WWW.KONF.X-PDF.RU
БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА - Авторефераты, диссертации, конференции
 


Pages:   || 2 | 3 | 4 | 5 |

«ПАТОГЕНИТЕЧЕСКИЕ СВОЙСТВА ВИРУСА ИНФЕКЦИОННОГО БРОНХИТА КУР ...»

-- [ Страница 1 ] --

Федеральное государственное бюджетное автономное образовательное

учреждение

«Российский университет дружбы народов»

Федеральное государственное бюджетное учреждение

«Федеральный центр охраны здоровья животных» (ФГБУ «ВНИИЗЖ»)

На правах рукописи

Дандал Али Шебли

ПАТОГЕНИТЕЧЕСКИЕ СВОЙСТВА ВИРУСА ИНФЕКЦИОННОГО

БРОНХИТА КУР

06.02.02 «ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология»

Диссертация на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

Научный руководитель:

доктор биологических наук, профессор Макаров Владимир Владимирович

Научный консультант:

кандидат ветеринарных наук Фролов Сергей Владимирович Владимир-20

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

АГ – аппарат Гольджи ИБК – инфекционный бронхит кур ИФА – иммуноферментный анализ КК – культура клеток ПККЯ – первичная культура клеток из яйцевода ПЦР – полимеразная цепная реакция РГА – реакция гемагглютинации РДП – реакция диффузной преципитации РКЭ – развивающиеся куриные эмбрионы РН – реакция нейтрализации РНК – рибонуклеиновая кислота РНП – рибонуклеопротеид РТГА – реакция торможения гемагглютинации СПФ – свободный от патогенных факторов ТОК – тканевая органная культура ХАО – хориоаллантоисная оболочка ТЭ – ткань тела эмбриона ЦА – цилиарная активность ЦД50 – доза, вызывающая цилиостаз в половине зараженных культур ЦПД – цитопатическое действие ШЭР – шероховатый эндоплазматический ретикулум ЭИД50 – 50%-я эмбриональная инфицирующая доза (доза вируса, вызывающая инфекционный процесс у 50% инфицированных эмбрионов) ЭЭЖ – экстраэмбриональная жидкость lg – логарифм с основанием десять log2 – логарифм с основанием два

ОГЛАВЛЕНИЕ

Стр.

ВВЕДЕНИЕ

Обзор литературы Общие сведения об инфекционном бронхите кур 1.1 Биология вируса ИБК 1.1.1 Морфология вируса ИБК 1.1.2 Строение вируса 1.1.3 Антигенная вариабельность 1.1.4 Патогенез возбудителя ИБК 1.2 Особенности репликации отдельных штаммов вируса ИБК 1.2.1 Механизм репликации вируса в организме 1.3

–  –  –

Патогенез вируса инфекционного бронхита кур 3.4 Диссеминация вируса в организме цыплят по результатам 66 3.4.1 ПЦР Патологоанатомические и гистологические изменения в 7 3.4.2 почках и трахеях птиц, вызванные различными штаммами вируса ИБК Патогенетическое действие и репродукция штамма QX 78 3.4.3 вируса ИБК в организме цыплят при различных способах заражения

ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

–  –  –

ПРИЛОЖЕНИЯ

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы. Основу современного птицеводства составляют промышленные птицеводческие хозяйства. Одной из особенностей этих хозяйств является то, что на ограниченной территории содержится большое количество птицы. Это создает определенную опасность для возникновения инфекционных болезней и быстрого распространения их.

Инфекционные болезни птиц, протекающие с признаками поражения респираторного тракта, являются актуальной проблемой для современного промышленного птицеводства. В настоящее время инфекционный бронхит кур одна из наиболее значимых болезней промышленного птицеводства. Болезнь впервые была описана Schalk и Hawn [46] как респираторная болезнь цыплят, и считалось, что ей подвержен только молодняк кур. Однако дальнейшие исследования показали, что вирус ИБК вызывает болезнь и у взрослых кур [79].

В настоящее время болезнь распространена практически во всех странах мира, где развито промышленное птицеводство. В последние годы вспышки ИБК регистрируются в птицеводческих хозяйствах многих стран, в том числе в РФ и странах СНГ, что указывает на широкое распространение болезни [9, 11, 14].

Биологические особенности вируса ИБК контагиозность, (высокая длительная персистенция, чувствительность популяции) способствуют стационарности и широкому распространению болезни [2, 8, 14].

При возникновении болезни происходит быстрое инфицирование всего поголовья. Тяжесть протекания болезни зависит от ряда факторов, основными из которых являются антигенная структура и тропизм вируса. Общепринято, что ткани дыхательной системы – главная мишень вируса, но вирус также размножается в других органах и тканях, имеющих эпителиальные клетки, и поражает почки и репродуктивные органы [13, 81, 88].

В последние годы вирус ИБК также был выделен при исследовании клоакальных мазков и тканей кишечника. При этом есть сообщение о возможности инфицирования цыплят вирусом ИБК клоакальным способом[120, 130, 172].

Тропность и место первичной репликации зависит от штамма вируса, например, некоторые штаммы могут вызывать тяжёлые поражения почек, а в респираторном тракте вызывать лишь слабое воспаление [14, 39, 163].

Таким образом, штаммы вируса ИБК имеют вариабельный тканевой тропизм, что приводит к разнообразию клинического проявления болезни.

При этом следует подчеркнуть, что отмечены признаки эволюции вируса, которая характеризуется изменениями антигенных свойств и расширением тропизма вируса, что увеличивает его эпизоотологическую опасность [3, 4, 5].

Основной мерой борьбы с данной болезнью является вакцинопрофилактика.

Для научно-исследовательских и производственных целей количественное определение вируса ИБК всегда остаётся актуальной задачей. Традиционно для титрования вируса ИБК используются развивающиеся эмбрионы кур (РКЭ), что имеет свои преимущества и недостатки. К основным недостаткам относятся:

достаточно длительная процедура титрования, связанная с развитием инфекционного процесса (не менее 7 сут), достаточно высокая степень субъективизма при оценке результатов; кроме этого, сами тест-объекты и их обслуживание высокозатратны. В связи с этим поиск опосредованных методов оценки титра инфекционного вируса на основе ПЦР в реальном времени представляется актуальным. Обнаружение положительной корреляции результатов по выявлению генома вируса ИБК в ПЦР и титрования вируса ИБК в РКЭ позволит разработать прогностическую модель для опосредованной оценки инфекционного титра вируса.

В вирусологической практике изучение патогенеза вновь выделенных изолятов вируса ИБК является необходимой и актуальной задачей, поскольку позволяет понять природу болезни и разработать средства борьбы с ИБК. В этой связи изучению патогенеза ИБК необходимо уделять большое внимание [8].

Таким образом, в настоящее время существует потребность в разработке новых методических подходов к количественному определению вируса ИБК в биологических материалах, а также в сравнительном изучении патогенеза различных штаммов вируса инфекционного бронхита кур в организме птицы.

Цели и задачи исследований. Цель настоящей работы состояла в изучении патогенетических свойств вируса инфекционного бронхита кур.

В рамках поставленной цели были определены следующие задачи.

Оценить возможность использования ПЦР (в режиме реального 1.

времени) для опосредованной оценки инфекционного титра вируса ИБК.

Построить модель связи между концентрацией вирусного генома (значением порогового цикла амплификации в ОТ-ПЦР-РВ) и величиной инфекционного титра вируса ИБК для КЭ и для ТОК.

Определить развитие вируса инфекционного бронхита кур в 2.

различных частях куриного эмбриона.

Сравнить опосредованные оценки титра инфекционного вируса на 3.

основе показателей ПЦР в режиме реального времени с фактически установленными значениями инфекционного титра для ТОК.

Исследовать процесс распространения (диссеминации) в организме 4.

птицы различных штаммов вируса ИБК и оценить их преимущественный тропизм.

Определить характер и продолжительность обусловленных вирусом 5.

патологических процессов в реснитчатом эпителии трахеи инфицированных птиц.

Сравнить патогенное действие штамма RF08-10 вируса ИБК генотипа 6.

QX для цыплят при различных способах заражения.

Научная новизна. В процессе выполнения исследований были получены следующие результаты, представляющие научный интерес.

1. Показана принципиальная возможность использования ОТ-ПЦР РВ для опосредованной оценки инфекционного титра вируса ИБК. Соответствующие регрессионные модели на основе значений пороговых циклов амплификации позволяли прогнозировать значение титра вируса, стандартное отклонение которого было сопоставимо с аналогичной эмпирической оценкой как для СПФэмбрионов кур, так и для трахеальной органной культуры.

2. Установлено, что максимальное накопления вируса ИБК в ткани хориоаллантоисной оболочки эмбриона кур может не сопровождаться возникновением макроскопических патологий данной ткани.

3. Показано, что характер патогенеза заболевания существенно зависит от тропизма конкретного штамма вируса ИБК. Определено, что по интенсивности воспроизводства в клетках конкретного вида ткани в организме птицы вирусные варианты могут различаться в 300 и более раз.

4. Установлено, что вирус ИБК штамма QX имеет тропизм к тканям респираторного тракта, почек, яичников и лимфоидным тканям слепой и толстой кишок. При этом инфекционный процесс, вызванный вирусом штамма Н-120, в основном ограничен дыхательной системой птиц.

Практическая значимость. Результаты, полученные при проведении настоящих исследований, могут иметь очевидное практическое использование.

Во-первых, была предложена модель опосредованной оценки величины инфекционного титра вируса ИБК на основе результатов, полученных в ПЦР.

Данная модель позволяет с достаточной точностью определить ожидаемый титр вируса в течение 4 часов (при условии, что стандартный способ оценки титра продолжается 5 - 7 сут) и может быть использована для ускоренной оценки его инфекционной активности.

Во-вторых, установленные различия патогенетической сущности штаммов вируса ИБК в организме цыплят требуют корректировки оценочных показателей для средств специфической профилактики.

В-третьих, особенности инфекционного процесса при разных методах заражения птицы вирусом ИБК генотипа характеризуют основные QX патогенетические свойства этого вируса.

Основные положения диссертационной работы, выносимые на защиту.

Использование ПЦР (в режиме реального времени) позволяет 1.

осуществлять ускоренную опосредованную оценку величины инфекционного титра вируса ИБК.

Местом репликации вируса ИБК в курином эмбрионе является 2.

хориоаллантоисная оболочка, а максимальное накопление вируса происходит в экстраэмбриональной жидкости.

Показатели инфекционного титра вируса ИБК при размножении в КЭ, 3.

установленные с помощью ПЦР и в трахеальной органной культуре, не имеют существенных различий.

Патогенез инфекционного бронхита кур при заражении разными 4.

штаммами вируса имеет характерные различия.

Обусловленные вирусом патологические процессы в трахее 5.

инфицированных птиц характеризуются временным разрушением реснитчатого эпителия.

Патогенное действие вируса ИБК генотипа QX проявляется при 6.

заражении цыплят СПФ как окулярно-назальным, так и клоакальным способами.

Апробация результатов работы. Основные материалы диссертации представлены, доложены и обсуждены на научно-практических конференциях «Популяционное здоровье животных и эмерджентные инфекции в современных условиях» Международной научно-практической (Волгоград, 2013), VI конференции преподавателей, молодых ученых, аспирантов и студентов «Инновационные процессы в АПК» (Москва, 2014).

Промежуточные результаты экспериментов вошли в материалы ежегодных отчетов лаборатории профилактики болезней птиц ФГБУ «ВНИИЗЖ» в 2013-2014 гг.

Публикация результатов исследований. По материалам диссертации опубликовано 4 научных работы, в том числе 3 статьи в изданиях, рекомендованных ВАК Министерства образования и науки Российской Федерации.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 122 страницах компьютерного текста и включает введение, обзор литературы, собственные исследования, обсуждение, выводы, практические предложения и список литературы, который состоит из 199 источников, в том числе 159 - зарубежных авторов.

Работа иллюстрирована 5 таблицами, 11 рисунками и дополнена приложением документов, подтверждающих внедрение результатов работы в ветеринарную практику.

Место выполнения работы. Исследования по теме диссертации проводены в течение 2012-2015 гг. на базе лаборатории профилактики болезней птиц ФГБУ «Федеральный центр охраны здоровья животных» (ФГБУ «ВНИИЗЖ»).

Личный вклад соискателя. Диссертационная работа выполнена самостоятельно. В ходе работы практическую и консультативную помощь оказывали сотрудники ФГБУ «ВНИИЗЖ» С.В. Фролов, В.Ю. Кулаков, Д.Л.

Долгов, Е.В. Овчинникова, за что автор выражает им искреннюю признательность.

Благодарности. Автор выражает искреннюю признательность научному руководителю д.б.н., профессору Макарову Владимиру Владимировичу за повседневную помощь при выполнении и оформлении диссертации, а также искренне благодарит сотрудников лаборатории профилактики болезней птиц ФГБУ «ВНИИЗЖ» за практическую помощь при выполнении различных разделов работы.

12

1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Общие сведения об инфекционном бронхите кур Инфекционный бронхит кур (ИБК) - вирусное высоко контагиозное заболевание кур различного возраста, проявляется поражением главным образом органов респираторного, репродуктивного тракта, почек и других органов и систем организма [2, 8, 67, 80,113, 114, 125].

Впервые ИБК наблюдали в 1931 году в штате Северная Дакота под названием новая болезнь дыхательных органов цыплят [39, 199].

Доклад по клиническим признакам и предварительным лабораторным исследованиям этих случаев, сделанный A. Schalk, M. Hawn в 1931 году, рассматривается как первый отчет по ИБК, а непосредственно этиологический агент впервые был выделен в 1937г. [14, 61, 113, 196].

Вначале считалось, что эта болезнь проявляется только респираторными признаками и ей подвержен только молодняк птицы, но дальнейшие исследования показали, что такие проявления инфекционного бронхита встречаются и у взрослых кур [80, 199]. Другие проявления инфекционного бронхита, такие как поражение органов репродуктивной системы, обнаружили в 1940-х годах 20-го века, а поражение почек - в шестидесятые годы того же века.

Наиболее важными этапами в изучении болезни были следующие:

установление вирусной этиологии болезни, выполненное Beach и Schalm в 1936г.

[1, 2], установление возможности культивирования вируса в оплодотворенном курином яйце, проведенное F.R. Beaudette и C.B. Hudson в 1937 г. [5], в 1956 г.

E.L. Jungher at al. установили существование антигенного разнообразия у вируса ИБК [14, 61].

Первый выделенный в США штамм вируса ИБК относился к серотипу Массачусетс. Штаммы серотипа Массачусетс также были выделены в Европе, начиная с сороковых годов 20-го века. Позднее на территории США, Европы, в Австралии были выделены и другие серологические типы этого вируса [14, 57, 199].

После обнаружения ИБК в 1936г. в США, в 1941 г. он был зарегистрирован 13 в Палестине. В Европе ИБК впервые диагностирован в Нидерландах в 1947 г., а затем в Англии [14, 39]. В настоящее время болезнь распространена практически во всех странах мира, где развито промышленное птицеводство. В последние годы вспышки ИБК регистрируются в птицеводческих хозяйствах США, Канады, Кубы, Италии, Франции, Бельгии, Греции, Германии, Индии, Великобритании, Египта, Австралии и ряда других стран.

В России изучение ИБК было начато в 1950-е годы, когда на крупных птицеводческих комплексах яичного направления у цыплят стали наблюдаться респираторные нарушения, а у взрослой птицы отмечалось снижение яичной продуктивности [8, 9, 14]. В настоящее время ИБК подтверждают во многих обследованных хозяйствах России и стран СНГ, что указывает на широкое распространение заболевания [11, 14, 36].

1.1.1 Биологические свойства вируса ИБК В 1933 г. Bushnell и Brandly, изучая респираторную болезнь цыплят, впервые выяснили, что возбудителем ее является фильтрующийся вирус.

Дальнейшие исследования Beach и Schalm в 1936 г. показали, что этот этиологический агент отличается от возбудителя инфекционного ларинготрахеита птиц, открытого ранее [14, 60].

Вирус ИБК отличается невысокой устойчивостью к неблагоприятным факторам внешней среды. В трупах павшей птицы быстро теряет инфекционную активность. В питьевой воде при комнатной температуре сохраняется 11 чесов, в пораженных тканях, 50%-м растворе глицерина при температуре 4°С — до 8 дней, в аллантоисной жидкости при температуре 37 °С — в течение 3 дней, при 20-30оС — 24 дня, при 4°С — 427 дней, при минус 25 °С — 537 дней. В инфицированной аллантоисной жидкости при температуре минус 30 °С оставался активным 17 лет [29, 39, 81, 169].

Большинство штаммов вируса инфекционного бронхита кур инактивируются при 56 °С за 10 мин, однако среди них встречаются варианты, различающиеся по терморезистентности. Это свойство зависит от числа пассажей вируса на куриных эмбрионах. Показано, что различные изоляты вируса на 14 разных пассажах в куриных эмбрионах обладают неодинаковой чувствительностью к прогреванию при 56 °С. Более 98% популяции состоят из вирионов, чувствительных к действию повышенной температуры, однако около 2% представлены терморезистентными частицами. Используя метод предельного разведения, удалось получить популяцию, состоящую из терморезистентных вирионов, но в ходе длительного пассирования такой популяции в куриных эмбрионах в них опять появляются термолабильные вирионы, число которых с каждым пассажем возрастает. Вирусы, прошедшие на эмбрионах кур небольшое число пассажей, инактивируются, как правило, при температуре 56 °С через 30 — 150 мин [30, 81, 170].

Все штаммы относительно резистентны к кислой среде с рН 3, к щелочной среде с рН 11 они чувствительны. Все штаммы этого вируса чувствительны к хлороформу и дезоксихолату натрия. Штаммы (Ве-42 и Connaught) после обработки эфиром обладают остаточной инфекционностью. По чувствительности к эфиру и прогреванию в течение 90 мин при 45 °С все штаммы вируса ИБК разделены на 3 группы. Первая группа включает штаммы Ве-42 и Connaughtштаммы, чувствительные к двум обработкам. Вторая группа включает 6 штаммов, которые относительно резистентны к эфиру, но чувствительны к прогреванию при 45 °С в течение 90 мин, и в третью группу входят штаммы В-41 и КН, которые резистентны к эфиру и прогреванию. Все штаммы резистентны к трипсину, очень чувствительны к УФ-облучению [29, 30, 69].

Глюкоза (10%-я) стабилизирует вирус при лиофилизации. Под действием ультрафиолетовых лучей вирус инфекционного бронхита кур разрушается через 18 - 24 ч. Солнечные лучи инактивируют его при 36 - 38 °С за 3 ч; 1%-е растворы фенола, крезола, формалина, 70%-й этиловый спирт и раствор соды (1 : 10 000) обезвреживают его за 3 мин [30, 36, 169].

1.1.2 Морфология вируса ИБК Инфекционный бронхит кур вызывает РНК-содержащий вирус, относящийся к роду Coronavirus (от латинского «corona» -корона), семейства Coronaviridae, которое включает в себя два рода - коронавирус и торовирус [92, 15 158, 186, 198]. Вирионы представляют собой частицы сферической формы диаметром 80-160 нм, имеют липопротеиновую оболочку, которая на своей поверхности содержит большие, радиально расположенные пепломеры, напоминающие корону [92].

Вирус ИБК полиморфен, но в основном круглой формы. Вирионы состоят из нуклеокапсида спиральной симметрии и липопротеидной оболочки, на поверхности которой имеются булавовидные выступы длиной 12-24 нм, образующие подобие солнечной короны. Вирионы чувствительны к жирорастворителям – детергентам [12, 14, 92].

Вирус ИБК размножается в цитоплазме клеток. Созревание вирионов происходит почкованием через мембраны эндоплазматического ретикулюма и аппарата Гольджи. Новая популяция вируса появляется через 3-4 ч после инфицирования, с максимальным выходом из клеток через 12 ч при 37°С [47, 60].

Штаммы вируса ИБК различаются по плотности, определяемой в градиенте сахарозы, пик плотности обычно варьирует в пределах 1,15-1,18 д/мл, но также встречаются частицы с более низкой (незрелый РНП) и более высокой плотностью [36].

1.1.3 Строение вируса Геном вируса представлен единой односпиральной линейной молекулой РНК с молекулярной массой 6,5-11. Вирионная РНК обладает инфекционностью.

Геном состоит из 27-33 тыс. нуклеотидов. Гены структурных белков расположены в 3`-концевой области гена [14, 30, 115, 196].

Вирионы вируса ИБК содержат три основных вирусоспецифических протеина: гликопротеин шипиков (S), гликопротеин мембраны (М) и протеин нуклеокапсида (N). Дополнительно четвертый протеин (малый мембранный протеин - SM) ассоциирует с мембранной оболочкой. S протеин состоит из двух или трех копий: каждая, в свою очередь, представлена двумя гликополипептидами и Антигемагглютинирующие и S1 S2.

вируснейтрализующие антитела индуцируются белком S1 [14, 28, 74, 173]. Nпротеин, окружая один отрезок одно-тяжевого положительного РНК-генома, 16 представлен в форме РНП. Выступы построены из S-белка, М-белок пронизывает оболочку насквозь. S и М-белки индуцируют синтез вируснейтрализующих антител. Препараты очищенного вируса всегда содержат полипептиды клеток хозяина [28, 74, 137, 158].

–  –  –

1.1.4 Антигенная вариабельность Одной из наиболее важных и характерных особенностей вируса ИБК является наличие большого числа серотипов (по разным данным, от 20 до 30), что усложняет специфическую профилактику этой болезни [14, 52, 92, 102, 158, 192].

Вирус ИБК отличается высокой генетической изменчивостью, которая обуславливает его антигенную вариабельность [11, 122]. Показано, что возникновение новых штаммов обусловлено процессами рекомбинации и мутации. Для проявления этих процессов может быть множество причин, например: многократное пассирование вируса на разновозрастном поголовье птиц, смешанная инфекция ИБК с микоплазмозом, колибактериозом, пуллорозом, ларинготрахеитом, аденовирусной инфекцией, одновременная циркуляция в одном стаде вакцинного и полевого вируса, одновременная вакцинация двумя или более живыми вакцинными штаммами вируса [118].

В 1937 году был получен первый штамм вируса ИБК - «Bodett», который был выделен на развивающихся куриных эмбрионах [14, 39]. Этот штамм вместе с выделенным в 1941 году штаммом «Массачусетс 41», является представителем самого первого, давно известного и наиболее широко распространенного серотипа Массачусетс [14, 61]. В результате некоторое время считалось, что вирус ИБК однороден по своей антигенной структуре [181].

В 1946 году был выделен изолят вируса, вызывавший у кур сходную клинику, но не показавший перекрёстной нейтрализации и перекрёстной защиты со штаммами серотипа Массачусетс, поэтому данный изолят был отнесен к новому серотипу Коннектикут вируса ИБК. Это было первое сообщение о том, что вирус ИБК имеет более, чем один серотип [14, 61].

Дальнейшие исследования показали наличие ранее неизвестных изолятов вируса ИБК, вызывающих респираторную клинику, но не относящихся к ранее известным серотипам. По результатам исследований они были выделены в новые серотипы - Айова 97 и Айова 609 (Iowa 97, Iowa 609) [14, 68].

Были выделены изоляты вируса, обладающие нефропатогенным действием, в США это серотипы Грей и Холте (Gray, Holte), в Австралии серотипы T и T1 [14, 125].

Штамм JMK был выделен во время вспышки ИБК на поголовье птицы, иммунизированной вакциной из штамма Коннектикут.

Во время вспышки ИБК на одной из птицефабрик в штате Арканзас был выделен изолят вируса, обладающий оригинальными антигенными свойствами, и он был отнесён к новому серотипу Арканзас [14].

Выделенные в Калифорнии два изолята (Калифорния G и S) в серологических исследованиях не показали антигенного родства с известными серотипами вируса, и были выделены в новый серотип Калифорния [53].

В настоящее время идентифицировано более 30 серотипов вируса и их число постоянно растёт. По географии распространения их условно можно разделить на несколько групп: американскую, европейскую и австралийскую.

К американской группе относятся следующие серотипы: Массачусетс, Айова 97, Айова 609, Грей, Холте, Арканзас, Флорида, Калифорния, Коннектикут, Делавер [7, 14, 115].

18 К европейской группе относятся серотипы - A (Mass), В (D207), С (D212), D (D3128), E (D3896), UK/918/67, UK/82, UK/84, UK/86, 793/B и др. [14, 102].

В результате исследований, проведенных в Австралии, было показано, что циркулирующие там изоляты антигенно отличаются от американских и европейских штаммов. Было типировано более 10 новых серотипов вируса ИБК A (Vac-1), В (Q1/76), С (N1/62), D (N9/74), E (Q1/73), F(V2/71), G (V1/71), H (N1/75), I (N2/75), J (N3/62), К (Т1/82), L (N1/88), M (Q3/88), N (N25/87), О (V18/91), на основе которых получены живые и инактивированные вакцины [14, 49].

По сообщению J.K.A.Cook, выделяемые в Европе изоляты вируса имеют лишь отдалённое антигенное родство с референтными штаммами известных серотипов.

В 1994 году во Франции, Бельгии и Голландии отмечали вспышки ИБК, вызванные новым нефропатогенным штаммом вируса [57, 118].

Зимой 1990-1991 гг. в Великобритании наблюдалась вспышка острого высококонтагиозного заболевания среди бройлеров, вызвавшего резкий подъем смертности у родительского поголовья и у бройлеров на последней стадии откорма. Было выделено около 10 изолятов вируса ИБК, которые были антигеннородственны между собой и значительно отличались от американских и европейских референтных штаммов. Изоляты были сгруппированы в новый серотип, названный 793/В [78]. О выделении новых изолятов вируса ИБК, антигенно отличных от вакцинных штаммов и референтных серотипов, сообщалось в Тайване [145], Корее [102], Италии [68], Австралии [116], Великобритании [145], Китае [159], Мексике [100], Иране [137].

Обобщив приведенные данные, можно заключить, что вирус ИБК в настоящее время продолжает изменяться, генерируя большое количество новых серотипов и вариантов.

1.2 Патогенез возбудителя ИБК Верхние дыхательные пути - основное место размножения вируса ИБК, затем в результате виремии вирус получает широкое распространение в других 19 тканях организма [160]. Вирус является, в основном, эпителиотропным и проникает в клетки путем виропексиса. Работы с применением иммунофлуоресцентной иммунопероксидазной и (IF) [160], [164, 171] электронной микроскопии [164] показали репликацию вируса ИБК в реснитчатом эпителии и клетках, секретирующих слизь.

В течение клинической фазы заболевания максимальные титры вируса регистрируются в трахеях между 5 и 10 сут. после заражения [49, 168], но изредка вирус может присутствовать на 28 день после заражения [47].

Вирус также размножается в эпителиальных клетках легких и воздушных мешках [131]. Высокие титры вируса наблюдаются в этих тканях между 4 и 11 днями после заражения [168].

1.2.1 Особенности репликации отдельных штаммов вируса ИБК Несколько штаммов ИБК выделены из клоакальных мазков, экскрементов и миндалин слепой кишки [46, 47, 154]. Эксплантанты из некоторых кишечных тканей показаны как среда для выращивания вируса ИБК in vitro [62, 64, 100]. В нескольких работах в тканях пищевода обнаруживали максимальное количество вируса при инфицировании кишечным изолятом ECV2 вируса ИБК [154], а также вирусом, относящимся к серотипу 793/В [108]. Мазки из пищевода также использовали для индикации вируса ИБК в ПЦР. Однако осталось не выясненным, действительно ли вирус размножался в пищеводе, или он попадал туда из трахеи механическим путем.

Вирус ИБК также выделяли из железистого желудка, двенадцатиперстной кишки и тонкого кишечника [49, 154]. Darbyshire et al. [100] показали, что вирус ИБК хуже размножался в тканях железистого желудка in vitro, чем в тканях респираторного тракта и в яичниках. Тем не менее тип клеток для размножения вируса в тканях железистого желудка достоверно не установлен, но, вероятно, это эпителиальные клетки.

Напротив, в тканях толстого кишечника репликация вируса ИБК происходит в клетках, подобных гистиоцитам и лимфоидным клеткам, расположенным в миндалинах слепой кишки [172]. С помощью реакции иммунофлуоресценции показано размножение вируса в ворсинках эпителиальных клеток в подвздошной и прямой кишках [49, 108]. Хотя вирус ИБК имеет обширный тропизм, для органов желудочно-кишечного тракта не описаны явные гистологические изменения.

Вариантный штамм вируса ИБК G классифицирован как энтеротропный, благодаря его более длительному присутствию в тканях кишечника, по сравнению с респираторными тканями [112]. Недавно обнаружилось, что вариантный штамм серотипа 793/В вируса ИБК был более энтеротропный, чем пневмотропный, и даже ассоциировался с диареей у бройлеров [108]. Очевидно, что работами по репликации вируса ИБК в кишечнике пренебрегают, потому что штаммы вируса ИБК не демонстрируют энтеропатогенность.

MacDonald et al. [156] сообщали, что вследствие зобной инокуляции цыплят вакцинами из штаммов Н-52 и H-120, вирус редко выделялся из кишечника или любых других висцеральных тканей, и антительный ответ не обнаруживался. Тем не менее почки проявляли устойчивость к внутривенному контрольному заражению. Более интенсивное изучение орального инфицирования энтеротропными штаммами ИБК или двойного заражения вирусом и другими кишечными патогенами, такими, как сальмонеллы, кокцидии или ротавирус, может дать больше информации о влиянии репликации вируса ИБК на кишечник.

Способность штаммов ИБК выживать при низком рН в присутствии пищеварительных ферментов и желчных солей может быть результатом кишечной репликации. Otsuki et al. [170] показали, что некоторые штаммы несут большие потери в титрах, когда выдерживаются 3-4 часа при рН 3,0, но другие, более устойчивые, штаммы выделить из кишечника не удалось. Ambali & Jones [50] сравнили штамм М41 с энтеротропным вариантом (G). Оба вируса имели одинаковую чувствительность к трипсину, но вариант G показал в 50 раз большую устойчивость к таирогликохолату натрия, что могло бы частично объяснить его способность к репликации в кишечнике.

Вирус ИБК выделялся из гардеровой железы [108, 117, 188], и клетки, положительные к вирусу ИБК, обнаруживали в строме железы при помощи 21 иммунофлуоресцентного окрашивания Интраокулярная вакцинация [188].

привела к развитию массовой инфильтрации лимфоцитов, к повышению количества клеток в плазме крови [101, 161, 187] и десквамации тубулярного эпителия в гардеровой железе с восстановлением через 14 дней после вакцинации [188]. Увеличение числа плазматических клеток и развитие лимфоидной ткани [162] также наблюдалось в слезной железе после вакцинации.

Вирус ИБК также выделяли из бурсы и, вследствие [49, 112], экспериментального заражения штаммами Н52 и H120 наблюдались явные гистологические повреждения [155, 159]. Хотя вирус ИБК выделен из ряда других тканей, таких, как печень [47, 49] и селезенка [168], не подтверждена его связь с каким-либо функциональным изменением. Вирус ИБК выделяли также из спермы и яиц [168].

1.3 Механизм репликации вируса в организме Репликация и транскрипция РНК коронавируса происходит в цитоплазме инфицированных клеток путем почкования (рисунок 2). Вирион коронавируса прикрепляется к рецептору клетки-хозяина с помощью шипа гликопротеина и, в зависимости от штамма вируса, протеин шипов вириона гликозилируется во время трансляции и транспортируется в аппарат Гольджи (АГ). Вирионы накапливаются в пузырьках гладкой эндоплазматической сети, прежде чем освободиться [13, 39].

Вирионы содержат три основных структурных белка S, N, и M и минорный оболочечный белок sM или E.

Молекулы основного фосфопротеина N, взаимодействуя с геномной РНК, образуют протяженный нуклеокапсид со спиральной симметрией, диаметром нм. Нуклеокапсид окружает 9-11 липопротеиновая оболочка, которая формируется из ШЭР (шероховатый эндоплазматический ретикулум) или АГ зараженных клеток. Гликопротеин М это трансмембранный белок, довольно глубоко погруженный в оболочку. На наружной поверхности липидного бислоя оказывается лишь небольшой, гликозилированный N-концевой участок молекулы белка [39, 88]. Предполагают, что гликопротеин М способствует включению нуклеокапсида в оболочку вириона при почковании.

Гликопротеин-предшественник S (180-200 кДа) является структурным белком пепломеров. Посттрансляционно он нарезается протеазами на 2 части – гликопротеины S1 и S2. Небольшая его часть погружена в липидный бислой, а большая часть молекулы находится снаружи. Гликопротеин S1 содержит основные антигенные детерминанты, индуцирующие синтез серотипспецифических и вируснейтрализующих антител, а также играет роль антирецептора, с помощью которого вирусная частица прикрепляется к рецепторам клетки и вызывает слияние мембран [39, 72].

При трансляции гликопротеин S включается в мембрану ШЭР и гликозилируется путем переноса олигосахаридов на аспарагиновые остатки растущей полипетидной цепи [12, 39, 82]. А в аппарате Гольджи или на плазматической мембране белок S расщепляется протеазами клетки-хозяина на две большие субъединицы S1 (90 кДа) и S2 (84 кДа) [39, 72], что является необходимым условием для проявления инфекционности вируса [39, 112].

Было установлено, что гликопротеин S переносится на плазматическую мембрану и экспонируется на поверхности инфицированных клеток, что может делать клетки чувствительными к лизису под действием противовирусных антител и комплемента [39, 82].

Гликопротеин М также синтезируется на полисомах, связанных с мембранами, однако по процессингу и типу включения он отличается от большинства других вирусных гликопротеинов [39, 183].

Коронавирусы обладают некоторыми уникальными особенностями транскрипции РНК, состава белков и механизма сборки вирионов. Коронавирусы прикрепляются к рецепторам клеток-мишеней своими пепломерами [127].

Вирионы коронавирусов образуются путем почкования от мембран ШЭР и АГ. Нити нуклеокапсидов выстраиваются в месте почкования на цитоплазматической поверхности этих мембран в упорядоченный ряд на участках, содержащих вирусные гликопротеины. На мембранах ШЭР или АГ белки клетки-хозяина исключаются из почкующихся вирионов и заменяются вирусными гликопротеинами [39].

Рисунок 2 - Репликация и транскрипция РНК коронавируса в чувствительной клетке [73] Почкующиеся вирионы, которые содержат собранный нуклеокапсид, проходят в полости ШЭР и АГ. Таким образом, внутри клетки могут образовываться зрелые вирионы, возможно, даже до того, как белок S перейдет на плазматическую мембрану и сделает клетку чувствительной к иммунному воздействию. Поэтому покрытые оболочкой вирусы этого типа почкуются в месте, которое не подвергается действию иммунной защиты хозяина. Возможно, именно этим объясняется персистенция коронавируса в хозяине, обладающем иммунитетом [39, 179].

Вирионы некоторых вирусов могут выходить из клетки лишь при ее гибели, однако коронавирусы способны выходить также из интактных клеток, повидимому, с помощью механизма клеточной секреции [140]. Способность 24 коронавирусов выходить из клетки без ее лизиса является важным фактором, обеспечивающим возможность умеренной (нецитопатической) инфекции.

1.4 Эпизоотология ИБК Главным источником инфекции служит больная и переболевшая птица.

Выделение вируса из организма происходит с истечениями из носа и глаз, со слюной и фекалиями. Переболевшие цыплята и куры остаются вирусоносителями в течение 50-100 дней [14].

Заражение происходит в основном аэрогенным путём, а также при приёме инфицированного корма и воды. Распространение инфекции возможно через инфицированную внешнюю среду: кормушки, подстилку, одежду и обувь обслуживающего персонала. Распространению инфекции способствуют неблагоприятные условия содержания, неудовлетворительное кормление и, как возможный, часто дискутируемый фактор иммунизация живыми вирусвакцинами [14, 39, 94].

На тяжесть течения болезни влияют возраст птицы, пол, порода и условия кормления [15, 42].

При ИБК наблюдается длительное и прерывающееся вирусоносительство, что значительно осложняет борьбу с данной инфекцией, т.к. создаёт угрозу повторных вспышек и дальнейшего распространения заболевания. Природа персистентной инфекции ИБК остаётся невыясненной [14, 38].

Длительность инкубационного периода при экспериментальной инфекции составляет 18-36 часов, в естественных условиях - от 36 часов до 8 сут.

Продолжительность инкубационного периода обусловлена вирулентностью штамма и методом введения вируса, его дозой, а также условиями кормления и содержания птицы и, соответственно, общим уровнем резистентности организма [14, 81].

При аэрозольном заражении цыплят неразведённой вируссодержащей ЭЭЖ появляются трахеальные хрипы уже через 24 часа, а при интратрахеальном введении цыплята заболевают через 18 часов.

К ИБК восприимчивы куры всех возрастов, но наиболее яркую клиническую картину удаётся наблюдать у молодых цыплят. Уровень летальности при ИБК также во многом обусловлен возрастом больной птицы.

Смертность цыплят 2-3 - суточного возраста при ИБК составляет 90-100%, в возрасте 15 сут - до 25%, среди кур-молодок – 19% [22]. Однако чаще летальность при ИБК невысока, и ущерб от заболевания складывается в основном из снижения яичной и мясной продуктивности, вынужденной выбраковки птиц и повышения чувствительности к другим заболеваниям [35].

Ослабляя организм, ИБК создаёт благоприятный фон для развития вторичных инфекций.

При ассоциированном течении ИБК и пуллороза (возбудитель – Salmonella pullorum gallinarum) клинические признаки обоих заболеваний ярко выражены, падёж сравнительно выше, ИБК обостряет латентную форму пуллороза [118].

При ассоциированном течении ИБК с микоплазмозом или колибактериозом клинические признаки со стороны респираторного тракта наблюдают более длительный срок [76].

При экспериментальном заражении цыплят вирусом ИБК и Escherichia coli наблюдали высокую летальность, чего не отмечали при инфицировании цыплят каждым возбудителем по отдельности. ИБК часто протекает в ассоциации с другими вирусными заболеваниями, такими, как ларинготрахеит и аденовирусная инфекция [11].

В начале 90-х годов в Великобритании были выделены несколько полевых изолятов вируса, обладающих высокой вирулентностью, вызывающих высокую летальность даже среди взрослых кур и молодок [24]. При этом обнаруживали нехарактерные для ИБК признаки: отёки, аэросаккулиты.

Во второй половине 90-х годов в Европе широко распространились штаммы нового серотипа 793/В, вызывающие характерные изменения в грудных мышцах, диарею, обладающие высокой вирулентностью. Респираторные признаки при этом были слабо выражены.

Кроме кур к заражению ИБК чувствительны фазаны, индюки и перепела. У фазанов при заражении вирусом ИБК наблюдали признаки снижения 26 яйценоскости и поражения респираторного тракта. Экспериментальное заражение индюков вирусом ИБК удавалось только путём внутривенного введения вируса, что вызывало виремию продолжительностью до 48 часов. У перепелов, заражённых вирусом ИБК, диагностировали бронхиальные хрипы, хотя вирус не был выделен, и повышения титров антител не наблюдали [14, 39].

При интрацеребральном заражении в экспериментальных условиях удается заразить белых мышей - сосунов. При этом они заболевали в 100% случаев до 12суточного возраста и погибали через 3 – 4 дня после заражения; заболевание протекало с симптомами поражения нервной системы. Интрацеребральным методом удается заразить мышей вирусом инфекционного бронхита, относящимся к серотипам Массачусетс, Айова-97 и Грей. Вирусы серотипов Коннектикут, Айова-609 и Хольт не вызывали заболевания у мышат [36].

Таким образом, характерные клинические признаки вирус ИБК вызывает только у кур, что является отличительной чертой коронавирусов, которые имеют ограниченный круг хозяев.

При возникновении заболевания происходит быстрое инфицирование всего поголовья. Тяжесть протекания заболевания зависит от вирулентности и тропности циркулирующего штамма. По сообщениям авторов, наиболее высокую смертность вызывали такие штаммы, как Delaware 072 в США, «Т» штамм в Австралии, штамм «Чапаевский» на территории бывшего СССР [12, 126].

1.5 Клинические признаки при ИБК

При инфекционном бронхите отмечают три клинических синдрома:

респираторный, нефрозо-нефритный и репродуктивный.

1.5.1. Респираторный синдром Размножение ИБК в респираторных тканях вызывает характерные симптомы, такие, как одышка, кашель, трахеальные хрипы и носовые выделения.

Иногда наблюдаются отекшие, воспаленные глаза и опухшие пазухи [78, 172]. В случаях без осложнений эти симптомы сохраняются только 5-7 дней и исчезают в 27 течение 10-14 дней. У пораженных кур отмечаются слабость, снижение аппетита и веса через 3 дня после заражения [167].

У инфицированных кур наблюдается загустевание слизи в носовых проходах, пазухах и трахее. В легких могут наблюдаться небольшие участки, пораженные пневмонией. Воздушные сумки могут казаться затемненными или содержать желтый творожистый экссудат.

В природе вирус ИБК не единственная респираторная болезнь птиц, встречающаяся в полевых условиях. В присутствии некоторых респираторных заболеваний кур, вызываемых бактериями или вирусами, эти агенты увеличивают тяжесть заболевания. Вирус ИБК, вероятно, сам по себе не является опасным, но создаёт благоприятный фон для развития вторичных инфекций.

1.5.2 Репродуктивный синдром В процессе изучения заболевания было установлено, что кроме типичных респираторных признаков вирус ИБК может вызывать значительное снижение яйценоскости и, далее, изменения в скорлупе и ухудшение качества яиц [156].

Такие эффекты могут сопровождаться слабыми респираторными симптомами, или респираторные симптомы могут отсутствовать [94]. Некоторые штаммы вызывают только изменения в окраске скорлупы [94]. Степень снижения яйценоскости изменяется в зависимости от периодов яйцекладки, вирулентности вируса и других неспецифических факторов. Чувствительность отдельных особей варьирует в значительной степени [160]. Повышение продуктивности может начаться после 2-3 недель, но достигает только субоптимального уровня. Когда яйцекладка возобновляется, некоторые яйца имеют мягкую скорлупу, неправильную форму или грубую скорлупу.

У кур, инфицированных вирусом ИБК штамм М41, вирусный антиген обнаруживался в эпителии яичников между 6 и 9 днями после заражения [135].

Участки железистой гипоплазии, вызванной ИБК, ведут к снижению синтеза белков альбуминов, особенно овомуцина, лизоцима и других важных белков.

Также описано присутствие в яичном альбумине кровяных включений [156].

28 В брюшной полости инфицированных несушек можно обнаружить сгущенный желтковый материал. Микроскопические изменения в яичниках включают в себя уменьшение размера эпителиальных клеток, уменьшение числа или полное отсутствие ресничек, увеличение желез, лимфатического центра и клеточную инфильтрацию в тонком слое и в тубулярной строме.

Не выяснены механизмы, посредством которых инфицирование ИБК вызывает прекращение яйценоскости некоторых птиц, для разных временных периодов.

1.5.2.1 Факторы, влияющие на патогенность вируса ИБК для репродуктивных органов 1.5.2.1.1 Возраст птицы Инфицирование ИБК особей женского пола в возрасте менее 2 недель может вызывать долговременные нарушения в развитии репродуктивного тракта, в результате чего появляются "ложные несушки", которые не несутся нормально в половозрелом возрасте [135]. У цыплят, зараженных в однодневном возрасте вирусом ИБК штамм М41, вирус выделяли между 5 и 11 днями после заражения [134], и также отмечали его размножение в эпителии яичников [97, 134].

Изменения в яичнике, вызванные ранним заражением, могут варьироваться от слабого развития структуры до выпадения слепой кишки из клоаки [134,135].

Средняя треть яичника наиболее сильно поражается участками локализованной гипоплазии, наблюдаемой в визуально нормальных яичниках. На границах гипопластических районов могут наблюдаться крупные кисты, наполненные светлой серозной жидкостью [97].

Гистопатологические изменения в яичнике заключаются в уменьшении размера и потере ресничек в эпителиальных клетках, разбухании тубулярных желез, инфильтрации гетерофилами, лимфоцитами и плазматическими клетками, отеке и фиброплазии [97].

О воздействии на мужской репродуктивный тракт не сообщалось.

1.5.2.1.2 Вирулентность вируса 29 Различия в способности штаммов вируса ИБК вызывать снижение яйценоскости и ухудшение качества яиц было описано Guittet et al. [123]; штамм D274 был наименее вирулентным, в то время как штамм М41 и вариантный штамм PL84084 имели одинаковую степень патогенности. Cook & Huggins [94] установили, что несколько вариантных штаммов вируса ИБК вызывали небольшое снижение яйценоскости, но заметно влияли на окраску яиц.

Различия в вирулентности штаммов вируса ИБК для слаборазвитого яичника кур были описаны [97]; штаммы Massachusetts и Т были вирулентны, в то время как Connecticut Iowa 609 – нет. При пассировании на эмбрионах штамма М41 его вирулентность для яичника уменьшалась [97]. In vitro органная культура яичников (ОКЯ) была высоко чувствительна к штамму H-52 вируса ИБК независимо от возраста кур, и не наблюдалось различий в чувствительности между яйцеводом и участками матки. Pradhan et al. [175] показали, что вируса ИБК штамм M41 вызывает цилиостаз в ОКЯ, полученной из яичников цыплят, предварительно стимулированных эстрогеном. Эта работа дала оптимальное сравнение вирулентности семи штаммов вируса ИБК in vitro с использованием цилиостаза для оценки повреждения эпителия яичника [104]. Изолят ИБК, принадлежащий к серотипу D207, был наиболее вирулентным, в то время как энтеротропный вариантный штамм G был наименее вирулентным.

1.5.3 Нефрозо-нефритный синдром Респираторные признаки выражены слабо и быстро исчезают, у птицы наблюдается депрессивное состояние, снижение массы тела, взъерошенность оперения, а также поражение почек и мочеточников с отложением уратов.

Течение болезни обычно острое. При первичной циркуляции вируса в хозяйстве летальность птицы может достигать 57-70%. Такими свойствами обладают американские штаммы (Gray, Holte), австралийские штаммы (Т1, Т2), а также ряд штаммов, выделенных в Японии и Китае [14].

У птиц старше 6 недель заболевание чаще протекает субклинически, без ярко выраженной клиники. ИБК часто протекает в форме хронической инфекции и может приобретать в хозяйстве стационарный характер.

Хотя такие штаммы, как М41, могут иногда вызывать повреждения почек, нефропатогенность ассоциируется только с определенными штаммами. Высокая вирулентность вируса для почек впервые описана в Австралии [134]. После этого о нефропатогенности ИБК сообщалось из США и некоторых частей Европы [75, 138, 147, 174].

Некоторые штаммы ИБК вызывают первоначально респираторные симптомы, с развитием нефропатогенных признаков, проявляющихся в повышенном потреблении воды и жидком помете. Первый падеж обычно наблюдается на 6 сутки после заражения.

Показано размножение вируса в почках: в центральных извитых канальцах, периферических извитых выводящих канальцах [172] и выводящих протоках [89].

Структурные изменения в эпителиальных клетках канальцев вызывали ухудшение транспорта жидкости и электролитов, приводящее к острой почечной недостаточности. Оказалось, что усиление мочеиспускания у кур, зараженных ИБК, связано с пониженным осмотическим давлением мочи и более высокой скоростью выделения в мочу натрия, калия и кальция [44].

Chen et al. [89] предположили, что почечные повреждения, вызванные вирусом ИБК, могут считаться дактотабулярным интерстициальным нефритом.

Вирус вызывает гранулярную дегенерацию, вакуолизацию и десквамацию эпителия канальцев с массовой инфильтрацией гетерофилов на острой стадии заболевания. Изменения в хронической фазе классифицировались как активный или неактивный типы интерстициального хронического нефрита [45].

Хроническая неактивная форма нефрита указывала на репликацию вируса ИБК в почках и последующую его элиминацию, в то время как хронический активный тип предполагал непрекращающуюся репликацию вируса и повреждение эпителиальных клеток почечных канальцев. Вирус выделялся у 50% птиц с хроническим нефритом.

1.5.3.1 Вирулентность вируса Австралийский штамм Т вызывал наиболее быстрые и тяжелые повреждения у восприимчивых кур вследствие как внутривенного (в/в), так и 31 внутриглазного заражения. Воздействие ИБК на трахеи, по-видимому, не связано с воздействием на почки. Нефропатогенный штамм S вируса ИБК воздействовал на почки менее интенсивно, чем Т, но более сильно на слизистую трахеи.

Используя внутривенно инокуляционную модель для определения титра инфекционости, Lambrechts et al. [148] не нашли значительных различий в инфекционности между нефропатогенными бельгийскими полевыми изолятами, но инфекционность при пассировании вируса на яйцах сильно уменьшалась.



Pages:   || 2 | 3 | 4 | 5 |

Похожие работы:

«ХАФИЗОВ ТОИР ДАДАДЖАНОВИЧ ОСОБЕННОСТИ РОСТА, РАЗВИТИЯ И ПРОДУКТИВНОСТИ ЧАЙОТА (SECHIUM EDULE L. – CHAYOTE) В УСЛОВИЯХ ГИССАРСКОЙ ДОЛИНЫ ТАДЖИКИСТАНА Специальность: 06.01.01. – общее земледелие, растениеводство ДИССЕРТАЦИЯ на соискание учёной степени кандидата сельскохозяйственных наук НАУЧНЫЙ РУКОВОДИТЕЛЬ: доктор биологических наук, профессор, Гулов С.М. Душанбе – 201 ОГЛАВЛЕНИЕ...»

«ПОПОВ ВИКТОР СЕРГЕЕВИЧ ТЕОРЕТИЧЕСКОЕ И ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЕ ОБОСНОВАНИЕ ИССЛЕДОВАНИЙ СРЕДСТВ И СПОСОБОВ ИММУНОМЕТАБОЛИЧЕСКОЙ КОРРЕКЦИИ У СВИНЕЙ 06.02.02 – ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени доктора ветеринарных наук Научный консультант: доктор...»

«Ульянова Онега Владимировна МЕТОДОЛОГИЯ ПОВЫШЕНИЯ БЕЗОПАСНОСТИ БАКТЕРИАЛЬНЫХ ВАКЦИН НА МОДЕЛИ ВАКЦИННЫХ ШТАММОВ BRUCELLA ABORTUS 19 BA, FRANCISELLA TULARENSIS 15 НИИЭГ, YERSINIA PESTIS EV НИИЭГ 03.02.03 – микробиология Диссертация на соискание ученой степени доктора биологических наук Научный консультант:...»

«ТИТОВА СВЕТЛАНА АНАТОЛЬЕВНА Влияние фитопатогенных микроорганизмов на энзиматическую активность растения-хозяина Glycine max (L.) Merr. и Glycine soja Sieb. et Zucc. 03.02.08 ЭКОЛОГИЯ Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: к.б.н., доцент Семенова Е.А. БЛАГОВЕЩЕНСК –...»

«СИМАНИВ ТАРАС ОЛЕГОВИЧ ОПТИКОМИЕЛИТ И ОПТИКОМИЕЛИТ-АССОЦИИРОВАННЫЕ СИНДРОМЫ ПРИ ДЕМИЕЛИНИЗИРУЮЩИХ ЗАБОЛЕВАНИЯХ 14.01.11 – Нервные болезни ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Научный руководитель: доктор медицинских наук М. Н. Захарова Москва – 2015 ОГЛАВЛЕНИЕ ВВЕДЕНИЕ Глава 1. Обзор литературы Оптиконевромиелит Аквапорины и их биологическая функция 13 Патогенез...»

«Горовой Александр Иванович БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫЕ ВЕЩЕСТВА ДРЕВЕСНОЙ ЗЕЛЕНИ И ШИШЕК PINUS KORAIENSIS (ПОЛУЧЕНИЕ, СОСТАВ, ИСПОЛЬЗОВАНИЕ) 03.02.14 – биологические ресурсы Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: доктор биологических наук, профессор Тагильцев Ю. Г. Хабаровск – 2015 СОДЕРЖАНИЕ стр Введение.. 4 Глава 1 Обзор...»

«Степина Елена Владимировна ЭКОЛОГО-ФЛОРИСТИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА СТЕПНОЙ РАСТИТЕЛЬНОСТИ ЮГО-ЗАПАДНЫХ РАЙОНОВ САРАТОВСКОЙ ОБЛАСТИ 03.02.08 – экология (биологические науки) Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: доктор...»

«Шинкаренко Андрей Семенович Формирование безопасного и здорового образа жизни школьников на современном этапе развития общества Специальность 13.00.01– общая педагогика, история педагогики и образования Диссертация на соискание ученой степени кандидата педагогических наук Научные...»

«Степина Елена Владимировна ЭКОЛОГО-ФЛОРИСТИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА СТЕПНОЙ РАСТИТЕЛЬНОСТИ ЮГО-ЗАПАДНЫХ РАЙОНОВ САРАТОВСКОЙ ОБЛАСТИ 03.02.08 – экология (биологические науки) Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: доктор...»

«Жукова Дарья Григорьевна ДИАГНОСТИКА И ПРОГНОЗИРОВАНИЕ РЕАКЦИЙ ГИПЕРЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ К ЛЕКАРСТВЕННЫМ ПРЕПАРАТАМ У БОЛЬНЫХ В ПЕРИОПЕРАЦИОННОМ ПЕРИОДЕ В УСЛОВИЯХ МНОГОПРОФИЛЬНОГО СТАЦИОНАРА 14.03.09 клиническая иммунология, аллергология Диссертация на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Научные руководители: доктор...»

«Ульянова Онега Владимировна МЕТОДОЛОГИЯ ПОВЫШЕНИЯ БЕЗОПАСНОСТИ БАКТЕРИАЛЬНЫХ ВАКЦИН НА МОДЕЛИ ВАКЦИННЫХ ШТАММОВ BRUCELLA ABORTUS 19 BA, FRANCISELLA TULARENSIS 15 НИИЭГ, YERSINIA PESTIS EV НИИЭГ 03.02.03 – микробиология Диссертация на соискание ученой степени доктора биологических наук Научный консультант:...»

«Будилова Елена Вениаминовна Эволюция жизненного цикла человека: анализ глобальных данных и моделирование 03.02.08 – Экология Диссертация на соискание ученой степени доктора биологических наук Научный консультант доктор биологических наук, профессор А.Т. Терехин Москва 2015 Посвящается моим родителям, детям и мужу с любовью. Содержание Введение.. 5 1. Теория эволюции жизненного цикла. 19...»

«Регузова Алёна Юрьевна Исследование специфической активности полиэпитопных Т-клеточных ВИЧ-1 иммуногенов, полученных с использованием различных стратегий проектирования 03.01.03 – «молекулярная биология» Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научные...»

«КОЖАРСКАЯ ГАЛИНА ВАСИЛЬЕВНА КЛИНИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ МАРКЕРОВ КОСТНОГО МЕТАБОЛИЗМА У БОЛЬНЫХ РАКОМ МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ 14.01.12 онкология Диссертация на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Научные руководители: доктор биологических наук, Любимова Н.В. доктор медицинских наук, Портной С.М. Москва, 2015 г....»

«ГУЛЬ ШАХ ШАХ МАХМУД БИОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ ЦИТРУСОВОЙ МИНУРУЮЩЕЙ МОЛИ (Phyllocnistis citrella Stainton) В УСЛОВИЯХ ЮГО-ВОСТОЧНОГО АФГАНИСТАНА Специальность 06.01.07 – Защита растений ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени кандидата сельскохозяйственных наук НАУЧНЫЙ РУКОВОДИТЕЛЬ: доктор с.-х. наук, профессор КАХАРОВ К.Х. Душанбе, 2015 СОДЕРЖАНИЕ ВВЕДЕНИЕ..4 ГЛАВА I. СОВРЕМЕННОЕ СОСТОЯНИЕ ПРОБЛЕМЫ...»

«Доронин Максим Игоревич ЭКСПРЕСС-МЕТОДЫ ВЫЯВЛЕНИЯ ВИРУСА ИНФЕКЦИОННОГО НЕКРОЗА ГЕМОПОЭТИЧЕСКОЙ ТКАНИ ЛОСОСЕВЫХ РЫБ 03.02.02 «Вирусология» Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: доктор биологических наук, Мудрак Наталья Станиславовна Владимир 2015 ОГЛАВЛЕНИЕ 1 ВВЕДЕНИЕ 2 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 2.1 Характеристика возбудителя инфекционного...»

«СЕРГЕЕВА ЛЮДМИЛА ВАСИЛЬЕВНА ПРИМЕНЕНИЕ БАКТЕРИАЛЬНЫХ ЗАКВАСОК ДЛЯ ОПТИМИЗАЦИИ ФУНКЦИОНАЛЬНО-ТЕХНОЛОГИЧЕСКИХ СВОЙСТВ МЯСНОГО СЫРЬЯ И УЛУЧШЕНИЯ КАЧЕСТВА ПОЛУЧАЕМОЙ ПРОДУКЦИИ Специальность 03.01.06 – биотехнология ( в том числе бионанотехнологии) Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель Доктор биологических наук, профессор Кадималиев Д.А. САРАНСК 2014 ОГЛАВЛЕНИЕ ВВЕДЕНИЕ.....»

«Артеменков Алексей Александрович КОНЦЕПЦИЯ ОПТИМИЗАЦИИ ФУНКЦИОНАЛЬНОГО СОСТОЯНИЯ И ПОВЫШЕНИЯ АДАПТАЦИОННЫХ ВОЗМОЖНОСТЕЙ ЧЕЛОВЕКА 03.03.01 – Физиология Диссертация на соискание ученой степени доктора биологических наук Научный консультант: доктор биологических наук, профессор Брук...»

«ВУДС ЕКАТЕРИНА АНАТОЛЬЕВНА Фармакогенетические аспекты антиангиогенной терапии экссудативной формы возрастной макулярной дегенерации» 14.01.07 – Глазные болезни ДИССЕРТАЦИЯ на соискание учёной степени кандидата медицинских наук Научные руководители: доктор медицинских наук Будзинская Мария Викторовна кандидат биологических наук Погода Татьяна Викторовна Москва – 2015...»

«Мансуров Рашид Шамилович Применение препарата Солунат при выращивании бройлеров 06.02.08. – кормопроизводство, кормление сельскохозяйственных животных и технология кормов Диссертация на соискание ученой степени кандидата сельскохозяйственных наук Научный руководитель: доктор биологических наук, профессор, Заслуженный деятель науки Российской...»







 
2016 www.konf.x-pdf.ru - «Бесплатная электронная библиотека - Авторефераты, диссертации, конференции»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.