WWW.KONF.X-PDF.RU
БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА - Авторефераты, диссертации, конференции
 

Pages:   || 2 |

«ИССЛЕДОВАНИЯ ДЕТЕЙ С АУТИЗМОМ И ИХ МАТЕРЕЙ ...»

-- [ Страница 1 ] --

На правах рукописи

КРАВЕЦ Виктор Сергеевич

ЦИТОГЕНЕТИЧЕСКИЕ И МОЛЕКУЛЯРНО-ЦИТОГЕНЕТИЧЕСКИЕ

ИССЛЕДОВАНИЯ ДЕТЕЙ С АУТИЗМОМ И ИХ МАТЕРЕЙ

03.02.07 – генетика

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание учёной степени

кандидата биологических наук

Белгород - 2015

Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном учреждении

«Научный центр психического здоровья» Российской академии медицинских наук.

Научный руководитель:

Юров Иван Юрьевич, доктор биологических наук

Официальные оппоненты:

Курило Любовь Фёдоровна, доктор биологических наук, профессор, заслуженный деятель науки, Федеральное государственное бюджетное учреждение «Медико-генетический научный центр» Российской академии медицинских наук, заведующая лабораторией генетики нарушений репродукции Ларионова Валентина Ильинична, доктор медицинских наук, Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Северо-Западный государственный медицинский университет» им. И.И. Мечникова» Министерства здравоохранения России, профессор кафедры педиатрии и детской кардиологии

Ведущая организация:

Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Первый Московский Государственный Медицинский Университет им. И.М. Сеченова» Министерства здравоохранения России

Защита диссертации состоится « » 201 г. в час. на заседании совета по защите диссертаций на соискание учёной степени кандидата наук, на соискание учёной степени доктора наук Д 212.015.13 при ФГАОУ ВПО государственный национальный «Белгородский исследовательский университет», по адресу: 308015, г. Белгород, ул. Победы,

С диссертацией можно ознакомиться в Научной библиотеке ФГАОУ ВПО государственный национальный исследовательский «Белгородский университет» Минобрнауки России и на сайте www.bsu.edu.ru

Автореферат разослан «_____»____________2015 г.

И.о. учёного секретаря совета по защите диссертаций на соискание учёной степени кандидата наук, на соискание учёной степени доктора наук Д 212.015.13 доктор медицинских наук, доцент С.П. Пахомов

Общая характеристика работы

Актуальность проблемы. В настоящее время роль генетических факторов в этиологии большей части случаев психических болезней, нарушений психоречевого и психомоторного развития у детей не вызывает сомнения. Изучение генетических аномалий при различных психических заболеваниях у детей является одним из наиболее актуальных направлений в современной психиатрической генетике и биологической психиатрии. Тем не менее, определение генетических изменений, являющихся причиной распространенных заболеваний, связанных с аутистическими расстройствами, чаще всего остаётся невозможным, что может быть объяснено существованием множества различных факторов, способных вызывать признаки аутизма [Levy et al., 2009]. В целом, среди исследователей этой патологии преобладает мнение о генетической природе большинства случаев аутизма (или, по крайней мере, большей их части) [Ворсанова и др., 2006; 2013]. Известно также, что хромосомные синдромы и аномалии сопровождаются нарушением функциональной активности головного мозга и всей нервной системы, и при более 200 из них наблюдаются аутистические расстройства [Betancur, 2011]. Этот факт можно объяснить тем, что развитие и функционирование столь сложной системы, как головной мозг, регулируются не единичными генами, а тысячами различных генов, которые весьма сложным образом взаимодействуют друг с другом.

В спектре всех психических нарушений видное место занимают аутистические расстройства. Клинически аутизм выражается в основном в нарушении социальных контактов и утрате познавательной активности.

Впоследствии это ведёт к регрессу и распаду личности, десоциализации, инвалидизации и снижению интеллекта. Частота аутизма значительно варьирует как в разных странах, так и по оценкам разных авторов и составляет 5-90 на 10 000 детского населения [Башина, 1999]. В некоторых исследованиях американских авторов приводятся данные и о более высокой частоте аутизма среди детей: от 1:250 и до 1:88 [Ozand et al.

, 2009; по данным Центра контроля и профилактики заболеваний /Centers for Disease Control and Prevention, 2012/]. Вполне возможно, что определённый вклад в развитие аутизма вносит ухудшение экологической обстановки. Вероятно также, что многие группы детского населения недостаточно обследованы, и в некоторых когортах детей этот показатель может быть ещё выше. Это особенно актуально для социальных групп и стран, где уровень генетического консультирования низок. Очевидно, что с развитием методов и систем обследования детей с аутизмом эти показатели будут меняться в сторону увеличения. Важно отметить, что у некоторых детей классические признаки аутизма «маскируются» более тяжёлыми симптомами, связанными с другими нарушениями психики. Можно также предположить, что немалое число детей с аутистическими нарушениями психики в Российской Федерации находятся в различных учреждениях для детей-инвалидов и по ряду причин не обследуются клиническими генетиками.

Показано, что хромосомные аномалии являются наиболее частой формой генетической патологии у детей. Систематический поиск специфических и неспецифических хромосомных аберраций и вариаций у детей с психическими заболеваниями является необходимым этапом диагностических исследований. Хромосомные аномалии являются причиной генного дисбаланса и нарушений функциональной активности генома клетки, эпигенетических изменений, связанных, по-видимому, с эффектом положения генов, патологических процессов в клетках головного мозга. Анализ вариаций и аномалий хромосом у детей с психическими заболеваниями, в том числе с аутизмом, представляет несомненный интерес для дальнейшего поиска характерных для этих состояний генетических и эпигенетических изменений, а также для выявления генетических диагностических маркеров.

Современные цитогенетические и молекулярно-цитогенетические исследования, направленные на идентификацию хромосомных аномалий среди детей с психическими заболеваниями, позволят не только выявить те или иные численные и структурные аномалии, но также и картировать гены болезней мозга, что необходимо в решении актуальных задач современной генетики. Молекулярно-цитогенетические технологии позволяют проводить анализ структуры и числа хромосом с высокой разрешающей способностью в различных типах клеток, а также на разных стадиях клеточного цикла. Среди современных методов исследования можно назвать флюоресцентную in situ гибридизацию (FISH) и сравнительную геномную гибридизацию (CGH) в её различных вариациях. Данные свидетельствуют о том, что геномная (хромосомная) нестабильность, а также аномалии хромосом наблюдаются при некоторых наследственных нервных и психических заболеваниях, например, при болезни Альцгеймера, атаксии-телеангиэктазии, шизофрении и умственной отсталости, значительно чаще, чем в общей популяции [Ворсанова и др., 2008; Yurov et al., 2001, 2008; Iourov et al., 2009]. Феномен нестабильности генома, как предполагается, может лежать в основе патогенеза и других нервных и психических заболеваний. Актуальность исследований вариабельности генома при аутизме неоднократно отмечалась и заключается в том, что с помощью цитогенетических и молекулярноцитогенетических методов можно провести детальный анализ структурных особенностей генома в группе лиц с аутистическими расстройствами для обнаружения возможных генетических причин патологических проявлений этого клинически гетерогенного и распостранённого заболевания.

В связи с вышеизложенным были сформулированы цель и задачи исследования.

Цель: выявление и изучение геномных вариаций в виде хромосомных аномалий, соматического мозаицизма (мозаичной анеуплоидии) и гетероморфизма гетерохроматиновых участков хромосом у детей с расстройствами аутистического спектра и их матерей.

Задачи:

1. Определить частоту хромосомных аномалий у детей с аутистическими расстройствами;

2. Оценить вклад мозаичных форм хромосомных аномалий (соматического мозаицизма) в структуру генетической патологии при аутизме;

3. Идентифицировать частоту вариаций гетерохроматиновых участков хромосом в когорте детей, страдающих аутистическими расстройствами;

4. Определить частоту хромосомных аномалий, хромосомной нестабильности и гетерохроматиновых вариантов в группе матерей детей с аутизмом;

5. На основе полученных данных оценить роль хромосомных аномалий, хромосомного мозаицизма (в виде мозаичной анеуплоидии) и гетероморфизма гетерохроматиновых участков хромосом в патогенезе аутизма, а также предложить рекомендации для молекулярноцитогенетической диагностики с целью повышения эффективности медикогенетического консультирования семей с этим заболеванием.

Научная новизна. Впервые получены данные о частоте хромосомных аномалий при учёте соматических геномных вариаций в российской когорте детей с аутизмом (10,8%). Впервые определена частота хромосомного мозаицизма у детей с аутизмом, достигающая 16,4%. Впервые определена частота вариаций гетерохроматиновых районов хромосом в когорте детей с аутизмом, превысившая таковую в контрольной группе более чем в 9 раз.

Впервые цитогенетическими и молекулярно-цитогенетическими методами обследована группа матерей детей с аутизмом с целью обнаружения возможных цитогенетических маркёров заболевания. Впервые представлены неизвестные случаи хромосомных аномалий, ранее не описанных при заболеваниях аутистического спектра.

Практическая значимость. Комплекс современных цитогенетических и молекулярно-цитогенетических методов позволил выявить генетические маркеры аутистических расстройств, в том числе и семейные (повышенная частота гетерохроматиновых вариантов, хромосомный мозаицизм низкого уровня). Полученные данные имеют исключительное практическое значение для последующих исследований в этой гетерогенной группе заболеваний.

Предложены рекомендации для проведения обязательных цитогенетических и, по показаниям, молекулярно-цитогенетических исследований у детей с аутизмом, а также разработаны показания к их проведению для медикогенетического консультирования семей с этим заболеванием.

Внедрение результатов исследования. Результаты диссертационной работы использовались для исследования хромосомных аномалий у детей с аутистическими расстройствами и их матерей в лаборатории молекулярной цитогенетики нервно-психических заболеваний обособленного структурного подразделения – НИКИ педиатрии ГБОУ ВПО РНИМУ им. Н.И. Пирогова Минздрава России, лаборатории цитогенетики и геномики психических заболеваний НЦПЗ РАМН, а также в НОЦ «Нейробиологическая диагностика наследственных психических заболеваний у детей и подростков» ГОУ ВПО Московского городского психолого-педагогического университета.

Апробация работы. Результаты данного исследования неоднократно представлены на различных конгрессах и конференциях в России и за рубежом: на 54м Съезде американского общества медицинских генетиков (Торонто, Канада, 2004); на ежегодных Конгрессах «Современные технологии в педиатрии и детской хирургии» 2005 - 2013 г. (Москва); на конференции «Современные молекулярно-цитогенетические методы в диагностике хромосомной патологии» (Монпелье, Франция, 2005); на 14м Всемирном конгрессе по психиатрической генетике (Кальяри, Италия, 2006);

на 7й-10й Балканской конференции по генетике человека (Скопье, Македония, 2006; Дубровник, Хорватия, 2009; Тимишоара, Румыния, 2011;

Блед, Словения, 2013); на конференции «Прогресс в области биологической психиатрии» (Москва, 2007); на Международном рабочем совещании «Геномика и протеомика 2007» (Киев, Украина); на 6й и 7й Европейской цитогенетической конференции (Стамбул, Турция, 2007.; Стокгольм, Швеция, 2009); на научно-практическом симпозиуме «Лабораторная медицина: инновационные технологии в аналитике, диагностике, образовании, организации» (Москва, 2008); на IV съезде медицинских генетиков Украины (Львов, Украина, 2008); на Международной конференции «Хромосома 2009» (Новосибирск, 2009); на Международной конференции по медицинской генетике (Одесса, Украина, 2009); на научной конференции НОЦ нейробиологической диагностики наследственных нарушений психического развития у детей и подростков ГОУ ВПО МГППУ «Лечение и диагностика синдромов Дауна и Ретта» (Москва, 2009); на Международной научной конференции «Современные методы психологии» (Москва, 2010);

на Научно-практической конференции «Биологическая психиатрия – клинической психиатрии» (Москва, 2010); на Международной научной конференции «Современные методы психологии» (Москва, 2010); на VI Съезде Российского общества медицинских генетиков, (Ростов-на-Дону, 2010); на 7й Всероссийской научно-практической конференции с международным участием аспекты «Медико-биологические мультифакториальной патологии» (Курск, 2011); на 15м и 16м Конгрессах педиатров России «Актуальные проблемы педиатрии» (Москва, 2011; 2012);

на международной научно-практической конференции «Эпигенетические болезни» (Харьков, Украина, 2011); на съезде «Геном человека 2011» (Human Genome Meeting 2011) (Дубаи, ОАЭ); на 5 съезде Российского психологического общества (Москва, 2012); на Научно-практической конференции «Проблемы наследственной и мультифакторной патологии»

(Киев, Украина, 2012); на Европейской конференции по генетике человека (Нюрнберг, Германия, 2012); на 20м Всемирном конгрессе по психиатрической генетике (Гамбург, Германия, 2012); на Научном симпозиуме «Редкие (орфанные) наследственные болезни» (Харьков, Украина, 2012); на Всероссийской научно-практической конференции «Психические расстройства в детском возрасте: мультидисциплинарные аспекты диагностики, лечения и реабилитации» (Москва, 2013); на Конференции проблемы психиатрии, наркологии, «Актуальные психотерапии и клинической психологии» (Саратов, 2013); на 16й Общероссийской научной конференции с международным участием «Инновационные медицинские технологии» (Москва, 2013); на 1м Международном форуме «Молекулярная медицина – новая модель здравоохранения XXI века: технологии, экономика, образование» (СанктПетербург, 2013).

Апробация диссертационного исследования состоялась на совместном методическом совещании лаборатории цитогенетики и геномики психических заболеваний, лаборатории молекулярной генетики мозга, лаборатории патофизиологии, лаборатории нейроиммунологии, лаборатории клинической генетики Федерального государственного бюджетного учреждения «Научный центр психического здоровья» Российской академии медицинских наук 20 июня 2014 года.

Личный вклад автора. Соискателем лично сформированы исследуемые выборки, собран первичный материал. Автор самостоятельно осуществлял культивирование лимфоцитов периферической крови, приготовление цитогенетических препаратов, цитогенетические и молекулярно-цитогенетические исследования, выполнил статистическую обработку данных, провёл анализ материалов, обобщил результаты исследования. По итогам выполненной работы автором подготовлены основные публикации, проведена апробация результатов исследования, написана и оформлена рукопись.

Публикации: По теме диссертации опубликовано 36 работ в различных отечественных и зарубежных журналах, из них 6 в журналах из перечня ВАК.

Положения, выносимые на защиту:

частота хромосомных аномалий в группе детей с аутизмом выше, 1) чем в общей популяции, что говорит о возможной роли генетических факторов в патогенезе аутизма;

показано наличие в группе детей с аутизмом мозаичных форм, 2) связанных с численными аномалиями как хромосомы Х, так и некоторых аутосом;

применение новых высокоинформативных молекулярноцитогенетических технологий, основанных на методике сравнительной геномной гибридизации, повышает эффективность выявления хромосомных аномалий в группе детей с аутистическими расстройствами;

в группе матерей детей с аутизмом обнаружена высокая частота 4) хромосомных аномалий в виде мозаичной анеуплоидии хромосомы Х, в том числе в виде мозаичных форм моносомии и трисомии хромосомы Х, а также дополнительных маркерных хромосом, происхождение которых было от хромосомы Х, и хромосомная нестабильность в виде неспецифических транслокаций;

частота хромосомных (гетерохроматиновых) вариантов в группе 5) детей с аутистическими расстройствами в 9 раз превышает частоту вариантов в общей популяции, что позволяет говорить о вариабельности околоцентромерного гетерохроматина как о возможном маркёре аутизма;

также обнаружена более высокая частота хромосомного гетероморфизма (хромосомных вариантов) у матерей детей с аутистическими расстройствами по сравнению с контрольной группой;

цитогенетические и молекулярно-цитогенетические исследования 6) детей с аутизмом и их матерей должны рассматриваться как обязательные для выявления генетических причин аутизма и для корректного медикогенетического консультирования семей, в которых есть дети с расстройствами аутистического спектра.

Структура и объём диссертации. Диссертация состоит из следующих разделов: введение, обзор литературы, объекты и методы исследования, результаты и их обсуждение, заключение, выводы и список литературы.

Материалы изложены на 129 страницах машинописного текста и содержат 12 таблиц и 19 рисунков. Библиографический указатель содержит 217 наименований, из которых 183 иностранных.

Материалы и методы исследования Клиническая характеристика исследованных групп Для решения поставленных задач были исследованы 3 группы.

Группа 1: 204 ребёнка с идиопатическим аутизмом, средний возраст которых составил 6,3 г; максимальный – 18 лет, минимальный – 1 год. Среди обследованных детей было 170 мальчиков и 34 девочки. Соотношение полов составило (М:Ж) 5:1. Все пациенты обследованы по шкалам аутизма и при тестировании по стандартным шкалам аутизма набрали должное число баллов [Schopler et al., 1988; Lord et al., 1994].

Группа 2: Исследования хромосомного мозаицизма у детей с аутизмом проводились в группе из 116 детей (все мальчики). Контрольной группой послужили 60 здоровых детей.

Группа 3: Обследовали репрезентативную группу из 96 матерей детей с аутизмом. Возраст обращения матерей в генетическую консультацию варьировал от 24 до 60 лет (средний – 33,5 лет). Средний возраст в период рождения ребенка с аутизмом составил 27,4 года (от 17 до 45 лет).

Контрольную группу составили 59 женщин, не имеющих детей с аутистическими расстройствами, в возрасте от 24 до 48 лет (средний возраст 33,2 года).

Методы исследования

Для обследования группы 1 применялись следующие методы:

стандартное цитогенетическое исследование (кариотип), молекулярноцитогенетические исследования – флюоресцентная in situ гибридизация (FISH) [Vorsanova et al., 1991] и сравнительная геномная гибридизация (CGH).

Для FISH пациенты отбирались по следующим критериям: 1) необходимость уточнения точек разрыва при структурных перестройках хромосом (транслокации, инсерции, кольцевые хромосомы); 2) подтверждение наличия хромосомного мозаицизма (например, 45,X/46,XX). При проведении молекулярно-цитогенетических исследований для выявления возможного хромосомного мозаицизма анализировали не менее 100 метафазных пластинок и 1000 интерфазных ядер. Критериями отбора пациентов для HR CGH (CGH высокого разрешения) послужило наличие у пациента при нормальном кариотипе выраженной умственной отсталости, пороков и микроаномалий развития и аутизма. HR СGH проводилась по стандартным протоколам [Iourov et al., 2008].

Для FISH исследований использовались центромерные ДНК зонды на хромосомы 1, 17, 18, X и Y. Все исследования с помощью FISH проводились по стандартному протоколу [Соловьёв и др., 1998; Soloviev et al., 1994; Yurov et al., 1996]. ДНК пробы взяты из оригинальной коллекции лаборатории цитогенетики и геномики человека НЦПЗ РАМН и лаборатории молекулярной цитогенетики нервно-психических заболеваний НИКИ педиатрии – обособленного структурного подразделения ГБОУ ВПО РНИМУ им. Н.И. Пирогова Минздрава России [Соловьёв и др., 1998; Юров, 1987; Юров и др., 1989; Soloviev et al., 1995; 1997; Yurov et al., 1997].

В работе применяли стандартные методы статистической обработки для медико-биологических исследований. Для анализа достоверности отличия групп пациентов и контрольных групп использовался общепринятый метод дисперсионного анализа [Гланц, 1999]. Исследования одобрены этическим комитетом Научного центра психического здоровья РАМН и проводились с учетом всех международных этических и правовых норм генетических исследований в области психиатрической генетики [Farmer et al., 2000].

Результаты и исследования и их обсуждение I. Результаты исследований в группе 1.

Стандартными цитогенетическими методами обследованы 204 ребёнка.

Обнаружено 17 случаев хромосомных аномалий, что составило 8,3% от общего числа пациентов (рис. 1).

Рис. 1. Удельный вес хромосомной патологии, обнаруженной цитогенетическими методами, в группе детей с аутизмом (n=204).

Структуру патологии составили следующие хромосомные аномалии:

транслокации – 3 (1,5% от общего числа пациентов); инверсии эухроматина – 2 (1%); синдром FRAXA – 2 (1%); инсерции – 1 (0,5%); дополнительный материал /add/ - 1 (0,5%); мозаичные случаи дополнительной маркерной хромосомы – 3 (1,5%); кольцевая хромосома – 1 (0,5%); численные и структурные аномалии гоносом – 4 (2%). Структура хромосомной патологии в группе 1 (n=204) показывает: 1) в данной когорте отсутствуют случаи делеций больших участков хромосом, что может быть объяснено тем, что клинические проявления у детей с делециями значительно тяжелее, чем при транслокациях и некоторых численных аномалиях хромосом (например, при анеуплоидиях половых хромосом); 2) причиной аутизма у детей могут быть разнообразные цитогенетические аномалии с участием практически всех хромосом, что ещё раз подтверждает мультифакторную природу аутизма.

Полученные результаты в данной группе детей с аутизмом согласуются с результатами других подобных исследований [Ворсанова, Юров 1999; Bill, Geschwind, 2009]. Выявленные хромосомные аномалии (дополнительный хромосомный материал (add), мозаицизм, структурные перестройки) указывают на необходимость проведения в некоторых случаях дополнительных молекулярно-цитогенетических исследований (сравнительной геномной гибридизации высокого разрешения – HR CGH) для выявления хромосомных (геномных) аномалий, которые невозможно обнаружить стандартными цитогенетическими методами, что позволит значительно увеличить эффективность выявления хромосомной патологии в когорте детей с аутизмом. Обнаружение структурных и численных аномалий различных хромосом в исследованной группе детей очевидно указывает на гетерогенную природу аутистических расстройств с участием многих генов, регулирующих развитие нервной системы.

Среди пациентов с нормальным кариотипом были выбраны дети, клинические проявления (выраженная умственная отсталость, пороки и множественные микроаномалии развития) у которых позволяли предположить наличие микроаномалий хромосом (генома). Таким детям (n=11) была проведена HR CGH. В результате проведения HR CGH у 5 детей из 11 была обнаружена хромосомная патология (4 субмикроскопические делеции и 1 дупликация) (табл. 1).

Табл. 1. Хромосомные аномалии, обнаруженные методом сравнительной геномной гибридизации высокого разрешения (HR CGH) № Пол пациента Возраст Результаты CGH мальчик 7 лет 1 cgh del (3)(p21.32-p21.33) мальчик 7 лет 2 cgh del (5)(p15.33-pter), del(5)(p15.33-pter) мальчик 4 года 3 cgh del(17)(q25q25) девочка 4 года 4 cgh del(13)(q34-qter) девочка 6 лет 5 cgh dup (22)(q11.2q11.2) Число обнаруженных геномных аномалий при использовании метода CGH в группе детей с аутистическими расстройствами показывает, что: 1) данный метод весьма эффективен для поиска субмикроскопических хромосомных аномалий в когорте детей с аутистическими расстройствами при отсутствии цитогенетических аномалий при стандартном кариотипировании; 2) чаще встречаются аномалии в виде делеций генома, что говорит об их большей патогенности по сравнению с микродупликациями. На рис. 2 представлен пример использования метода HR CGH – микроделеция (около 1 млн пн) хромосомы 22 у мальчика 6 лет с аутизмом и задержкой развития.

Кроме того, результаты стандартных цитогенетических исследований заставили предположить у некоторых пациентов наличие мозаичной анеуплоидии хромосом (у них были обнаружены единичные анеуплоидные клетки). Таких пациентов было 11, всем им была проведена флюоресцентная in situ гибридизация (FISH). У 8 из 11 пациентов (3,9% от общего числа пациентов) была подтверждена хромосомная патология в виде анеуплоидии хромосом, в основном в виде мозаичной анеуплоидии половых хромосом (гоносом). Случаи хромосомной патологии, обнаруженной методом FISH, представлены в табл. 2.

Рис. 2. Исследование методом HR CGH, проведённое у мальчика 6 лет с аутизмом и выраженной умственной отсталостью выявило микродупликацию хромосомы 22 [cgh dup (22)(q11.2q11.2)].

–  –  –

различных тканей, например, в клетках крови доля аномальных клеток мала, а в клетках других тканей (буккальный эпителий, фибробласты кожи и др.) она больше либо такие клетки отсутствуют. Этот обнаруженный нами феномен требует исследований клеток различных тканей. Уже существуют данные о наличии малопроцентного мозаицизма в клетках головного мозга при других психических и нервных заболеваниях (при шизофрении, атаксиителеангиэктазии и др.) (данные получены в результате исследований постмортальных тканей) [Тиганов и др., 2012]. В нашем исследовании у 22 детей после проведения стандартного цитогенетического анализа определены показания для проведения молекулярно-цитогенетической диагностики методами FISH и CGH. HR CGH проводили тем детям, у которых клиническая картина предполагала наличие хромосомной (геномной) аномалии (выраженная умственная отсталость, пороки развития), но стандартное цитогенетическое исследование не выявило хромосомных перестроек. CGH провели 11 детям (5,4% от общего числа детей), патология выявлена у 5 детей (2,5%) (табл. 1). FISH проводилась для подтверждения хромосомного мозаицизма при цитогенетическом выявлении 1-2 клеток с анеуплоидией хромосомы Х (кариотип 45,Х или 47,XXY) или для определения точек разрыва при транслокациях (табл. 2). FISH провели 11 детям (5,4% от общего числа детей), патология обнаружена у 8 детей (3,9%).

С учётом подтверждённого хромосомного мозаицизма, доля хромосомной патологии в данной группе составила 10,8%. Таким образом, оба молекулярно-цитогенетических метода исследований показали высокую эффективность в обнаружении низкопроцентных хромосомных перестроек и аномалий.

Гетерохроматиновые участки хромосом были изучены с помощью стандартного метода С-окрашивания. Гетерохроматиновые, или хромосомные, варианты были обнаружены у 110 пациентов из 204 обследованных (53,9%) (рис. 3). Всего вариантов обнаружено 189 (0,92 варианта на индивидуума). Изолированные варианты были обнаружены в 81 случае (39,7% от общего числа пациентов). Сочетанные варианты обнаружены в 52 случаях (25,5% от общего числа пациентов). Среди отдельно взятых вариантов наиболее часто встречались варианты хромосом 1, 9 и 16 (изолированно и в сочетании с другими) (табл. 3).

Рис. 3. Удельный вес вариантов гетерохроматина в группе 1 детей с аутизмом

–  –  –

Рис. 4. Удельный вес различных вариантов хромосом в группе детей с аутизмом (n=204) Таким образом, доля вариантов гетерохроматиновых участков в группе детей с аутизмом оказалась значительно выше, чем в общей популяции (4-6%) [Iourov et al., 2006], что может быть объяснено тем, что: 1) гетерохроматиновые варианты могут быть цитогенетическими маркёрами аутизма; 2) в процессе наследования этих вариантов от родителей детям и далее в череде поколений они могут подвергаться некоторым изменениям, чаще количественным, и попадать в поле зрения исследователей именно в виде гетероморфизма гетерохроматиновых районов хромосом, что также может быть фактором, связанным с патогенезом аутизма, так как даже просто количественные изменения хромосомного материала, хотя бы и не участвующего непосредственно в кодировании белковых последовательностей, могут оказывать эпигенетическое влияние на геном человека; тем более значимое влияние могут оказывать на геном варианты околоцентромерного гетерохроматина в виде его инверсий, так как при них расположенные вблизи с гетерохроматином участки кодирующих последовательностей эухроматина могут быть подвержены гетерохроматинизации, что может нарушать нормальную экспрессию генов в этих участках хромосом [Жимулёв, 1993; Iourov et al., 2006].

При изучении разнообразия гетерохроматиновых вариантов обращает на себя внимание преобладание околоцентромерных инверсий гетерохроматина хромосом 1 и 9, как изолированно, так и в сочетании с другими гетерохроматиновыми вариантами (рис 4), что может указывать на патогенность этих инверсий благодаря возможной гетерохроматинизации участков эухроматина вблизи точек разрыва при формировании инверсий по сравнению с вариантами в виде увеличения или уменьшения размеров блоков С-гетерохроматина и в виде увеличения коротких плечей акроцентрических хромосом, их спутников и спутничных нитей [Жимулёв, 1993].

II. Результаты исследований в группе 2 Исследования хромосомного мозаицизма у детей с аутизмом проводились в группе из 116 детей (все мальчики). Контрольной группой послужили 60 здоровых детей. Кариотип детей в обеих группах был нормальным. С целью обнаружения стохастической (фоновой) анеуплоидии хромосом была проведена 3-цветная флюоресцентная in situ гибридизация (FISH) c зондами на 6 случайно отобранных аутосом и половые хромосомы (гоносомы). Всего было проанализировано более 420 000 клеток у 176 детей.

В результате была определена средняя частота стохастической анеуплоидии при аутизме и в контроле: 1) потеря аутосом - 0,6% (0,37%-0,83%) и 0,58% (0,42%-0,75%), соответственно; 2) дополнительные (сверхчисленные) аутосомы - 0,22% (0,14%-0,3%) и 0,15% (0,09%-0,21%), соответственно; 3) дополнительная хромосома Х - 1,01% (0,85%-1,17%) и 1,11% (0,9%-1,31%), соответственно. Пример FISH с ДНК зондами на хромосомы X и Y у ребёнка с идиопатическим аутизмом и мозаицизмом по хромосоме Х представлен на рисунке 5: видна клетка с нормальным числом гоносом (справа) и с дисомией хромосомы Х (слева) у мальчика 6 лет.

Таким образом, у этого ребёнка с аутизмом выявлена дополнительная (сверхчисленная) хромосома Х, и данный пациент является носителем мозаичной анеуплоидии по хромосоме Х, так как такие клетки обнаружены у ребёнка с аутизмом в определённой доле, превышающей стохастический уровень (6,2%).

–  –  –

После проведения цитогенетических и молекулярно-цитогенетических исследований в группе матерей детей с аутизмом был определён удельный вес хромосомных аномалий и гетерохроматиновых вариантов, что представлено на рис. 6.

Рис. 6. Удельный вес хромосомных аномалий, вариантов и их сочетания у матерей детей с аутизмом.

В группе 3 были обнаружены хромосомные аномалии в 16,6% случаев, а гетерохроматиновые варианты – в 64,6% случаев. При изучении результатов цитогенетических и молекулярно-цитогенетических исследований в группе матерей детей с аутизмом можно заключить следующее: 1) обнаружена высокая частота хромосомных аномалий у матерей детей с аутизмом, в основном в виде мозаичных форм численных аномалий хромосомы Х, в том числе в виде мозаичных форм синдрома Шерешевского-Тернера, трисомии хромосомы Х, а также дополнительных маркерных хромосом, происхождение которых было от хромосомы Х; кроме того, у одной из этих матерей обнаружена дупликация хромосомы 21 в участке q21 во всех клетках, у другой – моносомия хромосомы 18 в одном из 5 мозаичных клонов, причём клоны присутствовали в небольшой доле клеток – от 4 до 25%; в одном случае хромосомной аномалии как у матери, так и у ребёнка выявлена и хромосомная нестабильность в виде дополнительных неспецифических транслокаций; 2) в половине из всех случаев (8,3%) хромосомных аномалий обнаружены ещё и хромосомные варианты, и в 3 случаях хромосомные аномалии у матерей и детей были идентичны; 3) идентичная у матери и её ребенка нестабильность хромосом в виде неспецифических моносомий, транслокаций и делеций наблюдалась в 2 случаях, один из которых был с нормальным кариотипом; 4) обнаружена высокая частота хромосомного гетероморфизма (хромосомных вариантов) у матерей детей с аутистическими расстройствами по сравнению с контрольной группой (5%); эти изменения выявлены у 62 матерей (64,6%), включая 8 матерей с аномалиями хромосом;

сочетанные варианты встречались в 22 случаях, максимальное число вариантов у индивидуума – 5; число вариантов на индивидуума в среднем 1,58; 5) определение геномных изменений у больных детей и их матерей значимо для идентификации генетических и нейробиологических маркёров аутистических расстройств; 6) при анализе корреляций «генотип-фенотип»

обнаружены когнитивные нарушения и спонтанные аборты у матерей детей с аутизмом, имеющих хромосомные аномалии, а также умственная отсталость, смерть в раннем возрасте и нарушения репродуктивной функции у родственников этих женщин; 7) обнаружены пороки развития у родственников тех матерей детей с аутизмом, у которых обнаружены хромосомные варианты; цитогенетические и молекулярноцитогенетические исследования матерей и детей с аутизмом должны рассматриваться как обязательные для выявления возможных генетических причин аутизма и для генетического консультирования семей, в которых есть дети с заболеваниями аутистического спектра.

В группе матерей детей с аутизмом преобладают различные гетерохроматиновые варианты хромосом 1 (12% от общего числа пациентов, с учётом сочетанных вариантов – 25,5%) и 9 (17%, с учётом сочетанных вариантов – 37,8%). Это может быть объяснено следующим: 1) варианты этих хромосом вообще чаще всего встречаются в любой популяции, так как гетерохроматиновые блоки этих хромосом чаще всего варьируют в размерах и подвержены перицентрическим инверсиям (инверсии гетерохроматина хромосомы 16 не встречаются); 2) варианты других хромосом довольно редки. Сочетанные хромосомные варианты наиболее часто включают в себя различные изменения гетерохроматиновых участков хромосом 1 и 9.

Удельный вес каждого из сочетанных хромосомных вариантов указан на рис.

7. Высокая частота изолированных и сочетанных вариантов хромосом 1 и 9 может служить дополнительным маркёром риска нарушений психики в группе матерей детей с аутизмом. В контрольной группе хромосомные варианты в виде 1qh+ и 9qh+ встречались в 3 (5%) из 60 случаев. Общая частота гетерохроматиновых вариантов в контрольной и обследованных группах достоверно отличались друг от друга (p0,05).

Суммируя полученные данные, можно сделать вывод о том, что определение геномных изменений у больных детей и их матерей значимо для идентификации маркёров аутистических расстройств. Обнаружено повышение частоты когнитивных нарушений у 9 матерей (9,4%) и спонтанных абортов у 23 (24%) матерей детей с аутизмом, а также увеличение случаев умственной отсталости (в 5 раз), смерти в раннем возрасте (в 4-5 раз) и нарушений репродуктивной функции (в 2 раза) в родословных матерей детей с аутизмом, имевших хромосомные аномалии. Выявлены пороки развития в родословных матерей с хромосомными вариантами. Все это может свидетельствовать в пользу сегрегации случаев хромосомной (геномной) патологии в этих семьях. Несомненно, цитогенетические и молекулярноцитогенетические исследования матерей и детей с аутизмом должны рассматриваться как обязательные для выявления возможных генетических причин аутизма и для генетического консультирования семей, в которых имеются дети с аутистическими расстройствами. Проведён анализ Рис. 7. Удельный вес каждого хромосомного варианта у матерей детей с аутизмом.

наследуемости по материнской линии хромосомных аномалий (мозаицизма) и вариантов, нестабильности хромосом в семьях детей с аутизмом (рис. 8). На рисунке представлен анализ матерей детей с аутизмом с хромосомными аномалиями (мозаицизм) и вариантами и нестабильностью хромосом (генома): если ребёнок наследовал одну из клеточных линий (при мозаицизме), хромосомные варианты или хромосомную (геномную) нестабильность от матери, то это обозначено в соответствующих клетках. Из рисунка видно, что подобные случаи встречались в данной группе весьма часто - у 39 матерей (40,6% от общего числа матерей).

Выявление цитогенетических аномалий и моногенный характер некоторых заболеваний, связанных с аутизмом, указывает на генетическую гетерогенность и различные закономерности их наследования в отдельных семьях. Вероятно, для идиопатического аутизма, то есть случаев с неизвестной причиной, возможны моногенные, полигенные и мультифакторные механизмы наследования. Можно предположить, что для изучения природы аутистических расстройств необходимо рассматривать эти заболевания как в контексте взаимодействия генов, так и эпигенетических механизмов.

В настоящее время роль генетических факторов в возникновении большой части случаев идиопатического аутизма у детей не вызывает сомнения. Известно, что хромосомные перестройки и аномалии являются наиболее частой формой наследственной патологии у детей. Поиск различных специфических и неспецифических хромосомных аномалий и вариаций у детей с аутизмом является необходимым этапом диагностических исследований. Хромосомные аномалии являются причиной нарушения генного баланса и функциональной активности генома клетки, эпигенетических изменений, связанных, по-видимому, с эффектом положения генов, и часто Рис. 8. Наследуемость по материнской линии хромосомных аномалий (мозаицизма), вариантов и хромосомной нестабильности в семьях с аутизмом. Вертикальный ряд 1 — хромосомные аномалии (мозаичные формы); 2 — хромосомные варианты; 3 — нестабильность хромосом. Горизонтальные ряды соответствуют наложению признаков (1, 2, 3) в паре ребенок-мать. Серым цветом обозначены случаи, когда ребенок от матери наследовал одну из клеточных линий (в случае мозаицизма) или один из хромосомных вариантов. Черным цветом — у ребенка наблюдались те же клеточные линии (в случае мозаицизма); такие же варианты и/или хромосомная нестабильность матери.

инициируют патологические процессы в клетках головного мозга.

Современные цитогенетические и молекулярно-цитогенетические исследования, направленные на идентификацию хромосомных аномалий среди детей с аутизмом, позволят не только выявить те или иные численные и структурные аномалии, но и картировать гены психических болезней.

Сложный, трудный в изучении феномен нестабильности генома может лежать в основе патогенеза наследственных нервных и психических заболеваний, в том числе и аутизма. Актуальность исследований генома очевидна и заключается в том, что с помощью этих методов можно провести детальный анализ структурных особенностей генома в группе лиц с аутизмом для обнаружения возможных генетических причин патологических проявлений, входящих в перечень признаков данного заболевания. Нами было проведено исследование с помощью данных методов в группах детей с аутизмом и их матерей, что позволило выявить причину части случаев аутизма. После проведения этих исследований в когорте детей с аутизмом и в группе матерей таких детей было обнаружено, что во всех 3 исследованных группах численные и структурные хромосомные аномалии, а также гетерохроматиновые варианты хромосом встречаются с частотой, большей чем в общей популяции. В первой группе детей с аутизмом обнаружены хромосомные аномалии в 8,3% случаев, что превышает частоту аномалий в общей популяции (до 1%), и примерно равно частоте хромосомных аномалий в когорте детей с умственной отсталостью [Ворсанова и др.

, 2006]. Среди обнаруженных в I группе детей с аутизмом встречались разнообразные структурные аномалии хромосом как в виде транслокаций, инверсий эухроматина, дополнительного материала хромосом, маркерных хромосом, кольцевой хромосомы 22, так и в виде численных аномалий, чаще хромосомы Х; отмечен очень редкий случай, где у мальчика с аутизмом, аномалиями поведения и микрогематурией обнаружена сложная хромосомная аномалия, сочетающая в себе структурную перестройку в виде псевдоизодицентрической хромосомы Y с численными мозаичными аномалиями в виде потери и удвоения данной перестроенной хромосомы Y (рис. 9).

Рис. 9. Пример хромосомной аномалии (псевдоизодицентрическая хромосома Y) у мальчика с аутизмом, сниженным интеллектом, аномальным поведением и микрогематурией - кариотип 46,X,psu idic(Y).

Определён удельный вес хромосомных, или гетерохроматиновых, вариантов в группе детей с аутизмом. Частота изолированных и сочетанных вариантов значимо превышает частоту гетерохроматиновых вариантов в общей популяции, что позволяет выдвинуть гипотезу об определённой роли гетерохроматиновых вариантов в генезе аутизма. Эта проблема требует дальнейшего всестороннего изучения с применением различных современных технологий.

Следует отметить, что большую долю (50-60%) хромосомных аномалий у новорождённых составляют численные аномалии хромосом [Jacobs, Hassold, 1995; Iourov et al., 2006]. При аномалиях такого рода необходимо цитогенетическое исследование, но мозаичные формы анеуплоидий сложны для выявления этим методом «скрытого» низкопроцентного хромосомного мозаицизма. Для выявления хромосомного мозаицизма проведены исследования с применением флюоресцентной in situ гибридизации (FISH) во всех трёх группах: в 1-ой группе той части пациентов, где FISH-метод был необходим для уточнения хромосомной патологии; во 2-ой группе для поиска возможного хромосомного мозаицизма; в 3-ей группе матерей детей с аутизмом для поиска мозаицизма хромосомы Х и генетических маркёров аутизма. Были также обнаружены случаи малопроцентного мозаицизма различных аутосом, причём уровень такого мозаицизма превышал стохастический. У довольно большой части группы матерей детей с аутизмом (16,6%) обнаружен малопроцентный хромосомный мозаицизм, причём не только хромосомы Х, но и мозаицизм аутосом (хромосома 18). Таким образом, хромосомный мозаицизм – новый генетический фактор аутизма. В отдельных случаях проводили молекулярно-цитогенетические исследования (HR CGH). Подбор пациентов для этих исследований основывался на наличии у них аутизма, выраженной умственной отсталости, множественных микроаномалий при нормальном кариотипе (Iourov et al., 2008). Данный метод показал высокую эффективность в обнаружении субмикроскопических хромосомных (геномных) перестроек, которые невозможно обнаружить классическими цитогенетическими методами. Таким образом, на основании проделанных исследований можно сделать соответствующие выводы.

Выводы:

1) определена частота хромосомных аномалий в российской когорте детей с аутистическими расстройствами, которая составила 10,8%;

2) определён вклад мозаичных форм хромосомной патологии в виде малопроцентного хромосомного мозаицизма в группе мальчиков с идиопатическим аутизмом, не выявляемого при цитогенетическом анализе, составляющий 16,4%;

3) определена частота хромосомных вариаций в виде гетероморфизма гетерохроматиновых участков хромосом в когорте детей, страдающих аутизмом, составляющая 53,9%;

4) в группе матерей детей с аутизмом обнаружена высокая частота хромосомных аномалий (16,6%) в виде мозаичных форм численных аномалий хромосомы Х, в том числе в виде мозаичных форм синдрома Шерешевского-Тернера, трисомии хромосомы Х, дополнительных маркерных хромосом – дериватов хромосомы Х, и хромосомная нестабильность, что указывает на высокую частоту генетической предрасположенности к заболеваниям в семьях детей с аутизмом;

5) обнаружена высокая частота хромосомных вариаций в виде гетероморфизма гетерохроматиновых участков хромосом у матерей детей с аутистическими расстройствами, составляющая 64,6%;

6) на основе полученных данных предложена гипотеза о связи вариаций гетерохроматиновых участков генома с аутистическими расстройствами;

7) показано, что применение современных высокоинформативных молекулярно- цитогенетических методов необходимо для эффективного выявления хромосомных (геномных) аномалий в группе детей с аутистическими расстройствами;

8) оценён вклад хромосомных аномалий, хромосомного мозаицизма (в виде мозаичной анеуплоидии) и гетероморфизма гетерохроматиновых участков хромосом в этиологию аутизма, а также предложены рекомендации для внедрения молекулярно-цитогенетической технологий в практику медикогенетического консультирования.

Список сокращений ДНК – дезоксирибонуклеиновая кислота ЗПМР – задержка психомоторного развития ЗПРР – задержка психоречевого развития МАР – микроаномалии развития пн – пары нуклеотидов HR CGH – high resolution comparative genomic hybridization (сравнительная геномная гибридизация высокой степени разрешения) FISH – fluorescent in situ hybridization (флюоресцентная in situ гибридизация) Cписок опубликованных работ по теме диссертации

1. Vorsanova, S.G. Non-disjunction of chromosome 21, alphoid DNA variation, and sociogenetic features of Down syndrome / S.G. Vorsanova, I.Y.

Iourov, A.K. Beresheva, I.A. Demidova, V.V. Monakhov, V.S. Kravets, O.B.

Bartseva, E.A. Goyko, I.V. Soloviev, Y.B. Yurov // Цитология и Генетика. Т.39, №6. - С. 30-36.

2. Vorsanova, S.G. Analyses cytogenetiques et FISH d’une population clinique d’un hopital pediatrique / S.G. Vorsanova, Y.B. Yurov, I.V. Soloviev, I.A.

Demidova, A.K. Beresheva, A.D. Kolotii, V.S. Kravets, V.V. Monakhov, I.Y.

Iourov // Medecine Science. - 2006. - Vol.22. - Hors de serie №2. - P. 57.

3. Ворсанова, С.Г. Идентификация генетических маркеров аутистических расстройств: хромосомные варианты и аномалии у детей с аутизмом [Текст] / С.Г. Ворсанова, И.Ю. Юров, И.А. Демидова, В.Ю. Воинова-Улас, В.С.

Кравец, Н.Л. Горбачевская, Ю.Б.Юров // Медико-биологические аспекты мультифакториальной патологии. Материалы российской научной конференции с международным участием. - Том I. - Курск: КГМУ. - 2006. С. 457-460.

4. Vorsanova, S.G. Molecular cytogenetic study of low-level chromosomal mosaicism in children with autism by interphase FISH / S.G. Vorsanova, I.Y.

Iourov, V.Y. Voinova-Ulas, N.L. Gorbachevskaya, I.A. Demidova, A.K.

Beresheva, V.V. Monakhov, V.S. Kravets, A.D. Kolotii, Y.B. Yurov // Proceedings of the 7th Balkan Meeting of Human Genetics. - 2006. - P.32. - Balkan Journal of Medical Genetics.2006.Vol.9, N 3&4.- P.61.

5. Vorsanova, S.G. Increased rate of low-level chromosomal mosaicism in autism: an interphase FISH survey / S.G. Vorsanova, I.Y. Iourov, V.Y. VoinovaUlas, N.L. Gorbachevskaya, A.D. Kolotii, A.K. Beresheva, I.A. Demidova, V.S.

Kravets, V.V. Monakhov, Y.B.Yurov // American Journal of Medical Genetics Part B: Neuropsychiatric Genetics. - 2006. - Vol.141B. - Issue 7. - P. 770.

6. Кравец, В.С. Необычная ломкость хромосом у ребенка с умственной отсталостью [Текст] / В.С. Кравец, С.Г. Ворсанова, И.Ю. Юров, М.В.

Прыткина, Н.С. Айрапетова, Ю.Б. Юров // Материалы V Российского конгресса «Современные технологии в педиатрии и детской хирургии». С.57.

7. Кравец, В.С. Хромосомная нестабильность, связанная с анеуплоидией хромосомы Х и полиплоидией, у матери ребенка с синдромом Дауна [Текст] / В.С. Кравец, И.Ю. Юров, А.К. Берешева, Ю.Б. Юров, С.Г. Ворсанова // Материалы V Российского конгресса «Современные технологии в педиатрии и детской хирургии». - 2006. - С.57-58.

8. Ворсанова, С.Г. Вариабельность гетерохроматиновых районов хромосом и хромосомные аномалии у детей с аутизмом: идентификация генетических маркеров аутистических расстройств [Текст] / С.Г. Ворсанова, И.Ю. Юров, И.А. Демидова, В.Ю. Воинова-Улас, В.С. Кравец, И.В.

Соловьев, Н.Л. Горбачевская, Ю.Б. Юров // Журнал неврологии и психиатрии им. С. С. Корсакова. - 2006. - Т.106, №6. - С.52-57.

9. Ворсанова, С.Г. Цитогенетические и молекулярно-цитогенетические исследования детей с аутизмом [Текст] / С.Г. Ворсанова, И.Ю. Юров, И.А.

Демидова, В.С. Кравец, А.К. Берешева, В.Ю. Воинова-Улас, Н.Л.

Горбачевская, В.В. Монахов, А.Д. Колотий, Ю.Б. Юров // Сборник материалов XI Конгресса Педиатров России «Актуальные проблемы педиатрии». - Изд.: ГОЭТАР-Медиа. - 2007. - С.147.

10. Yurov, Y.B. Frequency of mosaic aneuploidy in children with idiopathic autism / Y.B. Yurov, S.G. Vorsanova, I.Y. Iourov, I.A. Demidova, A.K.

Beresheva, V.S. Kravets, V.V. Monakhov, A.D. Kolotii, V.Y. Voinova-Ulas, N.L.

Gorbachevskaya // European Journal of Human Genetics. - 2007. - Vol.15. – Suppl. 1. - P.102.

11. Yurov, Y.B. Aneuploidy and confined chromosomal mosaicism in the developing human brain / Y.B. Yurov, I.Y. Iourov, S.G. Vorsanova, T. Liehr, A.D.

Kolotii, S.I. Kutsev, F. Pellestor, A.K. Beresheva, I.A. Demidova, V.S. Kravets, V.V. Monakhov, I.V. Soloviev // PLoS (Public Library of Science) ONE. - 2007. – Vol.2. - Issue.6. - e558.



Pages:   || 2 |
 

Похожие работы:

«НАУМОВ Юрий Анатольевич АНТРОПОГЕННАЯ ТРАНСФОРМАЦИЯ ПРИБРЕЖНО-ШЕЛЬФОВЫХ ГЕОСИСТЕМ ОКРАИННЫХ МОРЕЙ ДАЛЬНЕГО ВОСТОКА РОССИИ 25.00.36 – Геоэкология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора географических наук Томск 2008 Работа выполнена на кафедре экологии и природопользования Владивостокского государственного университета экономики и сервиса Научный консультант: доктор географических наук, профессор Кочуров Борис Иванович Официальные оппоненты: доктор...»

«ТОПТЫГИНА АННА ПАВЛОВНА КОМПЛЕКСНАЯ ОЦЕНКА ПРОЦЕССОВ ФОРМИРОВАНИЯ И ПОДДЕРЖАНИЯ ИММУНОЛОГИЧЕСКОЙ ПАМЯТИ НА ПРИМЕРЕ ВАКЦИНАЦИИ ПРОТИВ КОРИ, КРАСНУХИ И ЭПИДЕМИЧЕСКОГО ПАРОТИТА. 14.03.09 – Клиническая иммунология, аллергология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук МОСКВА-2015 Работа выполнена в Федеральном бюджетном учреждении науки «Московский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. Г.Н. Габричевского»...»

«Курбонов Косим Муродович СОВРЕМЕННЫЕ ЭПИЗООТОЛОГО-ЭПИДЕМИОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ И НАДЗОР ЗА БРУЦЕЛЛЕЗОМ В РЕСПУБЛИКЕ ТАДЖИКИСТАН 14.02.02 – эпидемиология Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Москва – 2015 Работа выполнена в Таджикском научно-исследовательском институте профилактической медицины Министерства здравоохранения и социальной защиты населения Республики Таджикистан Научные руководители: Доктор медицинских наук, профессор...»

«ИЛЬГИСОНИС Екатерина Викторовна ПРОТЕОТИПИЧЕСКИЕ ПЕПТИДЫ ДЛЯ КОЛИЧЕСТВЕННОГО МАСССПЕКТРОМЕТРИЧЕСКОГО АНАЛИЗА БЕЛКОВ, КОДИРУЕМЫХ ГЕНАМИ ХРОМОСОМЫ 18 ЧЕЛОВЕКА 03.01.09 – математическая биология, биоинформатика АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Москва – 2015 г. Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном научном учреждении «Научно-исследовательский институт биомедицинской химии имени В.Н. Ореховича». доктор...»

«Вечерковская Мария Фёдоровна Оценка микробиоты ротовой полости у детей с онкогематологическими заболеваниями 03.02.03. – микробиология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание учёной степени кандидата медицинских наук Санкт-Петербург – 2015 Работа выполнена в Государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Первый Санкт Петербургский Государственный медицинский университет имени академика И.П. Павлова» Министерства здравоохранения...»

«АЛЕКСЕЕВА Татьяна Васильевна БИОТЕХНОЛОГИЧЕСКИЙ ПОТЕНЦИАЛ ФРАКЦИЙ ГЛУБОКОЙ ПЕРЕРАБОТКИ НИЗКОМАСЛИЧНОГО СЫРЬЯ: БАЛАНСИРОВАНИЕ ПНЖК СОСТАВА, ПРОГНОЗИРОВАНИЕ КАЧЕСТВА, НОВЫЕ ТЕХНОЛОГИИ Биотехнология пищевых продуктов и биологических 05.18.07 – активных веществ Технология и товароведение пищевых продуктов 05.18.15 – и функционального и специализированного назначения и общественного питания АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора технических наук Воронеж Работа...»

«ДОБРЕНЬКОВ ДМИТРИЙ СЕРГЕЕВИЧ ХАРАКТЕРИСТИКА БИОЦЕНОТИЧЕСКИХ ОТНОШЕНИЙ БАКТЕРИАЛЬНЫХ СООБЩЕСТВ ПОЛОСТИ РТА И МИКРОЭКОЛОГИЧЕСКОЕ ОБОСНОВАНИЕ ПРИНЦИПОВ БИОКОРРЕКЦИИ 03.02.03 – Микробиология Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Волгоград Работа выполнена в Государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Волгоградский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения...»

«Арбузова Елена Николаевна ПРОЕКТИРОВАНИЕ РЕФЛЕКСИВНОЙ СИСТЕМЫ ОБУЧЕНИЯ С ПРИМЕНЕНИЕМ ИННОВАЦИОННОГО УЧЕБНО-МЕТОДИЧЕСКОГО КОМПЛЕКСА ПО МЕТОДИКЕ ОБУЧЕНИЯ БИОЛОГИИ Специальность 13.00.02 – Теория и методика обучения и воспитания (биология, уровень профессионального образования) АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора педагогических наук Москва Работа выполнена на кафедре биологии, экологии и методики обучения биологии ГБОУ ВПО города Москвы «Московский...»

«ШАХТАМИРОВ Иса Янарсаевич КАРИОПАТОЛОГИЯ У ЖИВОТНЫХ В ЗОНАХ СТОЙКИХ ОРГАНИЧЕСКИХ ЗАГРЯЗНИТЕЛЕЙ ВНЕШНЕЙ СРЕДЫ 03.02.07 – генетика АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук Санкт-Петербург Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном учреждении высшего профессионального образования «Чеченский государственный университет» Научный консультант: доктор биологических наук, профессор Кравцов Вячеслав Юрьевич Официальные оппоненты:...»

«УЛАНОВСКАЯ ИРИНА ВЛАДИМИРОВНА Биоморфологические особенности Hemerocallis hybrida hort. коллекции Никитского ботанического сада Специальность 03.02.01 – ботаника АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Ялта – 2015 Работа выполнена в Государственном бюджетном учреждении Республики Крым «Ордена Трудового Красного Знамени Никитский ботанический сад – Национальный научный центр» Научный руководитель доктор биологических наук, профессор...»

«Аужанова Асаргуль Дюсембаевна ОЦЕНКА ДЕЙСТВИЯ АБИОТИЧЕСКИХ ФАКТОРОВ И БИОПРЕПАРАТА РИЗОАГРИН НА МИКРОБИОЛОГИЧЕСКУЮ АКТИВНОСТЬ ПОЧВЫ, АДАПТИВНОСТЬ И ПРОДУКТИВНОСТЬ ЯРОВОЙ МЯГКОЙ ПШЕНИЦЫ 03.02.08 – экология (биология) АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Омск – 2015 Работа выполнена на кафедре экологии, природопользования и биологии ФГБОУ ВПО «Омский государственный аграрный университет им. П.А.Столыпина» Поползухина Нина Алексеевна...»

«Нгуен Тхи Тху Ха МЕДОНОСНЫЕ РЕСУРСЫ ЛЕСНОГО ФОНДА ЛЕНИНГРАДСКОЙ ОБЛАСТИ И ЦЕНТРАЛЬНОГО ВЬЕТНАМА 06.03.02 Лесоведение, лесоводство, лесоустройство и лесная таксация АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Санкт-Петербург 2015 ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность темы исследования. Использование недревесных ресурсов вносит существенный вклад в улучшение качества жизни населения многих стран, включая Россию и Вьетнам. До настоящего...»

«ПОПОВ Игорь Юрьевич ВЫМИРАНИЕ MARGARITIFERA MARGARITIFERA (L.) НА ЮГЕ АРЕАЛА В РОССИИ И МОДЕЛЬ ПРИРОДОХРАННОГО ИССЛЕДОВАНИЯ 03.02.08 – экология Автореферат диссертации на соискания учёной степени доктора биологических наук Санкт-Петербург Работа выполнена в Санкт-Петербургском государственном университете Официальные оппоненты: Иешко Евгений Павлович, доктор биологических наук, Институт биологии Карельского научного центра РАН заведующий лабораторией паразитологии животных и...»

«Потапов Григорий Сергеевич СТРУКТУРА НАСЕЛЕНИЯ ШМЕЛЕЙ (HYMENOPTERA: APIDAE, BOMBUS LATR.) ЕВРОПЕЙСКОГО СЕВЕРА РОССИИ 03.02.08 – Экология (биология) АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Томск – 2015 Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном учреждении науки Институте экологических проблем Севера Уральского отделения Российской академии наук, в лаборатории экологии популяций и сообществ. Научный руководитель: доктор...»

«БЕРЕЗИНА Елена Сергеевна ПОПУЛЯЦИОННАЯ СТРУКТУРА, ОСОБЕННОСТИ МОРФОЛОГИИ И ПОВЕДЕНИЯ И РОЛЬ ДОМАШНИХ СОБАК И КОШЕК В РАСПРОСТРАНЕНИИ ПРИРОДНО-ОЧАГОВЫХ ИНФЕКЦИЙ В РОССИИ 03.02.04 – зоология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук Омск – 2015 Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Омский государственный педагогический университет» и ФБУН «Омский НИИ...»

«ДРОБОТ Елена Игоревна РЕАКТИВНОСТЬ КЛЕТОК ВРОЖДЕННОГО ИММУНИТЕТА ПРИ ИНФЕКЦИИ, ВЫЗВАННОЙ РАЗНЫМИ ПЛАЗМИДНЫМИ ВАРИАНТАМИ YERSINIA PSEUDOTUBERCULOSIS 03.03.04 – клеточная биология, цитология, гистология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Владивосток – 2014 Работа выполнена в лаборатории клеточной биологии и гистопатологии ФГБУ «Научно-исследовательского института эпидемиологии и микробиологии имени Г.П. Сомова» СО РАМН. Научный...»

«ВАРЕНЦОВА Алиса Алексеевна АНАЛИЗ СТРУКТУРЫ ГЕНОВ ИЗОЛЯТОВ ВИРУСА АФРИКАНСКОЙ ЧУМЫ СВИНЕЙ, ВЫДЕЛЕННЫХ НА ТЕРРИТОРИИ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ 03.02.02 «Вирусология» Aвтореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Владимир – 2014 Работа выполнена в Государственном научном учреждении Всероссийский научно-исследовательский институт ветеринарной вирусологии и микробиологии Российской академии сельскохозяйственных наук (ГНУ ВНИИВВиМ Россельхозакадемии)...»

«Шкаленко Вера Владимировна РАЗРАБОТКА МЕТОДОВ ИНТЕНСИФИКАЦИИ ПРОИЗВОДСТВА КОНКУРЕНТОСПОСОБНОЙ ПРОДУКЦИИ СВИНОВОДСТВА ЗА СЧЕТ ОПТИМИЗАЦИИ ГЕНОТИПИЧЕСКИХ И ПАРАТИПИЧЕСКИХ ФАКТОРОВ В УСЛОВИЯХ ПРОМЫШЛЕННЫХ КОМПЛЕКСОВ 06.02.10 – частная зоотехния, технология производства продуктов животноводства АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук Волгоград – 2015 Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном образовательном учреждении высшего...»

«СТОЛПОВСКАЯ Елена Владимировна СИНТЕЗ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ КОМПЛЕКСНЫХ СОЕДИНЕНИЙ НА ОСНОВЕ ДИГИДРОКВЕРЦЕТИНА – ПРОДУКТА ГЛУБОКОЙ ПЕРЕРАБОТКИ ДРЕВЕСИНЫ ЛИСТВЕННИЦЫ 05.21.03 технология и оборудование химической переработки биомассы дерева; химия древесины АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание учёной степени кандидата химических наук Иркутск Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном учреждении науки Иркутском институте химии им. А.Е. Фаворского Сибирского...»

«Амирханян Михаил Артурович Влияние профессиональных физических и эмоциональных нагрузок на окклюзионно-артикуляционные параметры зубочелюстной системы 14.01.14 – Стоматология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Москва – 2015 Работа выполнена на кафедре клинической стоматологии и имплантологии ФГБОУ ДПО «Институт повышения квалификации Федерального медикобиологического агентства» Заслуженный деятель науки России, Научный руководитель...»







 
2016 www.konf.x-pdf.ru - «Бесплатная электронная библиотека - Авторефераты, диссертации, конференции»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.