WWW.KONF.X-PDF.RU
БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА - Авторефераты, диссертации, конференции
 


Pages:     | 1 |   ...   | 3 | 4 || 6 | 7 |   ...   | 8 |

«СИНТЕЗ И ФАРМАКО-ТОКСИКОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ВЕТЕРИНАРНЫХ ПРОТИВОПАРАЗИТАРНЫХ И АНТИБАКТЕРИАЛЬНЫХ ПРЕПАРАТОВ В РЯДУ АЗОТСОДЕРЖАЩИХ ГЕТЕРОЦИКЛОВ ...»

-- [ Страница 5 ] --

За период исследований синтезировали и определили уровень антибактериальной активности более 400 новых веществ. Минимальные бактерицидные концентрации синтезированных нами соединений расположены в интервале от 0,60 до 100,0 мкг/мл и выше. Наибольшей активностью обладают перйодиды гетероциклических аминов и 1,3–дизамещенные 2иминобензимидазолина.

Антибактериальная активность и токсичность донорноакцепторных комплексов галоген-гетероцикл (типа n-) Донорно-акцепторное межмолекулярное взаимодействие имеет большое значение в химии. Это взаимодействие проявляется в первичных актах и переходных состояниях многих химических реакций, лежит в основе многих каталитических процессов, обусловливает специфическую сольватацию в растворах и, наконец, приводит к образованию множества новых соединений с разнообразными свойствами, что особенно важно в контексте наших исследований.

Массив синтезированных нами веществ в ряду азотсодержащих гетероциклов представляет собой гетероциклические структуры, имеющие свободную (неподелённую) электронную пару у атома азота, которая (пара) может служить донором электронов для образования донорно-акцептрных комплексов типа n- с атомами галогена. В нашем исследовании в качестве акцептора мы выбрали универсальное антибактериальное вещество - йод. В качестве донора электронов использовали полученные нами, а также промежуточные и исходные азотсодержащие гетероциклы, которые должны были удотворять определенным требованиям: просто и с высоким выходом получаться, иметь низкую токсичность и достаточно высокую основность, которая напрямую связана с прочностью образующегося комплекса.

Синтезируются перйодиды сливанием растворов органического соединения и йода в мольном соотношении 1:1. Наилучшим растворителем является этанол. Выпадающий в осадок продукт отфильтровывают и промывают этанолом.

–  –  –

Таким образом, в изученных соединениях, благодаря образованию донорно-акцепторной связи йода с атомом азота, токсичность препаратов в пересчёте на чистый йод значительно снизилась при одновременном усилении антибактериальной активности.

Наибольшее внимание мы уделили разработке ветеринарных препаратов, содержащих в качестве активно действующего вещества донорно-акцепторные комплексы галоген-азотсодержащий гетероцикл (комплексы ).

nАзотсодержащие гетероциклы с неподелённой парой электронов выступают в качестве донора электронов, а молекула йода – акцептора электронов.

Поскольку азотсодержащие гетероциклы отличаются большим разнообразием, то и палитра комлексов также может быть весьма представительной. Прочность комплексов можно регулировать выбором соответствующего гетероцикла, причём прочность напрямую зависит от основности гетероцикла. Основность гетероцикла, в свою очередь, можно регулировать путём введения в молекулу гетероцикла донорных, либо акцепторных заместителей. Становится очевидным, что возможностей для конструирования комплексов с требуемыми фармакологическими параметрами довольно много.

В наших исследованиях показана перспективность работ по конструированию лечебных препаратов на основе перйодидов азотсодержащих гетероциклов для лечения сельскохозяйственных животных при инфекционных заболеваниях. Детально изучены некоторые фармако-токсикологические особенности перйодидов азотсодержащих гетероциклов, знание которых необходимо для использования перйодидов в качестве АДВ при колибактериозе телят.

Нами изучена антимикробная активность трёх наиболее перспективных перйодидов азотсодержащих гетероциклов в отношении различных видов микроорганизмов и, особенно, в отношении Escherihia coli, поскольку препараты этого ряда планировалось использовать в качестве лечебных средств при колибактериозе телят раннего возраста. Результаты испытаний представлены в таблице 20.

–  –  –

Из данных таблицы видно, что перйодиды азотсодержащих гетероциклов обладают высокой политропной бактерицидной активностью в отношении различных штаммов Escherihia coli, а так же других видов микроорганизмов.

Полевые изоляты эшерихий так же чувствительны, как и их референтные штаммы.

3.7 Изучение развития резистентности Escherihia coli к перйодидам азотсодержащих гетероциклов Многократные пересевы (произведено 100 пассажей) Escherihia coli О115 на бульоне Хоттингера в присутствии возрастающих концентраций перйодидов не привели к изменению чувствительности тест-культуры. Бактериостатическая активность перйодидов оставалась на уровне исходной (1000,0 мкг/мл для перйодида уротропина, 500,0 мкг/мл для перйодида 5,6-диметилбензимидазола и 500,0 мкг/мл для перйодида 1,2-диметил-5-метоксибензимидазола).

Бактерицидная концентрация (при постановке контрольных тестов в изотоническом растворе хлорида натрия) также оставалась на уровне исходной

–  –  –

где Z – половина суммы числа животных, павших от двух последующих доз; d – интервал между каждыми двумя последующими дозами; m – число животных на каждую дозу; – сумма.

Таким образом, по классификации Медведя Л.И. («Справочник по пестицидам», Киев, 1974. – 424с.) перйодиды испытанных азотсодержащих гетероциклов относятся к малотоксичным соединениям.

Картина отравления при введении ЛД100 для всех трёх перйодидов однотипна. Она описана соавтором исследований Фетисовым Л.Н. в кандидатской диссертации: «через 18 часов отмечали сильную диарею, усиленный диурез (полиурия). Шерстный покров быстро становился грязным.

Животные сбивались в одном месте клетки, наблюдали сильное угнетение.

Аппетит отсутствовал. Дыхание поверхностное, учащенное. Гибель в течение 1-3 суток. При патологоанатомическом вскрытии основные изменения обнаруживали в желудочно-кишечном тракте: резкое утолщение (в 5 раз) слизистой желудка и тонкого отдела кишечника (в 3-4 раза), сильная гиперемия кишечника со стороны слизистой и серозной оболочек; кровоизлияния под капсулой почек и под эпикардом. Печень слегка увеличена, кровенаполнена, темно-вишневого цвета. При гистологических исследованиях в почках находили зернистую дистрофию и некроз извитых канальцев, в двух случаях (1 самец и 1 самка) – гломерулонефрит. В желудке отмечен десквамативный катар слизистой оболочки, а у двух животных (1 самец и 1 самка) очаги некроза. В 12-перстной кишке и толстом отделе кишечника имели место очаги десквамации поверхностного эпителия собственного слоя слизистой оболочки.

Таким образом, введение препаратов в дозе ЛД100 вызывает у лабораторных крыс в почках и желудочно-кишечном тракте дистрофические и некротические поражения».

3.9 Влияние перйодидов азотсодержащих гетероциклов на свойства (активность) противоколипротейного лактоглобулина Ветеринарные препараты, применяемые для лечения телят раннего возраста при желудочно-кишечных заболеваниях не должны снижать активности лактоглобулинов. Результаты сравнительного изучения свойств нативного и инкубированного с перйодидами азотсодержащих гетероциклов

–  –  –

ИВ = (0,10 : 0,19) + (0,10 : 3,0) = 0,52+0,03 = 0,55 ИВ больше 0,50, но меньше 2,0 означает, что взаимодействие аддитивное или индифферентное.

2.Комбинация А с левомицетином – ИВ = (25,0 : 3,0) + (25,0 : 100,0) = 8,58 ИВ больше 2, комбинация антагонистическая.

3. Комбинация А с окситетрациклином – ИВ = (25,0 : 3,0) + (25,0 : 100,0) = 8,58 ИВ в этой комбинации больше 2 означает, что взаимодействие компонентов смеси антагонистическое.

4. Комбинация А с неоветином – ИВ = (0,19 :3,0) + (0,19 : 100,0) = 0,0619 ИВ в этой комбинации меньше 0,50 означает синергидное взаимодействие компонентов смеси.

5. Комбинация А с фурациллином –

ИВ = (0,19 :3,0) + (0,19 : 1,56) = 0,18

ИВ меньше 0,5 означает, что комбинация перйодида уротропина с фурациллином считается синергидной.

6. Комбинация А с ципрофлоксацином – ИВ=(0,20 : 3,0)+(0,20 : 0,5)= 0,46 ИВ в этой комбинации меньше 0,5 означает синергидное взаимодействие компонентов смеси

7. Комбинация Б с полимиксином – ИВ = (0,10: 3,0) + (0,1: 0,19) = 0,56 ИВ больше 0,5, но меньше 2,0 означает, что взаимодействие аддитивное или индифферентное

8. Комбинация Б с левомицетином – ИВ=(12,0 : 3,0)+(12,0 : 100,0) = 4,12 ИВ больше 2,0, комбинация антагонистическая

9. Комбинация Б с тетрациклином – ИВ=(12,0 : 3,0) + (12,0: 100,0)= 4,12 ИВ больше 2,0, комбинация антагонистическая

10. Комбинация Б с неоветином – ИВ=(2,0 : 3,0)+(2,0 : 100,0) = 0,68 ИВ больше 0,50, но меньше 2,0 означает, что взаимодействие аддитивное или индифферентное

11. Комбинация Б с фурациллином – ИВ=(1,0 : 3,0)+(1,0 : 1,56)= 1,30 ИВ больше 0,50, но меньше 2,0означает, что взаимодействие аддитивное или индифферентное

12. Комбинация Б с ципрофлоксацином – ИВ=(0,40 : 3,0) + (0,40 : 0,56) = 0,847 ИВ больше 0,50, но меньше 2,0 означает, что взаимодействие аддитивное или индифферентное

13. Комбинация В с полимиксином – ИВ=(0,05 : 1,0) + (0,05 : 0,19)= 0,31 ИВ в этой комбинации меньше 0,5 означает синергидное взаимодействие компонентов смеси

14. Комбинация В с левомицетином – ИВ=(12,0 : 1,0)+(12,0:100,0)= 12,12 ИВ больше 2, комбинация антагонистическая

15. Комбинация В с тетрациклином – ИВ=(12,0 : 1,0)+(12,0: 100,0)= 12,12 ИВ больше 2, комбинация антагонистическая

16. Комбинация В с неоветином – ИВ=(1,0 : 1,0)+(1,0 : 100,0) = 1,01 ИВ больше 0,50, но меньше 2 означает, что взаимодействие аддитивное или индифферентное

17. Комбинация В с фурациллином – ИВ=(1,0 : 1,0)+(1,0 : 1,56)= 1,64 ИВ больше 0,50, но меньше 2 означает, что взаимодействие аддитивное или индифферентное

18. Комбинация В с ципрофлоксацином – ИВ=(0,20 : 1,0)+(0,20 : 0,56)= 0,56 ИВ больше 0,50, но меньше 2 означает, что взаимодействие аддитивное или индифферентное Таким образом, в двенадцати комбинациях из восемнадцати перйодиды азотсодержащих гетероциклов оказались совместимы, и в отличие от других йодсодержащих соединений, возможно их совместное применение с некоторыми антибиотиками и нитрофуранами.

3.11 Совместимость перйодидов азотсодержащих гетероциклов с антибактериальными препаратами и средствами регидратации по тесту острой токсичности Совместимость препаратов изучили по тесту «острой» токсичности на лабораторных крысах. Антибиотики присутствовали в смесях в концентрации 100,0 мкг/мл, перйодиды вводили в максимально переносимой дозе для крыс (3,50 г/кг массы тела). В группы взяли по 5 лабораторных крыс массой по 170,0

– 180,0 г. Смеси вводили внутрижелудочно однократно в объеме 3,0 мл; срок наблюдения - 14 дней. В таблице 31 отражены результаты оценки совместимости перйодидов с антибактериальными препаратами и средствами регидратации по тесту «острой» токсичности.

–  –  –

По совокупности результатов, представленных в таблицах 24-31, есть основание считать перйодиды уротропина, 5,6-диметилбензимидазола, 1,2диметил-5-метоксибензимидазола совместимыми с лактоглобулинами, со средствами регидратации и некоторыми антибактериальными препаратами.

3.12 Скорость разложения перйодидов в желудочно-кишечном тракте лабораторных крыс Нами изучена скорость разложения в желудочно-кишечном тракте лабораторных крыс трёх перйодидов: уротропина, 5,6-диметилбензимидазола, 1,2-диметил-5-метоксибензимидазола в дозе 0,50 г/кг массы тела. Использовали животных массой 170,0-180,0 г (по 3 головы в группе).

Установили, что препараты находили в желудочно-кишечном тракте лабораторных крыс в течение 6 часов. Через 2 часа препараты обнаруживали во всем тонком кишечнике (на расстоянии 60,0-100,0 см, от пилоруса до слепой кишки). В последующие 2 часа препараты находили во всех отделах желудочно-кишечного тракта крыс, то есть в толстый отдел кишечника препараты поступают через два часа после введения и обнаруживаются в течение 2-4 часов после введения. Скорость разложения всех трёх препаратов была одинаковой.

Приведенные результаты исследований показали ряд полезных свойств перйодидов азотсодержащих гетероциклов: высокую бактерицидную активность политропного действия (МПК 3,0-1,0 мкг/мл), незначительную токсичность, совместимость с лактоглобулинами и средствами регидратации, сохранение до 6 часов активности в желудочно-кишечном тракте, стабильность антибактериальной активности в присутствии инактивирующих веществ. Таким образом, установили, что перйодиды азотсодержащих гетероциклов по сумме полезных свойств могут быть использованы в качестве активно действующих веществ в ветеринарных препаратах при желудочно-кишечных заболеваниях молодняка сельскохозяйственных животных.

В таблице 32 представлена сравнительная характеристика свойств перйодидов азотсодержащих гетероциклов и других йодсодержащих препаратов.

–  –  –

Совокупность результатов исследований, представленных выше, позволили нам приступить к изучению перйодидов азотсодержащих гетероциклов в качестве терапевтических средств при инфекционных заболеваниях сельскохозяйственных животных. Поскольку изученные детально перйодиды показали приблизительно одинаковые свойства, то по экономическим соображениям в опытах на сельскохозяйственных животных нами применялся перйодид уротропина.

Применение донорно-акцепторного комплекса йода с 3.13 гексаметилентетрамином и комплексного препарата на его основе «Колицид» для лечения телят при колибактериозе Все исследования по применению перйодида гексаметилентетрамина уротропина проведены совместно А.А. Зубенко и Л.Н. Фетисовым. Материалы исследований изложены в совместных статьях, патенте на препарат «Колицид», материалах, поданных в Ветфармсовет, а также в кандидатской диссертационной работе Л.Н.Фетисова, выполненной под руководством А.А.

Зубенко.

Влияние перйодида гексаметилентетрамина на организм телят при длительном использовании в терапевтической дозе (0,15г/кг, 2раза в день с физраствором, 14 дней).

Препарат выпаивали 2 раза в день с физиологическим раствором в объеме 200мл за 30 минут до выпойки молока. В таблицах 33 и 34 представлены результаты цитологических и биохимический исследований проб крови телят полученных через 1 сутки после завершения применения препарата. Телятам

–  –  –

достоверности различий Применение перйодида гексаметилентетрамина в течение 14 дней не вызывает у телят токсической реакции, биохимические и цитологические показатели крови телят опытной группы на 16-й день опыта (через сутки после завершения введения препарата) не имели достоверных отличий от аналогичных показателей контрольной группы.

Опыты по изучению лечебной эффективности перйодида гексаметилентетрамина при колидиарее телят.

Опыты этой серии провели на телятах, принадлежащих двум хозяйствам (колхоз им. Ленина Аксайского района Ростовской области и совхоз «Персиановский» Октябрьского района Ростовской области) с близкими условиями содержания телят раннего возраста: 1-2 секционные профилактории для одновременного содержания 20-30 телят. 92,0% новорожденных телят на 2-3 день жизни заболевали. Появлялась диарея, быстро приводящая животных к развитию дегидратационного состояния, телята слабели, теряли аппетит.

Гибель животных достигала 25,0%.

Телятам опытных групп с момента появления первых признаков заболевания давали перйодид гексаметилентерамина в дозе 0,15 г/кг массы тела с физиологическим раствором (0,85% водный раствор хлорида натрия) по 50мл на приём за 20-30 минут до выпойки молока, 2 раза в день. Животные контрольных групп получали антибактериальные препараты, используемые на тот момент в хозяйстве:

опыт №1- тетрациклин и норсульфазол, опыт №2 – тетрациклин и фуразолидон, опыт №3 – ЛЭРС, опыт №4 – тетрациклин и сульфамонометоксин, опыт №5 – левомицетин и фталазол, опыт №6 левомицетин внутрь и неомицин внутримышечно. Препараты применяли в рекомендуемых для телят дозах. При лечении телят обеих групп использовали патогенетические и симптоматические средства, по окончании лечения антибактериальными препаратами назначали бактериальные препараты АБК, ПАБК.

Опыт №1. В опытной группе из 40 телят погибло 2, сохранность составила 95,0 %. Длительность лечения – 2 суток. В контрольной группе из 38 телят погибло 9, сохранность составила 76,0 %, длительность лечения - 3,5 суток.

Опыт №2. В опытной группе из 45 телят пало 4, сохранность составила 91,10%. Длительность лечения - 2,20 суток. В контрольной группе из 25 телят погибло 4. Сохранность составила 84,0%. Длительность лечения – 2,80 суток.

Опыт №3. В опытной группе из 47 телят погибло 3, сохранность составила 93,60%. Длительность лечения – 2,40 суток. В контрольной группе из 35 телят погибло 3, сохранность составила 91,4%. Длительность лечения – 2,5 суток.

Опыт №4. В опытной группе из 40 телят погибло 4, сохранность составила 90,0%. Длительность лечения -1,90 суток. В контрольной группе из 22 телят погибли 4, сохранность составила 82,0%. Длительность лечения – 3,0 суток.

Опыт №5. В опытной группе из 25 телят все остались живы, сохранность

-100,0%. Длительность лечения – 2,0 суток.

В контрольной группе из 15 телят погибло 2, сохранность составила 86,70%. Длительность лечения – 3,80 суток.

Опыт №6. В опытной группе из 42 телят погибли 3, сохранность составила 93,0%. Длительность лечения – 2,10 суток. В контрольной группе из 35 телят погибли 5, сохранность составила 85,70%. Длительность лечения – 3,40 суток.

Таким образом, в опытных группах сохранность телят была стабильно выше 90,0%, достигала в отдельных опытах 100,0 % и в среднем составила 93,80%, в то время как в контрольных группах сохранность была от 76,0% до 91,40% и в среднем составила 84,40%. Длительность лечения в опытных группах в среднем была на 1,15 суток меньше, чем в контрольных группах.

Опыты по применению комплексного препарата «Колицид» для лечения телят при колибактериозе Лекарственная форма, в которую в качестве химиотерапевтического средства включен перйодид гексаметилентетрамина, была названа «Колицидом». Лечебную эффективность «Колицида» изучили в условиях молочно-товарных ферм колхоза «Серп и молот» Крыловского района Краснодарского края.

Фермы на момент проведения испытаний не были оборудованы родильными отделениями и профилакториями. Новорожденные телята содержались в индивидуальных клетках, размещенных в проходах и тамбурах коровников. Поение телят трехразовое. Диагноз на колибактериоз подтвержден бактериологическими исследованиями Павловской межрайонной ветлаборатории. Из патологического материала от павших телят выделены штаммы эшерихий: E.coli O15 (экспертиза № 1554), E.coli O18 (экспертиза № 1607-609 ), E.coli O33 (№2695-96). Первые признаки заболевания у телят отмечали на 2-3 день жизни. Заболевание проявлялось диареей и развитием дегидратационного состояния. Переболевали все новорожденные телята.

Лечебную эффективность «колицида» изучали на 141 теленке, в контрольных группах было 290 телят. Группы формировали по мере заболевания телят.

Лечение начинали при первых признаках проявления заболевания: ухудшение аппетита, угнетение, повышение температуры тела (в начальной стадии - на 1оС). Телятам опытных групп выпаивали за 30 минут до кормления по 100 мл «колицида» 3 раза в день в течение 2-3 дней. Контрольные животные получали вначале ЛЭРС по 250 мл 3 раза в день с молоком, в случае развития диареи применяли этокан (этоний, канамицин, лимонная кислота, глюкоза) по 0,5 г/кг массы животного, 3 раза в сутки, до кормления. Телятам опытной и контрольной групп назначали дополнительно средства регидратации и патогенетической терапии. Эффективность лечения определяли по количеству выздоровевших и павших животных в группах, тяжести течения заболевания, длительности лечения и приросту массы тела.

В опытной группе из 141 теленка выздоровело 127, пало 14, длительность лечения составила 3 дня, среднесуточный прирост массы тела составил 276 г (учет за первые 10 дней жизни); в контрольной группе из 290 телят выздоровление наступило у 255 телят, пало 35 телят, длительность лечения составила 5,7 дней, прирост массы тела равен 270г. Таким образом, лечебная эффективность «Колицида» составила 90,1%, контрольных препаратов (ЛЕРС и этокан) 87,9%. Длительность лечения телят при колибактериозе препаратом «Колицид» в 1,9 раза меньше, чем длительность лечения с использованием средств, применяемых в хозяйстве. Испытания показали преимущества «Колицида» по сохранности телят, по сокращению сроков лечения, по приросту массы тела.

4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ

4.1 Обсуждение результатов поиска инсектоакарицидных препаратов в ряду азотсодержащих гетероциклов и перспективы развития данного направления Реальной проблемой, снижающей эффективность лечебных мероприятий, является развивающаяся резистентность насекомых и клещей к давно и интенсивно применяемым препаратам. На данный момент более 500 видов насекомых и клещей обладают устойчивостью к инсектоакарицидам в той или иной степени. Становится очевидной необходимость разработки новых инсектоакарицидных препаратов.

В настоящее время в качестве инсектоакарицидных средств изучаются соединения многих классов органических веществ: ароматических эфиров, серосодержащих гетероциклов и, особенно, азотсодержащих гетероциклов, о чем свидетельствует все возрастающий поток патентов, касающихся производных пиразола, имидазола, бензимидазола, тиазола, тиазина. В основном патентуются производные, имеющие сульфидные, сульфонильные, нитрильные группировки, атомы серы и галогенов, среди которых приоритет отдан фтору. Следует подчеркнуть, что в отличие от ранее применявшихся полигалогенсодержащих инсектицидов (гексахлоран, альдрин, дильдрин и т.п.) новые галогенсодержащие гетероциклы способны подвергаться биодеградации.

Все возрастающее применение находят препараты из ряда синтетических производных никотина, которые называются неоникотиноидами. К этому классу относятся имидаклоприд, тиаклоприд, нитепирам, ацетамиприд, тиаметоксам, клотианидин, динотефуран и другие. В патентах они заявлены как инсектоакарициды широкого спектра действия, но пока более широкое применение они находят в растениеводстве, хотя созданы некоторые препараты для ветеринарии, например, адвокат и адвантикс фирмы Байер, в состав которых входит имидаклоприд. Неоникотиноиды являются производными алкалоидов никотина и анабазина, которые сами по себе обладают выраженными инсектоакарицидными свойствами, однако активность их недостаточна для того, чтобы найти широкое применение в ветеринарии.

Химическая модификация алкалоидов привела к созданию названных выше высокоактивных препаратов-неоникотиноидов. Модификации подвергались в основном насыщенные фрагменты алкалоидов, то есть ядра пиперидина и пирролидина, причём активными оказались не только соединения, сохранившие циклическую структуру, но и вещества с открытой цепью.

Пиридиновое же ядро в большинстве коммерческих препаратов остаётся неизменным. Предпринимается много попыток усилить активность неоникотиноидов путём введения различных заместителей в пиридиновое ядро с сохранением его циклической структуры, но пока реальные результаты приносит только замещение атома водорода на атом хлора в шестом положении гетероцикла.

Анализ литературных данных позволил нам предположить, что поиск активных препаратов путём замены ядра пиридина на иные гетероциклические структуры является перспективным направлением создания новых неоникотиноидов. Проблема заключалась в том, чтобы из множества известных гетероциклов выбрать наиболее подходящий по ряду параметров, что позволило бы данному гетероциклу выполнять те же функции (быть миметиком), что и шестичленный пиридиновый цикл в алкалоидах анабазине и никотине. Нами была выдвинута гипотеза о том, что наилучшим миметиком может быть азотсодержащий гетероцикл имидазол и что такая замена шестичленного гетероцикла на пятичленный может привести к новым противопаразитарным препаратам с полезными свойствами.

Имидазол был выбран нами по следующим соображениям:

- имидазольное кольцо является составной частью многих природных соединений (гистидин, гистамин) и лекарственных средств (особенно фунгицидные препараты группы имидазола), поэтому токсикология, фармакокинетика и фармакодинамика имидазолсодержащих средств достаточно детально изучены; в этих исследованиях нами не найдено указаний на высокую опасность имидазола для организма животных в тех случаях, когда ядро имидазола является составной частью метаболитов лекарственного средства; поскольку мы планировали синтез инсектоакарицидов на основе имидазола и производные данного гетероцикла могли быть возможными метаболитами предполагаемого лечебного средства, то выбор имидазола в определённой мере избавлял от опасности накопления и персистирования препарата и его метаболитов в организме животных;

- с химической точки зрения модификация ядра имидазола имеет больше возможностей, нежели других пятичленных азотсодержащих гетероциклов;

- два фрагмента в анабазине и никотине (ароматическое пиридиновое кольцо и насыщенные циклы пиперидина и пирролидина, соответственно) соединены ковалентной связью углерод-углерод; в планируемых нами соединениях фрагменты соединяются связью азот-углерод, формирование которой происходит значительно проще и открывает больше возможностей для связывания фрагментов различной химической природы.

Поскольку имидазольный цикл должен был играть роль миметика большего по размеру шестичленного пиридинового цикла, то на выбор заместителей, которые следовало ввести в ядро имидазола, налагались следующие ограничения:

1. Размер их не должен быть слишком большим;

2. Заместители должны обладать электроноакцепторными свойствами, поскольку основность имидазола выше основности пиридина, в котором пиридиновый атом азота играет решающую роль в проявлении инсектоакарицидной активности.

На стадии планирования работ оставался неясным вопрос, допустимо ли введение заместителей во второе положение имидазольного цикла. На схеме 35 изображены анабазин (слева) и АДВ ДИХИМ-1. Введение заместителей в указанные стрелками места резко ограничивает число степеней свободы из-за пространственных препятствий, что может воспрепятствовать принятию нужной конформации для связывания с биомишенью. Нам не удалось найти в литературе сведений о том, как влияют заместители во втором положении молекулы анабазина (указано стрелкой) на его биологическую активность, поэтому не было чёткого ответа на вопрос о возможном влиянии заместителей во втором положении имидазольного кольца.

–  –  –

В результате проведенных исследований многие наши предположения оправдались. Главное из них – это возможность замены пиридинового фрагмента на имидазольный цикл с целью создания высокоэффективных инсектоакарицидов.

–  –  –

Например, введение метильной группы в положение 2 высокоактивного АДВ ДИХИМ-1 (на схеме 35 указано стрелкой) приводит в полной потере активности. Вероятнее всего, что решающее значение в этом случае имеют пространственные ограничения.

Следует отметить, что нами предпринята обычная для поисковых работ процедура, а именно, модификация самого активного из полученных веществ с целью определения возможных направлений дальнейшей модификации. О результате введения метильной группы уже сказано выше. Безуспешной оказалась попытка удлинить на одно и два метиленовыз звена связующий мостик между двумя фрагментами АДВ ДИХИМ-1. В таблице 35 показаны структуры и величины активности синтезированных соединений.

–  –  –

Структурные формулы АДВ ДИХИМ-1, его гомологов и значения МИК в отношении личинок Leptinotarsa decemlineata Как видно из данных таблицы, гомологи АДВ ДИХИМ-1 полностью неактивны.

Кроме этого, мы пытались усилить активность путём алкилирования N-H групп в АДВ ДИХИМ-1, однако алкилирование приводило к снижению активности.

Следующий этап наших исследований – определить активность разработанного препарата в сравнении с известными веществами. В таблице 36 представлены сравнительные испытания АДВ ДИХИМ-1, имидаклоприда, фипронила и дельтаметрина.

–  –  –

Данные таблицы позволяют сделать вывод о существенном преимуществе разработанного нами препарата над известными коммерческими лекарственными средствами: в концентрации 0,0005% АДВ ДИХИМ-1 вызывает гибель 100% личинок, в то время как фипронил и дельтаметрин в такой концентрации неактивны, а имидаклоприд смертелен лишь для 10% личинок.

Необходимо отметить, что итогом скрининга должно быть решение двух задач:

испытание максимального числа веществ и выявление действительно эффективных соединений. Для решения этих задач необходимо иметь “строгий” по качеству и достоверный по количеству тест-объект. Исходя из этих посылок, для испытаний новых веществ мы использовали личинок колорадского жука Leptinotarsa decemlineata как многочисленный, устойчивый ко многим препаратам и удобный для испытаний вид насекомых. На личинках L.decemlineata природных популяций в 2002 году мы провели скрининг163 новых веществ, в 2003 году – 455 веществ, в 2004 году – 327 веществ, в 2005 и 2006 годах – по 250 веществ, в 2007-2010 годах – по 600-800 веществ ежегодно.

Использование личинок колорадского жука в качестве биологической модели при скрининге инсектицидов имеет ряд преимуществ перед другими моделями:

- достаточное число особей на испытание отдельного вещества – 20-50 личинок на каждом растении;

- личинок нет необходимости подкармливать или поить, так как они обитают на растениях, которые являются их питательным субстратом;

личинки малочувствительны к органическим

- L.decemlineata растворителям, поэтому, если препараты оказывались активными, то эта активность наверняка была обусловлена испытуемыми веществами;

- данная модель позволяет получать предварительную информацию о типе токсического действия вещества на насекомых: при репелентном эффекте личинки покидают обработанное растение; при воздействии на нервную систему личинки погибают в течение 1-2 часов; при антифидантном (анорексигенном) эффекте личинки вначале живы, активны, питаются, затем прекращают питание и постепенно гибнут (в течение 1 – 3 суток);

- оценка биологической активности веществ на личинках L.decemlineata представляет собой сканирующую процедуру на самом высоком уровне устойчивости модельного объекта (естественная среда обитания, перекрестная резистентность к целым группам препаратов), то есть в данном случае биологическая модель выступает и как дополнительный селективный фактор скрининга;

- и, наконец, как показали результаты наших исследований, выявленная на данном тест-объекте активность веществ коррелирует с их инсектоакарицидной активностью в отношении насекомых и клещей, имеющих ветеринарное значение.

Следующий шаг наших исследований – оценка токсических свойств АДВ ДИХИМ-1 на лабораторных животных. Установлено, что ЛД100 АДВ ДИХИМдля лабораторных крыс составляет 500,0 мг/кг массы тела. Рассчитанная по методу Кербера ЛД50 составляет 292,0 мг/кг массы тела. При внутрижелудочном введении АДВ препарата ДИХИМ-1 менее токсично: доза 0,30 г/кг массы тела не вызывает острых токсических реакций. По величине ЛД50 АДВ можно отнести к среднетоксичным, что дало нам основания для дальнейшей работы. Предстояло разработать лекарственную форму на основе полученного высокоактивного соединения. От часто применяемой формы инсектоакарицидных препаратов, а именно, концентрата эмульсии, пришлось отказаться ввиду плохой растворимости АДВ в растворителях, которые обычно применяются для этих целей (сольвент нефтяной, нефрас и другие). АДВ недостаточно хорошо растворим и в спиртах, которые можно было бы использовать для изготовления растворов (в первую очередь – изопропанол).

Поэтому в качестве вспомогательных веществ мы использовали диметилсульфоксид (ДМСО), который хорошо растворяет АДВ и (как свидетельствуют литературные данные) обеспечивает проникновение препарата в глубину кожного покрова, эмульгатор (ОП-7, ОП-10, неонол, геронол), способствующий смачиванию, самораспределению и длительному сохранению АДВ на кожном покрове, а также дистиллированную воду при следующем соотношении компонентов (вес.%):

АДВ - 0,10-20,0 ДМСО - 40,0-80,0 Эмульгатор - 5,0-10,0 Вода - до 100,0.

Обоснование процентного содержания компонентов заключается в следующем: содержание АДВ менее 0,10% приводит к излишнему расходу ДМСО и эмульгатора; содержание АДВ более 20,0% приводит к появлению осадка при хранении препарата. Оптимальным является следующий состав (вес.%), который называется препаратом ДИХИМ-1:

АДВ - 10,0 ДМСО - 75,0 Эмульгатор - 5,0 Вода - 10,0.

В качестве эмульгатора с одинаковым успехом применяют неонол, геронол, ОП-7 или ОП-10. Данные эмульгаторы часто входят в состав отечественных инсектоакарицидов. Отметим, что вода является сорастворителем и присутствие её обязательно для предотвращения появления осадка при пониженных температурах.

Изучение «хронической» токсичности препарата ДИХИМ-1 показало, что трехкратная обработка крыс в рабочей эмульсии препарата (0,05% по АДВ) не вызывает у животных очевидной токсической реакции. Установлено также, что однократная купка животных в рабочих растворах препарата с концентрацией по АДВ 0,1%; 0,5%; 1% и 2% (4 группы по 5 крыс) не вызывает у животных видимой токсической реакции, то есть в дозах, превышающих терапевтическую в 4-10 раз, препарат хорошо переносится животными. Результаты цитологических и биохимических исследований проб крови как лабораторных животных, так и свиней, дважды обработанных опрыскиванием препаратом ДИХИМ-1, указывают на отсутствие негативного воздействия на цитологические и биохимические показатели крови животных.

Далее мы провели сравнительные испытания при ктеноцефалидозе собак и кошек, применяя ДИХИМ-1 с понижающейся концентрацией по АДВ, вплоть до недействующей. Препаратом сравнения служил дельтаметрин. В этих испытаниях установили, что минимальная концентрация АДВ, вызывающая полное освобождение от блох для дельтаметрина составляет 0,003%, а для АДВ препарата ДИХИМ-1 – 0,001%, то есть ДИХИМ-1 в три раза эффективнее, чем бутокс. В отдельном опыте испытали эффективность ДИХИМ-1 (концентрация по АДВ составляла 0,005%) при сифункулятозе свиней. Препаратом сравнения был 0,005% раствор бутокса. Уже после первой обработки препаратом ДИХИМ-1 животные переставали беспокоиться, зуд прекращался. После второй обработки вшей на животных не находили. В контрольной группе после второй обработки у 5 животных обнаружили на коже живых вшей.

Нами проведены испытания препарата в производственных условиях.

Установлено, что двукратная обработка с интервалом 10 дней свиней препаратом ДИХИМ-1 0,05% концентрации по АДВ путем опрыскивания из расчета 15,0 мл на 1,0 кг массы тела освобождает животных от клещей Sarcoptes suis. Испытания показали, что препарат ДИХИМ-1 обладает терапевтической эффективностью при саркоптозе свиней, превышающей эффективность неоцидола и сравним по эффективности с бутоксом.

Препарат ДИХИМ-1 в концентрации 2,50% по АДВ в дозе 0,50-0,75 мл на 1 обработку (1 ухо) обладает акарицидной активностью в отношении клещей Psoroptes cuniculi. Двукратная обработка с интервалом 7 дней полностью освобождает кроликов от клещей, даже при сильной степени поражения.

Двукратная обработка кошек 2,50 % эмульсией препарата ДИХИМ-1 полностью освобождает животных от клещей Otodectes cynotes.

Перспективы развития данного направления исследований Дальнейшее развитие возможно как в направлении химической модификации ядра имидазола на основании выявленных закономерностей, так и расширении сферы применения препарата ДИХИМ-1 и его предполагаемых активных аналогов.

В области синтеза в первую очередь следует синтезировать фторзамещённые производные имидазола, содержащие один или несколько атомов фтора. Вполне возможно, что атом фтора, ввиду его небольшого размера, не будет мешать проявлению активности при введении во второе положение имидазольного кольца. В этом случае открывается значительно больше возможностей для модификации. Следует также синтезировать соединения с иным, нежели в АДВ ДИХИМ-1, вторым (помимо ядра имидазола) структурным фрагментом, взяв для начала заместители, которые содержатся в описанных в литературе неоникотиноидах.

Для расширения сферы применения следует изучить фармакокинетику как АДВ ДИХИМ-1, так и его возможных аналогов при различных способах введения. Если будет установлен факт элиминирования препарата через кожу животных, то это откроет возможность создания инъекционной формы, которая наиболее предпочтительна при лечении заболеваний, вызываемых внутрикожными паразитами.

По результатам исследований инсектицидной и акарицидной активности, токсических параметров, лечебно-профилактической эффективности препарата

ДИХИМ-1 оформлены и утверждены:

1.Заявка на изобретение и получен патент «Способ получения 4,5дихлоримидазолов». Пат. РФ №2425035, заявл. 15 октября 2009, опубл.27.07.2011 Бюл.№11.

2.Заявка на изобретение и получен патент «Способ лечения арахноэнтомозов животных и препарат для его осуществления». Пат. РФ № 2427365, заявл.15.10.2009, опубл.27.08.2011 Бюл.№24.

3. Заявка на изобретение и получен патент «Способ лечения псороптоза овец и препарат для его осуществления». Патент РФ № 2355388. Заявл.

04.06.2007. Заявка № 2007121037/13. Опубл.20.05.2009. Бюлл. № 14.

4. «Методические положения по применению препарата ДИХИМ-1 при арахноэнтомозах животных»

5. «Регламент лабораторный приготовления препарата ДИХИМ-1 для лечения эктопаразитозов животных». Оба документа рассмотрены и одобрены Отделением ветеринарной медицины РАСХН (протокол №3 сентября 2010 года) и прилагаются к диссертационной работе в виде приложения (см. с. 264).

4.2 Обсуждение результатов поиска препаратов с сочетанным антибактериальным и антипротозойным действием и перспективы развития данного направления За последние 20 лет резистентность бактерий достигла тревожного уровня (Алимарданов А.Ш., 2007; Карева Э.П., 2009; Bayrak H. et.al, 2009), что является серьёзной угрозой для здоровья человека (Cosgrove S.E., 2006). В области ветеринарной медицины отсутствие эффективных противомикробных средств затрудняет проведение лечебных мероприятий и увеличивает риск падежа животных. Кроме того, применение препаратов без должной предварительной проверки их эффективности на каждом конкретном предприятии способствует селекции устойчивых штаммов бактерий, опасных не только для животных, но и человека. Поэтому поиск препаратов с новыми механизмами антимикробного действия является острой необходимостью (Silverman R.B., 1992; Cunha B.A., 1998; Levy S.B., 1998; Lipsitch M., 2001).

В последние годы группой американских исследователей открыт новый перспективный класс двумишенных АП, относящихся к ряду 2аминобензимидазолов. Молекулы этих АП характеризуются наличием двух заместителей, этилуреидного в положении 2, и заместителя обычно гетарильного типа в бензольном кольце бензимидазольной системы. Синтезы таких структур многостадийны и трудоёмки.

Имея опыт работы в области синтеза и изучения биологической активности производных 2-аминобензимидазола, мы установили, что ряд простых структур со свободной аминогруппой также обладают выраженной антибактериальной активностью, причём присутствие заместителей в бензольном кольце не является обязательным. Последнее обстоятельство очень важно, поскольку синтез производных бензимидазола, не несущих заместителей в бензольном кольце, относительно прост, что сказывается на цене конечного продукта, а при разработке ветеринарных препаратов вопросы ценообразования стоят не на последнем месте. Чтобы повысить биологическую активность таких структур, нам предстояло выбрать пути их химической модификации. Анализируя данные по антибактериальной активности имеющихся структур, мы заметили, что соединения, несущие большие по молекулярной массе радикалы в положениях 1 и (или) 3, обладают повышенной активностью.

Основываясь на этом наблюдении, мы выдвинули предположение, что целенаправленный синтез соединений, в которых атомы азота связаны с объёмными заместителями, может привести к созданию высокоактивных структур. В дальнейшем наше предположение подтвердилось, но достоверно выяснить причины появления такого эффекта на данном этапе исследований не представляется возможным. Напрашивается наиболее простое

–  –  –

Из 11 производных, содержащих один гидрофильный бетагидроксиэтильный радикал (R1) и один гидрофобный бета-феноксиэтильный радикал (R) - все без исключения обладают высокой активностью в отношении стафилококка (1-15 мкг/мл). Это подтверждает предположение о том, что хотя бы один из заместителей должен быть объёмным и гидрофобным. Введение гидрофобных заместителей (метильная группа или атом галогена) в бензольное кольцо радикала R повышает гидрофобность заместителя, а также и антибактериальную активность в несколько раз. Однако зависимость эта неоднозначна: ещё более гидрофобные заместители (атом брома или два атома хлора) в бензольном кольце вместо ожидаемого повышения активности приводят к значительному (в 5-10 раз) её снижению. Возможно, это не имеет прямого отношения к обсуждаемой зависимости, но связано с мицеллообразованием, которое, как известно, наступает при определённой концентрации любого поверхностно-активного вещества, снижая при этом его антибактериальную активность.

Активность в отношении эшерихиа коли является средней (25-50 мкг/мл) причём соединения с двумя гидрофобными заместителями, как правило, обладают более высокой активностью.

Сравнительные испытания показывают, что многие разработанные нами соединения обладают более высокой активностью в отношении стафилококков, чем ампициллин, фуразолидон, канамицин и окситетрациклин, но менее активны в отношении E.coli.

Замечательной особенностью рассматриваемого класса соединений является высокая протистоцидная активность (менее 1 мкг/мл). Сочетание антибактериальной и антипротозойной активности является желательной при лечении ряда заболеваний, особенно кокцидиоза животных и птицы. Среди исследованных нами соединений (более 600) выявлено несколько десятков высокоактивных веществ с минимальными ингибирующими концентрациями в интервале 0,20-15,0 мкг/мл, причём значительное число (около 3,0 %) исследованных соединений показывает высокую протистоцидную активность на модели Colpoda steinii. В отличие от этого, тотальный скрининг на антибактериальную и инсектоакарицидную активности дает намного меньшую цифру. Так в наших исследованиях на модели L.decemlineata при тотальном скрининге более чем 2000 соединений выявлено 4-5 веществ со средней активностью, позволяющей говорить лишь о дальнейшей целесообразности поиска активных структур в этом же ряду. И только поиск на основании научной гепотезы, то есть целенаправленный подход, позволяет поднять процент активных структур, но не более чем до 1,0 %. Возникает естественный вопрос, являются ли полученные результаты на модели Colpoda steinii достаточным основанием для того, чтобы считать данный класс соединений перспективным в плане создания практически важных для ветеринарии антипротозойных препаратов. Чтобы ответить на этот вопрос, мы использовали наиболее активные препараты с МИК менее 1,0 мкг/мл в опытах по определению терапевтической эффективности на модели экспериментального кокцидиоза цыплят. Эти работы проведены совместно с Бодряковой М.А. и представлены в ее диссертационной работе (Воронеж, 2015). Главный вывод заключается в том, что соединения данного класса, обладающие активностью ин витро в отношении Colpoda steinii в концентрации 1 мкг/мл или менее, обладают выраженной терапевтической эффективностью при экспериментальном кокцидиозе цыплят.

Перспективы развития данного направления исследований.

С целью повышения активности в отношении грам-отрицательных микроорганизмов необходимо предпринять попытку изменить заряд молекулы с положительного на отрицательный. Для этого необходимо ввести в молекулу карбоксильные группы. Местом введения могут быть как бензольное кольцо в бета-феноксиэтильных заместителях, так и аминогруппа, которую можно алкилировать альфа- или бета-галогензамещёнными кислотами. Не исключается и возможность ацилирования аминогруппы ангидридами дикарбоновых кислот.

Продолжить испытания терапевтической эффективности при кокцидиозе цыплят, имея в виду выбор наилучшего соединения из 10-20 вариантов. Если наиболее эффективное соединение окажется водонерастворимым (что наиболее вероятно), то синтезировать водорастворимую форму (как более предпочтительную при кокцидиозе) с помощью известных приёмов.

Провести производственные испытания.

4.3 Обсуждение результатов исследований по разработке антибактериальных препаратов на основе донорно-акцепторных комплексов йода с азотсодержащими гетероциклами. Перспективы развития данного направления Обострившаяся в последние годы проблема лекарственной устойчивости микроорганизмов создает значительные трудности для развития животноводства (Завьянцев В.Г.,1977; Морогина З.Н.,1971). Один из путей снижения отрицательных последствий этого явления – более широкое внедрение в ветеринарную практику препаратов, характеризующихся антисептическим действием: поверхностно-активных веществ (Чекандина Г.Н., Быков Л.А., Романова А.Д.,1975; Соколовский М.В., Афиногенов Г.Е., Панарин Е.Ф.,1980), галогенов (Мохнач В.О.,1967, 1974), солей серебра и других, причем отмечается четкая тенденция применения их при лечении желудочнокишечных болезней.

Особое место в ряду антисептиков по широте спектра и степени антибактериального действия занимают препараты йода, однако использование их при лечении болезней желудочно-кишечного тракта затруднено вследствие быстрой инактивации (Мохнач В.О.,1974; Мозгов И.Е., 1979) или токсичности (Мозгов И.Е., 1979). Задача, которую решают исследователи, заключается в выборе доступного малотоксичного «носителя» йода, устраняющего указанные недостатки. Для усиления полезных свойств известных лекарственных препаратов используют разнообразные приемы инкапсулирование в полимерную матрицу для пролонгированного выделения, микроизмельчение до наночастиц для изменения фармакокинетики и фармакодинамики, инкорпорирование водорастворимых препаратов в липофильную матрицу с целью доставки до нужной мишени и многое другое.

В обсуждении мы считаем уместным описать первые положительные результаты поиска носителя йода. В работе мы руководствовались несколько необычной идеей – применить для этой цели активированный уголь.

Необычность идеи заключалась в том, что активированный уголь применяют в технологиях извлечения йода из буровых вод и литературные данные свидетельствовали о том, что данный адсорбент настолько прочно связывает йод, что для его десорбции необходимо применять химические реагенты с целью восстановления в йодид-анион, который практически не адсорбируется и переходит в раствор. Другими словами, не было никаких оснований ожидать, что йод в адсорбированном виде проявит сколько-нибудь значимую антибактериальную активность. Однако при изучении образцов активированного угля с различным содержанием адсорбированного йода нами было обнаружено наличие у них высокой бактерицидной активности (таблица 37).

–  –  –

Опыты были проведены в отношении E.coli О15 при экспозиции 3,0 часа, бактериальная нагрузка составляла 0,50 млн. микробных клеток в 1,0 мл. Для практических целей интерес представлял препарат с 14,50% содержанием йода, обладающий бактерицидным действием в концентрации 0,0045% (45,0 мкг/мл или около 7,0 мкг/мл в пересчете на свободный йод), что сравнимо с активностью других препаратов йода (Мозгов И.Е.,1979; Мейсель М.Н., Мохнач В.О., Вакина И.П. и др.,1971). Например, для йодинола МПК в отношении E.coli составляет 16,0 мкг/мл, а для йода в растворе йодида калия – 16,0-64,0 мкг/мл.

В целях определения степени инактивации йода, адсорбированного на активированном угле, нами была изучена его бактериостатическая активность в мясо-пептонном бульоне (таблица 38)

–  –  –

22 - - - - +- + + + 28 - - - - +- + + + Примечания: знак (+) – наличие роста культуры; (-) – отсутствие роста культуры; * Предварительно было установлено, что ацидин-пепсин в концентрации 0,475% (0,075% в пересчете на пепсин) и его смесь с активированным углем не влияет на развитие микроорганизмов.

Как оказалось, активность его, как и других препаратов йода (Мохнач В.О.,1974), резко снижается (таблица 38). Мы предположили, что одной из причин этого может быть адсорбирование активированным углем различных веществ из среды, что затрудняет достаточный контакт микробной клетки и частиц активированного угля, а также десорбцию йода и проявление антибактериального эффекта. Поскольку адсорбированные вещества могут быть и белковой природы, то следовало ожидать увеличения антимикробной активности в присутствии белок расщепляющих ферментов. Действительно, ожидаемый эффект имеет место: минимальная бактериостатическая концентрация препарата с 14,50 %-м содержанием йода в присутствии ацидинпепсина в 2 раза меньше при экспозиции 22 часа и в 4 раза меньше при экспозиции 28 часов.



Pages:     | 1 |   ...   | 3 | 4 || 6 | 7 |   ...   | 8 |

Похожие работы:

«КОЖАРСКАЯ ГАЛИНА ВАСИЛЬЕВНА КЛИНИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ МАРКЕРОВ КОСТНОГО МЕТАБОЛИЗМА У БОЛЬНЫХ РАКОМ МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ 14.01.12 онкология Диссертация на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Научные руководители: доктор биологических наук, Любимова Н.В. доктор медицинских наук, Портной С.М. Москва, 2015 г....»

«Якимова Татьяна Николаевна Эпидемиологический надзор за дифтерией в России в период регистрации единичных случаев заболевания 14.02.02 эпидемиология диссертация на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Научный руководитель: доктор...»

«ПОЕДИНОК НАТАЛЬЯ ЛЕОНИДОВНА УДК 602.3:582.282/284:57.086.83]:[681.7.069.24+577.34 БИОТЕХНОЛОГИЧЕСКИЕ ОСНОВЫ ИНТЕНСИФИКАЦИИ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ СЪЕДОБНЫХ И ЛЕКАРСТВЕННЫХ МАКРОМИЦЕТОВ С ПОМОЩЬЮ СВЕТА НИЗКОЙ ИНТЕНСИВНОСТИ 03.00.20 – биотехнология Диссертация на соискание научной степени доктора биологических наук Научный консультант Дудка Ирина...»

«Сафранкова Екатерина Алексеевна КОМПЛЕКСНАЯ ЛИХЕНОИНДИКАЦИЯ ОБЩЕГО СОСТОЯНИЯ АТМОСФЕРЫ УРБОЭКОСИСТЕМ Специальность 03.02.08 – экология (биологические науки) Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: доктор...»

«ХОАНГ ЗИЕУ ЛИНЬ ЭКОЛОГИЗАЦИЯ ЗАЩИТЫ КАПУСТНЫХ КУЛЬТУР ОТ ОСНОВНЫХ ЧЕШУЕКРЫЛЫХ ВРЕДИТЕЛЕЙ В УСЛОВИЯХ МОСКОВСКОГО РЕГИОНА Специальность: 06.01.07 – защита растений Диссертация на соискание учёной степени кандидата биологических наук Научный руководитель: Попова Татьяна Алексеевна, кандидат биологических наук, доцент...»

«Мухаммед Тауфик Ахмед Каид ХАРАКТЕРИСТИКА ГЕНОТИПОВ С ХОРОШИМ КАЧЕСТВОМ КЛЕЙКОВИНЫ, ОТОБРАННЫХ ИЗ ГИБРИДНЫХ ПОПУЛЯЦИЙ АЛЛОЦИТОПЛАЗМАТИЧЕСКОЙ ЯРОВОЙ ПШЕНИЦЫ МЯГКОЙ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ДНК-МАРКЕРОВ Специальность 06.01.05 – селекция и семеноводство сельскохозяйственных растений Диссертация на соискание ученой степени кандидата сельскохозяйственных наук Научный...»

«КУЖУГЕТ ЕЛЕНА КРАССОВНА «Хозяйственно-биологические особенности крупного рогатого скота, разводимого в разных природно-климатических зонах Республики Тыва» 06.02.10. Частная зоотехния, технология производства продуктов животноводства Диссертация на соискание ученой степени кандидата сельскохозяйственных наук Научный...»

«Мануйлов Виктор Александрович Генетическое разнообразие вируса гепатита В в группах коренного населения Сибири 03.01.00 – молекулярная биология Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: член-корр. РАН, профессор, д.б.н. С.В. Нетесов...»

«КОВАЛЕВА АННА ВАЛЕРЬЕВНА ПРИМЕНЕНИЕ ФИТОСИРОПОВ И ФИТОЭКСТРАКТОВ В ПРОИЗВОДСТВЕ ХЛЕБОБУЛОЧНЫХ ИЗДЕЛИЙ Специальность 05.18.01 – Технология обработки, хранения и переработки злаковых, бобовых культур, крупяных продуктов, плодоовощной продукции и виноградарства Диссертация на соискание ученой степени кандидата технических наук Научный руководитель: доктор...»

«Храмцов Павел Викторович ИММУНОДИАГНОСТИЧЕСКАЯ СИСТЕМА ДЛЯ ОЦЕНКИ НАПРЯЖЕННОСТИ ПОСТВАКЦИНАЛЬНОГО ИММУНИТЕТА К КОКЛЮШУ, ДИФТЕРИИ И СТОЛБНЯКУ 14.03.09 – Клиническая иммунология, аллергология Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: доктор биологических наук, Раев Михаил Борисович...»

«Хохлова Светлана Викторовна ИНДИВИДУАЛИЗАЦИЯ ЛЕЧЕНИЯ БОЛЬНЫХ РАКОМ ЯИЧНИКОВ 14.01.12-онкология ДИССЕРТАЦИЯ На соискание ученой степени доктора медицинских наук Научный консультант: Доктор медицинских наук, профессор Горбунова В.А Москва 2015 ОГЛАВЛЕНИЕ Введение Глава 1. Обзор литературы 1.1. Общая характеристика рака яичников 1.1.1. Молекулярно-биологические и...»

«ТУРТУЕВА ТАТЬЯНА АНАТОЛЬЕВНА РАЗРАБОТКА СБОРА НЕЙРОПРОТЕКТИВНОГО И ЭКСТРАКТА СУХОГО НА ЕГО ОСНОВЕ 14.04.02 фармацевтическая химия, фармакогнозия ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук Научный руководитель: доктор фармацевтических наук, профессор НИКОЛАЕВА ГАЛИНА ГРИГОРЬЕВНА Улан-Удэ – 2015 ОГЛАВЛЕНИЕ...»

«Шапурко Валентина Николаевна РЕСУРСЫ И ЭКОЛОГИЧЕСКОЕ КАЧЕСТВО ЛЕКАРСТВЕННЫХ РАСТЕНИЙ (НА ПРИМЕРЕ БРЯНСКОЙ ОБЛАСТИ) Специальность 03.02.08 – экология (биологические науки) Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: доктор...»

«Трубилин Александр Владимирович СРАВНИТЕЛЬНАЯ КЛИНИКО-МОРФОЛОГИЧЕСКАЯ ОЦЕНКА КАПСУЛОРЕКСИСА ПРИ ПРОВЕДЕНИИ ФАКОЭМУЛЬСИФИКАЦИИ КАТАРАКТЫ НА ОСНОВЕ ФЕМТОЛАЗЕРНОЙ И МЕХАНИЧЕСКИХ ТЕХНОЛОГИЙ 14.01.07 – глазные болезни Диссертация на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Научный...»

«Шинкаренко Андрей Семенович Формирование безопасного и здорового образа жизни школьников на современном этапе развития общества Специальность 13.00.01– общая педагогика, история педагогики и образования Диссертация на соискание ученой степени кандидата педагогических наук Научные...»

«Ядрихинская Варвара Константиновна ЭКОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ РАСПРОСТРАНЕНИЯ ОСТРЫХ КИШЕЧНЫХ ИНФЕКЦИЙ В Г. ЯКУТСКЕ И РЕСПУБЛИКЕ САХА (ЯКУТИЯ) 03.02.08 – экология Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель кандидат биологических наук, доцент М.В. Щелчкова Якутск 2015...»

«ЗАУЗОЛКОВА Наталья Андреевна АГАРИКОИДНЫЕ И ГАСТЕРОИДНЫЕ БАЗИДИОМИЦЕТЫ ЛЕСОСТЕПНЫХ СООБЩЕСТВ МИНУСИНСКИХ КОТЛОВИН 03.02.01 – «Ботаника» ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель – кандидат биологических наук, И. А. Горбунова Абакан – 2015 СОДЕРЖАНИЕ ВВЕДЕНИЕ... ГЛАВА 1....»

«Петро ва Ю лия Геннад ь евна «ШКОЛА УХОДА ЗА ПАЦИЕНТАМИ» ПР И ПР ОВЕДЕНИИ МЕДИЦИНСКОЙ Р ЕАБИЛИТАЦИИ ПОСЛЕ ЦЕР ЕБР АЛЬНОГО ИНСУЛЬ ТА 14.01.11 – нервные болезни ДИССЕРТАЦИЯ на соискание учёной степени кандидата медицинских наук Научный руководитель: доктор медицинских наук, Пряников И.В. профессор Москва – 2015 стр ВВЕДЕНИЕ ГЛАВА 1. СПЕЦИФИКА И ОСОБЕННОСТИ ПРОВЕДЕНИЯ МЕДИЦИНСКОЙ...»

«Доронин Максим Игоревич ЭКСПРЕСС-МЕТОДЫ ВЫЯВЛЕНИЯ ВИРУСА ИНФЕКЦИОННОГО НЕКРОЗА ГЕМОПОЭТИЧЕСКОЙ ТКАНИ ЛОСОСЕВЫХ РЫБ 03.02.02 «Вирусология» Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: доктор биологических наук, Мудрак Наталья Станиславовна Владимир 2015 ОГЛАВЛЕНИЕ 1 ВВЕДЕНИЕ 2 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 2.1 Характеристика возбудителя инфекционного...»

«Вафула Арнольд Мамати РАЗРАБОТКА ЭЛЕМЕНТОВ ТЕХНОЛОГИИ ВЫРАЩИВАНИЯ ПАПАЙИ ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ ЗДОРОВОГО ПОСАДОЧНОГО МАТЕРИАЛА И ЭКСТРАКТОВ С БИОПЕСТИЦИДНЫМИ СВОЙСТВАМИ ДЛЯ ЗАЩИТЫ ЕЕ ОТ ВРЕДНЫХ ОРГАНИЗМОВ Специальности: 06.01.07 – защита растений 06.01.01 – общее земледелие и растениеводство Диссертация на соискание ученой степени кандидата сельскохозяйственных...»







 
2016 www.konf.x-pdf.ru - «Бесплатная электронная библиотека - Авторефераты, диссертации, конференции»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.