WWW.KONF.X-PDF.RU
БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА - Авторефераты, диссертации, конференции
 


Pages:   || 2 | 3 | 4 | 5 |   ...   | 8 |

«СИНТЕЗ И ФАРМАКО-ТОКСИКОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ВЕТЕРИНАРНЫХ ПРОТИВОПАРАЗИТАРНЫХ И АНТИБАКТЕРИАЛЬНЫХ ПРЕПАРАТОВ В РЯДУ АЗОТСОДЕРЖАЩИХ ГЕТЕРОЦИКЛОВ ...»

-- [ Страница 1 ] --

На правах рукописи

Зубенко Александр Александрович

СИНТЕЗ И ФАРМАКО-ТОКСИКОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА

ВЕТЕРИНАРНЫХ ПРОТИВОПАРАЗИТАРНЫХ И

АНТИБАКТЕРИАЛЬНЫХ ПРЕПАРАТОВ В РЯДУ АЗОТСОДЕРЖАЩИХ

ГЕТЕРОЦИКЛОВ

06.02.03 – ветеринарная фармакология с токсикологией

ДИССЕРТАЦИЯ

на соискание ученой степени доктора биологических наук

г. Новочеркасск – 2015 Содержание ВВЕДЕНИЕ……………………………………………………………………....... 6

1.Обзор литературы…………….………………………….…………….….........19

1.1. Проблема лекарственной устойчивости микроорганизмов и пути её преодоления………………………………………………………...……………....19

1.2. Проблема резистенности насекомых и клещей и пути её преодоления.......34

1.3. Поиск антибактериальных препаратов в ряду азотсодержащих гетероциклов……………………………………………………………….……….38

1.4. Поиск противопаразитарных препаратов в ряду азотсодержащих гетероциклов………………………………………………………………………..43

1.5. Подходы к компьютерному прогнозированию биологической активности органических соединений……………...………………………….....50

2. Материалы и методы исследований……..………………………...……….58

2.1. Общие сведения. Методы синтеза инсектоакарицидных соединений в ряду азотсодержащих гетероциклов……………………………………………………58

2.2. Методы синтеза соединений с сочетанным протистоцидным и антибактериальным действием……………………………………………………6

2.3. Методы оценки инсектоакарицидной, протистоцидной и антибактериальной активности синтезированных соединений…………………97

2.4. Методы оценки токсичности полученных соединений…………................103

2.5. Методы изучения терапевтической эффективности препарата ДИХИМ-1 при арахноэнтомозах животных…………………………………………………105

2.6. Изучение особенностей фармакокинетики препарата ДИХИМ-1………..113

2.7. Методы оценки фармако-токсикологических свойст донорно-акцепторных комплексов йода с азотсодержащими гетероциклами…………………………114

2.8. Изучение терапевтической эффективности перйодида гексаметилентетрамина и препарата на его основе «Колицид» при колибактериозе телят…………………………………………………………….117

3. Результаты исследований…………………………..……………………….119

3.1. Целенаправленный синтез инсектоакрицидных соединений, основанный на научной гипотезе …………………………………......……........119

3.2. Показатели инсектоакарицидной активности новых соединений…...……121

3.3. Фармако-токсикологическая характеристика нового инсектоакарицидного препарата ДИХИМ - 1 …………………………………..123 3.3.1. Разработка лекарственной формы препарата ДИХИМ – 1…………….123 3.3.2. Исследование токсических свойств препарата ДИХИМ – 1 ………........124 3.3.3. Исследование эффективности препарата ДИХИМ – 1 при различных заболеваниях животных ………………………...………….......129 3.3.4. Особенности распределения препарата ДИХИМ – 1 в организме лабораторных животных …………………………………………………….......131 3.3.5. Разработка методических положений и инструкции по применению препарата ДИХИМ-1……………

3.4. Целенаправленный синтез протистоцидных соединений, основанный на научной гипотезе ………………………………………..………134

3.5. Производные азотсодержащих гетероциклов, обладающие сочетанным антипротозойным и антибактериальным действием

3.5.1. Антибактериальая активность и токсичность соединений в ряду бензимидазола..……………………………………………………………………149 3.5.2. Сводная таблица по результатам определения антибактериальной активности..……………………………………………………………………......158

3.6. Антибактериальная активность и токсичность донорно-акцепторных комплексов галоген – гетероциклы (типа n-)…………………………….........163

3.7. Изучение развития резистентности E.coli к перйодидам азотсодержащих гетероциклов ……………………………….…………….........170

3.8. Величины ЛД50 перйодидов азотсодержащих гетероциклов ………........171

3.9. Влияние перйодидов азотсодержащих гетероциклов на свойства (активность) лактоглобулинов …………………………………………………..173

3.10. Совместимость перйодидов азотсодержащих гетероциклов с антибактериальными препаратами по тесту антимикробной активности……………………………………………………....177

3.11. Совместимость перйодидов азотсодержащих гетероциклов с атибактериальными препаратами и средствами регидратации по тесту острой токсичности………………………………...…………………..181

3.12. Скорость разложения перйодидов в желудочно-кишечном тракте лабораторных крыс.………………………………………………………………183

3.13. Применение донорно-акцепторного комплекса йода с гексаметилентетрамином и препарата на его основе «колицида»

для лечения телят при колибактериозе …………………………….………......185

4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ……………………………..……….......191

4.1. Обсуждение результатов поиска инсектоакарицидных препаратов в ряду азотсодержащих гетероциклов и перспективы развития данного направления………………………………………………......191

4.2. Обсуждение результатов поиска препаратов с сочетанным антибактериальным и антипротозойным действием и перспективы развития данного направления………………………….……......201

4.3. Обсуждение результатов исследований по разработке антибактериальных препаратов на основе донорно-акцепторных комплексов йода с азотсодержащими гетероциклами.

Перспективы развития данного направления……………………….……….....205

5.ВЫВОДЫ………………………………….………...………………...….……218

6.СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ……………………………………………….......222

7.ПРИЛОЖЕНИЯ…………………………………..…………………….…….265

7.1.Приложение 1…………………………………………………………….......265

7.2.Приложение 2………………………………………………………………...267

7.3.Приложение 3………………………………………………………………...271

7.4.Приложение 4………………………………………………………………...273 Условные обозначения и сокращения АП – антибактериальные препараты АДВ – активно действующее вещество Лейк. – лейкоциты Б – базофилы Э – эозинофилы Ю – юные нейтрофилы П – палочкоядерные нейтрофилы С – сегментоядерные нейтрофилы Л – лимфоциты М – моноциты Нв – гемоглобин Эр – эритроциты ЦП – цветной показатель АТФ – аденозинтрифосфат ДМСО – диметилсульфоксид ДМФА - диметилформамид ЗФР – забуференный физиологический раствор LB – среда Luria-Bertani МПД – максимально переносимая доза Кк – коэффициент кумуляции РПГА – реакция пассивной гемагглютинации ЯМР1Н – ядерный магнитный резонанс ИФА – иммуноферментный анализ ИВ – индекс взаимодействия МПК – минимальная подавляющая концентрация МИК – минимальная ингибирующая концентрация МБК – минимальные бактерицидные концентрации CDCl3 –дейтерированный хлороформ DMSO – d6 – дейтерированный диметилсульфоксид

ВВЕДЕНИЕ

Общая характеристика работы

.

Актуальность темы. Фундаментальным свойством живых организмов является их способность приспосабливаться к неблагоприятным факторам окружающей среды. Не удивительно, что широкое применение химиотерапевтических антибактериальных и противопаразитарных средств приводит к появлению резистентных популяций как микробов, так и паразитов (Смирнов А.А., 1999; Кирилловсих В.А., 2005; Ventos S., 2010; Panasevich L.S., 2004; Mani N., 2006; Grossmann T.H., 2007; Charifson P.S., 2008.). Это создает напряженную ситуацию с сохранностью сельскохозяйственных животных (Мейнел Г., 1976; Кудлай Д.Г., 1977; Зароза В.Г., 1991; Макаров В.В. с соавт., 2000; Шахов А.Г. с соавт., 2000, 2003; Косенко Ю.М., 2009; Карева Э.П., 2012;

Клименко А.И. с соавт., 2012). Без расширения арсенала терапевтических средств для ветеринарной медицины трудно ожидать эффективного ведения животноводства.

Следствием этого является необходимость синтеза новых препаратов, в том числе противопаразитарных и антибактериальных средств, что является одним из перспективных направлений ветеринарной фармакологии (Антипов В.А.,2008, 2009, 2011; Кузин М.И., 1990; Стручков В.И. с соавт., 1991;

Алексеев К.В. с соавт., 2000; Морковник А.С., 2013).

Производные азотсодержащих гетероциклов (имидазола, бензимидазола и других) обладают разнообразной биологической активностью вкупе с низкой токсичностью, поэтому поиск лечебных препаратов в этой области весьма перспективен и постоянно привлекает исследователей (Preston F.N., 1974;

Куколенко С.С. с соавт., 1976; Арзыбаев М., 2002; Malleshappa Noolvi et al, 2014). На базе имидазольных систем созданы антигельминтные, фунгицидные, иммуномодулирующие, адаптогенные и другие средства.

Необходимость разработки новых лечебных средств для ветеринарии определяет цель и задачи данного исследования.

Объект исследования: производные азотсодержащих гетероциклов общей формулы А, методы их синтеза, методы биотестирования, лабораторные и сельскохозяйственные животные.

–  –  –

R1 А Предмет исследования: противопаразитарные, антибактериальные, токсикологические и терапевтические свойства новых производных азотсодержащих гетероциклов.

Научная гипотеза. При поиске новых лечебных средств в ряду азотсодержащих гетероциклов общей формулы А (указаны заместители R1-R4 и нумерация атомов в цикле) нами использован целенаправленный подход, основанный на синтезе структур, которые могут быть миметиками природных и синтетических соединений с известной биологической активностью. Как известно, введение различных заместителей, либо замена целых фрагментов придают новые ценные фармако-токсикологические особенности известным препаратам.

В своей работе мы руководствовались следующими предположениями:

Пятичленный имидазольный фрагмент в структуре А при соответствующих заместителях R1, R2, R3 и R4 может выполнять те же функции (быть миметиком), что и шестичленный пиридиновый цикл в алкалоидах анабазине и никотине, которые обладают инсектоакарицидной активностью. Такая замена может привести к новым противопаразитарным препаратам с полезными свойствами.

Введение в структуру 2-аминобензимидазола (R2=NH2; R3,R4= CH=CH-CH=CH) объёмных липофильных заместителей в положения 1 и 3 может усилить обнаруженную нами антипротозойную и антибактериальную активность соединений этого ряда.

Атом азота, обладающий основными свойствами (положение 3 в формуле А) может быть использован для образования донорно-акцепторных комплексов с антибактериальными галогенами, что придаст ценные фармакотоксикологические свойства данным комплексам в сравнении с исходными компонентами.

Цель исследования. Разработать методы синтеза, изучить фармакотоксикологические свойства и научно обосновать принципы применения в ветеринарной медицине новых противопаразитарных и антибактериальных препаратов из ряда азотсодержащих гетероциклов.

Для достижения намеченной нами цели были поставлены следующие задачи исследования:

Основываясь на научной гипотезе, синтезировать массив новых 1.

производных азотсодержащих гетероциклов.

Разработать эффективные экспресс-методики и провести скрининг 2.

синтезированных соединений на противопаразитарную активность.

Изучить фармако-токсикологические параметры соединений с 3.

высокой инсектоакарицидной и антибактериальной активностью.

Разработать лекарственные формы на основе веществ с высокой 4.

биологической активностью и низкой токсичностью.

Изучить терапевтическую эффективность препарата ДИХИМ-1 при 5.

арахноэнтомозах (эктопаразитозах) животных.

Изучить терапевтическую эффективность нового комлексного 6.

препарата при колибактериозе телят.

Научная новизна. Сформулирована и экспериментально подтверждена гипотеза о возможности получения высокоэффективных инсектоакарицидных средств путём замены шестичленного пиридинового кольца на пятичленный имидазольный цикл в структуре природных противопаразитарных алкалоидов анабазине и никотине. Выявлена зависимость величины активности от вида, количества и местоположения заместителей в имидазольном кольце. С учётом выявленных зависимостей структура-активность, было синтезировано новое органическое соединение: 2-(4,5-дихлор-1-имидазолилметил)-2-(нитровинил)имидазолидин, которое предложено в качестве активно действующего вещества инсектоакарицидного препарата ДИХИМ-1. По результатам исследований получено три патента (патент RU № 2355388 «Способ лечения псороптоза овец и препарат для его осуществления», патент RU №2425035 «Способ получения и патент №2427365 «Способ лечения 4,5-дихлоримидазолов» RU арахноэнтомозов животных и препарат для его осуществления»).

«Методические положения по применению препарата ДИХИМ-1 при арахноэнтомозах животных», а также «Регламент лабораторный приготовления препарата ДИХИМ-1 для лечения эктопаразитозов животных» рассмотрены и одобрены секцией «Инвазионные болезни животных» Отделения ветеринарной медицины Россельхозакадемии, протокол №3 от «23» сентября 2010г.

Впервые обнаружен эффект, состоящий в том, что введение заместителей в положения 1 и 3 азотсодержащего гетероцикла бензимидазола при наличии аминогруппы в положении 2 приводит к появлению противопаразитарных (антипротозойных) свойств. При этом анализ зависимости структураактивность позволяет сделать заключение, что решающее значение для наличия активности имеют свойства 1,3-заместителей: гидрофильные заместители и заместители небольшого размера резко снижают активность, 3,4дихлорбензильный и бета-феноксиэтильный заместители в первом и (или) третьем положении обеспечивают высокий антипротозойный эффект: 11 соединений этого ряда имеют МИК менее 1 мкг/мл в отношении Colpoda steinii.

Наряду с этим, структуры с такими заместителями показали высокую антибактериальную активность с величинами МИК 1-5 мкг/мл в отношении St.aureus и 20-50 мкг/мл в отношении E.coli. Разработка «1--Арилоксиалкил и 1-бензилзамещенные 2-иминобензимидазолины и их фармакологически приемлемые соли, обладающие протистоцидной и антимикробной активностью» признана изобретением и защищена патентом РФ № 2514196.

Разработка «1,3–Дизамещенные 2-иминобензимидазолина, обладающие антибактериальным действием» признана изобретением и защищена патентом РФ № 2423355. Разработан «Регламент лабораторный (технологический) синтеза и очистки антибактериальных препаратов на основе 2иминобензимидазола», который рассмотрен и одобрен секцией «Инфекционная патология животных» Отделением ветеринарной медицины РАСХН, протокол № 2 от 16.04.2013 г.

Сформулирована и экспериментально подтверждена гипотеза, заключающаяся в том, что образование донорно-акцепторных комплексов с участием молекулы йода и азотсодержащими основными гетероциклами может привести к препаратам, выгодно отличающимся по фармакотоксикологическим характеристикам от других форм комбинированных препаратов йода. Установлено, что при образовании комплекса резко снижается токсичность комплекса в сравнении с чистым йодом, причем антибактериальная активность при этом не изменяется, а в отношении некоторых микроорганизмов повышается: МИК комплексных соединений йода с азотсодержащими гетероциклами в отношении E.coli cоставляет 0,20 – 6,25 мкг/мл, в отношении Staph.aureus – 0,78 - 6,25 мкг/мл, в то время как для водного раствора йода в йодиде калия МИК составляют 16,0 – 64,0 и 64,0 мкг/мл соответственно. При этом улучшились такие важные характеристики, как безвредность и стабильность в желудочно-кишечном тракте, что позволило создать препарат «Колицид» для лечения телят при колибактериозе (патент SU № 1809942 А3).

Разработка «Перйодиды бензимидазолия, обладающие антимикробным действием» признана изобретением и защищена патентом РФ № 2009132.

Разработка «Производные пиридо[1,2-a] бензимидазола, обладающие антибактериальным действием и способ их получения» признана изобретением и защищена патентом РФ № 2394824.

Разработка «Производные полиоснования, обладающие антибактериальной и иммуностимулирующей активностью» признана изобретением и защищена патентом RU № 2051156.

Разработки новых методов синтеза производных бензимидазола защищены тремя патентами: АС USSR № 449047 «Способ получения производных 4-(бензимидазолил-2)-метилен-диоксолана-1,3»; АС USSR № 444768 «Способ получения производных 4-(бензимидазолил-2)-метилендиоксолана-1,3»; АС USSR № 433148 «Способ получения виниловых эфиров в ряду 2-замещённых бензимидазола».

Теоретическая и практическая значимость работы.

Модификация алкалоидов анабазина и никотина путем замены шестичленного пиридинового фрагмента на 4,5-дихлорзамещённое производное пятичленного гетероцикла имидазола приводит к эффективным инсектоакарицидам. Это теоретическое положение открывает новые направления в разработке противопаразитарных препаратов.

Полученные в настоящей работе данные позволили установить, что образование донорно-акцепторной связи между йодом и третичным атомом азота гетероциклов придает новым комплексам ряд существенных особенностей по сравнению с отдельными компонентами: резко снижается токсичность йода, повышается устойчивость к инактивирующим веществам, увеличивается антибактериальная активность в отношении некоторых организмов, пролонгируется действие в желудочно-кишечном тракте.

Практическая значимость работы выражается в создании двух новых ветеринарных препаратов для лечения животных при эктопаразитозах и инфекционных заболеваниях.

Реализация результатов исследований.

1. Результатом исследований методов синтеза в ряду дихлоримидазолов является изобретение «Способ получения 4,5 –дихлоримидазолов» (патент РФ № 2425035). Исследования инсектоакарицидной активности соединений ряда 4,5 –дихлоримидазола позволили выявить соединение, обладающее высокими арахноцидными и энтомоцидными свойствами. Новое органическое соединение 2-(4,5-дихлор-1-имидазолилметил)-2-(нитровинил)-имидазолидин предложено в качестве активно действующего вещества препарата ДИХИМ-1, разработка которого защищена патентом RU №2427365 «Способ лечения арахноэнтомозов животных и препарат для его осуществления». Разработаны «Методические положения по применению препарата ДИХИМ-1 при арахноэнтомозах животных» (см. Приложения 4, с.272), к которым приложен проект «Инструкции по применению ДИХИМ-1 при арахноэнтомозах животных»

(Приложение 1, с.264) и «Регламент лабораторный приготовления препарата ДИХИМ-1 для лечения эктопаразитозов животных». Материалы рассмотрены и одобрены Отделением ветеринарной медицины РАСХН (протокол №3 от 23 сентября 2010г).

2. Материалы исследований соединений ряда 2-и 1-аминобензимидазолов легли в основу четырёх патентов на изобретения (патенты РФ №2423355, №2477129, №2425044, №2514007) и были представлены на секции «Инфекционная патология животных» отделения ветеринарной медицины РАСХН, где был рассмотрен и утвержден «Регламент лабораторный (технологический) синтеза и очистки антибактериальных препаратов на основе 2-иминобензимидазола» (протокол №2 от 16.04.2013, см. Приложение 3, с.270).

3. Получен патент SU №1809942 от 10.10.1992 «Препарат для лечения желудочно-кишечных заболеваний телят» («Колицид») по заявке №4916405/15 с приоритетом от 04.03.1991. Активно действующим веществом разработанного препарата является перйодид гексаметилентетрамина, обладающий набором практически важных характеристик: значительной антибактериальной активностью политропного действия, низкой токсичностью, совместимостью с лактоглобулинами и средствами регидратации, отсутствием способности к индукции резистентности у кишечной палочки.

4. Материалы по препарату «Колицид» были представлены в Ветеринарный фармакологический совет для получения разрешения на проведение широких производственных испытаний. Материалы были рассмотрены на заседании президиума Ветеринарного фармакологического совета 23 июня 1989 года. В результате Временное наставление по препарату колицид было представлено на утверждение в Главное управление ветеринарии СССР и было 23 июня 1989 года утверждено. В 1993г Госветфармкомиссия продлила срок действия Временного наставления по применению препарата «Колицид» ( см.Приложение 2, с.266).

5. Разработка «Перйодиды бензимидазолия, обладающие антимикробным действием» признана изобретением и защищена патентом РФ № 2009132.

6. По материалам исследований новых соединений в ряду производных пиридо[1,2-a]бензимидазола оформлена заявку на изобретение №2008151859/04(068172) с приоритетом от 25.12.2008, по которой получили патент РФ на изобретение № 2394824 «Производные пиридо[1,2a]бензимидазола, обладающие антибактериальным действием, и способ их получения», опубликовано 20.07.2010, бюл.№20.

7. Материалы исследований новых производных 5-нитрофурана стали предметом заявки на изобретение № 2009134915/04(049196) с приоритетом от 17.09.2009, по которой получен патент на изобретение № 2425044 «Производные нитрофурана, обладающие антибактериальным действием», опубликовано 27.07.2011, бюл. №21 Апробация работы.

1. Разработанные на основе материалов диссертации «Методические положения по применению препарата ДИХИМ-1 при арахноэнтомозах животных», проект «Инструкции по применению ДИХИМ-1 при арахноэнтомозах животных» и «Регламент лабораторный приготовления препарата ДИХИМ-1 для лечения эктопаразитозов животных» были рассмотрены и одобрены Отделением ветеринарной медицины РАСХН (протокол №3 заседания от 23 сентября 2010г, см. Приложения 1 и 4).

2. Материалы по препарату «Колицид» для лечения телят при колибактериозе были рассмотрены и одобрены на заседании президиума Ветеринарного фармакологического совета 23 июня 1989 года (см. Прилож. 2).

3. На секции «Инфекционная патология животных» отделения ветеринарной медицины РАСХН был рассмотрен и утвержден «Регламент лабораторный (технологический) синтеза и очистки антибактериальных препаратов на основе 2-иминобензимидазола» (протокол №2 от 16.04.2013).

4. Материалы диссертации доложены и обсуждены на Всесоюзной научно-практической конференции «Профилактика болезней сельскохозяйственных животных и ветеринарно-санитарное обеспечение животноводческих помещений», СКЗНИВИ г. Новочеркасск, 1991 г.; на научно-практической конференции «Состояние и перспективы внедрения достижений ветеринарной науки и практики в сельскохозяйственное производство», Вологодская НИВС, Вологда, 2002 г.; на Всероссийской научно-практической конференции «Повышение продуктивности сельскохозяйственных животных и птицы на основе инновационных достижений», ГНУ СКЗНИВИ г. Новочеркасск, 2009 г.; на 7-ой Всероссийской научной конференции «Химия и медицина. ОРХИМЕД», Уфа, 2009 г.; Пятой Международной конференции по химии и химическому образованию. – Минск, Беларусь, 6-9 апреля 2010 года; X Международном семинаре по магнитному резонансу ( спектроскопия, томография, экология). – г. Ростов-на- Дону, 2-10 марта 2010 года; VII Международной конференции по химии. – Туапсе, 2010г.;

IV Международной конференции «Современные аспекты химии гетероциклов», г. Санкт-Петербург, 2-6 августа 2010 года; 2-ой Международной конференции «Новые направления в химии гетероциклических соединений», Железноводск, 2011г.; 18-ой Украинской конференции по неорганической химии. Харьков, июль 2011г.; III Съезде фармакологов и токсикологов России «Актуальные проблемы ветеринарной фармакологии, токсикологии и фармации», СПбГАВМ, Санкт-Петербург, 2011г); Всероссийской научно-практической конференции «Научное обеспечение инновационного развития отечественного животноводства», Новочеркасск, 2011г.; Международной конференции по химии гетероциклов. Новосибирск, 2012г.; Всероссийской научнопрактической конференции «Научное обеспечение устойчивого развития отраслей животноводства Российской федерации», Новочеркасск, 2012г.; VI International Conference “High-Spin Molecules and Molecular Magnets”.-September 8-13, 2012, Rostov on Don, Russia; Международном паразитологическом симпозиуме «Современные проблемы общей и частной паразитологии», СанктПетербург 15-16 ноября 2012 г.; Первой Российской конференции по медицинской химии (Medchem.Russia), Москва, 8-12 сентября 2013г.; на Международной конференции (Индия) по химическим и биологическим наукам, 2-5 марта, 2013г.; XI Международном семинаре по магнитному резонансу (спектроскопия, томография, экология), Россия, Ростов-на-Дону, 9 сентября 2013г.; Всероссийской научно-практической конференции «Научные проблемы и современные тенденции развития отечественного животноводства в условиях ВТО», Новочеркасск, 2013г.; X Международной конференции «Спектроскопия координационных соединений» Туапсе, 22-28 сентября 2013 г.; Третьей Международной научной конференции «Новые направления в химии гетероциклических соединений», Пятигорск, 17-21 сентября 2013 г.

Участие в выставках.

Выставка «АгроРусь»-2011. Золотая медаль за разработку и 1.

внедрение в производство инсектоакарицидного препарата «ДИХИМ-1». Санкт-Петербург, 26 августа 2011 г.

Выставка в Международном институте прорывных технологий и 2.

инноваций. Международный фонд биотехнологии имени академика И.Н.

Блохиной. Диплом за инновационный проект: «Инсектоакарицидный препарат «ДИХИМ-1», Москва, 2012 г.

РосБиоТех-2012, 6-я международная биотехнологическая выставкаярмарка. Диплом, серебряная медаль за разработку Инсектоакарицидный препарат «ДИХИМ-1», Москва, 7-9 ноября 2012 г.

Выставка «АгроРусь»-2013. Золотая медаль за научную разработку 4.

«Производные пиридо [1,2-а] бензимидазола, обладающие антибактериальным действием и способ их получения», Санкт-Петербург, 29 августа 2013 г Выставка «АгроРусь»-2013. Золотая медаль за разработку «Способ 5.

лечения кокцидиоза (эймериоза) сельскохозяйственных животных и птиц», Санкт-Петербург, 29 августа 2013 г.

Выставка «АгроРусь»-2013. Серебряная медаль за научную 6.

разработку «Производные нитрофурана, обладающие антибактериальным действием», Санкт-Петербург, 29 августа 2013 г.

Выставка «АгроРусь»-2013. Серебряная медаль за научную 7.

разработку «1,3-дизамещенные 2-иминобензимидазолина, обладающие антибактериальным действием», Санкт-Петербург, 29 августа 2013 г.

Публикации. Основные положения диссертации отражены в 81 научной работе, в том числе: в 23 трудах Всероссийских конференций и съездов, в 19 патентах Российской Федерации и в 19 изданиях, рекомендованных ВАК.

Личный вклад. Исследования по разработке методов синтеза инсектоакарицидных и протистоцидных соединений, а также синтезы донорноакцепторных комплексов выполнены авторам самостоятельно. При этом часть работ по изучению фармако-токсикологических характеристик препаратов, а также синтезу производных 2-иминобензимидазолина, выполнены в соавторстве с д.х.н. Морковником А.С., к.х.н. Диваевой Л.Н., к.в.н. Фетисовым Л.Н., к.в.н. Бодряковым А.Н. и другими. Все авторы не возражают против использования совместных данных, что подтверждается справками, представленными в диссертационный совет. Автор выражает искреннюю благодарность члену-корреспонденту РАН, профессору А.И. Клименко, д. б. н., профессору Ермакову А.М., к.в.н. Фетисову Л.Н. за консультацию и поддержку.

Структура и объем работы. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследований, результатов собственных исследований и их обсуждения, выводов, практических предложений, списка литературы.

Работа изложена на 264 страницах компьютерного текста, содержит 36 схем, 38 таблиц. Библиографический список включает 373 источника, в том числе 144 зарубежных. Диссертация содержит четыре приложения на 29 страницах.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Модификация алкалоидов анабазина и никотина путем замены шестичленного пиридинового фрагмента на производные пятичленного гетероцикла имидазола при соответствующем подборе заместителей приводит к новым эффективным противопаразитарным препаратам с полезными свойствами.

2. Решающее влияние на активность оказывает количество метиленовых звеньев между имидазольным гетероциклом и кольцом 2-(нитровинил)имидазолидина: соединения с одним метиленовым звеном обладают инсектоакарицидной активностью; увеличение числа звеньев до двух или трёх приводит к полной потере активности.

3. Образование донорно-акцепторных комплексов с участием молекулы йода и азотсодержащими основными гетероциклами с пиридиновым атомом азота позволяет получить препараты, выгодно отличающимся по фармакотоксикологическим характеристикам от других форм комбинированных препаратов йода.

4. Разработка донорно-акцепторных комплексов типа n- галогентретичный амин - перспективный путь создания новых химиотерапевтических средств с высокой антибактериальной активностью политропного действия, низкой токсичностью и длительным действием в условиях желудочнокишечного тракта животных.

5. Донорно-акцепторные комплексы йода с 5,6-диметилбензимидазолом, 1,2-диметил-5-метоксибензимидазолом и гексаметилентетрамином не влияют на свойства противоколипротейного лактоглобулина, совместимы со средствами регидратации и некоторыми антибактериальными препаратами (в 12 комбинациях из 18 изученных) как по тесту антибактериальной активности, так и по тесту токсичности.

6. В ряду производных 1,3-дизамещенного 2-иминобензимидазолина, обладающих сочетанным противопаразитарным и антибактериальным действием, гидрофильные заместители и заместители небольшого размера резко снижают активность; соединения с 3,4-дихлорбензильным и бетафеноксиэтильным заместителями в первом и (или) третьем положении обеспечивают высокий антипротозойный и антибактериальный эффект.

1.ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Проблема лекарственной устойчивости микроорганизмов и пути её преодоления Нахождение соединений нового класса с высокой антибактериальной активностью является трудной задачей, так как подобные соединения среди новых типов органических структур встречаются не часто. В качестве показательного примера можно привести результаты тестирования антибактериальной активности диверсифицированной коллекции из 150000 соединений (De La Fuente R., Sonawane N.D., 2006), по результатам которого удалось найти лишь небольшое число соединений с достаточно выраженной активностью. Это делает весьма актуальной разработку компъютерных методов прогнозирования способности тех или иных соединений надежно связываться с жизненно важными клеточными мишенями патогенных бактерий, обеспечивая их гибель. Наряду с традиционным актуален, следовательно, и мишеньориентированный подход к созданию новых антибактериальных препаратов (Lefa E., Dunman A.M.,2005; Franklin T.J., Snow G.A.,2005). Интенсификация поиска антибактериальных средств необходима также ввиду быстро развивающейся резистентности микроорганизмов к известным препаратам.

Этот процесс не знает границ и достиг таких масштабов, что требует неотложных и скоординированных действий на национальном, региональном и глобальном уровнях (WHA58.27 Improving the containment of antimicrobial resistance).

Лекарственная устойчивость микроорганизмов способность микроорганизмов сохранять жизнедеятельность, включая размножение, несмотря на контакт с химиопрепаратами. Более 70 лет назад Abraham E. и Chain E. (1940) сообщили о наличии пенициллазы у Bacterium coli, микроорганизма, известного в настоящее время как Escherichia coli, a Kirby W.

(1944) - о присутствии фермента подобного типа у Staphylococcus aureus. Эти два сообщения положили начало изучению резистентности микроорганизмов к антимикробным препаратам. Позднее появилось много публикаций о мультирезистентных микроорганизмах, как грамположительных, так и грамотрицательных (Tenover F.C.,1991; Murray B.M. 1991 Neu H.C. 1992).

Сейчас мы встречаемся с инфекциями, вызванными некоторыми штаммами энтерококков, Pseudomonas aeruginosa и ряда других, которые не поддаются лечению.

Различают лекарственную устойчивость природную и возникшую в результате мутаций или приобретения чужеродных генов.

В качестве примера природной устойчивости можно указать на толерантность микоплазм к пенициллину по причине отсутствия у них клеточной стенки, которые являются мишенями для пенициллинов;

устойчивость синегнойной палочки к эритромицину объясняется неспособностью последнего проникать внутрь клетки к своим мишеням рибосомам.

Лекарственная устойчивость микроорганизмов как результат мутаций или приобретения чужеродных генов получила распространение вследствие создаваемого широко применяемыми препаратами селективного фона для выживания именно устойчивых форм бактерий. Так, частота обнаружения пенициллиноустойчивых стафилококков в некоторых регионах достигает 80,0 — 90,0 %, стрептомициноустойчивых — 60,0—70,0 %, шигелл, устойчивых к ампициллину, — 90,0 %, устойчивых к тетрациклину и стрептомицину — более 50,0 % и т.д.

Гены, обусловливающие резистентность, могут находиться как в репликоне, так и в плазмиде, поэтому различают лекарственную устойчивость плазмидного и хромосомного происхождения. Однако генетические элементы под названием транспозоны способны к переходу из одного репликона в другой, поэтому плазмидные гены могут быть включены в хромосому, а хромосомные – в репликон плазмиды. Обмен генетическим материалом путём конъюгации и трансдукции способствует быстрому распространению генов устойчивости и приводит к появлению полирезистентных штаммов микроорганизмов.

К основным механизмам лекарственной устойчивости относят:

- ферментативную инактивацию химиопрепаратов; в этом механизме задействованы бета-лактамазы, эстеразы, трансферазы (хлорамфениколацетилтрансферазы, аминогликозидацетил, фосфо - или аденилилтрансферазы и фосфотрансферазы, воздействующие на эритромицин);

- ослабление проницаемости препаратов внутрь клетки возбудителя;

такой механизм может реализоваться по отношению к бета-лактамам, аминогликозидам, фторхинолонам и др;

- изменение конформации мишени, на которую воздействует препарат;

образование повышенного количества мишеней, на которые воздействует антимикробный препарат.

Систематическое выявление устойчивых штаммов микроорганизмов началось в Российской Федерации несколько десятилетий назад. В совместной статье Фетисова Л.Н. и Зубенко А.А.(1991) и в диссертационной работе Фетисова Л.Н.(2013) отмечается, что при длительном применении одних и тех же антибактериальных препаратов происходит селекция устойчивых к ним популяций микроорганизмов, возбудителей различных болезней при резком снижении лечебной эффективности применяемых средств (Терешин Е.Т., 1974;

Грищенко Р.И. и др., 1980; Навашин С.М., 1984; Минухин В.В., Цыганенко А.Я., 1989). Морогина З.Н. (1971) в течение 4 лет выделяла от больных и павших телят грамотрицательные бактерии и определяла их чувствительность к стрептомицину, тетрациклину, мицерину, колимицину, мономицину, неомицину и полимиксину. Было установлено, что минимальная подавляющая концентрация (МПК) тетрациклина с 30,0 мкг/мл возросла до 200 и выше;

стрептомицина с 28,0 до 104,0 мкг/мл. То же самое происходило с неомицином и мицерином. Здесь необходимо отметить, что лекарственная устойчивость возникает не только у эшерихий, но и у псевдомонад, протея, кокковых форм бактерий (Брода П., 1982; Vanni M., Zucca C., 1986). Шипицын А.Г. и др. (1986) сообщили, что выделенные ими штаммы О 10 и О 11 Ps.aeruginosa не чувствительны совсем или слабо чувствительны к полимиксину-М, тетрациклину, бензилпенициллину, стрептомицину, эритромицину, левомицетину, мономицину и неомицину.

Фетисов Л.Н. (1991, 2013) отмечает, что отечественные и зарубежные исследователи регистрировали множественную лекарственную устойчивость у патогенных серотипов кишечной палочки, обусловленную плазмидами резистентности (Anderson J.D., Jngram L.C., 1973; Anderson E.S., Threlfall E.J., 1974 Брода П., 1982). Рысакова Е.Н.(1973) обнаружила устойчивость патогенных эшерихий в отношении 6-8 антимикробных препаратов. Завьянцев В.Е. (1976) выявил маркеры резистентности у 64,0 - 80,0 % эшерихий, выделенных от больных диареей поросят, а у большинства штаммов, выделенных от больных телят, регистрировал устойчивость к 9 антибиотикам.

Установлено, что высокая устойчивость энтеробактерий к антибиотикам связана с наличием у них плазмид резистентности (R+ - фактор), число которых может достигать 10 и более (Anderson E.S., 1968; Челышев Г.Н. и др., 1978;

Поликарпов Н.А., Шилов В.М., 1979; Брода П., 1982; Акатов А.А., 1984).

Бондаренко В.М. с соавторами (1987), Фетисов Л.Н. (2013), ЗубенкоА.А.(1991) сообщали о том, что не удалось обнаружить ни одного штамма патогенных эшерихий, которые были бы чувствительны к нескольким антибиотикам. Петров В.М. с сотрудниками (1987) в течение ряда лет неоднократно выявляли устойчивость патогенных эшерихий, выделенных от больных и павших телят и поросят из разных хозяйств Алма-Атинской области по отношению к 5-8 антимикробным препаратам (стрептомицину, левомицетину, мономицину, канамицину, гентамицину, полимиксину, энтеросептолу, фуразолидону и др.). Терешин И.М. (1977) показал возможность передачи внехромосомного фактора устойчивости между микроорганизмами. Отмечено, что существуют не только внутривидовая, но и межвидовая передача детерминант устойчивости к антибиотикам, процессы активной и пассивной передачи ДНК от устойчивых бактерий к чувствительным путем конъюгации, трансдукции, трансформации.

Hartleg C.L. и др. (1975) и Howe K., Linton A.H. (1976) обнаружили во многих случаях, что набор О-серотипов E.coli, обнаруживаемых у человека, сходен с таковым у свиней, домашней птицы и телят. Поэтому, вероятно, что здесь имеется общий фонд, в котором происходит обмен плазмидами (данные из статьи Л.Н. Фетисова и А.А. Зубенко, 1991).

Брода П. (1982) указывал на то, что у крупного рогатого скота и овец, содержащихся вне помещения R+ колиформ не обнаруживается. У большинства здоровых людей, не получавших антибиотиков, R+ штаммы также составляли очень небольшую долю всей популяции, однако представляется ясным, что употребление антибиотиков человеком и животными (в виде добавок к корму), ведет к отбору бактерий, несущих плазмиды R. Брода П.

(1982) далее отмечал, что устойчивые бактерии, как правило, исчезают из организма человека по окончании курса лечения антибиотиками, но есть большая опасность, если плазмиды R станут чаще встречаться в тех штаммах, которые колонизируют кишечник наиболее эффективно (Hartley C.J., Richmond M.H., 1975). Возможно такая ситуация в животноводстве уже сложилась, т.е.

появились устойчивые штаммы способные на равных конкурировать с чувствительными штаммами при колонизации кишечника (Smith H.W., 1975).

За последние 20 лет резистентность бактерий достигла тревожного уровня (Bayrak H. et.al, 2009) и является серьёзной угрозой для здоровья человека (Cosgrove S.E., 2006). В области ветеринарной медицины отсутствие эффективных противомикробных средств затрудняет проведение лечебных мероприятий и увеличивает риск падежа животных. Кроме того, применение слабо или вовсе не действующих препаратов способствует селекции устойчивых штаммов бактерий, опасных не только для животных, но и человека. Поэтому поиск препаратов с новыми механизмами антимикробного действия является острой необходимостью (Silverman R.B., 1992; Cunha B.A., 1998; Levy S.B., 1998; Lipsitch M., 2001). Анализ литературных данных показывает, что острота проблемы возросла как в медицине, так и в ветеринарии. Так, в статье Иванова Д.В. и Егорова А.М. (2009) под названием «Распространение и механизмы резистентности микроорганизмов, продуцирующих бета-лактамазы. Фенотипирование потенциальных продуцентов бета-лактамаз семейства enterobacteriaceae и молекулярные механизмы устойчивости к бета-лактамным антибиотикам штаммов enterobacter cloacae, выделенных при внутрибольничных инфекциях»

исследована антибиотикочувствительность 128 внутрибольничных штаммов потенциальных продуцентов бета-лактамаз семейства Enterobacteriaceae, выделенных у больных, находившихся на стационарном лечении в 30 медицинских центрах 15 различных регионов России. Авторы детектировали гены бета-лактамаз класса А (ТЕМ, SHV, СТХ) у 51 штамма Е. cloacae с применением современного метода полимеразной цепной реакции (ПЦР). В работах Крапивиной И.В. (2007), Симоновой О.И. (2007), Рахманова С.Н.

(2009), Савиновой Т.А. (2010), Рыжко И.В. (2010), Халиуллина С.В. (2010), Габриэляна Н.И. (2011), Федянина С.Д. (2012) также отмечено обострение проблемы резистентности бактерий. В статье Колбина А.С. (2010) говорится о том, что с «момента своего внедрения в широкую медицинскую практику антибактериальные средства существенно изменили структуру заболеваемости и достоверно снизили такой показатель, как атрибутивная летальность от инфекционных заболеваний. В то же время в последние десятилетия на фоне значимого роста приобретенной бактериальной резистентности в реальную клиническую практику во всем мире поступило крайне ограниченное количество новых антибактериальных препаратов. Это связано со снижением числа исследований и разработок фармацевтическими компаниями».

Тревожная ситуация сложилась и в ветеринарии (Алимарданов А.Ш.

(2007) и Карева Э.П. (2009). По данным Алимарданова А.Ш., изучавшего резистетность штаммов эшерихий на четырёх птицефабриках, число резистентных и полирезистентных штаммов регулярно увеличивается.

Малоэффективными становятся давно применяющиеся в хозяйствах препараты:

тетрациклин, стрептомицин, неомицин, фуразолидон. На Галляаральской птицефабрике из 12 исследованных штаммов оказались резистентными: к тетрациклину - 9, левомицетину – 4, канамицину – 0, полимиксину – 2, неомицину – 3. При этом 10 штаммов были резистентны к одному антибиотику, 6 – к двум, 3 – к трём. Аналогичные результаты получены и на других фабриках. Количество резистентных штаммов на всех птицефабриках составляло 70,0 – 80,0 %, причём 15,0 – 30,0 % штаммов оказались устойчивыми к трём антибиотикам.

Шкиль Н.Н. (2010) отмечает, что резистентность к антибиотикам выделенной микрофлоры из синовии суставов крупного рогатого скота с клиническими признаками патологии суставов часто превышает 60,0 – 80,0 % от числа взятых проб. Подчёркнута острая необходимость в разработке новых средств для лечения данной патологии. В другой работе этого же автора (2011) также отмечен высокий уровень резистентности на примере возбудителей заболеваний молодняка крупного рогатого скота. Интересные данные по развитию устойчивости бактерий представлены в работе Сашниной Л.Ю.

(2012).

Пути преодоления лекарственной устойчивости микроорганизмов.

В совместной статье Л.Н.Фетисова и А.А.Зубенко (1991) и в диссертационной работе Л.Н.Фетисова (2013), выполненной под нашим руководством, отмечается, что научно-исследовательские работы, имеющие своей целью снижение отрицательных последствий лекарственной устойчивости, ведутся по нескольким направлениям.

Во-первых, предпринимаются попытки воздействовать на интимный механизм этого явления, т.е. на его биологические основы. Результатом этих исследований явились некоторые антибиотики, подавляющие развитие устойчивых штаммов. Большое количество литературных данных свидетельствуют о возможности превращения устойчивых штаммов в антибиотикочувствительные с помощью ДНК-тропных химических соединений (Борисенкова А.Н., 1965; Бродинова Н.С., 1967; Шендеров Б.А., 1971; Jorgensen S., 1974; Pinney R., 1971, 1974). Необходимо подчеркнуть, что большинство данных этими авторами получено ин витро. Уместно также указать, что подавляющее большинство эффективных веществ относится к числу сравнительно токсичных, не нашедших применения или ограниченно используемых в клинике (Терешин И.М., 1977). Это обстоятельство заставляет быть осторожным и не делать далеко идущих выводов о возможности преодоления лекарственной устойчивости путем сочетанного применения химиотерапевтических средств с препаратами, обладающими элиминирующей или антимутагенной активностью.

Во-вторых, проводился интенсивный поиск новых и модификация ядер известных антибиотиков (Егоров Н.С., 1987; Бибикова М.В., 1989; Ломакина Н.Н., 1989; Смирнов В.В., 1989; Nara T.et al, 1977; Teintze M. et al, 1981).

Этот путь приносит щедрые плоды, но появление каждого нового антибиотика, как отмечено выше, требует в настоящее время все возрастающих затрат.

В-третьих, ведется интенсивный скрининг антимикробных препаратов среди различных классов органических соединений (Жарков И.И., 1970, 1978;

Аржаков В.Н., 1979; Отаров А. И., 1979; Ковалев В.Ф., 1980; Кушнир В.Н., 1980; Ибрагимова А.И., 1983; Геворкян Г.Г., 1984).

В-четвёртых, применяются так называемые ударные дозы антибиотиков.

Такой подход часто применяется и даёт отличные результаты, но область его применения ограничивается малотоксичными антибиотиками, имеющими высокий терапевтический индекс (пенициллины, цефалоспорины и т.п.).

В-пятых, применяется комбинированная химиотерапия, что весьма эффективно в борьбе с лекарственно-устойчивыми микроорганизмами, но при сочетании, например, бактериостатического антибиотика с бактерицидным (левомицетина с пенициллином) возможен межлекарственный антагонизм, приводящий к ослаблению антимикробного эффекта. Для защиты беталактамных антибиотиков от бета-лактамаз бактерий используют ингибиторы этих ферментов — клавулановую кислоту, сульбактам (сульфон пенициллановой кислоты) и др. Открытие клавулановой кислоты, содержащей бета-лактамное кольцо и блокирующей ряд бета-лактамаз, стимулировало поиск разнообразных ингибиторов ферментов (аналогов субстратов), что позволяет значительно расширить применение антибиотиков, чувствительных к инактивирующим их ферментам. Поиск веществ для комбинированной терапии интенсивно продолжается (Денисенко П.П.,1997; Сидоров В.В., 2004; Билёв А.Е. и др., 2007; Яковлев В.П., 2008).

В-шестых, ведется поиск новых природных антибиотиков, химическая модификация уже известных антибиотиков с целью получения антимикробных веществ, эффективных против бактерий, устойчивых к уже применяемым препаратам, а также интенсивный синтез новых органических соединений с предполагаемой антибактериальной активностью.

И, наконец, в-седьмых, широко изучаются антисептики с целью создания препаратов, пригодных для использования не только на поверхности тела животных, но и для лечения желудочно-кишечных и иных заболеваний.

В этом отношении представляют интерес поверхностно-активные вещества (ПАВ), многие из которых применяют в медицинской практике в качестве стерилизующих средств. ПАВ повышают проницаемость мембран у бактерий и ингибируют ферменты, разрушающие антибиотики (Афинагенов Г.Е., 1977; Писько Г.Т. и др.,1980; Терешин И.М., 1977) В ряде работ отмечено усиление действия антибиотиков под влиянием катионоактивных ПАВ в отношении грамположительных и грамотрицательных бактерий (Рожавин М.А., 1980; Гудзь О.В. и др., 1982; Литвин В.П., 1985;

Чулков А.К., 1983; Есютин А.В., 1985; Федоров Н.М. и др., 1988;

Вострикова В.Н. и др., 1987). Несмотря на огромные успехи фармакологии, число болезней, вызванных патогенными и условно патогенными микроорганизмами не уменьшается, а растет. Вся история борьбы с инфекционными заболеваниями не оставляет сомнения в том, что имеющийся арсенал лекарств не может решить этой проблемы. Неудержимый рост числа устойчивых видов и штаммов бактерий указывает на то, что нужны другие средства, обеспечивающие уничтожение микробов, а не их культивирование, усиливающее патогенные свойства микроорганизмов.

В этом плане широко изучаются галогены, причем основная доля работ посвящена препаратам йода ( Мейсель М.Н. и др., 1971; Ливицкий В.И., Зубенко А.А., 1977; Дорофеенко Г.А. и др., 1982; Рубцова С.Л. и др., 1983;

Плеханов Б.П., 1986; Индюков А.Л., 2009).

Обращает на себя внимание тот факт, что основная задача, которую ставят перед собой авторы – снижение токсичности соединений йода при одновременном сохранении или даже увеличении их антимикробной активности и повышении стабильности при введении внутрь.

В диссертационной работе Л.

Н.Фетисова (выполненной под руководством А.А.Зубенко; Новочеркасск, 2013 г) дан детальный обзор печатных работ по препаратам на основе йода, опубликованных в основном в 1970-1990 годах. В обзоре отмечается, в частности, что в многочисленных зарубежных патентах (Патент США 2.746.928; Патент США 2.679.533; Патент Великобритании 1.265.919; Патент Франции 1.531.108 и др.) предлагаются синергидные композиции на основе йода и четвертичных аммониевых солей (число патентных разработок в этой области превышало четыре десятка). Интенсивно изучались антимикробные композиции йода и полимеров (Патент США Мохнач В.О., 1962,1967,1974; Скала Л.З., 1968; Мохнач И.В., 1979).

4031249;

Результатом этих работ являлись препараты с низкой токсичностью и высокой антимикробной активностью. Создание новых лекарственных форм, новых носителей для йода остается главной задачей при разработке препаратов, пригодных для применения внутрь.

В 1990-2012 годах исследования по разработке йодсодержащих препаратов интенсивно продолжались.



Pages:   || 2 | 3 | 4 | 5 |   ...   | 8 |

Похожие работы:

«Аканина Дарья Сергеевна РАЗРАБОТКА СРЕДСТВ ДЕТЕКЦИИ ВЫСОКОВИРУЛЕНТНОГО ШТАММА ВИРУСА ГРИППА А ПОДТИПА Н5N 03.02.02 – вирусология Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель Д.б.н., профессор Гребенникова Т. В. Москва 20 ОГЛАВЛЕНИЕ Список использованных сокращений 1. Введение 2. Обзор литературы 2.1. Описание заболевания 2.2. Общая характеристика вируса гриппа 2.3. Эпидемиология вируса гриппа А...»

«ВУДС ЕКАТЕРИНА АНАТОЛЬЕВНА Фармакогенетические аспекты антиангиогенной терапии экссудативной формы возрастной макулярной дегенерации» 14.01.07 – Глазные болезни ДИССЕРТАЦИЯ на соискание учёной степени кандидата медицинских наук Научные руководители: доктор медицинских наук Будзинская Мария Викторовна кандидат биологических наук Погода Татьяна Викторовна Москва – 2015...»

«Платонова Ирина Александровна ПОСТПИРОГЕННАЯ ТРАНСФОРМАЦИЯ НАДЗЕМНОЙ ФИТОМАССЫ В СОСНЯКАХ СЕЛЕНГИНСКОГО СРЕДНЕГОРЬЯ Специальность 06.03.02 – Лесоведение и лесоводство, лесоустройство и лесная таксация ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: д.б.н., с.н.с. Г.А. Иванова Красноярск – 2015...»

«НГУЕН ВУ ХОАНГ ФЫОНГ ОЦЕНКА ЭКОЛОГИЧЕСКОЙ СИТУАЦИИ КРУПНЫХ ГОРОДОВ В СОЦИАЛИСТИЧЕСКОЙ РЕСПУБЛИКЕ ВЬЕТНАМ Специальность: 03.02.08экология (биология) Диссертация на соискание учёной степени кандидата биологических наук Научный руководитель: доктор биологических наук, профессор Чернышов В.И. Москва ОГЛАВЛЕНИЕ ГЛАВА 1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА...»

«Головань Екатерина Викторовна Ресурсы декоративных растений для озеленения внутриквартальных территорий (на примере г. Владивостока) 03.02.14 – биологические ресурсы Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: д.б.н., доцент О.В. Храпко Владивосток — Оглавление Введение Глава 1. Современные подходы...»

«СИМАНИВ ТАРАС ОЛЕГОВИЧ ОПТИКОМИЕЛИТ И ОПТИКОМИЕЛИТ-АССОЦИИРОВАННЫЕ СИНДРОМЫ ПРИ ДЕМИЕЛИНИЗИРУЮЩИХ ЗАБОЛЕВАНИЯХ 14.01.11 – Нервные болезни ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Научный руководитель: доктор медицинских наук М. Н. Захарова Москва – 2015 ОГЛАВЛЕНИЕ ВВЕДЕНИЕ Глава 1. Обзор литературы Оптиконевромиелит Аквапорины и их биологическая функция 13 Патогенез...»

«ТОМОШЕВИЧ Мария Анатольевна ФОРМИРОВАНИЕ ПАТОКОМПЛЕКСОВ ДРЕВЕСНЫХ РАСТЕНИЙ ПРИ ИНТРОДУКЦИИ В СИБИРИ 03.02.01 – «Ботаника» 03.02.08 – «Экология» Диссертация на соискание ученой степени доктора биологических наук Научный консультант: д.б.н., академик РАН Коропачинский И.Ю. Новосибирск – 2015 ОГЛАВЛЕНИЕ: ВВЕДЕНИЕ.. 4 ГЛАВА 1. АНАЛИЗ...»

«ДЕНИСЕНКО ВАДИМ СЕРГЕЕВИЧ ОПЕРЕЖАЮЩАЯ ФИЗИЧЕСКАЯ ПОДГОТОВКА СТУДЕНТОВ УЧЕБНЫХ ЗАВЕДЕНИЙ СФЕРЫ ФИЗИЧЕСКОЙ КУЛЬТУРЫ В КОНТЕКСТЕ ОБЕСПЕЧЕНИЯ НЕПРЕРЫВНОСТИ ПРОФЕССИОНАЛЬНОГО ОБРАЗОВАНИЯ 13.00.04 – Теория и методика физического воспитания, спортивной тренировки, оздоровительной и адаптивной физической культуры ДИССЕРТАЦИЯ на соискание...»

«Брит Владислав Иванович «Эффективность методов вакцинации против ньюкаслской болезни в промышленном птицеводстве» Специальность: 06.02.02 ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени кандидат ветеринарных наук Научный руководитель:...»

«СЕРГЕЕВА ЛЮДМИЛА ВАСИЛЬЕВНА ПРИМЕНЕНИЕ БАКТЕРИАЛЬНЫХ ЗАКВАСОК ДЛЯ ОПТИМИЗАЦИИ ФУНКЦИОНАЛЬНО-ТЕХНОЛОГИЧЕСКИХ СВОЙСТВ МЯСНОГО СЫРЬЯ И УЛУЧШЕНИЯ КАЧЕСТВА ПОЛУЧАЕМОЙ ПРОДУКЦИИ Специальность 03.01.06 – биотехнология ( в том числе бионанотехнологии) Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель Доктор биологических наук, профессор Кадималиев Д.А. САРАНСК 2014 ОГЛАВЛЕНИЕ ВВЕДЕНИЕ.....»

«Мансуров Рашид Шамилович Применение препарата Солунат при выращивании бройлеров 06.02.08. – кормопроизводство, кормление сельскохозяйственных животных и технология кормов Диссертация на соискание ученой степени кандидата сельскохозяйственных наук Научный руководитель: доктор биологических наук, профессор, Заслуженный деятель науки Российской...»

«СИНЕЛЬЩИКОВА Александра Юрьевна Ночная миграция дроздов рода Turdus в юго-восточной Прибалтике Специальность 03.02.04 – Зоология Диссертация на соискание учёной степени кандидата биологических наук Научный руководитель: доктор биологических наук, профессор, главный научный сотрудник К.В. Большаков Санкт-Петербург Оглавление Введение... 3 Глава 1. Особенности миграции...»

«Черкасова Анна Владимировна НОВЫЕ КАРОТИНСОДЕРЖАЩИЕ БАД: ПОЛУЧЕНИЕ, СВОЙСТВА И ПРИМЕНЕНИЕ ДЛЯ ОБОГАЩЕНИЯ МОЛОЧНЫХ ПРОДУКТОВ Специальность: 05.18.07– Биотехнология пищевых продуктов и биологических активных веществ Диссертация на соискание ученой степени кандидата технических наук Научный руководитель: доктор технических наук,...»

«БОЛОТОВ ВЛАДИМИР ПЕТРОВИЧ ОЦЕНКА СОДЕРЖАНИЯ И МИГРАЦИЯ ТЯЖЕЛЫХ МЕТАЛЛОВ В ЭКОСИСТЕМАХ ВОЛГОГРАДСКОГО ВОДОХРАНИЛИЩА Специальность: 03.02.08. Экология Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: доктор биологических наук,...»

«Якимова Татьяна Николаевна Эпидемиологический надзор за дифтерией в России в период регистрации единичных случаев заболевания 14.02.02 эпидемиология диссертация на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Научный руководитель: доктор...»

«Артеменков Алексей Александрович КОНЦЕПЦИЯ ОПТИМИЗАЦИИ ФУНКЦИОНАЛЬНОГО СОСТОЯНИЯ И ПОВЫШЕНИЯ АДАПТАЦИОННЫХ ВОЗМОЖНОСТЕЙ ЧЕЛОВЕКА 03.03.01 – Физиология Диссертация на соискание ученой степени доктора биологических наук Научный консультант: доктор биологических наук, профессор Брук...»

«ПОЕДИНОК НАТАЛЬЯ ЛЕОНИДОВНА УДК 602.3:582.282/284:57.086.83]:[681.7.069.24+577.34 БИОТЕХНОЛОГИЧЕСКИЕ ОСНОВЫ ИНТЕНСИФИКАЦИИ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ СЪЕДОБНЫХ И ЛЕКАРСТВЕННЫХ МАКРОМИЦЕТОВ С ПОМОЩЬЮ СВЕТА НИЗКОЙ ИНТЕНСИВНОСТИ 03.00.20 – биотехнология Диссертация на соискание научной степени доктора биологических наук Научный консультант Дудка Ирина...»

«Цвиркун Ольга Валентиновна ЭПИДЕМИЧЕСКИЙ ПРОЦЕСС КОРИ В РАЗЛИЧНЫЕ ПЕРИОДЫ ВАКЦИНОПРОФИЛАКТИКИ. 14.02.02 – эпидемиология ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени доктора медицинских наук Научный консультант: заслуженный деятель науки РФ, лауреат Государственной премии СССР профессор, доктор медицинских наук Ющенко Галина Васильевна Москва – 20 Содержание...»

«ЯМБОРКО Алексей Владимирович ПОПУЛЯЦИОННАЯ ЭКОЛОГИЯ ЛЕСНЫХ ПОЛЕВОК (род CLETHRIONOMYS) СЕВЕРО-ВОСТОЧНОЙ АЗИИ Специальность 03.02.08 – экология Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: доктор биологических наук Н.Е. Докучаев Магадан – 2015 ОГЛАВЛЕНИЕ ВВЕДЕНИЕ.. Глава 1. МАТЕРИАЛ И...»

«СОКУР Светлана Александровна ОПТИМИЗАЦИЯ ИСХОДОВ ПРОГРАММ ВСПОМОГАТЕЛЬНЫХ РЕПРОДУКТИВНЫХ ТЕХНОЛОГИЙ У СУПРУЖЕСКИХ ПАР С ПОВЫШЕННЫМ УРОВНЕМ АНЕУПЛОИДИИ В СПЕРМАТОЗОИДАХ 14.01.01акушерство и гинекология Диссертация на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Научные руководители:...»







 
2016 www.konf.x-pdf.ru - «Бесплатная электронная библиотека - Авторефераты, диссертации, конференции»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.