WWW.KONF.X-PDF.RU
БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА - Авторефераты, диссертации, конференции
 


Pages:   || 2 | 3 | 4 | 5 |   ...   | 8 |

«МНОГОУРОВНЕВЫЙ АНАЛИЗ СОСТОЯНИЯ КОРНЕОСКЛЕРАЛЬНОЙ ОБОЛОЧКИ ГЛАЗА В РЕАЛИЗАЦИИ НОВЫХ ПОДХОДОВ К ДИАГНОСТИКЕ И ЛЕЧЕНИЮ ПЕРВИЧНОЙ ОТКРЫТОУГОЛЬНОЙ ГЛАУКОМЫ ...»

-- [ Страница 1 ] --

ФЕДЕРАЛЬНОЕ ГОСУДАРСТВЕННОЕ БЮДЖЕТНОЕ

ОБРАЗОВАТЕЛЬНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ

ДОПОЛНИТЕЛЬНОГО ПРОФЕССИОНАЛЬНОГО ОБРАЗОВАНИЯ

«ИНСТИТУТ ПОВЫШЕНИЯ КВАЛИФИКАЦИИ

ФЕДЕРАЛЬНОГО МЕДИКО-БИОЛОГИЧЕСКОГО АГЕНТСТВА»

На правах рукописи

АРУТЮНЯН ЛУСИНЕ ЛЕВОНОВНА

МНОГОУРОВНЕВЫЙ АНАЛИЗ СОСТОЯНИЯ

КОРНЕОСКЛЕРАЛЬНОЙ ОБОЛОЧКИ ГЛАЗА В РЕАЛИЗАЦИИ

НОВЫХ ПОДХОДОВ К ДИАГНОСТИКЕ И ЛЕЧЕНИЮ

ПЕРВИЧНОЙ ОТКРЫТОУГОЛЬНОЙ ГЛАУКОМЫ

14. 01. 07 глазные болезни Диссертацияна соискание ученой степени доктора медицинских наук

Научные консультанты:

доктор медицинских наук С.И. АНИСИМОВ доктор биологических наук, профессор Е.Н. ИОМДИНА Москва -2016

ОГЛАВЛЕНИЕ

ВВЕДЕНИЕ…………………………………………………………………………….6

ГЛАВА 1. СТРУКТУРНЫЕ, МИКРОЭЛЕМЕНТНЫЕ И

БИОМЕХАНИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ КОРНЕОСКЛЕРАЛЬНОЙ

ОБОЛОЧКИ ГЛАЗА ПРИ ПЕРВИЧНОЙ ОТКРЫТОУГОЛЬНОЙ

ГЛАУКОМЕ (обзор литературы)………………………………………………….18

1.1. Структурные особенности соединительной ткани корнеосклеральной оболочки глаза при глаукоме………………………………………………………...19 1.1.1. Особенности коллагена склеральной ткани в норме и при глаукоме………19 1.1.2. Состояние эластиновых волокон склеры в норме и при глаукоме………….24 1.1.3. Значение матриксных металлопротеиназ и их ингибиторов в ремоделировании корнеосклеральной оболочки глаза при глаукоме……………..27

1.2. Значение микроэлементного дисбаланса в патогенезе ПОУГ………………...33 1.2.1. Роль микроэлементов в метаболизме глазных тканей……………………….33 1.2.2. Роль микроэлементов в апоптозе ганглиозных клеток и деструкции соединительной ткани при глаукоме………………………………………………...38 1.2.3. Значение магния в метаболизме соединительной ткани и активности матриксных металлопротеиназ………………………………………………………46 1.2.4. Значение исследования слезной жидкости для анализа микроэлементного дисбаланса в тканях и средах глаза

1.3. Исследование биомеханических особенностей соединительной ткани глаза в условияхнагрузочных проб…………………………………………………………..59 ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ……………………...58

2.1. Материал, исследованный с помощью мультифотонной микроскопии……...58

2.2. Материал, исследованный с помощью термомеханического, биохимического ифлуоресцентного анализа…………………………………………………………...59

2.3. Материал, исследованный с помощью микроэлементного анализа…………..62

2.4. Описание групп пациентов, обследованных с использованием вакуумкомпрессионной нагрузочнойпробы………………………………………………...65

2.5. Описание групп пациентов, обследованных для оценки эффективности гипотензивной терапии аналогами простагландинов по результатам изменений значений корнеального гистерезиса…………………………………………………69

2.6.Общие методы исследования…………………………………………………….70

2.7. Статистическая обработка результатов исследования………………………...78

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТ ИЗУЧЕНИЯ КОЛЛАГЕНОВЫХ И

ЭЛАСТИЧЕСКИХ СТРУКТУР СКЛЕРЫ ГЛАЗ ПРИ ПЕРВИЧНОЙ

ОТКРЫТОУГОЛЬНОЙ ГЛАУКОМЕ С ПОМОЩЬЮ НЕЛИНЕЙНООПТИЧЕСКОЙ (МУЛЬТИФОТОННОЙ) МИКРОСКОПИИ И

ГИСТОЛОГИИ………………………………………………………………………80

3.1. Нелинейная оптическая микроскопия…………………………………………..83

3.2. Гистологическое изучение……………………………………………………….89

ГЛАВА 4. РЕЗУЛЬТАТЫ СРАВНИТЕЛЬНОГО

ТЕРМОМЕХАНИЧЕСКОГО ИССЛЕДОВАНИЯ И АМИНОКИСЛОТНОГО

АНАЛИЗА ОБРАЗЦОВ СКЛЕРЫ И ТЕНОНОВОЙ КАПСУЛЫ ГЛАЗ

ПАЦИЕНТОВ С РАЗЛИЧНЫМИ СТАДИЯМИ ПЕРВИЧНОЙ

ОТКРЫТОУГОЛЬНОЙ ГЛАУКОМЫ…………………………………………...95

4.1. Сравнительное изучение возрастных особенностей уровня поперечной связанности коллагена склеры пациентов с разными стадиями ПОУГ…………...99

4.2. Взаимоотношения структурно-функциональных параметров и уровня поперечной связанности коллагена склеры глаукомных глаз……………………106

4.3. Термомеханические свойства склеры пациентов с ПОУГ в зависимости от получаемой медикаментозной терапии…………………………………………….114

4.4. Сравнительное изучение возрастных особенностей уровня поперечной связанности коллагена теноновой капсулы пациентов с разными стадиями ПОУГ…………………………………………………………………………………116

4.5. Результаты аминокислотного и аутофлюоресцентного анализа склеральной ткани пациентов с ПОУГ……………………………………………………………120

ГЛАВА 5. ИЗУЧЕНИЕ СОДЕРЖАНИЯ МИКРОЭЛЕМЕНТОВ В

СТРУКТУРАХ ГЛАУКОМНЫХ ГЛАЗ………………………………………....131

5.1. Результаты сравнительного изучения микроэлементного состава влаги передней камеры при ПОУГ и возрастной катаракте……………………………..132

5.2. Результаты сравнительного изучения микроэлементного состава склеры при ПОУГ…………………………………………………………………………………136

5.3. Результаты сравнительного изучения микроэлементного состава сетчатки при ПОУГ…………………………………………………………………………………137

5.4. Результаты сравнительного изучения микроэлементного состава слезной жидкости при ПОУГ………………………………………………………………...137

ГЛАВА 6. ВЛИЯНИЕ КОРРЕКЦИИ УРОВНЯ МАГНИЯ НА

ВНУТРИГЛАЗНОЕ ДАВЛЕНИЕ И БИОМЕХАНИЧЕСКИЕ ПОКАЗАТЕЛИ

КОРНЕОСКЛЕРАЛЬНОЙ КАПСУЛЫ БОЛЬНЫХ С ПЕРВИЧНОЙ

ОТКРЫТОУГОЛЬНОЙ ГЛАУКОМОЙ………………………………………..139

ГЛАВА 7. ИЗУЧЕНИЕ ВЗАИМООТНОШЕНИЙ БИОМЕХАНИЧЕСКИХ

СВОЙСТВ ОБОЛОЧЕК ГЛАЗА И МОРФОМЕТРИЧЕСКИХ ПАРАМЕТРОВ

ДИСКА ЗРИТЕЛЬНОГО НЕРВА В УСЛОВИЯХ ДОЗИРОВАННОЙ

ВАКУУМ-КОМПРЕССИОННОЙ НАГРУЗКИ………………………………..153

7.1. Изменение значений корнеального гистерезиса и параметров диска зрительного нерва при дозированной вакуум-компрессионной нагрузке в норме………………………………………………………………………………….154

7.2. Изменение значений корнеального гистерезиса и параметров диска зрительного нерва при дозированной вакуум-компрессионной нагрузке у пациентов с ПОУГ…………………………………………………………………...160

7.3. Изменение значений корнеального гистерезиса и параметров диска зрительного нерва при дозированной вакуум-компрессионной нагрузке у пациентов с ПОУГ и ПС…………………………………………………………….165

7.4. Изменение значений корнеального гистерезиса и параметров диска зрительного нерва при дозированной вакуум-компрессионной нагрузке у пациентов с подозрением на глаукому……………………………………………..170

ГЛАВА 8. ВЛИЯНИЕ ГИПОТЕНЗИВНОЙ ТЕРАПИИ АНАЛОГАМИ

ПРОСТАГЛАНДИНОВ НА БИОМЕХАНИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА

КОРНЕОСКЛЕРАЛЬНОЙ ОБОЛОЧКИ ГЛАЗА И

МОРФОФУНКЦИОНАЛЬНОЕ СОСТОЯНИЯ ЗРИТЕЛЬНОГО НЕРВА...180

ЗАКЛЮЧЕНИЕ…………………………………………………………………….191 ВЫВОДЫ……………………………………………………………………………209 ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ…………………………………………212 СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ………………………………………………………..213 СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ………………………………………………………...215

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы и степень ее разработанности Первичная открытоугольная глаукома (ПОУГ) остается одной из наиболее актуальных проблем современной офтальмологии и, несмотря на успехи в ранней диагностике и совершенствовании медикаментозного, лазерного и хирургического лечения, отдаленные функциональные результаты у большинства больных остаются неудовлетворительными. ПОУГ до сих пор занимает лидирующее место среди главных причин неустранимой слепоты в мире.

Актуальность проблемы возрастает в связи с поражением населения трудоспособного возраста. Об остроте проблемы свидетельствуют следующие цифры: в России свыше 1 млн больных глаукомой, более 150 тыс. являются инвалидами по зрению, и около 70 тыс. насчитывается слепых от глаукомы. Доля глаукомы в нозологической структуре первичной инвалидности по причине заболеваний глаз составляет в России в среднем 28% (Е.С. Либман, 2009; В.В.

Нероев, 2013). Такой уровень распространенности глаукомы и ее место в структуре необратимой слепоты и слабовидения делают это заболевание особенно важным с медико-социальных позиций (В.П. Еричев, Е.А. Егоров, 2014).

К настоящему моменту в практической офтальмологии разработаны и успешно апробированы различные направления диагностики и лечения ПОУГ, однако во многих случаях, несмотря на проведенное лечение, глаукомная оптическая нейропатия неуклонно прогрессирует. В связи с этим углубленное изучение механизмов ее развития и разработка новых подходов к лечению этого заболевания представляется весьма актуальной научной задачей.

Предполагают, что развитие ПОУГ сопровождается патологическим ускорением возрастных, структурных и биохимических изменений решетчатой пластинки (РП) что, по мнению многих авторов, способствует поражению зрительного нерва при глаукоме. Отмечено, что с возрастом утолщаются эластические волокна РП и в них увеличивается содержание I, II и III типов коллагена (M. Hernandez, 2008). Изменяется и состав межклеточного матрикса, а также функциональная активность астроцитов. Все эти изменения приводят к уменьшению эластичности РП и увеличению ее жесткости (J. Albona, 2000).

Однако изменения структурно-биомеханических особенностей собственно склеры при глаукомном поражении изучены пока явно недостаточно (Е.Н. Иомдина, 2009; В.В. Страхов, 2009).

Именно поэтому изучению биомеханики корнеосклеральной оболочки глаза при глаукоме в последние годы уделяют все большее внимание. Это связано, вопервых, с признанием влияния биомеханических показателей роговицы на результаты измерения внутриглазного давления (C.Э. Аветисов, 2013), а, вовторых, с изучением возможной взаимосвязи между биомеханическими свойствами склеры и течением глаукомного процесса (В.В. Волков, 2001). В этой области остается еще немало вопросов, требующих решения, в частности, необходимо изучить связь между биомеханическими и биохимическими показателями корнеосклеральной оболочки при глаукоме.

Состояние при глаукоме одного из главных фибриллообразующих биополимеров склеры, напрямую влияющего на ее биомеханические свойства, эластина, освещено в литературе достаточно скудно. Внимание исследователей, изучавших состояние эластиновых волокон в норме и при глаукоме, было сосредоточено в основном на решетчатой пластине (РП) склеры, поскольку считается, что эластичность РП и ее адаптация к колебаниям ВГД обеспечивают именно эти структурные элементы. J. Pena выявил первичное нарушение синтеза эластина в ламинарных астроцитах при хронической экспериментальной глаукомной оптической нейропатии (ГОН) (J. Pena et al., 2000). Он связывает развитие ГОН с эластозом РП. M. Hernandez считает, что при ГОН астроциты играют главную роль в ремоделировании внеклеточной матрицы диска зрительного нерва, синтезируя факторы роста (M. Hernandez, 2000). H.Quigley et al. на основе данных трансмиссионной электронной микроскопии показали, что по мере прогрессирования глаукомного процесса эластические волокна РП диссоциируются от других соединительнотканных элементов склеры, вызывая нарушение ее устойчивости к хронически повышенному ВГД (H. Quigley et al., 2006). При этом состояние коллагенового матрикса и, в особенности, эластических структур собственно склеры при ПОУГ пока изучено явно недостаточно.

В последнее время разработаны новые технологии визуализации структурных особенностей различных биологических тканей, в частности, разработан новый метод исследования - нелинейная оптическая микроскопия (НЛОМ), часто называемая мультифотонной микроскопией (K. Schenke-Layland, 2008; W. Zipfel, 2003; Е.В. Митрошина, 2012). Это один из наиболее популярных и быстро развивающихся на сегодняшний день оптических методов наблюдения трехмерных структур с субмикронным разрешением. НЛОМ основана на нелинейном взаимодействии света со средой, ответный сигнал которой пропорционален квадрату интенсивности света. Мультифотонная микроскопия открывает новые возможности для визуализации мельчайших структур и оптического секционирования, достигаемого за счет использования нелинейного возбуждения.

Значительная площадь сканирования позволяет исследовать большое число клеток и параметров в одном эксперименте. Благодаря своим достоинствам метод нашел широкое применение для изучения микроструктур в биологических объектах, включая получение изображения структуры отдельных клеток и изучение их динамики в реальном времени. В том числе данный метод предоставляет возможность детального изучения морфологии тканей глаза и, в частности, соединительной ткани, ее клеточных элементов, коллагеновых волокон и пучков (R. Williams, 2005). Существуют два типа сигналов, ответственных за формирование образа объекта - генерация второй гармоники (ГВГ) и двухфотонная флуоресценция (ДФФ). Между ГВГ и ДФФ существует некоторая разница. Сигнал ГВГ связан с одновременным рассеянием двух фотонов, в результате чего частота рассеянных фотонов удваивается по сравнению с зондирующим излучением. Сигнал ДФФ возникает от всех составляющих биологических тканей, содержащих группы флуорофоров триптофан, меланин, эластин, коллаген, холекальциферол и др.

Дифференциальный анализ спектров ДФФ позволяет рассматривать морфологию отдельных компонентов ткани. В случае коллагена и эластина спектры флуоресценции перекрываются, и разделить их на ДФФ микрофотографиях оказывается достаточно сложно (Wang Bao-Gui, 2008). Однако НЛОМ с одновременной регистрацией ГВГ и ДФФ позволяет разделить важнейшие структурные компоненты соединительной ткани - коллаген и эластин. Повидимому, изучение коллагеновых и эластиновых структур глаукомной склеры с помощью НЛОМ позволит получить новую инфрмацию о патогенезе глаукомного поражения.

Известно, что структурная стабильность соединительной ткани, в том числе и склеры, в большей степени определяется количеством внутри- и межмолекулярных поперечных связей (Е.Н. Иомдина, 1993, 2007). Для определения уровня внутри- и межмолекулярной связанности соединительной ткани используют измерение тепловых эффектов денатурации, в частности, температуры (Тm) и энтальпии денатурации (Hm) с помощью дифференциальной сканирующей калориметрии (ДСК) (F. Flandin, 1984; P. Kronick, 1988; M. Le Lous, 1982). Величины Тm, Hm и форма кривой денатурации здоровых и патологически измененных тканей существенно различаются между собой (S. Vyazovkin, 2007).

Исследование поперечной связанности склеры в возрастном аспекте и при ПОУГ путем определения термодинамических параметров денатурации коллагена представляется существенным шагом в понимании этиологии заболевания, его диагностики, и может служить основанием для разработки патогенетической терапии. Деструкция и ремоделирование соединительнотканных структур может быть следствием дисбаланса белкового, в частности, ферментативного обмена, когда нарушена секреция или активность матриксных металлопротеиназ (ММП) (ферментов, связанных с ионами некоторых микроэлементов - металлов), а также медь-зависимого фермента лизилоксидазы и трансглутаминазы. В связи с этим, сдвиги в содержании макро- и микроэлементов (МЭ), играющих важнейшую роль в метаболизме соединительной ткани склеры, а также обеспечивающих метаболическую активность внутриглазной жидкости (ВЖ), могут быть значимым фактором нарушения биомеханики оболочек глаза и развития ПОУГ.

Одним из микроэлементов, который, возможно, играет важную роль в патогенезе ПОУГ, является магний, поскольку углубленные исследования соединительной ткани показали ключевое участие магния в ее метаболизме (S.

Johnson, 2001). Воздействие Mg2+ на соединительную ткань не ограничивается коллагеном и коллагенaзами, этот микроэлемент влияет на состояние микрофибрилл и эластина - основных компонентов гибких волокон. Деградация волокон эластина может значительно возрастать (в 2-3 раза) в присутствии Mg2+, а дефицит Mg2+ соответствует более низкой активности эластаз (B. Stix, 2001). Mg2+ может ингибировать медь-зависимую лизилоксидазу, также вовлеченную в поперечную сшивку цепей эластинов и/или коллагенов. Соответственно, дефицит Mg2+ может приводить к активизации поперечной сшивки коллагена и эластина, а этот процесс, наряду с нарушением активности ММП, приводит ксвоего рода грануляризации соединительной ткани и, как следствие, к увеличению ее жесткости, выявленной клиническими исследованиями (Е.Н. Иомдина с соавт., 2009).

По мнению H. Quigley (программное сообщение на конгрессе EGS 2012), а также российских специалистов (Е.Н. Иомдина с соавт., 2015), терапия глаукомы должна быть также направлена на изменение биомеханических свойств склеры.

Первые шаги в этом направлении уже сделаны в отечественной практике с применением быстроинтегрирующегося коллагена для уменьшения механических напряжений в перипапиллярной зоне склеры у больных с глаукомой (С.Ю.

Анисимова, С.И. Анисимов, 2012).

Представление о механическом повреждении структур зрительного нерва при повышении внутриглазного давления при глаукоме привело к появлению нагрузочных проб, основанных на создании искусственной гипертензии и сравнении исходных параметров с полученными в ходе такой нагрузки (В.В.

Волков, 1981; Ю.С. Астахов, 2003). Накопленные данные говорят о возможности использования компрессионных проб для прижизненного изучения биомеханических особенностей глаукомных глаз и диагностики глаукомы.

Информация об особенностях деформациитканей в области ДЗН при компрессионной нагрузке может расширить наши представления о механизмах развития экскавации ДЗН и позволит обосновать некоторые новые методы ее диагностики и лечения.

Таким образом, проблема комплексного исследования состояния корнеосклеральной оболочки глаза в контексте обоснования новых подходов к диагностике и лечению ПОУГ требует более широкого изучения, как в концептуальном плане, так и по отдельным направлениям.

С учетом вышесказанного, цель настоящей диссертационной работы провести комплексное изучение патогенетических механизмов развития ПОУГ, связанных с патологией корнеосклеральной оболочки глаза, определение значимости изменений структурно-механических свойств склеральной ткани в прогрессировании глаукомного процесса и разработка на этой основе новых подходов к диагностике и лечению этой офтальмопатологии.

Основные задачи работы:

1. Провести сравнительное исследование коллагенового каркаса и эластических волокон склеральной ткани в норме и у пациентов с ПОУГ методами нелинейно-оптической (мультифотонной) и световой микроскопии.

2. Провести изучение возрастных особенностей уровня поперечной связанности коллагена склеры и теноновой капсулы пациентов с разными стадиями ПОУГ.

3. Изучить взаимоотношения структурно-функциональных параметров и уровня поперечной связанности коллагена склеры глаукомных глаз.

4. Изучить микроэлементный состав биоптатов склеры, влаги передней камеры и слезной жидкости у пациентов с глаукомой различных стадий и установить корреляционную зависимость между содержанием значимых микроэлементов в этих биологических жидкостях и степенью глаукомного поражения.

5. На основе комплексного корреляционного анализа связи между местным микроэлементным балансом и клиническими структурно-функциональными показателями глаз с различными стадиями глаукомы выявить микроэлементы, наиболее тесно связанные с развитием глаукомного процесса.

6. Оценить эффективность выбранного средства системной коррекции микроэлементного дисбаланса у пациентов с различными стадиями ПОУГ на основании динамического анализа структурно-функциональных параметров глаза.

7. Оценить диагностическую и прогностическую значимость изменений биомеханических параметров корнеосклеральной оболочки глаза и морфометрических параметров ДЗН в условиях дозированного подъема ВГД в норме и у пациентов с ПОУГ.

Основные положения, выносимые на защиту диссертационной работы

1. Исследование показателей состояния корнеосклеральной оболочки глаза является отдельным направлением персонализированной системы диагностики и лечения пациентов с ПОУГ, что подтверждается высоким уровнем корреляционной взаимосвязи между базовыми параметрами коллагенового каркаса и эластических волокон в склеральном матриксе и степенью прогрессирования глаукомного процесса, а также клинической эффективностью препаратов, нормализующих структурно-биомеханические характеристики корнеосклеральной оболочки глаза.

2. Ремоделирование матрикса склеры может рассматриваться в качестве одного из ведущих факторов риска развития глаукомного процесса.

Формирование избыточных сшивок коллагеновых структур склеры, связанное с глаукомным поражением, играет более существенную роль в нарушении ее структурно-биомеханических свойств, чем сшивание коллагеновых комплексов, вызванное естественным процессом старения, поскольку различия по термомеханическим показателям Тm и Hm между разными возрастными группами менее значительны, чем различия, связанные с прогрессированием ПОУГ.

3. Нарушение микроэлементного состава сред и тканей глаза пациентов с различными стадиями ПОУГ (снижение уровня магния и цинка, повышение уровня железа) способствует росту поперечного сшивания коллагена склеры и оказывает негативное влияние на структурно-функциональное состояние глаза.

Дополнительное (к необходимому медикаментозному гипотензивному режиму) системное применение магний-содержащего препарата приводит к статистически значимому повышению биомеханических и функциональных показателей, позволяет стабилизировать глаукомный процесс.

4. Комплексный метод оценки изменений биомеханических показателей корнеосклеральной оболочки глаза и параметров ДЗН при дозированном подъеме ВГД позволяет своевременно диагностировать ПОУГ и прогнозировать течение глаукомного процесса.

Научная новизна работы Впервые выполнена комплексная оценка состояния корнеосклеральной оболочки глаза пациентов с различными стадиями ПОУГ по структурным, биохимическим, термомеханическим, микроэлементным и биомеханическим показателям.

Впервые разработана персонализированная система диагностики и лечения пациентов с ПОУГ, основанная на оценке состояния корнеосклеральной оболочки глаза.

Впервые в офтальмологической практике патогенетически обосновано новое направление медикаментозной терапии пациентов с ПОУГ.

Впервые установлены статистически достоверные нарушения коллагеновой структуры теноновой капсулы глаз с ПОУГ, зависящие от стадии глаукомного процесса (р=0,009 по U-критерию Манна-Уитни).

Впервые методами нелинейно-оптической (мультифотонной) и световой микроскопии) выявлены морфологические особенности деструкции коллагеновых и эластических волокон при различных стадиях глаукомного процесса.

Установлены статистически значимые различия термомеханических параметров Тm и Hm, отражающих уровень сшивания коллагеновых комплексов склеры при ПОУГ (в пределах 1,9-2,70С и 4,0-7,5 Дж/г сухого остатка соответственно) и при естественном старении (в пределах 0,8-1,00С и 0,3-2,1 Дж/г сухого остатка соответственно).

Определены статистически достоверные прямые корреляционные взаимоотношения уровня поперечной связанности коллагена склеры со структурно-функциональными параметрами глаз с ПОУГ (R=0,61, р0,05).

Установлено, что уровень поперечной связанности коллагена склеры наиболее значимо коррелирует с периметрическими показателями и структурными параметрами ДЗН (R=0,65, р=0,015 и R=0,73, р=0,009, соответственно) у относительно молодых пациентов с ПОУГ.

Выявлено, что ткани и среды глаз пациентов с ПОУГ характеризуются дефицитом магния (снижение по сравнению с нормой в 1,3-1,6 раз, р0,05), что определяет необходимость включения в лечение ПОУГ магний-содержащих препаратов.

Определено стабилизирующее влияние лекарственного средства «Магнерот» на течение глаукомного процесса при его включении в комплекс лечения пациентов с ПОУГ в качестве дополнения к необходимому медикаментозному гипотензивному режиму, что проявляется статистически значимой положительной динамикой периметрических индексов MD и PSD (на 16,7% и 15,1% соответственно, р0,05).

Доказана диагностическая значимость изменений корнеального гистерезиса и параметров ДЗН (чувствительность метода - 93%, специфичность метода - 87%) при двух разных уровнях дозированного подъема ВГД у лиц с подозрением на глаукому.

Установлен относительно более низкий уровень поперечной связанности коллагена склеры на фоне гипотензивной терапии аналогами простагландинов и их благоприятное воздействие на биомеханические и структурнофункциональные показатели глаукомных глаз со статистически значимой положительной динамикой показателя корнеального гистерезиса (на 19,6%, р0,05).

Теоретическая значимость работы заключается в раскрытии патогенетических механизмов развития ПОУГ, связанных с патологией соединительной ткани, в выявлении значимости изменений структурномеханических свойств склеральной ткани в прогрессировании глаукомного процесса, что создает основу для разработки новых подходов к диагностике и лечению этой офтальмопатологии. Определены возрастные особенности ремоделирования матрикса глаукомной склеры как предрасполагающего фактора развития и прогрессирования глаукомного поражения. Выявлены нарушения микроэлементного состава, а также коллагеновой структуры склеры и теноновой капсулы, зависящие от стадии глаукомного процесса и возраста манифестации, что предполагает наличие генерализованного поражения соединительнотканных структур глаза и доказывает необходимость назначения препаратов, нормализующих структурно-биомеханические характеристики корнеосклеральной оболочки, в первую очередь относительно молодым пациентам с ПОУГ.

Практическая значимость работы определяется разработкой (с учетом комплексной оценки состояния корнеосклеральной оболочки глаза) диагностических, профилактических и лечебных мероприятий, обеспечивающих существенное повышение клинико-функциональных результатов диагностики и лечения пациентов с различными стадиями ПОУГ.

Методология и методы исследования В работе применялся комплексный подход к оценке состояния корнеосклеральной оболочки глаза на основе применения структурноморфологических, биохимических, термомеханических, микроэлементных и биомеханических методов исследования.

Степень достоверности результатов Достоверность результатов исследования определяется достаточным и репрезентативным объемом выборок. Исследование проведено в стандартизированных условиях и на материале, достаточном для выполнения поставленных задач. В работе использовано современное сертифицированное оборудование. Анализ результатов исследования и статистическая обработка выполнены с применением современных методов сбора и обработки научных данных.

Внедрение результатов работы Материалы диссертационного исследования внедрены в научнопрактическую и педагогическую деятельность кафедры офтальмологии ФГБОУ ДПО "Институт повышения квалификации Федерального медико-биологического агентства", кафедры глазных болезней Московского государственного медикостоматологического университета им. А.И. Евдокимова, включены в материалы сертификационного цикла и цикла профессиональной переподготовки, в клиническую работу ООО Глазной центр «Восток-Прозрение». Результаты работы включены в учебно-методическое пособие «Коллагенопластика дренажных путей и заднего полюса глаза как способ хирургического лечения различных клинических форм глаукомы» (2013 г.).

Апробация и публикация материалов исследования Материалы диссертации доложены на VIII и XI Всероссийских научнопрактических конференциях с международным участием «Федоровские чтения»

(Москва, 2009, 2013), на 3-ем и 5-ом Всемирных Глаукомных конгрессах WGC (Boston, 2009, Vancouver, 2013), на VII Международной научно-практической конференции «Пролиферативный синдром в офтальмологии» (Москва, 2012), на VI, VII и VIII Российских Общенациональных офтальмологических форумах (Москва, 2013, 2014 и 2015), на конгрессах Российского глаукомного общества «Глаукома: теории, тенденции, технологии» (Москва, 2013 и 2014), на VI конференция «Глаукома: теория и практика» (Санкт-Петербург, 2013), на XIII и XIV Всероссийских школах офтальмолога (Снегири, 2014 и 2015), на конференции «Возможности высокотехнологичной офтальмологической помощи пациентам с тяжелой витреоретинальной патологией в условиях многопрофильного стационара» (Москва, 2013), на Межрегиональной научнопрактической конференции офтальмологов Нижегородской области (Нижний Новгород, 2013), на краевой научно-практической конференции «Актуальные вопросы организации офтальмологической помощи» (Красноярск, 2014), на 10-ом Съезде офтальмологов России (Москва, 2015), на 10-ом Европейском глаукомном конгрессе EGS (получен диплом за лучший доклад, Copenhagen, 2012), на XXXI европейском конгрессе катарактальных и рефракционных хирургов ESCRS (Amsterdam, 2013), на 11-ом Европейском глаукомном конгрессе EGS (Nice, 2014), на VII Евро-Азиатской конференции по офтальмохирургии (Екатеринбург, 2015), на конференции «Актуальные вопросы в офтальмологической практике (Пенза, 2015), на межрегиональной научно-практической конференции «Актуальные вопросы в офтальмологии» (Ижевск, 2015).

Материалы диссертации представлены в 51 научной работе, в том числе в 18 статьях, опубликованных в определенных ВАК РФ ведущих рецензируемых научных журналах.

Структура и объем диссертации Диссертация изложена на 250 страницах машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы, 6 глав собственных исследований, заключения, выводов и практических рекомендаций.

Работа иллюстрирована 23 таблицами и 80 рисунками. Список литературы содержит 350 источников (130 - отечественных и 220 - иностранных).

ГЛАВА 1. СТРУКТУРНЫЕ, МИКРОЭЛЕМЕНТНЫЕ И

БИОМЕХАНИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ КОРНЕОСКЛЕРАЛЬНОЙ

ОБОЛОЧКИ ГЛАЗА ПРИ ПЕРВИЧНОЙ ОТКРЫТОУГОЛЬНОЙ

ГЛАУКОМЕ (обзор литературы) Патогенез ПОУГ как многофакторного нейродегенеративного заболевания остается до конца не изученным, и современные средства лечебного воздействия далеко не всегда эффективно предотвращают развитие глаукомной оптической нейропатии [9, 48, 81]. В связи с этим дальнейшее углубленное изучение механизмов глаукомного поражения остается актуальной научной задачей [50, 51, 129].

В последние годы было высказано предположение, что еще одним важным звеном в патогенезе ПОУГ может быть деструкция и ремоделирование соединительной ткани структур глаза [22, 39, 68, 110, 113], которые проявляются на нескольких уровнях. Во-первых, на уровне генетической программы, вовторых, на уровне дисбаланса ферментативного и белкового обмена, для которого характерны нарушенная секреция или активность металлопротеиназ (ферментов, содержащих белки, связанные с ионами металлов - цинка, магния, кальция), повышенный уровень лизилоксидазы и трансглутаминазы, а также аномальная активность РНК. В-третьих, возможны нарушения на наноуровне, в частности, дисбаланс макро- и микроэлементов, играющих важнейшую роль в метаболизме соединительной ткани.

Таким образом, последние две группы патогенетических факторов в той или иной степени связаны с нарушением обмена макро- и микроэлементов, входящих в состав ВЖ и соединительнотканных структур глаза. Это обстоятельство обуславливает необходимость научных исследований, направленных на определение роли деструкции соединительной ткани и микроэлементного дисбаланса в патогенезе ПОУГ.

1.1. Структурные особенности соединительной ткани корнеосклеральной оболочки глаза при глаукоме 1.1.1. Особенности коллагена склеральной ткани в норме и при глаукоме В последние годы получены данные, свидетельствующие о нарушении при ПОУГ биомеханических, биохимических и структурных свойств корнеосклеральной оболочки глаза [2, 3, 68, 161, 162, 169, 194, 210].

О биохимических особенностях склеры пожилых людей, которые составляют основной контингент пациентов с ПОУГ, позволяют составить представление работы M. Hernandez. С возрастом из РП исчезают факторы эластичности (коллаген II и белок эластин), несколько возрастает содержание факторов прочности мембраны (коллаген I и IV). Регуляторами этих процессов являются астроциты. Число последних на уровне РП в норме особенно велико и достигает 25% от общего объема клеток в этой области. Именно активация астроцитов, по мнению ряда авторов, в случае возникновения «биомеханического стресса» по причине повышения гидростатического давления играет компенсаторную роль на клеточном уровне [207, 278]. При этом возрастает синтез не только коллагена IV, но и тенасцина, формирующего крупный экстрацеллюлярный матрикс РП.

Показано, что по мере прогрессирования глаукомного поражения корнеосклеральная оболочка становится более жесткой, менее проницаемой, что, по-видимому, связано с избыточным накоплением ее экстрацеллюлярного матрикса (в первую очередь основного структурного белка - коллагена), в результате нарушенного метаболизма и формирования избыточных поперечных связей в коллагеновых структурах [68, 213]. Однако, судя по единичным морфологическим исследованиям, есть основания полагать, что дезорганизация и деструкция соединительной ткани склеры, как переднего, так и заднего отделов глаза может быть не только следствием ПОУГ, но также начальным звеном в ее патогенезе [11, 14, 58, 60, 165]. Так, показано, что уже на ранней стадии развития глаукомы в экстрацеллюлярном матриксе склеры дренажной зоны выявляются морфологические изменения: зоны отека и дезорганизации коллагеновых волокон чередуются с зонами склероза. По мере прогрессирования глаукомы дезорганизация усиливается: отмечаются отек, диссоциация и истончение коллагеновых пучков [106, 319].

Основными компонентами соединительной ткани являются коллагеновые волокна, клетки и ремоделирующие ферменты. Принципиальное отличие соединительной ткани от любого другого типа ткани - это избыток внеклеточной матрицы (ВКМ) при сравнительно небольшом числе клеток [136].

Коллагеновыми структурами экстрацеллюлярного матрикса являются гликозаминогликаны, протеогликаны, гликопротеиды. Экстрацеллюлярный матрикс представлен также неколлагеновыми структурными белками фибронектином, ламинином и др. В работах Л.Д. Андреевой при далекозашедшей стадии глаукомы в склере выявляются признаки мукоидного набухания, то есть увеличение количества свободных (несвязанных с белком) гликозаминогликанов [11, 14]. Однако состояние экстрацеллюлярного матрикса и, в первую очередь, коллагеновых структур склеры при глаукоме изучено недостаточно.

По результатам иммуногистохимического исследования А.Н. Журавлевой, у пациентов с ПОУГ в склере происходит накопление фибронектина и коллагена III типа, а также гликозаминогликанов [13, 56, 57].

В начальной стадии глаукомы, соответственно данным Л.Г. Сенновой, изменения экстрацеллюлярного матрикса склеры носят очаговый характер, они аналогичны физиологическому старению, но являются более глубокими: зоны отека, распада волокон чередуются с зонами склероза [106]. Накапливаются мукополисахариды, увеличивается количество дегенеративно измененных клеток.

При естественном старении, главным образом в результате накопления спиралевидного коллагена, отмечается утолщение трабекулы в два - три раза.

Соответственно, увеличивается количество базального материала, уменьшается количество протеогликанов [27].

Многочисленные цепи протеогликанов прикрепляются к особому виду гликозаминогликанов - полимеру гиалуроновой кислоты, называемому гиалуронаном. Нити гиалуронана скрепляют структуру геля в единое целое, и этот полисахаридный «гель» может противостоять сжатию и растяжению ВКМ и в то же время обеспечивать быструю диффузию питательных веществ, строительных материалов и гормонов между кровью и клетками соединительной ткани.

Как было сказано выше, соединительная ткань состоит из клеток, фибриллярных (волокнистых) образований и основного вещества. Основной фибриллярный компонет ВКМ - коллагеновые волокна придают соединительной ткани прочность и стабильность. Именно они играют ведущую роль в осуществлении биомеханической функции этой ткани [63, 64, 109, 187, 209].

Коллагеновое волокно имеет несколько микрон в диаметре и состоит из тысяч индивидуальных полипептидных цепей коллагенов, плотно упакованных вместе.

Коллагены различаются по положению в ткани и по своему функциональному значению:

- коллаген I - основной компонент кости, также есть в шрамах, сухожилиях и хрящах, в том числе этот тип коллагена является доминирующим белком в склере, без его функционирования невозможно нормальное заживление ран; - коллаген II - основной компонент хряща; - коллаген III формирует ретикулярные волокна - они вместе держат внеклеточную матрицу;- коллаген IV формирует базальную ламину - на ней держится эпителий.

Различия в аминокислотном составе разных типов коллагена, его ко- и посттрансляционной модификацией, способах укладки макромолекул в фибриллы и организацией фибрилл, взаимодействием фибрилл с другими химическими компонентами тканевого матрикса определяют многообразие соединительных тканей. При синтезе и созревании коллагена сначала образуются сульфидные связи между тремя про--цепями коллагена в рибосомах гранулярного эндоплазматического ретикулума, что обеспечивает их упорядочивание по отношению друг к другу. Далее, по мере продвижения в цистерны гранулярного ретикулума, гидроксилирующие ферменты (пролилгидроксилаза и лизилгидроксилаза) гидроксилируют аминокислотные остатки пролина и лизина, находящиеся в определенном положении в цепях коллагена. Стабилизация спиральной конформации полипептидных цепей происходит за счет образования сетки водородных связей с участием остатков гидроксипролина и молекул воды.

Образование остатков гидроксилизина открывает возможность последующей модификации - присоединению к некоторым из этих остатков моносахаридов.

Реакции гликозилирования про--цепей происходят при участии специфических трансфераз: галактозилтрансферазы и глюкозилтрансферазы. Первый фермент присоединяет к гидроксилизилу галактозу, а второй - к образовавшемуся галактозилгидроксилизилу глюкозу. Во внеклеточном матриксе, куда секретируется проколлаген в виде трехспиральных молекул, происходит его окончательное превращение в коллаген (рисунок 1) [63, 64].

Рисунок 1 - Строение коллагена Источник: Биохимия: учебник для вузов / под ред. Е.С. Северина, 5-е изд., 2009, 768 с.

В склере глаз в норме обнаружен коллаген I, III, V, VI, VIII типов с преобладанием изоформы I типа [13].

В склере глаукомных глаз по данным аминокислотного анализа в основном определяется коллаген I типа и отсутствуют детектируемые количества коллагена II и III типов [68].

Раннее проведенное нами совместно с Н.А. Даниловым и др. (2011) и Е.Н.

Иомдиной и др. (2011), целенаправленное исследование, позволило выявить, что в глаукомных глазах коллаген составляет около 50% от сухой массы ткани и около 70% от общего содержания белка. Следует отметить, что эти величины существенно превышают характерное для нормальной склеры взрослого человека содержание коллагена (394%), приведенное в работе F. Keeley [232]. Более того, прослеживается отчетливая тенденция к росту уровня коллагена по мере развития глаукомного процесса [68].

Итак, в склере глаукомных глаз, так же, как и в здоровых глазах, в основном присутствует коллаген I типа, однако по мере прогрессирования ПОУГ происходит увеличение его содержания и рост поперечной связанности коллагеновых структур, что лежит в основе увеличения жесткости и снижения проницаемости склеры. Уровень возрастного сшивания коллагена в склере при глаукоме совпадает с характеристиками естественного старения, что в сочетании с увеличеним концентрации коллагена и общего числа поперечных сшивок свидетельствует о специфическом патологическом изменении состояния основного компонента матрикса склеральной ткани. Это может являться существенным фактором патогенеза ПОУГ.

Особая роль в развитии глаукомного поражения принадлежит решетчатой пластине (РП) склеры. Несмотря на увеличение прочности РП, с возрастом она фактически теряет сопротивляемость к биомеханическим деформациям, которые становятся необратимыми. Вызвано это, в частности, тем, что в ретробульбарной части зрительного нерва существенно снижается содержание гликозаминогликанов, которые страхуют РП от неупругих прогибов при повышении трансмембранного градиента [208, 279]. Примечательно, что при сохранении содержания гликозаминогликанов в других нервах, в зрительном нерве их уровень с возрастом существенно убывает, что способствует развитию инволюционной формы глаукомы [196]. Основной компонент гликозаминогликанов - гиалуроновая кислота, содержащаяся в миелиновых волокнах зрительного нерва, у людей молодого возраста, как полагают, выполняет роль своеобразного буфера, предохраняющего РП от сдавления [196], а возрастная потеря гиалуроновой кислоты снижает защиту структурных элементов РП от повышенного ВГД.

1.1.2. Состояние эластиновых волокон склеры в норме и при глаукоме Состояние при глаукоме одного из главных фибриллообразующих биополимеров склеры, напрямую влияющего на ее биомеханические свойства, эластина, освещено в литературе достаточно скудно. Как известно, эластин, составляющий в норме около 2% сухого веса склеры, имеет гидрофобную природу наподобие эластомеров [62, 329, 335]. Он состоит из цепей аминокислот, соединенных через определенные промежутки жесткими химическими связями. С возрастом количество эластиновых фибрилл в склере и их диаметр увеличиваются, достигая максимума к 16-22 годам [228]. В дальнейшем происходит постепенное снижение числа эластиновых волокон. Они располагаются в основном во внутренних слоях склеры заднего полюса глаза, на границе с сосудистой оболочкой; однако определенное количество этих волокон обнаружено и в средних слоях передне-экваториальной склеры [259, 267].

Внимание исследователей, изучавших состояние эластиновых волокон в норме и при глаукоме, было сосредоточено в основном на решетчатой пластине (РП) склеры, поскольку считается, что эластичность РП и ее адаптация к колебаниям ВГД обеспечивают именно эти структурные элементы. J. Pena выявил первичное нарушение синтеза эластина в ламинарных астроцитах при хронической экспериментальной глаукомной оптической нейропатии (ГОН) [276, 277, 290]. Он связывает развитие ГОН с эластозом РП. M. Hernandez считает, что при ГОН астроциты играют главную роль в ремоделировании внеклеточной матрицы диска зрительного нерва, синтезируя факторы роста [203].

По мнению M. Hernandez et al., изучавших экспериментальную глаукомную оптикопатию у обезьян, синтез эластина может компенсаторно увеличиваться, что приводит к развитию эластоза, проявляющегося, по данным электронной микроскопии и иммуногистохимии, образованием больших аморфных агрегатов неправильной формы. Эти изменения эластических волокон нарушают податливость и эластичность РП, вовлеченной в глаукоматозный процесс [206].

Кроме того, с возрастом отмечается увеличение перекрестных сшивок эластина (десмозин, изодесмозин), что является причиной возрастного снижения податливости РП [336] и может способствовать деформации волокон зрительного нерва в порах РП глаукомного глаза. H. Quigley et al. [291] на основе данных трансмиссионной электронной микроскопии показали, что по мере прогрессирования глаукомного процесса эластические волокна РП диссоциируются от других соединительнотканных элементов склеры, вызывая нарушение ее устойчивости к хронически повышенному ВГД. При этом состояние коллагенового матрикса и, в особенности, эластических структур собственно склеры при ПОУГ пока изучено явно недостаточно.

В последнее время разработаны новые технологии визуализации структурных особенностей различных биологических тканей, в частности, разработан новый метод исследования - нелинейная оптическая микроскопия (НЛОМ), часто называемая мультифотонной микроскопией [92, 296, 302, 350].

Это один из наиболее популярных и быстро развивающихся на сегодняшний день оптических методов наблюдения трехмерных структур с субмикронным разрешением. НЛОМ основана на нелинейном взаимодействии света со средой, ответный сигнал которой пропорционален квадрату интенсивности света.

Существуют два типа сигналов, ответственных за формирование образа объекта генерация второй гармоники (ГВГ) и двухфотонная флуоресценция (ДФФ).

Сигналы обоих типов возникают без введения экзогенных красителей, но при очень высоких плотностях мощности зондирующего излучения (свыше 100 МW).

Такие мощности достигаются в локальном объеме фокусировкой излучения лазеров с длительностью импульса ~ 100 фемтосекунд. Использование системы гальвосканеров и пьезо-управляемых объективов позволяет изменять положение объема, из которого возникает сигнал в плоскости и глубине образца. Таким образом, НЛОМ обладает большими возможностями для трехмерной визуализации субклеточных структур и их изменений с высоким пространственным и временным разрешением (так называемая 4D-микроскопия).

Между ГВГ и ДФФ существует некоторая разница. Сигнал ГВГ связан с одновременным рассеянием двух фотонов, в результате чего частота рассеянных фотонов удваивается по сравнению с зондирующим излучением. Способность к ГВГ существует у молекул с отсутствием центра симметрии и возникает в двулучепреломляющих средах. В соединительных тканях ГВГ обусловлена фибриллами и волокнами коллагена, длинные трехспиральные молекулы которого образуют оптически анизотропные волокнистые структуры. В случае ДФФ имеет место одновременное поглощение двух фотонов ближнего инфракрасного (ИК) диапазона (700-1200 нм), что соответствует энергии перехода эндогенных флуорофоров в электронно-возбужденное состояние. Таким образом, флуоресценция индуцируется низкоэнергетическими фотонами. Сигнал ДФФ возникает от всех составляющих биологических тканей, содержащих группы флуорофоров - НАДФ, триптофан, меланин, эластин, коллаген, холекальциферол и др. Дифференциальный анализ спектров ДФФ позволяет рассматривать морфологию отдельных компонентов ткани. В случае коллагена и эластина спектры флуоресценции перекрываются, и разделить их на ДФФ микрофотографиях оказывается достаточно сложно [334]. Однако НЛОМ с одновременной регистрацией ГВГ и ДФФ позволяет разделить важнейшие структурные компоненты соединительной ткани - коллаген и эластин.

НЛОМ открывает новые возможности для визуализации мельчайших структур и оптического секционирования, достигаемого за счет использования нелинейного возбуждения. Значительная площадь сканирования позволяет исследовать большое число клеток и параметров в одном эксперименте.

Благодаря своим достоинствам метод нашел широкое применение для изучения микроструктур в биологических объектах, включая получение изображения структуры отдельных клеток и изучение их динамики в реальном времени. В том числе данный метод предоставляет возможность детального изучения морфологии тканей глаза и, в частности, соединительной ткани, ее клеточных элементов, коллагеновых волокон и пучков [341]. С этой целью используется регистрация ГВГ. Проведенное M. Han et al. [201] исследование коллагена роговицы и склеры изолированных свиных глаз с регистрацией ГВГ продемонстрировало адекватность метода и подтвердило известные данные о том, что фибриллы коллагена роговицы упакованы регулярно в виде поликристаллической решетки, что обеспечивает прозрачность роговицы. И, наоборот, фибриллы склеры обладают неоднородной, трубкообразной структурой, поддерживающей высокую жесткость и упругость склеральной ткани. По мнению авторов, фундаментальное изучение коллагеновых волокон с использованием прижизненной томографии ГВГ может стать в будущем чувствительным методом клинического исследования и мониторинга заболеваний роговицы. В единственном найденном нами в доступной литературе мультифотонном исследовании образцов перипапиллярной зоны склеры глаз с глаукомой с помощью этого метода выявлена существенно сниженная анизотропия этой области по сравнению с нормальной тканью [281]. Повидимому, изучение коллагеновых и эластиновых структур глаукомной склеры с помощью НЛОМ позволит получить новую инфрмацию о патогенезе глаукомного поражения.

1.1.3. Значение матриксных металлопротеиназ и их ингибиторов в ремоделировании корнеосклеральной оболочки глаза при глаукоме

–  –  –

поперечных связей двумя путями - ферментативным и неферментативным, то есть гликацией [65].

Ферментативный путь характеризуется тем, что лизилоксидаза, а также лизилоксидазоподобные ферменты осуществляют поперечную сшивку полипептидных цепей коллагена, таким образом усиливая механическую прочность фибрилл. Изначально происходит окисление -аминогрупп N- и Стерминальных остатков лизина и гидроксилизина с образованием основания Шиффа (группировка -C=N-). Такие незрелые сшивки встречаются в соединительной ткани молодых животных. Дальнейшее формироване зрелых сшивок происходит следующим образом: эта группировка реагирует с остатком гистидина с образованием производного гистидино-гидроксилизинонорлейцина.



Pages:   || 2 | 3 | 4 | 5 |   ...   | 8 |

Похожие работы:

«Храмцов Павел Викторович ИММУНОДИАГНОСТИЧЕСКАЯ СИСТЕМА ДЛЯ ОЦЕНКИ НАПРЯЖЕННОСТИ ПОСТВАКЦИНАЛЬНОГО ИММУНИТЕТА К КОКЛЮШУ, ДИФТЕРИИ И СТОЛБНЯКУ 14.03.09 – Клиническая иммунология, аллергология Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: доктор биологических наук, Раев Михаил Борисович...»

«Серёгин Сергей Викторович Оптимизация конструкций рекомбинантных ДНК для получения иммунобиологических препаратов 03.01.03 – молекулярная биология Диссертация на соискание ученой степени доктора биологических наук Научный консультант: доктор биологических наук Бажан Сергей Иванович...»

«Цвиркун Ольга Валентиновна ЭПИДЕМИЧЕСКИЙ ПРОЦЕСС КОРИ В РАЗЛИЧНЫЕ ПЕРИОДЫ ВАКЦИНОПРОФИЛАКТИКИ. 14.02.02 – эпидемиология ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени доктора медицинских наук Научный консультант: заслуженный деятель науки РФ, лауреат Государственной премии СССР профессор, доктор медицинских наук Ющенко Галина Васильевна Москва – 20 Содержание...»

«КЛЁНИНА АНАСТАСИЯ АЛЕКСАНДРОВНА УЖОВЫЕ ЗМЕИ (COLUBRIDAE) ВОЛЖСКОГО БАССЕЙНА: МОРФОЛОГИЯ, ПИТАНИЕ, РАЗМНОЖЕНИЕ Специальность 03.02.08 – экология (биология) (биологические науки) Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: кандидат биологических наук, доцент Бакиев А.Г. Тольятти – 2015 СОДЕРЖАНИЕ ВВЕДЕНИЕ ГЛАВА 1. К...»

«Лямина Наталья Викторовна УДК 591.148:574.52(262.5) ДИНАМИКА ПАРАМЕТРОВ ПОЛЯ БИОЛЮМИНЕСЦЕНЦИИ В ЧЁРНОМ МОРЕ И ИХ СОПРЯЖЁННОСТЬ С ФАКТОРАМИ СРЕДЫ 03.02.10 – гидробиология Диссертация на соискание учной степени кандидата биологических наук Научный руководитель д.б.н., профессор Ю. Н. Токарев Севастополь 2014 г. СОДЕРЖАНИЕ Стр. ПЕРЕЧЕНЬ УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ И СОКРАЩЕНИЙ, СИМВОЛОВ, ЕДИНИЦ И ТЕРМИНОВ. ВВЕДЕНИЕ.. РАЗДЕЛ ИСТОРИЯ...»

«СОКУР Светлана Александровна ОПТИМИЗАЦИЯ ИСХОДОВ ПРОГРАММ ВСПОМОГАТЕЛЬНЫХ РЕПРОДУКТИВНЫХ ТЕХНОЛОГИЙ У СУПРУЖЕСКИХ ПАР С ПОВЫШЕННЫМ УРОВНЕМ АНЕУПЛОИДИИ В СПЕРМАТОЗОИДАХ 14.01.01акушерство и гинекология Диссертация на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Научные руководители:...»

«Кузнецова Наталья Владимировна СОВРЕМЕННОЕ ГИДРОБИОЛОГИЧЕСКОЕ СОСТОЯНИЕ РЕКИ ЯХРОМА КАК МОДЕЛЬНОЙ МАЛОЙ РЕКИ ПОДМОСКОВЬЯ 03.02.10 – гидробиология Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук...»

«Брит Владислав Иванович «Эффективность методов вакцинации против ньюкаслской болезни в промышленном птицеводстве» Специальность: 06.02.02 ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени кандидат ветеринарных наук Научный руководитель:...»

«Вафула Арнольд Мамати РАЗРАБОТКА ЭЛЕМЕНТОВ ТЕХНОЛОГИИ ВЫРАЩИВАНИЯ ПАПАЙИ ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ ЗДОРОВОГО ПОСАДОЧНОГО МАТЕРИАЛА И ЭКСТРАКТОВ С БИОПЕСТИЦИДНЫМИ СВОЙСТВАМИ ДЛЯ ЗАЩИТЫ ЕЕ ОТ ВРЕДНЫХ ОРГАНИЗМОВ Специальности: 06.01.07 – защита растений 06.01.01 – общее земледелие и растениеводство Диссертация на соискание ученой степени кандидата сельскохозяйственных...»

«Минаева Наталья Викторовна Отдаленные последствия высокодозной химиотерапии и аутологичной трансплантации гемопоэтических стволовых клеток у больных гемобластозами 14.01.21 – гематология и переливание крови ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Научный руководитель...»

«ПОРЫВАЕВА Антонина Павловна ТЕОРЕТИЧЕСКИЕ И ПРАКТИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ МОДЕЛИРОВАНИЯ ХРОНИЧЕСКОЙ ГЕРПЕСВИРУСНОЙ ИНФЕКЦИИ 03.02.02 Вирусология ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени доктора биологических наук Научный консультант: доктор медицинских наук, профессор Глинских Нина Поликарповна Екатеринбург 2015 ОГЛАВЛЕНИЕ 1 ВВЕДЕНИЕ 2 ОСНОВНАЯ ЧАСТЬ 2.1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ...»

«ШИТОВ АЛЕКСАНДР ВИКТОРОВИЧ ВЛИЯНИЕ СЕЙСМИЧНОСТИ (НА ПРИМЕРЕ ЧУЙСКОГО ЗЕМЛЕТРЯСЕНИЯ И ЕГО АФТЕРШОКОВ) И СОПУТСТВУЮЩИХ ГЕОЛОГИЧЕСКИХ ПРОЦЕССОВ НА АБИОТИЧЕСКИЕ КОМПОНЕНТЫ ЭКОСИСТЕМ И ЗДОРОВЬЕ ЧЕЛОВЕКА 25.00.36 – Геоэкология (науки о Земле) Диссертация на соискание ученой степени доктора геолого-минералогических наук Горно-Алтайск...»

«Якимова Татьяна Николаевна Эпидемиологический надзор за дифтерией в России в период регистрации единичных случаев заболевания 14.02.02 эпидемиология диссертация на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Научный руководитель: доктор...»

«Очиров Джангар Сергеевич НАРУШЕНИЯ МИКРОНУТРИЕНТНОГО СТАТУСА ОВЕЦ И ИХ КОРРЕКЦИЯ ВИТАМИННО-МИНЕРАЛЬНЫМИ КОМПЛЕКСАМИ 06.02.01 – диагностика болезней и терапия животных, патология, онкология и морфология животных ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: доктор ветеринарных...»

«Мануйлов Виктор Александрович Генетическое разнообразие вируса гепатита В в группах коренного населения Сибири 03.01.00 – молекулярная биология Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: член-корр. РАН, профессор, д.б.н. С.В. Нетесов...»

«Палаткин Илья Владимирович Подготовка студентов вуза к здоровьесберегающей деятельности 13.00.01 общая педагогика, история педагогики и образования Диссертация на соискание ученой степени кандидата педагогических наук Научные руководители: доктор биологических наук, профессор,...»

«Толмачева Алла Викторовна УДК 633.34:551.АГРОКЛИМАТИЧЕСКАЯ ОЦЕНКА УСЛОВИЙ ВОЗДЕЛЫВАНИЯ СОИ В УКРАИНЕ 11.00.09 – метеорология, климатология, агрометеорология ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени кандидата географических наук Научный руководитель: Полевой Анатолий Николаевич, доктор географических наук, профессор Одесса – 2015 СОДЕРЖАНИЕ стр. ВВЕДЕНИЕ РАЗДЕЛ І. БИОЛОГИЧЕСКИЕ...»

«ШАРАВИН Дмитрий Юрьевич IN SITU / EX SITU ИДЕНТИФИКАЦИЯ МИКРООРГАНИЗМОВ ФИЛЬТРАЦИОННЫХ ВОД ПОЛИГОНА ТВЁРДЫХ БЫТОВЫХ ОТХОДОВ 03.02.03 Микробиология Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: доктор биологических наук, профессор А.И. Саралов Пермь – 2015 ОГЛАВЛЕНИЕ СТР. ВВЕДЕНИЕ.. 4...»

«ЯКОВЛЕВ Роман Викторович Древоточцы (Ьер1^р1ега, Cossidae) Старого Света Том 1 (Приложения в 2-х томах) 03.02.05 энтомология диссертация на соискание ученой степени доктора биологических наук научный консультант Дубатолов Владимир Викторович, доктор биологических наук Барнаул 2014 Оглавление Оглавление Введение Глава 1. История изучения древоточцев (Lepidoptera, Cossidae) Старого Света 1.1. Периоды изучения древоточцев Старого Света...»

«КУЖУГЕТ ЕЛЕНА КРАССОВНА «Хозяйственно-биологические особенности крупного рогатого скота, разводимого в разных природно-климатических зонах Республики Тыва» 06.02.10. Частная зоотехния, технология производства продуктов животноводства Диссертация на соискание ученой степени кандидата сельскохозяйственных наук Научный...»







 
2016 www.konf.x-pdf.ru - «Бесплатная электронная библиотека - Авторефераты, диссертации, конференции»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.