WWW.KONF.X-PDF.RU
БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА - Авторефераты, диссертации, конференции
 


Pages:     | 1 || 3 |

«ГЕНЕТИЧЕСКОЕ РАЗНООБРАЗИЕ ХАНТАВИРУСОВ В ПОПУЛЯЦИЯХ ГРЫЗУНОВ И НАСЕКОМОЯДНЫХ АЗИАТСКОЙ ЧАСТИ РОССИИ ...»

-- [ Страница 2 ] --

2). Наибольший процент инфицированных животных выявлен среди степных пеструшек (Lagurus lagurus) (33,3%), красно-серых (29,0%), рыжих (18,2%), красных (15,4%) и узкочерепных (Microtus gregalis) (15,0%) полевок в районах, где они занимают доминирующее или субдоминирующее положение в сообществе. Рыжая полевка (M. glareolus), доминирующая в лесных сообществах в европейской части России и являющаяся носителем вируса PUUV, в Сибири в исследованных таежных лесных биотопах встречалась вместе с красной и красно-серой полевками, но, как правило, уступала им по численности, за исключением подтаежной зоны Тюменской (58,3%), Омской(50%) и Кемеровской (50%) областей.

Серопозитивные животные были обнаружены в четырех ключевых участках, причем в одном из них, на Телецком, доля рыжих полевок среди отловленных составляла лишь 6,7%. В выборках Тюмень, Усть-Ишим, Хмелевка и Телецкое доля инфицированных среди отловленных рыжих полевок составляла 9,5%, 18,2%, 14.3% и 10,0%, соответственно. В остальных точках инфицированных особей не выявлено.

–  –  –

Красно-серая полевка (M. rufocanus), обитающая в таежных биотопах, доминировала в отловах в предгорьях Тегерецкого хребта (Покровка, Алтайский край — 55,2%) и по среднему течению реки Большая Шушь (Средняя Шушь, Красноярский край — 34,8%). Здесь доля инфицированных среди отловленных красно-серых полевок составляла 21,6% и 29,0%, соответственно. Инфицированных животных выявляли также в Республике Алтай (Телецкое) и в Алтайском крае (Солтон), где красно-серая полевка была малочисленна (2,0% и 6,9% от всех отловленных).

Красная полевка (M. rutilus) обычна для всех лесных ландшафтов Сибири, являясь доминантным видом в сообществе Солтона, Хмелевки, Колывани, Парной, Телецкого и Сухоречья. Серопозитивных животных выявляли в восьми из пятнадцати исследованных районов. Инфицированность красных полевок была достаточно велика и составляла от 9,1% до 15,4%, за исключением Тюменской области, где лишь 3,4% животных были серопозитивны. В литературе отсутствовали данные о том, носителем какого генетического типа хантавируса являются красные полевки. Основываясь на близком родстве видов рыжей и красной полевок можно предполагать, что красные полевки являются носителем PUU-подобного вируса, но этот вопрос оставался открытым.

Узкочерепную полевку (Microtus gregalis) отлавливали в открытых ландшафтах Сибири, включая степные районы Новосибирской (Карасук) области и луговые участки между лесными массивами в подтаежной зоне Томской (Бакса), Кемеровской (Балахнино) областей и Красноярского края (Шушенское). Инфицированность вида составляла 6,1%, 6,0%, 0% и 15%, соответственно. В Алтайском крае (Колывань) одна из двух отловленных полевок оказалась серопозитивной.

Степную пеструшку (Lagurus lagurus) отлавливали лишь в одном месте, в степных районах Новосибирской области (Карасук), где она обитает в тех же биотопах, что и узкочерепная полевка. Как показано ранее, оба эти вида являются носителями разных генетических вариантов вируса TULV. Нами выявлен высокий уровень инфицированности степной пеструшки (33,3%), превышающий инфицированность других видов, что может объясняться групповым образом жизни пеструшек.

Полевка экономка (Microtus oeconomus) присутствовала в отловах в 10 из 15 районов. В трех районах (Хмелевке, Покровке и Парной) были выявлены серопозитивные животные. Хотя число отловленных полевок было менее 10 и вычисление процента инфицированности некорректно, можно полагать, что инфицированность вида достаточно высока.

Выполненное нами исследование установило широкое географическое распространение хантавирусов среди мелких млекопитающих. Выявлено 11 новых очагов циркуляции хантавирусов на территории Республики Алтай, Алтайского и Красноярского краев, Кемеровской, Томской, Омской, Тюменской, Новосибирской и Иркутской областей. За исключением Иркутской, Тюменской и Омской областей, а также района села Шушенское в Красноярском крае, где ранее выявляли инфицированных хантавирусами грызунов, остальные выбранные нами территории не были обследованы. В районе Шушенского Красноярского края, где ранее сообщалось о выявлении хантавирусного антигена у красно-серых полевок (M. rufocanus), нами установлена инфицированность новых видов: полевой (A. agrarius) и восточноазиатской мышей (A. peninsulae), узкочерепной полевки (Microtus gregalis).

В следующих разделах идентифицированы вирусы, циркулирующие в популяциях M. rufocanus, M. rutilus, M. glareolus. Инфицированными оказались также узкочерепная полевка Microtus gregalis и степная пеструшка Lagurus lagurus, обитающие на территории Новосибирской области. В настоящем исследовании идентификация хантавирусов от этих видов не проводилась, однако ассоциация видов с вирусом TULV была установлена ранее в соседней Омской области (Якименко и др., 2008).

Полевая мышь (A. agrarius), с которой на Европейской территории и в Омской области ассоциирован вирус DOBV, встречалась в отловах в четырех точках и была малочисленна, за исключением района Шушенского, где являлась второй по численности (36,4%) среди отловленных животных.

Инфицированные полевые мыши были выявлены в Красноярском крае в окрестностях села Шушенское (12,5%) и в районе села Средняя Шушь (1 из 2).

Указанные находки являются первыми данными о распространении хантавирусов среди полевых мышей на территории Восточной Сибири.

Проведенный анализ не позволил идентифицировать вирус, так как образцы оказались отрицательными при тестировании методом ОТ-ПЦР. Наиболее вероятна ассоциация полевых мышей с патогенным вирусом DOBV, как это было установлено ранее на территории европейской части России и в Омской области (Ткаченко и др., 2008; Якименко и др., 2008), однако нельзя исключить циркуляции в Красноярском крае вируса HTNV, носителем которого на Дальнем Востоке также являются полевые мыши. Более обоснованные предположения о типе циркулирующего вируса могут дать данные анализа мтДНК полевых мышей и их отнесение к европейскому либо дальневосточному подвидам A. agrarius. Присутствие антител к хантавирусам выявлено и у восточно-азиатской мыши (A. peninsulae) на территории Республики Алтай и Красноярского края. Ранее в литературе отсутствовали данные о выявлении хантавирусной инфекции у восточно-азиатской мыши на территории Сибири.

Попытки идентификации хантавируса в A. peninsulae оказались безуспешными.

Поскольку на Дальнем Востоке с этим видом связан патогенный вирус Амур — возбудитель тяжелых и среднетяжелых форм ГЛПС, а в Сибири тяжелые формы ГЛПС не зарегистрированы, генетическая идентификация вируса и его особенностей в сравнении с дальневосточным вирусом Амур остается важной, пока нерешенной проблемой.

На территории Дальнего Востока России в ходе 14 экспедиций, проведенных на территории Приморского и Хабаровского краев, Амурской и Еврейской автономной областей в течение 2007 - 2009 гг., собрано и протестировано 9587 мелких млекопитающих 13 видов, среди них выявлено 875 инфицированных животных. Проведены исследования по оценке эпизоотологического состояния дальневосточных очагов хантавирусной инфекции, выполнен сбор образцов на территории Амурской области и ЕАО, где ранее анализ генетических типов циркулирующих хантавирусов не проводился, собраны пробы от инфицированных животных из ряда малоисследованных районов Приморского и Хабаровского краев. Помимо того, что собранные коллекции образцов явились основой для идентификации хантавирусов, циркулирующих в природных носителях вируса, был расширен ареал циркуляции патогенных хантавирусов. В расположенном на побережье Хабаровского края Ванинском районе впервые выявлена зараженность хантавирусами A. peninsulae – резервуара вируса Амур.

4. Хантавирусы Hokkaido (HOKV) и Puumala (PUUV)

4.1. Новый генетический вариант вируса HOKV в Приморье и его природный носитель, красно-серая полевка (Myodes rufocanus) Исследование типов вирусов, переносимых другими видами мелких млекопитающих Дальнего Востока и Сибири - основными носителями хантавирусов - было начато с характеристики геномов РНК изолятов хантавируса, циркулирующего в популяциях красно-серых полевок из Приморского края и митохондриальной ДНК его природного хозяина, M.

rufocanus. Ранее было показано, что на территории азиатской части континента красно-серые и красные полевки являются носителями хантавируса (Иванов и др., 1990; Мясников и др., 1992; Ткаченко и др., 1987; Zhang et al., 2007), а в красно-серых полевках на острове Хоккайдо в Японии идентифицирован вирус HOKV (Kariwa et al., 1999). Тип хантавируса, циркулирующего в популяциях красных полевок (M. rutilus), не был определен.

С помощью метода ОТ–ПЦР нами было проведено исследование образцов тканей легких M. rufocanus, отловленных в Приморском крае, из четырех образцов определены фрагменты M-сегмента вирусного генома.

Обнаруженные в Приморье РНК изоляты показали наименьшие различия с изолятом вируса HOKV, выявленным из образца красно-серой полевки с японского острова Хоккайдо (18–20% различий). На филогенетическом древе Sotkamo/Финляндия

–  –  –

0.05 Рис. 5. Филогенетические деревья, построенные на основе нуклеотидных последовательностей фрагмента М-сегмента генома хантавирусов длиной 222 н.о. Для анализа использован метод ближайших соседей. Индексы поддержки получены для 1000 повторов.

изоляты вируса, выделенные из красно-серых полевок в Приморском крае и Японии, группировались отдельно от штаммов, выделенных от рыжей полевки и от пациентов в районах распространения данного грызуна (рис. 5).

Наблюдалось филогенетическое разделение штаммов PUUV от рыжих полевок и изолятов HOKV от красно-серых полевок на 2 группы в соответствии с их природными резервуарами (переносимые рыжей полевкой и переносимые красно-серой полевкой). Изучаемые нуклеотидные последовательности РНК изолятов вируса от красно-серых полевок с высоким индексом поддержки группировались вместе и представляли отдельный генетический вариант вируса HOKV, названный нами «Шкотово». Филогению грызуна - хозяина геноварианта Шкотово (M. rufocanus) исследовали путем анализа последовательности фрагмента мтДНК, при этом наблюдалось филогенетическое разделение природных хозяев, M. rufocanus и M. glareolus, на две группы в соответствии с филогенетическим группированием переносимых ими хантавирусов. Таким образом, нами было установлено, что на Дальнем Востоке России, граничащем с северо-восточной частью Китая, в M. rufocanus циркулирует новый генетический вариант вируса HOKV, названный Шкотово.

4.2. Распространение вируса HOKV на территории азиатской части России и его природные носители, красно-серая полевка (M. rufocanus) и красная полевка (M. rutilus) Нами был проведен анализ генетической вариабельности вируса HOKV, его географического распространения на территории азиатской части России и установлены природные резервуары вируса в различных географических регионах. Были проанализированы 32 серо/антиген положительных образцов полевок M. rufocanus, отловленных на территории Приморского, Хабаровского краев и острова Сахалин, 6 образцов красно-серых полевок, отловленных в двух районах, прилегающих к озеру Байкал. Для исследования в очагах совместного обитания были взяты 44 серопозитивных полевки трех видов (M.

rufocanus, M. rutilus, M. glareolus), отловленных в 7 административных регионах Сибири - Алтайском и Красноярском краях, Республике Алтай, Кемеровской, Томской, Омской, Тюменской областях. Последовательности фрагментов трех сегментов вирусного генома были определены для 21 РНК изолята, представляющих все исследованные регионы.

Анализ нуклеотидных и кодируемых аминокислотных последовательностей трех фрагментов вирусного генома выявил пять генетических вариантов вируса HOKV, циркулирующих на территории Дальнего Востока России (геноварианты Шкотово-Китай, Солнечный и Сахалин-Япония), Восточной Сибири (геноварианты Байкал и Сибирь) и Западной Сибири (геновариант Сибирь).

При анализе дальневосточных изолятов, полученных от M. rufocanus, показано, что уровень различия установленных последовательностей Lсегмента генома между вариантами превышал 16,8% н.о. и 2,6% а.о. Для Lсегмента различие новых нуклеотидных и аминокислотных последовательностей вируса HOKV и ранее опубликованных штаммов вируса PUUV достигало 23% и 11,4%, соответственно. Уровни различия нуклеотидных/аминокислотных последовательностей с другими хантавирусами были выше и достигали 25%/13% с вирусом TOPV, 25%/17% - c вирусом KHAV, 27%/19% - с вирусом TULV, 34%/25% - с вирусом PHV.

Как и в случае L-сегмента, для M-сегмента наибольшие различия выявлены между последовательностями изолятов из Приморского края и острова Сахалин, 21,2Анализ всех трех сегментов генома показал, что генетический вариант Шкотово из Приморского края наиболее близок изолятам из китайской провинции Fusong и представляет собой единый генетический вариант вируса HOKV, обозначенный Шкотово-Китай. Второй генетический вариант представляли изоляты вируса HOKV с островов Сахалин и Хоккайдо (СахалинЯпония), для которых различие аминокислотных последовательностей не превышало 1,2%. Изолят из Солнечного района Хабаровского края был отнесен к третьему генетическому варианту.

Два идентифицированных РНК изолята от полевок, отловленных в районе озера Байкал выявили существенные различия. Уровни различия нуклеотидных/аминокислотных последовательностей L-сегмента двух прибайкальских изолятов составили 18,4%/5,3%, а их отличие от дальневосточных изолятов вируса HOKV составило 17,8-23,6%/3,5-8,8%.

Сравнительный анализ кодируемых аминокислотных последовательностей показал, что на территории Прибайкалья в красно-серых полевках циркулирует два генетических варианта вируса HOKV, отличающихся как друг от друга, так и от дальневосточных вариантов этого вируса. Новые генетические варианты были названы Байкал и Сибирь и выявлены в двух районах, прилегающих к озеру Байкал с южной (Тункинский район Республики Бурятии) и западной (Ольхонский район Иркутской области) сторон и разделенных Приморским хребтом и Хамар-Дабаном.

На большей части территории Азиатской части России в таежных лесных биотопах красно-серая полевка M. rufocanus встречается вместе с красной полевкой M. rutilus, а в ряде регионов Западной Сибири — и с рыжей полевкой, M. glareolus. В 11 из 14 исследованных нами мест отлова в Сибири одновременно отловлено два и более видов полевок (табл. 2), при этом в большинстве районов присутствие специфических антител установлено одновременно у двух и более видов полевок.

Вирусные последовательности были получены от полевок, отловленных в 4 ключевых участках: озеро Телецкое (Республика Алтай), Покровка и Солтон (Алтайский край) и в Тюменской области. Сравнительный анализ новых последовательностей от M. rutilus и M. rufocanus, отловленных в трех сайтах Республики Алтай и Алтайского края, показал, что оба вида являются носителями хантавируса HOKV. Различия по всем сегментам были минимальными в паре M.rutilus/M.rufocanus (1,5-3,4%) из одного места отлова (озеро Телецкое ) и в паре M.rutilus/M.rutilus (1,5-3,0%) из разных, но наиболее близко расположенных мест отлова (Телецкое и Солтон). Различие новых последовательностей вируса из Западной Сибири с HOKV последовательностями всех доступных для сравнения изолятов вируса HOKV варьировало от 14,6% до 22,7% для L- сегмента, от 15,4% до 22,9% для Mсегмента, и от 16,4% до 20,6% для S-сегмента генома. Сравнительный анализ установил принадлежность алтайских изолятов к генетическому варианту Сибирь, выявленному в Иркутской области в районе озера Байкал.

Анализ последовательностей фрагмента РНК-полимеразы показал, что дальневосточные изоляты вируса HOKV имели как общие маркерные замены (относительно вируса PUUV, штамм CG1820), присутствующие во всех исследованных изолятах: His59, His137, Lys153, так и замены характерные для пар географических вариантов вируса: E69, Gly73, Met126 у генетических вариантов Шкотово и Солнечный; Arg53 и Val125 у генетических вариантов Шкотово и Сахалин (рис. 6). Маркерными для генетического варианта Байкал являлись Arg53 и Val125, общие с генетическими вариантами Шкотово, Сахалин и Сибирь, а также Ile121, присутствующий у нескольких вариантов HOKV (Сахалин, Байкал, Сибирь). Общими маркерными аминокислотными остатками вируса HOKV являлись His59 и Lys153.

L сегмент PUUV

CG1820 Mg Россия DNKDKEQPIG LVLLMAGVPN DVIQSMEKRI/ /RGVREKILKY QGGLEFIEQL LQIEAQKGNC QSGFRIKFDV VAIR

HOKV Cахалин Sakhal-104 Mrf Сахалин....R..... H..................V..I...V...........H...............K.........

Шкотово-Китай SHK/74372 Mrf Шкотово....R..... H......... E..LG...........VM..........H...............K.........

SHK/74307 Mrf Шкотово....R..... H......... E..LG...........VM..........H...............K.........

SHK/74333 Mrf Шкотово....R..... H......... E..LG...........VM..........H...............K.........

SHK/74356 Mrf Шкотово....R..... H......... E..LG...........VM..........H...............K.........

26536 Mrf Шкотово....R..... H......... E..LG...........VM..........H...............K.........

31942 Mrf Чугуев....R..... H......... E..LG...........VM..........H...............K.........

31642 Mrf Кавалер....R...T. H......... E..LG...........VM..........H...V...........K.........

31612 Mrf Кавалер....R..... H......... E..LG...........VM..........H...V...........K.........

Солнечный Soln-574 Mrf Солнеч.......... H......... E...G...........MM..........H...............K.........

Байкал Baik-227 Mrf Бурят....R..... H.............G...KV..I...V...........................K.........

Сибирь Baik-109 Mrf Ольхон.......... H.............G.......I...VI.............H............K.........

Solton-35 Mrt Алтай.......... H.............G.......I...V..............H.........P..K.......V.

Telet-937 Mrf Алтай.......... H.............G.......I...V..............H.........P..K.......V.

Telet-854 Mrt Алтай.......... H.............G.......I...V..............H.........P..K.......V.

Pokrov-674 Mrf Алтай....R..... H.............G.......I...V..............H.........P..K.......V.

Рис. 6. Сравнение аминокислотных последовательностей белка РНК-полимеразы (49а.о.) хантавирусов, выявленных в рыжих (M. glareolus), красно-серых (M. rufocanus) и красных полевках (M. rutilus). Точками обозначены идентичные аминокислоты.

Сокращения:

Mg - Myodes glareolus, Mrf – M. rufocanus, Mrt – M. rutilus.

При сравнительном анализе фрагмента нуклеокапсидного белка N всех вновь выявленных и опубликованных изолятов вируса HOKV было установлено, что маркерными аминокислотными остатками генетического типа HOKV являлись Lys237, Ile262, Pro283. Маркерными аминокислотными остатками для геноварианта Сибирь являлись Met127, Ala233, Asp302 и Asp306, а для генетического варианта Байкал – Gln279 и Pro299. Маркерным аминокислотным остатком для изолятов геноварианта Шкотово-Китай являлся Ala229, при этом у всех изолятов данного варианта присутствовало сочетание 10 замен (Ile126, Val168, Ala229, Pro233, Asp234, Lys237, Lys258, Val260, Ile262, Pro283).

На исследованном участке поверхностного гликопротеина G2 маркерным для дальневосточных изолятов был Val262, отсутствующий у изолятов HOKV и штаммов PUUV из других регионов. Сочетание пяти замен (Val262, Ala287, Gly308, Val323, Ser327) являлось характерным для геноварианта Шкотово, а замены Ala287, Gly308, Val323, Ser327 присутствовали у всех изолятов генетического варианта Сибирь. Маркерными аминокислотными остатками для геноварианта Сахалин-Япония являлись Ala308, Ile311, Gly317. Как показывает проведенный анализ, маркерные аминокислотные остатки генотипа HOKV на исследованном участке не выявлены.

В настоящем исследовании нами впервые получено молекулярное доказательство циркуляции вируса HOKV на территории азиатской части России. Циркуляция вируса HOKV в настоящее время установлена на большей части ареала обитания M. rufocanus: на территории Западной Сибири (геновариант Сибирь), Восточной Сибири (геноварианты Байкал и Сибирь), Дальнего Востока (геноварианты Шкотово-Китай и Солнечный), Китая (геновариант Шкотово-Китай), островов Сахалин и Хоккайдо (геновариант Сахалин-Япония).

Полученные нами данные свидетельствуют о широком распространении вируса HOKV на территории Азиатской части России, и о способности его циркуляции в двух видах полевок, красно-серой полевке (M.

rufocanus) и красной полевке (M. rutilus). Нами показано, что подобно вирусу PUUV, представленному многочисленными генетическими вариантами, циркулирующими в рыжих полевках (M. glareolus) на территории Европы, вирус HOKV также представлен пятью генетическими вариантами, каждый из которых циркулирует в различных географических регионах азиатской части континента.

До сих пор не решен вопрос о значении в патологии человека вируса HOKV. Среди исследованных образцов от больных ГЛПС из очагов Дальнего Востока (раздел 1) нам не удалось выявить случаев, ассоциированных с вирусом HOKV. Варианты вируса HOKV, значительно отличающиеся от дальневосточных, выявлены в Сибири и на Сахалине, однако в этих регионах отсутствуют не только генетические, но и серологические данные о типах потенциальных возбудителей ГЛПС. Опубликованные данные по выявлению специфических антител у здорового населения регионов основаны на использовании комплекса антигенов хантавирусов, не позволяющего провести дифференциацию вирусов (Малкин и др., 1996). Возможность инфицирования человека вирусом HOKV, либо каким-либо из его генетических вариантов остается предметом дальнейших исследований.

4.3. Изоляты вируса PUUV из Тюменской области При анализе 437 образцов от полевок рода Myodes, отловленных на территории Сибири, были выявлены инфицированные рыжие полевки.

Серопозитивные M. glareolus были обнаружены в четырех местах отлова, расположенных в Омской, Тюменской областях, Республике Алтай и Алтайском крае (табл. 2). РНК изоляты вируса были выявлены от 4 из 8 серопозитивных M. glareolus.

Все ОТ-ПЦР положительные образцы от M. glareolus были собраны на территории Тюменской области. Выявленные вирусные последовательности были наиболее близки к ранее опубликованным последовательностям вируса PUUV из соседней Омской области, минимальное различие для M- и Sсегментов генома составило 3,3% и 3,8%, при уровне различия со штаммами из европейской части России 17,0% и 16,0%. Сравнение аминокислотных последовательностей подтвердило, что тюменские изоляты представляют тот же генетический вариант вируса PUUV, что и ранее опубликованные изоляты из Омской области.

На территории Сибири до настоящего времени отсутствуют прямые доказательства хантавирусной инфекции у человека, то есть выявление РНК изолятов хантавирусов от больных ГЛПС и их генетическая идентификация.

Выявление и идентификация вируса PUUV в рыжих полевках (M. glareolus), выполненное нами в Тюменской области, а также ранее опубликованные данные о циркуляции PUUV среди рыжих полевок в Тюменской и Омской областях (Якименко и др., 2008; Dekonenko et al., 2003), свидетельствуют о возможной связи заболевания людей ГЛПС в этих областях с вирусом PUUV, который является возбудителем ГЛПС в европейских очагах хантавирусной инфекции.

5. Хантавирусы Khabarovsk (KHAV) и Vladivostok (VLAV) и их природные носители Microtus maximowiczii и Microtus fortis

5.1. Генетическая идентификация хантавируса, циркулирующего среди дальневосточных полевок M. fortis К вирусам, связь с заболеваниями человека которых не установлена, относятся вирусы KHAV и VLAV, циркулирующие на территории Дальнего Востока (Horling et al., 1996; Kariwa et al., 1999).

Исследование хантавируса, циркулирующего в популяциях дальневосточных полевок (M. fortis), было опубликовано нами в 2006 году и основывалось на анализе M-сегмента вирусного генома. Нуклеотидные последовательности M-сегмента (позиции 2735-2993) двух РНК изолятов были выявлены в образцах от серопозитивных дальневосточных полевок M. fortis, отловленных в Надеждинском районе Приморского края вблизи поселка Городечное. Анализ нуклеотидных и кодируемых аминокислотных последовательностей РНК изолятов от полевок M. fortis показал, что они значительно отличались как от последовательностей вируса KHAV, так и от всех остальных хантавирусов (более чем на 21,9% и 9,8%, соответственно).

Выявленное нами различие последовательностей РНК изолятов от M. fortis от других хантавирусов соответствовало различию, необходимому для их отнесения к новому генетическому типу, который был предварительно назван Городечное (GD). Нельзя было исключить близкого сходства генетического типа GD с вирусом VLAV, выявленным ранее от M. fortis на других участках очаговой территории Приморского края, однако на данном этапе не представлялось возможным их сравнение. Для вируса VLAV были опубликованы только последовательности S–сегмента генома (Kariwa et al., 1997).

Полученные нами характеристики изолятов от M. fortis, а также опубликованные данные о выявлении двух различающихся вирусов KHAV и VLAV у одного вида носителей, дальневосточных полевок (M. fortis), не согласовывались с большинством опубликованных данных о циркуляции каждого вируса в своем природном носителе (Plyusnin & Morzunov, 2001). Для более точной идентификации вида носителей и ассоциированных с ними вирусов нами была получена характеристика геномов хантавирусов и митохондриальной ДНК их природных хозяев - полевок рода Microtus, отловленных на территории Дальнего Востока России.

5.2. Хантавирусы, циркулирующие в популяциях полевок M. fortis и M. maximowiczii Для анализа генетической вариабельности хантавирусов, циркулирующих в популяциях полевок рода Microtus, нами были проанализированы 45 серо/антиген положительных образцов. Были использованы три серии праймеров, специфичных для M-, L-, S-сегментов вирусного генома.

Положительным на наличие вирусной РНК оказался 21 образец. В сравнительный анализ помимо представителей всех известных типов хантавирусов были включены опубликованные в 2008 г. последовательности РНК изолятов вирусов KHAV и VLAV из Китая и Бурятии (Plyusnina et al., 2008; Zou et al., 2008), а также двух изолятов от M. fortis, исследованных на предыдущем этапе. К настоящему моменту в банке данных GenBank уже были опубликованы последовательности М-сегмента генома хантавируса VLAV, что сделало возможным их сравнение с выявленным ранее генетическим типом GD и полученными нами новыми РНК изолятами из четырех административных регионов Дальнего Востока России (Приморский и Хабаровский края, Амурская область и Еврейская автономная область). Результаты анализа Mсегмента вирусного генома (позиции 2735-2993) показали, что в 12 образцах нами были выявлены последовательности вируса KHAV, а в оставшихся 9 образцах – вируса VLAV. Нами установлено значительное различие между хантавирусами VLAV и KHAV, циркулирующими на одной территории.

Нуклеотидные и аминокислотные последовательности отличались на 18,1и 11,5%, соответственно. Все РНК изоляты KHAV были близки прототипному вирусу KHAV (штамм mf-43). Следующим по степени близости являлся вирус TOPV, изолированный от сибирского лемминга, различия составляли 17,6-21,3% для нуклеотидных и 8,7% - для аминокислотных последовательностей. Вариабельность геномов изолятов KHAV находилась в пределах 1,4-11,3%, при этом аминокислотные последовательности всех изолятов на выбранном участке белка G2 оказались полностью идентичны штамму KHAV mf-43. Вариабельность геномов VLAV составляла 3,6-10,9%, аминокислотные последовательности были идентичны друг другу, включая ранее исследованные изоляты GD. Установленные последовательности оказались наиболее близки (4,1-11,9% нуклеотидных и 0% аминокислотных различий) последовательностям штаммов VLAV от M. fortis из окрестностей города Fusong, расположенного в Китае в 400 км от Владивостока. В то же время различие с географически более удаленными РНК изолятами VLAV из Бурятии достигало 16,3-20,4% для нуклеотидных и 3.7% для аминокислотных последовательностей. Полученный результат показал, что ранее выявленные последовательности изолятов от M. fortis, предварительно отнесенные к новому генетическому типу в действительности представляют собой последовательности изолятов вируса VLAV.

Анализ замен в аминокислотной последовательности белка G2 показал, что изоляты вируса VLAV из различных регионов могут быть разделены на четыре группы: Дальний Восток — Fusong (Китай, приграничный район Приморского края), Бурятия, Yuanjiang (южный район Китая) и Shenyang (восточный район Китая). Из девяти замен относительно вируса KHAV лишь пять замен (Thr282, Ile307, Ile324, Leu326 и Thr329) присутствуют во всех группах.

Сочетание остальных замен характерно для каждой из групп.

Для определения генетического родства изучаемых изолятов с ранее известными типами хантавирусов на основе M-сегмента вирусного генома реконструирована его филогения (рис. 7). На филогенетическом древе все изоляты вируса KHAV образуют единую кладу с высоким индексом поддержки, что говорит о единстве их происхождения. Внутри клады изоляты KHAV объединяются по географическому признаку. Более сложная картина филогенетических взаимосвязей выявлена для изолятов вируса VLAV. Эта клада, имеющая высокий уровень поддержки, разделена на две подгруппы. В первую подгруппу вошли объединенные по географическому принципу изоляты из Приморского края и Китая (Городечное и Fusong), из Приморского края и Амурской области (Спасск и Благовещенск). Изоляты из Бурятии образовали вторую подгруппу.

–  –  –

0.05 Рис. 7. Филогенетические взаимосвязи хантавирусов, циркулирующих в полевках рода Microtus на Дальнем Востоке России, и других типов хантавирусов, полученные на основе нуклеотидных последовательностей М-сегмента генома, позиции 2735-2993. Для анализа использован метод ближайших соседей, индексы поддержки получены для 1000 повторов анализа. Жирным шрифтом выделены последовательности, полученные нами от M. fortis и M. maximowiczii.

Сокращения: Ap - A. peninsulae, Aa - A. agrarius, Af - A. flavicollis, Cg - C. glareolus, CRF - C.

rufocanus, Ma - M. arvalis, Mf - M. fortis, Mm – M.maximoviczii, Mp - M. pennsylvanicus, Pm Peromyscus maniculatus, Pl – P. leucopus, Ls - L. sibiricus.

Анализ РНК изолятов вирусов, циркулирующих в полевках рода Microtus, и митохондриальной ДНК носителей вируса показал, что у двух вирусов имеются два природных резервуара: M. fortis для вируса VLAV и М.

maximowiczii для вируса KHAV. Эти данные подтверждалиcь результатами исследования двух вирусов на территории Китая (Zou et al., 2008a, 2008b).

Таким образом, при исследовании РНК изолятов хантавирусов от полевок рода Microtus, нами впервые установлена циркуляция вируса KHAV в популяциях полевок M. maximowiczii и вируса VLAV - в популяциях полевок M. fortis в Амурской области, Еврейской АО и Хабаровском крае, а также подтверждена циркуляция вируса VLAV среди полевок M. fortis на территории Приморского края.

6. Генетическая идентификация хантавирусов, циркулирующих среди насекомоядных на территории Сибири В последние годы значительное внимание уделялось выявлению новых видов - носителей хантавирусов среди мелких млекопитающих, в частности, насекомоядных. В течение короткого времени были открыты 12 новых генетических типов рода Hantavirus, циркулирующих в различных видах бурозубок в географически удаленных регионах на трех континентах, а также в кротах (Arai et al., 2007; 2008a; Klempa et al., 2007; Song et al., 2007b, 2007c, 2009). В ряде ранее опубликованных работ хантавирусный антиген выявляли в тканях легких нескольких видов бурозубок на территории Европейской части России и Сибири (Мясников и др., 1992; Чапоргина и др., 2001; Tkachenko et al., 1983), однако молекулярно-генетических исследований не проводилось. Нами впервые получено генетическое доказательство циркуляции хантавирусов среди насекомоядных в Сибири. Экспедиции по отлову животных и сбору образцов были проведены в различных экологических системах Западной и Восточной Сибири (Республике Алтай, Алтайском и Красноярском краях, Новосибирской, Омской, Кемеровской и Иркутской областях) в период 2007 гг.

6.1. Вирус Seewis (SWSV) и его природные носители Для выявления и анализа географического распространения и генетического разнообразия хантавирусов, циркулирующих среди насекомоядных носителей в Сибири, ткани легких от 96 бурозубок 6 видов были проанализированы методом ОТ-ПЦР с использованием праймеров для Lи S-сегментов генома. Хантавирусная РНК была выявлена в 17 бурозубках, отловленных в 7 из 11 исследованных ключевых участков: озеро Телецкое (Республика Алтай), Крапивинский р-н (Кемеровская обл.), Карасук и окрестности г. Новосибирска (Новосибирская область), Парная и Западный Саян (Красноярский край) и окрестностях г. Иркутска (Иркутская область).

Одним из трех типов хантавирусов, выявленных среди насекомоядных на территории Сибири, был вирус Seewis (SWSV), обнаруженный в 15 образцах.

Анализ последовательностей L- (2968-3313 н.о.) и S-сегментов (407-1243 н.о.) генома РНК изолятов от 11 S. araneus, двух S. tundrensis, двух S. daphaenodon показал их сходство с вирусом SWSV, ранее выявленным от S. araneus в Швейцарии (Song et al., 2007b). Установлено, что выявленные вирусные последовательности являются новыми генетическими вариантами вируса SWSV и отличаются от изолята mp70 из Швейцарии на 16,3-20,2% по нуклеотидным последовательностям и на 1,7% по кодируемым аминокислотным последовательностям для L-сегмента, и на 17,4-19,1% и 1,4% для S-сегмента, соответственно. Уровень отличия новых нуклеотидных последовательностей от других видов хантавирусов, выявленных от грызунов и насекомоядных, варьирует от 24,5% до 35,6% и от 31,9% до 48,4%, соответственно.

Филогенетический анализ, основанный на фрагментах L- и S-сегментов, выявил группирование изолятов вируса SWSV по географическому принципу (рис. 8) независимо от вида бурозубок - носителей вируса. Обнаруженный факт противоречит данным, опубликованным ранее для большинства хантавирусов, переносимых грызунами. Выявленная корреляция между генетическими различиями изолятов вируса SWSV и географическим происхождением видов носителей свидетельствует о локальной видо-специфической адаптации в ходе эволюции вируса.

Рис. 8. Филогенетические деревья, отображающие объединение сибирских изолятов вируса SWSV по географическому признаку. Деревья построены на основе нуклеотидных последовательностей S- и L-сегментов длиной 837 и 346 нуклеотидов, соответственно, с использованием метода максимального правдоподобия (ML), модель эволюции GTR+I+G, индексы поддержки рассчитаны для 1000 повторов.

Вид насекомоядных - носителей сибирских изолятов хантавируса SWSV, определенный экспертами-зоологами, подтверждали на основании анализа фрагмента митохондриальной ДНК. Анализ частичной 426-нуклеотидной последовательности гена цитохрома b, идентифицировал носителей вируса SWSV как S. araneus, S. tundrensis и S. daphaenodon. Выявление вируса SWSV в S. tundrensis и S. daphaenodon согласуется с гипотезой S. araneus, существования общего предка у этих близкородственных видов Sorex (Searle and Wojcik, 1998).

6.2. Новые генетические типы хантавирусов, циркулирующих среди насекомоядных – Алтай (ALTV) и Lena (LNAV) Сравнительный анализ последовательностей L- и S-сегментов генома 17 вновь выявленных изолятов от насекомоядных показал, что помимо пятнадцати изолятов вируса SWSV, обнаружен ранее неизвестный генетический тип, названный Алтай (ALTV), а также новый изолят генетического типа Lena (LNAV), открытого на территории Республики Саха (персональное сообщение д-ра Янагихары, университет Гавайи, США), но до настоящего времени не опубликованного. Выявленные нами генетические типы существенно отличались как друг от друга, так и от ранее известных хантавирусов. Различие генетических типов между собой варьировало от 24,7% до 39,3% для нуклеотидных последовательностей и от 13,8% до 34,9% для аминокислотных последовательностей L-сегмента (табл. 3).

Таблица 3 Различие нуклеотидных (L-сегмент, 2735-2968 н.о.) и аминокислотных последовательностей трех хантавирусов, выявленных в насекомоядных носителях на территории Сибири

–  –  –

Новый генетический тип хантавирусов, названный Алтай (ALTV), выявлен в образце от обыкновенной бурозубки (S. araneus), отловленной в Республике Алтай. Генетический тип ALTV существенно отличался от ранее опубликованных вирусов. Последовательность L-сегмента вируса Алтай отличалась от последовательности прототипного вируса насекомоядных, вируса Thottapalayam (TPMV) на 36,4%, различие с другими известными хантавирусами было выше и достигало 46,4%. Минимальное различие аминокислотных последовательностей составляло 30,6% (табл. 4). При этом уровень различия нуклеотидной последовательности нового генетического типа Алтай от последовательностей РНК изолятов вируса SWSV, циркулирующих в том же месте отлова (озеро Телецкое), превышал 36,6%, столь же велико было и различие аминокислотных последовательностей (34,9%). В настоящий момент данные о распространении нового генетического типа Алтай ограничены, единственный РНК изолят генетического типа Алтай был выявлен в Республике Алтай. Установленный высокий уровень генетического различия с ранее известными хантавирусами позволяет заключить, что выявлен новый генетический тип рода Hantavirus, представляющий собой 14-й известный к настоящему времени генетический тип, ассоциированный с насекомоядными носителями.

Таблица 4 Сравнение нуклеотидных и аминокислотных последовательностей L-сегмента РНК изолята генетического типа Алтай (ALTV) с ранее известными хантавирусами

–  –  –

Третьим генетическим типом, выявленным от насекомоядных в Сибири, был новый вариант генетического типа LNAV, изоляты которого ранее были выявлены в том же виде носителя, средней бурозубке (S. caecutience) в Республике Саха. Различие нуклеотидных и аминокислотных последовательностей нового РНК изолята с ранее исследованным изолятом из Республики Саха (Sca363Russia) составило для L-сегмента 21,8% н.о. и 3,1% а.о., для S-сегмента – 23,4% н.о. и 2,8% а.о. (табл. 5). Уровень различия вновь выявленных последовательностей с другими ранее известными хантавирусами, включая генетический тип Алтай и изоляты вируса SWSV из Сибири, был значительно выше и превышал 40,4% н.о. и 45,3% а.о. для S-сегмента и 35,6% н.о. и 32,1% а.о. для L-сегмента. В настоящем исследовании РНК изолят генетического типа LNAV был обнаружен в одном образце средней бурозубки (S. caecutience), отловленной на территории Красноярского края. Ранее несколько РНК изолятов этого вируса были выявлены в том же виде насекомоядного носителя в другой части Сибири, в Республике Саха, отстоящей на 1500 км от исследованного нами места отлова в Красноярском крае. Можно предполагать, что генетический тип LNAV циркулирует на значительной части территории Сибири, расположенной между этими точками.

Таблица 5 Сравнение нуклеотидных и аминокислотных последовательностей нового РНК изолята генетического типа LNAV с ранее известными хантавирусами

–  –  –

Выполненное исследование является первым молекулярным доказательством циркуляции хантавирусов среди бурозубок на территории Сибири. Наши данные подтверждают более ранние публикации о выявлении хантавирусного антигена в бурозубках и идентифицируют типы хантавирусов.

На территории Сибири впервые идентифицирован новый генетический тип Алтай (ALTV) от обыкновенной бурозубки S. araneus, выявлен новый генетический вариант хантавируса LNAV в S. caecutience и впервые установлена циркуляция вируса SWSV.

Установлен значительный уровень отличия нуклеотидных и аминокислотных последовательностей новых и ранее известных хантавирусов, превышающий 35,7% н.о. и 30,6% а.о. для генетического типа Алтай и 35,6% н.о. и 32,1% а.о. для генетического типа LNAV для исследованных фрагментов вирусного генома. Кроме того, на территории Сибири установлено широкое распространение генетического типа SWSV, открытого в 2007 г. в Швейцарии.

Впервые показано, что вирус SWSV встречается у трех близкородственных видов бурозубок S. araneus, S. tundrensis и S. daphaenodon. Очаги циркуляции вируса SWSV выявлены в Республике Алтай, Красноярском крае, Кемеровской, Новосибирской областях и в окрестностях городов Новосибирск и Иркутск.

Важнейшим нерешенным вопросом остается вопрос о патогенности хантавирусов, циркулирующих среди насекомоядных, для человека. Получено лишь косвенное доказательство инфицирования человека вирусом TPMV, основанное на выявлении антител к вирусу TPMV у людей (Okumura et al., 2007). Прямое генетическое доказательство ассоциации хантавирусов, выявленных от бурозубок и кротов, с заболеванием человека в настоящее время отсутствует. Установленная нами циркуляция вируса SWSV в окрестностях двух больших городов (Новосибирска и Иркутска), выявление двух типов вирусов SWSV и Алтай в центре туризма в окрестностях озера Телецкое (Республика Алтай) дает основания для исследования роли выявленных вирусов в патологии человека.

В результате выполненных нами исследований представлены генетические доказательства существования на обширной территории азиатской части России – Сибири и Дальнем Востоке - очагов хантавирусной инфекции, природными носителями которой являются как грызуны, так и насекомоядные. На основании изучения разных сегментов генома получены данные о разнообразии хантавирусов, циркулирующих в 12 административных регионах Сибири и Дальнего Востока, выделены новые генетические типы и генетические варианты известных видов хантавирусов, установлен круг животных – носителей обозначенных генотипов и показано значение трех генетически различных хантавирусов в заболеваемости ГЛПС в очагах Дальнего Востока.

Полученные данные о генетическом составе хантавирусов найдут практическое применение при создании диагностических препаратов, при решении задачи о значении выявленных в очагах Сибири новых вирусов в патологии человека и необходимости их использования при разработке вакцин против ГЛПС.

ВЫВОДЫ

1. Впервые на основании молекулярно-генетического исследования материала от больных ГЛПС и мелких млекопитающих – носителей вирусов на территории регионов азиатской части России (Приморского и Хабаровского краев, Амурской и Еврейской автономной областей, Томской, Кемеровской, Новосибирской, Иркутской областей, Республик Алтай и Бурятии, Алтайского и Красноярского краев) установлена циркуляция 9 генетических типов хантавирусов.

2. Представлены доказательства, что возбудителями ГЛПС в очагах Дальнего Востока России являются новые генетические варианты известных вирусов HTNV (вариант FE) и SEOV (вариант VDV) и новый для рода Hantavirus генетический тип Амур (AMRV). Показано, что уровень отличия нуклеотидных и кодируемых аминокислотных последовательностей фрагмента среднего сегмента генома генетического типа Амур от HTNV (FE) составлял 15,9-21,2% и 6,3-8,9%, Амур от SEOV (VDV) – 20,2-24,8% и 16,7соответственно.

3. На основании сходства фрагментов генома РНК изолятов от больных ГЛПС и грызунов – носителей вируса установлено, что резервуарами генетического типа Амур и вируса HTNV (FE) являются восточно-азиатская (Apodemus peninsulae) и полевая (Apodemus agrarius) мыши, соответственно.

Впервые установлено, что в популяциях A. peninsulae на территории Приморского и Хабаровского краев циркулируют четыре филогенетически различающихся варианта генетического типа Амур (Приморье, Приморье1-Китай, Хабаровск, Солнечный), которые группируются по географическому признаку.

В популяциях A. agrarius на территории Приморского и Хабаровского краев, Еврейской автономной и Амурской областей циркулирует генетический вариант HTNV (FE), отличающийся от вариантов вируса HTNV из Китая и Кореи в пределах 17,7% для нуклеотидных и 6,2% для аминокислотных последовательностей фрагментов всех сегментов генома.

4. Установлено, что генетический вариант вируса SEOV (VDV), циркулирующий в популяциях серой крысы (R. norvegicus) в городе Владивостоке, имеет общее происхождение с генетическим вариантом вируса из стран юго-восточной Азии (Камбоджи и Сингапура). Изолят вируса SEOV, выявленный на острове Сахалин, близок варианту вируса из Кореи, что подтверждено на основании анализа фрагмента среднего сегмента генома.

5. Выявлено 11 ранее неизвестных очагов хантавирусной инфекции среди полевок Myodes glareolus, M. rutilus, M. rufocanus, Microtus oeconomus, M.

agrestis, M. gregalis; степных пеструшек Lagurus lagurus; мышей A. agrarius и A. peninsulae на территории Новосибирской, Кемеровской, Томской областей, Красноярского и Алтайского краев и Республики Алтай.

6. В популяциях красно-серых полевок (M. rufocanus) азиатской части России впервые обнаружен вирус HOKV, который представлен пятью генетическими вариантами на территории Западной Сибири (вариант Сибирь), Восточной Сибири (варианты Байкал и Сибирь), Дальнего Востока России (варианты Шкотово-Китай и Солнечный), острова Сахалин (вариант Сахалин-Япония). Уровень различия между вариантами на основании анализа фрагментов трех сегментов вирусного генома превышал 16,8% для нуклеотидных и 2,6% для аминокислотных последовательностей. Вирус HOKV впервые выявлен и в популяциях красных полевок (M. rutilus).

8. Показано что, вирус PUUV, выявленный в популяциях рыжих полевок (M.

glareolus) на территории Тюменской области, генетически близок вирусу PUUV, циркулирующему на территории Омской области, уровень их различия для фрагментов малого и среднего сегментов генома не превышал 3,8% и 5,0%.

9. Вирусы Khabarovsk (KHAV) и Vladivostok (VLAV) имеют самостоятельных природных хозяев: дальневосточную полевку (M. fortis) - для вируса VLAV и полевку Максимовича (М. maximowiczii) - для вируса KHAV, что установлено на основании анализа последовательностей гена цитохрома b мтДНК носителей вируса. Впервые показано, что на территории Амурской области, Еврейской АО и Хабаровского края в популяциях M. maximowiczii циркулирует вирус KHAV, на территории Приморского края и Амурской области в популяциях M. fortis циркулирует вирус VLAV.

10. Впервые на территории Сибири генетически доказана циркуляция хантавирусов среди насекомоядных. Бурозубки рода Sorex являются носителями трех генетических типов хантавирусов.

Новый для рода Hantavirus генетический тип Алтай (ALTV), отличающийся от известных хантавирусов из других регионов мира более чем на 35,7% по нуклеотидным и на 30,6% по аминокислотным последовательностям фрагмента большого сегмента вирусного генома обнаружен у обыкновенной бурозубки (S. araneus) в Республике Алтай.

В Красноярском крае в популяции средней бурозубки (S. caecutiens) выявлен генетический вариант вируса Lena (LNAV) также имеющего значительные отличия от известных хантавирусов: более 35,6% нуклеотидных и 32,1% аминокислотных различий в последовательностях фрагментов малого и большого сегментов генома.

Впервые в популяциях трех близкородственных видов бурозубок (S.

araneus, S. tundrensis и S. daphaenodon) в Республике Алтай, Красноярском крае, Кемеровской и Новосибирской областях, окрестностях городов Новосибирск и Иркутск установлена циркуляция нового генетического варианта вируса Seewis (SWSV). Различия с РНК изолятом SWSV из Швейцарии составили более 16,3% по нуклеотидным и 1,4% по аминокислотным последовательностям фрагментов малого и большого сегментов вирусного генома.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

Статьи в научных журналах, рекомендованных ВАК:

1. Yashina L.N., Patrushev N.A., Ivanov L.I., Slonova R.A., Mishin V., Kompanez G.G., Zdanovskaya N.I., Kuzina I.I., Safronov P.F., Chizhikov V.E., Schmaljohn С., Netesov S.V.

Genetic diversity of hantaviruses associated with hemorrhagic fever with renal syndrome in the Far East of Russia // Virus Res. - 2000. - Vol. 70. - P. 31-44.

2. Yashina L., Mishin V., Zdanovskaya N., Schmaljohn C., Ivanov L. A newly discovered variant of a hantavirus in Apodemus peninsulae, Far Eastern Russia // Emerg. Infect. Dis. - 2001. - Vol.

7. - P. 912-913.

3. Слонова Р.А., Компанец Г.Г., Сокотун С.А., Кушнарева Т.В., Яшина Л.Н., Симонов С.Б.

Распространение генотипов хантавируса в Приморском крае и их эпидемиологическое значение // Бюллетень Восточно-Сибирского научного центра СО РАМН. - 2002. - № 4. C. 25-28.

4. Слонова Р.А., Яшина Л.Н., Компанец Г.Г., Мишин В. А. Антигенная и генетическая характеристика штаммов вируса Сеул - возбудителя геморрагической лихорадки с почечным синдромом // Вопр. вирусол. - 2003. - № 3. - C. 10-14.

5. Яшина Л.Н., Слонова Р.А., Олейник О.В., Кузина И.И., Кушнарева Т.В., Компанец Г.Г., Симонов С.Б., Симонова Т.Л., Нетесов С.В., Морзунов С.П. Новый генетический вариант вируса Пуумала в Приморье и его природный носитель, красно-серая полевка Clethrionomys rufocanus // Вопр. вирусол. - 2004. - № 6. - С. 34-37.

6. Яшина Л.Н., Кузина И.И., Малышева Т.В., Иванов Л.И., Хасанова С.С. Применение амплификационной тест-системы для диагностики геморрагической лихорадки с почечным синдромом и изучения генотипов вирусов-возбудителей // Вестник РАМН. С. 40-43



Pages:     | 1 || 3 |

Похожие работы:

«Малышев Алексей Владиславович КОМПЛЕКСНАЯ СИСТЕМА ПЕРСОНАЛИЗИРОВАННЫХ МЕРОПРИЯТИЙ ПО ПОВЫШЕНИЮ КЛИНИКОФУНКЦИОНАЛЬНОЙ ЭФФЕКТИВНОСТИ ХИРУРГИЧЕСКОГО ЛЕЧЕНИЯ ВИТРЕОРЕТИНАЛЬНОЙ ПАТОЛОГИИ 14.01.07 – глазные болезни Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук Москва 2015 Работа выполнена на кафедре офтальмологии Федерального государственного бюджетного образовательного учреждения дополнительного профессионального образования «Институт повышения...»

«ВАГАЙЦЕВА КСЕНИЯ ВАЛЕРЬЕВНА ГЕНЕТИЧЕСКОЕ РАЗНООБРАЗИЕ ПОПУЛЯЦИЙ СЕВЕРНОЙ ЕВРАЗИИ ПО STR И SNP МАРКЕРАМ X-ХРОМОСОМЫ И ИХ ДНКИДЕНТИФИКАЦИОННЫЙ ПОТЕНЦИАЛ 03.02.07 генетика АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Томск – 2015 Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном научном учреждении «Научно-исследовательский институт медицинской генетики», г. Томск Научный руководитель: доктор биологических наук, профессор Степанов Вадим...»

«Худоногова Елена Геннадьевна БИОЛОГИЯ, ЭКОЛОГИЯ И ПРОДУКТИВНОСТЬ ПОЛЕЗНЫХ РАСТЕНИЙ ПРЕДБАЙКАЛЬЯ: АНАЛИЗ, ПРОГНОЗИРОВАНИЕ И ОПТИМИЗАЦИЯ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ Специальность 03.02.01 – ботаника (биологические науки) АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук Оренбург 2015 Работа выполнена на кафедре ботаники, плодоводства и ландшафтной архитектуры в ФГБОУ ВО «Иркутский государственный аграрный университет имени А.А. Ежевского» Научный консультант:...»

«Калякин Евгений Александрович ПОЗДНЕМЕЛОВЫЕ МОРСКИЕ ЕЖИ СРЕДНЕГО И НИЖНЕГО ПОВОЛЖЬЯ: ТАКСОНОМИЧЕСКОЕ РАЗНООБРАЗИЕ, СТРАТИГРАФИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ Специальность: 25.00.02 – палеонтология и стратиграфия Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата геолого-минералогических наук Саратов – 2015     Работа выполнена на кафедре исторической геологии и палеонтологии ФГБОУ ВПО «Саратовский государственный университет имени Н.Г. Чернышевского» Евгений Михайлович Первушов,...»

«ВЕДЕНИНА Варвара Юрьевна РОЛЬ ГЕНЕТИЧЕСКИ ДЕТЕРМИНИРОВАННЫХ АКУСТИЧЕСКИХ СИГНАЛОВ В МИКРОЭВОЛЮЦИИ САРАНЧОВЫХ (INSECTA, ACRIDIDAE, GOMPHOCERINAE) 03.02.07 – генетика АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук Москва 2014 Работа выполнена в лаборатории обработки сенсорной информации федерального государственного бюджетного учреждения науки Института проблем передачи информации им. А.А. Харкевича Российской академии наук Официальные оппоненты:...»

«ИЛЬГИСОНИС Екатерина Викторовна ПРОТЕОТИПИЧЕСКИЕ ПЕПТИДЫ ДЛЯ КОЛИЧЕСТВЕННОГО МАСССПЕКТРОМЕТРИЧЕСКОГО АНАЛИЗА БЕЛКОВ, КОДИРУЕМЫХ ГЕНАМИ ХРОМОСОМЫ 18 ЧЕЛОВЕКА 03.01.09 – математическая биология, биоинформатика АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Москва – 2015 г. Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном научном учреждении «Научно-исследовательский институт биомедицинской химии имени В.Н. Ореховича». доктор...»

«НАУМОВА ЭВЕЛИН АРВИДОВНА РАЗРАБОТКА ТЕХНОЛОГИИ ПРЕСЕРВОВ ИЗ КИЛЬКИ БАЛТИЙСКОГО МОРЯ, ОБОГАЩЕННЫХ КОМПОНЕНТАМИ С ГИПОТЕНЗИВНЫМИ СВОЙСТВАМИ 05.18.04 Технология мясных, молочных и рыбных продуктов и холодильных производств 05.18.07 Биотехнология пищевых продуктов и биологических активных веществ Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата технических наук Калининград – 2015 Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном образовательном учреждении...»

«Кисова Светлана Владимировна АГРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ОСНОВЫ ФОРМИРОВАНИЯ ОБЪЕКТОВ ЦВЕТОЧНОГО ОФОРМЛЕНИЯ В ОЗЕЛЕНЕНИИ ГОРОДСКОЙ СРЕДЫ (НА ПРИМЕРЕ УЛАН-УДЭ) 06.01.01 – общее земледелие, растениеводство АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата сельскохозяйственных наук Улан-Удэ – 2015 Работа выполнена на кафедре ландшафтного дизайна и экологии Федерального государственного бюджетного образовательного учреждения высшего образования «Бурятская государственная...»

«Потапов Антон Михайлович КОЛЛЕМБОЛЫ В ТРОФИЧЕСКИХ СЕТЯХ ЛЕСНЫХ ПОЧВ: СПЕЦИАЛИЗИРОВАННАЯ МИКРОБОФАГИЯ специальность 03.02.03 – микробиология и специальность 03.02.08 – экология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Москва 2014 Работа выполнена на кафедре биологии почв факультета почвоведения Федерального государственного бюджетного образовательного учреждения высшего образования «Московский государственный университет имени М.В....»

«ЕФИМОВ ПЕТР ГЕННАДЬЕВИЧ РОД PLATANTHERA Rich. (ORCHIDACEAE Juss.) И БЛИЗКИЕ РОДЫ ВО ФЛОРЕ РОССИИ 03.00.05. – «Ботаника» Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук САНКТ-ПЕТЕРБУРГ Работа выполнена в Отделе Гербарий высших растений Ботанического института им. В. Л. Комарова РАН. Научный руководитель: доктор биологических наук Аверьянов Леонид Владимирович Официальные оппоненты: доктор биологических наук Шамров Иван Иванович, кандидат...»

«НАУМОВ Юрий Анатольевич АНТРОПОГЕННАЯ ТРАНСФОРМАЦИЯ ПРИБРЕЖНО-ШЕЛЬФОВЫХ ГЕОСИСТЕМ ОКРАИННЫХ МОРЕЙ ДАЛЬНЕГО ВОСТОКА РОССИИ 25.00.36 – Геоэкология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора географических наук Томск 2008 Работа выполнена на кафедре экологии и природопользования Владивостокского государственного университета экономики и сервиса Научный консультант: доктор географических наук, профессор Кочуров Борис Иванович Официальные оппоненты: доктор...»

«ХОССАИН АКБАР ВЛИЯНИЕ ЭКОЛОГИЧЕСКИХ УСЛОВИЙ СЕВЕРА БАНГЛАДЕШ НА СТРЕССОУСТОЙЧИВОСТЬ И ПРОДУКТИВНОСТЬ ЯРОВОЙ ПШЕНИЦЫ 03.02.08 – экология (биология) Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Саратов – 2013 Работа выполнена в ФГБОУ ВПО «Астраханский государственный университет» в научно-образовательном центре экологического земледелия «Астэко» Научный руководитель: Лозовская Марина Вячеславовна, доктор биологических наук, профессор, ФГБОУ...»

«Ильина Елена Петровна Незаконная добыча (вылов) водных биологических ресурсов (по материалам Камчатского края) 12.00.08 – Уголовное право и криминология; уголовно-исполнительное право Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата юридических наук Москва – 2015 г. Работа выполнена в федеральном государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Московский государственный юридический университет имени О.Е. Кутафина...»

«Быков Роман Андреевич ДИНАМИКА ИНФИЦИРОВАННОСТИ ПРИРОДНЫХ И ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫХ ПОПУЛЯЦИЙ DROSOPHILA MELANOGASTER РАЗНЫМИ ГЕНОТИПАМИ ЭНДОСИМБИОНТА WOLBACHIA (03.02.07) «генетика» Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Новосибирск 2014 Работа выполнена в Лаборатории генетики популяций Федерального государственного бюджетного учреждения науки Института цитологии и генетики СО РАН, г. Новосибирск. Научный руководитель: доктор биологических...»

«Голиков Алексей Валентинович РАСПРОСТРАНЕНИЕ И РЕПРОДУКТИВНАЯ БИОЛОГИЯ ДЕСЯТИРУКИХ ГОЛОВОНОГИХ МОЛЛЮСКОВ (SEPIOLIDA, TEUTHIDA) В БАРЕНЦЕВОМ МОРЕ И ПРИЛЕГАЮЩИХ АКВАТОРИЯХ Специальность 03.02.04 – Зоология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Казань – 2014 Работа выполнена в ФГАОУ ВПО «Казанский (Приволжский) федеральный университет» (КФУ) и ФГУП «Полярный НИИ морского рыбного хозяйства и океанографии им. Н. М. Книповича» (ПИНРО, г....»

«АНДРЕЕВА НАДЕЖДА МИХАЙЛОВНА МЕТОДИКА ИСПОЛЬЗОВАНИЯ ДОРОЖНЫХ КАРТ ПРИ ЭЛЕКТРОННОМ ОБУЧЕНИИ СТУДЕНТОВ ИНФОРМАТИКЕ (на примере экономических и биологических направлений подготовки) 13.00.02 – Теория и методика обучения и воспитания (информатика, уровень профессионального образования) АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата педагогических наук Красноярск – 2015 Работа выполнена в Федеральном государственном автономном образовательном учреждении высшего...»

«Соловьева Наталья Сергеевна БИОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА ВОЗБУДИТЕЛЯ И ОПТИМИЗАЦИЯ ЭТИОЛОГИЧЕСКОЙ ДИАГНОСТИКИ ТУБЕРКУЛЕЗНОГО СПОНДИЛИТА 14.01.16 Фтизиатрия 03.02.03 Микробиология Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Санкт-Петербург – 2015 Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном учреждении «Санкт-Петербургский научно-исследовательский институт фтизиопульмонологии» Министерства здравоохранения Российской Федерации Научные...»

«Шигапов Иршат Сайдашович ОСОБЕННОСТИ ФОРМИРОВАНИЯ И РАЗВИТИЯ МАЛЫХ ОЗЕР УРБАНИЗИРОВАННЫХ ТЕРРИТОРИЙ (НА ПРИМЕРЕ ГОРОДА КАЗАНИ) 25.00.36 Геоэкология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата географических наук Москва 2014 Работа выполнена в федеральном государственном автономном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Казанский (Приволжский) федеральный университет» на кафедре природообустройства и водопользования Научный...»

«СТОЛПОВСКАЯ Елена Владимировна СИНТЕЗ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ КОМПЛЕКСНЫХ СОЕДИНЕНИЙ НА ОСНОВЕ ДИГИДРОКВЕРЦЕТИНА – ПРОДУКТА ГЛУБОКОЙ ПЕРЕРАБОТКИ ДРЕВЕСИНЫ ЛИСТВЕННИЦЫ 05.21.03 технология и оборудование химической переработки биомассы дерева; химия древесины АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание учёной степени кандидата химических наук Иркутск Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном учреждении науки Иркутском институте химии им. А.Е. Фаворского Сибирского...»

«Шарипова Альфия Фаритовна БИОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ И МЯСНЫЕ КАЧЕСТВА ЦЫПЛЯТ-БРОЙЛЕРОВ ПРИ ИСПОЛЬЗОВАНИИ ПРОБИОТИЧЕСКОЙ КОРМОВОЙ ДОБАВКИ «ВЕТОСПОРИН-АКТИВ» 06.02.10 – частная зоотехния, технология производства продуктов животноводства АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Уфа – 2015 Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Башкирский государственный...»







 
2016 www.konf.x-pdf.ru - «Бесплатная электронная библиотека - Авторефераты, диссертации, конференции»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.