WWW.KONF.X-PDF.RU
БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА - Авторефераты, диссертации, конференции
 


Pages:   || 2 | 3 | 4 | 5 |

«Ангиогенные факторы в коже человека в возрастном аспекте ...»

-- [ Страница 1 ] --

Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение

высшего профессионального образования «Чувашский государственный

университет имени И.Н. Ульянова»

На правах рукописи

Васильева Ольга Валерьевна

Ангиогенные факторы в коже человека в возрастном аспекте

03.03.04 – клеточная биология, цитология, гистология

Диссертация на соискание ученой степени

кандидата медицинских наук

Научный руководитель:

Доктор медицинских наук

профессор Гунин А.Г.

Чебоксары – 2015

ОГЛАВЛЕНИЕ

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Кожа: строение, функции

1.2. Возрастные изменения организма человека

1.3. Общие сведения о возрастных изменениях кожи

1.4. Общие сведения об ангиогенезе. Ангиогенез в коже человека

1.5. Регуляторы ангиогенеза

1.6. Иммуногистохимические маркеры клеточной пролиферации

1.7. Иммуногистохимические маркеры кровеносных сосудов

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Характеристика исследуемого материала

2.1.

Забор и первичная обработка материала

2.2.

Методы исследования

2.3.

Выявление Dll4

2.4.

Выявление Jag-1

2.5.

Выявление VEGF

2.6.

Выявление ангиомотина

2.7.

Выявление эндостатина

2.8.

Выявление CD31

2.9.

Выявление CTGF

2.10.

Выявление PCNA

2.11.

Выявление фибробластов в дерме

2.12.

Количественная оценка результатов

2.13.

Статистическая обработка результатов

2.14.

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

3.1. Исследование VEGF в дерме в различные возрастные периоды

3.2. Исследование Dll4 в сосудах дермы человека в различные возрастные периоды

3.3. Исследование Jag-1 в дерме человека в различные возрастные периоды....... 68

3.4. Исследование ангиомотина в сосудах дермы в различные возрастные периоды

3.5. Исследование эндостатина в сосудах дермы человека в различные возрастные периоды

3.6. Кровеносные сосуды дермы человека с позитивным окрашиванием на CD31 в различные возрастные периоды

3.7. Фибробласты дермы в различные возрастные периоды

3.8. Исследование CTGF в фибробластах и сосудах дермы человека в различные возрастные периоды

3.9. Исследование PCNA-положительных фибробластов в дерме в различные возрастные периоды

ГЛАВА 4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ

ВЫВОДЫ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

СПИСОК ИЛЛЮСТРАТИВНОГО МАТЕРИАЛА

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность исследований Исследователи на протяжении долгого времени занимаются изучением механизмов старения организма. Было выдвинуто множество теорий, однако ни одна из них в настоящее время не может полноценно объяснить тонкие механизмы, происходящие в организме в процессе старения [63, 163]. Бесспорный интерес в рамках проблемы возрастных изменений организма человека представляет, в частности, старение кожи [137, 178]. Кожа, являясь барьерным органом, непосредственно испытывает на себе воздействие факторов окружающей среды – ультрафиолетового и ионизирующего излучения, воздействия высоких и низких температур, загрязнения внешней среды и т.д.

[149]. Все это приводит к изменению структуры, цвета кожи, потере некоторых свойств, таких как эластичность и растяжимость, появлению морщин [179].

Однако, несмотря на интенсивное развитие дерматокосметологии, возможности современной медицины, преодолеть в полной мере появление возрастных изменений кожи на сегодняшний день невозможно. Для решения этой непростой проблемы необходимо знать механизмы, приводящие к возрастным изменениям.

Тем не менее, как показывает современная ситуация в медицине на сегодняшний день, мы не располагаем достаточными знаниями в этой области.

В процессе физиологического старения кожа подвергается структурным и морфофункциональным изменениям, главным среди которых являются изменения в межклеточном веществе дермы. Установлено, что с возрастом происходит уменьшение количества фибробластов – основных продуцентов внеклеточного матрикса дермы, изменяется их функциональная активность [147, 218]. Однако изменения численности фибробластов и их пролиферативной активности в процессе старения от фетального периода до старости практически не описаны.

Имеющиеся в литературе сведения либо охватывают короткий промежуток времени, либо характеризуют изменения, происходящие в дерме не в естественных условиях, а на модели искусственного старения [12, 81, 192].

Общеизвестно, что функционирование органов и тканей в физиологических и патологических условиях зависит от регулярной доставки к ним кислорода кровеносными сосудами. Образование кровеносных сосудов в эмбриональный период происходит за счет васкулогенеза, который заключается в формировании примитивных сосудистых сплетений, и ангиогенеза, связанного с ремоделированием и созреванием новых сосудов [209]. Затем на протяжении постнатального периода онтогенеза человека также постоянно происходят процессы физиологического, патологического и репаративного ангиогенеза. Одну из главных ролей в процессе формирования новых сосудов играют регуляторы ангиогенеза, в частности сосудистый эндотелиальный фактор роста (VEGF), регулирующий митоз эндотелиальных клеток сосудов и проницаемость сосудистой стенки [88], компоненты Notch-регуляторного пути – дельтаподобный лиганд 4 (Dll4) и Jagged-1 (Jag-1), влияющие на пролиферацию эндотелиоцитов [247], ангиомотин, который играет ключевую роль в миграции и определении полярности клеток эндотелия [43, 172], фрагмент коллагена XVIII типа – эндостатин, ингибирующий пролиферацию эндотелиальных клеток [94, 101], а также фактор роста соединительной ткани (CTGF), регулирующий адгезию, миграцию эндотелиальных клеток [230]. Хорошо изучена роль этих молекул в регуляторных путях в процессе формирования новых кровеносных сосудов при опухолевом росте [90, 99, 193, 229]. Однако роль молекул, принимающих участие в формировании сосудистой системы, в возрастных изменениях кровоснабжения кожи в физиологических условиях остается неизвестной [230]. Еще одним малоисследованным аспектом этой проблемы является отсутствие данных о биологической взаимосвязи между состоянием сосудистой системы и фибробластами дермы [154, 155]. Кроме того, исследования, проведенные в этой области, также охватывают определенный период жизни, отсутствуют длительные наблюдения от эмбрионального этапа до глубокой старости [15].

Классические морфологические методы визуализации не всегда позволяют корректно оценить морфологическое и функциональное состояние различных типов клеток, что ведет к недостаточной изученности тонких механизмов функционирования. Но с внедрением иммуногистохимических методов значительно расширились возможности идентификации клеток и оценки их функционального состояния.

Таким образом, исследование возрастных аспектов сосудистого обеспечения кожи, несомненно, актуально и может оказаться полезным в выявлении новых механизмов старения, а также в разработке способов его коррекции.

Цель и задачи исследования

Целью настоящей работы явилось изучение возрастных изменений содержания и распределения регуляторов ангиогенеза в дерме человека.

В соответствии с целью были поставлены следующие задачи:

Определить содержание и распределение сосудистого 1.

эндотелиального фактора роста (VEGF) в дерме человека в возрастном аспекте.

Изучить возрастные изменения в распределении дельтаподобного 2.

лиганда 4 (Dll4) в дерме человека.

Изучить содержание и распределение Jagged-1 (Jag-1) в дерме 3.

человека в онтогенезе.

Изучить распределение ангиомотина в дерме человека в возрастном 4.

аспекте.

Изучить возрастные изменения содержания эндостатина в дерме 5.

человека.

Исследовать возрастные изменения содержания фактора роста 6.

соединительной ткани (CTGF) в дерме человека.

Научная новизна

Впервые выявлено, что уменьшение количества фибробластов дермы как основных продуцентов внеклеточного матрикса, происходящее в процессе физиологического старения, связано с ухудшением кровоснабжения дермы.

Новыми являются данные о содержании регуляторов ангиогенеза в коже человека в возрастном аспекте. Приоритетными следует признать сведения о том, что возрастное увеличение содержания VEGF в кровеносных сосудах дермы не ведет к увеличению количества сосудов дермы.

В работе впервые доказано влияние компонентов Notch пути на активность ангиогенеза в дерме человека на протяжении от эмбрионального периода до старости. Новыми являются сведения о негативном влиянии содержания Dll4, происходящее после 20 лет, на степень кровоснабжения дермы. Новизной обладают данные о возрастном увеличении содержания Jag-1 в сосудах дермы.

Это, вероятно, является одним из механизмов ухудшения ангиогенеза дермы.

Приоритетными являются данные о роли эндостатина в процессе формирования кровеносных сосудов дермы. Показано постепенное планомерное возрастное увеличение содержания эндостатина, ведущее к ухудшению ангиогенеза дермы.

Новыми являются сведения о распределении ангиомотина в кровеносных сосудах дермы человека в возрастном аспекте. Впервые продемонстрировано снижение уровня ангиомотина в дермальных сосудах, что является одним из механизмов, приводящих к ухудшению ее кровоснабжения в возрастном аспекте.

Новизной обладают данные о том, что с возрастом в фибробластах и кровеносных сосудах дермы отмечается повышение содержания CTGF, что взаимосвязано с ухудшением кровоснабжения дермы.

Таким образом, впервые, используя методы иммуногистохимии, были получены новые знания о содержании регуляторов ангиогенеза в дерме в возрастном аспекте.

Научно-практическая значимость

Проведенное исследование механизмов ангиогенеза в коже человека существенно расширяет и дополняет наши знания о морфологических и структурных изменениях в дерме человека, происходящих в процессе физиологического старения. Впервые представлены механизмы, ведущие к возрастным изменениям в ангиогенезе в коже человека. Полученные данные могут быть полезны для разработки клинических подходов в профилактике и терапии возрастных изменений кожи.

Практическая значимость настоящей работы заключается в использовании полученных данных о возрастной регуляции ангиогенеза в дерме при проведении научных исследований в гистологии, патологической анатомии и геронтологии.

Они дополняют существующие данные в области возрастной гистологии и могут быть использованы при чтении лекций и проведении практических занятий на медицинских и биологических факультетах вузов.

Основные положения, выносимые на защиту

1. Содержание в кровеносных сосудах дермы человека сосудистого эндотелиального фактора роста (VEGF), Jagged-1 (Jag-1), фактора роста соединительной ткани (CTGF) и эндостатина увеличивается, ангиомотина – уменьшается от 20 недель беременности до 85 лет жизни, а дельтаподобного лиганда 4 (Dll4) – увеличивается от 20 недель беременности до 20 лет с последующим снижением к 85 годам жизни.

2. Возрастные изменения содержания в кровеносных сосудах дермы человека регуляторов ангиогенеза (VEGF, Dll4, Jag-1, ангиомотин, эндостатин и CTGF) сопровождаются уменьшением численности кровеносных сосудов и фибробластов в дерме в онтогенезе.

Связь работы с базовыми научными программами

Работа была поддержана следующими грантами:

2008-2011 гг. – грант РФФИ 08-04-97003 «Молекулярные механизмы старения кожи человека».

2011-2013 гг. – дополнительный заказ-наряд Министерства образования и науки Российской Федерации 4.1166.2011 «Исследование особенностей кожи человека в процессе старения».

2012-2013 гг. – государственный контракт ФЦП Федерального агентства по науке и инновациям 2012-1.3.2-12-000-1002-1416 «Изучение морфологических характеристик дермы кожи человека в зависимости от степени активности факторов ангиогенеза в различные возрастные периоды».

2012-2013 гг. – грант РФФИ 12-04-31065 «Молекулярная регуляция ангиогенеза в коже человека в онтогенезе».

2012 г. – грант РФФИ 12-04-00005 «Ангиогенез в коже человека в процессе старения».

2013 г. – грант РФФИ 13-04-97112 «Морфологические характеристики дермы кожи человека в зависимости от степени активности факторов ангиогенеза и иммунного ответа в различные возрастные периоды».

Апробация работы

Результаты работы, отражающие основные положения диссертации, представлялись на ежегодных итоговых конференциях медицинского факультета Чувашского государственного университета имени И.Н. Ульянова (2010-2014 гг.), международной научной конференции «Актуальные проблемы психологии и медицины в условиях модернизации образования и здравоохранения»

(Чебоксары, 2012 г.), VIII международной заочной научно-практической конференции «Научная дискуссия: инновации в современном мире» (Москва, 2013 г.), The 8th European Congress of Biogerontology joint with the 2nd International RESOLVE Meeting «Healthy Ageing and Regenerative Medicine» (Israel, 2013 г.), научной конференции «Фундаментальные проблемы геронтологии и гериатрии», посвященной 20-летию со дня основания Геронтологического общества при Российской академии наук (Санкт-Петербург, 2014 г.).

Публикации по теме диссертации

По теме диссертации опубликовано 14 печатных работ, из них две в зарубежных и четыре в отечественных ведущих рецензируемых научных журналах и изданиях, рекомендованных ВАК для защиты кандидатских и докторских диссертаций, шесть тезисов докладов международных и всероссийских конференций и конгрессов.

Место проведения работы Работа выполнена в ФГБОУ ВПО «Чувашский государственный университет имени И.Н. Ульянова» (2010-2015 гг.).

Работа одобрена этическим комитетом университета. Выписка из протокола заседания этического комитета № 1 от 25 сентября 2015 года.

Структура и объем диссертации Диссертация состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, результатов исследования, обсуждения и выводов. Объем диссертации – 153 страницы машинописного текста. Работа содержит 44 рисунка.

Список цитированной литературы включает 7 отечественных и 261 зарубежный источник.

–  –  –

1.1. Кожа: строение, функции Кожа представляет собой наружный покров тела, площадь которого у взрослого человека составляет 1,5-2 м2. Кожа является барьерным органом, так как находится на границе внешней и внутренней среды. Она выполняет множество функций: защитная, иммунная, экскреторная, рецепторная, эндокринная, а также участвует в терморегуляции, депонировании крови и водносолевом обмене [2, 34]. Кожа состоит из трех слоев: наружный слой представлен эпидермисом, под ним залегает дерма и самый глубокий слой — гиподерма [2].

Эпидермис представлен многослойным плоским ороговевающим эпителием, образующимся из эктодермы. Среди эпителиальных клеток эпидермиса (кератиноциты) располагаются неэпителиальные клетки (меланоциты, клетки Лангерганса, Т-лимфоциты, клетки Меркеля) [115].

Основными клетками эпидермиса являются кератиноциты, которые образуют пять слоев — базальный, шиповатый, зернистый, блестящий и роговой.

Особенностью кератиноцитов является то, что они непрерывно образуются в базальном слое и смещаются в вышележащие слои. Подвергаясь полной денуклеации, они дифференцируются, превращаясь в роговые чешуйки, слущивающиеся с поверхности кожи [79].

Отростчатые клетки эпидермиса представлены меланоцитами, клетками Лангерганса и клетками Меркеля [169]. Меланоциты – это пигментные клетки нейрального происхождения, образуются из нервной трубки и нервного гребня [79]. Тела меланоцитов находятся в базальном слое, а отростки проникают в шиповатый. Основная функция меланоцитов – это синтез пигмента меланина, который в виде гранул (меланосом) транспортируются в их отростки, а из них — в кератиноциты, защищая последние от ультрафиолетового облучения [2, 119].

Дендритные клетки (клетки Лангерганса, эпидермальные макрофаги) — антигенпредставляющие клетки костномозгового происхождения, которые локализуются в базальном или шиповатом слоях. Клетки Лангерганса захватывают антигены, попадающие в эпидермис, осуществляют их процессинг, затем передают информацию лимфоцитам, вызывая развитие иммунной реакции [162]. Клетки Меркеля имеют нейральное происхождение. Связываясь с афферентным нервным волокном, клетки Меркеля выполняют механорецепторную функцию. Тело тактильных клеток локализуется в базальном слое, а отростки соединены с эпителиоцитами базального и шиповатого слоев посредством десмосом [169].

Эпидермис и дерма разделены базальной мембраной, состоящей из полудесмосом базальных кератиноцитoв, светлой пластины, плотной пластины и фибрoретикулярной пластины.

Дерма (собственно кожа) представлена волокнистой соединительной тканью мезенхимального происхождения. Дерма включает два слоя – сосочковый и сетчатый. Сосочковый слой дермы состоит из рыхлой волокнистой соединительной ткани с лимфатическими и кровеносными капиллярами, нервными волокнами и окончаниями. В сосочковом слое содержатся в большом количестве клетки (фибробласты, тучные клетки, клетки костномозгового происхождения, макрофаги, лейкоциты, пигментные клетки) и небольшое количество внеклеточного матрикса (коллагеновые, эластические и ретикулярные волокна). Сетчатый слой образован плотной волокнистой соединительной тканью. Он представлен в основном коллагеновыми волокнами, выполняющими опорную функцию [42, 152]. Условная граница между сосочковым и сетчатым слоем проходит по одним данным на уровне субпапиллярного сплетения кровеносных сосудов [1], по другим — на уровне концевых отделов сальных желез [6].

Среди клеток дермы выделяют постоянно присутствующие в ней – это фибробласты, эндотелиоциты лимфатических и кровеносных сосудов и блуждающие клетки, которые мигрируют из крови в дерму (макрофаги, тучные клетки, лейкоциты) [34].

Основная масса клеток дермы представлена фибробластами разной степени зрелости: юные, дифференцированные и зрелые фиброциты. Незрелые фибробласты проходят этапы последовательной дифференцировки, достигая зрелости. Процесс пролиферации фибробластов контролируется различными цитокинами и медиаторами, в частности интерлейкин-1, инетерлейкин-1 и интерлейкин-8 [113, 199]. Основная часть фибробластов постоянно присутствует в дерме, но небольшая часть образуется из гемопоэтических стволовых клеток, мигрирующих из костного мозга в дерму [121]. Фибробласты являются основными продуцентами компонентов внеклеточного матрикса, включающих коллаген, фибронектин, эластин, протеогликаны, гликозаминогликаны и другие.

Они также участвуют в поддержании гомеостаза в дерме за счет выработки цитокинов, факторов роста и ферментов, в том числе ферментов, разрушающих коллаген [77].

Морфологически фибробласты представляют собой клетки округлой или вытянутой формы с различным количеством отростков. Форма клетки и количество отростков зависят от степени зрелости фибробласта. Юные (недифференцированные) фибробласты имеют небольшие размеры, содержащие крупное ядро и равномерно распределенную по всему объему цитоплазму. Они имеют небольшое количество отростков, что определяет их способность к миграции в очаг повреждения, то есть, незрелые фибробласты участвуют в репаративных процессах и пролиферации. В качестве хемоаттрактанта выступают продукты деградации коллагена [113].

Дифференцированные фибробласты крупнее по сравнению с юными клетками. Они также имеют ядро овальной формы и большое количество цитоплазмы. Дифференцированные фибробласты обладают хорошей подвижностью ввиду большого количества отростков, располагающихся на их поверхности. Они участвуют в синтезе, перестройке и даже разрушении межклеточного вещества дермы, поддерживая химический гомеостаз.

Фиброцит – зрелая, дефинитивная (конечная) форма развития фибробластов. Они имеют веретенообразную форму с крыловидными отростками.

Клетки содержат вытянутое ядро, небольшое число органелл, вакуолей, липидов и гликогена. Синтез коллагена и других веществ в фиброцитах резко снижен.

Зрелые фибробласты участвуют в поддержании тканевой структуры дермы и медленном, непрерывном обновлении внеклеточного матрикса [92].

К мигрирующим клеткам дермы относят тучные клетки, выполняющие защитную, регуляторную, эффекторную и гомеостатическую функции.

Наибольшая концентрация тучных клеток обнаружена в сосочковом слое вокруг кровеносных сосудов, а также рядом с придатками кожи и нервными окончаниями [75]. В дерме присутствуют клетки костномозгового происхождения

– макрофаги, проникающие в нее из кровеносных сосудов. Основная функция макрофагов заключается в поглощении чужеродных антигенов, то есть осуществлении фагоцитоза, а также предоставлении информации лимфоцитам – антигенпрезентирующая функция [267]. В дерме также определяются стволовые клетки, мигрирующие из костного мозга. Здесь они подвергаются дифференцировке, в результате которой гемопоэтические стволовые клетки могут превращаться либо в фибробласты и участвовать в процессах регенерации в очаге воспаления, либо в тучные клетки и лейкоциты, а также в клетки кровеносных сосудов [41, 47].

Внеклеточный матрикс дермы состоит их трех компонентов: основное вещество дермы, адгезивные белки и волокнистые структуры (коллагеновые, эластические и ретикулярные волокна). Функции внеклеточного матрикса заключаются в формировании структурных основ дермы, механических контактов между клетками и создании путей миграции для клеток. Основное вещество имеет гелеобразную структуру, которая состоит из гликозаминогликанов, гликопротеинов, гидратированных комплексов протеогликанов, растворимого коллагена, ферментов и продуктов деградации коллагена [59, 138].

Структурную основу дермы составляют коллагеновые волокна, включающие фибриллярный белок коллагена, синтезируемый фибробластами дермы. Коллагеновые волокна поддерживают архитектонику дермы, обеспечивают прочность и эластичность кожи [171]. Механическую прочность дермы обеспечивает коллаген I типа, находящийся преимущественно в сетчатом слое, а коллаген VII типа проникает в базальный слой эпидермиса и стабилизирует кожу, прочно связываясь с подлежащей соединительной тканью [46]. Существует мнение, что формирование коллагеновых волокон стимулируется декорином и фибромодулином [160]. Эластические волокна обладают хорошей растяжимостью, они обусловливают эластичность и упругость кожи. В состав эластических волокон входит эластин и фибриллин [128].

Ретикулиновые волокна – это разновидность коллагена. Они имеют тесные связи с основным веществом дермы, обеспечивают растяжимость кожи [54].

Кровоснабжение дермы осуществляют артерии гиподермы, которые образуются в результате слияния артерий межмышечных фасциальных перегородок, мышечно-кожных и надкостно-кожных артерий. Они образуют две сосудистые сети: поверхностную — на границе сосочкового и сетчатого слоя, и глубокую — на границе дермы и гиподермы. Кровеносные сосуды кожи формируют множество артериовенозных анастомозов с богатой симпатической иннервацией. Сосуды кожи участвуют в терморегуляции, депонировании крови, осуществляют транспортную и обменную функции [32, 82].

Гиподерма, или подкожная жировая клетчатка, представляет собой прослойку белой жировой ткани, состоящей из белых адипоцитов. Клетки гиподермы разделены между собой перегородками из коллагеновых и эластических волокон [11].

1.2. Возрастные изменения организма человека

Старение – это сложный неизбежный биологический процесс, характеризующийся потерей адаптационных резервов организма, нарушением физиологической целостности, что приводит к снижению функциональности, повышению восприимчивости к средовым факторам и, в конечном счете, к смерти организма [243].

Старение организма инициируется генетическими и внешними факторами окружающей среды. Изменения, происходящие в процессе старения, захватывают молекулярный, клеточный, организменный и системный уровни, характеризуются структурной и функциональной трансформацией организма [120, 158].

На протяжении многих лет исследование механизмов старения является актуальной областью в научном мире. Однако только в последние годы достигнут определенный прогресс, связанный с открытием способов контроля скорости старения с помощью генетических и биохимических процессов, сохраняемых в эволюции [225, 243]. Исследователями было выдвинуто сотни гипотез старения, но только некоторые из них имеют научную ценность. Самой распространенной гипотезой является теория генетически запрограммированного старения. В противоположность данной теории существует предположение, что старение связано с повреждением клеток, органелл, происходящем на уровне ДНК. Это приводит к накоплению мутаций (теория соматических мутаций) на уровне теломеров (теория теломеров), митохондриальной ДНК. Повреждения клеточных структур могут быть вызваны свободными радикалами – супероксид кислорода, перекись водорода, гидроксильные радикалы (свободнорадикальная теория) [187].

Старение организма захватывает все органы и системы, но в каждой из них имеются свои характерные особенности. В основе старения сердечно-сосудистой системы лежит дисфункция эндотелия, которая приводит к повышенной агрегации тромбоцитов, образованию тромбов и, как следствие, к гипоксии и ишемии [52, 93, 146]. В органах дыхательной системы с возрастом также происходит структурная и морфологическая перестройка. Усиление фиброза в легочной паренхиме способствует снижению дыхательной поверхности легких. В результате снижается вентиляция легких, жизненная емкость легких, увеличивается остаточный дыхательный объем [33, 237]. Установлено, что с возрастом значительно уменьшается количество нейронов, особенно в черном веществе, гиппокампе, базальных ядрах, мозжечке. В результате этого активируются покоящиеся клетки микроглии, стимулируя выработку цитокинов, факторов роста. Их активация запускает иммунные реакции, приводящие к нейрональной дисфункции [78]. В периферической нервной системе старение вызывает уменьшение числа двигательных и чувствительных нейронов, демиелинизацию нервных волокон [148, 199]. Изменения, происходящие в репродуктивной системе, коррелируют с перестройкой в нервной системе, в частности гипоталамусе и гипофизе. В женском организме старение приводит к прекращению овариальной функции, переходу в менопаузу. Отмечается атрофия матки и маточных труб, образование фолликулярных кист в яичниках [210, 211].

В мужском организме также отмечается снижение уровня половых гормонов — андрогенов, яички подвергаются дегенеративным изменениям. В организме происходит комплекс эндокринных и метаболических изменений, что в первую очередь проявляется функциональными нарушениями в половой и центральной нервной системах, костях, мышцах, кожном покрове [13].

Таким образом, старение представляет собой комплексный процесс, характеризующийся структурно-функциональной перестройкой всех органов и систем. Одной из первых на возрастные изменения реагирует кожа, что проявляется внешними признаками старения.

–  –  –

Подобно всему организму кожа подвергается старению, которое представляет собой сложный биологический процесс, состоящий из внешнего и внутреннего старения. Внутреннее старение генетически детерминировано, характеризуется изменением структуры межклеточного вещества, клеточного состава. Внешнее старение обусловлено воздействием факторов окружающей среды и имеет характерные морфологические признаки – появление морщин, изменение пигментации, снижение упругости и эластичности, дряблость, появление старческих пятен, телеангиоэктазий [153].

Морщины представляют собой видимые углубления на поверхности кожи. Их появление обусловлено структурными и физиологическими изменениями, происходящими в коже в процессе старения. Деградация внеклеточного матрикса дермы, изменение активности мимических мышц, структуры лицевых костей и хрящей, потеря подкожной жировой клетчатки являются основой для формирования морщин [179, 203].

С возрастом кожа претерпевает ряд характерных изменений и на гистологическом уровне. В эпидермисе с возрастом уменьшается число эпидермальных макрофагов (клеток Лангерганса), меланоцитов, что приводит к неравномерной пигментации [122, 260]. Наиболее выраженные возрастные изменения происходят в дерме. Эти изменения непосредственно связаны с изменением численности фибробластов как основных продуцентов внеклеточного матрикса. Популяционные изменения фибробластов зависят от их способности к самообновлению. Однако на сегодняшний день достоверно неизвестно, какая часть дермальных фибробластов способна к делению или находится в клеточном цикле в разные возрастные периоды. Установлено, что с возрастом происходит уменьшение численности фибробластов, это в свою очередь приводит к уменьшению основного вещества дермы, соединительной ткани, протеогликанов, гиалуроновой кислоты, что выражается в потере тургора, эластичности кожи и образовании морщин. Кроме этого, стареющие фибробласты начинают синтезировать ферменты коллагеназу, желатиназу, эластазу [218]. Под действием ферментов эластические волокна подвергаются деформации, они становятся тонкими, распределяются неравномерно. Сеть коллагеновых волокон с возрастом теряет свою пространственную ориентацию, приобретает хаотичное расположение [38]. Многочисленные исследования показали, что с возрастом меняется морфологическая и функциональная активность фибробластов.

Известно, что фибробласты кожи пожилых людей вырабатывают интерлейкин-6 и интерлейкин-8 в большем количестве, чем фибробласты молодых людей [242].

Экспериментальным путем на лабораторных мышах установлено, что в эмбриональном периоде в коже отмечается низкий уровень экспрессии трансформирующего фактора роста-1, CD44, интерлейкина-6, интерлейкина-8 и высокое содержание гиалуроновой кислоты, что способствует полной ее регенерации при повреждении в отличие от кожи взрослых особей [111, 112].

Высокая экспрессия интерлейкина-10 в коже взрослых людей приводит к уменьшению воспалительной реакции, аномальному отложению коллагена и восстановлению нормальной архитектоники при повреждении [212].

Исследователями установлено, что с возрастом происходит изменением клеточной биомеханики фибробластов, что ведет к потере кожей упругости. В процессе старения отмечается повышение жесткости цитоскелета фибробластов в результате трансформации мономерного G-актина в фибриллярный F-актин [231].

Анализ фибробластов кожи четырех здоровых доноров 22-30 лет и шести здоровых доноров 81-92 лет показал хорошую миграционную активность молодых фибробластов. Фибробласты кожи пожилых людей продемонстрировали плохую миграционную возможность, что отразилось в неорганизованном построении актинового цитоскелета и низкой способности к сокращению коллагеновых волокон [207].

Определенные изменения в процессе хронологического старения происходят во внеклеточном матриксе. Отмечается уменьшение количества белков экстрацеллюлярного матрикса под действием металлопротеиназ [117].

Наряду с этим в межклеточном веществе дермы описана высокая экспрессия фибронектина, провоспалительных интерлейкинов и цитокинов. Снижение количества коллагена в тканях приводит к нарушению структурной целостности, увеличению жесткости и, как следствие, к нарушению биомеханических свойств, дисбалансу в системе структура — функция внеклеточного матрикса. Кроме того, расположение коллагеновых волокон I типа становится менее организованным, носит фрагментарный характер [64]. Установлено, что в процессе старения фибробласты меняют спектр синтезируемых веществ в зависимости от пола. Так, уменьшение продукции гиалуроновой кислоты и гепаринсульфата характерно для лиц мужского и женского пола, а снижение синтеза хондроитин сульфата только для женского организма [53].

Одной из вероятных причин старения кожи является ухудшение ее кровоснабжения с возрастом. Исследование кожи 120 здоровых людей разного возраста показало, что старение сопровождается ухудшением микроциркуляции, которое определяется морфологическими изменениями в сосудах, изменением в микрогемодинамике и реологических свойств крови. Кожа пожилых лиц характеризуется уменьшенным количеством функционирующих капилляров [258]. Исследуя кожу людей в возрасте от 33 до 82 лет с использованием антител против антигена CD34, ученые выявили неуклонное снижение плотности капилляров в сосочковом слое дермы, начиная с 60 лет. Подобные изменения в сетчатом слое дермы не определялись ни в одном возрастном периоде [202]. На модели индуцированного старения кожи под воздействием ультрафиолетового облучения выявлена активация процесса ангиогенеза и нарушение лимфатического дренажа кожи [214]. Эндотелиальные клетки сосудов, находясь на границе между тканями и плазмой, обеспечивают поддержание гомеостаза.

Они способны генерировать новые кровеносные сосуды, участвовать в воспалительных реакциях, коагуляции, заживлении ран. Ввиду того, что большинство патологических процессов происходит на уровне микрососудов, эндотелиоциты являются актуальной моделью для изучения клеточного старения [155]. Однако механизмы ухудшения кровоснабжения кожи в возрастном аспекте до конца еще не изучены.

1.4. Общие сведения об ангиогенезе. Ангиогенез в коже человека

Функционирование органов и тканей в физиологических и патологических условиях зависит от регулярной доставки кислорода кровеносными сосудами. В последнее десятилетие исследователи активно занимаются изучением механизмов образования кровеносных сосудов. Существует два принципиально различных механизма их формирования — это васкулогенез и ангиогенез.

Васкулогенез происходит у эмбриона и характеризуется образованием кровеносных сосудов de novo из предшественников эндотелиальных клеток. В период раннего эмбрионального развития мезодермальные клетки дифференцируются в гемангиобласты, которые являются общими предшественниками как клеток гемопоэза, так и эндотелиальных клеток, дающих начало кровеносным сосудам. При дальнейшей дифференцировке из гемангиобластов образуются ангиобласты. В результате агрегации ангиобластов формируются кровяные островки. Затем при слиянии кровяных островков образуется первичное сосудистое сплетение. Оно состоит из множества мелких капилляров, сформированных клетками эндотелия [4, 209]. Известно, что уже на этой стадии капилляры начинают дифференцироваться в артериальный или венозный сосуд. Это указывает на генетически запрограммированную специфичность клеток [72]. Недавние исследования показали принципиально новый механизм регуляции васкулогенеза. Для формирования основного осевого сосуда ангиобласты мигрируют в направлении от средней линии, где в качестве хемоаттрактанта выступает VEGF. Однако ученые показали, что на срединную миграцию ангиобластов влияет уровень экспрессии апелин рецепторов [244].

Ангиогенез – это процесс образования новых кровеносных сосудов из уже существующей сосудистой системы [209]. В процессе ангиогенеза происходит расширение первичного сосудистого сплетения за счет ветвления капилляров и формирование высокоорганизованной сосудистой сети. Образование новых сосудов начинается с локального разрушения стенки ранее существующего сосуда, активации пролиферации и миграции эндотелиальных клеток. Это приводит к формированию трубчатых структур из клеток эндотелия, которые являются основой для стенки будущих сосудов. Дальнейшее созревание сосудистой сети приводит к слиянию капилляров в более крупные сосуды, артерии и вены [4].

Стенки капилляров и мелких сосудов состоят из одного слоя клеток, называемых перицитами, а стенки артерий и вен образованы несколькими слоями гладкомышечных клеток. Перициты представляют собой гетерогенную популяцию клеток мезенхимального происхождения, обладающих способностью к дифференцировке в мезенхимальные клетки другого типа, такие как гладкомышечные клетки, фибробласты и остеобласты [123]. Дисфункция перицитов, характеризующаяся нарушением их сократимости, играет одну из ключевых ролей в патогенезе фибропролиферативных и сосудистых заболеваний [241]. Также существует мнение, что перициты представляют собой популяцию стволовых клеток, обладающих мощным пролиферативным, регенераторным потенциалом в процессе заживления ран [89].

Таким образом, в сосудистой стенке выделяют два основных типа клеток:

эндотелиальные клетки и перициты. Во время ангиогенеза клетки эндотелия выходят из свойственного им состояния покоя, начинают активно делиться и образуют так называемую эндотелиальную почку, которая прорывает базальную мембрану и внедряется в соединительную ткань. Эндотелиальные клетки активируются под воздействием факторов роста и компонентов внеклеточного матрикса. Прекращение действия этих факторов возвращает эндотелиальные клетки в состояние покоя [4, 209].

На протяжении постнатального периода онтогенеза человека также постоянно происходят процессы физиологического, патологического и репаративного ангиогенеза. Как известно, ангиогенез играет важную роль в развитии, нормальном росте ткани, заживлении ран, репродуктивном цикле у женщин (развитие плаценты и желтого тела, овуляция) и также имеет важное значение в различных заболеваниях. Известно, что избыточная активность ангиогенеза приводит к развитию аутоиммунных заболеваний, например, ревматоидного артрита, саркомы Капоши, псориаза. Однако недостаточное формирование системы кровоснабжения способствует развитию язвенной болезни желудка, остеопороза, а также медленному заживлению ран и ишемии органов и тканей. Таким образом, роль ангиогенеза в организме человека неоднозначна.

Образование новых сосудов также непосредственно связано с ростом опухолей. Этот процесс, известный как опухолевый ангиогенез, является неотъемлемой частью метастазирования. Ангиогенез свойственен всем видам опухолей: и доброкачественным, и злокачественным. Кровеносные сосуды опухоли имеют функциональные и морфологические отличия от нормальной сосудистой сети. В структуре их стенки отсутствуют перициты, сосудистая сеть имеет хаотичную организацию с множеством ветвлений и извитостью кровеносных сосудов. Сосуды обладают повышенной проницаемостью, а их рост детерминирован действием факторов роста [30].

В основе регуляции механизма неоангиогенеза лежит высвобождение ангиогенных факторов, источниками которых могут быть эндотелиальные и тучные клетки, макрофаги и другие [21]. Ангиогенные факторы приводят к активации эндотелиоцитов и миграции их за пределы базальной мембраны, а также к дальнейшему формированию ответвлений основных сосудов. Есть мнение, что миграция эндотелиоцитов инициируется активацией экспрессии эндотелиальных молекул адгезии, например Е-селектина. В состоянии покоя эндотелиоциты не пролиферируют и редко (один раз в 7-10 лет) делятся. Но воздействие ангиогенных факторов роста и цитокинов приводит к активации пролиферации эндотелиоцитов и ремоделированию сосуда, после чего вновь образованный сосуд приобретает стабильное состояние [4].

Известно, что ангиогенез детерминирован балансом между его стимуляторами и ингибиторами. В настоящее время известны следующие стимуляторы неоангиогенеза: VEGF, ангиогенин, фактор роста фибробластов, тромбоцитарный фактор роста, эпидермальный фактор роста, инсулиноподобный фактор роста-1, трансформирующие факторы роста- и, NO, интерлейкин-8 и неспецифические факторы, такие как матриксные металлопротеиназы.

Ингибиторы неоангиогенеза: эндостатин, тромбоспондин, ангиостатин, растворимые рецепторы VEGF, рестин, вазостатин, ингибиторы матриксных металлопротеиназ [24, 37, 74].

Молекулярные основы ангиогенеза кожи, а также факторы, влияющие на его активность, широко изучались на лабораторных животных.

Экспериментальным путем установлено влияние гирудина на ангиогенез кожи лабораторных животных. Гирудин стимулирует ангиогенез кожи путем увеличения экспрессии VEGF и уменьшения экспрессии эндостатина и тромбоспондина-1 опосредованно через p38 MAPK-ERK путь [134]. Известно, что от активности ангиогенеза зависит интенсивность фиброза при многих фибропролиферативных заболеваниях. В этой связи было показано, что рецептор токсина сибирской язвы, также известный как эндотелиальный опухолевый маркер-8, вызывает снижение синтеза эндотелиальных компонентов базальной мембраны и гиперпролиферацию фенестрированных кровеносных сосудов в коже. Он также приводит к увеличению экспрессии VEGF, количества тучных клеток и макрофагов [208]. Механизм ангиогенеза кожи человека изучался А.

Lafosse и другими на хронических длительно незаживающих ранах[35]. Они выяснили, что выделенные из жировой ткани стромальные клетки улучшают заживление раны путем стимуляции ангиогенеза и иммуномодуляции [35].

Установлено, что клеточная пролиферация, лежащая в основе заживления ран, непосредственно связана с ангиогенезом и фиброплазией. Эти два процесса являются взаимозависимыми, и дисбаланс в одной из составляющих может привести к длительному заживлению раны или формированию патологического рубца [76].

Ряд исследователей изучали воздействие электрического тока на рост и образование новых сосудов кожи человека в остро возникших ранах. Они показали, что воздействие электрического тока усиливает экспрессию ангиогенных факторов роста, в частности VEGF-A и плацентарного фактора роста, а также способствует миграции кератоницитов, макрофагов, стимуляции фибробластов, что улучшает процесс заживления раны [22]. Терапевтический эффект мезенхимальных стволовых клеток, выделенных из пуповины человека, изучался в процессе регенерации кожи. Было показано, что мезенхимальные стволовые клетки обладают определенным проангиогенным эффектом. Они опосредованно через Wnt4 индуцируют активацию -катенина в эндотелиальных клетках, что приводит к повышению экспрессии ядерного антигена пролиферирующих клеток [139]. Ангиогенез является актуальной проблемой и для больных сахарным диабетом [3]. При данном заболевании существует два противоположных эффекта: чрезмерный рост новых сосудов в сетчатке глаза приводит к развитию ретинопатии и недостаточная активность ангиогенеза в коже приводит к нарушению ее трофики и формированию венозных язв [3, 23, 58].

Широко изучен механизм ангиогенеза при опухолевых заболеваниях в качестве ключевого звена в процессе метастазирования [44]. В этой связи таргетная терапия опухолевых заболеваний, основанная на блокировании ангиогенеза, остается актуальной проблемой на сегодняшний день [30].

В современной биологии и медицине весьма актуальными являются вопросы роли ангиогенеза в патогенезе ишемических заболеваний. Известно, что одним из факторов, приводящих к активации роста новых сосудов, является гипоксия. Ответы клеток на гипоксию в основном регулируются активацией факторов транскрипции так называемого фактора, индуцированного гипоксией (HIFs) [194]. HIFs факторы играют защитную роль в развитии ишемических заболеваний, связанных с недостаточным развитием коллатерального кровотока при артериальной непроходимости, так как один из его димеров HIF-2 способен индуцировать экспрессию ангиогенных факторов роста [132].

Изучение процесса образования и роста сосудов кожи в онтогенезе проводилось на моделях индуцированного старения человека или на лабораторных животных. Человек ежедневно подвергается воздействию ультрафиолетового, инфракрасного излучений, тепла. Доказано, что эти факторы индуцируют ангиогенез. Однако действие излучения на ангиогенез кожи неоднозначно: при остром воздействии активируются процессы васкуляризации, при хроническом длительном воздействии, наоборот, кровоснабжение кожи значительно ухудшается [60]. В качестве терапевтического способа для лечения фотостарения кожи предложено использовать гипербарическую оксигенацию.

Было доказано, что использование гипербарической оксигенациии приводит к сокращению количества морщин, возникающих от воздействия ультрафиолетового излучения [31], которое связано с активацией проангиогенных факторов, таких как HIF-1, VEGF, матриксных металлопротеиназ 2 и 9 [133].

Таким образом, проанализировав имеющиеся литературные источники, мы не нашли сведений о регуляции ангиогенеза кожи человека в возрастном аспекте в физиологических условиях. Все имеющиеся данные касательно механизмов васкуляризации кожи человека были получены в ходе изучения патологических состояний, в частности, регенерация при заживлении кожных ран и образование рубцов [35], опухолевый ангиогенез [44], а также изменение трофики кожи при сахарном диабете [3, 58], ишемических заболеваниях. Кроме того, особенности ангиогенеза кожи человека рассмотрены, в основном, на моделях индуцированного старения, например, на модели фотостарения [60, 124]. В имеющихся литературных источниках нами не обнаружено исследований по кровоснабжению кожи в возрастном аспекте от эмбрионального периода до глубокой старости [155]. Как правило, изучение васкуляризации кожи человека касалось какого-то одного промежутка жизни человека [66].

1.5. Регуляторы ангиогенеза 1.5.1. Сосудистый эндотелиальный фактор роста (VEGF) Во время позднего эмбриогенеза и в постнатальный период образование и рост новых сосудов происходит за счет ангиогенеза — процесса, характеризующегося образованием сосудов из уже существующих. Данный процесс находится под стимулирующим влиянием факторов роста. Самым мощным из всех известных факторов роста, влияющих на ангиогенез, является VEGF [257].

VEGF представляет собой семейство белков, в которое входят VEGF-A, вирусный гомолог Экспрессия VEGF-B, VEGF-C, VEGF-D, VEGF-E.

эндотелиальных факторов роста дифференциально регулируется короткими шпильками мРНК [84].

Самым активным из семейства эндотелиальных факторов роста сосудов является VEGF-A. Первоначально он был выделен как фактор сосудистой проницаемости [88]. VEGF-A представляет собой гетеродимерный гликопротеин, который продуцируется различными типами клеток. Идентифицировано пять изоформ VEGF-А: VEGF 12, VEGF 165, VEGF 183, VEGF 189, VEGF 206. В отличие от других митогенов эндотелиальных клеток, таких как фактор роста фибробластов- и тромбоцитарный фактор роста, VEGF синтезируется как предшественник, содержащий 226 аминокислот. VEGF обладает сильным ангиогенным действием, регулирует митоз эпителиальных клеток сосудов, способствует вазодилатации опосредованно через путь, NO-синтетазный увеличивает проницаемость сосудистой стенки, изменяя функцию гемато– энцефалического барьера [235].

Ангиогенный эффект VEGF-A реализуется через взаимодействие со специфическими рецепторами: VEGFR-1, VEGFR-2 и нейролипин-1, которые находятся в растворимой форме на васкулярных и лимфатических эндотелиальных клетках [223]. VEGFR-1 также обнаруживается в остеобластах, клетках трофобласта [222]. Они способны связывать цитокины с последующей их нейтрализацией. Максимальная экспрессия рецепторов обнаруживается в пролиферирующем эндотелии выстилки сосудов и солидных опухолях. VEGFR-1 и VEGFR-2 имеют значительные отличия на биохимическом уровне. Так, VEGFRиграет регуляторную роль, а VEGFR-2 является основным преобразователем ангиогенных сигналов в пути VEGF- VEGFR [116, 220].

Лиганд VEGF-B широко распространен во многих тканях, но максимальная его концентрация встречается в сердце и скелетных мышцах. В организме человека VEGF-B имеет две изоформы: VEGF-B 167 и VEGF-B 186 [74]. Роль лиганда VEGF-B в организме до конца не изучена. На лабораторных животных показано, что выключение гена приводит к формированию VEGF-B неполноценной сердечно-сосудистой системы, при этом животные остаются жизнеспособными [170].

В семействе VEGF выделяют лиганды, участвующие преимущественно в процессе лимфоангиогенеза, к ним относятся VEGF-C и VEGF-D [221]. Эти лиганды обладают структурной гомологией. Высокая экспрессия VEGF-C обнаружена при злокачественных опухолях желудочно-кишечного тракта, а VEGF-D у развивающихся эмбрионов, преимущественно в легочной мезенхиме. В тканях взрослых людей VEGF-D обнаруживается в сердце, легких, скелетной мускулатуре и тонком кишечнике [221].

Экспрессия VEGF также регулируется множеством проангиогенных факторов, в частности, эпидермальным ростовым фактором, фактором роста фибробластов, тромбоцитарным фактором роста. Кроме того, на уровень VEGF влияют факторы окружающей среды: рН, давление и концентрация кислорода.

Результатом воздействия этих различных факторов на VEGF является стимуляция ключевых для ангиогенеза факторов, таких как антиапоптотические белки, молекулы клеточной адгезии и матриксные металлопротеиназы.



Pages:   || 2 | 3 | 4 | 5 |
 

Похожие работы:

«Цвиркун Ольга Валентиновна ЭПИДЕМИЧЕСКИЙ ПРОЦЕСС КОРИ В РАЗЛИЧНЫЕ ПЕРИОДЫ ВАКЦИНОПРОФИЛАКТИКИ. 14.02.02 – эпидемиология ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени доктора медицинских наук Научный консультант: заслуженный деятель науки РФ, лауреат Государственной премии СССР профессор, доктор медицинских наук Ющенко Галина Васильевна Москва – 20 Содержание...»

«Шинкаренко Андрей Семенович Формирование безопасного и здорового образа жизни школьников на современном этапе развития общества Специальность 13.00.01– общая педагогика, история педагогики и образования Диссертация на соискание ученой степени кандидата педагогических наук Научные...»

«МИГИНА ЕЛЕНА ИВАНОВНА ФАРМАКОТОКСИКОЛОГИЯ И ЭФФЕКТИВНОСТЬ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ КОРМОВОЙ ДОБАВКИ ТРИЛАКТОСОРБ В МЯСНОМ ПЕРЕПЕЛОВОДСТВЕ 06.02.03 – ветеринарная фармакология с токсикологией Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: доктор биологических наук, профессор Кощаев Андрей...»

«Головань Екатерина Викторовна Ресурсы декоративных растений для озеленения внутриквартальных территорий (на примере г. Владивостока) 03.02.14 – биологические ресурсы Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: д.б.н., доцент О.В. Храпко Владивосток — Оглавление Введение Глава 1. Современные подходы...»

«Трубилин Александр Владимирович СРАВНИТЕЛЬНАЯ КЛИНИКО-МОРФОЛОГИЧЕСКАЯ ОЦЕНКА КАПСУЛОРЕКСИСА ПРИ ПРОВЕДЕНИИ ФАКОЭМУЛЬСИФИКАЦИИ КАТАРАКТЫ НА ОСНОВЕ ФЕМТОЛАЗЕРНОЙ И МЕХАНИЧЕСКИХ ТЕХНОЛОГИЙ 14.01.07 – глазные болезни Диссертация на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Научный...»

«КОНОНОВА ЕКАТЕРИНА АЛЕКСАНДРОВНА ЭКОЛОГО-БИОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ НОВЫХ СОРТОВ СТЕВИИ Stevia rebaudiana (Bertoni) Hemsley ПРИ ВВЕДЕНИИ В КУЛЬТУРУ В ЦЕНТРАЛЬНОМ ПРЕДКАВКАЗЬЕ по специальности 06.01.05 – селекция и семеноводство сельскохозяйственных растений Диссертация на соискание ученой степени кандидата...»

«НГУЕН ВУ ХОАНГ ФЫОНГ ОЦЕНКА ЭКОЛОГИЧЕСКОЙ СИТУАЦИИ КРУПНЫХ ГОРОДОВ В СОЦИАЛИСТИЧЕСКОЙ РЕСПУБЛИКЕ ВЬЕТНАМ Специальность: 03.02.08экология (биология) Диссертация на соискание учёной степени кандидата биологических наук Научный руководитель: доктор биологических наук, профессор Чернышов В.И. Москва ОГЛАВЛЕНИЕ ГЛАВА 1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА...»

«Карачевцев Захар Юрьевич ОЦЕНКА ПИЩЕВЫХ (АКАРИЦИДНЫХ) СВОЙСТВ РЯДА СУБТРОПИЧЕСКИХ И ТРОПИЧЕСКИХ РАСТЕНИЙ В ОТНОШЕНИИ ПАУТИННОГО КЛЕЩА TETRANYCHUS ATLANTICUS MСGREGOR Специальность: 06.01.07 – защита растений Диссертация на соискание учёной степени кандидата биологических наук Научный руководитель: Попов Сергей...»

«СЫРКАШЕВА Анастасия Григорьевна СОВРЕМЕННЫЕ ПОДХОДЫ К ПОВЫШЕНИЮ ЭФФЕКТИВНОСТИ ПРОГРАММ ВСПОМОГАТЕЛЬНЫХ РЕПРОДУКТИВНЫХ ТЕХНОЛОГИЙ У ПАЦИЕНТОК С ДИСМОРФИЗМАМИ ООЦИТОВ 14.01.01акушерство и гинекология Диссертация на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Научные руководители: доктор...»

«ЯМБОРКО Алексей Владимирович ПОПУЛЯЦИОННАЯ ЭКОЛОГИЯ ЛЕСНЫХ ПОЛЕВОК (род CLETHRIONOMYS) СЕВЕРО-ВОСТОЧНОЙ АЗИИ Специальность 03.02.08 – экология Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: доктор биологических наук Н.Е. Докучаев Магадан – 2015 ОГЛАВЛЕНИЕ ВВЕДЕНИЕ.. Глава 1. МАТЕРИАЛ И...»

«Ульянова Онега Владимировна МЕТОДОЛОГИЯ ПОВЫШЕНИЯ БЕЗОПАСНОСТИ БАКТЕРИАЛЬНЫХ ВАКЦИН НА МОДЕЛИ ВАКЦИННЫХ ШТАММОВ BRUCELLA ABORTUS 19 BA, FRANCISELLA TULARENSIS 15 НИИЭГ, YERSINIA PESTIS EV НИИЭГ 03.02.03 – микробиология Диссертация на соискание ученой степени доктора биологических наук Научный консультант:...»

«Будилова Елена Вениаминовна Эволюция жизненного цикла человека: анализ глобальных данных и моделирование 03.02.08 – Экология Диссертация на соискание ученой степени доктора биологических наук Научный консультант доктор биологических наук, профессор А.Т. Терехин Москва 2015 Посвящается моим родителям, детям и мужу с любовью. Содержание Введение.. 5 1. Теория эволюции жизненного цикла. 19...»

«Аканина Дарья Сергеевна РАЗРАБОТКА СРЕДСТВ ДЕТЕКЦИИ ВЫСОКОВИРУЛЕНТНОГО ШТАММА ВИРУСА ГРИППА А ПОДТИПА Н5N 03.02.02 – вирусология Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель Д.б.н., профессор Гребенникова Т. В. Москва 20 ОГЛАВЛЕНИЕ Список использованных сокращений 1. Введение 2. Обзор литературы 2.1. Описание заболевания 2.2. Общая характеристика вируса гриппа 2.3. Эпидемиология вируса гриппа А...»

«Гуськов Валентин Юрьевич МОРФОЛОГИЧЕСКАЯ И ГЕНЕТИЧЕСКАЯ ИЗМЕНЧИВОСТЬ БУРОГО МЕДВЕДЯ URSUS ARCTOS LINNAEUS, 1758 ДАЛЬНЕГО ВОСТОКА РОССИИ 03.02.04 – зоология Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель доктор биологических наук, с.н.с. А.П. Крюков Владивосток – 2015 Оглавление Введение Глава 1. Обзор...»

«Искам Николай Юрьевич ЭФФЕКТИВНОСТЬ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ НОВОЙ КОРМОВОЙ ДОБАВКИ АЦИД-НИИММП НА ОСНОВЕ ОРГАНИЧЕСКИХ КИСЛОТ ПРИ ПРОИЗВОДСТВЕ ГОВЯДИНЫ 06.02.10 – частная зоотехния, технология производства продуктов животноводства; 06.02.08 – кормопроизводство, кормление сельскохозяйственных животных и технология кормов. ДИССЕРТАЦИЯ на...»

«Труш Роман Викторович ФАРМАКО-ТОКСИКОЛОГИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ СКАЙ-ФОРСА И ЕГО ЭФФЕКТИВНОСТЬ ПРИ КОЛИБАКТЕРИОЗЕ ЦЫПЛЯТ-БРОЙЛЕРОВ 06.02.03 – ветеринарная фармакология с токсикологией Диссертация на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук Научный руководитель Горшков Григорий Иванович заслуженный деятель науки РФ, доктор биологических наук, профессор Белгород – п. Майский 2015 г. СОДЕРЖАНИЕ...»

«САФИНА ЛЕЙСЭН ФАРИТОВНА Анафилактический шок на ужаления перепончатокрылыми насекомыми (частота встречаемости, иммунодиагностика, прогнозирование) 14.03.09 – клиническая иммунология, аллергология Диссертация на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Научный...»

«ЕГОРОВА Ангелина Иннокентьевна МОРФОФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ ОСОБЕННОСТИ СТРУКТУРЫ ЩИТОВИДНОЙ ЖЕЛЕЗЫ У МУЖЧИН КОРЕННОЙ И НЕКОРЕННОЙ НАЦИОНАЛЬНОСТИ ЯКУТИИ В РАЗНЫЕ СЕЗОНЫ ГОДА 03.03.04 – клеточная биология, цитология, гистология Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научные руководители: доктор медицинских наук, профессор Д.К....»

«КЛЁНИНА АНАСТАСИЯ АЛЕКСАНДРОВНА УЖОВЫЕ ЗМЕИ (COLUBRIDAE) ВОЛЖСКОГО БАССЕЙНА: МОРФОЛОГИЯ, ПИТАНИЕ, РАЗМНОЖЕНИЕ Специальность 03.02.08 – экология (биология) (биологические науки) Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: кандидат биологических наук, доцент Бакиев А.Г. Тольятти – 2015 СОДЕРЖАНИЕ ВВЕДЕНИЕ ГЛАВА 1. К...»

«Степина Елена Владимировна ЭКОЛОГО-ФЛОРИСТИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА СТЕПНОЙ РАСТИТЕЛЬНОСТИ ЮГО-ЗАПАДНЫХ РАЙОНОВ САРАТОВСКОЙ ОБЛАСТИ 03.02.08 – экология (биологические науки) Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: доктор...»







 
2016 www.konf.x-pdf.ru - «Бесплатная электронная библиотека - Авторефераты, диссертации, конференции»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.