WWW.KONF.X-PDF.RU
БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА - Авторефераты, диссертации, конференции
 


Pages:     | 1 | 2 || 4 | 5 |

«ТИТОВА СВЕТЛАНА АНАТОЛЬЕВНА Влияние фитопатогенных микроорганизмов на энзиматическую активность растения-хозяина Glycine max (L.) Merr. и Glycine soja Sieb. et Zucc. 03.02.08 - ЭКОЛОГИЯ ...»

-- [ Страница 3 ] --

Полученный экстракт центрифугировали в течение 15 мин. при 3000 g. Осадок отбрасывали, а надосадочную жидкость фильтровали через слой капроновой ткани для удаления липидной пленки и использовали для дальнейшего анализа (Методы…, 1987).

Определение общего белка в экстрактах проводили методом Лоури (Lowry et al., 1951).

Определение активности ферментов Метод определения активности пероксидазы (1.11.1.7) (Бояркин, 1951;

Малый…, 1994) основан на образовании окрашенных продуктов при окислении бензидина под действием фермента, содержащегося в растениях, до образования продукта окисления синего цвета (n,n’-диаминдифенилхинона).

Активность фермента определяли на фотоэлектроколориметре (КФК-2). Об активности пероксидазы судили по времени развития окраски до определенного значения оптической плотности (значение D выбирают в зависимости от скорости развития окраски в пределах от 0,25 до 0,5).

Расчет активности пероксидазы вели по формуле:

D, (Бояркин, 1951) А td где: А – активность фермента, выраженная в относительных единицах на 1 г навески за 1 с; D – зарегистрированная в опыте оптическая плотность; t – время, с;

d – толщина слоя жидкости, см;,, – степень разведения: – отношение количества жидкости, взятой для приготовления вытяжки, мл, к массе навески, г;

– степень дополнительного разведения вытяжки после центрифугирования (если это требовалось); – степень постоянного разведения вытяжки в кювете.

Активность каталазы (1.11.1.6) определяли газометрическим методом (Методы…, 1987; Иваченко и др., 1997). Метод основан на определении объема кислорода, выделившегося после прибавления Н2О2 к экстракту из растений, содержащего каталазу. Активность каталазы выражается в миллилитрах кислорода, который выделяется под действием фермента из 1 г растительного материала за 3 минуты (учитывали содержание белка в пробе и разбавление).

Определение активности кислой фосфатазы (3.1.3.2) (Филиппович и др., 1982; Шаройко и др., 2002) основано на количественном учете неорганического фосфора, образующегося при расщеплении органических фосфорных соединений в строго определенных условиях под действием этого фермента.

Удельную активность выражали в миллиграммах отщепленного неорганического фосфора под действием фермента из 1 мг белка, которую определяли по формуле:

Е ав, (Филиппович и др., 1982) А сd t где: А – удельная активность фермента; Е – показания ФЭКа (определенное по калибровочной кривой); а – количество инкубационной смеси; в – количество раствора для фотоколориметрирования; с – аликвота из инкубационной смеси; d – количество белка; t – время инкубации, мин.

Построение калибровочного графика для определения содержания фосфора осуществляли по методу Фиске-Суббароу (Методы…, 1987).

Все анализы осуществляли в двух биологических и трех аналитических повторностях.

Статистическую обработку полученных данных проводили методами дисперсионного и корреляционного анализов (Доспехов, 1979; Плохинский, 1970). Достоверность результатов оценивали, используя t – критерий Стьюдента при уровне вероятности (р) 0,05 (Доспехов, 1979; Короневский, 1985).

3 ЭНЗИМАТИЧЕСКАЯ АКТИВНОСТЬ В КОРНЯХ И ЛИСТЬЯХ СОИ ПРИ

ПОРАЖЕНИИ ПОЧВЕННЫМИ (КОРНЕВЫМИ) ИНФЕКЦИЯМИ

Почва по ряду экологических параметров представляет собой промежуточную среду жизни между наземно-воздушной и водной. Буферные свойства почвы препятствуют резкому колебанию температуры и влажности, поэтому она является достаточно стабильной и благоприятной средой для существования почвенных организмов.

Наиболее вредоносным заболеванием на посевах сои является корневая гниль. По данным исследователей, видовой состав возбудителей корневой гнили характеризуется большим разнообразием и неодинаковым соотношением видов как в зонах Российской Федерации (Жуковская, 1977; Подкина, 1981, 1982), так и за рубежом (Hildebrand, Koch, 1974; Sato, Kitazawa, 1980; Reeve, 1983).

Микрофлора пораженных корней сои в Приамурье разнообразна и формируется в основном из микрофлоры почвы и семян. Л.К. Дубовицкой (1987) было установлено, что основными доминирующими видами являются грибы рода Fusarium, они составляют до 51,3% от общего количества микрофлоры корней сои.

В результате проведенных исследований было установлено, что процентное соотношение возбудителей, выделенных в разные фазы развития сои в среднем за три года, было непостоянным. Наиболее часто изолировали из пораженных корней F. solani (47,3-69,4%), F. oxysporum (20,1-23,2%), значительно реже F.

moniliforme (1,5-4,3%), очень редко F. gibbosum и прочие сопутствующие виды:

Actinomyces, Penicillium, Mucor, Trichoderma, Mycelia sterilia, Alternaria, Sporotrihum (рис. 11).

12,73 4,2 24,6 2,3 1,5 47,3 56,8 5 22,3 2,1 0,7 20,1 8,2 2,7 4,3 23,2 59,4 Рисунок 11 – Количественное соотношение грибов, выделенных из пораженных корней в разные фазы развития сои, %, 2008 – 2010 гг.

Экологические факторы среды оказывают огромное влияние на состояние растения-хозяина, на возникновение и течение патологических процессов в нем (Стэкмен, Харрар, 1959; Заостровных, Дубовицкая, 2003).

Для выяснения влияния погодных условий на развитие заболевания были проанализированы сумма осадков и величина среднесуточной температуры воздуха за вегетационный период.

Погодные условия в 2008 году по температурному показателю за вегетационный период были выше среднемноголетних на 2 оС (приложения 1, 2).

Количество осадков в июне составило 38 мм, что на 60 мм ниже среднемноголетних данных. Сложившиеся погодные условия препятствовали заражению растений, так как длительная засуха затрудняет распространение патогенов. Высокие температуры в июле и выпавшие осадки (98% от многолетней нормы) привели к развитию заболевания в фазе цветения, первоначальный уровень повысился в 2 раза. В фазе образования бобов развитие болезни продолжилось и составило 27,5% (рис. 12).

Самым благоприятным для развития корневой гнили был 2009 год. В июне сложилась дождливая и прохладная погода, это способствовало ослаблению растений и повышению восприимчивости к патогенам. Теплая погода с неравномерным распределением осадков в июле и обилие осадков в августе способствовали распространению корневых гнилей. Условия, неблагоприятные для интенсивного роста и развития сои, являлись благоприятными для патогена. В фазе цветения развитие болезни составило 21,2%, к периоду уборки – 33,0% (рис.

12).

В 2010 году погодные условия по температурному режиму были выше среднемноголетних значений: июнь характеризовался жаркой и сухой погодой, в июле выпало рекордное количество осадков (267 мм), что составило 215% от климатической нормы. Известно, что развитие патогенов находится в зависимости от влажности, слишком высокое содержание влаги в почве для возбудителей корневой гнили вредно, так как затрудняет снабжение их кислородом. В августе установилась дождливая погода с неустойчивым температурным режимом. При таких условиях развитие болезни составило 15,5% в фазе цветения, максимум (28,3%) приходился на фазу образования бобов (рис.

12).

Статистическая обработка результатов показала, что наибольшее поражение сои корневыми гнилями наблюдается при низких показателях относительных значений накопленных сумм температур. Коэффициенты корреляции между уровнем температуры и развитием корневых гнилей варьировали от r = -0,39±0,06 (сорт Соната) до r =-0,81±0,04 (сорт Гармония).

Корреляционная зависимость между степенью развития болезни и количеством осадков была положительной: сильной для сортов Соната (r = 0,85±0,06) и Даурия (r = 0,70±0,02), средней для сорта Гармония (r = 0,58±0,02).

Изучение распространенности и развития корневой гнили в динамике по фазам развития сои показало, что болезнь проявляется на ранних стадиях при формировании примордиальных листьев и достигает высокого уровня к периоду цветения и началу бобообразования.

В фазе первого тройчатого листа распространение болезни составило от 34,2 до 48,3%, при развитии болезни 5,7 – 11,0% (среднее по сортам) (рис. 13, 14, приложение 3). К фазе цветения болезнь распространялась быстрее и превысила первоначальный уровень в 1,4 – 1,5 раза. Частота встречаемости в период цветения не превышала 51,7 – 66,7%, при развитии корневой гнили 8,5 – 26,0% (рис. 13, 14, приложение 3). В фазе бобообразования в среднем за три года исследований распространенность болезни составила 64,2 – 81,7%, развитие соответственно 11,5 – 50,6% по сортам (рис. 13, 14, приложение 3).

% 90 Рисунок 13 – Динамика распространенности корневой гнили сои, %, 2008 – 2010 гг.

Анализ результатов исследования за 2008 – 2010 гг. показал, что различные сорта сои поражались корневой гнилью по-разному. Среднеспелый сорт Гармония (2 балл поражения) оказался более устойчивым к поражению корневыми гнилями, в период максимального развития заболевания (фаза бобообразования) степень поражения варьировала по годам в пределах 10,0 – 13,0% (приложение 3).

Сорт Даурия (среднеспелый) зарекомендовал себя как среднеустойчивый, в фазе бобообразования он имел 3 балл поражения, процент развития болезни составлял 23,5 – 33,0% (приложение 3).

Наиболее восприимчивым к заболеванию оказался раннеспелый сорт Соната (4 балл поражения), в фазе бобообразования развитие болезни доходило до 53,0% при распространенности 90,0% (приложение 3).

% 60 Рисунок 14 – Динамика развития корневой гнили сои, %, 2008 – 2010 гг.

Таким образом, поражению растений корневыми гнилями способствует теплая с достаточным количеством осадков погода. Выявлена положительная корреляционная зависимость между степенью развития болезни и количеством осадков (r = 0,58 – 0,85) и отрицательная с температурой воздуха (r = -0,39 – Распространенность и развитие заболевания увеличивается по фазам развития сои, наиболее интенсивно поражаются растения от фазы всходов до цветения, максимум приходится на фазу бобообразования. Наибольшей устойчивостью к корневым гнилям в условиях южной зоны Амурской области обладает сорт Гармония, наименьшей – сорт Соната.

3.2 Изменение активности пероксидазы, каталазы и кислой фосфатазы в корнях сои при поражении возбудителями корневой гнили Подземные части растений живут в гораздо более сложной биологической среде, чем побеги, так как в почве обычно обитает большое количество грибов, бактерий, актиномицетов, простейших, нематод, насекомых и других организмов.

Все эти организмы взаимодействуют друг с другом, и, кроме того, на их численность влияют химические и физические условия почвы (Тарр, 1975).

Воздействие патогена вызывает значительные изменения в функциональном состоянии растения, а это прежде всего отражается на уровне ферментативной активности.

Удельная активность пероксидазы в корнях, пораженных корневой гнилью, как увеличивается, так и уменьшается относительно контроля (здоровые корни).

В частности, установлено увеличение удельной активности пероксидазы в пораженных корнях сортов Гармония и Даурия в фазе первого тройчатого листа.

Наоборот, у сорта Соната активность пероксидазы снижается по сравнению с контролем (рис. 15, приложение 4).

В фазе цветения удельная активность пероксидазы увеличивается в инфицированных корнях сорта Гармония (в 1,5 раза) с 1384 до 2076 ед/мг белка х 10-2. У сортов Даурия и Соната активность фермента соответственно в 1,2 и 1,3 раза ниже, чем в контроле (рис. 15, приложение 4).

Результаты исследования показали, что активность пероксидазы в фазе бобообразования у сорта Гармония в 1,7 раза выше, чем в контроле. Вероятно, высокая активность пероксидазы в корнях устойчивых сортов сои наряду с другими механизмами защиты обеспечивает способность этих растений противостоять действию возбудителя.

Наименьшая активность пероксидазы в наших исследованиях отмечена в пораженных корнях сорта Соната (454 ед/мг белка х 10-2) (рис. 15, приложение 4).

Как свидетельствуют наши наблюдения, активность пероксидазы в пораженных корнях сорта Соната ниже, чем в контроле во все фазы развития сои.

Согласно литературным данным (Серова и др., 1982), такой характер изменения активности пероксидазы свойствен восприимчивым к заболеваниям растениям.

Каталаза встречается в клетке вместе с пероксидазой. Её биологическая роль заключается не только в защите клеток от образующейся в ходе метаболизма перекиси водорода, но и в снабжении растения кислородом.

Результаты нашего исследования показали, что в фазе первого тройчатого листа удельная активность каталазы в пораженных корнях сорта Гармония снижается в 1,5 раза, но возрастает у сортов Соната (в 1,5 раза) и Даурия (в 1,2 раза) (рис. 16, приложение 5).

В фазе цветения активность каталазы в пораженных корнях у сортов Гармония и Даурия несущественно отличается от контроля, а у сорта Соната она в 1,3 раза выше, чем в здоровых корнях (рис. 16, приложение 5).

В фазе бобообразования у устойчивого сорта Гармония активность каталазы в инфицированных корнях в 1,4 раза ниже, чем в здоровых (рис. 16, приложение 5).

Рисунок 16 – Удельная активность каталазы (% к контролю) в корнях сои при поражении корневой гнилью, 2008 – 2010 гг.

У сорта Даурия, занимающего промежуточное положение по устойчивости к корневым гнилям, активность фермента достоверно не изменялась по сравнению со здоровыми корнями (рис. 16, приложение 5). У сильно поражаемого корневой гнилью сорта Соната активность фермента в 1,3 раза выше, чем в контроле (рис. 16, приложение 5). Повышение активности каталазы привело к снижению концентрации перекиси водорода, а это лимитирует реакции, катализируемые пероксидазой. Не исключено, что подобные изменения активности каталазы у сорта Соната способствуют формированию совместимых отношений в комбинации хозяин (соя) – патоген.

Изучение зависимости поражения сои корневой гнилью от активности каталазы показало, что между указанными параметрами существует положительная корреляция средней силы в фазе первого тройчатого листа и сильная в фазе цветения: чем ниже активность каталазы, тем ниже балл поражения (табл. 3).

Однако в фазе бобообразования была выявлена сильная отрицательная взаимосвязь между степенью поражения растений корневой гнилью и активностью каталазы в пораженных корнях сои, при которой с увеличением активности фермента происходит снижение устойчивости (табл. 3).

Таблица 3 – Корреляционная зависимость между степенью поражения корневой гнилью и удельной активностью каталазы в пораженных корнях сои (в среднем по сортам) Анализируемая пара Фаза развития сои Коэффициент параметров корреляции степень поражения корневой 1-й тройчатый лист 0,55 ± 0,07 гнилью – удельная активность цветение 0,78 ± 0,05 каталазы в корнях сои бобообразование - 0,74 ± 0,06 tтеор при Р0,95=2,01 Динамика изменения удельной активности кислой фосфатазы в инфицированных корнях сорта Гармония следующая: в фазе первого тройчатого листа она снижается на 24%, в фазах цветения и бобообразования достоверного отличия активности этого фермента между больными и здоровыми растениями не выявлено (рис. 17, приложение 6).

В пораженных корнях сорта Даурия активность кислой фосфатазы во всех фазах развития ниже, чем у здоровых растений (рис. 17, приложение 6).

В пораженных корнях сорта Соната активность кислой фосфатазы в фазе первого тройчатого листа снижается, а затем в фазах цветения и бобообразования увеличивается в 2,0 и 1,6 раза соответственно (рис. 17, приложение 6). Рост активности кислой фосфатазы говорит о возможности усиления литических процессов в пораженных корнях, что может негативно отразиться на гомеостазе фосфорных эфиров.

На основании литературных данных (Лисицын, Кропотов, 2002) и наших исследований можно полагать, что под действием стрессового фактора в корнях сильнопоражаемых растений активность кислой фосфатазы увеличивается, а у слабопоражаемых незначительно снижается или приближается к контролю.

Рисунок 17 – Удельная активность кислой фосфатазы (% к контролю) в корнях сои при поражении корневой гнилью, 2008 – 2010 гг.

Корреляционный анализ полученных данных позволил выявить сильную положительную связь между степенью поражения корневой гнилью и активностью кислой фосфатазы в фазе первого тройчатого листа. При этом в фазах цветения и образования бобов устойчивость сои к корневой гнили слабо связана с активностью кислой фосфатазы в пораженных корнях (табл. 4).

Проанализированные корреляционные зависимости между активностью пероксидазы, каталазы, кислой фосфатазы и степенью поражения сои корневой гнилью на разных стадиях онтогенеза позволили выявить тесные взаимосвязи, при которых с изменением активности ферментов (убывание или возрастание) возрастает устойчивость.

Корреляционная связь несущественна tфакт tтеор Таким образом, инфицирование корней сои корневой гнилью приводит к увеличению активности пероксидазы и снижению каталазы у устойчивого сорта Гармония (активность кислой фосфатазы изменяется несущественно) и, наоборот, к снижению активности пероксидазы и росту активности каталазы и кислой фосфатазы у восприимчивого сорта Соната.

3.3 Изменение активности пероксидазы, каталазы и кислой фосфатазы в листьях сои при поражении возбудителями корневой гнили Известно (Ильинская и др., 1991; Граскова и др., 2004; Яруллина и др., 2005), что заражение вызывает изменение метаболизма в органах, отдаленных от места внедрения и локализации патогена. В связи с этим нами была определена активность ферментов в листьях сои при поражении корней корневыми гнилями.

Важнейшим ферментом, задействованным в формировании защитной реакции растений на внедрение патогена и, в частности, в регуляции уровня перекиси водорода в клетках, является пероксидаза.

Развитие заболевания приводит к увеличению активности пероксидазы у устойчивого сорта Гармония не только в корнях, но и в листьях пораженных растений. Повышение удельной активности пероксидазы у сорта Гармония свидетельствует о его высоком адаптивном потенциале (табл. 5, приложение 7).

У сортов Соната и Даурия активность пероксидазы в листьях пораженных растений, так же как и в корнях, ниже, чем в здоровых (табл. 5, приложение 7).

Важно заметить, что инфицирование растений через корни приводит к изменению активности фермента в листьях, которые не контактировали с патогеном. Следовательно, можно сделать предположение об участии пероксидазы в развитии системной устойчивости сои при заражении корневыми гнилями. Это согласуется с существующими представлениями о том, что пероксидазу можно рассматривать в качестве маркера системной устойчивости растений при патогенезе (Серова и др., 1982).

Каталаза вместе с другими оксидоредуктазами направляет метаболизм клетки на создание неблагоприятных условий для патогена. Известно о различных ответных реакциях каталазы у устойчивых растений: от сильной активации у овса при заражении корончатой ржавчиной до снижения активности у пшеницы, пораженной стеблевой ржавчиной (Коно, 1961; Нилова, Егорова, 1948).

Под влиянием заражения сои корневой гнилью активность каталазы в листьях сорта Гармония в фазе цветения повышается, а в фазе бобообразования снижается, при этом в пораженных корнях активность фермента в данные фенологические фазы была ниже, чем в контроле (табл. 5, приложение 8).

Активность каталазы в листьях пораженных растений сортов Соната и Даурия в фазах цветения и бобообразования снижается, в пораженных корнях сорта Соната – увеличивается, а в корнях сорта Даурия – увеличивается в фазе цветения и снижается в фазе бобообразования (табл. 5, приложение 8).

В наших исследованиях активность кислой фосфатазы, выделенной из корней и листьев разных сортов сои, под действием патогена изменялась поразному. У сорта Гармония активность кислой фосфатазы в пораженных корнях остается на уровне здоровых, а в листьях снижается; у сорта Даурия – снижается в корнях и в листьях; у сорта Соната – повышается в корнях, а в листьях снижается (табл. 5, приложение 9).

НСР05 0,51 0,29 1,68 Проанализировав полученные результаты, можно сделать заключение, что при патогенезе корневой гнилью только активность пероксидазы, выделенной из разных органов сои, изменяется однонаправленно, изменение активности других изучаемых ферментов носит разнонаправленный характер. Так как удельная активность пероксидазы, выделенной из корней и листьев, изменяется сходным образом, то для установления устойчивости к патогену можно использовать любой из этих органов.

4 ЭНЗИМАТИЧЕСКАЯ АКТИВНОСТЬ В ЛИСТЬЯХ СОИ ПРИ

ПОРАЖЕНИИ ЛИСТО-СТЕБЛЕВЫМИ ИНФЕКЦИЯМИ

Основной средой обитания возбудителей листо-стеблевых инфекций являются вегетативные органы, дополнительной – генеративные органы растений.

Распространяются возбудители из года в год благодаря сохранению их на растительных остатках и семенах. Они нуждаются в наличии капельно-жидкой влаги или высокой относительной влажности воздуха (80 – 100%) на всех этапах передачи: в период выделения пикноспор во внешнюю среду, при их распространении и при внедрении в ткани наземных органов растений.

Учеты распространенности и развития болезней сои проводили в течение всего вегетационного периода. В результате учетов и наблюдений в годы исследований наиболее широкое распространение получили следующие болезни:

септориоз, пероноспороз и бактериоз.

Время появления и степень развития болезни, вызываемой тем или иным патогеном сои, в значительной степени определялись метеорологическими условиями года, а также биологическими особенностями самих возбудителей болезни.

Септориоз (возбудитель Septoria glycines Hemmi. Syn.) является одним из самых вредоносных заболеваний этой культуры. На степень развития септориоза большое влияние оказали метеорологические условия 2008 – 2011 гг.

(приложения 1, 2). Заражению и развитию болезни способствует влажная и теплая погода, которая вызывает споруляцию патогена на первичных некрозах. Конидии распространяются ветром и брызгами от падающих дождевых капель.

Оптимальной для развития возбудителя является температура 24-28оС и влажность воздуха 90%. Очень благоприятны для распространения заболевания частые дожди, высокая температура во второй половине июля-августа и обильные росы (Заостровных, Дубовицкая, 2003).

Погодные условия в 2008 году оказались самыми благоприятными для развития гриба, несмотря на то что осадки распределялись неравномерно: в июне их было мало (39% от средних многолетних), в июле и августе количество осадков увеличилось, что способствовало повышению относительной влажности воздуха. Развитие септориоза в фазе бобообразования составило 62,2% (рис. 18, приложение 10).

62,2 Самые неблагоприятные условия для развития патогена сложились в 2010 году. В период всходов и образования тройчатых листьев температура на поверхности почвы достигла 50-63оС, развитие септориоза находилось в депрессии. Распространение и заражение растений началось в первой декаде июля после выпадения осадков. Развитие заболевания долгое время было невысоким и лишь в конце августа возросло до 24,6% (рис. 18).

Септориоз у сои проявляется очень рано, развитие начинается с семядолей и примордиальных листьев и продолжается в течение всего вегетационного периода. Распространенность септориоза на листьях культурной сои в фазе цветения составила 51,2 – 79,5%, развитие болезни – 14,4 – 28% (рис. 19, 20, приложение 10).

% 120 Рисунок 19 – Динамика распространенности септориоза сои, %, 2008 – 2011 гг.

S. glycines особенно сильно поражает старые ткани и достигает наибольшего развития во второй половине вегетации. Развитие септориоза у G. max в фазе бобообразования в среднем по сортам за четыре года составило 22,5 – 60,7% при частоте встречаемости 74,5 – 97,5%, в отдельные годы достигало 100,0% (рис. 19, 20, приложение 10).

% 70 Рисунок 20 – Динамика развития септориоза сои, %, 2008 – 2011 гг.

Среди исследованных сортов культурной сои были как высоко, так и среднепоражаемые септориозом. Среднеспелые сорта Гармония и Даурия оказались более устойчивыми к данному заболеванию, чем раннеспелый сорт Соната, степень развития септориоза в фазе бобообразования варьировала в пределах 46,0 – 82,3% при распространенности болезни от 90,0 до 100,0% (рис.

19, 20, приложение 10). Устойчивость сортов сои к S. glycines возрастает с увеличением их периода вегетации, полученные нами данные согласуются с результатами исследования Л.А. Дега (2012).

Септориоз очень часто встречается и на растениях дикорастущей сои.

Согласно А.К. Лещенко (1978), G. soja может служить резерватором и накопителем инфекции для заражения культурной сои. Степень поражения листьев дикорастущей сои в фазе бобообразования в среднем по годам составляла 31,2% при распространенности 61,7% (рис. 19, 20, приложение 10).

Пероноспороз, или ложная мучнистая роса (возбудитель Peronospora manshurica (Naum.) Syd. Syn.) является широко распространенным заболеванием сои на Дальнем Востоке. Известно (Заостровных, Дубовицкая, 2003), что оптимальной температурой для развития возбудителя пероноспороза считается 18-20оС. Распространение конидий происходит особенно интенсивно после дождей и длительных туманов, когда капли воды сохраняются на листьях не менее 5 часов. Развитие болезни может приостанавливаться не только в сухую жаркую погоду, но и в период сильных ливневых дождей, когда конидии смываются с листьев.

Наибольшего развития в условиях Амурской области пероноспороз достигал в 2009 году, в 2010 году отмечено самое низкое развитие болезни (рис.

21, приложение 11).

В 2008 году погодные условия по температурному режиму за вегетационный период были выше среднемноголетних на 1-4оС, жаркая и сухая погода в начале лета сдерживала развитие пероноспороза. Относительная влажность повысилась лишь в июле, что привело к распространению болезни.

Обильные осадки в июне 2009 года (206% от климатической нормы) при температуре воздуха ниже средней многолетней на 1оС создали благоприятные условия для развития патогена. Дождливая погода в июле, повышенная относительная влажность воздуха, длительное сохранение росы на листьях способствовали быстрому распространению и прорастанию конидий гриба.

Вегетационный период 2010 года также характеризовался большим количеством осадков, но пероноспороз не получил широкого распространения, так как сильные ливневые дожди, прошедшие в июле, смывали с листьев конидии возбудителя и тем самым приостановили развитие заболевания.

Июнь, июль и август 2011 года отличались высокой среднесуточной температурой воздуха, которая на 1-2оС была выше средней многолетней, и незначительным выпадением осадков, что привело к умеренному развитию пероноспороза.

Во все годы исследований гриб начинал развиваться на сое в фазе пятого настоящего листа, к фазе цветения болезнь быстро распространялась, так как нарастание верхних листьев способствовало развитию гриба, поражающего преимущественно молодые растущие ткани. Нами не отмечено диффузного поражения растений возбудителем.

46,2 28,4 5,55 Развитие болезни у сортов культурной сои в фазе цветения составляло 20,7

– 31,4%, при распространенности 39,4 – 64,5% (рис. 22, 23). Наиболее сильно поражались листья культурной сои в фазе бобообразования, развитие болезни составляло 52,9% при распространенности 97,0%, в отдельные годы поражалось до 100,0% растений (рис. 22, 23).

% 120 Рисунок 23 – Динамика развития пероноспороза сои, %, 2008 – 2011 гг.

У сорта Гармония степень поражения пероноспорозом в фазе бобообразования варьировала в пределах 25,5 – 50,0%, у сорта Соната – 39,3 – 56,2% (рис. 22, 23, приложение 11). У сорта Даурия развитие болезни достигало 64,5% при распространенности 100,0% (рис. 22, 23, приложение 11).

За все четыре года исследования дикорастущая соя слабо поражалась пероноспорозом, на листьях были отмечены единичные некротические пятна. В фазе пятого тройчатого листа пораженных растений не наблюдалось, распространенность пероноспороза в фазе цветения не превышала 8,8% при развитии болезни 2,1%, к фазе бобообразования распространенность составила 20,4%, развитие – 11,0% (рис. 22, 23, приложение 11).

Как мы отмечали выше, в Амурской области самым вредоносным из бактериальных заболеваний является угловатая пятнистость, или бактериальный «ожог» (возбудитель Pseudomonas glycineum Coerper. Syn.). За время проведения исследований (2008 – 2011 гг.) только в 2009 году данное заболевание было обнаружено на растениях G. max и G. soja. Решающим фактором в распространении бактериоза являются осадки. Осадки (206% к климатической норме), выпавшие в июне 2009 г., способствовали развитию бактериальной инфекции.

Распространение бактериоза в фазе цветения на листьях сои колебалось в зависимости от сорта от 18,0 до 32,6%, его развитие – от 11,2 до 14,6%; в фазе бобообразования – соответственно от 40,0 до 65,0% и от 26,0 до 46,0% (рис. 24, 25, приложение 12).

% 1,5 0,5 Рисунок 26 – Зависимость развития болезней от ГТК Гидротермические условия среды определяли все основные аспекты жизнедеятельности возбудителей болезней и степень нанесенного ими вреда.

Выявлена положительная зависимость между показателями ГТК и развитием септориоза, пероноспороза и бактериоза. Так, в 2009 году отмечено максимальное значение ГТК (2,5) и степень развития основных заболеваний сои. Низкое значение ГТК (1,2) в 2010 году способствовало снижению развития заболеваний.

Однако в 2008 году, несмотря на то что ГТК составил 1,4, развитие септориоза было самым высоким.

Обобщая полученные данные, можно сделать следующее заключение:

– различные экологические факторы оказывают существенное влияние на развитие патогенов сои, наиболее благоприятные условия для развития грибной и бактериальной инфекций сложились в 2009 году. Развитию возбудителей пероноспороза и бактериоза способствуют повышенная влажность воздуха и большое количество осадков в сочетании с пониженной температурой. Более высокие температуры в сочетании с повышенной относительной влажностью воздуха необходимы для развития S. glycines, наибольшее развитие болезни отмечено в 2008 году;

– сорт Соната наиболее сильно поражался септориозом; сорт Даурия – пероноспорозом. Сорт Гармония проявил среднюю устойчивость ко всему комплексу заболеваний. Форма дикорастущей сои КА-1344 оказалась устойчивой к пероноспорозу и среднеустойчивой к септориозу и бактериозу.

4.2 Участие ферментов в ответных реакциях сои на поражение листостеблевыми инфекциями Изучение биохимических и физиологических особенностей больного растения представляет важный этап на пути познания природы устойчивости его к патогенным микроорганизмам. При внедрении патогена в ткани растенияхозяина возникают различные нарушения метаболизма (изменяется интенсивность фотосинтеза, дыхания и транспирации, задерживается отток ассимилянтов и т.д.). Значительные изменения претерпевают белковые компоненты клетки и в первую очередь белки-ферменты (Кожанова, Аксенова, 1976).

Известно (Серова и др., 1982), что приспособление организма к условиям окружающей среды сводится к поддержанию на должном уровне скорости и направленности энзиматических реакций, благодаря которым обеспечивается состояние гомеостаза. Изменение ферментативной активности инфицированных растительных тканей свидетельствует о нарушении состояния гомеостаза. Вместе с тем оно указывает на то, что растительный организм активно борется с болезнью.

Поэтому важным, на наш взгляд, было провести исследование влияния фитопатогенов на растение-хозяин по изменению активности ферментов, обеспечивающих нейтрализацию неблагоприятных факторов среды и являющихся важнейшими инструментами сохранения гомеостаза обмена веществ.

Изменение активности пероксидазы, каталазы и кислой 4.2.1 фосфатазы в листьях сои при поражении грибной и бактериальной инфекциями в естественных условиях На следующем этапе работы испытанные на устойчивость к болезням сорта культурной сои (Гармония, Даурия, Соната) и дикорастущая форма КАанализировались на активность ферментов. Особый интерес представляет дикорастущая соя как уникальный источник генов, обусловливающих экологическую пластичность, высокий гомеостаз, устойчивость к болезням и вредителям, а также скороспелость и повышенную урожайность с одного растения (Ала и др., 2000).

Сорта Гармония и Даурия, а также дикорастущая форма КАзарекомендовали себя как среднеустойчивые к возбудителю септориоза.

Известно, что важную роль в развитии устойчивости растений к патогену играет пероксидаза, которая участвует в детоксикации активных форм кислорода, образующихся в ходе физиологического стресса, вызванного патогенезом (Kawano, 2003).

У сорта Гармония активность пероксидазы в пораженных листьях в фазе третьего тройчатого листа увеличивается в 4 раза. В фазах цветения и бобообразования активность пероксидазы также выше в инфицированных листьях, чем в здоровых (рис. 27, приложение 13).

В пораженных листьях сорта Даурия в фазе третьего тройчатого листа активность пероксидазы ниже, чем в контроле, на 40%, в фазе бобообразования активность пероксидазы повышается на 56% (рис. 27, приложение 13).

Рисунок 27 – Удельная активность пероксидазы (% к контролю) в листьях G. max и G. soja при поражении септориозом, 2008 – 2011 гг.

После заражения септориозом в фазе третьего тройчатого листа активность пероксидазы в листьях формы КА-1344 увеличивается в 1,8 раза по сравнению с контролем (здоровые листья). В ходе развития патологического процесса активность фермента растёт: в фазе цветения она увеличивается в 1,9 раза, в фазе образования бобов – в 3,8 раза (рис. 27, приложение 13).

В листьях восприимчивого сорта Соната в фазе третьего тройчатого листа активность пероксидазы ниже, чем в контроле, на 18%, в фазе бобообразования достоверного отличия между пораженными и здоровыми листьями не выявлено (рис. 27, приложение 13). Проведенные нами исследования по изучению активности ферментов устойчивых и восприимчивых сортов сои к септориозу показали, что такой характер изменения активности пероксидазы свойствен восприимчивым растениям (Семенова, Титова, Дубовицкая, 2012).

Активность пероксидазы в пораженных листьях сои достоверно отрицательно коррелировала со степенью поражения сои септориозом, особенно в фазе бобообразования: чем выше активность фермента, тем ниже балл поражения (табл. 6).

Таблица 6 – Корреляционная зависимость между степенью поражения септориозом и удельной активностью пероксидазы в пораженных листьях сои (в среднем по сортам) Анализируемая пара Фаза развития сои Коэффициент параметров корреляции степень поражения 3-й тройчатый лист - 0,48 ± 0,05 септориозом – удельная цветение - 0,44 ± 0,06 активность пероксидазы в бобообразование - 0,52 ± 0,05 листьях сои tтеор при Р0,95=1,96 Удельная активность каталазы в листьях сои, пораженных септориозом, в фазах третьего тройчатого листа и цветения ниже, чем в контроле у всех исследованных образцов (рис. 28, приложение 14).

Существенное снижение активности каталазы (в 2,2 – 3 раза) наблюдается в фазе образования бобов у всех сортов культурной и дикорастущей сои (рис. 28, приложение 14). Снижение каталазной активности в этот период патогенеза может быть обусловлено разрушением хлорофилла. Известно, что под воздействием большинства фитопатогенных грибов уменьшается количество хлорофилла в листьях, так как микроорганизмы разрушают хлоропласты.

Согласно исследованиям Б.А. Рубина и М.Е. Ладыгиной (1966), в листьях, в которых происходит частичное или полное разрушение хлорофилла, всегда наблюдается падение каталазной активности.

Корреляционная связь несущественна tфакт tтеор Удельная активность кислой фосфатазы в пораженных листьях всех изучаемых сортов сои ниже, чем в здоровых. Существенно (на 50 – 60%) снижается активность фермента в пораженных листьях сорта Соната, в меньшей степени – у дикорастущей сои (рис. 29, приложение 15).

Корреляционная связь несущественна tфакт tтеор Активность ферментов в листьях сои, инфицированных P. manshurica, определяли в фазы цветения и образования бобов. Удельная активность пероксидазы в листьях дикорастущей сои, устойчивой к пероноспорозу, увеличивается в фазе цветения – в 1,4 раза, в фазе бобообразования – в 2 раза (рис. 30, приложение 16).

Сорта Гармония и Соната, характеризующиеся средней устойчивостью к пероноспорозу, отличаются высокой активностью пероксидазы в пораженных листьях: в фазе бобообразования она повышается в 1,7 и 1,3 раза соответственно (рис. 30, приложение 16).

У сильнопоражаемого сорта Даурия активность фермента в пораженных листьях повышается незначительно по сравнению с контролем (рис. 30, приложение 16).

Рисунок 30 – Удельная активность пероксидазы (% к контролю) в листьях G. max и G. soja при поражении пероноспорозом, 2008 – 2011 гг.

Коэффициенты корреляции между устойчивостью сои к пероноспорозу и удельной активностью пероксидазы в пораженных листьях сои представлены в таблице 9. Взаимосвязь между анализируемыми параметрами была отрицательной средней силы: чем выше активность пероксидазы, тем ниже степень поражения листьев.

Пораженные растения характеризуются низкой активностью каталазы. В фазе цветения она ниже, чем у здоровых растений, в 1,2 – 1,8 раза. К фазе бобообразования активность каталазы продолжает снижаться: у дикорастущей сои она составила 76%, у сорта Гармония – 74 %, у сорта Соната – 38%, у сорта Даурия – 18% от контроля (рис. 31, приложение 17). Снижение каталазной активности в этот период патогенеза может быть обусловлено разрушением хлорофилла.

Рисунок 31 – Удельная активность каталазы (% к контролю) в листьях G.

max и G. soja при поражении пероноспорозом, 2008 – 2011 гг.

У изучаемых сортов установлена положительная связь средней силы между степенью поражения пероноспорозом и удельной активностью каталазы в пораженных листьях сои в фазе цветения: чем выше активность, тем выше пораженность сои. В фазе бобообразования связь между анализируемыми параметрами была сильной отрицательной: чем выше активность, тем меньше степень поражения сои (табл. 10).

Таблица 10 – Корреляционная зависимость между степенью поражения пероноспорозом и удельной активностью каталазы в пораженных листьях сои (в среднем по сортам) Анализируемая пара Фаза развития сои Коэффициент параметров корреляции степень поражения цветение 0,43 ± 0,06 пероноспорозом – удельная бобообразование - 0,88 ± 0,02 активность каталазы в листьях сои tтеор при Р0,95=1,98 В листьях G. max и G. soja, пораженных пероноспорозом, активность кислой фосфатазы ниже в сравнении со здоровыми листьями. В меньшей степени активность фермента снижается в листьях дикорастущей сои, устойчивой к пероноспорозу, в большей степени – у сортов Даурия и Соната (рис. 32, приложение 18).

Корреляционная связь несущественна tфакт tтеор По-видимому, снижение активности кислой фосфатазы в листьях пораженных растений связано не с формированием устойчивости, а с нарушением углеводно-фосфорного и липидного обменов, которое происходит под влиянием патогенов.

Исследованные сорта культурной сои (Гармония, Даурия и Соната) и дикорастущая форма КА-1344 обладали средней устойчивостью к бактериозу.

Инфицирование растений бактериозом приводит к изменению активности пероксидазы в пораженных листьях всех образцов, она увеличивается относительно контроля, особенно у дикорастущей сои (рис. 33, приложение 19).

Как видно из данных таблицы 12, существует средняя отрицательная корреляционная зависимость между удельной активностью пероксидазы в пораженных листьях сои и устойчивостью к бактериозу: чем выше активность пероксидазы, тем ниже балл поражения.

Под влиянием заражения удельная активность каталазы в фазе цветения в листьях сортов Соната и Даурия увеличивается в 2,7 – 4,5 раза соответственно, а у сорта Гармония и формы КА-1344 снижается. В фазе бобообразования в листьях культурной и дикорастущей сои активность каталазы была ниже, чем в контроле.

Минимальная активность фермента (13 х 10-4 ед/мг белка) обнаружена у G. soja (рис. 34, приложение 20).

Корреляционная связь несущественна tфакт tтеор Однако в фазе бобообразования наблюдалась сильная отрицательная зависимость степени поражения сои бактериозом от активности каталазы в пораженных листьях сои.

Заражение растений сои бактериозом вызывает снижение активности кислой фосфатазы на 20 – 40% в листьях исследованных образцов в фазах цветения и бобообразования. В большей степени активность фермента снижается у сорта Даурия (на 55%) в фазе бобообразования. В меньшей степени активность кислой фосфатазы снижается у дикорастущей формы (на 18%) (рис. 35, приложение 21).

Корреляционная связь несущественна tфакт tтеор Проанализировав корреляционные зависимости между степенью поражения листьев патогенами листо-стеблевой экологической ниши и активностью ферментов, была выявлена отрицательная средней силы связь активности пероксидазы с устойчивостью к септориозу, пероноспорозу и бактериозу.

Корреляция активности каталазы с устойчивостью была положительной в фазы третьего тройчатого листа и цветения, отрицательной в фазе бобообразования.

Несмотря на то, что связь активности кислой фосфатазы со степенью поражения листьев фитопатогенами в основном была слабой и недостоверной, нельзя не учитывать тот факт, что активность литических ферментов имеет большое значение в исходе противоборства растения-хозяина и патогена.

Поскольку характер взаимодействия патогена и растения-хозяина зависит не только от патогена, но и от растения-хозяина, нами была исследована активность изучаемых ферментов в листьях здоровых растений. При проведении анализа было обнаружено, что удельная активность пероксидазы, каталазы и кислой фосфатазы возрастает в онтогенезе, достигая максимума в фазе образования бобов (приложения 16 – 18), подобные изменения активности ферментов в листьях сои были отмечены в ранее проведенных исследованиях (Семенова, 2006).

Корреляционный анализ показал, что зависимости между устойчивостью сои к болезням и активностью ферментов (пероксидазы, каталазы, кислой фосфатазы) в листьях здоровых растений слабые и иногда недостоверные (табл.

15).

Таблица 15 – Корреляционная зависимость между степенью поражения болезнями и удельной активностью ферментов в здоровых листьях сои (в среднем по сортам) Корреляционная связь несущественна tфакт tтеор Таким образом, постинфекционные изменения исследованных ферментов определяются генотипом и фазой развития сои. Формирование совместимых или несовместимых взаимоотношений растение-хозяин – патоген не зависит от изначальной активности пероксидазы, каталазы и кислой фосфатазы в листьях сои, а связано с изменением активности ферментов в ответ на внедрение патогена.

4.2.2 Изменение активности пероксидазы, каталазы и кислой фосфатазы в изолированных листьях сои при искусственном заражении септориозом Данное исследование было предпринято с целью изучения динамики изменения активности ферментов (пероксидазы, каталазы, кислой фосфатазы) в изолированных листьях, искусственно зараженных септориозом в лабораторных условиях, для того, чтобы исключить влияние абиотических стрессоров действующих в естественных условиях. Известно, что абиотический стресс может подавлять защитные реакции растений на биотическое воздействие (Перфильева, Рымарева, 2012).

Результаты исследования показали, что степень поражения септориозом культурной и дикорастущей сои различна. Первые проявления болезни были отмечены на 3 сутки у сорта Соната, у сортов Гармония и Даурия - на 4 сутки и на 7 сутки – у формы КА-1344 (рис. 36).

98 % 90 Рисунок 36 – Динамика развития септориоза на листьях G. max и G. soja, %, 2008 – 2010 гг.

При учете развития септориоза на 9 сутки после инокуляции возбудителем болезни форма КА-1344 (1 балл поражения) была классифицирована как высокоустойчивая, сорта Гармония (2 балл поражения) и Даурия (2 балл поражения) – как устойчивые, и только сорт Соната (4 балл поражения) был отнесен к восприимчивым.

На 12 сутки после заражения S. glycines только форма КА-1344 (2 балл поражения) была отнесена к устойчивым, сорта Гармония (3 балл поражения) и Даурия (3 балл поражения) – к среднеустойчивым, сорт Соната (5 балл поражения) – к сильновосприимчивым.

Патогенность и конечный результат взаимодействия патогена и растенияхозяина во многом зависят от биологической активности возбудителя септориоза.

Поэтому нами была определена активность ферментов в вытяжке из мицелия гриба S. glycines (рис. 37). Обнаружено, что возбудитель септориоза обладает некоторой ферментативной активностью. Удельная активность каталазы составила 20 х 10-4 ед/мг белка, пероксидазы – 12 х 10-4 ед/мг белка, кислой фосфатазы – 56 х 10-6 ед/мг белка.

Рисунок 37 – Возбудитель септориоза Septoria glycines Hemmi. Syn. (фотоС.А. Титова)

В контрольных (неинфицированных) листьях сои в процессе опыта активность каталазы (в 2,3 – 3,5 раза) и кислой фосфатазы (в 1,4 – 3,5 раза) снижается, а пероксидазы, напротив, увеличивается в 3,3 – 6,0 раза (приложения 22 – 24). Известно, что пероксидаза играет существенную роль в процессе старения, деградация листьев приводит к увеличению активности пероксидазы.

Аналогичная закономерность отмечалась рядом исследователей ранее (Гусев и др., 1982; Lazar, Farkas, 1970; Омельченко, Андреева, 1976), но на других объектах.

Инфицирование листьев септориозом привело к изменению активности ферментов по отношению к контролю. Незначительное увеличение активности пероксидазы у всех изучаемых сортов было зафиксировано на 1 сутки после нанесения инокулюма. Но пик активности приходится на 2 – 3 сутки: в наибольшей степени возрастает активность фермента у дикорастущей сои (в 4 раза), у сортов Гармония и Даурия ~ в 3 раза и 1,9 раза у сорта Соната (рис. 38, приложение 22). По данным корреляционного анализа была установлена взаимосвязь изменения активности пероксидазы в инфицированных листьях (3 сутки) с уровнем устойчивости к септориозу: чем выше активность пероксидазы, тем ниже балл поражения (r = - 0,97 ± 0,02) (приложение 25).

Рисунок 38 – Изменение удельной активности пероксидазы (% к контролю) в листьях G. max и G. soja при инфицировании септориозом, 2008 – 2010 гг.

Второй пик активности пероксидазы в инфицированных листьях сои был зафиксирован на 9 сутки и зависел от степени поражения листа (рис. 38, приложение 22). Наиболее значительное увеличение активности фермента (в 6 раз) было отмечено у сорта Соната, развитие болезни при этом составляло 70%.

Наименьшее повышение пероксидазы по сравнению с контролем наблюдалось у дикорастущей сои, некротические пятна занимают 10% поверхности листа. Сорта Гармония и Даурия, развитие болезни – 20 – 25%, по изменению активности пероксидазы занимают промежуточное положение.

Согласно литературным данным увеличение активности пероксидазы происходит либо за счет повышения активности имеющихся в клетке молекул энзима, либо за счет синтеза фермента de novo (Mader, Walter, 1986). Полученные нами результаты не исключают вероятности, что увеличение активности фермента, по мере развития заболевания, может происходить и за счет пероксидазы, синтезируемой самим грибом S. glycines. Некоторые соображения в пользу такого предположения имеются в литературе (Wong, Preece, 1978). Б.А.

Рубин с соавторами (1973, 1975) считают, что активация пероксидазы в тканях растений, инфицированных грибами, может происходить, во-первых, за счет пероксидазы, синтезируемой самим паразитом, во-вторых, за счет активации имеющихся в клетке изопероксидаз.

Активность каталазы в листьях сои повышается на 1 сутки после заражения, у формы КА-1344 – в 2 раза, у сортов культурной сои – в 1,2 – 1,5 раза относительно контроля (рис. 39, приложение 23).

Рисунок 39 – Изменение удельной активности каталазы (% к контроля) в листьях G. max и G. soja при инфицировании септориозом, 2008 – 2010 гг.

Корреляция между активностью каталазы в инфицированных листьях и их поражаемостью септориозом в этот период была сильной отрицательной r = - 0,96 ± 0,04 (приложение 25). По-видимому, высокая активность каталазы подавляет появление видимых некрозов после инокуляции возбудителем септориоза.

По мере развития заболевания активность каталазы в листьях, пораженных септориозом, снижается у всех исследованных образцов, в большей степени у дикорастущей сои, что приводит к существенному накоплению перекиси водорода в клетке, тем самым создаются неблагоприятные условия для патогена (рис. 39, приложение 23).

Интерес к изучению отдельных групп фосфатаз определяется участием их в обмене углеводов, фосфолипидов, нуклеотидов и других соединений. Эти ферменты обладают гидролитическим и феразным действием, что имеет важное значение в обмене веществ.

У восприимчивого сорта Соната пик активности кислой фосфатазы был зафиксирован на 1 сутки после заражения. У сортов, слабо поражаемых септориозом, активность фермента значительно повышалась только на 3 сутки развития болезни (рис. 40, приложение 24).

Рисунок 40 – Изменение удельной активности кислой фосфатазы (% к контролю) в листьях G. max и G. soja при инфицировании септориозом, 2008 – 2010 гг.

Дальнейшее развитие заболевания приводит к снижению активности кислой фосфатазы: у сорта Соната – в 4 раза, у слабо поражаемых сортов Гармония и Даурия – в 1,7 раза (рис. 40, приложение 24).



Pages:     | 1 | 2 || 4 | 5 |
 

Похожие работы:

«Очиров Джангар Сергеевич НАРУШЕНИЯ МИКРОНУТРИЕНТНОГО СТАТУСА ОВЕЦ И ИХ КОРРЕКЦИЯ ВИТАМИННО-МИНЕРАЛЬНЫМИ КОМПЛЕКСАМИ 06.02.01 – диагностика болезней и терапия животных, патология, онкология и морфология животных ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: доктор ветеринарных...»

«ОВСЯННИКОВ Алексей Юрьевич СЕЗОННАЯ СТРУКТУРНО-ФУНКЦИОНАЛЬНАЯ ТРАНСФОРМАЦИЯ ФОТОСИНТЕТИЧЕСКОГО АППАРАТА ХВОИ PICEA PUNGENS ENGL. И P. OBOVATA LEDEB. НА ТЕРРИТОРИИ БОТАНИЧЕСКОГО САДА УРО РАН (Г. ЕКАТЕРИНБУРГ) 03.02.08 «Экология (в биологии)» диссертация на соискание учёной степени кандидата биологических наук Научный руководитель: доктор биологических наук...»

«СИНЕЛЬЩИКОВА Александра Юрьевна Ночная миграция дроздов рода Turdus в юго-восточной Прибалтике Специальность 03.02.04 – Зоология Диссертация на соискание учёной степени кандидата биологических наук Научный руководитель: доктор биологических наук, профессор, главный научный сотрудник К.В. Большаков Санкт-Петербург Оглавление Введение... 3 Глава 1. Особенности миграции...»

«Петренко Дмитрий Владимирович Влияние производства фосфорных удобрений на содержание стронция в ландшафтах Специальность 03.02.08 экология Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: доктор биологических наук, профессор Белюченко Иван Степанович Москва – 2014 г. Содержание Введение Глава 1.Состояние изученности вопроса и цель работы 1.1 Экологическая...»

«Фирстова Виктория Валерьевна ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНО-ИММУНОЛОГИЧЕСКОЕ ОБОСНОВАНИЕ ВЫБОРА СТРАТЕГИИ ОЦЕНКИ ПОСТВАКЦИНАЛЬНОГО ИММУНИТЕТА ПРОТИВ ЧУМЫ И ТУЛЯРЕМИИ 14.03.09 – Клиническая иммунология, аллергология Диссертация на соискание ученой степени доктора биологических...»

«КОЖАРСКАЯ ГАЛИНА ВАСИЛЬЕВНА КЛИНИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ МАРКЕРОВ КОСТНОГО МЕТАБОЛИЗМА У БОЛЬНЫХ РАКОМ МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ 14.01.12 онкология Диссертация на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Научные руководители: доктор биологических наук, Любимова Н.В. доктор медицинских наук, Портной С.М. Москва, 2015 г....»

«Мануйлов Виктор Александрович Генетическое разнообразие вируса гепатита В в группах коренного населения Сибири 03.01.00 – молекулярная биология Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: член-корр. РАН, профессор, д.б.н. С.В. Нетесов...»

«Ульянова Онега Владимировна МЕТОДОЛОГИЯ ПОВЫШЕНИЯ БЕЗОПАСНОСТИ БАКТЕРИАЛЬНЫХ ВАКЦИН НА МОДЕЛИ ВАКЦИННЫХ ШТАММОВ BRUCELLA ABORTUS 19 BA, FRANCISELLA TULARENSIS 15 НИИЭГ, YERSINIA PESTIS EV НИИЭГ 03.02.03 – микробиология Диссертация на соискание ученой степени доктора биологических наук Научный консультант:...»

«СЕТДЕКОВ РИНАТ АБДУЛХАКОВИЧ РАЗРАБОТКА НОВЫХ СРЕДСТВ СПЕЦИФИЧЕСКОЙ ПРОФИЛАКТИКИ И ЛЕЧЕНИЯ ЭШЕРИХИОЗОВ ТЕЛЯТ И ПОРОСЯТ 06.02.02 – ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология Диссертация на соискание ученой степени доктора ветеринарных наук Научный консультант: доктор ветеринарных наук, профессор, заслуженный деятель науки РФ и РТ Юсупов...»

«УДК 256.18(268.45) ШАВЫКИН АНАТОЛИЙ АЛЕКСАНДРОВИЧ ЭКОЛОГО-ОКЕАНОЛОГИЧЕСКОЕ СОПРОВОЖДЕНИЕ ОСВОЕНИЯ НЕФТЕГАЗОВЫХ МЕСТОРОЖДЕНИЙ АРКТИЧЕСКОГО ШЕЛЬФА (НА ПРИМЕРЕ БАРЕНЦЕВА МОРЯ) Приложения Специальность 25.00.28 «океанология» Диссертация на соискание ученой степени доктора географических наук Мурманск – 2015 ОГЛАВЛЕНИЕ ПРИЛОЖЕНИЕ А...»

«ПОЕДИНОК НАТАЛЬЯ ЛЕОНИДОВНА УДК 602.3:582.282/284:57.086.83]:[681.7.069.24+577.34 БИОТЕХНОЛОГИЧЕСКИЕ ОСНОВЫ ИНТЕНСИФИКАЦИИ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ СЪЕДОБНЫХ И ЛЕКАРСТВЕННЫХ МАКРОМИЦЕТОВ С ПОМОЩЬЮ СВЕТА НИЗКОЙ ИНТЕНСИВНОСТИ 03.00.20 – биотехнология Диссертация на соискание научной степени доктора биологических наук Научный консультант Дудка Ирина...»

«Степина Елена Владимировна ЭКОЛОГО-ФЛОРИСТИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА СТЕПНОЙ РАСТИТЕЛЬНОСТИ ЮГО-ЗАПАДНЫХ РАЙОНОВ САРАТОВСКОЙ ОБЛАСТИ 03.02.08 – экология (биологические науки) Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: доктор...»

«Шинкаренко Андрей Семенович Формирование безопасного и здорового образа жизни школьников на современном этапе развития общества Специальность 13.00.01– общая педагогика, история педагогики и образования Диссертация на соискание ученой степени кандидата педагогических наук Научные...»

«БРИТАНОВ Николай Григорьевич ГИГИЕНИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ ПЕРЕПРОФИЛИРОВАНИЯ ИЛИ ЛИКВИДАЦИИ ОБЪЕКТОВ ПО ХРАНЕНИЮ И УНИЧТОЖЕНИЮ ХИМИЧЕСКОГО ОРУЖИЯ 14.02.01 Гигиена Диссертация на соискание ученой степени доктора медицинских наук Научный консультант: доктор медицинских наук, профессор...»

«АУЖАНОВА АСАРГУЛЬ ДЮСЕМБАЕВНА ОЦЕНКА ДЕЙСТВИЯ АБИОТИЧЕСКИХ ФАКТОРОВ И БИОПРЕПАРАТА РИЗОАГРИН НА МИКРОБИОЛОГИЧЕСКУЮ АКТИВНОСТЬ ПОЧВЫ, АДАПТИВНОСТЬ И ПРОДУКТИВНОСТЬ ЯРОВОЙ МЯГКОЙ ПШЕНИЦЫ 03.02.08 – Экология Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: доктор...»

«Моторыкина Татьяна Николаевна ЛАПЧАТКИ (РОД POTENTILLA L., ROSACEAE) ФЛОРЫ ПРИАМУРЬЯ И ПРИМОРЬЯ 03.02.01 – Ботаника Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: доктор биологических наук, старший научный сотрудник Н.С. Пробатова Хабаровск Содержание Введение... Глава 1. Природные...»

«Платонова Ирина Александровна ПОСТПИРОГЕННАЯ ТРАНСФОРМАЦИЯ НАДЗЕМНОЙ ФИТОМАССЫ В СОСНЯКАХ СЕЛЕНГИНСКОГО СРЕДНЕГОРЬЯ Специальность 06.03.02 – Лесоведение и лесоводство, лесоустройство и лесная таксация ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: д.б.н., с.н.с. Г.А. Иванова Красноярск – 2015...»

«Сухарьков Андрей Юрьевич РАЗРАБОТКА МЕТОДОВ ОЦЕНКИ ОРАЛЬНОЙ АНТИРАБИЧЕСКОЙ ВАКЦИНАЦИИ ЖИВОТНЫХ 03.02.02 «Вирусология» Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: кандидат ветеринарных наук, Метлин Артем Евгеньевич Владимир 2014 ОГЛАВЛЕНИЕ 1 ВВЕДЕНИЕ 2 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 2.1 Характеристика возбудителя бешенства 2.2 Эпизоотологические...»

«Киселева Ирина Анатольевна СПЕЦИАЛИЗИРОВАННЫЙ ПРОДУКТ ДИЕТИЧЕСКОГО ПРОФИЛАКТИЧЕСКОГО ПИТАНИЯ НА ОСНОВЕ КОКТЕЙЛЯ БАКТЕРИОФАГОВ: КОНСТРУИРОВАНИЕ, ТЕХНОЛОГИЯ ПРОИЗВОДСТВА, ОЦЕНКА БЕЗОПАСНОСТИ И ЭФФЕКТИВНОСТИ ПРИМЕНЕНИЯ 03.01.06 – биотехнология (в том числе...»

«ГУЛЬ ШАХ ШАХ МАХМУД БИОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ ЦИТРУСОВОЙ МИНУРУЮЩЕЙ МОЛИ (Phyllocnistis citrella Stainton) В УСЛОВИЯХ ЮГО-ВОСТОЧНОГО АФГАНИСТАНА Специальность 06.01.07 – Защита растений ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени кандидата сельскохозяйственных наук НАУЧНЫЙ РУКОВОДИТЕЛЬ: доктор с.-х. наук, профессор КАХАРОВ К.Х. Душанбе, 2015 СОДЕРЖАНИЕ ВВЕДЕНИЕ..4 ГЛАВА I. СОВРЕМЕННОЕ СОСТОЯНИЕ ПРОБЛЕМЫ...»







 
2016 www.konf.x-pdf.ru - «Бесплатная электронная библиотека - Авторефераты, диссертации, конференции»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.