУГ. Препарат положительно воздействует на энергетический метаболизм, структуру соединительной ткани, сосудистый тонус и обладает нейропротекторным действием (А.Ю. Гоголев и др., 2010). Пациенты группы контроля находились на аналогичном индивидуальном гипотензивном режиме, но магнерот не применяли. У 23 пациентов 51-69 лет (средний возраст 61,1±2,5 года) основной группы проведен микроэлементный анализ проб слезной жидкости, взятых до и после курса лечения магнеротом.

До лечения, непосредственно после него и через 3 мес. после его окончания оценивали субъективные и объективные показатели структурно-функционального состояния органа зрения.

2.4. Описание групп пациентов, обследованных с использованием вакуумкомпрессионной нагрузочной пробы Обследованы 71 больной (82 глаза) с подозрением на глаукому и верифицированным диагнозом ПОУГ в возрасте от 51 до 80 лет (средний возраст 65,4±6,9 года): с подозрением на глаукому - 29 глаз, с ПОУГ - 32 глаза, с ПОУГ после проведения периневральной склеропластики (ПС) материалом Ксенопласт глаз. Материал Ксенопласт представляет собой костный коллаген типа I животного происхождения (ксеноткань), изготовленный в виде пластин размером 10110 мм (рисунок 8) (сертификат соответствия № POCCRU.ИМ05.В03301 от 27.01.2009г.).

Рисунок 8 - Материал для коллагенопластики Ксенопласт

Это биосовместимый склеро-пластический материал, имеющий пористую структуру, которая обеспечивает надежный контакт склеры и имплантируемого коллагена. Имплантат биологически инертен за счет отсутствия неколлагеновых белков. Используется для улучшения биомеханических характеристик склеры в зоне решетчатой пластинки диска зрительного нерва.

Техника проведения операции коллагенопластики дренажных путей и заднего полюса глаза.

Проводят разрез конъюнктивы и теноновой капсулы отступя 6-8 мм от лимба длиной 5-6 мм в трех квадрантах (нижне-наружном, нижне-внутреннем и верхне-наружном). Затем шпателем формируют три кармана в субтеноновом пространстве глубиной 15-20 мм к заднему полюсу глазного яблока. Из пластины материала Ксенопласт выкраивают лоскуты размером1010 мм. При помощи шпателя каждый лоскут имплантируют в сформированный в субтеноновом пространстве карман к заднему полюсу глазного яблока непосредственно к зоне решетчатой пластинки зрительного нерва (рисунок 9).

Рисунок 9 - Имплантация материала Ксенопласт при периневральной склеропластике в верхне-наружный, верхне-внутренний и нижне-наружный квадранты Для сравнительной оценки полученных показателей проведено исследование биомеханических свойств оболочек глаза и параметров ДЗН в условиях дозированного подъема ВГД 31 человека без офтальмопатологии (59 глаз), которые составили контрольную группу. Средний возраст здоровых лиц не отличался от такового в группах наблюдения и составил 62,8±6,7 лет (от 49 до 78 лет).

В группу больных с подозрением на глаукому вошли лица, имеющие в анамнезе эпизоды повышения ВГД без офтальмоскопических изменений ДЗН и полей зрения.

При проведении исследования дозированное повышение ВГД достигалось при помощи накладываемой на глаз чашечки-присоски, соединенной трубочкой с вакуумным насосом. Для этого применяли индикатор вакуумкомпрессионноготеста (фирма СКТБ офтальмологического приборостроения «Оптимед», Россия) (рисунок 10).

Рисунок 10 - Индикатор вакуум-компрессионного теста (фирма СКТБ офтальмологического приборостроения «Оптимед», Россия) Все исследования проводили на двух уровнях вакуума (уменьшение давления в системе относительно атмосферного создавалось на -60 и -80 мм рт.ст.). ВГД контролировали с помощью аппланационного тонометра (ORA, Reichert, США), при этом регистрировали как исходные значения корнеального гистерезиса (КГ) и фактора резистентности роговицы (ФРР), так и значения этих параметров на разных уровнях нагрузки. Измерение ВГД включало в себя регистрацию ВГД по Гольдману (ВГДг) и так называемого роговичнокомпенсированного давления (ВГДрк). Структурные изменения ДЗН в ходе компрессионных нагрузок фиксировали методом оптической когерентной томографии (ОКТ, Stratus, Сarl Zeiss, ФРГ).

Для этого регистрировали ОКТ снимки ДЗН до вакуум-компрессионной нагрузки и в условиях дозированной вакуум-компрессионной нагрузки.

–  –  –

Для этого 58 пациентам (63 глаза) с ПОУГ было проведено динамическое исследование в сроки от 36 до 42 месяцев. Средний возраст пациентов составил 69,6±5,2 года при разбросе показателей от 56 до 84лет.

Частота распределения пациентов по возрасту и полу представлена на рисунках 11 и 12.

–  –  –

Исследование было разделено на две части. Для проведения первой части исследования пациенты были разделены на 2 группы в зависимости от значения КГ. Значение КГ в 1-ой группе (37 глаз) соответствовало норме и составило 8,3мм рт.ст., а во 2-й (25 глаз) значение КГ было снижено и составило 5,6-8,2 ммрт.ст. Основанием для такого разделения значений стал разброс показателей КГ в 95% доверительном интервале в норме (от 8,2 до 12,6 мм рт.ст.). Во второй части исследования пациентам 2-ой группы с низким значением КГ была проведена замена гипотензивной терапии с назначением аналогов простагландинов (латанопроста, травопроста) по следующей инстилляционной схеме - по 1 капле 1 раз в день с интервалом в 24 часа.

Из сопутствующей офтальмопатологии отмечали начальную катаракту, из соматических заболеваний - гипертоническую болезнь, ишемическую болезнь сердца, атеросклероз, хронический гастрит вне фазы обострения, энтероколит, остеохондроз. Больных с сахарным диабетом, аутоиммунными заболеваниями в исследование не включали. Другими критериями исключения являлись также:

сопутствующая офтальмопатология заднего отрезка глаза (диабетическая ретинопатия, возрастная макулярная дегенерация выраженных стадий, передняя ишемическая нейропатия и ее последствия и прочие состояния сетчатки и зрительного нерва, приводящие к стойкому снижению зрительных функций);

нарушения рефракции (аметропия выше 3 дптр или астигматизм выше 0,5 дптр), а также серьезные системные заболевания, требующие постоянного применения системной терапии.

Из анамнестических данных особое внимание уделяли наследственной отягощенности по глаукоме, длительности заболевания глаукомой, динамике зрительных функций.

2.6. Общие методы исследования Всем пациентам для клинико-инструментального исследования офтальмологического статуса пациентов проводили визометрию, авторефрактометрию, компьютерную периметрию, биомикроскопию, гониоскопию, офтальмоскопию, тонометрию методом Маклакова (грузом 10 Г), тонографию (Глаутест 60, Россия), ретинотомографию, исследование биомеханических свойств глаза.

Визометрию осуществляли с помощью проектора оптотипов SZP 350 фирмы Zeiss (Германия). При этом проводили максимально возможную коррекцию зрения с учетом данных, полученных авторефрактометрией.

Измерение преломляющей силы и радиуса кривизны роговицы проводили на автоматическом рефракто-офтальмометре Zeiss Humphrey Systems 599 (Германия). По паспортным данным погрешность прибора находится в пределах ± 0,25 дптр.

Состояние полей зрения оценивали на автоматическом, проекционном компьютерном периметре Octopus 900 (Haag-Streit, Швейцария). Использовали стандартную пороговую программу 30-2, рекомендуемую для диагностики и мониторинга глаукомы и включающую в исследование 76 точек центрального поля зрения, расположенных в пределах 30° от точки фиксации с шагом в 4°.

Анализировали три основных показателя, отражающих данные периметрии: MS (mean sensitivity) - средняя внутригрупповая светочувствительность и сумму пороговых значений светочувствительности сетчатки в каждом квадранте (децибел (дБ)), МD (mean deviation) - среднее отклонение дефекта в анализируемой группе от возрастной нормы; PSD или sLV (corrected loss variance)

- корректированная внутригрупповая вариабельность снижения светочувствительности (отражает выраженность очаговых изменений). Значение sLV приравнивается значению среднеквадратичного отклонения PSD (pattern standart deviation).

-MD (mean deviation) - среднее отклонение светочувствительности сетчатки, исследуемой в каждой точке порогового тестирования, от аналогичного результата, характерного для средней возрастной нормы. Значения чувствительности меньше нормальных отмечаются знаком «минус» (обозначают девиацию). Показатель MD отражает главным образом размеры дефекта полей зрения.

-PSD или sLV (pattern standart deviation или corrected loss variance) внутригрупповая вариабельность дефектов. Сравнивает результаты в тестируемых точках между собой и таким образом показывает, насколько полученная у данного пациента форма холма зрения отклоняется от нормальной.

Показатель sLV указывает на локализацию дефектов в холме зрения.

Поскольку изменения полей зрения являются одним из критериев прогрессирования глаукомной оптической нейропатии верификация пороговых изменений подтверждалась повторными тестированиями.

Биомикроскопию проводили на щелевой лампе Opton 30 SL-M (Германия).

Оценивали состояние конъюнктивы, роговицы, глубины передней камеры;

структуры и изохромности радужной оболочки; состояние пигментной каймы зрачка и его реакция на свет; наличие и локализация помутнений в хрусталике, состояние стекловидного тела.

Исследование дренажной зоны и угла переднй камеры (УПК) проводили с использованием 4-зеркального гониоскопа Ван-Бойнингена. Оценивали степень открытия УПК, выраженность пигментации дренажной зоны, состояние корня радужной оболочки, выраженность гребенчатой связки.

При офтальмоскопии глазного дна с помощью ручного прямого офтальмоскопа фирмы Heine (Германия) оценивали состояние диска зрительного нерва (ДЗН), его размер и форму; цвет и равномерность нейроретинального ободка (НРП); локализацию, форму и глубину экскавации, соотношение ее размера к размеру ДЗН; положение сосудистого пучка, наличие и степень выраженности перипапиллярной атрофии (ППА) - -зоны.

Ретинотомографическое исследование проводили по методу оптической когерентной томографии (ОКТ) на приборе Stratus ОСТ 3000 (Carl Zeiss) (рисунок 13).

Это оптический метод исследования, позволяющий отображать структуру биологических тканей организма в поперечном срезе с высоким уровнем разрешения, обеспечивая получение прижизненной морфологической информации на микроскопическом уровне. Действие ОКТ основано на принципе низкокогерентной интерферометрии. Метод позволяет оценить величину и глубину светового сигнала, отражённого от различных по оптическим свойствам тканей. Осевое разрешение порядка 10 мкм обеспечивает хорошее отображения тканевых микроструктур.

Рисунок 13 - Оптический когерентный томограф Stratus OCT Методом ОКТ определяют эхозадержку отражённой световой волны с измерением интенсивности и глубины сигнала. При фокусировании на тканимишени светового луча происходит его рассеяние и частичное отражение от внутренних микроструктур на различных глубинах исследуемых тканей.

Низкокогерентный луч света инфракрасного спектра с длиной волны 830 нм (для визуализации сетчатки) разделяется на два пучка, один из которых направляется к исследуемым тканям, а другой (контрольный) - к специальному зеркалу.

Отражаясь, оба воспринимаются фотодетектором, образуя интерференционную картину. Она, в свою очередь, анализируется программным обеспечением, и результаты представляются в виде псевдоизображения, где в соответствии с предустановленной шкалой участки с высокой степенью отражения света окрашиваются в «теплые» (красный) цвета, с низкой - в «холодные» вплоть до черного.

Анализировали состояние головки зрительного нерва (Optic Nerve Head Analysis) и толщину слоя нервных волокон сетчатки (СНВС) (RNFL Thickness Average Analysis). Для анализа состояния головки зрительного нерва проводили радиальное линейное сканирование (позволяет получить кроссекционные срезы, на которых хорошо виден профиль экскавации и нейроретинального ободка зрительного нерва. При этом края диска четко визуализируются, их положение определяется объективно (автоматически) по границе интенсивно рефлектирующего пигментного эпителия. Результаты сканирования ДЗН анализируются показателями 6 радиальных сканов.

Измерение толщины СНВС проводится по результатам сканирования перипапиллярной зоны диаметром 2,27 и 3,46 мм концентрично окружности диска зрительного нерва по программе RNFL Thickness и Fast RNFL Thickness (Retinal Nerve Fiber Layer). Результаты измерения толщины СНВС представляются в виде графика-развертки TSNIT и статистически сопоставляются с нормативной базой данных, дифференцированной по возрасту. Проводили также сравнительный анализ серии последовательных томограмм СНВС (RNFL Thickness Serial Analysis). Используется для сравнения динамических изменений толщины слоя нервных волокон с течением времени.

Интенсивность ОКТ сигнала ранжируется от 0 (слабый) до 10 (сильный).

Алгоритм анализа применялся к сканограммам с уровнем сигнала выше 7. При проведении ОКТ исключали результаты с артефактами, связанные с отсутствием фиксации и непроизвольными движениями глазного яблока. Результаты ОКТ сканирования включали качественную оценку оптических срезов, а также количественную оценку. Полученные результаты сравнивали с нормативной базой, заложенной в приборе, и представленной в виде цветовой шкалы распределения нормы в популяции. Так, 90% измерений в нормальной популяции представлены зеленым цветом (5% - 95%).

Граница пигментного эпителия сетчатки (ПЭС) отмечена голубыми маркерами на сканограмме и красной линией на схеме. Из ретинотомографических параметров анализировали:

- площадь ДЗН (disc area, mm2) - полную площадь в границах красной линии;

- диаметр ДЗН (disc diameter, mm) - измеряется по линии, соединяющей по диаметру границы пигментного эпителия;

- площадь экскавации (cup area, mm2) - площадь в границах зеленой линии;

- диаметр экскавации (cup diameter, mm) - измеряется по линии, параллельной и расположенной на 150 микрон кпереди от линии диаметра диска;

- площадь НРП (rim area, mm2) - площадь ДЗН минус площадь экскавации;

- интегральный параметр площади НРП (horizontal integrated rim area, mm2) подсчитывается методом умножения его ширины (средний показатель по 6 срезам) на окружность диска;

- отношение площади экскавации к площади ДЗН (cup/disc area ratio);

- отношение площади экскавации к площади ДЗН по вертикали(cup/discvert.

ratio);

- отношение площади экскавации к площади ДЗН по горизонтали (cup/disc horiz. ratio);

- объём экскавации (cup volume, mm3) - объём экскавации в соответствии с топографическим изображением;

- объём НРП (vertically integrated rim vol., mm3) - подсчитывается методом умножения его площади (средний показатель по 6 срезам) на окружность диска, в норме объем НРП составляет 0,36±0,08 mm3;

- ширина НРП по горизонтали (rim length horiz., mm) - диаметр диска минус диаметр экскавации;

- среднюю толщину нервных волокон диска (avg. nerve width @ disc, мкм) среднее значение от границы пигментного эпителия до поверхности диска;

- средняя толщина СНВС в верхнем, нижнем, носовом и темпоральном квадрантах (Savg, Iavg, Navg, Tavg);

- максимальная толщина СНВС в верхнем, нижнем, носовом и темпоральном квадрантах (Smax, Imax, Nmax, Tmax);

- отношение максимальной и средней толщины СНВС по квадрантам;

-разница между максимальным и минимальным значением СНВС.

Исследование вязко-эластических свойств роговицы проводили на Анализаторе биомеханических свойств глаза (Ocular Response Analyzer (ORA), Reichert, США). Работа Анализатора основана на использовании бесконтактной пневмотонометрии. В Анализаторе биомеханических свойств роговицы используется быстрый воздушный импульс в качестве внешнего воздействия и специальная электронно-оптическая система для одновременного мониторинга двух независимых аппланационных значений давления: при первом уплощении роговицы, двигающейся кзади, и при втором уплощении роговицы, возвращающейся к исходной конфигурации, и соответствующее этим стадиям значение деформации роговицы. На рисунках 14-17 представлены все этапы выполнения этого измерения.

–  –  –

На рисунке 14 представлены источник и приемник инфракрасного излучения и воздушная «пушка», которая направлена на вершину роговицы.

На рисунке 15 воздушная пушка подает коллимированный поток воздуха на роговицу, заставляя ее прогибаться под действием силы этого воздействия. При достижении полной аппланации роговицы датчик фиксирует первый пик сигнала.

На рисунке 16 после аппланации воздушный импульс продолжает давить на роговую оболочку, заставляя ее дальше прогибаться. В результате отраженный свет становится рассеянным и сигнал датчика уменьшается.

На рисунке 17 после прекращения действия воздушной струи роговица возвращается к ее естественной форме и еще раз проходит фазу аппланации.

Отраженный свет достигает максимальной интенсивности и в датчике фиксируется второй пик сигнала, который дает основание электронно-оптической системе прибора измерить давление во второй раз. Роговая оболочка возвращается к нормальной конфигурации. Полный процесс измерения длится приблизительно 20 миллисекунд.

Благодаря вязкому затуханию динамичного воздушного импульса в роговичной ткани, происходит некоторая задержка уплощения роговицы, что приводит к регистрации двух различных значений давления (рисунок 18).

Рисунок 18 - Изображение сигнала ORA

Среднее значение двух величин давления соответствует показателю ВГД по Гольдману. Разность между этими двумя значениями является новым показателем, характеризующим способность роговичной ткани поглощать энергию воздушного импульса, и называется корнеальным гистерезисом (КГ).

Таким образом, динамический характер измерений, выполненных при помощи ORA, позволяет получить ряд дополнительных параметров, характеризующих вязко-эластические свойства роговицы.

Как физическое понятие эластичность - это статическое сопротивление вещества на воздействие, прямо пропорциональное приложенной силе, вне зависимости от продолжительности и скорости воздействия. Вязкость динамическое сопротивление вещества на воздействие в зависимости от скорости приложенной силы.

Дополнительный параметр, который ORA рассчитывает с помощью специального алгоритма, назван фактором резистентности роговицы (ФРР). Он служит показателем суммарной резистентности роговицы. Центральная толщина роговицы (ЦТР) измеряется встроенным в прибор ультразвуковым пахиметром.

Для расчета роговично-компенсированного ВГД (ВГДрк) используются данные клинических измерений и специальный алгоритм, учитывающий вязкоэластические свойства роговицы. Результаты измерения, помимо числового значения в мм рт.ст., отображаются на мониторе компьютера в виде корнеограммы. На рисунке 19 представлено ее схематическое изображение.

2.7. Статистическая обработка результатов исследования

Для оценки полученных данных применяли параметрические и непараметрические методы статистического анализа в пакете программ Statistica 10 (Statsoft, США). Критический уровень значимости (р) при проверке статистических гипотез в исследовании принимался равным 0,05 (5%). Для выбора способа представления средних значений и, последующего анализа результатов исследования, определяли характер распределения показателей в выборке при помощи критерия Шапиро-Уилка (Shapiro - Wilk’s W test). Критерий нормальности (Shapiro - Wilk’s W test) сравнивает теоретическую функцию Гаусса с реальным распределением. Нулевая гипотеза состоит в том, что теоретическая функция распределения не похожа на выборочную функцию распределения. В зависимости от уровня значимости нулевая гипотеза либо отвергалась (если уровень значимости p0,05) и, соответственно распределение исследуемого параметра в выборке являлось нормальным, либо принималась (при p0,05) и в таком случае, распределение параметра в выборке было не нормальным.

Средние значения результатов исследования в работе представлены в виде M±SD (M - среднеарифметическое значение, SD - стандартное отклонение) при нормальном распределении, и в виде медианы и квартилей (нижний и верхний), если исследуемый параметр был распределен в выборке не нормально.

Оценку различий показателей в зависимости от характера распределения в двух независимых выборках проводили с применением t- теста для сравнения независимых выборок или критерия Манна-Уитни (Mann 85 - Whitney U test); в двух зависимых выборках - t-парного теста для сравнения зависимых выборок или парного критерия Уилкоксона (Wilcoxon machted pairs test). Характер связи между показателями оценивали с вычислением коэффициентов корреляции Пирсона или Спирмена (r). Значение r может варьировать от 1 до -1, что соответствует наличию положительной или отрицательной связи между исследуемыми показателями (значение коэффициента, равное 0, указывает на отсутствие таковой). Критерием «достаточно сильных» корреляций принято считать значение коэффициента r более 0,7, «умеренных» - 0,4-0,7, «слабых» менее 0,4.

–  –  –

В последнее время разработаны новые технологии визуализации структурных особенностей различных биологических тканей, в частности, разработан новый метод исследования - нелинейная оптическая микроскопия (НЛОМ), часто называемая мультифотонной микроскопией [92, 296, 302, 350].

Это один из наиболее популярных и быстро развивающихся на сегодняшний день оптических методов наблюдения трехмерных структур с субмикронным разрешением. НЛОМ основана на нелинейном взаимодействии света со средой, ответный сигнал которой пропорционален квадрату интенсивности света.

Существуют два типа сигналов, ответственных за формирование образа объекта генерация второй гармоники (ГВГ) и двухфотонная флуоресценция (ДФФ).

Сигналы обоих типов возникают без введения экзогенных красителей, но при очень высоких плотностях мощности зондирующего излучения (свыше 100 МW).

Такие мощности достигаются в локальном объеме фокусировкой излучения лазеров с длительностью импульса ~ 100 фемтосекунд. Использование системы гальвосканеров и пьезо-управляемых объективов позволяет изменять положение объема, из которого возникает сигнал в плоскости и глубине образца. Таким образом, НЛОМ обладает большими возможностями для трехмерной визуализации субклеточных структур и их изменений с высоким пространственным и временным разрешением (так называемая 4D-микроскопия).

Между ГВГ и ДФФ существует некоторая разница. Сигнал ГВГ связан с одновременным рассеянием двух фотонов, в результате чего частота рассеянных фотонов удваивается по сравнению с зондирующим излучением. Способность к ГВГ существует у молекул с отсутствием центра симметрии и возникает в двулучепреломляющих средах. В соединительных тканях ГВГ обусловлена фибриллами и волокнами коллагена, длинные трехспиральные молекулы которого образуют оптически анизотропные волокнистые структуры. В случае ДФФ имеет место одновременное поглощение двух фотонов ближнего инфракрасного (ИК) диапазона (700-1200 нм), что соответствует энергии перехода эндогенных флуорофоров в электронно-возбужденное состояние. Таким образом, флуоресценция индуцируется низкоэнергетическими фотонами. Сигнал ДФФ возникает от всех составляющих биологических тканей, содержащих группы флуорофоров - НАДФ, триптофан, меланин, эластин, коллаген, холекальциферол и др. Дифференциальный анализ спектров ДФФ позволяет рассматривать морфологию отдельных компонентов ткани. В случае коллагена и эластина спектры флуоресценции перекрываются, и разделить их на ДФФ микрофотографиях оказывается достаточно сложно [334]. Однако НЛОМ с одновременной регистрацией ГВГ и ДФФ позволяет разделить важнейшие структурные компоненты соединительной ткани - коллаген и эластин.

НЛОМ открывает новые возможности для визуализации мельчайших структур и оптического секционирования, достигаемого за счет использования нелинейного возбуждения. Значительная площадь сканирования позволяет исследовать большое число клеток и параметров в одном эксперименте.

Благодаря своим достоинствам метод нашел широкое применение для изучения микроструктур в биологических объектах, включая получение изображения структуры отдельных клеток и изучение их динамики в реальном времени. В том числе данный метод предоставляет возможность детального изучения морфологии тканей глаза и, в частности, соединительной ткани, ее клеточных элементов, коллагеновых волокон и пучков [341]. С этой целью используется регистрация ГВГ. Проведенное M. Han et al. [201] исследование коллагена роговицы и склеры изолированных свиных глаз с регистрацией ГВГ продемонстрировало адекватность метода и подтвердило известные данные о том, что фибриллы коллагена роговицы упакованы регулярно в виде поликристаллической решетки, что обеспечивает прозрачность роговицы. И, наоборот, фибриллы склеры обладают неоднородной, трубкообразной структурой, поддерживающей высокую жесткость и упругость склеральной ткани. По мнению авторов, фундаментальное изучение коллагеновых волокон с использованием прижизненной томографии ГВГ может стать в будущем чувствительным методом клинического исследования и мониторинга заболеваний роговицы. В единственном найденном нами в доступной литературе мультифотонном исследовании образцов перипапиллярной зоны склеры глаз с глаукомой с помощью этого метода выявлена существенно сниженная анизотропия этой области по сравнению с нормальной тканью [282].

В связи с этим мы использовали НЛОМ для исследования состояния коллагеновых и эластических волокон передней области склеры при глаукоме при сравнении этого метода с классической гистологией.

В рамках данного предварительного исследования изучены 22 образца склеры, полученные во время проведения непроникающей глубокой склерэктомии у пациентов в возрасте 61-64 лет с I, II и III стадией ПОУГ.

Контролем служили образцы склеры 6 глаз, которые были получены при хирургическом лечении острой травмы глазного яблока у больных, которые ранее не имели никакой офтальмопатологии.

Для получения ГВГ и ДФФ изображений склеральные лоскуты фиксировали в 10% растворе нейтрального формалина. Перед съемкой препараты ткани помещались между покровными стеклами.

Изображения получали с помощью системы лазерной сканирующей микроскопии LSM 510 META (Carl Zeiss, Германия). Нелинейное возбуждение осуществлялось импульсным (100 фс) излучением Ti: сапфир-лазера (Mai Tai HP, Spectra Physics, США) с длиной волны 800 нм и частотой повторения импульсов 80 MГц. Два сигнала регистрировались одновременно на двух спектральных детекторах: с фильтрами 362-415 нм для сигнала второй гармоники и ГВГ изображения и 512-576 нм для сигнала автофлуоресценции и формирования ДФФ изображения. Изображение среза получалось с помощью объектива типа Plan-Neofluar (Carl Zeiss) с увеличением 40 и представляло поле 225225 мкм. Каждая линия изображения усреднялась по 8 сканам для улучшения отношения “сигнал-шум”. Изображения анализировали с помощьюпрограммного обеспечения Zeiss LSM Image Browser (Carl Zeiss Micro Imaging, Inc.) Для верификации полученных результатов путем сравнения их с данными гистологии после обезвоживания и заливки ткани в парафинсрезы склеры 4-5 мкм толщиной исследовали также методом световой микроскопии с окраской гематоксилин-эозином, пикрофуксином по Ван Гизонуна коллагеновые волокна, орсеином по методу Унна на эластические волокна и методом комбинированной окраски коллагеновых и эластических волокон. Изучение и анализ гистологических препаратов проводили с использованием светового микроскопа Olympus BX51, оснащенного цифровой видеокамерой «SDU-252»

(«Спецтелетехника», Россия). Микрофотографирование препаратов проводилось помощью этой камеры и программы Launch Cam View.

3.1. Нелинейная оптическая микроскопия

При изучении поверхности склеры контрольных образцов структура коллагена визуализируется по регистрации первым детектором ГВГ. Этот сигнал кодируется зеленым светом (рисунок 19 а). Второй детектор регистрирует сигнал ДФФ, возникающий как от эластина, так и от коллагена, и кодируется красным светом (рисунок 19 б). При совмещении картин на НЛОМ изображениях коллагеновые структуры выглядят желто-зелеными, а эластические структуры - красными (рисунок 19 в). Это позволяет селективно анализировать морфологию основных компонентов склерального матрикса - коллагена и эластина.

Коллагеновые волокна наружной поверхности склеры в контрольных образцах в основном собраны в пучки. Последние пересекаются между собой, расположены преимущественно параллельно склеральной поверхности и образуют слои (рисунок 19 а, б, в). Между пучками наблюдаются многочисленные тонкие коллагеновые волокна с диаметром 1 мкм. Такая картина в целом совпадает с принятыми представлениями о коллагеновом каркасе нормальной склеральной ткани [12, 335]. Немногочисленные эластические волокна равномерно распределены в пределах коллагеновых пучков. При этом они, как правило, тесно прилегают к коллагеновым волокнам и переплетаются с ними (рисунок 19 в).

–  –  –

Рисунок 19 - НЛОМ изображения наружной поверхности нормальной склеральной ткани:

a) ГВГ изображение коллагеновых пучков (звездочка);

б) ДФФ изображение, сигнал обусловлен наличием коллагена и эластина (стрелки);

в) совместное представление ГВГ/ДФФ изображений. Волокна и пучки коллагена (звездочка) выглядят желтыми, а эластина - красными (стрелки). Бар 50 мкм.

Значительная часть образца склеры пациента с I стадией ПОУГ принципиально не отличается от контроля. Тем не менее, изредка встречаются отдельные участки, где наблюдаются заметные отличия. Так, местами происходит разрыхление (диссоциация) коллагеновых пучков на тонкие коллагеновые волокна (рисунки 20 и 21). Помимо эластических волокон, тесно прилегающих к коллагеновым пучкам, обнаружены очаговые скопления эластических структур разной толщины и неопределенной формы (рисунок 20).

Рисунок 20 - Пример НЛОМ изображения наружной поверхности склеры глаза с I стадией ПОУГ (совместное представление ГВГ/ДФФ). Разрыхление коллагеновых пучков (стрелка), очаговое скопление (звездочка) эластических структур. Бар 50 мкм.

Местами эти структуры образуют клубки (рисунок 21).

Рисунок 21 - Пример НЛОМ изображений наружной поверхности склеры глаза с I стадией ПОУГ (совместное представление ГВГ/ДФФ). Разрыхление коллагеновых пучков (стрелки) и образование клубков (звездочка) эластических структур. Бар 50 мкм.



Pages:     | 1 | 2 || 4 | 5 |   ...   | 8 |

Похожие работы:

«Платонова Ирина Александровна ПОСТПИРОГЕННАЯ ТРАНСФОРМАЦИЯ НАДЗЕМНОЙ ФИТОМАССЫ В СОСНЯКАХ СЕЛЕНГИНСКОГО СРЕДНЕГОРЬЯ Специальность 06.03.02 – Лесоведение и лесоводство, лесоустройство и лесная таксация ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: д.б.н., с.н.с. Г.А. Иванова Красноярск – 2015...»

«Ксыкин Иван Валерьевич ВРЕДОНОСНОСТЬ СОРНЯКОВ И МЕРЫ БОРЬБЫ С НИМИ В ПОСЕВАХ ЗЕРНОВЫХ КУЛЬТУР НА СВЕТЛО-КАШТАНОВЫХ ПОЧВАХ ВОЛГО-ДОНСКОГО МЕЖДУРЕЧЬЯ Специальность: 06.01.01 общее земледелие, растениеводство Диссертация на соискание ученой степени кандидата сельскохозяйственных наук Научный руководитель: доктор...»

«ЛИТВИНЮК ДАРЬЯ АНАТОЛЬЕВНА МОРСКОЙ ЗООПЛАНКТОН И МЕТОДИЧЕСКИЕ ПРОБЛЕМЫ ЕГО ИЗУЧЕНИЯ Специальность 03.02.10. – Гидробиология Диссертация на соискание учной степени кандидата биологических наук Научный руководитель: доктор биологических наук, профессор Самышев Эрнест Зайнуллинович МОСКВА 2015 СОДЕРЖАНИЕ Стр. ПЕРЕЧЕНЬ УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ ВВЕДЕНИЕ РАЗДЕЛ 1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 1.1. История изучения и методологические аспекты оценки...»

«Хохлова Светлана Викторовна ИНДИВИДУАЛИЗАЦИЯ ЛЕЧЕНИЯ БОЛЬНЫХ РАКОМ ЯИЧНИКОВ 14.01.12-онкология ДИССЕРТАЦИЯ На соискание ученой степени доктора медицинских наук Научный консультант: Доктор медицинских наук, профессор Горбунова В.А Москва 2015 ОГЛАВЛЕНИЕ Введение Глава 1. Обзор литературы 1.1. Общая характеристика рака яичников 1.1.1. Молекулярно-биологические и...»

«Минаева Наталья Викторовна Отдаленные последствия высокодозной химиотерапии и аутологичной трансплантации гемопоэтических стволовых клеток у больных гемобластозами 14.01.21 – гематология и переливание крови ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Научный руководитель...»

«Мамалова Хадижат Эдильсултановна БИОЛОГИЧЕСКАЯ И ХОЗЯЙСТВЕННАЯ ОЦЕНКА ПЕРСПЕКТИВНЫХ СОРТОВ ЯБЛОНИ В УСЛОВИЯХ ЧЕЧЕНСКОЙ РЕСПУБЛИКИ специальность: 06.01.08 – Плодоводство, виноградарство диссертация на соискание ученой степени кандидата сельскохозяйственных наук Научный руководитель, доктор сельскохозяйственных наук, доцент Заремук Римма...»

«Куяров Артём Александрович РОЛЬ НОРМАЛЬНОЙ МИКРОФЛОРЫ И ЛИЗОЦИМА В ВЫБОРЕ ПРОБИОТИЧЕСКИХ ШТАММОВ ДЛЯ ПРОФИЛАКТИКИ АЛЛЕРГИЧЕСКИХ ЗАБОЛЕВАНИЙ У СТУДЕНЧЕСКОЙ МОЛОДЕЖИ СЕВЕРА 03.02.03 – микробиология 03.01.06 – биотехнология (в том числе бионанотехнологии) Диссертация на соискание учёной степени кандидата...»

«СИДОРОВА ТАТЬЯНА АЛЕКСАНДРОВНА ОСОБЕННОСТИ АДАПТИВНЫХ РЕАКЦИЙ У ДЕВУШЕК К УСЛОВИЯМ ГОРОДСКОЙ СРЕДЫ 03.02.08 Экология Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: доктор биологических наук, доцент Драгич О.А. Омск-2015 СОДЕРЖАНИЕ Введение.. Глава 1 Обзор литературы.. 1.1. Механизмы адаптации организма человека к окружающей среде 1.2. Закономерности развития...»

«РЫЛЬНИКОВ Валентин Андреевич ЭКОЛОГИЧЕСКИЕ ОСНОВЫ И ПОДХОДЫ К УПРАВЛЕНИЮ ЧИСЛЕННОСТЬЮ СИНАНТРОПНЫХ ВИДОВ ГРЫЗУНОВ (на примере серой крысы Rattus norvegicus Berk.) Специальность 03.00.16 – экология Диссертация на соискание ученой степени...»

«Дандал Али Шебли ПАТОГЕНИТЕЧЕСКИЕ СВОЙСТВА ВИРУСА ИНФЕКЦИОННОГО БРОНХИТА КУР 06.02.02 «ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология» Диссертация на соискание ученой степени кандидата ветеринарных...»

«Усов Николай Викторович Сезонная и многолетняя динамика обилия зоопланктона в прибрежной зоне Кандалакшского залива Белого моря в связи с изменениями температуры воды 25.00.28 – океанология Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Руководители: доктор биологических наук, главный научный сотрудник А.Д. Наумов доктор биологических наук, ведущий...»

«ШИТОВ АЛЕКСАНДР ВИКТОРОВИЧ ВЛИЯНИЕ СЕЙСМИЧНОСТИ И СОПУТСТВУЮЩИХ ГЕОЛОГИЧЕСКИХ ПРОЦЕССОВ НА АБИОТИЧЕСКИЕ И БИОТИЧЕСКИЕ КОМПОНЕНТЫ ЭКОСИСТЕМ (НА ПРИМЕРЕ ЧУЙСКОГО ЗЕМЛЕТРЯСЕНИЯ И ЕГО АФТЕРШОКОВ) 25.00.36 – Геоэкология (науки о Земле) Диссертация на соискание ученой степени доктора геолого-минералогических наук Горно-Алтайск 201...»

«ТОМОШЕВИЧ Мария Анатольевна ФОРМИРОВАНИЕ ПАТОКОМПЛЕКСОВ ДРЕВЕСНЫХ РАСТЕНИЙ ПРИ ИНТРОДУКЦИИ В СИБИРИ 03.02.01 – «Ботаника» 03.02.08 – «Экология» Диссертация на соискание ученой степени доктора биологических наук Научный консультант: д.б.н., академик РАН Коропачинский И.Ю. Новосибирск – 2015 ОГЛАВЛЕНИЕ: ВВЕДЕНИЕ.. 4 ГЛАВА 1. АНАЛИЗ...»

«БЕСЕДИНА Екатерина Николаевна УСОВЕРШЕНСТВОВАНИЕ МЕТОДА КЛОНАЛЬНОГО МИКРОРАЗМНОЖЕНИЯ ПОДВОЕВ ЯБЛОНИ IN VITRO Специальность 06.01.08 – плодоводство, виноградарство Диссертация на соискание учёной степени кандидата сельскохозяйственных наук Научный руководитель – кандидат биологических наук Л.Л. Бунцевич Краснодар 201 Содержание...»

«НГУЕН ВУ ХОАНГ ФЫОНГ ОЦЕНКА ЭКОЛОГИЧЕСКОЙ СИТУАЦИИ КРУПНЫХ ГОРОДОВ В СОЦИАЛИСТИЧЕСКОЙ РЕСПУБЛИКЕ ВЬЕТНАМ Специальность: 03.02.08экология (биология) Диссертация на соискание учёной степени кандидата биологических наук Научный руководитель: доктор биологических наук, профессор Чернышов В.И. Москва ОГЛАВЛЕНИЕ ГЛАВА 1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА...»

«Лямина Наталья Викторовна УДК 591.148:574.52(262.5) ДИНАМИКА ПАРАМЕТРОВ ПОЛЯ БИОЛЮМИНЕСЦЕНЦИИ В ЧЁРНОМ МОРЕ И ИХ СОПРЯЖЁННОСТЬ С ФАКТОРАМИ СРЕДЫ 03.02.10 – гидробиология Диссертация на соискание учной степени кандидата биологических наук Научный руководитель д.б.н., профессор Ю. Н. Токарев Севастополь 2014 г. СОДЕРЖАНИЕ Стр. ПЕРЕЧЕНЬ УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ И СОКРАЩЕНИЙ, СИМВОЛОВ, ЕДИНИЦ И ТЕРМИНОВ. ВВЕДЕНИЕ.. РАЗДЕЛ ИСТОРИЯ...»

«Регузова Алёна Юрьевна Исследование специфической активности полиэпитопных Т-клеточных ВИЧ-1 иммуногенов, полученных с использованием различных стратегий проектирования 03.01.03 – «молекулярная биология» Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научные...»

«МУХА (DIPTERA MUSCIDAE) КАК ПРОДУЦЕНТ КОРМОВОГО БЕЛКА ДЛЯ ПТИЦ НА ВОСТОКЕ КАЗАХСТАНА 16.02.02 – кормление сельскохозяйственных животных и технология кормов Диссертация на соискание ученой степени кандидата сельскохозяйственных наук КОЖЕБАЕВ БОЛАТПЕК ЖАНАХМЕТОВИЧ Научный руководитель – доктор биологических наук профессор Ж.М. Исимбеков...»

«Кошелева Оксана Владимировна НАЕЗДНИКИ СЕМЕЙСТВА EULOPHIDAE (HYMENOPTERA, CHALCIDOIDEA) СТАВРОПОЛЬСКОГО КРАЯ СО СПЕЦИАЛЬНЫМ ОБСУЖДЕНИЕМ ПОДСЕМЕЙСТВА TETRASTICHINAE 03.02.05 – энтомология Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: доктор биологических наук, С. А. Белокобыльский Санкт-Петербург...»

«Палаткин Илья Владимирович Подготовка студентов вуза к здоровьесберегающей деятельности 13.00.01 общая педагогика, история педагогики и образования Диссертация на соискание ученой степени кандидата педагогических наук Научные руководители: доктор биологических наук, профессор,...»







 
2016 www.konf.x-pdf.ru - «Бесплатная электронная библиотека - Авторефераты, диссертации, конференции»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.