WWW.KONF.X-PDF.RU
БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА - Авторефераты, диссертации, конференции
 


Pages:   || 2 | 3 | 4 | 5 |

«ОПТИМИЗАЦИЯ ИСХОДОВ ПРОГРАММ ВСПОМОГАТЕЛЬНЫХ РЕПРОДУКТИВНЫХ ТЕХНОЛОГИЙ У СУПРУЖЕСКИХ ПАР С ПОВЫШЕННЫМ УРОВНЕМ АНЕУПЛОИДИИ В СПЕРМАТОЗОИДАХ ...»

-- [ Страница 1 ] --

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ

РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

федеральное государственное бюджетное учреждение

«НАУЧНЫЙ ЦЕНТР АКУШЕРСТВА, ГИНЕКОЛОГИИ

И ПЕРИНАТОЛОГИИ ИМЕНИ АКАДЕМИКА В.И. КУЛАКОВА»

На правах рукописи

СОКУР

Светлана Александровна

ОПТИМИЗАЦИЯ ИСХОДОВ ПРОГРАММ ВСПОМОГАТЕЛЬНЫХ

РЕПРОДУКТИВНЫХ ТЕХНОЛОГИЙ У СУПРУЖЕСКИХ ПАР

С ПОВЫШЕННЫМ УРОВНЕМ АНЕУПЛОИДИИ

В СПЕРМАТОЗОИДАХ

14.01.01- акушерство и гинекология Диссертация на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Научные руководители:

доктор медицинских наук Долгушина Н.В.

доктор биологических наук Глинкина Ж.И.

Москва - 2015

ОГЛАВЛЕНИЕ

ВВЕДЕНИЕ ……………………………………………………………………………4 Глава 1. Современные методы лечения бесплодия и профилактики врожденных и наследственных заболеваний у супружеских пар с повышенным уровнем анеуплоидии в сперматозоидах (обзор литературы)……………………………………...........……………………………...10

1.1. Основные причины бесплодия...…………………………………………10

1.2. Роль мужского фактора в развитии бесплодия ……………………….…14

1.3. Генетические факторы мужского бесплодия

Взаимосвязь патозооспермии и анеуплоидии хромосом в 1.4.

сперматозоидах и эмбрионах у пациентов программ ВРТ...…...…................21

1.5. Профилактика врожденной и наследственной патологии плода у супружеских пар с нарушением репродуктивной функции.….…..................25

1.6. Риск анеуплоидии эмбрионов в программах ВРТ у супружеских пар с патозооспермией (мета-анализ)...……………………………………………..35 Глава 2. Материалы и методы исследования…………………...…… ……….48

2.1. Дизайн исследования……………..…………………………………….....49

2.2. Расчет объема выборки……………………………………………………5

2.3. Методы исследования

2.3.1. Общеклинические методы исследования………….…………....56 2.3.2. Ультразвуковое исследование органов малого таза……………57 2.3.3. Гормональное исследование……………………………………..58 2.3.4. Исследование эякулята…….…………………………………......58 2.3.5.Молекулярно-цитогенетическое исследование сперматозоидов …………………………………………………………………………….59 2.3.6. Преимплантационный генетический скрининг………………...61 функции яичников и трансвагинальная пункция

2.4.Стимуляция яичников

2.5. Оплодотворение и культивирование эмбрионов in vitro…….………….64

2.6. Перенос эмбрионов в полость матки и посттрансферный период……..65

2.7. Статистический анализ полученных данных…………………………...66 Глава 3. Исходы программ вспомогательных репродуктивных технологий у супружеских пар с различными видами патозооспермии…………...……….68 Клинико-анамнестическая характеристика супружеских пар, 3.1.

включенных в исследование………..…………………………………………68

3.2. Клинико-лабораторное обследование супружеских пар, включенных в исследование……………………………………………………………………74

3.3. Характеристика оогенеза, раннего эмбриогенеза и исходов программ ВРТ у супружеских пар, включенных в исследование………………………77 Глава 4. Влияние уровня анеуплоидии хромосом в сперматозоидах на развитие анеуплоидии эмбрионов и исходы программ вспомогательных репродуктивных технологий……………………………………………………….83

4.1. Клинико-анамнестическая характеристика супружеских пар, включенных в исследование………………………..…………………………83

4.2. Клинико-лабораторное обследование супружеских пар, включенных в исследование……………………………………………………………………89

4.3. Характеристика оогенеза, раннего эмбриогенеза и исходов программ ВРТ у супружеских пар, включенных в исследование……………………....91

4.4. Преимплантационный генетический скрининг у супружеских пар с патозооспермией: анализ затраты – эффективность………………………..99 4.4.1. Клинико-экономический анализ эффективности ПГС для общей популяции пар, страдающих бесплодием…………………………….104 4.4.2. Клинико-экономический анализ эффективности ПГС для пар с патозооспермией………….…………………….……………………...108 Глава Обсуждение полученных результатов. Заключение.

5.

……………………………………………………………………..……………….....112 ВЫВОДЫ…………………………………………………………………………… 123 ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ …..………………………………………..124 СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ И УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ.……………….....126 СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ…………………………………………………………...130

ВВЕДЕНИЕ

–  –  –

Преимплантационная генетическая диагностика (ПГД) изначально была разработана для диагностики нарушений у потомства пар с моногенными заболеваниями, такими как муковисцидоз, или заболеваниями, сцепленными с полом, такими как мышечная дистрофия. В дальнейшем эта методика стала применяться для диагностики различных видов анеуплоидии у эмбрионов.

Известно, что при беременности эмбрионом с анеуплоидией повышается риск невынашивания беременности, мертворождений или рождения детей с хромосомными нарушениями, такими, как синдром Дауна. При проведении экстракорпорального оплодотворения (ЭКО) и переноса в полость матки эмбриона (ПЭ) с анеуплоидией наблюдается более высокий риск неудач ЭКО.

Поэтому, в клинической практике ПГД часто рекомендуется парам с повышенным риском возникновения врождённых аномалий у потомства, которые не связаны с носительством известных мутаций. К таким парам относятся те, у которых возраст матери превышает 35 лет, имеются указания на множественные неудачные попытки ЭКО, или привычное невынашивание беременности в анамнезе. В этом случае эта диагностическая методика носит название преимплантационного генетического скрининга (ПГС).

На протяжении многих лет считалось, что бесплодие в большей степени связано с проблемами в репродуктивной системе женщины. Однако исследования последних лет доказали, что мужской фактор занимает 40-50% в структуре причин бесплодия [1][2]. Мужской фактор бесплодия может проявляться множеством различных нарушений, вызывающих изменение числа сперматозоидов, их морфологии, генетики и функции. Внедрение метода интрацитоплазматической инъекции сперматозоида в ооцит (ИКСИ) произвело революцию во вспомогательных репродуктивных технологиях (ВРТ) и в значительной степени стимулировало поиск причин мужского бесплодия. Было выявлено, что при наличии различных видов патозооспермии (олигозооспермии (ОЗС), астенозооспермии (АЗС), тератозооспермии (ТЗС)) увеличивается риск анеуплоидии хромосом в сперматозоидах В результате [3][4][5][6].

оплодотворения яйцеклетки генетически неполноценным сперматозоидом может образоваться анеуплоидный эмбрион, и, следовательно, родиться ребенок с генетическими нарушениями. По данным литературы, у мужчин с повышенной частотой хромосомных аномалий в половых клетках чаще, чем в популяции, наблюдается возникновение хромосомных аномалий у потомства [7][8]. В настоящее время во многих клиниках ЭКО мужчин с изменениями в молекулярно-цитогенетическом анализе ядер сперматозоидов методом флюоресцентной in situ гибридизации (FISH) относят к группе риска по рождению детей с генетическими отклонениями. ПГС у пар с патозооспермией может способствовать отбору эмбрионов без генетической патологии, что в клинической практике ВРТ приведет к увеличению частоты наступления беременности, уменьшению её потерь и снижению риска рождения детей с генетической патологией [9][10].

Цель исследования

Целью исследования является повышение эффективности программ вспомогательных репродуктивных технологий у супружеских пар с патозооспермией на основании изучения уровня анеуплоидии в сперматозоидах и клинико-экономического анализа эффективности преимплантационного генетического скрининга.

Задачи исследования

Провести анализ исходов программ ВРТ у супружеских пар с 1.

различными видами патозооспермии с учетом параметров оогенеза, раннего эмбриогенеза и клинико-лабораторных данных пациенток.

Определить частоту, уровень и типы анеуплоидии в сперматозоидах у 2.

супружеских пар с различными видами патозооспермии в программах ВРТ.

Оценить эффективность программ ВРТ у супружеских пар с 3.

патозооспермией в зависимости от уровня анеуплоидии в сперматозоидах.

Определить частоту различных типов анеуплоидии хромосом 13, 18, 4.

21, X, Y в ядрах бластомеров в зависимости от уровня анеуплоидии в сперматозоидах.

Оценить эффективность преимплантационного генетического 5.

скрининга в исходах программ ВРТ у супружеских пар с патозооспермией и повышенным уровнем анеуплоидии в сперматозоидах.

Провести анализ клинико-экономической эффективности 6.

преимплантационного генетического скрининга в реализации программ ВРТ у супружеских пар с патозооспермией.

Научная новизна

В ходе проведения исследования были получены следующие новые знания:

Была исследована зависимость уровня анеуплоидии в сперматозоидах от параметров спермограммы и установлен пороговый уровень анеуплоидии в сперматозоидах, влияющий на эффективность программ ВРТ.

Была проведена оценка влияния различных видов патозооспермии на параметры эмбриогенеза, уровень анеуплоидии в ядрах бластомеров и исходы программ ВРТ в зависимости от уровня анеуплоидии в сперматозоидах.

Была изучена эффективность, в том числе клинико-экономическая эффективность, преимплантационного генетического скрининга в реализации программ ВРТ у пациентов с повышенным уровнем анеуплоидии в мужских половых клетках.

Практическая значимость

В результате проведенного исследования были выявлены виды патозооспермии, а также порог уровня анеуплоидии в сперматозоидах, влияющие на эффективность программ ВРТ, которые могут быть использованы в качестве диагностических и прогностических критериев на этапе подготовки к программе ВРТ у супружеских пар с бесплодием, обусловленным мужским фактором.

Был проведен анализ затраты - эффективность преимплантационного генетического скрининга методом FISH у супружеских пар с патозооспермией, что послужило обоснованием его применения в изучаемой группе пациентов с учетом клинической и экономической составляющих.

Положения, выносимые на защиту

Патозооспермия (тератозооспермия и олигоастенозооспермия) 1.

способствует повышенному риску неудачных исходов программ ВРТ. Одной из причин подобных исходов может быть повышенный уровень анеуплодии хромосом в сперматозоидах (свыше 0,6%).

У пар с патозооспермией и повышенным уровнем анеуплоидии в 2.

сперматозоидах получение и перенос эмбрионов с различными видами анеуплоидий осуществляется в 2,3 раза чаще. Проведение преимплантационного генетического скрининга методом FISH в этой группе пациентов увеличивает эффективность программ ВРТ в 5,25 раза, что объясняется переносом в полость матки эуплоидных по 13, 18, 21, X и Y хромосомам эмбрионов.

Клинико-экономическая эффективность преимплантационного 3.

генетического скрининга методом FISH в лечении бесплодия супружеских пар с патозооспермией, являющихся пациентами высокого риска по рождению детей с генетической патологией, может быть достигнута путем снижения стоимости ПГС на 33%.

Личный вклад автора

Автор участвовал в выборе темы научной работы, разработке цели и задач исследования, в проведении и интерпретации результатов молекулярноцитогенетических исследований, в обобщении и статистической обработке полученных данных. Автором лично осуществлялось обследование и ведение супружеских пар на всех этапах лечения бесплодия методом ЭКО.

Соответствие диссертации паспорту научной специальности

Научные положения диссертации соответствуют формуле специальности 14.01.01 – «акушерство и гинекология». Результаты проведенного исследования соответствуют области исследования специальности, конкретно пунктам 4 и 5 паспорта акушерства и гинекологии.

–  –  –

Основные положения работы доложены на ХIII Всероссийском форуме «Мать и дитя» (Москва, 2012) и ХIV Всероссийском форуме «Мать и дитя»

(Москва, 2013).

Работа доложена на заседании апробационной комиссии ФГБУ «НЦАГиП им. В.И. Кулакова» Минздрава России 9 июля 2014 г.

–  –  –

Результаты исследования внедрены и используются в практической работе отделения вспомогательных технологий в лечении бесплодия (заведующий д.м.н. Калинина Е.А.) и лаборатории репродуктивной генетики (заведующий д.м.н. профессор Бахарев В.А.) ФГБУ «НЦАГиП им. В.И. Кулакова» Минздрава России (директор академик РАН Сухих Г.Т.). Материалы и результаты исследования включены в лекции и практические занятия для клинических ординаторов и аспирантов ФГБУ «НЦАГиП им. В.И. Кулакова» Минздрава России.

Результаты исследования изложены в 12 печатных работах, из которых 9 напечатаны в рецензируемых научных журналах, рекомендуемых ВАК: в одной обзорной статье, одном систематическом обзоре с проведением мета-анализа, одном описании клинического случая и шести оригинальных статьях, опубликованных в журналах «Акушерство и гинекология» (импакт-фактор 0,621) и «Гинекология» (импакт-фактор 0,576).

Структура и объем диссертации

Диссертация изложена в традиционной форме. Состоит из оглавления, списка принятых сокращений, введения, обзора литературы, глав собственных исследований, обсуждения полученных результатов, выводов, практических рекомендаций и списка литературы. Работа представлена на 146 страницах машинописного текста, иллюстрирована 19 рисунками и 32 таблицами.

Библиографический указатель включает 26 работ на русском языке и 137 работ на английском языке.

Глава 1. Современные методы лечения бесплодия и профилактики врожденных и наследственных заболеваний у супружеских пар с повышенным уровнем анеуплоидии в сперматозоидах (обзор литературы)

–  –  –

В мире 8-15% супружеских пар репродуктивного возраста страдают от бесплодия [11] [12]. По данным Всемирной организации здравоохранения (ВОЗ) бесплодие относится к болезням и занимает пятое место в списке умеренных и тяжелых форм инвалидности [13]. Бесплодием называется неспособность сексуально активной, не использующей контрацепцию пары добиться беременности в течение одного года регулярной половой жизни [14]. Отмечается примерно равное соотношение случаев бесплодия среди мужчин и женщин (примерно по 40% для мужского и женского фактора бесплодия). Наличие бесплодия у обоих супругов встречается в 10-20% случаев [15]. В международной классификации болезней десятого пересмотра (МКБ-10) выделяют следующие формы женского бесплодия:

-женское бесплодие, связанное с отсутствием овуляции;

-женское бесплодие трубного происхождения;

-женское бесплодие маточного происхождения;

-женское бесплодие цервикального происхождения;

-женское бесплодие, связанное с мужским фактором;

-другие формы женского бесплодия;

-женское бесплодие неуточненное [16].

По данным ВОЗ к перечню причин нарушений репродуктивной функции относятся также психосексуальные расстройства, эндометриоз, отрицательный посткоитальный тест, системные причины и туберкулез половых органов [17].

К основным причинам нарушения фертильности у мужчин относят:

-инфекционно-воспалительные заболевания гениталий;

-варикоцеле;

-врожденные аномалии развития (крипторхизм, монорхизм, гипо- и эписпадия);

-эндокринные нарушения;

-иммунологическое бесплодие;

вмешательства по поводу гидроцеле, паховой грыжи,

-хирургические стриктуры уретры и др.;

-генетические аномалии;

-психосексуальные расстройства;

заболевания: цирроз печени, сахарный диабет, туберкулез,

-системные инфекционный паротит, осложненный орхитом и др.

В ФГБУ «НЦАГиП им. В.И. Кулакова» Минздрава России было проведено исследование, в котором была изучена структура бесплодия у 2785 мужчин. На первом месте среди причин мужского бесплодия стояли инфекционные заболевания гениталий (22,1%), на втором - варикоцеле (14,9%), на третьем – эндокринопатии (14,8%). Идиопатическое бесплодие составило 22,8% [18].

В настоящее время для пар, проходящих лечение бесплодия, шансы стать родителями достаточно высоки. В мире частота живорождений, связанная с применением методов ВРТ, на 1 индуцированный цикл составляет от 22% до 49% [19] [20]. Этот показатель может возрастать на 15% с увеличением количества циклов ЭКО [21]. В 2014 году в журнале «Fertility and Sterility» был опубликован отчет международного комитета по мониторингу ВРТ. Всего за 2005 год в 53 странах мира было произведено 1’052’363 процедуры ВРТ, и, в результате, родилось 237’315 детей. Причем в 62,9% случаев в лечебном цикле использовалась процедура ИКСИ [22]. По данным Европейской ассоциации репродуктологов за 2009 год в европейских странах было произведено 399 тысяч циклов ВРТ. Авторы отмечают тенденцию к росту количества циклов ЭКО за 2009 год по сравнению с предыдущими годами [23].

Методы ВРТ охватывают все виды лечения бесплодия и включают:

-искусственную инсеминацию спермой мужа (партнера) или донора;

-ЭКО и перенос «свежих» или криоконсервированных эмбрионов в полость матки;

- ИКСИ (от англ. ICSI – Intra Cytoplasmic Sperm Injection);

-донорские программы (донорство спермы, донорство ооцитов) и суррогатное материнство;

-преимплантационную генетическую диагностику (ПГД) и преимплантационный генетический скрининг (ПГС) наследственных болезней и анеуплоидий de novo [24].

В литературе рассматриваются различные причины возможных неудач в программах ВРТ, среди них наиболее часто обсуждается «бедный» ответ яичников на стимуляцию суперовуляции, генетические аномалии у эмбриона, патология эндометрия, иммунологические факторы, плохое качество полученных гамет/эмбрионов, наличие тромбофилии, эндометриоза, и др. Одной из причин неудач циклов ВРТ может являться возраст женщины старше 40 лет, так как у большинства пациенток этой возрастной группы значительно снижен овариальный резерв и, следовательно, характерен «бедный» ответ яичников на стимуляцию суперовуляции. Известно, что измерение в сыворотке крови концентрации антимюллерова гормона (АМГ) является на сегодняшний день самым точным методом для определения овариального резерва у женщин [25].

Концентрация этого гормона в крови с возрастом уменьшается, так как уменьшается количество преантральных и антральных фолликулов. Женщины с низким уровнем АМГ склонны к плохому ответу на стимуляцию и, следовательно, к неудовлетворительным результатам циклов ВРТ. В разных исследованиях пороговый уровень АМГ, при котором можно предполагать «бедный» ответ, колеблется от 0,99 до 1,40 нг/мл [26] [27][28][29]. Таким пациенткам должны быть предложены другие варианты лечения, в том числе донация ооцитов.

Основное влияние на частоту имплантации оказывает качество эмбрионов.

На протяжении последних десятилетий многочисленные усилия были направлены на улучшение результативности ВРТ путем оптимизации условий культивирования эмбрионов. Это было достигнуто путем увеличения времени культивирования эмбрионов до стадии бластоцисты, морфологической оценки качества эмбрионов методом time lapse (непрерывная фотосъемка развития эмбриона до переноса в полость матки), улучшения культуральных сред, внедрения ПГД и ПГС. Качество эмбрионов напрямую зависит от качества гамет, участвующих в оплодотворении. В систематическом обзоре, опубликованном в 2011 году канадскими авторами, говорится о влиянии фрагментированной ДНК сперматозоидов на качество эмбрионов. Авторами было проанализировано 28 исследований (8 ЭКО, 12 ИКСИ и 8 смешанных ЭКО и/или ИКСИ циклов).

Результаты оказались вариабельными в разных группах. В 11 из 28 исследований (1/8 ЭКО, 5/12 ИКСИ, и 5/8 смешанных ЭКО/ИКСИ циклов) фрагментация ДНК сперматозоидов влияла на плохое качество эмбрионов, в то время как в 17 исследованиях такой связи выявлено не было. В исследованиях, в которых пациентам проводилось ИКСИ, практически в 50% случаев было показано отрицательное влияние фрагментированной ДНК на качество эмбрионов.

Значительную разницу в результатах исследований при применении ЭКО или ИКСИ авторы объясняют заведомо более плохим качеством спермы (в том числе целостности ДНК) в образцах, предназначенных для ИКСИ. Также ученые предполагают, что отсутствие влияния фрагментации ДНК сперматозоидов на качество эмбрионов в ряде случаев может быть результатом репарации ДНК сперматозоидов в яйцеклетке, которая возможна только во время естественного отбора в циклах ЭКО, но не ИКСИ [30].

Качество ооцитов непосредственно влияет на формирование эмбрионов и результативность циклов ЭКО. Идеальный зрелый ооцит должен иметь однородную цитоплазму, одно полярное тельце, адекватную толщину блестящей оболочки и перивителлинового пространства [31]. В ряде исследований была выявлена отрицательная корреляция между наличием некоторых дисморфизмов ооцитов, скоростью оплодотворения и качеством полученных эмбрионов [32].

Cheng B., с соавторами (2013) опубликовали данные своего исследования о влиянии длины теломеры кумулюсных клеток ооцита на качество эмбрионов.

Согласно их данным длина теломеры кумулюсных клеток была больше в зрелых ооцитах и эмбрионах хорошего качества.

Также к факторам, увеличивающим риск неудачной имплантации, можно отнести патологию эндометрия и миометрия (полипы эндометрия, хронический эндометрит, синехии полости матки, аденомиоз, миома матки). У человека имплантация эмбриона происходит в середине секреторной фазы менструального цикла. Период с 19 по 23 день цикла называют «окном имплантации». От синхронизации процессов между развивающимся эмбрионом и рядом молекулярных и клеточных преобразований в эндометрии во время «окна имплантации» зависит успех имплантации [33]. Малейший дисбаланс в каждом из этих звеньев может привести к патологическому состоянию в эндометрии и последующему бесплодию или невынашиванию беременности [34].

1.2. Мужской фактор бесплодия

На протяжении многих лет бесплодие в большей степени связывали с нарушениями в репродуктивной системе женщины. Однако в исследованиях последних лет было показано, что мужской фактор занимает 40-50% в структуре причин бесплодия [1][2]. Многие исследователи отмечают ухудшение параметров мужской спермы за последние десятилетия. Уже в конце 90-х годов некоторые ученые отмечали снижение показателей активности сперматогенеза, на что указывает исследование Carlsen Е., с соавторами (1992), в котором в период с 1938 г. по 1990 г. были оценены качественные и количественные показатели спермограммы у 14947 здоровых мужчин из разных стран мира в возрасте от 17 до 64 лет [35]. С помощью линейного регрессионного анализа было установлено, что концентрация сперматозоидов за указанный период времени снизилась с 113 млн/мл до 66 млн/мл (в 1,7 раз), а объем эякулята - с 3,4 до 2,75 мл. Схожие данные были получены в исследовании Swan SH., с соавторами [36]. Однако вопрос ухудшения качества спермы за последние десятилетия является спорным.

Ответом на него могут быть принятые в последнее время более строгие критерии оценки качества спермы [37].

В современных условиях возросло влияние неблагоприятных факторов окружающей среды на репродуктивную систему женщин и мужчин. Авторы книги «Andrology for the Clinician» выделяют следующие факторы, негативно влияющие на мужскую фертильность: курение, употребление алкоголя и наркотиков, посещение сауны, ожирение, стресс [38]. В недавнем исследовании иранских коллег было доказано отрицательное влияние электромагнитного поля на репродуктивную функцию.

В исследуемой группе мужчин даже непродолжительное воздействие электромагнитного излучения значительно снижало подвижность сперматозоидов [39]. Аналогичные данные были получены в американском исследовании, в котором изучалось влияние Wi-Fi на репродуктивную функцию мужчин. Исследователи отметили увеличение фрагментации ДНК в сперматозоидах у мужчин, подвергшихся электромагнитному излучению [40]. В ряде исследований оценивалось влияние курения на репродуктивную функцию. В группе курящих мужчин концентрация сперматозоидов была на 19% ниже, чем у некурящих, а количество выкуренных сигарет обратно коррелировало с количеством активно подвижных сперматозоидов [41] [42]. У курильщиков также отмечается увеличение уровня фрагментации ДНК в половых клетках [43]. В опубликованном в 2009 году метаанализе оценивалось влияние курения на отдаленные результаты циклов ВРТ.

Жены курящих мужчин значительно реже имели беременности и живых детей, а частота спонтанных абортов была в 2,6 раз выше по сравнению с группой некурящих пациентов [44].

По мнению японских авторов высокий индекс массы тела (ИМТ) является фактором, повышающим риск развития бесплодия [45]. В исследовании 483 супружеских пар не было выявлено зависимости между высоким ИМТ и концентрацией, подвижностью и морфологией сперматозоидов, однако мужчины с ожирением имели повышенный уровень повреждения ДНК в сперматозоидах и более низкий уровень ингибина В, и андрогенов [46]. Таким образом, наблюдаемая тенденция к ухудшению репродуктивного здоровья мужчин является доказательством негативного влияния различных факторов на организм человека. Поэтому отказ от «вредных» привычек, коррекция образа жизни, минимизация воздействия вредных факторов окружающей среды являются приоритетными для оздоровления мужского населения.

Сперматогенез - это непрерывный процесс образования и созревания мужских половых клеток в семенных канальцах. В течение жизни у мужчины созревают сотни миллиардов сперматозоидов. Согласно рекомендациям ВОЗ 2010 года образец спермы считается нормальным, если он соответствует следующим критериям: объем эякулята 1,5 мл и более, общее количество сперматозоидов 39 млн. и более, концентрация сперматозоидов 15 млн. и более в 1 мл эякулята, общая подвижность сперматозоидов 40% и более, наличие сперматозоидов с прогрессивным движением 32% и более, наличие сперматозоидов с нормальной морфологией не менее 4% [47]. К нарушениям сперматогенеза относятся азооспермия, олигозооспермия, астенозооспермия, тератозооспермия и их различные сочетания. По номенклатуре ВОЗ при азооспермии отсутствуют сперматозоиды в эякуляте, при ОЗС снижен показатель концентрации сперматозоидов менее 15 млн/мл. К АЗС относятся нарушения сперматогенеза, при которых общая подвижность сперматозоидов составляет менее 40%, а подвижность сперматозоидов с прогрессивным движением становится менее 32%.

При ТЗС менее 4% сперматозоидов имеют нормальную морфологию.

Эффективность программ ВРТ может различаться в зависимости от вида патозооспермии. В литературе существуют противоречивые данные о преимущественно негативном влиянии того или иного вида патозооспермии на исходы программ ВРТ. Например, в ряде работ были получены данные о важной роли ТЗС в неудачах ЭКО [7] [48]. Другие исследователи подчеркивают, что ОЗС и АЗС в большей степени, чем ТЗС, влияют на исходы программ ВРТ вследствие выявленного повышенного уровня анеуплоидии хромосом в сперматозоидах в этой группе мужчин [49] [50].

1.3. Генетические факторы мужского бесплодия

В настоящее время уделяется большое внимание изучению молекулярных и генетических факторов, лежащих в основе причин мужского бесплодия. Известно, что среди мужчин с нарушением репродуктивной функции процент хромосомной патологии выше, чем среди здоровых мужчин. Хромосомные нарушения у этой категории пациентов составляют 5-15%, при этом аномалии гоносом встречаются примерно в 70%, аномалии аутосом - в 30% наблюдений [51] [52].

При исследовании 4659 китайских мужчин, страдающих бесплодием, хромосомная патология была выявлена в 8,84% наблюдений: нарушения в комплексе гоносом были обнаружены в 6,74% случаев, в 2,1% случаев была выявлена патология аутосом. Следует отметить, что при этом числовые аномалии хромосом превалировали над структурными, их доля составила 63% [53]. Хромосомные нарушения среди фертильных мужчин встречаются значительно реже, их распространенность составляет по данным литературы 0,37% [54].

В настоящее время известно около 2000 генов, вовлеченных в процесс сперматогенеза. Эти гены контролируют процессы пролиферации сперматогониев, их мейотическое деление и сперматогенез в целом [55]. Можно выделить несколько групп генов, которые непосредственно участвуют в процессе сперматогенеза. Среди генов, специфически участвующих в сперматогенезе, можно выделить несколько основных групп.

К первой группе относятся гены, участвующие в развитии мужской репродуктивной системы и в половой дифференцировке (SRY, SOX9, WT1, Bcl-2 и др.) [55]. Клиническим примером такого нарушения является синдром де ля Шапелля (кариотип 46,ХХ при мужском фенотипе). У большенства таких пациентов фрагмент хромосомы Y, содержащий ген SRY (sex determining region Y), транслоцирован на одну из соматических хромосом. Мутации в этом гене сопровождаются широким диапазоном клинических и фенотипических проявлений — от полной реверсии пола до недоразвития мужских гонад [56] [57].

Аномалии развития Вольфового протока чаще всего связывают с нарушением трансмембранного регуляторного белка муковисцидоза CFTR (Cystic Fibrosis Transmembrane Conductance Regulator). Мутации гена CFTR, кодирующего этот белок, не влияют на процессы в самом яичке, и сперматогенез у таких пациентов практически не нарушен [58].

Во вторую группу включают гены, обеспечивающие эндокринную регуляцию. Причиной угнетения сперматогенеза и мужского бесплодия может быть нарушение секреции или действия гормонов. При синдроме Кальмана, связанного с нарушением гена KALIG-1, локализованного на коротком плече Ххромосомы (Хр22.3), отмечается снижению уровня секреции гонадотропинрилизинг гормона (ГнРГ) При синдроме Прадера–Вилли — болезни [59].

геномного импринтинга, вызванной отсутствием отцовского локуса на хромосоме 15 (15q11-q13), отмечается ожирение, умственная отсталость, аномалии половых органов и бесплодие.

Третью группу составляют гены, вовлеченные в процесс сперматогенеза. К ним относятся гены, локализованные в локусах AZF на длинном плече Yхромосомы. Выделяют три основных локуса: AZFа, AZFb и AZFc. Делеции в локусе AZFа и AZFb чаще всего приводят к полному отсутствию сперматогониев.

При этом в сперматогенной ткани присутствуют только клетки Сертоли. У пациентов с делецией в локусе AZFс могут быть единичные сперматозоиды в эякуляте (олигозооспермия), либо полное отсутствие сперматогенных клеток (азооспермия) [60].

К четвертой группе можно отнести гены, обеспечивающие функционирование сперматозоидов и оплодотворение. Например, мутация гена Фертилина приводит к нарушению связывания сперматозоида с мембраной ооцита и невозможности оплодотворения.

Часто изменения числа хромосом в кариотипе или в отдельных клетках сопряжены с бесплодием. Хромосомные аномалии подразделяются на геномные (числовые) и структурные. Структурные перестройки могут сопровождаться дисбалансом генетического материала в пределах одной или нескольких хромосом (транслокации, инсерции, дупликации, инверсии и др.). Генетически сбалансированные хромосомные аберрации, как правило, не изменяют фенотип носителя. Однако их наличие приводит к нарушению процессов мейоза и, как следствие этого, к образованию гамет с несбалансированными хромосомными аберрациями (делециями и дупликациями) и зигот с частичной моно- или трисомией по соответствующим участкам хромосом [61]. В результате хромосомных транслокаций возможно формирование гамет с несбалансированным хромосомным набором. Таким образом, у пациентов в процессе оплодотворения возможна передача хромосомной патологии посредством гамет, что может привести к самопроизвольному прерыванию беременности, развитию аномалий у плода и мертворождению. Числовые изменения хромосом могут быть либо кратными гаплоидному набору, либо некратными ему. У человека такие изменения могут быть представлены в виде триплоидии (3n = 69), либо различных вариантах анеуплоидии.

Анеуплоидия - это некратное гаплоидному набору изменение числа хромосом в клетках организма за счет потери или добавления отдельных хромосом. В зависимости от типа хромосом выделяют анеуплоидию гоносом и аутосом. В зависимости от числа привлеченных хромосом анеуплоидию можно разделить на нуллисомию при отсутствии пары гомологичных хромосом, моносомию при отсутствии одной из пары гомологичных хромосом, трисомию при наличии добавочной хромосомы. Для половых хромосом у человека также описаны случаи тетрасомии и пентасомии и их мозаичные варианты. Самой распространенной патологией половых хромосом у мужчин с бесплодием является синдром Клайнфельтера (47,XXY, 48,XXXY, мозаицизм). Этот синдром выявляется с частотой 1: 500 [62].

В основе возникновения анеуплоидии лежит нарушение сегрегации хромосом в митозе или в мейозе. Нерасхождение хромосом приводит к образованию дочерних клеток с анеуплоидией вследствие сегрегации обеих гомологичных хромосом (хроматид) к одному полюсу в анафазе клеточного деления (истинное нерасхождение).

Предделение – это преждевременное разделение центромер. Предделение мейотических хромосом (бивалентов), как правило, сопровождается образованием унивалентов. Сегрегация унивалентов к разным полюсам регистрируется как нормальная сегрегация, к одному полюсу - как нерасхождение. Разъединение сестринских хроматид в центромерном районе одной из Х-хромосом — относительно частое явление, наблюдаемое в отдельных 47,ХХХ лимфоцитах периферической крови у женщин с привычным невынашиванием [63].

Запаздывание хромосом (anaphase lagging) - это полное отсутствие или замедленное относительно остальных хромосом движение хромосомы (или хроматиды) в анафазе, обусловленное нарушением ее ориентации. По-видимому, ведущую роль в этом механизме играют нарушения микротрубочек веретена деления, формирования и функций кинетохоры — части центромеры, ответственной за прикрепление микротрубочек митотического веретена [64] [65].

Обычно запаздывающие хромосомы элиминируются или образуют микроядра, что сопровождается моносомией при митотических делениях или приводит к гипогаплоидии при мейотических делениях [63] (Рисунок 1).

–  –  –

II деление мейоза Нормальная сегрегация Истинное Нерасхождение М II Случайная сегрегация сестринских хроматид Рисунок 1. Механизмы возникновения анеуплоидии в мейозе. Варианты сегрегации гомологичных хромосом в анафазе первого деления мейоза:

нормальное расхождение, совместное движение бивалента к одному полюсу («истинное нерасхождение»), случайная ориентация унивалентов и их независимое движение к одному полюсу («ахиазматическое нерасхождение»), преждевременное разделение сестринских хроматид и их случайная комбинация.

Нерасхождение сестринских хроматид во втором делении мейоза обусловлено их неспособностью к разделению или движением одиночных хроматид к одному полюсу в анафазе II.

1.4. Взаимосвязь патозооспермии и анеуплоидии хромосом в сперматозоидах и эмбрионах у пациентов программ ВРТ Особый интерес представляют пациенты с нормальным кариотипом, у которых отмечается анеуплоидия хромосом в отдельных клетках и тканях.

Вследствие неправильного расхождения хромосом в мейозе могут возникать хромосомные анеуплоидии в половых клетках. Для определения анеуплоидии хромосом широко используется молекулярно-цитогенетический метод - FISH.

Одними из первых анализ хромосом в сперматозоидах человека с помощью FISHметода провели Joseph AM., с соавторами (1984) [66] (Рисунок 2).

Рисунок 2. FISH-исследование сперматозоидов.

По данным ряда исследователей, уровень анеуплоидии половых хромосом в сперматозоидах у фертильных мужчин варьирует от 0,21% до 1% [4][67]. Однако точного референсного значения числа анеуплоидных сперматозоидов в мужском эякуляте не существует.

Проспективные исследования половых клеток у мужчин демонстрируют, что уровень анеуплоидии хромосом сперматозоидов у мужчин с изменениями показателей спермограммы выше по сравнению с мужчинами с нормозооспермией (НЗС) Особенно часто повышение уровня [4][5][6].

анеуплоидии хромосом в половых клетках отмечается у мужчин с ТЗС. В исследовании Mehdi M., с соавторами (2012) общий уровень анеуплоидии хромосом у мужчин с ТЗС был значительно выше, чем у фертильных мужчин, и составил 5,52% и 1% соответственно. Наибольший риск возникновения анеуплоидии наблюдался у мужчин с макроцефалией сперматозоидов [4].

Сходные результаты были получены при исследовании Rives N., с соавторами (2000) и Brahem S., с соавторами (2011) [68] [69]. В ряде исследований было выявлено, что ОЗС также коррелировала с повышенным уровнем анеуплоидии гоносом в сперматозоидах и встречалась в 2,5 раза чаще, чем при НЗС [70].

Сниженная подвижность сперматозоидов характеризовалась значительным увеличением уровня анеуплоидии по сравнению с контрольной группой по данным Collodel G., с соавторами [49]. При исследовании сперматозоидов у ливанских мужчин с бесплодием также была выявлена более высокая частота дисомии по половым хромосомам у мужчин с АЗС по сравнению с фертильными мужчинами [71].

Таким образом, мужчины с какими-либо отклонениями в показателях спермограммы могут иметь повышенный уровень анеуплоидии гоносом и аутосом в ядрах сперматозоидов. У таких мужчин может возрастать риск передачи хромосомной аномалии во время оплодотворения яйцеклетки анеуплоидным сперматозоидом.

Некоторые исследования демонстрируют более высокий риск хромосомных аномалий de novo отцовского происхождения у детей, зачатых с помощью ЭКО/ИКСИ [72][73]. Исследования по типу случай-контроль продемонстрировали зависимость хромосомной патологии у потомства с анеуплоидией сперматозоидов у отцов. При исследовании сперматозоидов у отцов детей с синдромом Дауна было выявлено, что частота сперматозоидов с анеуплоидией хромосомы 21 выше по сравнению с контрольной группой [7]. У пар со спонтанными абортами в анамнезе или наличием детей с хромосомными нарушениями в комплексе гоносом (синдром Тернера, синдром Клайнфельтера) также было отмечено увеличение частоты анеуплоидии по половым хромосомам в сперматозоидах (от 0,2% до 24,7%) [74]. Все эти наблюдения свидетельствуют о необходимости развития и совершенствования генетического консультирования с включением FISH анализа сперматозоидов перед проведением процедуры ЭКО и выбора дальнейшей тактики проведения ВРТ у данной категории пациентов.

Magli MС., с соавторами (2009) изучали риск развития анеуплоидии у полученных эмбрионов от пациентов с различными видами патозооспермии (олигоастенотератозооспермией (ОАТ) и необструктивной азооспермией (НОА)) [75]. Было выявлено, что частота эмбрионов с анеуплоидией составила 62% у мужчин с ОАТ, 69% - у мужчин с НОА, и 55% - у мужчин с НЗС. В исследовании Dubey А., с соавторами были получены сходные данные [76]. Авторы отмечают более высокую частоту имплантации, частоту наступления беременностей и живорождений в программах ВРТ у пациентов с нормальными показателями спермограммы по сравнению с мужчинами с патозооспермией. Бельгийскими коллегами было изучено влияние ТЗС на исходы внутриматочной инсеминации.

Частота живорождений была выше в группе супружеских пар, где у мужчин отмечались нормальные показатели спермограммы, по сравнению с пациентками, у мужей которых отмечалась ТЗС, и составила 52,8% и 33,4% соответственно [77].

Таким образом, патозооспермия у мужчин может являться причиной неудачных исходов программ ВРТ. При наличии патозооспермии может наблюдаться повышенная частота анеуплоидии эмбрионов вследствие более высокого уровня анеуплоидии в сперматозоидах.

Ученые из Южной Кореи исследовали влияние патозооспермии на риск развития анеуплоидии эмбрионов [78]. В данном исследовании частота анеуплоидии хромосом 13, 18, 21, X и Y была выше в группе мужчин с ОАТ по сравнению с контрольной группой. Количество сперматозоидов обратно коррелировало с частотой анеуплоидии хромосом 13 и 21 в группе пациентов с OAT. Snchez-Castro M., с соавторами исследовали супружеские пары, в которых у мужей отмечался высокий уровень анеуплоидии хромосом в сперматозоидах.

Анализ данных показал, что у таких супружеских пар частота встречаемости анеуплоидии хромосом в эмбрионах была намного выше [79]. Наиболее крупное исследование было проведено бельгийскими авторами Magli MC., с соавторами (2009) [75]. В этом исследовании оценивался отцовский вклад в развитие анеуплоидии эмбрионов. Были проанализированы хромосомы X,Y, 13, 15, 16, 17, 18, 21 и 22. В результате исследования было выявлено, что 40 % эмбрионов были нормальными по изучаемым хромосомам. Частота хромосомных нарушений была значительно ниже в группе пациентов с НЗС (55%) по сравнению с пациентами с ОАТ (62%, р0,025) и НOA (69%, р0,005). В случаях обструктивной азооспермии доля эмбрионов с хромосомными аномалиями составила 63%.

Наблюдалось значительное увеличение уровня анеуплоидии в зависимости от тяжести патозооспермии. Количество эмбрионов хорошего качества было значительно выше в группе пациентов с нормальными показателями спермограммы и составило 40% против 16% в группе с патологией сперматогенеза. В исследовании американских коллег частота получения эмбрионов с анеуплоидией также была выше в группе мужчин с патозооспермией, чем в группе мужчин с нормальными показателями спермограммы [76]. Частота наступления беременности на стимулированный цикл составила 44% при НЗС и 14% при ТЗС. Частота имплантации в группе пар со здоровыми мужчинами была в два раза выше по сравнению с группой пар с мужчинами с патозооспермией.

Нами был проведен систематический обзор, в котором были обобщены данные о частоте и типах анеуплоидии эмбрионов, полученных от пар в программах ЭКО, где у мужчин отмечалась патозооспермия [80]. При обобщении полученных данных была выявлена статистически значимая зависимость между патозооспермией и риском развития анеуплоидии эмбрионов в программах ВРТ.

Таким образом, можно сделать заключение о том, что проведение программ ВРТ у пациентов с патозооспермией требует определенной генетической настороженности. Молекулярно-цитогенетическая диагностика в рамках программы ВРТ позволяет своевременно обнаружить хромосомные аберрации как в мужских половых клетках, так и в ядрах бластомеров. Исследование сперматозоидов на наличие анеуплоидии и проведение последующего ПГС может служить хорошим профилактическим мероприятием, повысить эффективность программ ВРТ и способствовать рождению здорового потомства у этой категории пациентов.

1.5. Профилактика врожденной и наследственной патологии плода у супружеских пар с нарушением репродуктивной функции В информационном бюллетене, опубликованном ВОЗ в 2012 году, отмечено, что примерно у 1 из 33 новорожденных детей наблюдаются пороки развития. Это значит, что ежегодно рождается примерно 3,2 миллиона детей с наличием той или

–  –  –

Главной целью неинвазивных методов является отбор беременных женщин в группы высокого риска рождения детей с врожденной и наследственной патологией, которые нуждаются в дополнительных исследованиях, включающих специальные лабораторные (цитогенетические, биохимические, молекулярные) методы исследования плодного материала. Для этой цели в настоящее время используют различные скрининговые методы. Согласно рекомендациям Европейской ассоциации перинатальной медицины в скрининговые программы включены [83]:

- ультразвуковой скрининг плода;

- биохимический скрининг маркерных белков в сыворотке беременной;

- цитогенетический скрининг;

- молекулярный скрининг;

- иммунологический скрининг.

Скрининговое ультразвуковое исследование плода проводится трехкратно при сроках беременности 11 – 14 недель, 18 – 21 недели и 30– 34 недели [84]. При сроках беременности 11 – 14 недель проводится забор проб крови беременных женщин для определения уровней плазменного альбумина, ассоциированного с беременностью, и свободной -субъединицы хорионического гонадотропина человека (-ХГ). К сывороточным маркерным белкам, определяемым в крови матери во II триместре, относятся альфа-фетопротеин (АФП), -ХГ, и неконъюгированный свободный эстриол (Е3). Биохимические исследования маркерных сывороточных белков крови беременной и ультразвуковое сканирование в настоящее время рассматривают как обязательные скрининговые программы дородовой диагностики, направленные на выявление женщин групп высокого риска по рождению детей с хромосомными болезнями и пороками развития [85].

Совершенствование методов ультразвуковой диагностики в настоящее время позволяет повысить частоту выявляемости хромосомных заболеваний во время беременности. С момента введения обязательного «комбинированного теста» в 1 триместре беременности в некоторых клиниках Германии эффективность диагностики пороков развития на ранних стадиях эмбриогенеза увеличилась на 30% [86]. Известно, что ПД относится к числу наиболее рентабельных направлений профилактической медицины. В целом эффективность ПД определяется частотой, с которой удается выявить плоды с тяжелыми внутриутробными пороками развития, хромосомными и моногенными болезнями.

Особенно высокой эффективностью обладает ультразвуковой скрининг пороков развития центральной нервной системы. Эффективность данного метода составляет, по данным диагностического центра г. Санкт-Петербурга, более 90% [87]. По данным авторов ФГБУ «НЦАГиП им. В.И. Кулакова» Минздрава России точность диагностики во 2 триместре беременности таких пороков, как анэнцефалия, голопрозэнцефалия, экзэнцефалия, лимфангиома шеи, омфалоцеле, гастрошизис и др., приближается к 100% [88].

Если на первом этапе обследования беременной выявляются отклонения от нормы сывороточных маркеров или нарушения в развитии плода по данным УЗИ, то пациентке рекомендуется проведение второго уровня ПД, который включает мероприятия по диагностике конкретных форм поражения плода, оценке их тяжести и прогнозу состояния здоровья ребенка, а также решение вопросов о прерывании беременности в случаях тяжелого, не поддающегося лечению, заболевания у плода. На второй уровень также направляются беременные женщины, имеющие высокий риск рождения детей с наследственной болезнью или врожденными пороками развития (ВПР); в возрасте от 35 лет и старше;

имеющие в анамнезе рождение ребенка с ВПР, хромосомной или моногенной болезнью; с установленным семейным носительством хромосомной аномалии или генной мутации [89]. Инвазивная диагностика, выполняемая для пренатального кариотипирования плода, многими авторами оценивается как самая надежная диагностика не только синдрома Дауна, но и других хромосомных заболеваний у плода [90]. Следует отметить, что экспоненциальный рост рождения детей с синдромом Дауна отмечается у женщин с 35-летнего возраста. Поэтому именно этот возраст во многих странах признан пограничным в плане риска синдрома Дауна у плода. Однако в качестве демаркационного значения для разделения на группы высокого и низкого риска, возраст беременных варьирует в разных странах от 34 до 40 лет [91][92].



Pages:   || 2 | 3 | 4 | 5 |
 

Похожие работы:

«Черкасова Анна Владимировна НОВЫЕ КАРОТИНСОДЕРЖАЩИЕ БАД: ПОЛУЧЕНИЕ, СВОЙСТВА И ПРИМЕНЕНИЕ ДЛЯ ОБОГАЩЕНИЯ МОЛОЧНЫХ ПРОДУКТОВ Специальность: 05.18.07– Биотехнология пищевых продуктов и биологических активных веществ Диссертация на соискание ученой степени кандидата технических наук Научный руководитель: доктор технических наук,...»

«ШАРАВИН Дмитрий Юрьевич IN SITU / EX SITU ИДЕНТИФИКАЦИЯ МИКРООРГАНИЗМОВ ФИЛЬТРАЦИОННЫХ ВОД ПОЛИГОНА ТВЁРДЫХ БЫТОВЫХ ОТХОДОВ 03.02.03 Микробиология Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: доктор биологических наук, профессор А.И. Саралов Пермь – 2015 ОГЛАВЛЕНИЕ СТР. ВВЕДЕНИЕ.. 4...»

«АБДУЛЛАЕВ Ренат Абдуллаевич ГЕНЕТИЧЕСКОЕ РАЗНООБРАЗИЕ МЕСТНЫХ ФОРМ ЯЧМЕНЯ ИЗ ДАГЕСТАНА ПО АДАПТИВНО ВАЖНЫМ ПРИЗНАКАМ Шифр и наименование специальности 03.02.07 – генетика 06.01.05 – селекция и семеноводство сельскохозяйственных растений ДИССЕРТАЦИЯ на соискание учёной степени кандидата...»

«Мануйлов Виктор Александрович Генетическое разнообразие вируса гепатита В в группах коренного населения Сибири 03.01.00 – молекулярная биология Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: член-корр. РАН, профессор, д.б.н. С.В. Нетесов...»

«АСБАГАНОВ Сергей Валентинович БИОЛОГИЧЕСКИЕ ОСНОВЫ ИНТРОДУКЦИИ РЯБИНЫ (SORBUS L.) В ЗАПАДНОЙ СИБИРИ 03.02.01 – «Ботаника» ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: к.б.н., с.н.с. А.Б. Горбунов Новосибирск 2014 ОГЛАВЛЕНИЕ ВВЕДЕНИЕ.. 4 Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.. 8 Ботаническая...»

«Усов Николай Викторович Сезонная и многолетняя динамика обилия зоопланктона в прибрежной зоне Кандалакшского залива Белого моря в связи с изменениями температуры воды 25.00.28 – океанология Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Руководители: доктор биологических наук, главный научный сотрудник А.Д. Наумов доктор биологических наук, ведущий...»

«Палаткин Илья Владимирович Подготовка студентов вуза к здоровьесберегающей деятельности 13.00.01 общая педагогика, история педагогики и образования Диссертация на соискание ученой степени кандидата педагогических наук Научные руководители: доктор биологических наук, профессор,...»

«Будилова Елена Вениаминовна Эволюция жизненного цикла человека: анализ глобальных данных и моделирование 03.02.08 – Экология Диссертация на соискание ученой степени доктора биологических наук Научный консультант доктор биологических наук, профессор А.Т. Терехин Москва 2015 Посвящается моим родителям, детям и мужу с любовью. Содержание Введение.. 5 1. Теория эволюции жизненного цикла. 19...»

«ТУРТУЕВА ТАТЬЯНА АНАТОЛЬЕВНА РАЗРАБОТКА СБОРА НЕЙРОПРОТЕКТИВНОГО И ЭКСТРАКТА СУХОГО НА ЕГО ОСНОВЕ 14.04.02 фармацевтическая химия, фармакогнозия ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук Научный руководитель: доктор фармацевтических наук, профессор НИКОЛАЕВА ГАЛИНА ГРИГОРЬЕВНА Улан-Удэ – 2015 ОГЛАВЛЕНИЕ...»

«ФЕДЕРАЛЬНОЕ ГОСУДАРСТВЕННОЕ БЮДЖЕТНОЕ ОБРАЗОВАТЕЛЬНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ ВЫСШЕГО ОБРАЗОВАНИЯ «БАШКИРСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ АГРАРНЫЙ УНИВЕРСИТЕТ» НА ПРАВАХ РУКОПИСИ НИКУЛИНА НЕЛЯ ШАМИЛЕВНА ПРОДУКТИВНЫЕ КАЧЕСТВА И БИОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ КОРОВ ЧЕРНО-ПЕСТРОЙ ПОРОДЫ ПРИ ИСПОЛЬЗОВАНИИ ПРОБИОТИЧЕСКОЙ ДОБАВКИ «БИОГУМИТЕЛЬ-Г» 06.02.10 – частная зоотехния, технология производства продуктов животноводства Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: доктор...»

«ПОЛУЭКТОВА ЕКАТЕРИНА ВИКТОРОВНА ФИТОТОКСИЧЕСКИЕ МЕТАБОЛИТЫ ГРИБА PARAPHOMA SP. ВИЗР 1.46 И ПЕРСПЕКТИВЫ ИХ ПРАКТИЧЕСКОГО ИСПОЛЬЗОВАНИЯ Шифр и наименование специальности: 03.02.12 – микология ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: Берестецкий А.О. кандидат биологических наук Санкт-Петербург...»

«УДК 256.18(268.45) ШАВЫКИН АНАТОЛИЙ АЛЕКСАНДРОВИЧ ЭКОЛОГО-ОКЕАНОЛОГИЧЕСКОЕ СОПРОВОЖДЕНИЕ ОСВОЕНИЯ НЕФТЕГАЗОВЫХ МЕСТОРОЖДЕНИЙ АРКТИЧЕСКОГО ШЕЛЬФА (НА ПРИМЕРЕ БАРЕНЦЕВА МОРЯ) Специальность 25.00.28 «океанология» Диссертация на соискание ученой степени доктора географических наук Мурманск – 2015 ОГЛАВЛЕНИЕ ОГЛАВЛЕНИЕ ВВЕДЕНИЕ...»

«Цвиркун Ольга Валентиновна ЭПИДЕМИЧЕСКИЙ ПРОЦЕСС КОРИ В РАЗЛИЧНЫЕ ПЕРИОДЫ ВАКЦИНОПРОФИЛАКТИКИ. 14.02.02 – эпидемиология ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени доктора медицинских наук Научный консультант: заслуженный деятель науки РФ, лауреат Государственной премии СССР профессор, доктор медицинских наук Ющенко Галина Васильевна Москва – 20 Содержание...»

«СЕРГЕЕВА ЛЮДМИЛА ВАСИЛЬЕВНА ПРИМЕНЕНИЕ БАКТЕРИАЛЬНЫХ ЗАКВАСОК ДЛЯ ОПТИМИЗАЦИИ ФУНКЦИОНАЛЬНО-ТЕХНОЛОГИЧЕСКИХ СВОЙСТВ МЯСНОГО СЫРЬЯ И УЛУЧШЕНИЯ КАЧЕСТВА ПОЛУЧАЕМОЙ ПРОДУКЦИИ Специальность 03.01.06 – биотехнология ( в том числе бионанотехнологии) Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель Доктор биологических наук, профессор Кадималиев Д.А. САРАНСК 2014 ОГЛАВЛЕНИЕ ВВЕДЕНИЕ.....»

«Ульянова Онега Владимировна МЕТОДОЛОГИЯ ПОВЫШЕНИЯ БЕЗОПАСНОСТИ БАКТЕРИАЛЬНЫХ ВАКЦИН НА МОДЕЛИ ВАКЦИННЫХ ШТАММОВ BRUCELLA ABORTUS 19 BA, FRANCISELLA TULARENSIS 15 НИИЭГ, YERSINIA PESTIS EV НИИЭГ 03.02.03 – микробиология Диссертация на соискание ученой степени доктора биологических наук Научный консультант:...»

«Мухаммед Тауфик Ахмед Каид ХАРАКТЕРИСТИКА ГЕНОТИПОВ С ХОРОШИМ КАЧЕСТВОМ КЛЕЙКОВИНЫ, ОТОБРАННЫХ ИЗ ГИБРИДНЫХ ПОПУЛЯЦИЙ АЛЛОЦИТОПЛАЗМАТИЧЕСКОЙ ЯРОВОЙ ПШЕНИЦЫ МЯГКОЙ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ДНК-МАРКЕРОВ Специальность 06.01.05 – селекция и семеноводство сельскохозяйственных растений Диссертация на соискание ученой степени кандидата сельскохозяйственных наук Научный...»

«ХАПУГИН Анатолий Александрович РОД ROSA L. В БАССЕЙНЕ РЕКИ МОКША 03.02.01 – ботаника Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель Силаева Татьяна Борисовна д.б.н., профессор САРАНСК ОГЛАВЛЕНИЕ ВВЕДЕНИЕ Глава 1. ИСТОРИЯ ИЗУЧЕНИЯ РОДА ROSA L. В БАССЕЙНЕ МОКШИ. Глава 2. КРАТКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РОДА ROSA L. 2.1. Характеристика рода Rosa L. 2.2. Систематика рода Rosa L. Глава 3....»

«Искам Николай Юрьевич ЭФФЕКТИВНОСТЬ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ НОВОЙ КОРМОВОЙ ДОБАВКИ АЦИД-НИИММП НА ОСНОВЕ ОРГАНИЧЕСКИХ КИСЛОТ ПРИ ПРОИЗВОДСТВЕ ГОВЯДИНЫ 06.02.10 – частная зоотехния, технология производства продуктов животноводства; 06.02.08 – кормопроизводство, кормление сельскохозяйственных животных и технология кормов. ДИССЕРТАЦИЯ на...»

«КОЖАРСКАЯ ГАЛИНА ВАСИЛЬЕВНА КЛИНИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ МАРКЕРОВ КОСТНОГО МЕТАБОЛИЗМА У БОЛЬНЫХ РАКОМ МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ 14.01.12 онкология Диссертация на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Научные руководители: доктор биологических наук, Любимова Н.В. доктор медицинских наук, Портной С.М. Москва, 2015 г....»

«ФЕДОРОВА Екатерина Алексеевна ХАРАКТЕРИСТИКИ ВИРУСА ГРИППА, ВЛИЯЮЩИЕ НА ПОКАЗАТЕЛИ ГУМОРАЛЬНОГО ИММУННОГО ОТВЕТА В ЭКСПЕРИМЕНТЕ И ПРИ ВАКЦИНАЦИИ 03.02.02 – вирусология ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: Доктор биологических наук, доцент И.В. КИСЕЛЕВА Санкт-Петербург – ОГЛАВЛЕНИЕ Раздел 1....»







 
2016 www.konf.x-pdf.ru - «Бесплатная электронная библиотека - Авторефераты, диссертации, конференции»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.