WWW.KONF.X-PDF.RU
БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА - Авторефераты, диссертации, конференции
 


«ГЕНЕТИЧЕСКОЕ РАЗНООБРАЗИЕ ПОПУЛЯЦИЙ СЕВЕРНОЙ ЕВРАЗИИ ПО STR И SNP МАРКЕРАМ X-ХРОМОСОМЫ И ИХ ДНКИДЕНТИФИКАЦИОННЫЙ ПОТЕНЦИАЛ ...»

На правах рукописи

ВАГАЙЦЕВА

КСЕНИЯ ВАЛЕРЬЕВНА

ГЕНЕТИЧЕСКОЕ РАЗНООБРАЗИЕ ПОПУЛЯЦИЙ СЕВЕРНОЙ ЕВРАЗИИ

ПО STR И SNP МАРКЕРАМ X-ХРОМОСОМЫ И ИХ ДНКИДЕНТИФИКАЦИОННЫЙ ПОТЕНЦИАЛ

03.02.07 - генетика

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Томск – 2015

Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном научном учреждении «Научно-исследовательский институт медицинской генетики», г. Томск

Научный руководитель:

доктор биологических наук, профессор Степанов Вадим Анатольевич

Официальные оппоненты:

Лавряшина Мария Борисовна, доктор биологических наук, профессор;

Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Кемеровский государственный университет», профессор кафедры генетики (г. Кемерово).

Чурносов Михаил Иванович, доктор медицинских наук, профессор;

Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Белгородский государственный национальный исследовательский университет», заведующий кафедрой медико-биологических дисциплин (г. Белгород).

Ведущая организация:

Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт общей генетики им. Н.И. Вавилова Российской академии наук (г. Москва).

Пирогова Мстерства здравоохранения Российской Федерации

Защита состоится «____» ____ 2015 года в _____ час на заседании объединенного диссертационного совета ДМ 001.045.01 при Федеральном государственном бюджетном научном учреждении «Научно-исследовательский институт медицинской генетики» при участии ГБОУ ВПО «Сибирский государственный медицинский университет» Минздрава России и ФГБНУ «Томский НИИ онкологии» по адресу: 634050, г. Томск, ул. Московский тракт, д. 3.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Федерального государственного бюджетного научного учреждения «Научно-исследовательский институт медицинской генетики» (г. Томск, ул. Набережная р. Ушайки, д. 10) и на сайте института http://www.medgenetics.ru/.

Автореферат разослан «____» ____________ 2015 года

Ученый секретарь диссертационного совета кандидат биологических наук И.Ю. Хитринская

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы.

Популяционно-генетические исследования населения России, выполненные с использованием различных систем генетических маркеров, выявили высокое внутри и межпопуляционную генетическую вариабельность, существенные генетические отличия между популяциями, принадлежащими к различным этническим и географическим регионам (Степанов В.А., 2002; Лавряшина М.Б., 2012; Харьков В.Н., 2005, 2012; Балановская Е.В. и др., 2007; Хитринская И.Ю., 2003 и др.). Структура генофонда населения Российской Федерации была исследована с помощью таких маркерных систем как «классический» белковый полиморфизм (Рычков Ю.Г., 1992; Балановская Е.В. и др., 2007 и др.), линий мтДНК (Голубенко М.В., 1998; Деренко М.В. и др., 2010; Батырова А.З., 2004;

Грошева А.Н. и др., 2014; Балановский О.П., 2012 и др.), Y-хромосомы (Харьков В.Н. и др., 2007, 2011, 2013, 2014; Харьков В.Н., 2005, 2012; Балановский О.П., 2012; Схаляхо Р.А. и др., 2012; Балаганская О.А. и др., 2011; Лепендина И.Н. и др., 2010; Падюкова А.Д. и др., 2014 и др.), аутосомные Alu-повторы (Хитринская И.Ю., 2003; Хитринская И.Ю и др., 2001, 2014; Лепендина И.Н. и др., 2013 и др.), и другие отдельные аутосомные локусы (Лавряшина М.Б и др., 2010, 2011; Песик В.Ю. и др., 2014; Степанов и др., 2011; Zhivotovsky L.A. et al., 2009 и др.), широкогеномные панели аутосомных SNP (Kushniarevich A. et al., 2015; Степанов В.А. и др., 2010). В то же время данные о популяционной вариабельности Хсцепленных маркеров в популяциях России очень ограничены (Хитринская И.Ю.

и др., 2010).

Популяционно-генетические данные являются основополагающими для разработки методов ДНК-идентификации и их применения. Вероятностная оценка достоверности выводов генетической экспертизы проводится на основе данных о частотах аллелей генетических маркеров в референтной популяции (Степанов В.А., и др., 2011; Пименов М.Г. и др., 2001).

Существующие в настоящее время, генетические тест-системы, используемые в практике экспертно-криминалистических служб, как за рубежом, так и в России, разработаны на основании данных о генетическом разнообразии США и стран Европы. Наиболее информативными для генетической экспертизы в России являются те тест-системы, которые были адаптированы для использования на территории России или же разрабатывались на основе данных о генетическом разнообразии населения РФ. Использование генетических систем ДНКидентификации без учета генетической специфичности популяции, из которой происходит исследуемый ДНК-профиль, снижает достоверность выводов (Степанов В.А. и др., 2011).

В практике ДНК-идентификации долгое время использовались тест-системы, основанные на микросателлитных локусах аутосом, однако ограниченность возможностей этих маркеров привела к внедрению систем, основанных на маркерах мтДНК, Y-хромосомы, Х-хромосомы (Jobling M.A. et al., 2004). При этом Х-хромосомные маркеры стали применяться в судебной медицине позднее (Szibor R., 2007).

Основными преимуществами Х-хромосомных маркеров являются особенности наследования и отсутствие рекомбинации у мужчин. За счет этого они являются удобным инструментом для сложных случаев экспертизы родства, например в случаях отсутствия ДНК предполагаемого отца или при генетическом анализе жертв катастроф, где необходимо установить семейные отношения.

Кроме того, данные о генетической структуре популяций по Х-хромосомным маркерам могут служить дополнительным инструментом для реконструирования путей расселения современного человека и филогеографии его генетического разнообразия, поскольку в отличие от Y-хромосомы и мтДНК, Х-хромосома несет информацию о комбинативной изменчивости и с отцовской, и с материнской стороны, и удобна в изучении за счет гемизиготности мужчин (Schaffner S.F., 2004).

В связи с небольшим объемом данных о генетическом разнообразии населения РФ и ближнего зарубежья по Х-хромосомным маркерам представляется актуальным изучение генетической структуры популяций по маркерам X-хромосомы, а также формирование базы данных содержащей информацию о частотах аллелей в России и сопредельных государствах.

Степень научной разработанности темы исследования. При работе над диссертацией были изучены коллективные труды и отдельные монографии российских и зарубежных ученых, посвященные изучению генетической структуры популяций по маркерам Х-хромосомы и их применимости для решения задач криминалистики и судебной медицины.

В литературе описана генетическая структура по Х-хромосомным маркерам для широкого ряда этнических групп:

алжирцы (Bekada A., et al., 2010), бразильцы (Cain L. et al., 2010, 2013; Ferreira da Silva H., et al., 2010; Ribeiro-Rodrigues E. et al., 2011), венгры (Horvth G. et al., 2012), ганцы (Becker В. et al., 2008; Poetsch M. et al., 2009), датчане (Tomas С. et al., 2012), дауры (Hou Q.F. et al., 2007), египтяне (Elakkary S. et al., 2014), испанцы (Zarrabeitia M.T. et al., 2006; Aler M. et al, 2007), итальянцы (Turrina S. et al., 2003;

Robino C. et al., 2006), индийцы (Shrivastava P. et al., 2015), китайцы (Deng J.Q. et al., 2003, 2004; Shi M.S. et al., 2003; Ying B.W. et al., 2003; Jia Y. et al., 2004; Gao S.

et al., 2007; Liu Q.L. et al., 2011, 2012, 2013; Luo H.B. et al., 2011; Sun R. et al., 2012;

Uchigasaki S. et al., 2013; Huang D. X. et al., 2015), корейцы (Son J.Y. et al., 2002;

Lee H.Y. et al., 2004; Shin K.J. et al., 2004; Shin S.H. et al., 2005; Lim E.J. et al., 2009;

Sim J.E. et al., 2010), португальцы (Pereira R. et al., 2007; Silva F. et al., 2010; Cain L. et al., 2013), поляки (Pepinski W. et al., 2005; uczak S. et al., 2011), турки (Asicioglu F. et al., 2011; Uchigasaki S. et al., 2013), уйгуры (Liu Q.L. et al., 2012), японцы (Koyama H. et al., 2002; Tabbada K.A. et al., 2005; Asamura H. et al., 2006;

Becker D. et al., 2008; Tie J. et al., 2010; Samejima M. et al., 2011; Nishi T. et al., 2013; Uchigasaki S. et al., 2013) и др. Из стран СНГ маркеры Х-хромосомы широко изучаются в Республике Беларусь (Rbaa K. et al., 2015). В России данные о генетическом разнообразии популяций по различным типам маркеров Ххромосомы немногочисленны и фрагментарны (Хитринская И.Ю., и др., 2010).

Цель исследования: Выявить структуру генофондов народов России и ближнего зарубежья по маркерам Х-хромосомы и оценить информативность Xхромосомных STR и SNP систем для целей идентификации личности в популяциях Северной Евразии.

Задачи исследования:

1. Описать генетическую вариабельность STR-маркеров Х-хромосомы в популяциях Северной Евразии.

2. На основании анализа генетического разнообразия Х-хромосомных SNP маркеров отобрать маркеры, наиболее информативные для целей ДНКидентификации, и описать их вариабельность в популяциях Северной Евразии.

3.Охарактеризовать генетическую дифференциацию по STR и SNP Ххромосомным маркерам, генетические внутри- и межэтнические взаимоотношения популяций Северной Евразии, а также провести сравнительный анализ генофонда мировых популяций по маркерам Х-хромосомы.

4.Оценить идентификационный потенциал систем, основанных на STR и SNP маркерах Х-хромосомы, в популяциях России и стран ближнего зарубежья.

5.Провести сравнительный анализ идентификационного потенциала маркерных систем на основе STR и SNP X-хромосомы и аутосом.

6.Создать референтную базу данных частот аллелей маркеров Х-хромосомы для популяций Северной Евразии.

Научная новизна: В работе впервые описана генетическая структура и генетическое разнообразие ряда популяций Сибири, Восточной Европы и Средней Азии по панелям Х-хромосомных локусов информативных для ДНКидентификации.

На основе данных о генетической структуре и генетическом разнообразии исследуемых этносов впервые были отобраны наиболее информативные для ДНК-идентификации в России X-SNP маркеры. Оценен идентификационный потенциал систем основанных на однонуклеотидных полиморфных и микросателлитных маркерах Х-хромосомы. В ходе работы была сформирована база данных аллельных частот в популяциях. Для ряда этнических групп, проживающих на территории РФ и ближнего зарубежья, разработаны индивидуальные панели генетических маркеров информативных в сложных случаях тестирования родства.

Теоретическая и практическая значимость работы: В работе получены данные о генетической структуре популяций Сибири, Восточной Европы и Средней Азии по ряду Х-SNP и X-STR маркеров. Полученные данные дополняют сведения о генофонде народов Евразии и могут быть использованы для построения генетических карт и геногеографических атласов.

В ходе работы разработана панель генетических маркеров (X-SNPid) и база данных по частотам аллелей для ДНК-идентификации в криминалистике и судебной медицине на территории России и ближнего зарубежья. Особенно полезна разработанная тест-система в случаях идентификации неопознанных тел и тестировании родства в осложненных случаях. Материалы работы также могут быть использованы в научно-образовательном процессе студентов биологических, медицинских и юридических специальностей.

Методология и методы диссертационного исследования:

Методологической основой диссертационного исследования послужили труды отечественных и зарубежных экспертов в области изучения генетической структуры и генетического разнообразия популяций, а также в области ДНКидентификации. В работе применялись следующие методы: выделение ДНК, полимеразная цепная реакция, капиллярный гель-электрофорез, MALDI-TOF масс-спектрометрия, статистические методы.

Положения диссертации, выносимые на защиту:

1.Генетическое разнообразие популяций Северной Евразии по маркерам Ххромосомы демонстрирует географическую структурированность. Для монголоидных популяций, проживающих на территории РФ и ближнего зарубежья, характерен спектр аллельных частот Х-хромосомных STR-маркеров, типичный для популяций Восточной Азии; для европеоидных – типичный для популяций Европы.

2.Уровень популяционной дифференциации по Х-хромосомным маркерам выше такового по аутосомным STR-маркерам. Наибольший уровень межпопуляционной дифференциации на фоне низкого уровня генетического разнообразия характерен для коренных популяций Сибири.

3.Идентификационный потенциал тест-системы основанной на X-SNP маркерах (X-SNPid), эквивалентен информативности традиционно используемого стандарта аутосомных маркеров и может быть использован для проведения экспертизы ДНК. Декаплекс Х-STR маркеров также показал высокий идентификационный потенциал, по информативности данная панель маркеров уступает аутосомной системе, содержащей большее число микросателлитных локусов.

Степень достоверности и апробация результатов: Достоверность научных выводов и положений основана на достаточном объеме материала, современных методах исследования и статистической обработке данных.

Апробация работы: Основные результаты работы были представлены на Межрегиональной научно-практической конференции «Современные молекулярно-биологические и генетические технологии в медицинской практике»

(Симонова К.В., 2013); семинаре ЭКЦ МВД в г. Ростов-на-Дону; ежегодном областном семинаре следователей с приглашением сотрудников СК РФ из других регионов России; VIII Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Молекулярная диагностика – 2014» (Вагайцева К.В. и др., 2014); международной конференции «International Society for Applied Biological Sciences 2015» (Stepanov V.A., 2015); международной конференции «Humam Genome Meeting 2015» (Vagaitseva K.V., 2015); международной конференции «International Scientific Conference on Regenerative Medicine & Healthy Aging» (Berezina G. et al., 2012); молодежной конференции «Популяционная генетика и геногеография: наука и практика» (Вагайцева К.В., 2013); на X научной конференции «Генетика человека и патология: проблемы эволюционной медицины» (Вагайцева К.В. и др., 2014); научных семинарах НИИМГ. Работа выполнена при финансовой поддержке грантов ФЦП "Исследования и разработки по приоритетным направлениям развития научнотехнологического комплекса России на 2014-2020 годы" (соглашение 14.604.21.0019 от 17.06.2014); ФЦП «Научные и научно-педагогические кадры инновационной России на 2009-2013 годы» (государственный контракт № П321 от 07 мая 2010 г.).

По теме диссертации опубликовано 11 работ (2 статьи в журналах рекомендованных ВАК, 2 статьи в сборниках, 2 тезиса в отечественных материалах и 4 в зарубежных, 1 зарегистрированная база данных).

Диссертационная работа изложена на 223 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, глав «Материалы и методы» и «Результаты и обсуждения», заключения, выводов, списка литературы и приложения. Работа проиллюстрирована 37 таблицами (+ 39 таблиц в приложении) и 24 рисунками. Список литературы включает 251 источник, из них 37 на русском языке.

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Материалом исследования послужили образцы ДНК, выделенной из лейкоцитов крови людей, принадлежащих к разным этническим группам. Для анализа генетического разнообразия X-STR маркеров в популяциях Северной Евразии были прогенотипированы образцы индивидов принадлежащих к 18 популяционным выборкам этносов Сибири, Средней Азии и Восточной Европы.

Общий объем исследованных выборок составил 1843 человека, из них 1172 индивида – мужчины, 671– женщины. Краткая характеристика и объем выборок представлены в таблице 1.

Для оценки генетического разнообразия по SNP-маркерам были прогенотипированы образцы 7 популяционных выборок: русские (190 человек), сибирские татары г. Томска (76 человек), ханты (92 человека), хакасы (95 человек), казахи (95 человек), буряты (94 человека), тувинцы (95 человек).

В исследование были включены две маркерные системы Ххромосомы: 10 микросателлитных локусов (DXS8378, GATA172D05, DXS7132, DXS9898, DXS7423, DXS8377, DXS101, DXS6809, DXS6789, HPRTB) и 66 X-SNP маркеров. Микросателлитные маркеры отбирались на основе широкой изученности в мировых популяциях на момент планирования работы.

Информативные SNP отбирались на основе ранее полученных нами данных о частотах аллелей 2867 SNP Х-хромосомы в 26 популяционных группах России и ближнего зарубежья (Vagaitseva К.V., et al., 2015). Генотипирование STRмаркеров проводили с помощью ПЦР каждого локуса с последующим мультиплексным анализом фрагментов методом капиллярного гельэлектрофореза на генетическом анализаторе (AbiPrism3130xl, AbiPrism3730xl).

Соответствие длины фрагментов и числа повторов определяли с помощью секвенирования ряда контрольных образцов (AbiPrism3130xl). Генотипирование SNP-маркеров проводили с помощью мультиплексной ПЦР с последующим анализом методом MALDI-TOF масс-спектрометрии на генетическом анализаторе MassARRAY Analyzer 4 (Sequenom, США). Для микросателлитных локусов использовали праймеры, описанные в литературе. Для SNP-маркеров праймеры подбирали с помощью Assay Design Suite v2.0 (https://www.mysequenom.com).

Оценку соответствия распределения частот аллелей и генотипов равновесию Харди-Вайнберга проводили с помощью теста Гуо и Томпсона (Guo S.W. and Thompson E.A., 1992). В качестве характеристик генетического разнообразия использовали теоретическую гетерозиготность (Nei М., 1987) и информационное содержание полиморфизма (PIC, polymorphism information content) (Botstein D. et al., 1980). Оценку генетической дифференциации популяций проводили с помощью анализа молекулярной дисперсии AMOVA (Excoffier L. et al., 1992). Для расчета генетических расстояний по STR маркерам использовали две меры, позволяющие учитывать различия по числу тандемных повторов – Rst и (µ)2 (Cтепанов В.А., 2002). Матрицу генетических расстояний по SNP маркерам строили по методу Нея (Nei M., 1987).

–  –  –

Корреляционный анализ матриц проводили тестом Мантеля, в программном пакете Arlequin (Schneider S. et al., 2000). Анализ структуры неравновесия по сцеплению проводили с использованием алгоритма цепей Маркова без применения дополнительных статистических алгоритмов, поскольку гаметическая фаза образцов ДНК мужчин известна. Генетические взаимоотношения популяций выявляли с помощью двух методов: метод главных компонент и метод многомерного шкалирования (Ким Дж.О., Мьюллер Ч.У., 1989; Дэйвинсон М., 1988; Степанов В.А. и др., 2014). Для оценки возможности использования системы маркеров для ДНК-идентификации в судебномедицинской экспертизе использовали стандартные популяционностатистические показатели, характеризующие идентификационный потенциал системы маркеров: вероятность дискриминации неродственных индивидов (PD, Power of Discrimination), исключающая способность (PE, Power of Exclusion), индекс отцовства (PI, Paternity Index) (Степанов В.А. и др., 2014).

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

Частоты аллелей, генетическое разнообразие и дифференциация популяций Оценка генетического разнообразия популяций проводилась на основании данных о среднем числе аллелей, среднем значении разброса числа повторов (в случае микросателлитных маркеров), ожидаемой гетерозиготности, информационном содержании полиморфизма (PIC).

Все включенные в исследование локусы оказались полиморфны во всех прогенотипированных выборках. Анализ X-STR маркеров показал, что модальные аллели совпадают для большинства локусов в популяциях различной этнической принадлежности, однако есть локусы, в которых распределение частот отличается в популяциях, принадлежащих к европеоидному и монголоидному расовым типам. Аллель 8,3 локуса DXS9898 обладает высокой частотой в отдельных европеоидных популяциях и низкой – у отдельных монголоидных популяций.

Аллели локуса DXS6789, содержащие 15 и 16 повторов, чаще представлены в популяциях монголоидного типа. В целом, было показано, что для исследованных нами европеоидных популяций России характерен спектр аллельных частот, типичный для популяций Европы, монголоидных – типичный для популяций Восточной Азии.

Наименьший уровень средней ожидаемой гетерозиготности по двум системам Х-хромосомных маркеров зафиксирован у популяций коренных этносов Сибири (ханты, алтайцы, тувинцы, буряты, хакасы) (рис. 1). По совокупности показателей (ожидаемая гетерозиготность, PIC, среднее число аллелей, разброс числа повторов) наибольшим генетическим разнообразием обладают популяции русских и сибирских татар (Томск). На этих же выборках ранее уже было показано наличие относительно высокого генетического разнообразия по Y-хромосомным маркерам (Харьков В.Н., 2012), что, видимо, отражает результат формирования этих этносов на основе предковых групп, разнородных по происхождению.

А

В

Рис.1. Средние значения ожидаемой гетерозиготности по STR (А) и SNP (B) маркерам Оценку генетической дифференциации популяций по STR маркерам проводили с помощью анализа молекулярной дисперсии (AMOVA). Общий уровень генетической дифференциации по X-STR составил 1,9% (р 10-4); по Х- SNP маркерам – 3,8 % (р 10-4). При расчете генетической дифференциации только по популяциям Сибири уровень Fst возрос до 2,4% (по STR- маркерам) и до 3.09% (по SNP-маркерам).

В целом, описанный низкий уровень генетического разнообразия и высокое значение популяционной дифференциации в популяциях коренных этносов Сибири согласуется с тенденцией постепенного изменения генофонда популяций Северной Евразии в направлении с запада на восток, описанной Ю.Г. Рычковым еще по классическим генетическим маркерам. Аналогичная картина была показана по целому ряду генетических маркеров (Балановская Е. В. и др., 2007; Степанов В.

А. и др., 1999, 2001, 2011; Хитринская И. Ю. и др., 2001, 2003, 2010, 2014; Харьков В. Н. и др., 2011, 2012, 2013, 2014; Батырова А. З., 2004; Деренко М. В., Малярчук Б. А., 2010). Вероятно, причиной такого снижения гетерозиготности и возрастания уровня популяционной дифференциации является более интенсивный дрейф генов у малочисленных и изолированных популяций Сибири, тогда как в Европе действие дрейфа генов снижается за счет интенсивных миграций населения.

Ранее полученные нами и литературные данные по 13 аутосомным микросателлитам позволили сравнить уровень генетической дифференциации популяций по Х-хромосомным и аутосомной системам маркеров (Zhivotovsky L.A.

et al., 2009; Степанов В.А. и др., 2011). Для анализа были привлечены данные по пяти популяциям: русские, марийцы, тувинцы, буряты, хакасы (таблица 2).

Согласно результатам, приведенным в таблице, Х-хромосомные маркеры имеют более высокий уровень дифференциации, что согласуется с особенностью их наследования.

Таблица 2 Уровни генетической дифференциации популяций по трем системам маркеров Fst Fst Популяции X-хромосомные маркеры Аутосомные STR Х-STR Русские, марийцы, 2,58 % 2,34 % тувинцы, буряты, хакасы X-SNP Русские, тувинцы, 4,99 % 2,3 % буряты, хакасы Генетические взаимоотношения между популяциями Генетические взаимоотношения популяций выявляли с помощью двух методов: метода главных компонент (ГК) и метода многомерного шкалирования. В качестве переменных, анализируемых методом главных компонент, использовали частоты аллелей, это позволило привлечь для анализа литературные данные. Из всего массива данных по мировым этническим группам, 16 популяций исследованы по десяти выбранным Х-STR маркерам: португальцы (Pereira R. et al., 2007), латиноамериканцы (Gomes I. et al., 2007), немцы (Becker D. et al., 2008; Edelman J. et al., 2001, 2003; Hering S.

et al., 2000, 2001), испанцы (Aler M. et al., 2007), колумбийцы (Pico A. et al., 2008), китайцы острова Тайвань (Hwa H.L. et al., 2011), американцы азиатского происхождения (Gomes I. et al., 2007), японцы (Asamura H. et al., 2006; Nakamura Y. et al., 2010), хань (Liu Q. et al., 2013), казахи Китая (Liu Q. et al., 2012), уйгуры, монголы (Liu Q. et al., 2013), афроамериканцы, Ангола, Мозамбик, Уганда (Gomes I. et al., 2007). Для анализа однонуклеотидных полиморфных маркеров были привлечены данные из проекта HapMap (CEU, TSI, MEX, JPT, CHB, CHD, GIH, ASW,YRI). Полученные графики представлены на рисунке 2.

Анализ частот аллелей как STR, так и SNP маркеров, показал согласованность между генетической кластеризацией популяций и их географической группировкой. В пространстве главных компонент среди изученных популяций можно выделить два кластера: евразийские популяции, популяции Африки и афроамериканцы. Вторая ГК распределяет популяции евразийского кластера по степени содержания восточно-евразийской компоненты в генофонде, при этом показана генетическая общность сибирских татар (Томск) с европеоидами, русскими в частности. Популяции хантов, относящиеся к уральскому малому расовому типу, показали преобладание восточно-евразийской компоненты в их генофонде. Анализ корреляции главных компонент с широтой и долготой показал отрицательную корреляцию первой ГК с долготой для X-STR (р = 0,002), а также значимую корреляцию с долготой (-0,821, р = 0,023) и широтой (0,786, р = 0,036) для X-SNP маркеров.

Метод многомерного шкалирования использовали для визуализации генетических расстояний между популяциями. Анализ корреляции двух первых размерностей с географическими координатами показал наличие значимой корреляции первой размерности с долготой (-0,893, р = 0,007) для SNP маркеров и корреляцию второй размерности с долготой (0,574, р = 0,020) для STR маркеров.

А

–  –  –

Рис.2. Положение популяций в пространстве двух первых главных компонент аллельных частот Х-STR (A) и X-SNP (B) маркеров Примечание: RUS – русские, GAG – гагаузы, MOL – молдаване, MAR – марийцы, PORT – португальцы, LATAM – латиноамериканцы, GER – немцы, ISP – испанцы, COL – колумбийцы, HAK, HAR – ханты, KHA – хакасы, TAT – сибирские татары, TUV – тувинцы, BUR – буряты, ALB, ALK – алтайцы, KGZ – киргизы, KZ – казахи, TAI – китайцы о. Тайвань, AZAM – американцы азиатского происхождения, JAP – японцы, CHIN – китайцы, KZCHIN – казахи Китая, UIG –

–  –  –

Доля вариабельности частот аллелей X-SNP, объясняемая географией, составила 28%. При этом достоверных совпадений генетических расстояний по XSTR маркерам с географией обнаружено не было как в целом, так и на региональном уровне (Таблица 3, пункты 1-3). Возможно, это можно объяснить тем фактом, что в данной работе не учитывались вариации тандемных повторов сложных микросателлитных маркеров. Также можно отметить корреляцию с уровнем значимости близким к пороговому значению, между матрицами генетических расстояний X-SNP и Y-STR маркеров, X-SNP и аутосомных SNPмаркеров иммунного ответа, а также X-STR и Alu-инсерций (Таблица 3). При этом корреляция генетических расстояний по X-SNP маркерам с географическими превзошла таковую по Y-STR локусам, для одного и того же пула популяций.

Сравнение уровней корреляции матриц для двух типов однонуклеотидных полиморфных маркеров одного пула популяций показало, что корреляция по аутосомным SNP иммунного ответа с географией сильнее, чем у X-SNP маркеров.

Анализ структуры неравновесия по сцеплению Оценка всех пар локусов микросателлитных маркеров в 12 выборках показала наличие сцепления для 53 пар маркеров. Единственной выборкой, для которой наличие сцепленных маркеров не было установлено, оказалась популяционная выборка русских. Маркеры, входящие в четвертую группу сцепления (DXS7423-DXS8377), показали наличие сцепления в шести популяционных выборках: хакасов, гагаузов, алтайцев Бешпельтира, сибирских татар, марийцев, казахов.

При этом при введении поправки на множественность сравнений Бенджамина-Хочберга (FDR) значимость сцепления осталась в выборках хакасов и казахов. Также было показано наличие сцепления между маркерами, расположенными на расстоянии 3,38 Mb (DXS9898-6809). Такое сцепление отмечалось в выборке гагаузов, молдаван, тувинцев и алтайцев Бешпельтира. При введение поправки сцепление данной пары локусов было показано только для тувинцев. Маркеры DXS6809-DXS6789, расположенные на дистанции в 0,5 Mb, показали сцепление в популяции бурят и алтайцев (Кулада), сцепление данных маркеров ранее отмечалось в популяции немцев (Szibor R. et al., 2005). Оставшиеся 41 пары сцепленных локусов были отнесены к эффекту выборки за счет большого расстояния между локусами и отсутствия сцепления с промежуточными маркерами.

Оценка 14305 пар локусов SNP показала наличие сцепления для 946 пар маркеров. Большая часть локусов в вероятно сцепленных парах оказались широко дистанцированны друг от друга, при этом сцепления с промежуточно расположенными локусами не наблюдается. Введение поправки на множественность сравнений (FDR) сократило число пар сцепленных локусов до

25. Полученные данные учитывались при индивидуальном расчете идентификационного потенциала тест-систем, основанных на Х-хромосомных маркерах, для популяций русских, тувинцев, хантов, казахов, бурят, сибирских татар и хакасов.

Идентификационный потенциал систем Х-хромосомных маркеров.

Сравнительный анализ идентификационной информативности Ххромосомных и аутосомных систем генетических маркеров Уровень идентификационной способности системы генетических маркеров отражает значения вероятности дискриминации неродственных индивидов (PD, Power of Discrimination) и исключающей способности (PE, Power of Exclusion).

Показатель вероятности дискриминации неродственных индивидов отражает информативность панели маркеров в идентификации индивида. Информативность системы маркеров для тестирования родства и, в частности отцовства, отражают показатели исключающей способности и индекса отцовства. Сравнительный анализ криминалистических показателей в мировых популяциях для X-STR систем отразил наибольшую информативность маркеров в популяциях, относящихся к европеоидам и народам Африки. Система 66 SNP-маркеров также показала высокую информативность у европеоидов, но, в отличие от микросателлитной, оказалась низко информативной для афроамериканцев. Уровень вероятности дискриминации неродственных индивидов (PD) и исключающей способности (PE) для монголоидов как по SNP-маркерам, так и по STR-маркерам, уступает информативности тест-системы для европеоидов. В целом обе системы Ххромосомных маркеров обладают высоким идентификационным потенциалом.

Однако для более точной оценки уровня информативности обсуждаемых систем маркеров, для каждой исследованной в данной работе популяции необходимо учитывать физическое сцепление генетических маркеров.

Наличие данных о частотах аллелей аутосомных микросателлитных локусов входящих в состав набора PowerPlex 16, в популяциях России позволило, в настоящей работе, провести сравнительный анализ идентификационной информативности не только между Х-хромосомными системами маркеров, но также привлечь к сравнению и стандартный аутосомный набор маркеров.

Сравнение проводилось по следующему ряду популяционных выборок: русские, марийцы, тувинцы, буряты, хакасы (таблица 4). Как видно из таблицы 4, идентификационная информативность системы, основанной на Х-хромосомных микросателлитных локусах, несколько уступает таковой по аутосомным STRмаркерам. Эта разница обусловлена тем, что в аутосомной системе маркеров представлено большее количество локусов. Тем не менее 10 X-STR маркеров показали удовлетворяющий уровень информативности в случае идентификации индивида, в отличие от уровня исключающей способности системы. Полученные результаты отражают необходимость увеличения панели маркеров для установления факта родства по Х-хромосомным микросателлитам.

Также данная система может быть использована в качестве дополнительной к стандартной аутосомной панели маркеров, что значительно увеличит информативность проводимой генетической экспертизы. Представленная в данной работе панель Ххромосомных однонуклеотидных полиморфных маркеров показала высокую информативность, как в случае индивидуальной идентификации, так и в случае тестирования на родство. Так информативность данной системы в популяции русских при проведении ДНК-идентификации женщин превосходит возможности аутосомной системы, но эквивалента таковой при анализе мужчин.

Не смотря на то, что уровни вероятности дискриминации неродственных индивидов (PD) и исключающей способности (PE) системы основанной на однонуклеотидных полиморфных маркерах, сопоставимы с уровнями криминалистических показателей системы аутосомных микросателлитов, представленная в данной работе система X-SNPid обладает рядом преимуществ, которые делают ее качественной альтернативой традиционной системы маркеров.

Основным минусом микросателлитных систем маркеров является их сложность мультиплексирования, а также генотипирования. Вероятность возникновения артефактных пиков требует высокого профессионализма при постановке и анализе результатов. Валидация рассматриваемой в данной работе системы X-SNPid показала, что использование технологии MALDI-TOF массспектрометрии обеспечивает 100% специфичность, чувствительность – 5 нг/мкл, 100% точность генотипирования, 100% воспроизводимость результата. В связи с этим анализ полученных генотипов исключает вероятность ошибочного генотипирования при соблюдении инструкции.

Таблица 4 Сравнительная характеристика систем генетических маркеров Аутосомные STR (15 маркеров) PD PE Русские* 0,999999999999999997 0,99999896 Марийцы* 0,9999999999999997 0,999987 Тувинцы** 0,9999999999999998 0,9999991 Буряты** 0,99999999999992 0,99998 Хакасы* 0,99999999999999992 0,999996 Хакасы** 0,9999999999997 0,999969

–  –  –

Хакасы 0,99999999999999999999996 0,9999999999999994 0,99995 Примечание: * - Степанов В.А. и др., 2011, ** - ZhivotovskyL.A. et al., 2009 Сравнение разработанной системы X-SNPid с существующими на настоящий момент аналогами показало, что разработанная в настоящей работе панель Xсцепленных однонуклеотидных маркеров по технологичности превосходит все имеющиеся аналоги, кроме систем, базирующихся на технологии массового параллельного секвенирования (MPS), которые на настоящий момент затратны.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

В настоящей работе охарактеризована генетическая структура ряда популяций Евразии по Х-хромосомным маркерам двух типов: STR, SNP. На основе полученных данных выполнена оценка идентификационной информативности исследуемых маркеров для каждой изученной популяции индивидуально.

Анализ частот аллелей показал, что для популяций, проживающих на территории Российской Федерации и ближнего зарубежья, относящихся к европеоидному расовому типу, характерен спектр частот, типичный для популяций Европы; к монголоидному расовому типу – типичный для популяций Восточной Азии.

Оценка ожидаемой гетерозиготности и уровня популяционной дифференциации показала снижение уровня генетического разнообразия и увеличение генетической дифференциации популяций в направлении с запада на восток. При этом 28% генетической вариабельности однонуклеотидных маркеров объясняется географическими различиями популяций. Отсутствие корреляции микросателлитных маркеров с географическими параметрами, наиболее вероятно является результатом того, что в данной работе не учитывались вариации структуры аллелей с одним и тем же числом повторов. В целом уровень популяционной дифференциации Х-хромосомных маркеров превосходит таковой по аутосомным микросателлитам. Таким образом, Х-маркеры являются наилучшими кандидатами для формирования идентификационной панели, позволяющей определять этническую принадлежность.

На основе полученных данных о генетическом разнообразии и частотах аллелей была сформирована панель однонуклеотидных полиморфных маркеров, наиболее информативных для ДНК-идентификации в российских популяциях, а также создана референсная база данных частот аллелей, что позволяет проводить расчеты частот встречаемости генотипов при идентификации личности и установлении биологического родства.

Анализ генетических взаимоотношений по двум панелям Х-хромосомных маркеров дал схожие результаты. В пространстве главных компонент, среди изученных популяций выделяются два кластера: западно-евразийский и восточноевразийский. При этом показана общность генофонда сибирских татар (Томск), относящихся к уральскому малому расовому типу, с европеоидами, русскими в частности. Популяции хантов, также относящиеся к уральскому расовому типу показали преобладание монголоидной компоненты в их генофонде.

Проведенный анализ структуры неравновесия по сцеплению показал различия в характере сцепления в различных популяциях. Учет этих данных позволил скорректировать панель наиболее информативных маркеров для каждой популяции.

Анализ идентификационного потенциала исследуемых систем маркеров выявил необходимость учета частот гаплотипов однонуклеотидных полиморфных маркеров в популяциях хакасов и бурят. В целом информативность X-SNP системы достигла высоких показателей и не только не уступает информативности панели, традиционно используемых аутосомных микросателлитных маркеров, но и превосходит ее в некоторых случаях.

Анализируемая X-STR система генетических маркеров также показала высокую информативность, однако ее идентификационный потенциал уступает информативности, традиционной тест-системы, за счет разницы в количестве локусов. Таким образом, данная панель маркеров может служить дополнением к стандартной аутосомной системе, что значительно увеличит информативность проводимой генетической экспертизы.

Полученные результаты обладают широкими перспективами для практического использования в криминалистике и судебной медицине. Наиболее полезны маркеры Х-хромосомы при тестировании родства, а также при непрямой молекулярно-генетической идентификации личности. Таким образом, разработанная в данном исследовании панель генетических маркеров может быть полезна при опознании тел жертв военных действий, массовых катастроф, терактов, в частности, при идентификации останков военнослужащих, погибших в ходе Второй мировой войны, особенно в тех случаях, когда Y-хромосомные маркеры неинформативны. При этом именно X-SNP система маркеров является наиболее предпочтительной в случае идентификации останков большого срока давности, за счет того, что SNP маркеры более удобны в работе с деградированной ДНК.

ВЫВОДЫ

1. Уровень генетического разнообразия в популяциях Евразии по панелям Х-хромосомных маркеров уменьшается в направлении с запада на восток.

Наибольший уровень ожидаемой гетерозиготности показан для популяций Восточной Европы (0,774 по X-STR маркерам; 0,480 по X-SNР). Наименьший – для коренных этносов Сибири (0,740 по X-STR маркерам; 0,450 по X-SNР).

2. Уровень генетических различий популяций народов России и ближнего зарубежья (Fst = 2,58% по X-STR; Fst = 4,99%, по X-SNP) по Х-хромосомным маркерам превосходит таковой по аутосомным микросателлитным маркерам (Fst = 2,34%).

3. Коренные популяции Сибири характеризуются высоким уровнем генетической дифференциации по маркерам Х-хромосомы различных типов (Fst= 2,4%, p 10-4 по X-STR; Fst = 3,9%, р 10-4 по X-SNP).

4. Генетические расстояния исследованных популяций по системе однонуклеотидных полиморфных маркеров Х-хромосомы коррелируют с географическими, 28%генетической вариабельности по X-SNP маркерам объясняется географическими расстояниями.

5. Исследованные популяции Евразии характеризуются различной структурой неравновесия по сцеплению Х-хромосомныхлокусов.Учет популяционной структуры неравновесия по сцеплению позволяет более точно оценить идентификационный потенциал предлагаемых панелей генетических маркеров для каждой популяции.

6. Идентификационный потенциал панели 10 X-STR маркеров уступает информативности тест-системы, содержащей 15 традиционно используемых в ДНК-идентификации аутосомных микросателлитных маркеров. Уровень вероятности дискриминации неродственных индивидов (PD) системы 10 X-STR маркеров в популяции русских составил 0,999999999997 – для женщин и 0,99999986 – для мужчин. Уровень исключающей способности (PE) составил 0,99988.

7. Идентификационный потенциал, отобранных в данном исследовании, однонуклеотидных полиморфных маркеров, образовавших тест-систему X-SNPid, соответствует информативности используемого стандарта аутосомных маркеров, а в случае идентификационного анализа женщин, дискриминационный потенциал предлагаемой панели маркеров на несколько порядков превышает информативность стандартной микросателлитной системы. Таким образом, тестсистема X-SNPid является информативным и достоверным инструментом для проведения ДНК-идентификации в популяциях России и ближнего зарубежья.

СПИСОК ПУБЛИКАЦИЙ ПО ТЕМЕ РАБОТЫ

Статьи в журналахи сборниках

1. Вагайцева К.В., Харьков В.Н., Черпинская К.В., Хитринская И.Ю., Степанов В.А. Генетическая вариабельность X-сцепленных STR-маркеров в популяциях Сибири // Молекулярная биология. – 2015. – Т. 49. – № 2. – С. 305Степанов В.А., Балановский О.П., Мельников А.В., Лаш-Завада А.Ю., Харьков В.Н., Тяжелова Т.В., Ахметова В.Л., Жукова О.В., Шнейдер Ю.В., Шильникова И.Н., Боринская С.А., Марусин А.В., Спиридонова М.Г., Симонова К.В., Хитринская И.Ю., Раджабов М.О., Романов А.Г., Штыгашева О.В., Кошель С.М., Балановская Е.В., Рыбакова А.В., Хуснутдинова Э.К., Пузырев В.П., Янковский Н.К. Характеристика популяций Российской Федерации по панели пятнадцати локусов, используемых для ДНК-идентификации и в судебномедицинской экспертизе //Acta Naturae. – 2011. – Т. 3. – № 2. – С.59-71.

3. Вагайцева К.В., Харьков В.Н., Черпинская К.В., Хитринская И.Ю., Степанов В.А. Вариабельность Х-сцепленных STR-маркеров в популяциях

Евразии // Генетика человека и патология. Проблемы эволюционной медицины:

сб. науч. трудов / под ред. В.А. Степанова. – Вып. 10. – Томск: «Печатная мануфактура», 2014. – С. 40-43.

4. Симонова К.В., Харьков В.Н., Махмутова Ж., Березина Г., Святова Г.С., Степанов В.А. Микросателлитные маркеры Х-хромосомы в популяционной генетике и криминалистике: генетическое разнообразие, дифференциация и дискриминационный потенциал в популяциях Казахстана // Молекулярнобиологические технологии в медицинской практике / под ред. чл.-корр. РАЕН А.Б. Масленникова. – Вып.19.– Новосибирск: «НСК Ресурс», 2013.– С. 190-197.

Патенты

5. Вагайцева К.В., Харьков В.Н., Хитринская И.Ю., Степанов В.А. База данных по частотам аллелей микросателлитных маркеров Х-хромосомы в популяциях Северной Евразии / Свидетельство о государственной регистрации базы данных. №2014621137. 13.08.14.

Тезисы

6. Вагайцева К.В., Харьков В.Н., Степанов В.А. Идентификационный потенциал тест-системы основанной на X-STR маркерах для популяций Евразии // Молекулярная диагностика – 2014: сб. тр. VIII Всероссийской научнопрактической конференции с международным участием / под ред. акад. РАН В.И.

Покровского. – М.: ООО «Издательство МБА», 2014. – Т. 2. – С. 325-326.

7. Вагайцева К.В., Харьков В.Н., Степанов В.А. Оценка применимости набора 10-STR маркеров Х-хромосомы для целей ДНК-идентификации на основе анализа 11 популяций Евразии // Сборник тезисов молодёжной конференции «Популяционная генетика и геногеография: наука и практика». Москва, 2013. С.

12.

8. Vagaitseva K., Stepanov V., Kharkov V., Trifonova E. Population genetics of Xlinked SNPs in North Eurasia and its implications for human DNA identification // Human Genome Meeting 2015. 14 – 17 March 2015. Kuala Lumpur Convention Centre, Malaysia. Final Programme and

Abstract

Book. – P. 59.

9. Stepanov V.A., Vagaitseva K.V., Kharkov V.N. Multiplex X-SNP system for forensic genetics // Ninth ISABS conference in forensic, anthropologic and medical genetics and mayo clinic lectures in individualized medicine. – Croatia, 2015. – P.86.

10. Berezina G., Svyatova G., Srepanov V., Simonova K., Kharkov V. Genetic structure of kazakhs based on the study of mtDNA, nuclear loci and ten X-chromosomal STR markers // International Scientific Conference on Regenerative Medicine & Healthy Aging. – Astana, 2012. – P.53.

11. Stepanov V., Vagaitseva K., Kharkov V. X-chromosomal SNPs variation in populations of Russia // Ann Transl Med 2015; 3(S2):AB048.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

STR (Short tandem repeat) – микросателлиты SNP (Single nucleotide polymorphism) – однонуклеотидный полиморфизм X-SNPid – разработанная система ДНК-идентификации основанная на Х- SNP маркерах MALDI (Matrix Assisted Laser Desorption/Ionization) – матрично-активированная лазерная десорбция/ионизация PD – power of discrimination, вероятность дискриминации неродственных индивидов PE – power of exclusion, исключающая способность PI – paternity index, индекс отцовства PIC – polymorphism information content, информационное содержание полиморфизма

Просьба высылать отзывы на автореферат по адресу:

ФГБНУ «НИИ медицинской генетики»

634050, г. Томск, ул. Набережная реки Ушайки, 10 Ученому секретарю Диссертационного Совета ДМ 001.045.01 канд. биол. наук Хитринской И.Ю.

Факс +7(3822)51-37-44 E-mail: i.khitrinskaya@medgenetics.ru




Похожие работы:

«ЕФИМОВ ПЕТР ГЕННАДЬЕВИЧ РОД PLATANTHERA Rich. (ORCHIDACEAE Juss.) И БЛИЗКИЕ РОДЫ ВО ФЛОРЕ РОССИИ 03.00.05. – «Ботаника» Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук САНКТ-ПЕТЕРБУРГ Работа выполнена в Отделе Гербарий высших растений Ботанического института им. В. Л. Комарова РАН. Научный руководитель: доктор биологических наук Аверьянов Леонид Владимирович Официальные оппоненты: доктор биологических наук Шамров Иван Иванович, кандидат...»

«Низкий Сергей Евгеньевич БИОЛОГИЧЕСКИЕ РЕСУРСЫ АНТРОПОГЕННО-ПРИРОДНЫХ И ТЕХНОГЕННЫХ ЛАНДШАФТОВ ПРИАМУРЬЯ, ИХ ВОССТАНОВЛЕНИЕ И ИСПОЛЬЗОВАНИЕ 03.02.14 – биологические ресурсы Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук Благовещенск – 2015 Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном учреждении высшего образования «Дальневосточный государственный аграрный университет» Официальные оппоненты: Голов Владимир Иванович, доктор...»

«Калинкин Дмитрий Евгеньевич ФАКТОРЫ ФОРМИРОВАНИЯ ЗДОРОВЬЯ НАСЕЛЕНИЯ ГОРОДОВ В ЗОНЕ ВОЗДЕЙСТВИЯ ПРЕДПРИЯТИЙ АТОМНОЙ ИНДУСТРИИ 14.02.03 – общественное здоровье и здравоохранение Автореферат диссертации на соискание учёной степени доктора медицинских наук Томск – 2015 Работа выполнена в Федеральном государственном унитарном предприятии «Северский биофизический научный центр» Федерального медикобиологического агентства Российской Федерации (г. Северск) Научный консультант: доктор...»

«Горовой Александр Иванович БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫЕ ВЕЩЕСТВА ДРЕВЕСНОЙ ЗЕЛЕНИ И ШИШЕК PINUS KORAIENSIS SIEBOLD ET ZUCC. (ПОЛУЧЕНИЕ, СОСТАВ, ИСПОЛЬЗОВАНИЕ) 03.02.14 – биологические ресурсы Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Владивосток, 2015 Работа выполнена в Федеральном бюджетном учреждении «Дальневосточный научно-исследовательский институт лесного хозяйства» Научный руководитель: доктор биологических наук, профессор Тагильцев Юрий...»

«Подсвирова Ирина Александровна Микробиологический мониторинг патогенов гнойновоспалительных заболеваний в хирургических отделениях и отделении реанимации и интенсивной терапии в многопрофильном стационаре 03.02.03 – микробиология Автореферат диссертации на соискание учёной степени кандидата медицинских наук Москва — 2014 Работа выполнена в ГБОУ ВПО Ставропольский государственный медицинский университет Минздрава Российской Федерации Научные руководители: Миронов Андрей...»

«Хоцкин Никита Валерьевич Пространственная память и обучение у мышей, различающихся по предрасположенности к наследственной каталепсии: влияние нейротрофического фактора мозга BDNF Физиология – 03.03.01 АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: д.б.н., г.н.с. Куликов А.В. Новосибирск, 2015 Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном научном учреждении Федеральный исследовательский центр Институт...»

«Гафаров Рамиз Рафикович Совершенствование лабораторной диагностики краснухи в условиях проведения массовой вакцинопрофилактики 03.02.02 Вирусология 14.03.10 Клиническая лабораторная диагностика АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Москва-2014 Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном учреждении «Научно-исследовательский институт вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова» Российской академии медицинских наук Научные...»

«ГАЛИНИЧЕВ АНДРЕЙ ВАСИЛЬЕВИЧ ЦИКАДОВЫЕ (HEMIPTERA, CICADINA) УРАЛА: СОСТАВ ФАУНЫ, ЭКОЛОГИЯ И ХОРОЛОГИЯ 03.02.08 – экология (биологические науки) АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Нижний Новгород Работа выполнена на кафедре зоологии федерального государственного автономного образовательного учреждения высшего образования «Нижегородский государственный университет им. Н. И. Лобачевского» Научный руководитель: доктор биологических...»

«Равашдех Шариф Халид Абдул-Азиз БИОЛОГИЯ, ВРЕДОНОСНОСТЬ И СОВЕРШЕНСТВОВАНИЕ МЕР БОРЬБЫ ПРОТИВ ТОМАТНОЙ МОЛИ Tuta absoluta (Meyrick) В УСЛОВИЯХ ИОРДАНИИ 06.01.07 – защита растений АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Москва – 2014 Работа выполнена на кафедре генетики, растениеводства и защиты растений Российского университета дружбы народов и на Сельскохозяйственной станции Дейр Алла (Королевство Иордания). Научный руководитель:...»

«ГРИГОРЬЕВА ЛЮДМИЛА ВИКТОРОВНА АГРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ ПОВЫШЕНИЯ ПРОДУКТИВНОСТИ ЯБЛОНИ В НАСАЖДЕНИЯХ ЦЧР РФ Специальность 06.01.08 – плодоводство, виноградарство АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание учёной степени доктора сельскохозяйственных наук Краснодар, 2015 Диссертационная работа выполнена в ФГБОУ ВО «Мичуринский государственный аграрный университет» Министерства сельского хозяйства РФ доктор сельскохозяйственных наук, профессор Научный консультант: Бобрович Лариса...»

«Бантыш Ольга Борисовна Биосинтез пептид-нуклеотидного антибиотика микроцина С и его гомологов Специальность 03.01.03 молекулярная биология АВТОРЕФЕРАТ Диссертация на соискание учной степени кандидата биологических наук Москва Работа выполнена в лаборатории молекулярной генетики микроорганизмов Федерального государственного бюджетного учреждения науки Института биологии гена Российской академии наук. Научный руководитель: Северинов Константин Викторович, доктор биологических...»

«Подольникова Юлия Александровна ОСОБЕННОСТИ СВОБОДНОРАДИКАЛЬНОГО СТАТУСА МОЛОКА КОРОВ УРБАНИЗИРОВАННОЙ ТЕРРИТОРИИ (на примере Омской области) 03.02.08 – экология Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Омск 2015 Работа выполнена на кафедре продуктов питания и пищевой биотехнологии Федерального государственного бюджетного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Омский государственный аграрный университет имени...»

«СЕЛИФОНОВА Жанна Павловна СТРУКТУРНО-ФУНКЦИОНАЛЬНАЯ ОРГАНИЗАЦИЯ ЭКОСИСТЕМ ЗАЛИВОВ И БУХТ ЧЕРНОГО И АЗОВСКОГО МОРЕЙ (РОССИЙСКИЙ СЕКТОР) Специальность 25.00.28 – Океанология Д 002.140.01 Диссертация на соискание ученой степени доктора биологических наук Мурманск, 2015 Работа выполнена в ФГБУН Мурманском морском биологическом институте КНЦ РАН и ФГБОУ...»

«Потапова Анна Викторовна ВЛИЯНИЕ ЗАГРЯЗНЕНИЯ ТРОФИЧЕСКИХ СУБСТРАТОВ ТЯЖЁЛЫМИ МЕТАЛЛАМИ И ХЛОРОРГАНИЧЕСКИМИ СОЕДИНЕНИЯМИ НА КАЧЕСТВО ЛОСИНОГО МОЛОКА 03.02.08 – Экология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание учёной степени кандидата биологических наук Москва 2015 Работа выполнена в ФГБОУ ВПО «Костромской государственный университет им. Н. А. Некрасова» Научный руководитель: доктор биологических наук, Баранов Александр Васильевич Официальные оппоненты: Марзанов Нурбий...»

«Сафранкова Екатерина Алексеевна КОМПЛЕКСНАЯ ЛИХЕНОИНДИКАЦИЯ ОБЩЕГО СОСТОЯНИЯ АТМОСФЕРЫ УРБОЭКОСИСТЕМ Специальность 03.02.08 – Экология (биологические науки) АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание учной степени кандидата биологических наук Брянск 2014 Работа выполнена на кафедре экологии и рационального природопользования ФГБОУ ВПО «Брянский государственный университет имени академика И.Г. Петровского» Научный руководитель: доктор сельскохозяйственных наук, профессор Анищенко...»

«ВАХРОМЕЕВА Ксения Александровна ПОЛИМОРФНЫЕ ГЕНЕТИЧЕСКИЕ МАРКЕРЫ САХАРНОГО ДИАБЕТА 2-го ТИПА И ИХ АССОЦИАЦИИ С КЛИНИКО-МЕТАБОЛИЧЕСКИМИ ПОКАЗАТЕЛЯМИ В РУССКОЙ ПОПУЛЯЦИИ 14.01.02 – эндокринология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Тюмень 2015 –2– Работа выполнена в государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Тюменская государственная медицинская академия» Министерства здравоохранения...»

«РУБИНА КСЕНИЯ АНДРЕЕВНА Т-КАДГЕРИН В ПРОЦЕССАХ РОСТА, РЕМОДЕЛИРОВАНИЯ КРОВЕНОСНЫХ СОСУДОВ И ОПУХОЛЕВОЙ ПРОГРЕССИИ Специальность 03.03.04 – клеточная биология, цитология, гистология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание учёной степени доктора биологических наук Москва 2015 Работа выполнена в научно-исследовательской лаборатории постгеномных технологий в медицине Факультета фундаментальной медицины Федерального государственного бюджетного образовательного учреждения высшего...»

«Нгуен Тхи Тху Ха МЕДОНОСНЫЕ РЕСУРСЫ ЛЕСНОГО ФОНДА ЛЕНИНГРАДСКОЙ ОБЛАСТИ И ЦЕНТРАЛЬНОГО ВЬЕТНАМА 06.03.02 Лесоведение, лесоводство, лесоустройство и лесная таксация АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Санкт-Петербург 2015 ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность темы исследования. Использование недревесных ресурсов вносит существенный вклад в улучшение качества жизни населения многих стран, включая Россию и Вьетнам. До настоящего...»

«Костюнин Александр Евгеньевич ФАУНА И ЭКОЛОГИЯ ПИЛИЛЬЩИКОВ И РОГОХВОСТОВ (HYMENOPTERA, SYMPHYTA) ЮГО-ВОСТОКА ЗАПАДНОЙ СИБИРИ 03.02.05 – энтомология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание учёной степени кандидата биологических наук Новосибирск – 2015 Работа выполнена в лаборатории филогении и фауногенеза ФГБУН Института систематики и экологии животных СО РАН Легалов Андрей Александрович Научный руководитель: доктор биологических наук Никитский Николай Борисович...»

«Темиров Николай Николаевич КОРРЕКЦИЯ АФАКИИ РАЗЛИЧНОГО ГЕНЕЗА МУЛЬТИФОКАЛЬНЫМИ ИНТРАОКУЛЯРНЫМИ ЛИНЗАМИ С АСИММЕТРИЧНОЙ РОТАЦИОННОЙ ОПТИКОЙ 14.01.07 – глазные болезни Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Москва, 2015г. Работа выполнена на кафедре офтальмологии Федерального государственного бюджетного образовательного учреждения дополнительного профессионального образования «Институт повышения квалификации Федерального...»







 
2016 www.konf.x-pdf.ru - «Бесплатная электронная библиотека - Авторефераты, диссертации, конференции»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.