WWW.KONF.X-PDF.RU
БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА - Авторефераты, диссертации, конференции
 


Pages:     | 1 | 2 || 4 | 5 |   ...   | 8 |

«ПОЛУЧЕНИЕ РЕКОМБИНАНТНЫХ И СИНТЕТИЧЕСКИХ АНТИГЕНОВ MYCOBACTERIUM TUBERCULOSIS И ПЕРСПЕКТИВЫ ИХ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ ДЛЯ СЕРОДИАГНОСТИКИ ТУБЕРКУЛЕЗА ...»

-- [ Страница 3 ] --

Для серодиагностики туберкулеза наиболее важно определение заболевания на начальных этапах активации туберкулезного процесса. Спектр синтезируемых антигенов M. tuberculosis и антительный ответ на них меняется в зависимости от стадии и формы заболевания. Так, например, повышенный титр анти – 14 кДа антител ассоциировано с хронической формой заболевания в большей степени, чем с активным туберкулезным процессом, антитела к ESAT-6 определяются уже в латентном периоде заболевания, но их титр существенно нарастает при активации туберкулеза. Высокий уровень анти – 32 кДа антител определяется на ранних стадиях прогрессирования заболевания до фазы распада и диссеминирования, а антител против 38кДа белка – при активном прогрессирующем кавернозном туберкулезе легких [61, 74, 84, 136, 258, 259]. В таблице 5 представлены наиболее эффективные серодиагностические маркеры туберкулеза при различных формах и стадиях заболевания.

Таблица 5 - Перспективные серодиагностические маркеры туберкулеза при различных формах и стадиях заболевания

–  –  –

Главными критериями отбора антигенных препаратов для серодиагностики являются их чувствительность и специфичность. Эти показатели для тестов с одним антигеном могут значительно варьировать в регионах, отличающихся по уровню распространенности заболевания и у различных категорий больных.

Географическая гетерогенность иммунного ответа при туберкулезе определяет различия в уровнях напряженности гуморального иммунного ответа на идентичные антигены M. tuberculosis у больных активным туберкулезом из разных стран (таблица 6).

Сохранение диверсифицированного антительного репертуара у ВИЧинфицированных туберкулезных больных дает возможность диагностировать туберкулез, используя серологический подход, основанный на детекции антител к M. tuberculosis-специфичным антигенам [319].

Наиболее перспективными антигенами для целей M. tuberculosis серодиагностики туберкулеза у ВИЧ-инфицированных, по данным литературы, являются: Rv0222 [250], TB16.3, TB9.7 [325], 38 кДа, 19 кДа белки [319], Ag85В [308], МРТ51 [34], МТВ81 [257], MPT32 [279] и PGL-Tb1 [275].

В работе K.Weldingh M. tuberculosis - специфичные антигены TB16.3 и TB9.7 в ИФА реагировали более чем с 85% сывороток туберкулезных больных, коинфицированных ВИЧ, причем, чувствительность детекции анти - TB9.7 антител с сыворотками ВИЧ - положительных, в данном случае, оказалась выше (91%), чем с сыворотками ВИЧ - отрицательных туберкулезных больных (79%).

Хотя разница не являлась статистически значимой (P=0,11), однако, эти результаты свидетельствуют о том, что обычно супрессированный антительный ответ у ВИЧ - положительных пациентов не препятствует хорошему распознаванию некоторых антигенов [325].

Более того, в нескольких работах было продемонстрировано, что антитела против MPT51 и МТВ81 детектируются в субклиническом периоде туберкулеза у ВИЧ - положительных в большем проценте случаев, чем у ВИЧ – отрицательных туберкулезных больных [41, 278].

Таблица 6 - Серодиагностическая эффективность антигенов M. tuberculosis в разных странах

–  –  –

Выявление внелегочного туберкулеза и туберкулеза у «мазок-негативных»

пациентов с помощью серодиагностики могло бы дать ей дополнительные преимущества, по сравнению с другими методами. Некоторые белковые и гликолипидные антигены M. tuberculosis имеют потенциал для использования в серодиагностике туберкулеза у таких групп больных (например, МРТ64, PGLTb1, корд-фактор) [54, 131, 132].

В связи с наличием индивидуальной гетерогенности иммунного ответа при туберкулезе чувствительность серологических тестов на основе одного антигена, как правило, невысокая (не выше 75% даже в «мазок-позитивных» случаях туберкулеза). Повышения чувствительности теста можно достичь комбинацией нескольких наиболее иммуногенных в данном регионе антигенов. Так в работе A.

Raja и соавторов чувствительность теста, определяющего антитела классов G и А к смеси из 4 белков M. tuberculosis (38 кДа, 30 кДа, 16 кДа и 27 кДа белков), превысила значения, полученные для каждого из этих белков отдельно и достигла 96%. Однако специфичность теста в данном случае оказалась ниже, чем с отдельными антигенами (85%) [241].

1. 4. 2. Способы получения антигенных препаратов M. tuberculosis для целей серодиагностики туберкулеза Эффективность применения антигенных препаратов в серодиагностике зависит от их «качества», которое определяется, в том числе и способом их получения. Оптимальными структурными характеристиками, необходимыми для связывания противотуберкулезных антител в иммунных анализах, обладают нативные белки, выделенные из фильтрата культуры или цельноклеточного лизата M. tuberculosis [31, 259, 325].

Однако длительность культурального цикла M. tuberculosis, необходимость специализированных лабораторий и производств, имеющих разрешения для работы с микроорганизмами III группы патогенности, и строго контроля степени очистки препаратов от неспецифичных белков и других компонентов культуры M. tuberculosis затрудняют получение нативных микобактериальных белков в большом объеме для целей массовой диагностики [241].

Данную проблему может решить использование рекомбинантных экспрессионных систем, например, E. coli. Ее преимуществами являются простота, доступность, быстрый рост культуры, высокая экспрессия чужеродных белков и другие. Однако, иммуногенность рекомбинантных микобактериальных белков, полученных в E. coli, как правило, снижена, что обусловлено отличиями в их строении от нативных белков M. tuberculosis [80, 259, 345].

В существующих системах экспрессии E. coli рекомбинантные белки не подвергаются посттрансляционным модификациям, в частности, гликозилированию. Это приводит к неправильному фолдингу белков, утрате их функций, в том числе нарушению связывания со специфическими антителами при отсутствии конформационных эпитопов [90, 176]. Кроме того, гликозилированы многие, главным образом, секретируемые и поверхностные белки M. tuberculosis (Rv0040c, Rv1860, Rv2873, Rv3763 и другие) [53, 81, 88, 198, 284, 329].

В некоторых патогенных штаммах E. coli все же были обнаружены гликозилированные (гептозными остатками) секретируемые белки (аутотранспортеры AIDA-I, TibA, Ag43) и соответствующие гликозилтрансферазы (Aah, TibC), однако, механизмы гликозилирования данных белков малоизучены [75]. В настоящее время разрабатываются методы экспрессии в E. coli бактериальных и эукариотических белков, с N-гликозилированных использованием хорошо охарактеризованной системы гликозилирования Campylobacter jejuni, но пока они недостаточно эффективны [225, 226, 311, 317, 321].

Гликозилированные рекомбинантные белки M. tuberculosis для целей серодиагностики, возможно, получать в таких экспрессионных системах как Pichia pastoris (в ней получены белки CFP32, Ag85B) [52, 273], Streptomyces lividans (MPT32) [103, 176] и Mycobacterium smegmatis (Rv3763, Rv3873) [81, 104].

Система P. pastoris является наиболее широко распространенным и изученным «инструментом» для получения гликозилированных белков. Она обладает способностью секретировать в среду функционально активные рекомбинантные белки в значительных концентрациях при незначительном количестве собственных секретируемых белков. В данной системе белки подвергаются посттрансляционным модификациям, а именно формированию дисульфидных связей, ацетилированию, фосфорилированию, и N- Oгликозилированию, в частности, O-маннозилированию, которое осуществляется у дрожжей по тому же механизму, что и у M. tuberculosis [193].

О-маннозилирование – жизненно важный механизм гликозилирования белков, консервативный для грибов и эукариотов, также был обнаружен у M. tuberculosis. Исследования на моделях иммунодефицитных мышей выявили значительное снижение вирулентности у штамма M. tuberculosis с нарушенным механизмом О-маннозилирования. Предполагается, что поверхностные и секретируемые белки M. tuberculosis, связанные 1–2-маннобиозой, имитируют разветвленные маннозные мотивы внутриклеточных эукариотических белков не случайно, и могут иметь решающее значение для эффективного паразитирования в эукариотических клетках. В P. pastoris, как и в M. tuberculosis, Оманнозилированные гликаны, - связанные с гидроксильной группой серина или треонина, образуют 1,2-связанные маннобиозу и маннотриозу (Man1-2Man1Man1-Ser/Thr). Кроме того, в отличие от Saccharomyces cerevisiae, в P. pastoris происходит терминальное силилирование О-цепей подобное тому, которому подвергаются гликопротеины в клетках эукариот [89, 185].

Для P. pastoris, как правило, характерен высокоманнозный тип Nгликозилирования, связывая 8-14 остатков маннозы с амидным азотом аспарагина посредством двух молекул N-ацетилглюкозамина (сайты гликозилирования:

аспарагин - любая аминокислота (кроме пролина) - серин/треонин).

В отличие от Saccharomyces cerevisiae секретируемые белки P. pastoris не гипергликозилированы, также как и нативные белки M. tuberculosis [89, 185, 193, 284].

В тоже время, разными авторами показано, что антимикобактериальные антитела обладают большим сродством именно к гликозилированной форме некоторых антигенов M. tuberculosis [91, 109, 176].

Кроме того, как M. tuberculosis, так и P. pastoris имеют ГЦ-богатый состав генома. Это сходство обеспечивает стабильность генов M. tuberculosis в геноме P. pastoris.

Таким образом, белки, полученные в дрожжевой системе, обладают структурой, сходной с нативной, а, следовательно, более иммуногенны.

Например, благодаря использованию дрожжевой системы P. pastoris удалось повысить чувствительность теста ИФА на основе рекомбинантного белка M. tuberculosis CFP32 с 34% (с CFP32, выделенным из E. coli) до 85% (с соответствующим белком, полученным в P. pastoris) [52].

Кроме рекомбинантных систем экспрессии для получения антигенных препаратов также эффективен химический синтез. Он имеет преимущества при производстве пептидов, являющихся линейными эпитопами антигенов, а также углеводных и липидных молекул.

Например, в работе R. S. Kashyap синтетические пептиды белков комплекса Ag85 позволяли детектировать легочный и внелегочный туберкулез. А в исследовании A. Laszlo синтетический корд-фактор в ИФА реагировал с большим числом сывороток больных туберкулезом, чем его нативный аналог. D. Kaur показано, что химически синтезированные олигоарабинофуранозиды эффективно связывают в ИФА моноклональные анти-ЛАМ антитела. Синтетические антигены M. tuberculosis имеют перспективы для применения их в серодиагностике туберкулеза [151, 152, 177].

Систематизация антигенов M. tuberculosis по группам белков и небелковых липидные) антигенов при описании их характеристик в (углеводные, литературном обзоре представляется наиболее удобной, так как в ее основе лежат не только структурные отличия антигенов, но и разные механизмы развития иммунного ответа на них [219, 237, 271, 316].

1. 4. 3. Белковые антигены M. tuberculosis, обладающие потенциалом для использования в серодиагностике туберкулеза

–  –  –

Среди белковых антигенов M. tuberculosis, обладающих потенциалом для применения в серодиагностике туберкулеза, можно выделить 9 белков (Rv3871Rv3879c), кодируемых RD1 регионом микобактерий туберкулезного комплекса, который удален во всех субштаммах M. bovis BCG, в том числе в M. bovis BCG Russia (таблица 7).

Таблица 7 - Видовая специфичность некоторых «RD белков» M. tuberculosis [43].

–  –  –

здоровых БЦЖ - вакцинированных людей. Среди белков, кодируемых RD1 регионом M. tuberculosis, наибольший интерес для целей серодиагностики представляют антигены PE35(Rv3872), PPE68(Rv3873), CFP-10(Rv3874) и ESAT-6 (Rv3875).

Гены белков Rv3872 и Rv3873 относятся к мультигенному семейству РЕ/РРЕ. Оно насчитывает 176 ОРС белков, составляющих 10% протеома M. tuberculosis. Все белки этого семейства имеют высококонсервативные пролинглутамат (РЕ) и пролин-пролин-глутамат (РРЕ) N-терминальные домены, содержащие 110 и 180 аминокислотных остатков, соответственно [37]. Наличие данных гомологичных участков в структуре указанных RD1 белков, может обусловить перекрестные реакции организма у здоровых БЦЖ-вакцинированных людей, а также пациентов, контактировавших с нетуберкулезными микобактериями, и, таким образом, снизить специфичность иммунологического анализа. Например, L. M. Okkels показано, что пептид Rv3873118-135 на 78-89% идентичен последовательностям 9 РРЕ белков M. tuberculosis и M. bovis, а также 2-7 белков M. leprae, M. marinum, M. smegmatis [221]. Действительно, в работе А.В. Жердева и соавторов специфичность ИФА с Rv3873 оказалась невысока – при определении антител класса М - 63,5% (чувствительность - 62,5%), класса G чувствительность - 65,4%) [10].

Использование в ИФА только специфичных пептидов Rv3873, например, как в работе Jia-Nan Xu, может привести к повышению специфичности анализа, по сравнению с целым антигеном [340]. При оценке иммуногенности отдельных перекрывающихся пептидов Rv3872 в работе P. Mukherjee два из них, Р8 и Р9, оказались наиболее серореактивными и показали результаты в ИФА схожие с данными, полученными при оценке целого белка. Вместе Р8 и Р9 позволили выявить 94% (против 92% для Rv3872) случаев легочного и 90% (против 89%) внелегочного туберкулеза. Специфичность ИФА с Р8 и Р9 составила 100%, что оказалось на 5% выше результатов с целым белком [83, 210, 212].

Rv3874 (CFP-10) и Rv3875 (ESAT-6) – низкомолекулярные белки фильтрата культуры M. tuberculosis, кодируемые генами, относящимися к семейству esat6.

Белки, принадлежащие к указанному семейству, имеют гомологию с ESAT-6 в аминокислотной последовательности от 10 до 35%,а их ортологи встречаются у M. leprae, Staphylococcus aureus, Listeria monocytogenes и другие [110, 189, 323].

CFP-10 и ESAT-6 экспрессируются на ранних стадиях развития инфекции, формируют плотный 1:1 гетеродимерный комплекс ESAT-6/CFP-10, который секретируется во внеклеточное пространство благодаря системе ESX-1, при этом сам процесс секреции ассоциирован с патогенезом туберкулеза. ESAT-6 ингибирует антиген-презентирующую функцию макрофагов за счет уменьшения продукции ИЛ-12 посредством нарушения Toll-like рецептор 2 сигнального пути, угнетает Т-клеточный ответ, оказывает влияние на сигнальный путь Т-клеточного рецептора после ZAP70, снижает выработку -ИНФ, ИЛ-17, фактор некроза опухоли (ФНО), но не ИЛ-2. Действуя как цитолитический токсин, формирующий поры в мембранах клетки, он вызывает лизис эритроцитов, способствует проникновению M. tuberculosis в клетку, избегая фаголизосомы, и, таким образом, диссеминации патогена в организме [99, 122, 160, 260].

В исследованиях, направленных на измерение уровня IgG против перекрывающихся синтетических пептидов ESAT-6, наиболее выраженный антительный ответ был получен против С-концевого участка белка, как у экспериментальных, так и у естественно инфицированных животных. Более того, эти антитела детектировались уже на ранних этапах экспериментальной инфекции, что объяснялось быстрым увеличением числа ESAT-6-специфичных Bклеточных клонов в ходе течения заболевания. В недавних исследованиях в Канаде при сравнении антительного ответа на ESAT-6, 38кДа и 14 кДа (Rv0455c) белки M. tuberculosis у больных и здоровых пациентов, было обнаружено, что ESAT-6 не ассоциирован с активным туберкулезом, а только с факторами риска развития активного заболевания, либо с латентным туберкулезом [119]. В исследованиях, проведенных в Эфиопии, напротив, было показано, что повышенный титр анти-ESAT-6 антител характерен для активного прогрессирующего туберкулеза [84].

При изучении антительного ответа на белки ESAT-6 и CFP-10 у больных и здоровых жителей высокоэндемичного региона, Гамбии, чувствительность теста с ESAT-6 составила 67%, а с CFP-10 - 63%, специфичности - 51% и 55%, соответственно. Почти у половины доноров контрольной группы, проживающих в Гамбии, обнаруживались антитела к данным белкам, в то время как в неэндемичных странах с ними реагировали менее 6% сывороток здоровых БЦЖвакцинированных доноров. Низкая специфичность тестов, по мнению авторов, объяснялась широкой распространенностью латентного туберкулеза в Гамбии [119].

CFP-10 - один из многообещающих антигенов M. tuberculosis для целей серодиагностики туберкулеза. В работе H. Zhang и соавторов серологический тест, основанный на CFP-10, выявил 78% случаев легочного, 65,6%-внелегочного туберкулеза, а специфичность теста составила 96,4% [349].

1. 4. 3. 2. Другие потенциальные белковые антигены M. tuberculosis для целей серодиагностики туберкулеза Среди белков M. tuberculosis, гомологичных белкам M. bovis BCG, также есть антигены с высоким потенциалом для применения в серодиагностике туберкулеза. Важной характеристикой таких белков является наличие в их структуре иммунодоминантных эпитопов, специфичных для микобактерий туберкулезного комплекса. Антитела против данных антигенов появляются, либо значительно нарастает их титр (по сравнению с уровнем противотуберкулезных антител у здоровых БЦЖ-вакцинированных или инфицированных туберкулезом людей), только при активации заболевания. Потенциальные белковые серодиагностические маркеры туберкулеза относятся в основном к группам секретируемых белков M. tuberculosis, наиболее доступных для иммунной системы [196, 245].

Секретируемый белок M. tuberculosis Rv0040c (МТС28), с высоким содержанием остатков аланина и пролина, проявляет выраженную иммунологическую активность как в реакциях клеточного, так и гуморального иммунитета. Кодирующая последовательность этого антигена присутствует только в геноме микобактерий туберкулезного комплекса, а также M. leprae, но не микобактерий окружающей среды, в том числе M. avium. МТС28 обнаруживают в фильтрате культуры M. tuberculosis на ранних стадиях развития инфекции. Он, как и многие внеклеточные белки M. tuberculosis, вызывает иммунный ответ у морских свинок, иммунизированных живыми, а не убитыми микобактериями.

МТС28 имеет сигнальный пептид из 32 аминокислотных остатков на N-конце полипептида и секретируется во внеклеточное пространство в гликозилированной форме [198]. В работе X. Wu чувствительность серодиагностического теста, детектирующего анти-МТС28 антитела в сыворотках больных туберкулезом Китая, составила 19% [337]. В работе A. Kulshrestha, выполненной в Индии, антиМТС28 антитела выявляли только у 14,6% больных легочным и 13% внелегочным туберкулезом [163].

Белок Rv0222 (ECHA1), кодируемый RD4 регионом M. tuberculosis, является одним из многообещающих антигенов для серодиагностики туберкулеза.

В работе I. Rosenkrandsa при изучении серодиагностического потенциала 47 «RD белков» M. tuberculosis, лучшим был признан именно Rv0222. Он выявил 82% больных туберкулезом среди доноров из Дании. В этом же исследовании, но с сыворотками больных туберкулезом высокоэндемичного региона, Уганды, чувствительность анализа с Rv0222, при сравнении с неэндемичным контролем (образцами от здоровых БЦЖ-вакцинированных доноров Дании), была 94%, а с эндемичным контролем (образцами от больных нетуберкулезными заболеваниями легких Гамбии) – только 36%. Значения чувствительности анализов, полученные при тестировании слитого белка ESAT-6-CFP-10 и 38кДа белка с теми же сыворотками, были значительно ниже (75% и 26%, и 27% и 0%, соответственно).

Кроме того, чувствительность ИФА с Rv0222 была выше в группе ВИЧ – инфицированных (43%), чем в группе не инфицированных ВИЧ жителей Уганды (30%) [250].

Rv0934 (38 кДа белок, PstS1) является одним из наиболее иммуногенных антигенов Это периплазматический фосфатсвязывающий M. tuberculosis.

липопротеин, принимающий участие в активном транспорте неорганического фосфата через плазматическую мембрану микобактерий. Он синтезируется микобактериями в гликозилированной форме. В работе C. Espitia удаление углеводных остатков у данного гликопротеина привело к утрате его антигенности, что было, вероятно, связано с изменением конформации и потерей эпитопа ТВ72 [91].

38 кДа белок широко применяется в исследованиях гуморального иммунитета при туберкулезе и составляет основу большинства коммерческих серодиагностических тестов [243, 263, 267]. Антительный ответ на 38 кДа белок ассоциирован с активным прогрессирующим туберкулезным процессом [258, 261, 274]. Специфичность тестов, основанных на Rv0934, как правило, высокая - от 88 до 100%, чувствительность, напротив, варьирует в широких пределах для различных групп пациентов.

Так, для «мазок – положительных» туберкулезных больных она составляет 36 - 89%, для «мазок - отрицательных» – 16 - 54%, а для пациентов с внелегочным туберкулезом – 12 - 56%. Антительный ответ к 38 кДа белку детектируют и у детей и ВИЧ-инфицированных больных туберкулезом (чувствительность 37 - 77,4% и 38 - 73%, соответственно) [67, 145, 191, 309]. Как отмечают многие исследователи, 38 кДа белок наиболее эффективен для серодиагностики в сочетании с другими иммунодоминантными белками [337].

Так в работе M. Amicosante и соавторов при комбинации 38 кДа антигена с 34 кДа белком, чувствительность теста составила 86%, а специфичность около 100% даже в сравнении с больными нетуберкулезными заболеваниями легких контрольной группы [40, 67]. Также удачными оказались сочетания 38 кДа белка с 16 кДа белком, МРТ51, Ag85B, Rv3425, ЛАМ [241, 267, 349].

Rv1636 (ТВ15.3) и Rv2185c (ТВ16.3) относят к группе консервативных гипотетических белков M. tuberculosis. Эти белки определяются только в мембранной фракции и цельноклеточном лизате штамма H37Rv. Тем не менее, Y. Y. Bahk выделил Rv1636 из фильтрата культуры вирулентного К-штамма M. tuberculosis (семейство Beijing), но не штаммов H37Rv и CDC1551. Таким образом, вариабельность штаммов в локализации Rv1636 может повлиять на различия в доступности белка для иммунной системы и, следовательно, выраженности гуморального ответа организма на него [47, 200].

ТВ15.3 и ТВ16.3 применяются в качестве серомаркеров туберкулеза как в эндемичных, так и неэндемичных по данному заболеванию регионах [325]. В работе L. Zhang из 21 антигена M. tuberculosis, исследованного в ИФА с сыворотками больных туберкулезом Китая, белок TB16.3 оказался лучшим серомаркером туберкулеза (чувствительность - 45,6%, специфичность – 100%) Чувствительность анализов с белком составила 31,1%, [345]. TB15.3 специфичность – 96,7%. Схожие результаты были получены для белков TB16.3 и TB15.3 другим автором, K. Weldingh, с сыворотками больных туберкулезом неэндемичного региона (Дании): чувствительность - 55% и 31%, специфичность – 100% и 97%, соответственно. Более того, свыше 30% тестируемых сывороток больных туберкулезом Дании распознавались четырьмя (TB16.3, TB15.3, TB9.7, TB51) из 35 исследованных антигенов M. tuberculosis. Среди пациентов из эндемичного по туберкулезу региона (юго-восточная часть Африки) теми же четырьмя антигенами выявлялись сыворотки 65% больных туберкулезом.

Наиболее распознаваемым антигеном в ИФА в обоих случаях также был белок TB16.3. В анализах с TB16.3 выявлено 93%, а TB15.3 – 69% больных. Также с помощью данных антигенов в ИФА было определено более 41% случаев внелегочного и «мазок-негативного» легочного туберкулеза [325].

Rv1837c (МТВ81, GlcB, 8188кДа белок) - 81кДа малат-синтетаза, участвующая в глиоксилатном цикле, обеспечивающем выживаемость M. tuberculosis в неблагоприятных условиях в организме хозяина. GlcB стимулирует выраженный гуморальный иммунный ответ при туберкулезе [169, 258, 259]. K. M. Samanich показано, что анти-МТВ81 антитела обнаруживаются на ранних стадиях заболевания еще до появления анти-38кДа антител и сохраняются при прогрессирующем течении туберкулеза с кавитарными поражениями тканей, даже когда анти-38кДа антитела уже не определяются [258].

GlcB является серомаркером туберкулеза и у ВИЧ - инфицированных пациентов. При использовании его в серодиагностике туберкулеза у жителей Уганды и Южной Африки, чувствительность ИФА для ВИЧ+ТВ+ оказалась выше (92%), чем для ВИЧ-ТВ+ пациентов (56%) [133]. K. K. Singh и соавторы методом ИФА детектировали анти - GlcB антитела у 70% ВИЧ-ТВ+ и 79% ВИЧ+ТВ+ пациентов. Этим же исследователям удалось выявить антитела против GlcB и MPT-51 в сыворотках, полученных от ВИЧ - инфицированных пациентов, еще до клинического проявления туберкулеза (чувствительность составила 81% и 86%, соответственно). Эти антигены, по мнению авторов, могут быть использованы как маркеры латентной туберкулезной инфекции у ВИЧ - инфицированных [27, 278].

В работе X. Wu МТВ81 выявил в ИФА, согласно расчетам по cutoff, только 26,7% из 210 ВИЧ-ТБ+ больных, ложноположительный результат был получен только для 1% из 192 здоровых БЦЖ-вакцинированных доноров. По результатам ROC анализа эти цифры составили 62,4% и 11,5%, соответственно [337].

45/47 кДа) – секретируемый белок Rv1860 (MPT32, Apa, DPEP, M. tuberculosis, а также M. leprae. Он является фибронектин - связывающим белком и, вероятно, способствует инвазии микобактерий в эпителиальные и шванновские клетки [128]. Существуют данные о том, что МРТ32 секретируется M. tuberculosis уже на ранних этапах развития заболевания, в том числе в период внеклеточной репликации микроорганизма до инфицирования им макрофага. В нативном МРТ32 -1,2-О-маннозилированы как N- так и С-концы полипептидной цепи, и именно углеводные мотивы МРТ32 обеспечивают повышенную иммуногенность данного гликопротеина. было показано, что M. Lara дегликозилирование МРТ32 приводит к потере белком способности к связыванию специфических антител [53, 88, 176, 258].

МРТ32 распознается сыворотками больных туберкулезом как с ранними некавитарными, так и уже с кавитарными поражениями легких, а, следовательно, имеет высокий потенциал для использования его в серодиагностике туберкулеза.

В работе K. M. Samanich применение нативного МРТ32 в ИФА обеспечило выявление 69% ВИЧ-ТБ+, и 19% ВИЧ+ТБ+ пациентов, специфичность составила 98% [259]. В исследовании X. Wu чувствительность серодиагностики с МРТ32 для ВИЧ-ТБ+ была лишь 13,3%, специфичность - 98%. При исследовании гуморального иммунитета при туберкулезе в работе K. K. Singh анти-МРТ32 антитела были обнаружены в сыворотке крови больных в 68% случаев, в моче - в 64% и при комбинировании результатов анализов - в 77% [279, 337].

Rv1886c (Ag85B, МРТ59, 30кДа белок) относится к группе антигенов комплекса Ag85 (Ag85A (MPT44, Rv3804c), Ag85B, Ag85C (MPT45, Rv0129с) и Ag85D (MPT-51, Rv3803c)), которые составляют до 30% секретируемых белков M. tuberculosis. Они принадлежат к семейству некаталитических - гидролаз, способных связывать фибронектин. Представители этого семейства обладают миколилтрансферазной активностью, необходимой для биогенеза димиколат трегалозы (корд-фактора), доминантной структуры, ответственной за поддержание целостности клеточной стенки микобактерий и выживаемости патогена внутри макрофага [328]. Белки Ag85А и Ag85B стимулируют клеточный иммунный ответ в организме и активируют механизмы противотуберкулезной защиты. Они входят в состав некоторых противотуберкулезных вакцин (HyVac1 (Ag85B и ESAT-6), HyVac4 (Ag85B и TB10.4), MVA85A (Ag85A) и другие), которые после успешного проведения клинических испытаний могут быть использованы на практике [150,175, 282].

По мнению многих авторов, Ag85B является одним из наиболее серореактивных белков M. tuberculosis [173, 194, 261]. Чувствительность тест систем, основанных на Ag85B, колеблется от 41% до 94%. В исследовании, проведенном в Индии, Ag85B, полученный из фильтрата культуры M. tuberculosis, был использован при определении антител разных классов у больных легочным туберкулезом. Чувствительность теста составила 76,4%, 14,8% и 14,3%, а специфичность 99%, 96,7% и 92% для IgG, IgA и IgM, соответственно.

Комбинация результатов ИФА по определению анти-Ag85B антител классов А и G позволила повысить чувствительность теста до 71% [184]. Ag85B эффективный серомаркер туберкулеза у ВИЧ - инфицированных. В Уганде с помощью Ag85B было выявлено 92% ВИЧ+ТБ+ больных, а в ЮАР – 72% [133].

Серологические тесты, созданные на основе Ag85B, как правило, не обладают высокой специфичностью. Это связано с перекрестной реактивностью антигенов комплекса Ag85 с антигенами других микобактерий. Решением этой проблемы может быть использование в серодиагностике не всего белка, а только его эпитопов. Так, при использовании лишь одного иммунодоминантного пептида A25 с сыворотками больных туберкулезом, удалось достичь чувствительности теста равную чувствительности в анализе с целым белком Ag85B (около 60%), а также высокую специфичность (97%).

А использование всего 6 иммунодоминантных пептидов Ag85B оказалось достаточным для выявления туберкулеза у 82% больных Индии. В работе G. Kumar белки Ag85A, Ag85B и Ag85C показали в ИФА чувствительность 44,6%, 34% и 80,9%, и специфичность 55,6%, 74,1% и 40,7% соответственно. Чувствительность тестов ИФА на основе Ag85D достигает 71%, а специфичность около 95% [165].

Ген белка Rv1980c (MPT64) относится к RD2 региону M. tuberculosis, который присутствует в геноме M. bovis BCG Russia, но отсутствует в геномах многих других субштаммов и большинства M. bovis BCG, M. leprae нетуберкулезных микобактерий. В исследовании M. Kalra, выполненном в Индии, при оценке серодиагностического потенциала белка МРТ64 в комбинации с тремя другими «RD белками» (ESAT-6, CFP-10, CFP-21), общая чувствительность теста составила 52%, еще 38% больных удалось выявить при применении дополнительного метода детекции данных антигенов в составе ЦИК. В работе M.

C. Kaisermann анти-МРТ64 антитела класса A были обнаружены в плевральном выпоте 72% больных туберкулезным плевритом Бразилии, специфичность теста составила 96% [147, 149].

Rv2031с (16 кДа антиген) является цитозольным регуляторным белком (фактором вирулентности), специфичным для микобактерий туберкулезного комплекса. Его кодирующая последовательность идентична генам белка теплового шока млекопитающих Hsp16.3 (Acr) и - кристаллина (белку, участвующему в поддержании прозрачности хрусталика глаза). Этот антиген не детектируется в экспоненциальную фазу роста M. tuberculosis, но синтезируется в избытке в стационарную фазу и при неблагоприятных условиях, таких как гипоксия, недостаток питательных веществ, низкий рН, накопление токсичных продуктов. Было показано, что микобактерии, лишенные гена rv2031с, не могут расти в макрофагах. Rv2031c относится к группе белков, кодирующихся DosR регулоном. Экспрессия данной группы белков ассоциирована с латентной инфекцией [251].

У больных туберкулезом в крови обнаруживается повышенный титр антител против 16 кДа белка. A. Raja и соавторы, используя ИФА тесты, детектирующие анти – 16 кДа антитела классов IgG, IgA и IgM в сыворотках мазок - и культуропозитивных больных туберкулезом детей, получили чувствительность тестов 62%, 52% и 11%, специфичность – 100%, 97% и 95%, соответственно, а комбинация всех трех изотипов иммуноглобулинов позволила получить чувствительность 83% и специфичность 93% Другие [241].

исследователи, используя рекомбинантный 16 кДа белок, получили несколько худшие результаты, они выявили IgG у 34%, IgA – у 19% и IgM - у 3% больных [138]. В ретроспективном исследовании M. F. Rabahi повышенный титр IgM против 16 кДа белка определялся в сыворотке пациентов еще за год до виража туберкулиновой пробы. Таким образом, 16 кДа белок является серомаркером латентной туберкулезной инфекции и может выявлять лица, имеющие высокий риск активации заболевания [238]. Тем не менее, в недавней работе A. Kaushik, выполненной в Индии, чувствительность ИФА детекции IgG и IgA против 16кДа белка в группе пациентов с легочным туберкулезом была 73,8-81,2% для разных категорий больных, в группе больных с внелегочным туберкулезом- 42,8-63,3%, специфичность составила 94,7% [153].

Rv2376c (МТВ12, CFP2) - низкомолекулярный секретируемый белок, составляющий значительную часть фильтрата культуры M. tuberculosis. Он играет важную роль в провоспалительном ответе на ранних стадиях развития туберкулеза легких у человека, индуцируя секрецию ФНО, ИЛ-6, но не -ИНФ.

Эти данные могут свидетельствовать о важной роли МТВ12 в иммунопатогенезе туберкулеза у человека. В работе G. Zhang для ИФА с МТВ12 была получена чувствительность 24,4%, специфичность - 94,4%. В исследовании J. S. Lee чувствительность ИФА с МТВ12 составила 53% (специфичность 95,4%), а в комбинации с 38 кДа белком 73% (специфичность 95,4%) [179, 343].

Rv2873 (MPТ83/MTB83) и Rv2875 (MPТ70/MTB70) – высокогомологичные белки, относящиеся к генетическому семейству MPT70/MPT83 комплекса M. tuberculosis. Представители указанного комплекса отличаются по уровню экспрессии данных белков, что обусловлено наличием мутаций в положительном (sigK (сигма фактор К)) или отрицательном (rskA) регуляторах транскрипции генов. Для M. tuberculosis характерен низкий базальный уровень активации генов mpt83 и mpt70 и выраженная их индукция при инфицировании макрофага [68, 315].

M. bovis имеет постоянно высокий уровень экспрессии данных белков в связи с мутацией в rskA (антисигма К фактор). В ходе длительных пассажей M. bovis BCG в sigK появилась точечная мутация, приведшая к редуцированной экспрессии некоторыми субштаммами M. bovis BCG белков МРТ83 и МРТ70.

Сохранение высокой экспрессии данных белков в ряде субштаммов M. bovis BCG (Russia, Moreau, Sweden, Tokyo) связывают с риском развития БЦЖ - остита у детей до года как осложнение БЦЖ-вакцинации. Это обусловлено гомологией данных белков с остеобластспецифическим фактором II, или периостином, участвующим в регуляции роста костной ткани [68, 134, 295, 307, 315].

МРТ83, в отличие от МРТ70, имеет типичный липопротеиновый участок и уникальную вставку из 35 аминокислот на N-конце полипептида с сайтом гликозилирования. МРТ83 связан с клеточной стенкой, а МРТ70 - растворимый секретирующийся белок [327, 329].

МРТ83 и МРТ70 показали свою эффективность в качестве серомаркеров бычьего туберкулеза у животных. В работе S. Liu гибридный белок, содержащий МРТ70, МРТ83 и ESAT-6, применявшийся для серодиагностики бычьего туберкулеза, позволил выявить 69,4% больных туберкулезом коров, ложноположительный результат был лишь у 4% здоровых животных. Подобный химерный белок ESAT-6/МРТ70/МРТ83, полученный I. Souza, показал в диагностике бычьего туберкулеза методом ИФА чувствительность - 83,2% и специфичность - 86,5% [186, 288].

После работы R. Colangeli (1999 год), где чувствительность ИФА с Rv2875 у ВИЧ-инфицированных туберкулезных больных составила лишь 10%, на протяжении около десяти лет в литературе практически не встречались данные об определении потенциала Rv2873 и Rv2875 для использования в серодиагностике туберкулеза у людей [71]. Вероятно, это было обусловлено представлением о слабо выраженном гуморальном ответе при туберкулезе на МРТ83 и МРТ70 в связи с низкой экспрессией их M. tuberculosis, обнаруженной в исследовании in vitro. Однако в работе G.C. Ireton за 2010 год было показано, что у 55-74% исследованных больных туберкулезом определялись высокие титры антител против Rv2875, а чувствительность анализа с Rv2873 в работе L. Zhang за 2011 год составила 34,4%. Специфичность анализов в обоих случаях была более 90% [141, 345].

Кодирующая последовательность белка Rv3425 (PPE57) располагается в RD11 регионе генома M.tuberculosis. Этот регион отсутствует в геноме M. bovis и многих субштаммов M. bovis BCG. Белок Rv3425 экспрессируется M. tuberculosis H37Rv во время экспоненциального роста in vitro. J. Wang и соавторы обнаружили, что PPE57 стимулировал как Th1, так и Th2 типы иммунного ответа в моделях мышей, что проявлялось повышением концентрации -ИНФ в спленоцитах, стимулированных этим антигеном, и выраженным IgG1 антительным ответом.

В исследованиях гуморального иммунитета при туберкулезе отмечается иммунодоминантная роль Rv3425. Он распознается сыворотками больных как легочным, так и внелегочным туберкулезом. H. Zhang и соавторами были обнаружены анти - Rv3425 антитела класса IgG у 70% больных легочным и 59,4% внелегочным туберкулезом, специфичность теста составила 100% [344]. В работе S. L. Zhang и соавторов Rv3425 показал чувствительность 45,8%, меньшую, чем ЛАМ (55,9%), однако, большую, чем 38кДа белок (37,3%) с теми же образцами.

Мультиантигенный ИФА тест, включающий три этих антигена, показал чувствительность для выявления легочного туберкулеза 89,8%, а внелегочного Специфичность теста была 93% [349].

Белок Rv3881c (МТВ48) является одним из наиболее иммуногенных белков M. tuberculosis. Его кодирующая последовательность высококонсервативна для геномов M. tuberculosis и M. bovis и отсутствует в геномах M. avium и M. leprae.

Зрелая форма этого белка обнаруживается как в цитоплазме, так и в фильтрате культуры В работе среди 484 M. tuberculosis. S. Kunnath-Velayudhan протестированных в ИФА белков M. tuberculosis МТВ48 оказался лучшим серомаркером туберкулеза с сыворотками больных туберкулезом из разных регионов. В исследовании, проведенном в Китае, чувствительность теста ИФА с МТВ48 составила 74,4%, а в Уганде, Бразилии и Филиппинах только 47%, 33% и соответственно В работе при исследовании 32%, [166]. X. Wu серодиагностического потенциала 17 антигенов M. tuberculosis, только 26,7% сывороток больных туберкулезом было выявлено ИФА с помощью данного антигена, однако, почти для половины из них (46,4%) были получены высокие значения OD490, превышающие среднее OD490 контрольной группы плюс шесть стандартных отклонений [337].

Белок МТВ48 также применялся для серодиагностики в составе различных антигенных коктейлей. Одним из наиболее перспективных из них в настоящее время, согласно данным литературы, можно считать химерный белок TbF6, включающий МТВ8, 38 кДа белок, CFP-10 и МТВ48. Использование TbF6, совместно с МРТ32, в ИФА с сыворотками больных туберкулезом из разных стран позволило достичь чувствительности серодиагностики более 85,7% [292].

Антиген А60 – это термостабильный полуочищенный липополисахаридноДа), белковый комплекс экстрагированный из M. bovis BCG и содержащий около 30 компонентов. Он неспецифичен для микобактерий, так как продуцируется коринебактериями и нокардиями [67, 314]. Этот антиген, преимущественно в нативной форме, является основой нескольких коммерческих серодиагностических тест-систем.

В исследовании K. T. Luh при использовании его в ИФА он позволил выявить 76,2% пациентов с активным туберкулезом легких и 59% пациентов с внелегочным туберкулезом [190]. Измерение анти-А60 IgM более достоверно для пациентов с первичным активным туберкулезом, а IgG - для больных со вторичным активным туберкулезом. Чувствительность детекции IgG и IgM против А60 у детей из Индии в работе S. Gupta была аналогична чувствительности диагностики у взрослых. При определении анти-А60 IgA и IgM антител в указанной работе общие чувствительность и специфичность теста составили 76% и 92%, соответственно [82, 123]. В исследовании, проведенном в Иране, показатели чувствительности серодиагностики с сыворотками детей данного региона при определении анти-А60 IgA, IgG и IgM составили 29,4%, 37,3% и 70,6%, специфичности – 97,5%, 95% и 62,5%, соответственно [156].

1. 4. 4. Липидные и углеводные антигены M. tuberculosis

Оболочка микобактерий содержит значительные количества разнообразных липидных молекул, многие из которых ассоциированы с их вирулентностью и патогенностью. Наиболее иммуногенными среди липидов M. tuberculosis являются липогликаны (ЛАМ), сульфатиды (SLI, SLII), производные - эфиры трегалозы (корд-фактор, PGL-Tb1).

Титр IgG антител против липидных антигенов M. tuberculosis существенно возрастает в активную фазу туберкулезной инфекции и быстро снижается во время проведения противотуберкулезной терапии.

Гуморальный ответ на липидные антигены M. tuberculosis так же, как и на белковые антигены, является гетерогенным [102].

Серологические тесты, основанные на липидных антигенах M. tuberculosis, обладают высокой эффективностью выявления туберкулеза, так как они более стабильны, воспроизводимы, и, как правило, имеют низкий уровень перекрестной реактивности, по сравнению с серотестами, включающими только белки M. tuberculosis.

В работе J. He, антитела IgG к корд-фактору (трегалоза-6,6-димиколат) были детектированы методом ИФА у 81% мазок - позитивных больных туберкулезом и только у 4% здоровых доноров, чувствительность данного теста для мазок - негативных туберкулезных больных составила 70% [131, 195].

Другим автором были выявлены антитела к 6 производным трегалозы у 91,5% из 924 госпитализированных и у 93,3% из 210 вновь выявленных туберкулезных больных [102]. Чувствительность серологических тестов с ДАТ колеблется от 11% до 88%, а с TAT - от 51% до 93% [31].

В одном из исследований при сравнении в ИФА серодиагностической эффективности четырех липидных антигенов M. tuberculosis (корд-фактора, ДАТ, TAT и SL I), наилучшие показатели чувствительности (81% при детекции IgG, 66% - IgА) и специфичности (77,6% - IgG и 87% - IgА) были получены для SL I [146].

В работе J. M. Bezerra PGL-Tb1 оказался лучшим серомаркером туберкулеза, по сравнению со слитым белком TbF6/DPEP и белковым препаратом из сониката (ультразвукового дезинтеграта) культуры M. tuberculosis. Анти PGL-Tb1 антитела класса А были выявлены у 88% больных (независимо от результатов бактериоскопии мазка мокроты) и ни у одного здорового пациента из контрольной группы, при этом в ходе лечения титры данных антител снижались [54].

Многие данные свидетельствуют о высокой эффективности серологических тестов, основанных на гликолипидных антигенах M. tuberculosis, при выявлении туберкулеза у ВИЧ-инфицированных.

В работе N. Simonney при исследовании диагностического потенциала PGLTb1 методом ИФА, чувствительность теста с сыворотками ВИЧ-положительных (76,8%) оказалась выше, чем с сыворотками ВИЧ-отрицательных (58,9%) туберкулезных больных, специфичность составила около 94%. Для ВИЧ положительных туберкулезных больных при всех формах туберкулеза чувствительность ИФА была идентична, и уровень антител к гликолипиду не коррелировал с уровнем CD4+ клеток, результатами теста Манту, возрастом или обнаружением бактерий в мазке.

Эффективным серомаркером туберкулеза у ВИЧ-инфицированных также является липидный антиген ДАТ [275].

–  –  –

Липоарабиноманнан (ЛАМ) является одним из основных структурных компонентов оболочки M. tuberculosis. Это фактор вирулентности M. tuberculosis, который обеспечивает выживаемость микобактерий в макрофагах и оказывает иммуносупрессивный эффект на Т-клеточное звено противотуберкулезного иммунитета. Наличие последних эффектов ЛАМ связывают с его формой ManLAM, включающей маннозные фрагменты (кэпы) на терминальных участках боковых ветвей арабинанового домена [61]. Однако в недавнем исследовании было показано, что маннозные кэпы в ЛАМ не влияют ни на вирулентность M. tuberculosis in vivo, ни на взаимодействие патогена с макрофагами in vitro [35].

Существует предположение, что маннозные кэпы в ManLAM маскируют терминальные арабинофуранозидные фрагменты (Araf) от иммунной системы хозяина, в частности, от взаимодействия с антителами [152].

Арабинановый домен ЛАМ содержит -(15)-связанный арабинофуранозиловый остов с терминальными разветвленным гексаарабинофуранозидом (Araf6) и линейным тетраарабинофуранозидом (Araf4) [61].

Арабинаны признаются главными В-клеточными иммуногенами ЛАМ и арабиногалактана (АГ). Показано, что они утрачивают антигенность при обработке арабиназами Терминальные нередуцированные мотивы [208].

арабинановой цепи (Araf) ЛАМ являются основными эпитопами для связывания антител.

В работе D. Kaur моноклональные анти-ЛАМ антитела CS-35 реагировали в ИФА с AraLAM, ManLAM и АГ, но не связывались ни с липоманнаном, ни с АГ, полученным из мутантных штаммов, дефектных по синтезу арабинана или только Araf6 фрагментов. В данном исследовании при тестировании эффективности связывания в ИФА различных синтетических олиго -Araf с CS-35, «лучшим»

эпитопом для анти-ЛАМ антител был признан метил гликозид Araf6 разветвленной структуры [152].

Araf6 имеет перспективы для использования его в диагностике или в качестве компонента гликопротеиновых вакцин против туберкулеза [125, 148, 152, 304].

Определение анти-ЛАМ антител достаточно часто используется в серодиагностике туберкулеза. Чувствительность тестов на основе ЛАМ варьирует от 21,5% до 89% среди ВИЧ-ТВ+ и от 7 до 40% среди ВИЧ+ТВ+ [67]. В работе S.L.

Zhang анти-ЛАМ антитела были выявлены методом ИФА у 55,9% «мазокпозитивных», 19,4% «мазок-негативных» больных легочным туберкулезом и у 20% больных внелегочным туберкулезом, тогда как для 38 кДа белка эти значения составляли 37,3%, 9,7% и 0%, соответственно [349].

ЛАМ является основой многих коммерческих серодиагностических тестсистем. При исследовании гуморального ответа у ВИЧ-отрицательных больных туберкулезом Танзании, Ганы и Таиланда с помощью теста MycoDot (Mossman Associates, США) анти-ЛАМ IgG антитела были обнаружены в 33%, 56%, и 63% случаев туберкулеза, соответственно.

ИФА тест Pathozyme-Myco G (Omega Diagnostics Ltd, Alloa, Scotland), детектирующий антитела к двум антигенам M. tuberculosis, ЛАМ и 38кДа белку, показывает чувствительность до 71% при специфичности 100% [178, 246, 263, 285].

В связи с тем, что ЛАМ активно экскретируется с мочой (от 0,5 до нескольких сотен нанограмм на 1 мл мочи), разработано несколько уринарных тестов, детектирующих ЛАМ (Alere Determine TB LAM Ag, Alere, США). В исследовании P. Daley чувствительность подобного теста оказалась низкой (20%), однако, одинаковой как у ВИЧ+ТВ+, так и ВИЧ-ТВ+ пациентов, т.е. ВИЧ статус не влиял на секрецию ЛАМ у туберкулезных больных [79].

В работе R. Wood ЛАМ определялся в моче у 16,1% пациентов до третьей недели химиотерапии [333]. В исследованиях, проведенных в Танзании, была обнаружена прямая корреляция между уровнем выделения почками ЛАМ и бактериовыделением [285].

1. 4. 5. Конъюгаты белков M. tuberculosis с углеводными фрагментами ЛАМ Одним из способов усовершенствования серодиагностических тестов, выявляющих туберкулез, является создание полиэпитопных химерных антигенов путем химической конъюгации белков с углеводными молекулами.

Иммуногенность ЛАМ обеспечивается, главным образом, его арабинановым компонентом [208].

В исследовании B. Hamasur олигосахаридные фрагменты арабиноманнана, выделенные из ЛАМ штамма были ковалентно M. tuberculosis H37Rv, конъюгированы с белками фильтрата культуры M. tuberculosis штамма Harlingen (Ag85B и 75кДа), а также с тетанус токсином (в качестве контроля для углеводного компонента конъюгатов). Лабораторные животные (мыши, кролики, морские свинки) были иммунизированы данными конъюгатами, а затем инфицированы M. tuberculosis. Все конъюгаты индуцировали высокие титры IgG антител против углеводного компонента ЛАМ, а также обеспечивали протективный эффект против M. tuberculosis (дозозависимое уменьшение бактериальной нагрузки в селезенке и легких, потери веса и увеличение продолжительности жизни), по сравнению с неиммунизированными животными, что тоже могло быть обусловлено действием специфических антител [126].

Основными эпитопами для связывания анти-ЛАМ антител являются терминальные гексаарабинофуранозидные фрагменты (Araf6) ветвей арабинановой цепи ЛАМ [69]. В работе D. Kaur было показано, что химически синтезированные олигоарабинофуранозиды, в частности, Araf6 разветвленной структуры (2(-D-Araf-(12)--D-Araf)-(13 и 5)--D-Araf-(15)--D-Araf-OCH3), эффективно связываются в ИФА с моноклональными анти-ЛАМ антителами [152].

–  –  –

Антительный ответ во время туберкулезной инфекции направлен против многих микобактериальных антигенов [191]. Однако в зависимости от стадии и формы туберкулеза, а также иммуногенетических особенностей организма набор антигенов на которые формируется антительный ответ, M. tuberculosis, различается у каждого пациента. Вследствие этого, как отмечают многие авторы, серодиагностический тест, основанный на одном антигене, не может быть высокочувствительным [108, 191].

Одним из путей повышения эффективности серодиагностики туберкулеза является создание композиции (коктейля) из нескольких иммунодоминантных антигенов M. tuberculosis. При включении в него антигенов M. tuberculosis только с высокой специфичностью можно достичь увеличения чувствительности диагностики при минимальном числе ложноположительных результатов.

Применение в ИФА мультиантигенного коктейля имеет ряд преимуществ, по сравнению с анализом с одним антигеном.

Во-первых, при использовании в ИФА антигенного коктейля уменьшается влияние неспецифического связывания на результаты измерений, а, следовательно, предотвращается возможное снижение диагностической точности исследования, обусловленное измерением в анализе фонового излучения.

Во-вторых, высокого уровня сывороточной реактивности к одному из антигенов достаточно для получения положительного результата в ИФА для всего коктейля.

В-третьих, низкий уровень сывороточной реактивности в ИФА на один антиген на фоне общего реагирования сыворотки на несколько антигенов в коктейле становится неявным, при этом специфичность диагностики повышается.

Однако, по мнению M. L Gennaro, в зависимости от числа антигенов в составе коктейля и общего количества белка, вносимого в лунку планшета, в ИФА может наблюдаться снижение общей расчетной чувствительности [108].



Pages:     | 1 | 2 || 4 | 5 |   ...   | 8 |

Похожие работы:

«БРИТАНОВ Николай Григорьевич ГИГИЕНИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ ПЕРЕПРОФИЛИРОВАНИЯ ИЛИ ЛИКВИДАЦИИ ОБЪЕКТОВ ПО ХРАНЕНИЮ И УНИЧТОЖЕНИЮ ХИМИЧЕСКОГО ОРУЖИЯ 14.02.01 Гигиена Диссертация на соискание ученой степени доктора медицинских наук Научный консультант: доктор медицинских наук, профессор...»

«Радугина Елена Александровна РЕГУЛЯЦИЯ МОРФОГЕНЕЗА РЕГЕНЕРИРУЮЩЕГО ХВОСТА ТРИТОНА В НОРМЕ И В УСЛОВИЯХ ИЗМЕНЕННОЙ ГРАВИТАЦИОННОЙ НАГРУЗКИ 03.03.05 – биология развития, эмбриология Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: Доктор биологических наук Э.Н. Григорян Москва – 2015 Оглавление Введение Обзор литературы 1 Регенерация...»

«Палаткин Илья Владимирович Подготовка студентов вуза к здоровьесберегающей деятельности 13.00.01 общая педагогика, история педагогики и образования Диссертация на соискание ученой степени кандидата педагогических наук Научные руководители: доктор биологических наук, профессор,...»

«Иртегова Елена Юрьевна РОЛЬ ДИСФУНКЦИИ СОСУДИСТОГО ЭНДОТЕЛИЯ И РЕГИОНАРНОГО ГЛАЗНОГО КРОВОТОКА В РАЗВИТИИ ГЛАУКОМНОЙ ОПТИЧЕСКОЙ НЕЙРОПАТИИ 14.01.07 – глазные болезни ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Научный руководитель: доктор медицинских наук, профессор...»

«ГУЛЬ ШАХ ШАХ МАХМУД БИОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ ЦИТРУСОВОЙ МИНУРУЮЩЕЙ МОЛИ (Phyllocnistis citrella Stainton) В УСЛОВИЯХ ЮГО-ВОСТОЧНОГО АФГАНИСТАНА Специальность 06.01.07 – Защита растений ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени кандидата сельскохозяйственных наук НАУЧНЫЙ РУКОВОДИТЕЛЬ: доктор с.-х. наук, профессор КАХАРОВ К.Х. Душанбе, 2015 СОДЕРЖАНИЕ ВВЕДЕНИЕ..4 ГЛАВА I. СОВРЕМЕННОЕ СОСТОЯНИЕ ПРОБЛЕМЫ...»

«ЗАУЗОЛКОВА Наталья Андреевна АГАРИКОИДНЫЕ И ГАСТЕРОИДНЫЕ БАЗИДИОМИЦЕТЫ ЛЕСОСТЕПНЫХ СООБЩЕСТВ МИНУСИНСКИХ КОТЛОВИН 03.02.01 – «Ботаника» ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель – кандидат биологических наук, И. А. Горбунова Абакан – 2015 СОДЕРЖАНИЕ ВВЕДЕНИЕ... ГЛАВА 1....»

«ШИТОВ АЛЕКСАНДР ВИКТОРОВИЧ ВЛИЯНИЕ СЕЙСМИЧНОСТИ (НА ПРИМЕРЕ ЧУЙСКОГО ЗЕМЛЕТРЯСЕНИЯ И ЕГО АФТЕРШОКОВ) И СОПУТСТВУЮЩИХ ГЕОЛОГИЧЕСКИХ ПРОЦЕССОВ НА АБИОТИЧЕСКИЕ КОМПОНЕНТЫ ЭКОСИСТЕМ И ЗДОРОВЬЕ ЧЕЛОВЕКА 25.00.36 – Геоэкология (науки о Земле) Диссертация на соискание ученой степени доктора геолого-минералогических наук Горно-Алтайск...»

«ХАПУГИН Анатолий Александрович РОД ROSA L. В БАССЕЙНЕ РЕКИ МОКША 03.02.01 – ботаника Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель Силаева Татьяна Борисовна д.б.н., профессор САРАНСК ОГЛАВЛЕНИЕ ВВЕДЕНИЕ Глава 1. ИСТОРИЯ ИЗУЧЕНИЯ РОДА ROSA L. В БАССЕЙНЕ МОКШИ. Глава 2. КРАТКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РОДА ROSA L. 2.1. Характеристика рода Rosa L. 2.2. Систематика рода Rosa L. Глава 3....»

«АУЖАНОВА АСАРГУЛЬ ДЮСЕМБАЕВНА ОЦЕНКА ДЕЙСТВИЯ АБИОТИЧЕСКИХ ФАКТОРОВ И БИОПРЕПАРАТА РИЗОАГРИН НА МИКРОБИОЛОГИЧЕСКУЮ АКТИВНОСТЬ ПОЧВЫ, АДАПТИВНОСТЬ И ПРОДУКТИВНОСТЬ ЯРОВОЙ МЯГКОЙ ПШЕНИЦЫ 03.02.08 – Экология Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: доктор...»

«Тюрин Владимир Анатольевич МАРАЛ (CERVUS ELAPHUS SIBIRICUS SEVERTZOV, 1873) В ВОСТОЧНОМ САЯНЕ (РАСПРОСТРАНЕНИЕ, ЭКОЛОГИЯ, ОПТИМИЗАЦИЯ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ) Специальность 03.02.08 – Экология (биологические науки) Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: Д-р биол. наук, профессор М.Н. Смирнов Красноярск 201 Содержание Введение.. 4 Глава 1. Изученность экологии марала.. Биология марала.. 9...»

«Вафула Арнольд Мамати РАЗРАБОТКА ЭЛЕМЕНТОВ ТЕХНОЛОГИИ ВЫРАЩИВАНИЯ ПАПАЙИ ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ ЗДОРОВОГО ПОСАДОЧНОГО МАТЕРИАЛА И ЭКСТРАКТОВ С БИОПЕСТИЦИДНЫМИ СВОЙСТВАМИ ДЛЯ ЗАЩИТЫ ЕЕ ОТ ВРЕДНЫХ ОРГАНИЗМОВ Специальности: 06.01.07 – защита растений 06.01.01 – общее земледелие и растениеводство Диссертация на соискание ученой степени кандидата сельскохозяйственных...»

«СЕРГЕЕВА ЛЮДМИЛА ВАСИЛЬЕВНА ПРИМЕНЕНИЕ БАКТЕРИАЛЬНЫХ ЗАКВАСОК ДЛЯ ОПТИМИЗАЦИИ ФУНКЦИОНАЛЬНО-ТЕХНОЛОГИЧЕСКИХ СВОЙСТВ МЯСНОГО СЫРЬЯ И УЛУЧШЕНИЯ КАЧЕСТВА ПОЛУЧАЕМОЙ ПРОДУКЦИИ Специальность 03.01.06 – биотехнология ( в том числе бионанотехнологии) Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель Доктор биологических наук, профессор Кадималиев Д.А. САРАНСК 2014 ОГЛАВЛЕНИЕ ВВЕДЕНИЕ.....»

«УШАКОВА ЯНА ВЛАДИМИРОВНА ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ТЕХНОЛОГИЙ ДНК-МАРКИРОВАНИЯ В СЕЛЕКЦИОННО-ГЕНЕТИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЯХ ЯБЛОНИ Специальность 06.01.05. – селекция и семеноводство сельскохозяйственных растений ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: кандидат биологических...»

«Усов Николай Викторович Сезонная и многолетняя динамика обилия зоопланктона в прибрежной зоне Кандалакшского залива Белого моря в связи с изменениями температуры воды 25.00.28 – океанология Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Руководители: доктор биологических наук, главный научный сотрудник А.Д. Наумов доктор биологических наук, ведущий...»

«Алексеев Иван Викторович РАЗВИТИЕ КОМПЛЕКСНОГО ИНЖЕНЕРНО-ГЕОЛОГИЧЕСКОГО И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОГО МОНИТОРИНГА НА ЯКОВЛЕВСКОМ РУДНИКЕ ДЛЯ ПОВЫШЕНИЯ БЕЗОПАСНОСТИ ВЕДЕНИЯ ОЧИСТНЫХ РАБОТ ПОД НЕОСУШЕННЫМИ ВОДОНОСНЫМИ ГОРИЗОНТАМИ Специальность 25.00.08 – Инженерная геология,...»

«Кузнецов Василий Андреевич ПОЧВЫ И РАСТИТЕЛЬНОСТЬ ПАРКОВО-РЕКРЕАЦИОННЫХ ЛАНДШАФТОВ МОСКВЫ Специальность 03.02.13-почвоведение ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: доктор биологических наук, профессор, И.М. Рыжова Москва-2015 Содержание Введение Глава 1. Влияние рекреации на лесные экосистемы (Литературный обзор) 1.1.Состояние проблемы 1.2....»

«Фирстова Виктория Валерьевна ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНО-ИММУНОЛОГИЧЕСКОЕ ОБОСНОВАНИЕ ВЫБОРА СТРАТЕГИИ ОЦЕНКИ ПОСТВАКЦИНАЛЬНОГО ИММУНИТЕТА ПРОТИВ ЧУМЫ И ТУЛЯРЕМИИ 14.03.09 – Клиническая иммунология, аллергология Диссертация на соискание ученой степени доктора биологических...»

«Баранов Михаил Евгеньевич Экологический эффект биогенных наночастиц ферригидрита при ремедиации нефтезагрязненных почвенных субстратов Специальность (03.02.08) – Экология (биология) Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: кандидат...»

«ПОРЫВАЕВА Антонина Павловна ТЕОРЕТИЧЕСКИЕ И ПРАКТИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ МОДЕЛИРОВАНИЯ ХРОНИЧЕСКОЙ ГЕРПЕСВИРУСНОЙ ИНФЕКЦИИ 03.02.02 Вирусология ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени доктора биологических наук Научный консультант: доктор медицинских наук, профессор Глинских Нина Поликарповна Екатеринбург 2015 ОГЛАВЛЕНИЕ 1 ВВЕДЕНИЕ 2 ОСНОВНАЯ ЧАСТЬ 2.1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ...»

«САФИНА ЛЕЙСЭН ФАРИТОВНА Анафилактический шок на ужаления перепончатокрылыми насекомыми (частота встречаемости, иммунодиагностика, прогнозирование) 14.03.09 – клиническая иммунология, аллергология Диссертация на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Научный...»







 
2016 www.konf.x-pdf.ru - «Бесплатная электронная библиотека - Авторефераты, диссертации, конференции»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.