WWW.KONF.X-PDF.RU
БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА - Авторефераты, диссертации, конференции
 


Pages:   || 2 |

«ПАТОМОРФОЛОГИЧЕСКИЙ И МОЛЕКУЛЯРНО-БИОЛОГИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ НЕМЕЛКОКЛЕТОЧНОГО РАКА ЛЕГКОГО. ДИАГНОСТИКА И ПРОГНОЗ ...»

-- [ Страница 1 ] --

На правах рукописи

КОБЯКОВ ДМИТРИЙ СЕРГЕЕВИЧ

ПАТОМОРФОЛОГИЧЕСКИЙ И МОЛЕКУЛЯРНО-БИОЛОГИЧЕСКИЙ

АНАЛИЗ НЕМЕЛКОКЛЕТОЧНОГО РАКА ЛЕГКОГО.

ДИАГНОСТИКА И ПРОГНОЗ

14.03.02 – патологическая анатомия

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени

доктора медицинских наук

Новосибирск - 2015

Работа выполнена в лаборатории исследований молекулярно-генетических характеристик опухоли Федерального государственного бюджетного научного учреждения «Российский онкологический научный центр имени Н.Н.Блохина» Алтайский филиал (Барнаул)

Научные консультанты:

доктор медицинских наук, профессор Лазарев Александр Федорович доктор медицинских наук Авдалян Ашот Меружанович

Официальные оппоненты:

Горчаков Владимир Николаевич, доктор медицинских наук, профессор, заведующий лабораторией функциональной морфологии лимфатической системы ФГБНУ «НИИ клинической и экспериментальной лимфологии» (Новосибирск) Жукова Наталья Анатольевна, доктор медицинских наук, старший научный сотрудник лаборатории фармакологических исследований ФГБУН «Новосибирский институт органической химии имени Н.Н.Ворожцова» СО РАН Фурсов Сергей Александрович, доктор медицинских наук, профессор, профессор кафедры онкологии ГБОУ ВПО «Новосибирский государственный медицинский университет» МЗ РФ

Ведущая организация: ФГБНУ «НИИ молекулярной биологии и биофизики», лаборатория молекулярных механизмов канцерогенеза (Новосибирск)

Защита состоится « _____ » ____________ 2015 г. в ______ ч на заседании совета

Д 001.037.01 в ФГБНУ «Институт молекулярной патологии и патоморфологии» по адресу:

630117, Новосибирск, ул. Тимакова, 2.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке и на сайте ФГБНУ «Институт молекулярной патологии и патоморфологии»

http://pathomorphology.soramn.ru Автореферат разослан « _______ » ________________ 2015 г.

Ученый секретарь Диссертационного совета доктор биологических наук профессор Молодых Ольга Павловна

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Рак легкого – серьезная медицинская и социальная проблема, в развитых странах он является наиболее часто встречающейся злокачественной опухолью и наиболее распространенной причиной смерти от онкологической патологии.

По данным мировой статистики, ежегодно выявляются более 1 млн. 600 тыс. больных этой нозологией и около 1 млн. 400 тыс. человек умирают [Jemal A. et al., 2011]. Пятилетняя выживаемость составляет 16%, и варьируется от 73% при 1А стадии до 2% при 4 стадии [Goldstraw P. et al., 2007]. В России и странах СНГ рак легкого так же занимает 1 место среди онкологических заболеваний, показывая тенденции аналогичные мировой статистике [Давыдов М.И., Аксель Е.М., 2012; Каприн А.Д., Старинский В.В., Петрова Г.В., 2012; Siegel R, Naishadham D, Jemal A., 2012; Woolhouse I., 2011].

Не менее 80% рака легкого приходится на НМКРЛ. Несмотря на определенные успехи в диагностике и лечении результаты, в целом, остаются малоутешительными. Общепризнанно, что основными факторами прогноза, влияющими на продолжительность жизни оперированных больных НМКРЛ, являются клинико-морфологические параметры опухоли. Международная классификация по системе TNM не лишена недостатков в плане прогнозирования течения заболевания, так как в один и тот же показатель включаются больные НМКРЛ неоднородные по другим факторам, имеющим прогностическое значение.

Поэтому в практической онкологии после хирургического лечения больных НМКРЛ, однородных по системе TNM, наблюдается выздоровление у одних, а у других наступает прогрессирование и рецидивирование. Поэтому актуальным является исследование фундаментальных молекулярно-биологических параметров, определяющих как прогноз, так и показания для последующей полихимиотерапии и направленной таргетной терапии НМКРЛ [Новик А.А., Камилова Т.А., Цыган В.Н., 2004; Захарычев В.Д., 2010].

На сегодняшний день существуют определенные трудности в достоверной оценке пролиферативного потенциала, так как пролиферация включает в себя не только количество пролиферирующих клеток (пролиферативная активность, фракция роста), но и скорость прохождения (продолжительность) клеточного цикла.

Для оценки пролиферативной активности общепризнанным и доступным является иммуногистохимическое определение уровня антигена Ki-67. Антиген Ki-67 выявляется в клетках в позднюю G1, S, G2, М фазы, однако, функциональное значение этого ядерного белка в процессе пролиферации не совсем ясно. Фермент топоизомераза II (ТороII) – белок с ферментативной активностью, участвующий в топологической сборке ДНК во время транскрипции, конденсации и сегрегации хромосом. Выявляется в клетках в S, G2, M фазы клеточного цикла, в связи с чем, является также маркером пролиферативной активности. Кроме того, в схемы химиотерапии НМКРЛ включены препараты антрациклинового ряда, ингибирующие фермент топоизомеразу II, степенью активности которого и обусловлена чувствительность опухоли к данным препаратам. Ag-ЯОР-белки являются маркером скорости клеточного цикла.

До 75% окрашивания Ag-ЯОР-белков составляют два главных аргирофильных белка С23 (нуклеолин) и В23 (нуклеофозмин), играющих важнейшую роль в синтезе рибосомальной РНК [Hernandez-Verdun D. et al., 2010]. Количественное содержание Ag-ЯОР-белков имеет обратную зависимость с длительностью клеточного цикла и временем удвоения опухоли [Canet V. еt al., 2001, Trere D. еt al., 1997, Trer D., 1998].

Основополагающими догмами биологии опухоли является изменение как процесса пролиферации, так и программируемой гибели клетки - апоптоза. Р53 является транскрипционным фактором, регулирующим функцию большинства генов; bcl-2 является антиапоптотическим, а bax - проапоптотическим белком митохондриального пути апоптоза.

Ангиогенез имеет фундаментальное значение для роста и распространения новообразований различных локализаций. В настоящее время, в эпоху развития таргетной терапии, одной из мишеней для такого типа лечения являются сосуды опухоли – кровеносные и лимфатические [Имянитов Е.Н., 2014]. Иммуногистохимическая визуализация антигенов CD 34 и подопланина позволяет на микроскопическом светооптическом уровне оценивать разные стороны ангиогенеза в НМКРЛ – гемангиогенеза и лимфангиогенеза.

Семейство онкогенов Her (erbB) часто гиперэкспрессируются при раке легкого [Pelosi G. et al., 2005]. Онкоген Her2 находится на длинном плече хромосомы 17 (q12-q21), продуктом этого онкогена является мембранный белок Her2. В раковых клетках гиперэкспрессия этого онкогена часто происходит за счет амплификации. Повышение содержания белка Her2 и амплификация гена Her2 частое событие в инвазивном раке молочной железы, связанное с плохим прогнозом, резистентностью к гормонотерапии и ответом опухоли на терапию Her2 моноклональными антителами трастузумаб (герцептин). Повышение содержания белка Her2 и амплификация гена Her2 найдены также и при злокачественных опухолях желудка, толстой кишки, а также легких [Завалишина Л. Э., Андреева Ю. Ю., Франк Г. А., 2012; Reinmuth N. et al., 2000], что открывает возможность таргетной терапии опухолей этих локализаций.

Таким образом, на сегодняшний день актуальным является исследование молекулярнобиологических маркеров (Ag-ЯОР-белков, маркеров пролиферативной активности, апоптоза, ПМЦР-Г и ПМЦР-Л, статуса белка и гена Her2) во взаимосвязи с клиникоморфологическими параметрами, выживаемостью больных и прогнозом при НМКРЛ.

Цель исследования: изучить патоморфологические и молекулярно-биологические параметры немелкоклеточного рака легкого во взаимосвязи с их прогностической значимостью.

Задачи исследования:

1. Определить дифференциально-диагностическую значимость молекулярнобиологических параметров немелкоклеточного рака легкого в сопоставлении с неизмененным легким.

2. Изучить молекулярно-биологические характеристики во взаимосвязи с клиникоморфологическими параметрами немелкоклеточного рака легкого: возрастом, полом, стадией заболевания, показателями Т и N, наибольшим размером опухоли, гистогенезом, дифференцировкой.

3. Определить взаимосвязи между молекулярно-биологическими параметрами немелкоклеточного рака легкого.

4. Изучить общую 5-летнюю выживаемость больных немелкоклеточным раком легкого в зависимости от клинико-морфологических и молекулярно-биологических параметров, а также коэкспрессии молекулярно-биологических маркеров.

5. Выявить независимые факторы 5-летней выживаемости больных немелкоклеточным раком легкого.

6. Разработать комбинированную морфобиомолекулярную модель прогноза для больных немелкоклеточным раком легкого на основании многофакторного анализа клинико-морфологических и молекулярно-биологических факторов.

Научная новизна. Впервые при НМКРЛ и его гистогенетических вариантах (Ак и Пк) на большом клиническом материале (243 больных), с использованием метода тканевых матриц комплексно изучены молекулярно-биологические маркеры: Ag-ЯОР-белки, экспрессия маркеров пролиферативной активности (Ki-67 и топоизомеразы II), Ag-ЯОРбелки в MIB-1 позитивных клетках, показатель пролиферации, экспрессия маркеров апоптоза (р53, bcl-2 и bax), ПМЦР-Г и ПМЦР-Л, экспрессия белка Her2 и статус гена Her2 и СЕР17. На операционном материале НМКРЛ применены SISH метод (для выявления амплификация гена Her2 и состояния СЕР17), а также метод двойного окрашивания на антиген Ki-67 и Ag-ЯОР-белки (для изучения Ag-ЯОР-белков в пролиферирующих клетках) с последующим компьютерным анализом изображений.

Впервые на большом клиническом материале выявлены и систематизированы данные о молекулярно-биологических параметрах при неизмененном легком и НМКРЛ: ИП и КВ Ag-ЯОР-белков, маркерах пролиферативной активности (ИМ Ki-67 и ИМ ТороII), AgЯОР-белках в MIB-1 позитивных клетках, показателе пролиферации, маркерах апоптоза (р53, bcl-2 и bax), ПМЦР-Г и ПМЦР-Л, экспрессии белка Her2 и амплификации гена Her2.

Выявлена дифференциально-диагностическая значимость определения данных молекулярно-биологических маркеров в операционном материале для разграничения НМКРЛ и неизмененного легкого.

Впервые при НМКРЛ и его гистогенетических вариантах (Ак и Пк) проведено комплексное, систематическое исследование взаимосвязи между клиническими критериями, клинико-морфологическими параметрами по системе TNM и молекулярнобиологическими маркерами, а также исследование корреляционных взаимосвязей между молекулярно-биологическими маркерами: ИП и КВ Ag-ЯОР-белков, маркерами пролиферативной активности (ИМ Ki-67 и ИМ ТороII), площадью Ag-ЯОР-белков в MIB-1 позитивных клетках, показателем пролиферации, маркерами апоптоза (р53, bcl-2 и bax), ПМЦР-Г и ПМЦР-Л, экспрессией белка Her2 и амплификацией гена Her2.

Впервые на большом материале при НМКРЛ и его гистогенетических вариантах (Ак и Пк) проанализирована 5-летняя выживаемость в зависимости от молекулярнобиологических маркеров: ИП и КВ Ag-ЯОР-белков, ИМ Ki-67 и ИМ ТороII, площади AgЯОР-белков в MIB-1 позитивных клетках, показателя пролиферации, экспрессии р53, bclи bax, ПМЦР-Г и ПМЦР-Л, экспрессии белка Her2 и амплификации гена Her2. Также показана взаимосвязь 5-летней выживаемости и коэкспрессии вышеперечисленных молекулярно-биологических маркеров.

Проведены детальные одно- и многофакторные анализы прогноза жизни при НМКРЛ и его гистогенетических вариантах (Ак и Пк) с включением следующих групп факторов:

клинических (возраст, пол, тип операции, полихимиотерапия, лучевая терапия, полихимио- и лучевая терапия), клинико-морфологических (показатель Т, наибольший размер, показатель N, стадия, гистогенез, дифференцировка) и молекулярно-биологических (ИП и КВ Ag-ЯОР-белков, ИМ Ki-67 и ИМ ТороII, площади Ag-ЯОР-белков в MIB-1 позитивных клетках, показателя пролиферации, экспрессии р53, bcl-2 и bax, ПМЦР-Г и ПМЦР-Л, экспрессии белка Her2 и амплификации гена Her2. На основании многофакторного регрессионного анализа по Коксу разработаны комбинированные, морфобиомолекулярные модели прогноза при НМКРЛ, Ак и Пк.

Теоретическая и практическая значимость. Теоретическая значимость работы заключается в том, что на большом клиническом материале при неизмененном легком и при НМКРЛ, а также при гистогенетических вариантах - Ак и Пк, комплексно изучен целый спектр молекулярно-биологических маркеров: Ag-ЯОР-белки, экспрессия маркеров пролиферативной активности (Ki-67 и топоизомеразы II), Ag-ЯОР-белки в MIB-1 позитивных клетках, показатель пролиферации, экспрессия маркеров апоптоза (р53, bcl-2 и bax), ПМЦР-Г и ПМЦР-Л, экспрессия белка Her2 и статус гена Her2 и СЕР17. Выявлены взаимосвязи между вышеперечисленными молекулярно-биологическими маркерами, с одной стороны, и между молекулярно-биологическими маркерами и клиническими, клиникоморфологическими параметрами НМКРЛ, Ак и Пк.

Практическая значимость работы представлена, во-первых, определением дифференциально-диагностической значимости исследованных молекулярно-биологических маркеров для разграничения НМКРЛ и неизмененного легкого. Во-вторых, скорректирована оценка выживаемости на основании анализа 5-летней общей выживаемости в зависимости от экспрессии молекулярно-биологических маркеров при НМКРЛ, Ак и Пк. В-третьих, оптимизировано клиническое прогнозирование по разработанным морфобиомолекулярным моделям прогноза на основании многофакторного анализа при НМКРЛ, Ак и Пк. В анализе использована действующая классификация стадий рака легкого по системе TNM 7 пересмотра, что облегчает применение полученных данных на практике.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Дифференциально-диагностическое значение между неизмененным легким и НМКРЛ имеют следующие молекулярно-биологические маркеры: ИП и КВ Ag-ЯОРбелков, ИМ Ki-67, ИМ ТороII, площадь Ag-ЯОР-белков в MIB-1 позитивных клетках, показатель пролиферации, экспрессия р53, bcl-2 и bax, ПМЦР-Г и ПМЦР-Л, экспрессия белка Her2 и амплификация гена Her2.

2. Клинико-морфологические параметры НМКРЛ (пол, стадия заболевания, показатели Т и N, наибольший размер опухоли, гистогенез, дифференцировка) взаимосвязаны с молекулярно-биологическими характеристиками: ИП и КВ Ag-ЯОР-белков, ИМ Ki-67, ИМ ТороII, площадью Ag-ЯОР-белков в MIB-1 позитивных клетках, показателем пролиферации, экспрессией р53, bcl-2 и bax, ПМЦР-Г и ПМЦР-Л, экспрессией белка Her2 и амплификацией гена Her2.

3. Разные характеристики пролиферации (ИП и КВ Ag-ЯОР-белков, площадь AgЯОР-белков в MIB-1 позитивных клетках, показатель пролиферации, ИМ Ki-67, ИМ ТороII) являются взаимосвязанными, отражая единый процесс повышения пролиферативного уровня НМКРЛ. Имеются особенности изменения процесса пролиферации НМКРЛ во взаимосвязи с экспрессией р53, bcl-2, bax, белка Her2 и амплификацией гена Her2.

4. Низкий показатель общей 5-летней выживаемости больных НМКРЛ взаимосвязан с клинико-морфологическими (тип операции пневмонэктомия, показатель Т2-3, показатель N1-3, стадия заболевания II-III, наибольший размер опухоли 3см, гистогенез Ак, дифференцировка умеренная-низкая) и молекулярно-биологическими параметрами (большими количественными значениями ИП и КВ Ag-ЯОР-белков, площади Ag-ЯОР-белков в MIBпозитивных клетках, показателя пролиферации, ИМ Ki-67, ИМ ТороII, ПМЦР-Г и ПМЦР-Л, р53 положительной и bcl-2 отрицательной экспрессией, положительной экспрессией белка Her2, амплификацией гена Her2 и увеличением СЕР17). Также выживаемость больных НМКРЛ взаимосвязана с коэкспрессией Ag-ЯОР-белков, Ki-67, ТороII, Ag-ЯОР-белков в MIB-1 позитивных клетках; и в незначительной степени с коэкспрессией маркеров апоптоза (р53, bcl-2 и bax), ПМЦР-Г и ПМЦР-Л.

5. Неблагоприятными факторами прогноза являются: при НМКРЛ – большие количественные значения площади Ag-ЯОР-белков в MIB-1 позитивных клетках, ПМЦР-Г, КВ Ag-ЯОР-белков, ИМ Ki-67, а также показатель N1-3, наибольший размер опухоли 3 см;

при Ак - большие количественные значения показателя пролиферации, ПМЦР-Г, ИМ KiИМ ТороII, площади Ag-ЯОР-белков в MIB-1 позитивных клетках; при Пк - большие количественные значения ПМЦР-Г, ИМ ТороII, площади Ag-ЯОР-белков в MIB-1 позитивных клетках, ПМЦР-Л, КВ Ag-ЯОР-белков, а также тип операции пневмонэктомия.

6. Комбинированная морфобиомолекулярная модель прогноза основана на клиникоморфологических и молекулярно-биологических параметрах НМКРЛ. Данная модель имеет наибольшую значимость фактора прогноза жизни больных НМКРЛ по сравнению с клинико-морфологическими и молекулярно-биологическими факторами.

Апробация работы. Материалы диссертации доложены на российской научнопрактической конференции с международным участием «Современные аспекты диагностики и лечения рака легкого» (Томск, 2013); 9 конференция по фундаментальной онкологии «Петровские чтения», в рамках VIII Всероссийского съезда онкологов (СанктПетербург, 2013); Всероссийской конференции с международным участием «Современные подходы в клинико-морфологической диагностике и лечении заболеваний человека»

(Санкт-Петербург, 2013); XVIII Российском онкологическом конгрессе (Москва, 2014);

Всероссийской конференции, посвященной 155-летию кафедры патологической анатомии Военно-медицинской академии им. С.М. Кирова «Актуальные вопросы патологической анатомии в мирное и военное время» (Санкт-Петербург, 2014); 10 конференции по фундаментальной онкологии «Петровские чтения» (Санкт-Петербург, 2014); VIII Съезде онкологов и радиологов стран СНГ и Евразии (Казань, 2014); Всероссийской конференции с международным участием «Проблемы современной онкологии» (Барнаул, 2009); Всероссийской конференции с международным участием «Новые методы в онкологической практике» (Барнаул, 2013); Всероссийской конференции с международным участием «Таргетная терапия в онкологии» (Барнаул, 2014); Ученом совете Алтайского филиала ФГБУ «Российский онкологический научный центр им. Н.Н.Блохина» РАМН.

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 47 научных работ, из них 16 статей в журналах по списку ВАК и 7 статей в зарубежных рецензируемых журналах.

Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, главы «Материал и методы исследований», 8 глав «Результатов собственных исследований», обсуждения полученных данных, выводов, практических рекомендаций и списка цитируемой литературы. Общий объем диссертации 326 страниц машинописного текста.

Указатель литературы содержит 567 работ отечественных и зарубежных авторов. Диссертация иллюстрирована 109 таблицами и 66 рисунками.

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Исследование выполнено на операционном материале, полученном от 243 пациентов, находившихся на лечении в торакальном отделении Алтайского филиала РОНЦ им. Н.Н.

Блохина РАМН «Алтайский краевой онкологический диспансер» (г. Барнаул). Средний возраст больных составил 59,4±7,7 лет (от 35 до 75 лет); мужчины - 209 случаев (86%), женщины - 34 случая (14%). В 173 случаях (71%) выполнена лобэктомия, в 70 случаях (29%) – пневмонэктомии. Предоперационная химио-лучевая терапия не проводилась, постоперационная химио-лучевая терапия проведена 92 больным (38%). При проведении химиотерапии в большинстве случаев использовался цисплатин и этопозид. При лучевой терапии назначалась суммарная очаговая доза 50-60 Гр.

Клинико-морфологические параметры определены согласно классификации TNM 7 пересмотра. Показатель Т в 66 случаях (27%) соответствовал Т1, в 147 случаях (61%) – Т2 и в 30 случаях (12%) - Т3. Опухоли с показателем Т4 в исследовании отсутствовали.

Наибольший размер опухоли в 104 случаях (43%) был менее 3 см, в 139 случаях (57%) более 3 см. Показатель N в 156 случаях (64%) соответствовал N0, в 87 случаях (36%) – N1I стадия - 138 случаев (57%), II стадия - 60 случаев (25%), III стадия - 45 случаев (18%).

111 случаев (46%) Ак и 132 случая (54%) Пк. Высокая, умеренная и низкая дифференцировка была в 63 случаях (26%), 117 случаях (48%) и 63 случаях (26%) соответственно.

Случаи с отдаленными метастазами (параметр М1) и первично-множественными опухолями исключены из исследования. В качестве контроля в 10 случаях исследованы кусочки неизмененного легкого, полученные из отдаленных от опухоли участков.

Метод тканевых матриц. В каждом случае из трех парафиновых блоков (блоковдоноров) забраны столбики ткани иглой с внутренним диаметром 1,5 мм, на основании просмотра соответствующих гистологических препаратов. Столбики ткани помещены в шесть парафиновых блоков-реципиентов, с формированием тканевых матриц 12х12 столбиков и размером 20х20 мм. С парафиновых блоков-реципиентов изготавливались серийные гистологические срезы толщиной 4 мкм и переносились на стекла.

Для выявления Ag-ЯОР-белков срезы окрашивали по одностадийной методике. После стандартной депарафинизации срезы автоклавировали при 120С 20 минут в 0,01 М цитратном буфере (рН=6,0). На срезы наносили раствор, состоящий из 1 части 2% желатина в 1% муравьиной кислоте и 2 частей 50% нитрата серебра, инкубировали в термостате 16 минут при 37С во влажной камере. Докрашивания ядер не проводили.

Двойное окрашивание на антиген Ki-67 и Ag-ЯОР-белки. После стандартной депарафинизации срезы автоклавировали при 120С 20 минут в 0,01 М цитратном буфере (рН=6,0). Иммуногистохимическое окрашивание проводили стрептавидин-биотиновым методом с первичными антителами к Ki-67 (клон MIB-1, DAKO) и хромогеном - new fuchsin, согласно протоколу производителя. После инкубации с хромогеном срезы отмывали в бидистилированной воде. Далее срезы окрашивали азотнокислым серебром по одностадийной методике, во влажной камере при 37оС 19 минут. Докрашивание ядер не проводили, срезы заключали в водную среду Faramount (DAKO).

Компьютерный анализ изображений. Применяли следующее оборудование: микроскоп CX41 (Olympus) проходящего света с подсоединенной цветной видеокамерой DP72 (Olympus). Программное обеспечение - анализатор изображений ImageJ 1.42. Исследовали только ядра интерфазных клеток, при увеличении микроскопа в 1000 раз (объектив х100, 1.25, oil, окуляр х10), с использованием иммерсионной системы. В каждом случае исследовались 100 ядер клеток, с 10-30 цифровых изображений, полученные с 10 полей зрения.

Протокол анализа: 1. вручную отмечали ядра клеток, которые автоматически сохранялись на жесткий диск в файл множественных изображений и переводились в серое изображение; 2. определяли среднюю площадь Ag-ЯОР-белков в 20-25 ядрах малых лимфоцитов и проводили калибровку программы по средним значениям для каждого случая. ИП AgЯОР-белков определяли как отношение площади Ag-ЯОР-белков в клетке к значению средней площади Ag-ЯОР-белков в ядре малого лимфоцита. 3. автоматическое выделение гранул серебра в ядрах клеток по значению серого и перевод в бинарное изображении (пороговое значение серого – 110). Измерение площади на бинарном изображении, с последующим расчетом среднего значения площади, ИП и КВ Ag-ЯОР-белков. Показатель пролиферации (ПП) вычислялся как произведение ИМ Ki-67 на Ag-ЯОР-белков (MIB-1).

Иммуногистохимический метод проводился в автоматическом режиме в автостейнере BenchMark XT (Ventana). Система визуализации ultraView Universal DAB Detection Kit (Ventana), хромоген DAB. Использовались две группы первичных антител: 1 группа (дифференциально-диагностические маркеры) - цитокератин 7 (SP52, Ventana, RTU), цитокератин 20 (SP33, Ventana, RTU), TTF-1 (SP141, Ventana, RTU), высокомолекулярный кератин (34E12, Ventana, RTU), цитокератины 5/6 (D5/16B4, Ventana, RTU); 2 группа (молекулярно-биологические маркеры) - Ki-67 (MIB-1, Dako, 1:150), Topoisomerase II (JS5B4, Ventana, RTU), p53 (DO-7, Dako, RTU), bcl-2 (124, Dako, RTU), bax (SP47, SpringBio, 1:20), CD34 (QBEnd/10, Ventana, RTU), podoplanin (D2-40, Ventana, RTU), Her2 (4В5, Ventana, RTU). Оценку экспрессии молекулярно-биологических маркеров проводили согласно протоколу производителя и общепринятым методикам.

SISH метод проводился в автоматическом режиме в автостейнере BenchMark XT (Ventana). Использовались INFORM HER2 Dual ISH DNA Probe Cocktail, ultra View Silver ISH DNP Detection, ultra View Red ISH DIG Detection. Оценку результатов SISH метода проводили согласно инструкции к набору: подсчитывали метку в 20/40 ядрах опухолевых клеток (увеличение х1000), вычисляли соотношение Her2/CEP17. Оценку амплификации проводили согласно рекомендациям производителя: при соотношении Her2/CEP171,8, считали, что амплификация гена Her2 отсутствует, а при соотношении Her2/CEP17 2,0 – наличие амплификации. При соотношении Her2/CEP17=1,8-2,0 в просчет включали дополнительный объем клеток до тех пор пока не получали пограничного уровня. Для оценки состояния CEP17 использовали классификацию, предложенную Wang S. с соавторами (2002): при наличии менее 2,25 красных меток - отсутствие увеличения CEP17, при наличии более 2,25 красных меток - увеличение CEP17. По состоянию гена Her2 и CEP17 выделены четыре типа опухоли: отсутствие амплификации гена Her2 и отсутствие увеличения CEP17 – тип N, отсутствие амплификации гена Her2 и наличие увеличения CEP17 – тип P, наличие амплификации гена Her2 и отсутствие увеличения CEP17 – тип A, наличие амплификации гена Her2 и наличие увеличения CEP17 – тип AP.

Статистическая обработка данных проведена в программе STATISTICA 6.0. Предварительно определяли распределение данных (критерий Шапиро-Уилка), на основании которого выбирали параметрические или непараметрические методы описания. При параметрическом распределении меру центральной тенденции представляли в виде М ± с.о.;

при непараметрическом распределении – Ме (и.и.). Различия между величинами оценивали непараметрическими методами: двусторонний точный критерий Фишера, тест Краскелла-Уоллиса, U-критерий Манна-Уитни. Корреляцию оценивали непараметрическими методами: тест 2, коэффициент корреляции Спирмена (r). Выживаемость больных рассчитывали актуариальных способом. Общую 5-летнюю выживаемость больных определяли с даты операции до даты последнего наблюдения или смерти от любой причины. Для анализа выживаемости использовали метод Каплана - Мейера, для сравнения между группами - тест log-rank. Использовали регрессионный анализ - модель пропорциональных интенсивностей Кокса. Достоверность оценивали при р0,05.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Ag-ЯОР-белки. В ядрах клеток неизмененного эпителия альвеол ИП Ag-ЯОР-белков составил 1,31±0,20, КВ Ag-ЯОР-белков 28,3±3,1%. В эпителии бронхов ИП Ag-ЯОРбелков составил 1,85±0,24, КВ Ag-ЯОР-белков 29,3±3,3%. В НМКРЛ ИП Ag-ЯОР-белков составил 6,52±1,66, КВ Ag-ЯОР-белков - 30,5±4,6%. В клетках НМКРЛ наблюдалось статистически значимое увеличение ИП и КВ Ag-ЯОР-белков по сравнению с неизмененным эпителием альвеол и бронхов (р0,001).

Возраст больных НМКРЛ, Ак и Пк не взаимосвязан с ИП и КВ Ag-ЯОР-белков. При НМКРЛ у лиц мужского пола по сравнению с женским найдено статистически значимое увеличение ИП Ag-ЯОР-белков (соответственно 6,71±1,63 и 5,69±1,65, р=0,002) и КВ AgЯОР-белков (соответственно 31,03±4,59% и 28,25±3,86%, р 0,001). Аналогичная тенденция прослеживается при Ак; однако, при Пк различия статистически не достоверны.

–  –  –

При НМКРЛ ИП и КВ Ag-ЯОР-белков достоверно больше в группе Т2-3 по сравнению с Т1, при наибольшем размере опухоли более 3 см по сравнению с опухолью менее 3 см, при Пк по сравнению с Ак, при умеренной и низкой дифференцировке по сравнению с высокодифференцированной карциномой. Также ИП Ag-ЯОР-белков был больше при показателе N1-3 по сравнению с показателем N0, при II и III стадии по сравнению с I стадией (табл. 1). При НМКРЛ ИП и КВ Ag-ЯОР-белков имели корреляцию с показателем Т, наибольшим размером опухоли, гистогенезом и дифференцировкой. Также ИП AgЯОР-белков коррелировал с показателем N и стадией заболевания (табл. 2). В гистогенетических типах НМКРЛ (Ак и Пк) прослеживалась аналогичная динамика количественного содержания ИП и КВ Ag-ЯОР-белков в зависимости от клиникоморфологических параметров.

Таблица 2. Корреляционные взаимосвязи между клинико-морфологическими и молекулярно-биологическими параметрами при НМКРЛ (коэффициент Спирмена).

–  –  –

Примечание:

- р0,001, - р0,01, – р0,05 Количественные показатели ИП и КВ Ag-ЯОР-белков при НМКРЛ имели корреляцию как друг с другом (r=0,43, р0,001), так и с молекулярно-биологическими маркерами - AgЯОР-белками (MIB-1), ПП, ИМ Ki-67, ИМ ТороII. Также ИП Ag-ЯОР-белков при НМКРЛ имел корреляцию с экспрессией р53, bcl-2 и амплификацией гена Her2 (табл. 4).

Корреляционные взаимосвязи ИП и КВ Ag-ЯОР-белков с молекулярно-биологическими маркерами были тождественны и при гистогенетических типах НМКРЛ - Ак и Пк.

Рисунок 1. Графики выживаемости по Каплану-Мейеру больных НМКРЛ с небольшим (-) и большим (+) ИП Ag-ЯОР-белков (а) и Ag-ЯОР-белков (MIB-1) (б).

По оси абсцисс – время жизни (в днях), по оси ординат – доля выживших больных.

5-летняя выживаемость больных НМКРЛ имела статистически значимое отличие (р0,001) в зависимости от ИП Ag-ЯОР-белков: 49,8±5,2% - при небольшом ИП 6,52 и 28,6±4,7% - при большом ИП 6,52 (рис. 1а). Также 5-летняя выживаемость больных НМКРЛ имела статистически значимое отличие (р0,001) в зависимости от КВ Ag-ЯОРбелков: 50,2±4,9% - при небольшом КВ 30,5% и 25,8±4,9% - при большом КВ 30,5%.

Аналогичная динамика показателя 5-летней выживаемости найдена при гистогенетических типах НМКРЛ - Ак и Пк. При однофакторном регрессионном анализе прогностическое значение имели ИП Ag-ЯОР-белков (2=19,4-36,8; р0,001) и КВ Ag-ЯОР-белков (2=9,1-29,6; р0,001) при НМКРЛ, Ак и Пк.

Таким образом, в клетках НМКРЛ наблюдалось повышение ИП и КВ Ag-ЯОР-белков по сравнению с неизмененным эпителием альвеол и бронхов, что имеет практическое дифференциально-диагностическое значение. Имеется гендерная взаимосвязь с ИП и КВ Ag-ЯОР-белков. ИП и КВ Ag-ЯОР-белков взаимосвязаны с основными клиникоморфологическими и большинством молекулярно-биологических параметров НМКРЛ, Ак и Пк. Большие количественные показатели ИП и КВ Ag-ЯОР-белков являются неблагоприятными прогностическими факторами и взаимосвязаны с низким показателем выживаемости больных НМКРЛ, Ак и Пк.

–  –  –

Ag-ЯОР-белки (MIB-1) и ПП. В неизмененном эпителии бронха Ag-ЯОР-белки (MIBсоставила 2,19±0,27 мкм, ПП 8,8±1,1. В неизмененном эпителии альвеолы MIB-1 позитивные клетки отсутствовали. В НМКРЛ Ag-ЯОР-белки (MIB-1) составила 10,47 (8,57-12,69) мкм; ПП - 304,2 (172,9-476,5). В клетках НМКРЛ наблюдалось статистически значимое увеличение Ag-ЯОР-белки (MIB-1) и ПП по сравнению с неизмененным эпителием бронхов (р0,001).

Отсутствовала статистически значимая взаимосвязь возраста больных НМКРЛ, Ак и Пк с Ag-ЯОР-белки (MIB-1) и ПП, а также пола больных - с Ag-ЯОР-белки (MIB-1).

Найдено статистически значимое увеличение ПП при НМКРЛ у лиц мужского пола по сравнению с женским – соответственно 323,9(192,2-531,5) и 137,2(33,9-333,6) (р 0,001).

Аналогичная тенденция прослеживается при Ак; однако, при Пк различия статистически не достоверны.

При НМКРЛ Ag-ЯОР-белки (MIB-1) и ПП достоверно больше в группе Т2-3 по сравнению с Т1, при наибольшем размере опухоли более 3 см по сравнению с опухолью менее 3 см, при показателе N1-3 по сравнению с показателем N0, при II и III стадии по сравнению с I стадией, при умеренной и низкой дифференцировке по сравнению с высокодифференцированной карциномой. Также ПП был больше при Пк по сравнению с Ак (табл. 3). При НМКРЛ Ag-ЯОР-белки (MIB-1) и ПП были взаимосвязаны с показателем Т, наибольшим размером опухоли, показателем N, стадией заболевания и дифференцировкой. Также ПП коррелировал с гистогенезом (табл. 2). В гистогенетических типах НМКРЛ (Ак и Пк) прослеживалась аналогичная динамика количественного содержания Ag-ЯОР-белков (MIB-1) и ПП в зависимости от клиникоморфологических параметров.

При НМКРЛ Ag-ЯОР-белков (MIB-1) и ПП имели корреляцию как друг с другом, так и с молекулярно-биологическими маркерами - ИП и КВ Ag-ЯОР-белками, ИМ Ki-67, ИМ ТороII, экспрессией р53. Также Ag-ЯОР-белки (MIB-1) коррелировала с экспрессией bclи белка Her2, а ПП – с экспрессией bax и амплификацией гена Her2 (табл. 4). Корреляционные взаимосвязи Ag-ЯОР-белков (MIB-1) и ПП с молекулярно-биологическими маркерами в целом были тождественны и при гистогенетических типах НМКРЛ - Ак и Пк;

однако, имелись и отличия. Отсутствовала корреляция Ag-ЯОР-белков (MIB-1) с экспрессией р53, bcl-2 и белка Her2 при Ак; с ИМ Ki-67, ИМ ТороII и экспрессией р53 при Пк.

Отсутствовала корреляция ПП с экспрессией bax при Ак; с экспрессией bcl-2 при Пк.

–  –  –

5-летняя выживаемость больных НМКРЛ имела статистически значимое отличие (р0,001) в зависимости от Ag-ЯОР-белков (MIB-1): 61,2±5,4% - при небольшой площади 10,47 мкм и 16,2±4,2% - при большой 10,47 мкм (рис. 1б). Также 5-летняя выживаемость больных НМКРЛ имела статистически значимое отличие (р0,001) в зависимости от ПП: 50,2±4,9% - при небольшом ПП 304,2 и 25,8±4,9% - при большом ПП 304,2. Аналогичная динамика показателя 5-летней выживаемости найдена при гистогенетических типах НМКРЛ - Ак и Пк. При однофакторном регрессионном анализе прогностическое значение имели Ag-ЯОР-белки (MIB-1) (2=25,5-59,3; р0,001) и ПП (2=5,4-11,4; р0,05) при НМКРЛ, Ак и Пк.

Таким образом, в клетках НМКРЛ наблюдалось повышение Ag-ЯОР-белков (MIB-1) и ПП по сравнению с неизмененным эпителием бронхов, что имеет практическое дифференциально-диагностическое значение. Имеется гендерная взаимосвязь с ПП. Ag-ЯОРбелки (MIB-1) и ПП взаимосвязаны с основными клинико-морфологическими и большинством молекулярно-биологических параметров НМКРЛ, Ак и Пк. Большие количественные показатели Ag-ЯОР-белков (MIB-1) и ПП являются неблагоприятными прогностическими факторами и взаимосвязаны с низким показателем выживаемости больных НМКРЛ, Ак и Пк.

ИМ Ki-67 и ИМ ТороII. В неизмененном эпителии альвеол ИМ Ki-67 и ИМ ТороII составил менее 1% (единичные положительные клетки). В неизмененном эпителии бронхов ИМ Ki-67 составил 4 (1-8)%, ИМ ТороII - менее 1% (единичные положительные клетки). При НМКРЛ ИМ Ki-67 составил 25 (18-42)%, ИМ ТороII - 19 (12-27)%. При НМКРЛ наблюдалось повышение ИМ Ki-67 и ИМ ТороII по сравнению с неизмененным эпителием альвеол и бронхов (р0,001).

Возраст больных НМКРЛ, Ак и Пк не взаимосвязан с ИМ Ki-67 и ИМ ТороII. При НМКРЛ у лиц мужского пола по сравнению с женским найдено статистически значимое увеличение ИМ Ki-67 (соответственно 30 (19-45)% и 14 (5-22)%, р 0,001) и ИМ ТороII (соответственно 20 (13-28)% и 7 (3-17)%, р 0,001). Аналогичная тенденция прослеживается при Ак; однако, при Пк различия статистически не достоверны.

–  –  –

При НМКРЛ ИМ Ki-67 и ИМ ТороII достоверно больше при наибольшем размере опухоли более 3 см по сравнению с опухолью менее 3 см, при Пк по сравнению с Ак, при умеренной и низкой дифференцировке по сравнению с высокодифференцированной карциномой (табл. 5). При НМКРЛ ИМ Ki-67 и ИМ ТороII были взаимосвязаны с наибольшим размером опухоли, гистогенезом и дифференцировкой (табл. 2). В целом при гистогенетических типах НМКРЛ (Ак и Пк) прослеживалась аналогичная динамика ИМ Ki-67 и ИМ ТороII во взаимосвязи с клинико-морфологическими параметрами.

При НМКРЛ ИМ Ki-67 и ИМ ТороII имели корреляцию как друг с другом, так и с молекулярно-биологическими маркерами - ИП и КВ Ag-ЯОР-белков, Ag-ЯОР-белками (MIB-1), ПП, экспрессией р53, bax и амплификацией гена Her2 (табл. 4). Корреляционные взаимосвязи ИМ Ki-67 и ИМ ТороII с молекулярно-биологическими маркерами в целом были тождественны и при гистогенетических типах НМКРЛ - Ак и Пк; однако, имелись и отличия. Отсутствовала корреляция ИМ Ki-67 с экспрессией bax при Ак; с Ag-ЯОРбелками (MIB-1), экспрессией р53, bax и амплификацией гена Her2 при Пк. Отсутствовала корреляция ИМ ТороII с Ag-ЯОР-белками (MIB-1), экспрессией р53, bax и амплификацией гена Her2 при Пк; с ИП Ag-ЯОР-белков и экспрессией bax при Ак, в то же время при Ак отмечалась корреляция ИМ ТороII с экспрессией bcl-2.

5-летняя выживаемость больных НМКРЛ имела статистически значимое отличие (р0,01) в зависимости от ИМ Ki-67: 50,3±5,5% - при небольшом ИМ Ki-67 25% и 31,6±4,7% - при большом ИМ Ki-6725% (рис. 2а). Также 5-летняя выживаемость больных НМКРЛ имела статистически значимое отличие (р0,01) в зависимости от ИМ ТороII: 53,0±5,5% - при небольшом ИМ ТороII 19% и 31,7±5,1% - при большом ИМ ТороII19%. Аналогичная динамика показателя 5-летней выживаемости найдена при гистогенетических типах НМКРЛ - Ак и Пк. При однофакторном регрессионном анализе прогностическое значение имели ИМ Ki-67 (2=5,1-12,2; р0,05) и ИМ ТороII (2=9,6р0,01) при НМКРЛ, Ак и Пк.

Рисунок 2. Графики выживаемости по Каплану-Мейеру больных НМКРЛ с небольшим (-) и большим (+) ИМ Ki-67 (а), отрицательной (-) и положительной (+) экспрессией bcl-2 (б).

По оси абсцисс – время жизни (в днях), по оси ординат – доля выживших больных.

Таким образом, в клетках НМКРЛ наблюдалось повышение ИМ Ki-67 и ИМ ТороII по сравнению с неизмененным эпителием альвеол и бронхов, что имеет практическое дифференциально-диагностическое значение. Имеется гендерная взаимосвязь с ИМ Ki-67 и ИМ ТороII. ИМ Ki-67 и ИМ ТороII взаимосвязаны с клинико-морфологическими (размером, гистогенезом и дифференцировкой) и большинством молекулярнобиологических параметров НМКРЛ, Ак и Пк. Большие количественные показатели ИМ Ki-67 и ИМ ТороII являются неблагоприятными прогностическими факторами и взаимосвязаны с низким показателем выживаемости больных НМКРЛ, Ак и Пк.

p53, bcl-2 и bax. В неизмененном эпителии альвеол отсутствовала экспрессия p53, bclи bax. В неизмененном эпителии бронхов отсутствовали p53-положительные клетки, bclположительные клетки определялись только в базальном слое, bax-положительные клетки определялись во всех слоях. При НМКРЛ положительная экспрессия р53 определялась в 44%, bcl-2 - в 18%, bax - в 55%. Таким образом, при НМКРЛ наблюдалось повышение экспрессии p53, bcl-2 и bax по сравнению с неизмененным эпителием альвеол (р0,001), а также повышение экспрессии p53 и bcl-2 и снижение экспрессии bax по сравнению с неизмененным эпителием бронхов (р0,001).

Возраст больных НМКРЛ, Ак и Пк не взаимосвязан с экспрессией р53, bcl-2 и bax.

Найдено статистически значимое увеличение положительной экспрессии bax при НМКРЛ у лиц женского пола по сравнению с мужским – соответственно 26 случаев (76%) и 104 случая (51%) (р=0,006). Аналогичная тенденция прослеживается при Ак; однако, при Пк различия статистически не достоверны.

При Пк по сравнению с Ак найдено статистически значимое (р 0,05) увеличение количества случаев с положительной экспрессией р53 (соответственно 65 случаев (51%) и 39 случаев (36%)) и bcl-2 (соответственно 30 случаев (23%) и 13 случаев (12%)). Количество случаев с положительной экспрессией bax достоверно больше в Ак по сравнению с Пк (соответственно 69 случаев (63%) и 61 случай (48%), р 0,05). При НМКРЛ отмечается достоверное увеличение количества случаев с положительной экспрессией bcl-2 в группе опухолей без метастазов в лимфатические узлы по сравнению с опухолями с наличием метастазов (соответственно 34 случая (23%) и 9 случаев (10%), р 0,05), при I стадии заболевания по сравнению со II-III стадиями (соответственно 30 случаев (25%) и 13 случаев (11%), р 0,01). При НМКРЛ была найдена корреляция гистогенеза с экспрессией р53, bcl-2 и bax, а также показателя N и стадии заболевания с экспрессией bcl-2 (табл. 2). При Ак отсутствовала взаимосвязь экспрессии р53, bcl-2 и bax с клинико-морфологическими параметрами. При Пк экспрессия bcl-2 имела корреляцию со стадией заболевания (р=0,01) и на уровне тенденции к статистической значимости с показателем N (р=0,06).

При НМКРЛ положительная экспрессия р53 имела прямую корреляцию с ИП Ag-ЯОРбелков, Ag-ЯОР-белки (MIB-1), ПП, ИМ Ki-67, ИМ ТороII (табл. 4). Корреляционные взаимосвязи экспрессии р53 с молекулярно-биологическими маркерами в целом были тождественны и при гистогенетических типах НМКРЛ - Ак и Пк; однако, имелись и отличия. Отсутствовала корреляция экспрессии р53 с Ag-ЯОР-белки (MIB-1) при Ак; с ИМ Ki-67 и ИМ ТороII при Пк. При НМКРЛ положительная экспрессия bcl-2 имела обратную корреляцию с ИП Ag-ЯОР-белков и Ag-ЯОР-белками (MIB-1). При Ак отсутствовала взаимосвязь экспрессии bcl-2 с Ag-ЯОР-белками (MIB-1), но найдена взаимосвязь с ИМ ТороII (р=0,04). Корреляционные взаимосвязи экспрессии bcl-2 с молекулярно-биологическими маркерами были тождественны при Пк и НМКРЛ; однако, при Пк отмечается также взаимосвязь с ПП (р=0,006). При НМКРЛ положительная экспрессия bax имела прямую корреляцию с ПП, ИМ Ki-67 и ИМ ТороII. Однако при гистогенетических вариантах НМКРЛ (Ак и Пк) отсутствовала взаимосвязь экспрессии bax с молекулярно-биологическими маркерами.

5-летняя выживаемость больных НМКРЛ имела статистически значимое отличие в зависимости от экспрессии р53 (р=0,03): 46,2±4,7% – при отрицательной экспрессии и 32,4±5,1% - при положительной экспрессии. Также 5-летняя выживаемость больных НМКРЛ имела статистически значимое отличие в зависимости от экспрессии bcl-2 (р=0,004): 35,6±3,8% – при отрицательной экспрессии и 58,4±8,8% - при положительной экспрессии (рис. 2б). Выживаемость больных НМКРЛ при положительной экспрессии bax была ниже по сравнению с отрицательной экспрессией (36,8±4,7% и 44,8±5,2% соответственно), однако, отличие не достоверно (р=0,7). Аналогичная динамика показателя 5летней выживаемости найдена только при Пк. При однофакторном регрессионном анализе прогностическое значение имели экспрессия р53 (2=4,6-4,7; р0,05) и bcl-2 (2=4,1-8,5;

р0,05) при НМКРЛ и Пк.

Таким образом, при НМКРЛ изменялась экспрессия р53, bcl-2 и bax по сравнению с неизмененным эпителием альвеол и бронхов, что имеет практическое дифференциальнодиагностическое значение. Имеется гендерная взаимосвязь с экспрессией bax. Экспрессия р53, bcl-2 и bax была взаимосвязана с гистогенезом НМКРЛ, а также экспрессия bcl-2 - с показателем N и стадией заболевания. Экспрессия р53, bcl-2 и bax имела корреляцию с молекулярно-биологическими маркерами, взаимосвязанными с пролиферацией. Положительная экспрессия р53 и отрицательная экспрессия bcl-2 являются неблагоприятными прогностическими факторами и взаимосвязаны с низким показателем выживаемости больных НМКРЛ и Пк.

ПМЦР-Г и ПМЦР-Л. В неизмененных альвеолах ПМЦР-Г составила 86 (73-102), лимфатические сосуды отсутствовали. В неизмененных бронхах ПМЦР-Г составила 22 (17-31), ПМЦР-Л – 4 (2-7). При НМКРЛ ПМЦР-Г составила 43 (34-60), ПМЦР-Л - 4 (2-9).

При НМКРЛ наблюдалось снижение ПМЦР-Г по сравнению с альвеолами и повышение по сравнению с бронхами (р0,001), а также повышение ПМЦР-Л по сравнению с альвеолами (р0,001) и отсутствие отличия по сравнению с бронхами. Отсутствовала статистически значимая взаимосвязь возрастно-половых характеристик больных НМКРЛ, Ак и Пк с ПМЦР-Г и ПМЦР-Л.

Не найдено статистически значимого отличия ПМЦР-Г и ПМЦР-Л в зависимости от клинико-морфологических параметров НМКРЛ, Ак и Пк: показателя Т, наибольшего размера, показателя N, стадии заболевания и дифференцировки (табл. 2). Отмечалось статистически значимое увеличение ПМЦР-Г при Ак по сравнению с Пк – соответственно 47 (36-64) и 40 (30-59) (р=0,01). ПМЦР-Л не имела отличий в зависимости от гистогенеза.

При НМКРЛ, Ак и Пк отсутствовали статистически значимые связи ПМЦР-Г и ПМЦРЛ с экспрессией молекулярно-биологических маркеров, а также между ПМЦР-Г и ПМЦРЛ (табл. 4). При Ак ПМЦР-Г имела корреляцию с ИП Ag-ЯОР-белков и Ag-ЯОР-белков (MIB-1).

Рисунок 3. Графики выживаемости по Каплану-Мейеру больных НМКРЛ с небольшой (-) и большой (+) ПМЦР-Г (а) и четырех типов НМКРЛ, по состоянию гена Her2 и CEP17.

По оси абсцисс – время жизни (в днях), по оси ординат – доля выживших больных.

5-летняя выживаемость больных НМКРЛ имела статистически значимое отличие (р=0,008) в зависимости от ПМЦР-Г: 49,8±5,2% - при небольшой ПМЦР-Г 43 и 29,8±4,8% - при большой ПМЦР-Г43 (рис. 3а). Также 5-летняя выживаемость больных

НМКРЛ имела статистически значимое отличие (р=0,03) в зависимости от ПМЦР-Л:

48,3±5,5% - при небольшой ПМЦР-Л 4 и 34,0±4,6% - при большой ПМЦР-Л4. Аналогичная динамика показателя 5-летней выживаемости найдена при Ак и Пк в зависимости от ПМЦР-Г, а также при Пк в зависимости от ПМЦР-Л. При однофакторном регрессионном анализе ПМЦР-Г имела взаимосвязь с выживаемостью больных НМКРЛ, Ак и Пк (2=7,3-10,0; р0,01); взаимосвязь с ПМЦР-Л отсутствовала.

Таким образом, при НМКРЛ по сравнению с неизмененным легким наблюдались отличия ПМЦР-Г и ПМЦР-Л, что имеет практическое дифференциально-диагностическое значение. Отсутствовала гендерно-возрастная взаимосвязь с ПМЦР-Г и ПМЦР-Л. ПМЦРГ имела взаимосвязь с гистогенезом. Также ПМЦР-Г имела корреляцию с незначительным количеством молекулярно-биологических маркеров (ИП Ag-ЯОР-белков и Ag-ЯОРбелками (MIB-1). Большая ПМЦР-Г является неблагоприятным прогностическим фактором и взаимосвязана с низким показателем выживаемости больных.

Статус белка и гена Her2. В неизмененном эпителии альвеол и бронхов отсутствовала положительная экспрессия белка Her2 и амплификация гена Her2. При НМКРЛ положительная экспрессия белка Her2 найдена в 106 случаях (49%). При НМКРЛ амплификация гена Her2 найдена в 19 случаях (9%), увеличение CEP17 в 26 случаях (12%). В 4 случаях (2%) Ак амплификация гена Her2 (без увеличения CEP17) определялась в виде кластеров. В остальных 15 случаях (7%) амплификация гена Her2 определялась в виде отдельных множественных копий, из которых в 7 случаях совместно с увеличением CEP17 и в 8 случаях - без увеличения CEP17. В одном случае Ак с высоким уровнем амплификации гена Her2 найдена неоднородность амплификации гена Her2: в участках опухоли с железистоподобным строением отмечался низкий уровень амплификации гена Her2, а в участках солидизации - высокий уровень амплификации гена Her2. Таким образом, в клетках НМКРЛ наблюдалось увеличение количества случаев с положительной экспрессией белка Her2, амплификацией гена Her2 и увеличения CEP17 по сравнению с неизмененным эпителием альвеол и бронхов (р0,001).

Отсутствовала статистически значимая взаимосвязь пола и возраста больных НМКРЛ, Ак и Пк с положительной экспрессией белка Her2. Возраст больных НМКРЛ, Ак и Пк не взаимосвязан со статусом гена Her2. Найдено статистически значимое увеличение количества случаев с амплификацией гена Her2 при НМКРЛ у лиц женского пола по сравнению с мужским – соответственно 6 случаев (18%) и 13 случаев (7%) (р=0,04).

Однако, при Ак и Пк различия статистически не достоверны.

Отмечалось статистически значимое увеличение количества случаев с положительной экспрессией белка Her2 в группе опухолей с наличием метастазов в лимфатические узлы по сравнению с опухолями без метастазов (соответственно 44 случая (58%) и 62 случая (44%), р=0,048) и при Ак по сравнению с Пк (соответственно 61 случай (62%) и 45 случаев (38%), р0,001). Положительная экспрессия белка Her2 была взаимосвязана с показателем N и гистогенезом (табл. 2). Некоторые отличия имелись в экспрессии белка Her2 при гистогенетических вариантах НМКРЛ: при Ак положительная экспрессия белка Her2 коррелировала с наибольшим размером опухоли (r=0,21, р=0,03), при Пк – с показателем N (r=0,31, р=0,006) и стадией заболевания (r=0,21, р=0,03). Количество случаев с амплификацией гена Her2 достоверно больше при Ак по сравнению с Пк (соответственно 16 (16%) и 3 (3%) случая, р0,001). Отмечалось статистически значимое увеличение количества случаев с увеличением CEP17 в группе опухолей с наличием метастазов в лимфатические узлы по сравнению с опухолями без метастазов (соответственно 14 (18%) и 12 (8%) случаев, р=0,047). Амплификация гена Her2 коррелировала с гистогенезом НМКРЛ, а состояние CEP17 - с показателем N (табл. 2).

При НМКРЛ и Пк экспрессия белка Her2 коррелировала с Ag-ЯОР-белками (MIB-1).

При НМКРЛ и Ак амплификации гена Her2 имела корреляцию с ИП Ag-ЯОР-белков, ПП, ИМ Ki-67 и ИМ ТороII (табл. 4). При НМКРЛ, Пк и Ак отмечалась корреляция между положительной экспрессией белка Her2 и амплификацией гена Her2 (r=0,32, p 0,001).

Только при положительной экспрессии белка Her2 найдена амплификация гена Her2.

5-летняя выживаемость больных НМКРЛ имела статистически значимое отличие в зависимости от экспрессии белка Her2 (р=0,02): 46,8±5,2% – при отрицательной и 30,9±5,0%

- при положительной. Аналогичная взаимосвязь прослеживается только при Пк, при Ак отсутствует. 5-летняя выживаемость больных НМКРЛ при наличии амплификации гена Her2 была ниже по сравнению с опухолями, в которых отсутствовала амплификация гена Her2 (31,0±11,5% и 39,9±3,8% соответственно), однако, отличие не достоверно (р=0,5).



Pages:   || 2 |

Похожие работы:

«УДК 597.5:639.216.1(261)(268) МЕЛЬНИКОВ Сергей Петрович ОКУНЬ-КЛЮВАЧ SEBASTES MENTELLA АТЛАНТИЧЕСКОГО И СЕВЕРНОГО ЛЕДОВИТОГО ОКЕАНОВ (ПОПУЛЯЦИОННАЯ СТРУКТУРА, БИОЛОГИЯ, ПРОМЫСЕЛ) Специальность: 03.02.06 – ихтиология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук МОСКВА – 2013 Работа выполнена во Всероссийском научно-исследовательском институте рыбного хозяйства и океанографии (ФГУП «ВНИРО») Научный консультант: доктор биологических наук Булатов...»

«Кисова Светлана Владимировна АГРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ОСНОВЫ ФОРМИРОВАНИЯ ОБЪЕКТОВ ЦВЕТОЧНОГО ОФОРМЛЕНИЯ В ОЗЕЛЕНЕНИИ ГОРОДСКОЙ СРЕДЫ (НА ПРИМЕРЕ УЛАН-УДЭ) 06.01.01 – общее земледелие, растениеводство АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата сельскохозяйственных наук Улан-Удэ – 2015 Работа выполнена на кафедре ландшафтного дизайна и экологии Федерального государственного бюджетного образовательного учреждения высшего образования «Бурятская государственная...»

«Чичерина Екатерина Александровна БИОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА ВИРУЛЕНТНЫХ ШТАММОВ ВИРУСА БОЛЕЗНИ МАРЕКА 06.02.02. «Ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология» АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук Владимир 2015 Работа выполнена в федеральном государственном бюджетном учреждении «Федеральный центр охраны здоровья животных» (г. Владимир) Ирза Виктор Николаевич, доктор ветеринарных...»

«Шапурко Валентина Николаевна РЕСУРСЫ И ЭКОЛОГИЧЕСКОЕ КАЧЕСТВО ЛЕКАРСТВЕННЫХ РАСТЕНИЙ (НА ПРИМЕРЕ БРЯНСКОЙ ОБЛАСТИ) Специальность 03.02.08 – Экология (биологические науки) АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Брянск 2014 Работа выполнена на кафедре экологии и рационального природопользования ФГБОУ ВПО «Брянский государственный университет имени академика И.Г. Петровского» доктор сельскохозяйственных наук, профессор Научный...»

«МОРОЗОВА КСЕНИЯ ВЛАДИМИРОВНА ПОЛИМОРФИЗМ ГЕНОВ ФЕРМЕНТОВ ДЕТОКСИКАЦИИ, АНТИОКСИДАНТНОЙ ЗАЩИТЫ И РЕПАРАЦИИ ДНК В ГЕНЕЗЕ НЕВЫНАШИВАНИЯ БЕРЕМЕННОСТИ 14.01.01 – акушерство и гинекология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Москва – 2015 Работа выполнена в Государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Российский национальный исследовательский медицинский университет имени Н.И. Пирогова»...»

«ДОРОНИН Максим Игоревич ЭКСПРЕСС-МЕТОДЫ ВЫЯВЛЕНИЯ ВИРУСА ИНФЕКЦИОННОГО НЕКРОЗА ГЕМОПОЭТИЧЕСКОЙ ТКАНИ ЛОСОСЕВЫХ РЫБ 03.02.02 «Вирусология» Aвтореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Владимир – 2015 Работа выполнена в федеральном государственном бюджетном учреждении «Федеральный центр охраны здоровья животных» (ФГБУ «ВНИИЗЖ»). доктор биологических наук Научный руководитель: Мудрак Наталья Станиславовна Грищенко Леонид Иванович – Официальные...»

«Чичерина Екатерина Александровна БИОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА ВИРУЛЕНТНЫХ ШТАММОВ ВИРУСА БОЛЕЗНИ МАРЕКА 06.02.02. «Ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология» АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук Владимир 2015 Работа выполнена в федеральном государственном бюджетном учреждении «Федеральный центр охраны здоровья животных» (г. Владимир) Ирза Виктор Николаевич, доктор ветеринарных...»

«Дандал Али Шебли ПАТОГЕНЕТИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА ВИРУСА ИНФЕКЦИОННОГО БРОНХИТА КУР 06.02.02 «ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология» АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук Владимир-2015 Работа выполнена в ФГБУ «Федеральный центр охраны здоровья животных» (ФГБУ «ВНИИЗЖ) Россельхознадзора и в ФГБАОУ ВПО «Российский университет дружбы народов» Научный руководитель: Макаров Владимир...»

«АЛЕКСАНДРОВА Алина Витальевна ПОЧВООБИТАЮЩИЕ МИКРОСКОПИЧЕСКИЕ ГРИБЫ: ГЕОГРАФИЯ И ЭКОЛОГИЯ Специальность 03.02.12 – «Микология» Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук Москва – 2013 Работа выполнена на кафедре микологии и альгологии Биологического факультета Московского государственного университета имени М.В.Ломоносова Научный консультант: Ирина Ивановна...»

«Гафаров Рамиз Рафикович Совершенствование лабораторной диагностики краснухи в условиях проведения массовой вакцинопрофилактики 03.02.02 Вирусология 14.03.10 Клиническая лабораторная диагностика АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Москва-2014 Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном учреждении «Научно-исследовательский институт вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова» Российской академии медицинских наук Научные...»

«БУХАРОВА Надежда Владимировна АФИЛЛОФОРОВЫЕ ГРИБЫ ГОСУДАРСТВЕННОГО ПРИРОДНОГО ЗАПОВЕДНИКА «БАСТАК» 03.02.01 – ботаника АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Владивосток – 2013 Работа выполнена в лаборатории низших растений Федерального государственного бюджетного учреждения науки Биолого-почвенного института ДВО РАН Научный руководитель: кандидат биологических наук Булах Евгения Мироновна Научный консультант: кандидат биологических...»

«Абросимова Светлана Борисовна Совершенствование методов селекции картофеля на устойчивость к золотистой цистообразующей нематоде (Globodera rostochiensis (Woll.) Специальность: 06.01.05 – селекция и семеноводство сельскохозяйственных растений АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание учёной степени кандидата сельскохозяйственных наук Москва – 2014 Диссертационная работа выполнена в Государственном научном учреждении Всероссийский научно-исследовательский институт картофельного...»

«Фирстова Виктория Валерьевна Экспериментально-иммунологическое обоснование выбора стратегии оценки поствакцинального иммунитета против чумы и туляремии 14.03.09 Клиническая иммунология, аллергология АВТОРЕФЕРАТ диссертация на соискание ученой степени доктора биологических наук Оболенск 2015 Работа выполнена в ФБУН «Государственный научный центр прикладной микробиологии и биотехнологии» Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека...»

«СТОЛПОВСКАЯ Елена Владимировна СИНТЕЗ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ КОМПЛЕКСНЫХ СОЕДИНЕНИЙ НА ОСНОВЕ ДИГИДРОКВЕРЦЕТИНА – ПРОДУКТА ГЛУБОКОЙ ПЕРЕРАБОТКИ ДРЕВЕСИНЫ ЛИСТВЕННИЦЫ 05.21.03 технология и оборудование химической переработки биомассы дерева; химия древесины АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание учёной степени кандидата химических наук Иркутск Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном учреждении науки Иркутском институте химии им. А.Е. Фаворского Сибирского...»

«АЛЕКСЕЕВА Татьяна Васильевна БИОТЕХНОЛОГИЧЕСКИЙ ПОТЕНЦИАЛ ФРАКЦИЙ ГЛУБОКОЙ ПЕРЕРАБОТКИ НИЗКОМАСЛИЧНОГО СЫРЬЯ: БАЛАНСИРОВАНИЕ ПНЖК СОСТАВА, ПРОГНОЗИРОВАНИЕ КАЧЕСТВА, НОВЫЕ ТЕХНОЛОГИИ Биотехнология пищевых продуктов и биологических 05.18.07 – активных веществ Технология и товароведение пищевых продуктов 05.18.15 – и функционального и специализированного назначения и общественного питания АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора технических наук Воронеж Работа...»

«ГАБДУЛЛИН ФАИЛЬ ХАРИСОВИЧ ВЕТЕРИНАРНО-САНИТАРНАЯ И БИОЛОГИЧЕСКАЯ ОЦЕНКА КАЧЕСТВА МЯСА КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА ПРИ ИСПОЛЬЗОВАНИИ В РАЦИОНЕ АЭПК «БИОГУММИКС» 06.02.05 Ветеринарная санитария, экология, зоогигиена и ветеринарносанитарная экспертиза 03.03.01 Физиология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Казань 2015 Работа выполнена в федеральном государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования...»

«Вечерковская Мария Фёдоровна Оценка микробиоты ротовой полости у детей с онкогематологическими заболеваниями 03.02.03. – микробиология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание учёной степени кандидата медицинских наук Санкт-Петербург – 2015 Работа выполнена в Государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Первый Санкт Петербургский Государственный медицинский университет имени академика И.П. Павлова» Министерства здравоохранения...»

«Бондакова Марина Валерьевна РАЗРАБОТКА РЕЦЕПТУРЫ И ТЕХНОЛОГИИ ПРОИЗВОДСТВА КОСМЕТИЧЕСКИХ ИЗДЕЛИЙ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ЭКСТРАКТА ВИНОГРАДА Специальность 05.18.06 – Технология жиров, эфирных масел и парфюмерно-косметических продуктов (технические науки) АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата технических наук Москва – 2014 Работа выполнена на кафедре «Биотехнология и технология продуктов биоорганического синтеза» Федерального государственного бюджетного...»

«КОЛЯДИНА ИРИНА ВЛАДИМИРОВНА ГЕТЕРОГЕННОСТЬ РАННЕГО РАКА МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ: БИОЛОГИЧЕСКОЕ, ПОПУЛЯЦИОННОЕ И ПРОГНОСТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ 14.01.12 – Онкология АВТОРЕФЕРАТ диссертация на соискание ученой степени доктора медицинских наук Москва-2015 Работа выполнена в Государственном бюджетном образовательном учреждении дополнительного профессионального образования «Российская медицинская академия последипломного образования» Министерства здравоохранения Российской Федерации,...»

«Кузнецова Наталья Владимировна СОВРЕМЕННОЕ ГИДРОБИОЛОГИЧЕСКОЕ СОСТОЯНИЕ РЕКИ ЯХРОМА КАК МОДЕЛЬНОЙ МАЛОЙ РЕКИ ПОДМОСКОВЬЯ 03.02.10 – гидробиология Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук МОСКВА 2015 Работа выполнена на кафедре экологии Дмитровского рыбохозяйственного технологического института ФГБОУ ВПО «Астраханский государственный технический университет» (ДРТИ ФГБОУ ВПО «АГТУ»), п. Рыбное Научный руководитель: Вундцеттель Михаил...»







 
2016 www.konf.x-pdf.ru - «Бесплатная электронная библиотека - Авторефераты, диссертации, конференции»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.