WWW.KONF.X-PDF.RU
БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА - Авторефераты, диссертации, конференции
 


Pages:     | 1 |   ...   | 3 | 4 || 6 |

«ТЕОРЕТИЧЕСКИЕ И ПРАКТИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ МОДЕЛИРОВАНИЯ ХРОНИЧЕСКОЙ ГЕРПЕСВИРУСНОЙ ИНФЕКЦИИ ...»

-- [ Страница 5 ] --

Анализ клинико-лабораторных исследований показал, что у всех пациентов в день обращения клинические проявления рецидива генитальной герпесвирусной инфекции регистрировались в 100% случаев. Антиген ВПГ методом ИФ был выявлен в клетках слизистой оболочки урогенитального тракта и/или эрозивных поражений в 100% случаев. В сыворотке крови пациентов методом ИФА были диагностированы иммуноглобулины класса М (Ig M) к ВПГ, что подтверждало начало рецидива.

У пациентов группы 1, получавших только антивирусный препарат «Ацикловир Гекса», снижение остроты клинических проявлений рецидива генитального герпеса наблюдалось на 7-е сутки в 33,3% случаев, эпителизация эрозивных повреждений кожи полового органа и промежности – на 10-е сутки в 66,6% случаев.

Антиген ВПГ методом ИФ выявлялся в клетках слизистой оболочки урогенитального тракта и/или эрозивных поражений на 10-е сутки у 44,4%. Анализ результатов исследований гематологических показателей и уровня цитокинов ИЛ-1, ИЛФНО- ИЛ-4 в сыворотке крови выявил положительную динамику изменений, характерную для стадии окончания рецидива.

У пациентов группы 2 к 7-ым суткам клинические проявления рецидива генитального герпеса наблюдались в 50% случаев, эпителизация эрозивных повреждений кожи полового органа и промежности – на 10-е сутки в 75% случаев. Антиген ВПГ методом ИФ выявлялся в клетках слизистой оболочки урогенитального тракта и/или эрозивных поражений на 10-е сутки у 37,5%. Показатели остроты воспалительных реакций достоверно снижались и имели более выраженный характер, чем у пациентов группы 1. Полученные результаты соответствовали показателям стадии ремиссии заболевания.

Таким образом, применение лиофилизированный препарат АФБ в комплексном лечении рецидива генитального герпеса у человека показало, что он оказывает локальное противовоспалительное и противовирусное действие.

2.2.4.3 Оценка популяционного здоровья крупного рогатого скота по усовершенствованному алгоритму диагностики ГВИ Адекватность экспериментальной модели ГВИ для оценки популяционного здоровья крупного рогатого скота была изучена совместно с сотрудниками отдела мониторинга и прогнозирования инфекционных болезней Уральского НИВИ (Е.Н. Шилова, И.М. Донник, Е.В. Печура и др.). Клинико-лабораторные исследования, проведенные по усовершенствованному алгоритму диагностики герпетической инфекции, показали, что герпесвирус инфекционного ринотрахеита (ИРТ) выявлялся в 42% модельных хозяйств Уральского региона. Клинические проявления ИРТ у телят регистрировались в 43% случаев: острое воспаление с развитием крупозной пневмонии – 23%, диарея – 66,8%, конъюнктивиты и кератоконъюнктивиты – 26,9% (рисунок 44, 45).

Рисунок 44 – Клиническое проявление ИРТ у теленка – поражение носогубного зеркала. Фотография Е.В. Печура, А.П. Порываевой.

Рисунок 45 – Клиническое проявление ИРТ у теленка – конъюнктивит. Фотография Е.В. Печура, А.П. Порываевой.

Генитальная форма ИРТ (пустулезный вульвовагинит) у коров и телок регистрировалась в 30,5% случаев. У большинства животных в период стельности наблюдался рецидив заболевания с четко выраженной клинической картиной – многочисленные различной величины везикулы и эрозии на слизистой влагалища, его преддверии и вульве. (рисунок 46, 47) По данным отчетности ветеринарной службы у инфицированных коров при острой форме генитального ИРТ уровень абортов составлял 4,5%, у нетелей – до 11,5 %.

Рисунок 46 – Поражение вирусом ИРТ слизистой оболочки преддверия влагалища. Фотография Е.В. Печура, А.П. Порываевой.

Рисунок 47 – Пустулезный вульвовагинит. Фотография Е.В. Печура, А.П. Порываевой.

Клинико-лабораторные исследования в референтной группе животных (32 головы) показали, что в период лактации у коров в 58,5% случаев методом РНИФ была диагностирована бессимптомная персистенция возбудителя в клетках слизистой оболочки носа и генитального тракта. При оценке выраженности воспалительного процесса было установлено, что практически у всех обследованных животных показатель ЛИИ в 2,9 раза превышал нормативные показатели, что соответствовало средней степени интоксикации. О продукции токсинов на фоне бессимптомной персистенции вируса ИРТ свидетельствовало повышение уровня ЦИК в сыворотке крови (до 219,4 ус.е.).

Нарушения иммунорегуляторной функции в виде снижения количества Тлимфоцитов, были выявлены при обследовании иммунного статуса в 87,5 % случаев. В 56,2 % случаев регистрировалось снижение в 1,7 раза уровня фагоцитарной активности мононуклеарных клеток. Достоверных изменений в уровнях биохимических показателей крови не наблюдалось.

Таким образом, проведенные исследования показали, что при генитальной форме ИРТ репродукция возбудителя происходила на разных уровнях локализации очагов персистенции, что обеспечивало постоянную антигенную нагрузку на организм коров. Стратегия персистенции вирусного генома и вариабельность реализации его инфекционного потенциала обуславливало развитие патологических изменений в защитно-приспособительных реакциях клеточного звена иммунитета.

2.2.4.4 Эффективность применения лиофилизированного препарата АФБ в лечении коров с генитальной формой инфекционного ринотрахеита Лечение сельскохозяйственных животных от заболеваний герпесвирусной этиологии также является важной задачей. Для лечения вульвовагинита крупного рогатого скота, например, используют вакцины, приготовленные на основе штамма вируса герпеса ИРТ, вызывающего данное заболевание (Патент RU 2279474, МПК С12N7/00, А61К39/265, С12R1/93, 2006).

Однако большинство известных средств и составов, применяемых при генитальной форме ИРТ у коров имеют побочные эффекты. Кроме того, почти все известные препараты не вызывают регенерацию поврежденных вирусом тканей.

Изучение возможности применения лиофилизированного препарата АФБ для лечения генитальной формы ИРТ у коров было проведено в референтной группе животных в период стельности. Исследование проводили совместно с сотрудниками отдела инфекционной патологии животных Уральского НИВИ и АОА «Мезенское», Белоярского района.

Референтная группа животных была представлена 18 коровами уральского типа черно-пёстрой породы 2-ой лактации. Диспансеризацию референтных животных проводили во второй половине стельности. Клинический осмотр коров проводили на 1, 3, 7 и 10 день лечения. При осмотре учитывали наличие: 1) везикулезных и пустулезных элементов, эрозий и изъязвлений в вульве; 2) гиперемии и отека тканей половых органов. Интенсивность клинических проявлений выражали в процентах.

В качестве оценки выраженности воспалительного процесса использовали лейкоцитарный индекс интоксикации (ЛИИ) – по формуле Я. Я. Кальф-Калифа с учетом всех клеточных элементов лейкограммы, в сыворотке определяли уровень ЦИК по стандартной методике.

Для лечения герпетических эрозий препарат АФБ приготавливали в виде линимента. В качестве протектора применялся тизоль. Концентрация препарата АФБ составляла 50 тыс. клеток на 1 см3 тизоля. Лечение животных проводили по схемам представленных в таблице 20. По результатам клинических наблюдений рассчитывали индекс эффективности применения препарата (ИЭ):

Р1 ИЭ=, где Р2 Р1- показатель выраженности клинических проявлений пустулезного вульвита в группе 3 (в %);

Р2 – показатель выраженности клинических проявлений пустулезного вульвита в группе 1 или группе 2 (в %).

Результаты применения препарата АФБ для лечения генитальной формы инфекционного ринотрахеита коров в период стельности показаны в таблице 21.

–  –  –

При анализе полученных результатов лечения было установлено, что наружное применение препарата АФБ в концентрации 50 тыс. клеток на 1 см3 тизоля приводит к купированию воспалительного процесса, обусловленного генитальной инфекцией Herpesvirus bovis 1. У всех коров из группы 1 после проведенного лечения было зарегистрировано снижение интенсивности основных клинических проявлений герпетического вульвовагинита на 25 – 50%. Отмечено также снижения уровня количества элементов пустулезной сыпи на 37,5%, что свидетельствовало об ингибировании репродукции вируса. Индекс эффективности применения препарата АФБ при лечении в референтной группе 1 составлял 3,34.

–  –  –

У коров референтной группы 2 при нанесении на пораженные участки слизистой преддверия влагалища «тизоля» выраженного лечебного эффекта не наблюдалось. У одного животного было отмечено снижение интенсивности основных клинических проявлений герпетического вульвовагинита на 17,5 %. Индекс эффективности применения препарата «тизоль» в референтной группе 2 (контроль) составлял 1,06.

При исследовании образцов крови коров с генитальной формой ИРТ перед лечением регистрировались изменения в составе нейтрофильных гранулоцитов:

увеличение процентного состава миелоцитов, палочкоядерных и юные нейтрофилов до 35,8%. Выраженность воспалительной реакции характеризовалась средней и тяжелой степенью интоксикации в 83,3% случаев.

Анализ результатов гематологического исследования показателей воспалительной реакции после лечения у животных 1 группы выявил положительную тенденцию изменений, характерную для стадии окончания рецидива. Отмечалось некоторое снижение уровня ЦИК – в 1,2 раза по сравнению с показателями у животных 2 и 3 группы. ЛИИ соответствовал средней степени интоксикации.

Таким образом, действие препарата АФБ при лечении герпетического вульвовагинита суммарно выражалось в селективном ингибировании репродукции вируса в клетках слизистой оболочки, что снижало интенсивность воспалительной реакции и ускоряло процессы регенерации тканей преддверия влагалища у коров.

Сравнительный анализ результатов клинико-лабораторных обследований и экспериментально-лабораторных исследований доказал валидность экспериментальной модели хронической ГВИ и достаточно высокий уровень экстраполяции полученных данных в отношении человека и животных. Воспроизведение герпесвирусной инфекции на рандбредных мышах-самцах является потенциально эффективной моделью для разработки ряда научных и прикладных вопросов биологии. В частности, для решения прикладных вопросов медицинской и ветеринарной вирусологии для изучения патологических процессов при хронических заболеваниях, обусловленных возбудителями Herpesviridae, в популяциях человека и животных. Полученные экспериментальные данные могут быть использованы и в настоящее время используются для создания научно-обоснованной системы оценки популяционного здоровья человека и животных в условиях герпесвирусного инфицирования. Разработанная модель может быть использована при изучении эффективности антивирусных препаратов для лечения заболеваний человека и животных, вызванных вирусом герпеса.

152

ЗАКЛЮЧЕНИЕ 3.

Убиквитарное распространение вирусов позволяет рассматривать их как обязательный компонент биосферы. Вирусы, как векторы, в прямом и косвенном обмене генетической информацией являются одним из важных факторов эволюции (Жданов В.М., Гайдамович С.Я., 1987). В этом отношении представители Herpesviridae не составляют исключения. Герпесвирусы обнаружены у различных видов организмов, включая беспозвоночных, холоднокровных позвоночных, птиц и млекопитающих. Высокая вариабельность герпесвирусов является фактором потенциальной опасности неконтролируемого распространения инфекции в популяциях животных и человека [11, 14, 33, 105, 129]. Пожизненная персистенция вируса в организме, разнообразие клинических проявлений рецидивов инфекции, связь герпесвирусов с онкогенезом делают герпетическую инфекцию подходящей моделью для разработки ряда общебиологических проблем.

Важное значение имеют исследования на уровне макроорганизма, направленные на изучение стратегии персистенции вирусного генома, течения герпетической инфекции и ее патогенеза. Решение этих проблем осуществляется через разработку более частных задач, таких как изучение самого вируса и условий проявления его инфекционной потенции.

В результате проведенных исследований на экспериментальной модели in vivo было показано, что персистирующий вирус формирует в организме животного множественные очаги инфекции, обеспечивающие постоянную антигенную нагрузку на организм; развитие хронического процесса сопровождается сложным комплексом патологических изменений на клеточном и органном уровнях, приводящем к функциональному перенапряжению организма; хроническая воспалительная реакция, вызванная герпесвирусной инфекцией, активирует субклинические аутоиммунные процессы, усугубляя тяжесть и интенсивность патологических изменений в организме.

При оценке влияния герпесвирусной инфекции на репродуктивные ткани экспериментальных животных было установлено, что патогенное действие ВПГ на сперматогенез осуществляется на уровне клеток сперматогенного эпителия с формированием в них абортивной формы инфекции. Подтвержден риск вертикальной передачи вируса подвижными сперматозоидами нормальной морфологии, которые содержат ДНК либо белки стадий жизненного цикла вируса простого герпеса. Инфицирование эмбрионов вирусом проявляется в виде неонатального диссеминированного герпеса с вовлечением висцеральных органов.

На основе полученных экспериментальных данных был усовершенствован алгоритм диагностики герпесвирусной инфекции с использованием устройства на основе лазерного модуля для оценки активности вируса в клеточной системе и доказана эффективность иммунобиологического лиофилизированного препарата аллофибробластов (АФБ) для лечения поражений кожи и слизистых при генитальном герпесе у человека и пустулёзного вульвита у крупного рогатого скота.

3.1 Обсуждение

Вирусы семейства Herpesviridae в структуре инфекционных заболеваний человека и животных занимают одно из первых мест. Уровень инфицированности населения в Российской Федерации и странах СНГ достигает 70%, такая же тенденция характерна для популяции сельскохозяйственных животных. [37, 56, 105, 114].

На современном этапе одной из актуальных задач медицины и ветеринарии является обеспечение условий снижения риска распространения герпетических заболеваний и оценка влияния взаимодействия «вирус-хозяин» на состояние популяционного здоровья человека и животных [9, 26, 39, 53, 58, 65, 79, 89, 110, 123, 131, 143, 153, 157].

Генетическая общность герпесвирусов человека и животных позволяет использовать эталонные штаммы для создания экспериментальных моделей in vivo при изучении общебиологических проблем [30, 33, 142].

Экспериментальные модели ГВИ in vivo были изучены Баринским И.Ф., Шубладзе А.К., Бочаровым А.Ф., Розиной Э.Э., Bedson S.P., Milligan G.N. и другими исследователями и создавались для конкретных форм заболеваний путем непосредственного введения антигена в исследуемый орган или систему [8, 15, 57, 101, 141, 150, 155, 158].

В результате проведенных нами исследований было показано что моделирование ГВИ путем внутрибрюшинного введения вирусного антигена лабораторным мышам-самцам обеспечивает максимальную диссеминацию вируса в организме, и дает возможность изучать механизмы персистенции возбудителя в период рецидив-ремиссия. Наши данные о способе заражения согласуются с исследованиями Лоскутова И.Д. (1996), Розиной Э.Э. (1972), которые наблюдали оптимальность данного способа введения для детального изучения хронической, латентной и персистентной инфекции в течение 210 суток.

Полученная экспериментальная модель герпетической инфекции на рандбредной популяции лабораторных мышей-самцов позволила наблюдать инфекционный процесс в течение 460-и суток. За период наблюдения было зарегистрировано 5 периодов клинических проявлений ГВИ, которые чередовались с периодами «клинического благополучия», что соответствовало «классической» форме течение герпесвирусного заболевания – «рецидив – ремиссия» [37, 81].

Острая клиническая симптоматика герпетического заболевания: катаральный конъюнктивит, стоматит, выраженный менингиальный синдромом и острая интоксикация отмечалась только на стадии первичного инфицирования (до 30-х суток наблюдения). Длительная персистенция вируса в организме экспериментальных мышей-самцов проявлялась тремя основными формами инфекции: хроническая рецидивирующая; хроническая латентная; медленная. «Медленная» форма ГВИ регистрировалась в 3,6 % случаев, «Хроническая рецидивирующая» и «Хроническая латентная» формы – в 96,4% случаев. Полученные результаты совпадают с исследованиями Баринского И.Ф., Коломийца А.Г., Бикбулатова Р.М., Stevens J. с соавторами, доказавшим в опытах на лабораторных животных, что хроническая рецидивирующая; хроническая латентная; медленная инфекции развиваются только при длительной персистенции вируса в организме.

Изучение развития герпесвирусной инфекции и переход её в хроническую форму в эксперименте in vivo показало, что механизм развития хронического герпесвирусного заболевания «запускается» с момента проникновения вируса в организм. Вирусная экспансия «органов-мишеней» происходила в течение 15 – 17-и суток после инфицирования. Одним из факторов длительной презентации вирусного антигена в эндотелии сосудов и околососудистой зоне являлось нарушение холестеролового метаболизма у экспериментальных мышей.

В сосудах органов формировались микроочаги репродукции ВПГ, что и обеспечивало постоянную антигенную нагрузку. Репродукция ВПГ в самих тканях «органов-мишеней» – головного и спинного мозга, легких, печени и почек мышей также происходила непрерывно. В периоды клинических рецидивов заболевания репродукция вируса реализовалась в виде литической и латентной формы инфекции; в периоды клинической ремиссии – в виде латентной и абортивной формы.

Стратегия персистенции вирусного генома и вариабельность реализации его инфекционного потенциала обеспечивали «замыкание» хронического вирусного процесса.

В работах российских и зарубежных исследователей показано, что стратегия персистенции ВПГ являются определяющим звеном в регуляции баланса между «организмом – носителем» и «инфекционным агентом» [36, 40, 60, 112, 129, 140, 145, 152, 157].

Полноценный иммунный ответ на первичную ГВИ не обеспечивает полную элиминацию ВПГ из организма «хозяина». Защитно-приспособительные реакции организма у экспериментальных мышей разворачивались в условиях «постоянного стресса». В условиях хронической герпесвирусной нагрузки развивается состояние функционального перенапряжения организма. Так, нарушение иммунорегуляторных процессов выражалось в количественных и качественных изменениях клеточного иммунитета. В крови количество Т-лимфоцитов было снижено почти в 1,5 раза, в составе нейтрофильных гранулоцитов преобладали палочкоядерные Н (до 27,6%), юные Н и миелоциты (до 15,8%). Индекс миграции фагоцитирующих клеток возрастал почти в 2 раза. Однако, высокий уровень ЦИК в крови экспериментальных мышей, который в 2,5-3,7 раза превышал естественный уровень, свидетельствовал о функциональной неполноценности фагоцитирующих клеток.

Концентрация активных форм кислорода в лейкоцитарных клетках была чрезмерной и оказывала дестабилизирующие действие на клеточные мембраны, инициируя процессы перекисного окисления липидов, о чём свидетельствовал высокий уровень МДА (8,08 – 9,76 нмоль/л). Вероятно, что это являлось одной из причин угнетения и истощения функциональной активности лейкоцитарных клеток.

Аналогичные изменения фагоцитарной функции наблюдались у перитонеальных макрофагов и спленоцитов [93].

Такие изменения наблюдаются у пациентов с иммунодифицитными состояниями, что отражено в работах Архипова Г.С., Исакова Е.И., Белозерова Е.С., Кистеневой Л.Б., Лаврова В.Ф. и других [4, 11, 38, 95, 50, 57, 64, 71, 95, 116, 125, 129, 131].

Снижение функций иммунной системы осложнялось тяжелыми проявлениями воспалительной реакции. Наблюдался выраженный дисбаланс между уровнем цитокинов и медиатором воспалительной реакции – гистамином. Содержание гистамина было в 2-3 раза выше нормальных значений, однако уровень провоспалительных цитокинов достоверно не изменялся, наблюдался рост уровня только противовоспалительного ИЛ-4.

Анализ результатов исследований показателей воспалительной реакции установил, что у инфицированных животных сформировался сложный комплекс неспецифических, метаболических и функциональных расстройств. Тяжелые метаболические расстройства характеризовались нарушением углеводного и липидного обмена. У животных наблюдались гипогликемия, интенсивный рост уровня аминотрансфераз и холестерина.

Полученные данные согласуются с результатами Мальханова В.Б. с соавторами, Носика Н.Н., Смагина М.А. при изучении воспалительного стресса у человека при ГВИ [60, 62, 63, 75, 112].

Деструктивные эффекты иммуносупрессивного воздействие вируса выражались в тяжелых дистрофических изменениях во всех системах и органах экспериментальных животных. В тканях органов (печень, почки, селезенка, легкие, головной и спинной мозг) обнаруживались очаги некробиоза и дискомплексации, диффузная лимфоидная гиперплазия и инфильтрация; воспалительная трансформация эндотелия капилляров и посткапиллярных венул. В патологический инфекционный процесс были вовлечены и репродуктивные органы. В тканях семенников выявлялись дистрофические и некробиотические изменения, лимфоидная инфильтрация и микроциркуляторные расстройства в сосудистом русле.

Таким образом, сложный комплекс патологических изменений в организме экспериментальных животных был обусловлен как прямым, так опосредованным действием вируса простого герпеса. Множественные очаги персистенции ВПГ в организме индуцировали иммунодефицитное состояние, которое осложнялось генерализацией воспалительной реакции и развитием полиорганной дисфункции.

В работах Бочаровой Е.Н. (2008), Брагиной Е.Е. с соавторами (2000), Климова Р.Р. с соавторами (2010), Луцкого Д.Л. с соавторами (2011) было показано, что одной из причин идиопатического бесплодия является нахождение в эякуляте вирусов герпеса [16, 17, 43, 55].

В доступной литературе обнаружено мало сведений о патогенном действии ВПГ на сперматогенез.

При диссеминации вируса в репродуктивные ткани происходит формирование множественных локальных очагов с латентной, хронической и медленной формами инфекции. Гистологические исследования показали, что структурные изменения в виде расстройства микроциркуляции в сосудистом русле семенников инфицированных мышей-самцов формируются к 120-м суткам. Через 6 месяцев после инфицирования возникают явления отека интерстициальной ткани семенника.

Вокруг мелких и крупных сосудов наблюдалась лимфоидная инфильтрация, в самих сосудах – стаз крови и тромбоз. В просвете канальцев обнаруживались отторгшиеся клетки спермиогенного эпителия и клеточный детрит. Морфоструктурные изменения достигают максимума на 220 – 240-е сутки. На гистологических препаратах поперечных срезов семенников выявлены дистрофические изменения и очаговый некробиоз паренхиматозной ткани спермиогенного эпителия, периваскулярные инфильтраты, склероз, дезинтеграция клеток и обнажение клеток Сертоли. В ряде случаев отмечался частичный некроз перегородки между семенными канальцами и некробиоз сперматоцитов. В стенке части семенных канальцев наблюдался незавершенный процесс сперматогенеза с образованием сперматозоидов без хвостовой части. Общее количество патологических форм сперматозоидов к 120-ым суткам заболевания составляло 17, 6% в эякуляте, к 200-ым – 32,1% и к 420-ым – свыше 40%. Патологические формы сперматозоидов характеризовались аномалиями головки и жгутика. Учитывая полученные результаты о повышении числа патологических форм сперматозоидов, мы считаем правомерным утверждать, что у экспериментальных животных развитие ХГВИ сопровождается тератозооспермией.

Важнейшим фактором фертильности сперматозоидов является сохранение их подвижности. Количество прогрессивно подвижных сперматозоидов (a+b) должно составлять не менее 50% [103]. В исследуемых образцах эякулятов содержание с непоступательным движением и неподвижных c-сперматозоидов dсперматозоидов увеличивалось до 56,7 ± 3,5%, у интактных мышей-самцов суммарно такие формы не превышали 30%. Во фракции прогрессивно подвижных сперматозоидов (a+b) у экспериментальных самцов превалировали bсперматозоиды с медленным поступательным движением (до 40%). Причинами изменения фертильности сперматозоидов являлось не только инфицирование репродуктивных тканей. При герпесвирусной инфекции у экспериментальных мышей-самцов сформировался сложный комплекс метаболических и иммунных нарушений, который прямо или опосредованно мог влиять на подвижность сперматозоидов.

Так в сыворотке крови у мышей с ХГВИ содержание глюкозы почти в 2 раза ниже, чем у интактных животных. Глюкоза, по общему признанию является основным энергетическим субстратом для многоклеточного организма. Её производная – фруктоза – основной энергетический субстрат для сперматозоидов, отвечающий за двигательные характеристики половых клеток и их оплодотворяющие способности [16, 55].

В наших исследованиях было показано, что развитие ХГВИ сопровождается выраженным лейкоцитозом. Таким образом, мы можем утверждать, что изменение подвижности сперматозоидов у экспериментальных животных связано со снижением уровня фруктозы. Дисбаланс провоспалительных и противовоспалительных цитокинов также может являться провоцирующим фактором в угнетении подвижности сперматозоидов.

Основной причиной бесплодных браков считается бессимптомная герпесвирусная инфекция у женщин [1, 2, 12, 72, 115]. Однако, в работах Бочаровой Е.Н.

(2008), Брагиной Е.Е. (2000) и ряда других исследователей было показано, что морфологически нормальные сперматозоиды могут содержать в своей структуре вирусные детерминаты [16, 17, 43, 147].

В наших исследованиях было показано, что сперматозоиды, несущие вирусные белки, способны к преодолению защитных механизмов женских половых путей и оплодотворению. В развивающихся эмбрионах вирусная информация реализуется в виде латентной внутриутробной герпесвирусной инфекции, что вызывало патологические изменения на органном и системном уровне у плодов.

Внутриутробная гибель плода наблюдалась в 2% случаев. При вскрытии в рогах маток были обнаружены плоды с очагами некротических изменений. При лабораторных исследованиях тканей плодов и маток погибших мышей самок методами ПЦР и РИФ в них обнаруживались вирусная ДНК и антиген ВПГ.

Развитие герпетического заболевания у мышат, обусловленного внутриутробным инфицированием, имело ряд характерных особенностей.

В недельный период после рождения погибло 39 мышат (24,8%). Вирусологическими исследованиями антиген вируса герпеса был обнаружен в тканях головного и спинного мозга у 12,8% от общего числа погибших мышат. В гистологических образцах от погибших животных выявлены патологические изменения органов. В органах ЦНС – лимфоидная инфильтрация оболочек, выраженный периваскулярный и перицелюллярный отек, хроматолиз и некробиоз в отдельных нейронах. В тканях легких и сердца – лимфоидная инфильтрация и отек стромы.

В почках, селезенке, поджелудочной железе – некробиоз клеток, гипоплазия лимфоидной ткани. В тканях печени у всех погибших мышат выявлена баллонная дистрофия и некроз гепатоцитов, пролиферация купферовских клеток, периваскулярная лимфоидная инфильтрация.

Второй всплеск гибели мышат был зарегистрирован на 20 – 25-е сутки после рождения. В течение 2-3 суток, предшествующих смерти, у мышат наблюдалось развитие симптоматики поражения нервной системы – параличи одной или обеих задних лап, менингиальные явления. Вирусологические исследования показали сочетанное инфицирование органов ЦНС, сердца и печени – 55,1% случаев.

Необходимо подчеркнуть, что в клетках внутренних органов ВПГ в 94,3% случаев обнаруживался в виде вирусной ДНК и только в 4,2%– в виде вирусного антигена.

Примечательно, что в клетках слизистых оболочек ВПГ не определялся ни одним из применяемых методов. Полученные результаты свидетельствуют о персистенции вируса в организме мышей, инфицированных внутриутробно.

Результаты наших исследований согласуются с данными Бокового А.Г. (2008), Канна Ю.Н. (2008), Кистеневой Л.Б. (2003), Несевича Л.Л. с соавторами (2008) и других по клиническому проявлению ГВИ у детей [14, 39, 42, 72].

Таким образом, воспроизведение герпесвирусной инфекции на рандбредных мышах-самцах является потенциально эффективной моделью для разработки ряда научных и прикладных вопросов биологии.

Одной из задач нашей работы было усовершенствование алгоритма диагностики герпесвирусной инфекции с учетом полученных данных на экспериментальной модели и использованием современных методов детекции возбудителя.

В клинической и ветеринарной практике случаи диагностирования «первичной герпесвирусной инфекции» составляют не более 1-2% [11, 110, 116, 128, 134, 135]. Основной массой являются пациенты с хроническим вирусным процессом.

Для назначения адекватной противовирусной терапии у них необходимо проводить диагностические исследования по определению инфекционной активности ВПГ с использованием метода «выделение вируса на клеточной культуре». Время, необходимое на проведение данного исследования составляет от 24 до 120 часов [36, 44, 105, 129, 131].

В разработанном нами алгоритме диагностики было применено устройство, состоящее из лазерного модуля, формирующего поток когерентного излучения для оценки метаболической активности клеток при вирусном инфицировании [патент на полезную модель № 140 765 Российская Федерация / Владимиров А.П., Глинских Н.П., Порываева А.П., Малыгин А.С. и др.: опубликовано 20.05.2014, Бюл. № 14, С. 2]. Использование нового метода позволило проводить исследование инфекционной активности вируса в режиме «скрининг – анализ», что значительно повысило уровень и качество проводимой диагностики.

Алгоритм диагностики герпетической инфекции был применен при исследовании клинических материалов референтной популяции человека.

При исследовании пациентов мужчин с различными формами генитального герпеса было показано, что в период манифестации заболевания антиген ВПГ в 80,8% случаев обнаруживался в образцах эпителиальных клеток уретры, и 36% случаев в эпителии слизистых оболочек глаз, щек и миндалин.

При рецидиве генитального герпеса в клиническом анализе крови у мужчин регистрировался лейкоцитоз (17,5 ± 0,49109/л), ускорение СОЭ (28,7 ± 1,53 мм/ч) и изменение процентного соотношения клеточных элементов крови в лейкоцитарной формуле – нейтрофилов 69,7 ± 3,41 %, лимфоцитов 24,18 ± 0,05 %. При оценке выраженности воспалительного процесса показатель ЛИИ, по сравнению с показателем практически здоровых пациентов, был увеличен почти в 2,5 -3,6 раза.

Об усиленной продукции токсинов на фоне рецидива вирусной инфекции и недостаточности компенсаторной защиты организма у больных свидетельствовало повышение уровня ЦИК, увеличение содержания МДА и противовоспалительного гормона кортизола в сыворотке крови. Исследования цитокинового профиля пациентов показали, что рецидив заболевания у них сопровождался выраженным дисбалансом между провоспалительными и противовоспалительными интерлейкинами (ИЛ-1, ИЛ-6, ИЛ-4 и ФНО – ). Наиболее выраженные нарушения компенсаторной защиты выявлялись у пациентов с тяжелой степенью интоксикации.

Стойкие нарушения иммунорегуляторной функции в виде снижения количества Т-лимфоцитов, имеющих поверхностные рецепторы CD4 и CD8, были выявлены при обследовании иммунного статуса в 23,4% случаев. В 65,9% случаев регистрировалось снижение в 1,5 раза уровня фагоцитарной активности мононуклеарных клеток.

Аналогичные результаты были получены при обследовании референтной группы женщин, страдающих генитальным герпесом. Субклиническое течение инфекционного процесса на слизистых оболочках ротовой полости и глаз в 40,2% случаев диагностировано устройством оценки активности вируса в клеточных системах на основе лазерного модуля. Выраженность воспалительной реакции характеризовалась средней и тяжелой степенью интоксикации в 53,4% случаев.

Анализ результатов исследования цитокинового профиля у пациенток показал, что в 63% случаев регистрируется прогрессирующие повышение уровня ИЛ-6 на фоне умеренного увеличения концентрации ИЛ-1, ФНО- и ИЛ-4.

В 15,4% случаев рецидив ГВИ сопровождался невралгией бедренного нерва при выраженном дисбалансе цитокинов у пациенток в воспалительный процесс были вовлечены не только половые органы, но и область промежности, ягодичных складок, паха и внутренних поверхностей бедер [94, 96].

Алгоритм позволил выявлять атипичные формы герпесвирусной инфекции при невралгических, кардиологических заболеваниях [91, 83].

Таким образом, усовершенствованный алгоритм диагностики герпетической инфекции с использованием устройства для оценки активности вируса в клеточных системах существенно повышает качество и реальные возможности лабораторной практики. Своевременная диагностика заболевания позволила не только проводить адекватное антивирусное лечение, но и прогнозировать дальнейшее течение инфекции, при контроле результатов проводимой терапии.

Все известные препараты, применяемые в настоящее время для лечения герпесвирусных инфекций у человека, не вызывают регенерацию поврежденных вирусом тканей.

Возможность применения лиофилизированного препарата из аллофибробластов (АФБ) для лечения герпесвирусных заболеваний была изучена на экспериментальной модели ГВИ in vivo. Было показано, что препарат АФБ обладает многофункциональным действием, которое суммарно выражалось в селективном ингибировании клеточных антигенов, что снижало остроту воспалительной реакции и ускоряло процессы регенерации слизистых оболочек глаза и кожи у экспериментальных мышей с ГВИ; а также подавляло репродукцию вируса.

При применении препарата АФБ эпителизация эрозивных повреждений кожи и слизистых оболочек наблюдалась на 10-е сутки в 75% случаев. Показатели остроты воспалительных реакций достоверно снижались, имели более выраженный характер и соответствовали показателям стадии ремиссии заболевания.

У пациентов, получавших традиционное лечение на 10-е сутки эпителизация эрозивных повреждений наблюдалась 44,4%. Анализ результатов исследований гематологических показателей и уровня цитокинов ИЛ-1, ИЛ-6, ФНО- ИЛ-4 в сыворотке крови выявил положительную динамику изменений, характерную для стадии окончания рецидива.

Таким образом, применение лиофилизированного препарата АФБ в комплексном лечении рецидива генитального герпеса у человека показало, что он оказывает локальное противовоспалительное и противовирусное действие.

Адекватность экспериментальной модели ГВИ для оценки популяционного здоровья крупного рогатого скота была изучена в модельных хозяйствах Уральского региона.

По данным Петровой О.Г., Донник И.М., Шкуратовой И.А., Татарчука А.Т., Бурнадзе Т.П. с соавторами ущерб, наносимый циркуляцией возбудителя в стадах, выражается в падеже, преждевременной выбраковке животных, снижении оплодотворяемости и продуктивности животных. При тяжелых эпизоотиях отход составляет более 70%. [19, 79, 135].

Проведение клинико-лабораторные исследований по усовершенствованному алгоритму диагностики, показали, что герпесвирус инфекционного ринотрахеита (ИРТ) выявлялся в 42% исследуемых сельскохозяйственных предприятий.

У коров и телок генитальная форма ИРТ регистрировалась в 30,5% случаев от числа обследованных животных. Бессимптомная персистенция возбудителя в клетках слизистой оболочки носа и генитального тракта диагностировалась в 58,5% случаев. В 87,5 % случаев у них наблюдались нарушения иммунорегуляторной функции, выражающиеся снижением количества Т-лимфоцитов. В 56,2 % случаев регистрировалось снижение уровня фагоцитарной активности мононуклеарных клеток в 1,7 раза.

У телят клиническое проявление ИРТ сочеталось герпетическими поражениями конъюнктивы глаз, диареей, пневмонией в 43 % случаев. Бессимптомная персистенция возбудителя в клетках слизистой оболочки носа выявлена в 23% случаев.

При оценке выраженности воспалительного процесса было установлено, что практически у всех обследованных животных показатель ЛИИ в 2,9 раза превышал нормативные показатели, наблюдалось повышение уровня ЦИК в сыворотке крови (до 219,4 ус.е.), что соответствовало средней степени интоксикации.

Проведенные исследования показали, что независимо от формы ИРТ репродукция возбудителя происходила на разных уровнях локализации очагов персистенции, что обеспечивало постоянную антигенную нагрузку на организм животных.

Аналогичные данные получены Верещак Н.А., Шиловой Е.Н. при исследовании иммунодефицитных состояний у животных с инфекционными заболеваниями [21, 134].

Лечение сельскохозяйственных животных при заболеваниях герпесвирусной этиологии является актуальным. Большинство известных средств и составов, применяемых при генитальной форме ИРТ у коров имеют побочные эффекты и нетехнологичны.

Наружное применение препарата АФБ в концентрации 50 тыс. клеток на 1 см 3 тизоля при лечении генитального герпеса у крупного рогатого скота приводит к купированию воспалительного процесса, наблюдается снижение интенсивности основных клинических проявлений на 25 – 50 %, что свидетельствует об ингибировании репродукции вируса. Индекс эффективности применения препарата АФБ составляет 3,34.

Гематологические исследования показателей воспалительной реакции после лечения у животных выявили положительную тенденцию изменений, характерную для стадии окончания рецидива. ЛИИ соответствовал средней степени интоксикации. Действие препарата АФБ при лечении герпетического вульвовагинита суммарно выражалось в селективном ингибировании репродукции вируса в клетках слизистой оболочки, что снижало интенсивность воспалительной реакции и ускоряло процессы регенерации тканей преддверия влагалища у коров [25].

Таким образом, научно-обоснованная модель хронической герпесвирусной инфекции in vivo, отражает механизмы взаимодействия комплекса «инфекционный агент – макроорганизм». Валидность экспериментальной модели хронической герпесвирусной инфекции и высокий уровень экстраполяции полученных данных были установлены при сравнительных клинико-лабораторных исследованиях. Показано, что заболевание у человека, и у крупного рогатого скота развивается по сходному алгоритму. Для сохранения биологического потенциала и репродуктивного здоровья популяций человека и животных на основе экспериментальной модели был усовершенствован алгоритм диагностики герпесвирусных инфекций. Изучение эффективности антивирусных препаратов с использованием разработанной экспериментальной модели позволило оптимизировать комплекс лечебно-профилактических мероприятий, направленных на сохранение популяционного здоровья человека и животных.

166

3.2 Выводы

1. Для изучения стратегии персистенции герпесвирусного генома и вариабельности реализации его инфекционного потенциала разработана валидная экспериментальная модель на популяции лабораторных рандбредных мышей-самцов.

2. Реализация биологического потенциала инфекционного вируса в организме экспериментальной модели осуществляется через экспансию «органов – мишеней»: головного и спинного мозга, печени, легких, с формированием множественных очагов персистенции возбудителя. Диссеминирование герпесвирусного генома в ткани и сосудистое русло «органов – мишеней» происходит в течение 15 суток после инфицирования.

3. Алгоритм реализации биологического потенциала инфекционного вируса характеризуется фазностью его репродукции в тканях «органов – мишеней» в виде литической и абортивной форм, которые происходят непрерывно и одновременно в одном макроорганизме на разных уровнях локализации очагов персистенции возбудителя, что отражает патогенез процесса в естественных условиях.

4. Вариабельность реализации биологического потенциала инфекционного вируса является одним из определяющих факторов в нарушении баланса между «организмом – носителем» и «патогенным агентом». Нарушение баланса «хозяин

– вирус» обеспечивает развитие хронического процесса независимо от клинической формы заболевания.

5. Стратегия персистенции вирусного генома и вариабельность реализации его инфекционного потенциала вызывает развитие комплекса патологических изменений защитно-приспособительных реакций и метаболических процессов в организме экспериментальных животных:

– воспаление, как типовой патологический процесс, приобретает системный характер с нарушением кроветворных функций и выраженным дисбалансом провоспалительных и противовоспалительных цитокинов с доминированием последних;

– глубокие дистрофические изменения в периферических и центральных органах иммунитета с выраженным функциональным перенапряжением и истощением моноцитарно-макрофагального звена;

– формирование системного синдрома эндогенной интоксикации вследствие стойкого дисбаланса между белковым, углеводным и липидным обменом.

6. Развитие сложного комплекса патологических изменений на клеточном и органном уровнях в условиях хронического заболевания приводит к формированию полиорганной недостаточности у экспериментальных животных, способствующей диссеминации и риску распространения вирусного агента в окружающую среду.

7. Герпесвирус, как вектор генетической информации, оказывает негативное влияние на биологический потенциал животных-самцов:

– патогенное действие ВПГ на сперматогенез осуществляется на уровне клеток сперматогенного эпителия, что приводит к патологическим изменениям тканей семенников, количественного и качественного состава половых клеток;

– в подвижных сперматозоидах нормальной морфологии молекулярнобиологическими методами выявлен генетический материал герпесвируса.

8. Экспериментально подтвержден вертикальный путь передачи ВПГ при оплодотворении интактных мышей-самок сперматозоидами, содержащими генетический материал вируса. Персистенция вируса в развивающихся эмбрионах приводит к спонтанному абортированию, внутриутробной гибели плода или развитию неонатального диссеминированного герпеса у потомства.

9. У потомства инфицированных ВПГ мышей-самцов риск развития латентной и/или абортивной формы инфекции составляет свыше 60% случаев, что является негативным фактором, влияющим на биологический потенциал популяции в целом.

168

10. Усовершенствованный алгоритм диагностики позволяет оценить стратегию персистенции вирусного генома, вариабельность реализации его инфекционного потенциала и степень патологических изменений в макроорганизме.

11. Лиофилизированный препарат АФБ обладает локальным противовоспалительным и противовирусным действием, которое выражается в селективном ингибировании репродукции вируса в клетках слизистой оболочки, что снижает интенсивность воспалительной реакции и ускоряет процессы регенерации при лечении герпесвирусных заболеваний половых органов.

3.3 ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Внедрение методических подходов для оценки эффективности антивирусных препаратов с использованием разработанной экспериментальной модели, с целью оптимизации комплекса лечебно-профилактических мероприятий, направленных на сохранение популяционного здоровья человека и животных.

2. Рекомендации по сохранению биологического потенциала и репродуктивного здоровья популяций человека и животных на основе внедрения алгоритмов диагностики герпесвирусных инфекций с оценкой иммунного статуса, биохимического профиля и метаболического баланса живого организма.

3. Обеспечение условий снижения риска возникновения, распространения герпетических заболеваний, с целью стабилизации эпизоотической ситуации в популяции на основе внедрения комплекса разработанных лечебнодиагностических и профилактических мероприятий, рекомендуемых на основе материалов проведенного исследования.

169

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

АИ – индекс адгезии В/б – внутрибрюшинное введение В/м – внутримышечное введение ВБА – вирус болезни Ауески ВБМ – вирус болезни Марека ВГЧ-6 – вирус герпеса человека 6 типа ВПГ – вирус простого герпеса ВЭБ – вирус Эпштейн-Барр ГВИ – герпесвирусная инфекция ДК – дендритные клетки ИЛ – интерлейкин ИНФ – интерферон ИРИ – иммунорегуляторный индекс ИРТ – вирус инфекционного ринотрахеита ИФА – иммуноферментный анализ ЛИИ – лейкоцитарный индекс интоксикации ЛЭЧ – клетки легкого эмбриона человека М.

Д. № 25/у – медицинская документация № 25/ учет МДА – малоновый диальдегид МНК – мононуклеарные клетки МПО – миелопероксидаза МФ – макрофаги НФ – нейтрофилы ПМП – противомикробные пептиды ПЦР – полимеразная цепная реакция РИФ – реакция иммунофлюоресценции (прямой вариант) РН – реакция нейтрализации РНИФ – реакция непрямой иммунофлюоресценции СКРС – сыворотка крупного рогатого скота ТК – тучные клетки Т-клетки – тимусзависимые клетки ТМЛ – торможение миграции лейкоцитов ТЦД – тканевая цитолитическая доза ФИ – фагоцитарный индекс ФНО – фактор некроза опухоли ХГВИ – хроническая герпесвирусная инфекция ХХИ – холато-холестериновый индекс ЦИК – циркулирующие иммунные комплексы ЦМВ – цитомегаловирус человека ЦНС – центральная нервная система ЩФ – щелочная фосфатаза 171

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Абдулмеджидова, А.А. Влияние бессимптомной формы герпес-вирусной инфекции на женскую репродуктивную систему / А.А. Абдулмеджидова // Вопросы вирусологии. – 2009. – № 6. – С. 10-13.

2. Адбулмеджинова, А.Г. Влияние бессимптомной герпесвирусной инфекции на результаты лечения бесплодия методами вспомогательных репродуктивных технологий / А.Г. Адбулмеджинова, И.Г. Торганова, С.П. Чапик, И.И. Витязева // Акушерство и гинекология. – 2009. – № 1. – С. 45-48.

3. Александер, И. Половые гормоны и инфекционные заболевания / И. Александер, В. Стимсон // Паразитология. – 1988. – № 4. – С. 189-193.

4. Алимбарова, Л.М. Экспериментальная оценка противовирусной активности новых лекарственных форм на модели герпесвирусной инфекции in vivo: Методические рекомендации / Л.М. Алимбарова, И.Ф. Баринский, К.К. Кузьмин. – М., 2000. – 32 с.

5. Архипов, Г.С. Социальная значимость распространения герпеса и ВИЧинфекции. Современные подходы к профилактике и лечению: материалы научной сессии ННЦ СЗО РАМН / Г.С. Архипов, В.А. Исаков, Е.И. Архипова. – В. Новгород: Медицина, 2003. – 2 т. – С. 66-76.

6. Аурелайн, Л. Репродуктивное здоровье: механизм обострения герпетических инфекций и перспективы вакцинации / Л. Аурелайн. – М.: Медицина, 1988. – С. 131-203.

7. Баринский, И.Ф. Этиология хронических вирусных нейроинфекций: монография / И.Ф. Баринский, А.К. Шубладзе. – М.: Медицина, 1984. – С. 58-87

8. Баринский, И.Ф. Герпес: этиология, диагностика, лечение / И.Ф. Баринский, А.К. Шубладзе, А.А. Каспаров, В.Н. Гребенюк. – М.: Медицина, 1986. – 272 с.

9. Бархатова, Т.В. Распространенность маркеров герпесвирусных инфекций при острой патологии почек у детей / Т.В. Бархатова, Н.Е. Сенягина, В.В. Краснов // Детские инфекции. – 2011. – № 3. – С. 66-69.

Безопасность работы с микроорганизмами III-IV групп патогенности 10.

(опасности) и возбудителями паразитарных болезней. СП 1. 3. 2322-08. – М.: Минюст РФ, 2008.

Белозёров, Е.С. Болезни герпесвирусной группы / Е.С. Белозёров, 11.

Ю.И. Буланьков. – Элиста: Джангар, 2005. – 64 с.

Бесплодный брак. Современные подходы к диагностике и лечению / 12.

под ред. В.И. Кулаковой. – М.: ГЭОТАР-Медиа, 2005. – 616 с.

Бойко, Н.И. Нарушения репродукции при простатите/синдроме хронической тазовой боли / Н.И. Бойко // Международный медицинский журнал. – 2004. – №3. – С.141-142.

Боковой А.Г. Герпесвирусные инфекции у детей / А.Г. Боковой. – М.:

14.

МАКС Пресс, 2008. – 142 с.

Бочаров, А.Ф. Вирус простого герпеса / А.Ф. Бочаров, В.Я. Кицак, 15.

Е.Ф. Бочаров, А.Л. Трухачев. – Новосибирск: Наука, 1982. – 224 с.

Бочарова Е.Н. Морфологическая и молекулярно-биологическая характеристика мужских гамет при патоспермии и идиопатическом бесплодии: Автореф. дис. д-ра мед. наук. – Москва, 2008. – 44 с.

Брагина, Е.Е. Выявление сперматозоидов, инфицированных вирусом 17.

простого герпеса / Е.Е. Брагина, Р.А.Абдулмаликов, Л.Ф. Курило // Вестник дерматологии. Москва. – 2000. – №5. – С. 18-22.

Бурлев, В.А. Воспалительный стресс: системный ангиогенез, белки 18.

острой фазы и продукты деструкции тканей у больных хроническим рецидивирующим сальпингоофоритом / В.А. Бурлев // Проблемы репродукции. – 2011. – №5.

– С. 25-32.

Бурнадзе Т.П. Острые респираторные вирусные инфекции крупного 19.

рогатого скота в хозяйствах республики Коми и усовершенствование системы противоэпизоотических мероприятий: Автореф. дис. к-та вет. наук. - Екатеринбург, 2007. – 24 с.

Веселков, А.В. Диагностика, лечение и профилактика заболеваний, 20.

передаваемых половым путем / А.В. Веселков, Ф.Ф. Нифонтов, Ю.Я. Рюмин. – М.: МЕДпресс-информ, 2007. – 168 с.

Возрастная динамика иммунологических показателей крупного рогатого скота при техногенных воздействиях: научно-практические рекомендации / И.М. Донник, Н.А. Верещак, И.А. Шкуратова. – Екатеринбург, 2005. – 20 с.

Генерализованная герпетическая инфекция: Факты и концепция / А.Г.

22.

Коломиец, В.И. Вотяков, Р.М. Бикбулатов. – Минск, 1992. – 184 с.

Герпесвирусная инфекция (эпидемиология, клиника, диагностика, 23.

профилактика и лечение): методические рекомендации / Н.В. Каражас, Н.А. Малышев, Т.Н. Рыбалкина, М.Ю. Калугина. – М.: Медпресс, 2007. – 118 с.

Глинских, Н.П. Герпесвирусные инфекции: монография 24. /



Pages:     | 1 |   ...   | 3 | 4 || 6 |
 

Похожие работы:

«ЯМБОРКО Алексей Владимирович ПОПУЛЯЦИОННАЯ ЭКОЛОГИЯ ЛЕСНЫХ ПОЛЕВОК (род CLETHRIONOMYS) СЕВЕРО-ВОСТОЧНОЙ АЗИИ Специальность 03.02.08 – экология Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: доктор биологических наук Н.Е. Докучаев Магадан – 2015 ОГЛАВЛЕНИЕ ВВЕДЕНИЕ.. Глава 1. МАТЕРИАЛ И...»

«Палаткин Илья Владимирович Подготовка студентов вуза к здоровьесберегающей деятельности 13.00.01 общая педагогика, история педагогики и образования Диссертация на соискание ученой степени кандидата педагогических наук Научные руководители: доктор биологических наук, профессор,...»

«ХОАНГ ЗИЕУ ЛИНЬ ЭКОЛОГИЗАЦИЯ ЗАЩИТЫ КАПУСТНЫХ КУЛЬТУР ОТ ОСНОВНЫХ ЧЕШУЕКРЫЛЫХ ВРЕДИТЕЛЕЙ В УСЛОВИЯХ МОСКОВСКОГО РЕГИОНА Специальность: 06.01.07 – защита растений Диссертация на соискание учёной степени кандидата биологических наук Научный руководитель: Попова Татьяна Алексеевна, кандидат биологических наук, доцент...»

«ЕГОРОВА Ангелина Иннокентьевна МОРФОФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ ОСОБЕННОСТИ СТРУКТУРЫ ЩИТОВИДНОЙ ЖЕЛЕЗЫ У МУЖЧИН КОРЕННОЙ И НЕКОРЕННОЙ НАЦИОНАЛЬНОСТИ ЯКУТИИ В РАЗНЫЕ СЕЗОНЫ ГОДА 03.03.04 – клеточная биология, цитология, гистология Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научные руководители: доктор медицинских наук, профессор Д.К....»

«Толмачева Алла Викторовна УДК 633.34:551.АГРОКЛИМАТИЧЕСКАЯ ОЦЕНКА УСЛОВИЙ ВОЗДЕЛЫВАНИЯ СОИ В УКРАИНЕ 11.00.09 – метеорология, климатология, агрометеорология ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени кандидата географических наук Научный руководитель: Полевой Анатолий Николаевич, доктор географических наук, профессор Одесса – 2015 СОДЕРЖАНИЕ стр. ВВЕДЕНИЕ РАЗДЕЛ І. БИОЛОГИЧЕСКИЕ...»

«Ядрихинская Варвара Константиновна ЭКОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ РАСПРОСТРАНЕНИЯ ОСТРЫХ КИШЕЧНЫХ ИНФЕКЦИЙ В Г. ЯКУТСКЕ И РЕСПУБЛИКЕ САХА (ЯКУТИЯ) 03.02.08 – экология Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель кандидат биологических наук, доцент М.В. Щелчкова Якутск 2015...»

«БРИТАНОВ Николай Григорьевич ГИГИЕНИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ ПЕРЕПРОФИЛИРОВАНИЯ ИЛИ ЛИКВИДАЦИИ ОБЪЕКТОВ ПО ХРАНЕНИЮ И УНИЧТОЖЕНИЮ ХИМИЧЕСКОГО ОРУЖИЯ 14.02.01 Гигиена Диссертация на соискание ученой степени доктора медицинских наук Научный консультант: доктор медицинских наук, профессор...»

«Будилова Елена Вениаминовна Эволюция жизненного цикла человека: анализ глобальных данных и моделирование 03.02.08 – Экология Диссертация на соискание ученой степени доктора биологических наук Научный консультант доктор биологических наук, профессор А.Т. Терехин Москва 2015 Посвящается моим родителям, детям и мужу с любовью. Содержание Введение.. 5 1. Теория эволюции жизненного цикла. 19...»

«Петро ва Ю лия Геннад ь евна «ШКОЛА УХОДА ЗА ПАЦИЕНТАМИ» ПР И ПР ОВЕДЕНИИ МЕДИЦИНСКОЙ Р ЕАБИЛИТАЦИИ ПОСЛЕ ЦЕР ЕБР АЛЬНОГО ИНСУЛЬ ТА 14.01.11 – нервные болезни ДИССЕРТАЦИЯ на соискание учёной степени кандидата медицинских наук Научный руководитель: доктор медицинских наук, Пряников И.В. профессор Москва – 2015 стр ВВЕДЕНИЕ ГЛАВА 1. СПЕЦИФИКА И ОСОБЕННОСТИ ПРОВЕДЕНИЯ МЕДИЦИНСКОЙ...»

«Якимова Татьяна Николаевна Эпидемиологический надзор за дифтерией в России в период регистрации единичных случаев заболевания 14.02.02 эпидемиология диссертация на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Научный руководитель: доктор...»

«Галкин Алексей Петрович ИДЕНТИФИКАЦИЯ И АНАЛИЗ ВЗАИМОДЕЙСТВИЯ ПРИОНОВ И АМИЛОИДОВ В ПРОТЕОМЕ ДРОЖЖЕЙ SACCHAROMYCES CEREVISIAE Специальность 03.02.07 – генетика диссертация на соискание учной степени доктора биологических наук Научный консультант: Академик РАН С.Г. Инге-Вечтомов САНКТ-ПЕТЕРБУРГ ОГЛАВЛЕНИЕ ВВЕДЕНИЕ Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ....»

«Платонова Ирина Александровна ПОСТПИРОГЕННАЯ ТРАНСФОРМАЦИЯ НАДЗЕМНОЙ ФИТОМАССЫ В СОСНЯКАХ СЕЛЕНГИНСКОГО СРЕДНЕГОРЬЯ Специальность 06.03.02 – Лесоведение и лесоводство, лесоустройство и лесная таксация ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: д.б.н., с.н.с. Г.А. Иванова Красноярск – 2015...»

«БОЛОТОВ ВЛАДИМИР ПЕТРОВИЧ ОЦЕНКА СОДЕРЖАНИЯ И МИГРАЦИЯ ТЯЖЕЛЫХ МЕТАЛЛОВ В ЭКОСИСТЕМАХ ВОЛГОГРАДСКОГО ВОДОХРАНИЛИЩА Специальность: 03.02.08. Экология Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: доктор биологических наук,...»

«ФЕДОРОВА Екатерина Алексеевна ХАРАКТЕРИСТИКИ ВИРУСА ГРИППА, ВЛИЯЮЩИЕ НА ПОКАЗАТЕЛИ ГУМОРАЛЬНОГО ИММУННОГО ОТВЕТА В ЭКСПЕРИМЕНТЕ И ПРИ ВАКЦИНАЦИИ 03.02.02 – вирусология ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: Доктор биологических наук, доцент И.В. КИСЕЛЕВА Санкт-Петербург – ОГЛАВЛЕНИЕ Раздел 1....»

«Якимова Татьяна Николаевна Эпидемиологический надзор за дифтерией в России в период регистрации единичных случаев заболевания 14.02.02 эпидемиология диссертация на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Научный руководитель: доктор...»

«БЕСЕДИНА Екатерина Николаевна УСОВЕРШЕНСТВОВАНИЕ МЕТОДА КЛОНАЛЬНОГО МИКРОРАЗМНОЖЕНИЯ ПОДВОЕВ ЯБЛОНИ IN VITRO Специальность 06.01.08 – плодоводство, виноградарство Диссертация на соискание учёной степени кандидата сельскохозяйственных наук Научный руководитель – кандидат биологических наук Л.Л. Бунцевич Краснодар 201 Содержание...»

«Иртегова Елена Юрьевна РОЛЬ ДИСФУНКЦИИ СОСУДИСТОГО ЭНДОТЕЛИЯ И РЕГИОНАРНОГО ГЛАЗНОГО КРОВОТОКА В РАЗВИТИИ ГЛАУКОМНОЙ ОПТИЧЕСКОЙ НЕЙРОПАТИИ 14.01.07 – глазные болезни ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Научный руководитель: доктор медицинских наук, профессор...»

«ЖУРАВЛЕВА МАРИЯ СПАРТАКОВНА Количественная характеристика показателей иммунного ответа у кур на различные типы антигенов 06.02.02 – ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология Диссертация на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук Научный руководитель:...»

«Сафранкова Екатерина Алексеевна КОМПЛЕКСНАЯ ЛИХЕНОИНДИКАЦИЯ ОБЩЕГО СОСТОЯНИЯ АТМОСФЕРЫ УРБОЭКОСИСТЕМ Специальность 03.02.08 – экология (биологические науки) Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: доктор...»

«Трубилин Александр Владимирович СРАВНИТЕЛЬНАЯ КЛИНИКО-МОРФОЛОГИЧЕСКАЯ ОЦЕНКА КАПСУЛОРЕКСИСА ПРИ ПРОВЕДЕНИИ ФАКОЭМУЛЬСИФИКАЦИИ КАТАРАКТЫ НА ОСНОВЕ ФЕМТОЛАЗЕРНОЙ И МЕХАНИЧЕСКИХ ТЕХНОЛОГИЙ 14.01.07 – глазные болезни Диссертация на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Научный...»







 
2016 www.konf.x-pdf.ru - «Бесплатная электронная библиотека - Авторефераты, диссертации, конференции»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.