WWW.KONF.X-PDF.RU
БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА - Авторефераты, диссертации, конференции
 

Pages:   || 2 |

«МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ И ЭКОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ ШТАММОВ ИЕРСИНИЙ, ЦИРКУЛИРУЮЩИХ НА ТЕРРИТОРИИ ЯКУТИИ ...»

-- [ Страница 1 ] --

На правах рукописи

СОФРОНОВА

Октябрина Николаевна

МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ И ЭКОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ

ШТАММОВ ИЕРСИНИЙ, ЦИРКУЛИРУЮЩИХ НА ТЕРРИТОРИИ

ЯКУТИИ

03.02.03 – микробиология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени

кандидата медицинских наук

Санкт-Петербург – 2014

Работа выполнена в Федеральном бюджетном учреждении науки «СанктПетербургский научно- исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. Пастера»

Научный руководитель:

Заслуженный деятель науки РФ, доктор медицинских наук, профессор Ценева Галина Яковлевна

Официальные оппоненты:

…………………………………… Кветная Ася Степановна - доктор медицинских наук, профессор, Федеральное государственное бюджетное учреждение «Научно-исследовательский институт детских инфекций Федерального медико-биологического агентства России», отдел микроэкологии человека, ведущий научный сотрудник, руководитель Сбойчаков Виктор Борисович – доктор медицинских наук, профессор, Федеральное государственное бюджетное военное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Военно-медицинская академия имени С.М. Кирова» Министерства обороны Российской Федерации, кафедра микробиологии, заведующий Ведущее учреждение: Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Северо-Западный государственный медицинский университет имени И.И. Мечникова» Министерства здравоохранения Российской Федерации

Защита состоится «__» ____________2015 г. в ___ часов на заседании диссертационного совета Д 208.046.01 при Федеральном бюджетном учреждении науки «Московский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им Г.Н. Габричевского» Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека по адресу: 125212, г. Москва, ул.

Адмирала Макарова, д. 10

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке и на сайте ФБУН МНИИЭМ им. Г.Н. Габричевского Роспотребнадзора по адресу: 125212, г. Москва, ул. Адмирала Макарова, 10, http://www.gabrich.ru

Автореферат разослан «___»________2015 г.

Ученый секретарь диссертационного совета доктор медицинских наук ……………………………Борисова Ольга Юрьевна

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы исследования Ежегодно в мире инфекционные и паразитарные болезни регистрируются более чем у 2 млрд. людей. Одним из важных факторов роста заболеваемости является изменение вирулентности патогенных микроорганизмов (Онищенко Г.Г., 2006). В четвертом оценочном Докладе Межправительственной группы экспертов по изменению климата (МГЭИК –IPCC) в 2008 г. особое внимание уделяется опасности увеличения инфекционной заболеваемости на Севере, в связи с изменением климата и, как следствие, смещению ареала возбудителей и переносчиков инфекционных болезней. С эпидемиологической точки зрения это означает возможность расширения ареалов обитания ряда видов грызунов, являющихся источниками возбудителей многих инфекций (Ревич Б.А. и соавт., 2011). В этой связи реально появление новых подвидов микроорганизмов с измененными биологическими, в том числе, генетическими свойствами (Ценева Г.Я., 2006).

Yersinia pseudotuberculosis и Yersinia enterocolitica распространены во многих странах мира, являясь причиной спорадической и групповой заболеваемости.

Многолетняя динамика выделения иерсиний на всей территории Якутии имеет волнообразный характер. Надо полагать, что заболеваемость иерсиниозами на территории Якутии распространена повсеместно, однако, в большинстве районов клинико-лабораторная диагностика и, следовательно, регистрация иерсиниозов не ведется. Это объясняется и тем, что сельская местность имеет наибольшую территориальную зависимость и трудность в транспортной инфраструктуре (Тырылгин М.А., 2008).

Природные очаги бактериальных инфекций на Севере отличаются циркумполярным распространением, адаптацией возбудителей к типичным для Севера представителям фауны, способностью к размножению в переносчиках и во внешней среде при температуре (+2 - +4°С) вечной мерзлоты. Многие микробиологические и экологические аспекты, связанные с иерсиниями в условиях Севера, оставались неизученными, а официальная статистика не отражает их истинного распространения. Практически не изучалась распространенность иерсиний среди диких и сельскохозяйственных животных.

Мало данных о степени обсемененности объектов окружающей среды. Не проводилось изучение генетических детерминант вирулентности выделенных штаммов и молекулярно-генетических особенностей популяций иерсиний.

Таким образом, к началу нашей работы информация о распространенности различных видов иерсиний на Северных территориях отсутствовала, целенаправленные комплексные исследования в этом направлении не проводились. В этой связи организация и проведение микробиологических мониторинговых исследований на территории Якутии представляется актуальной.

Степень разработанности темы исследования В Якутии первая вспышка псевдотуберкулеза была зарегистрирована в 1974 г. В дальнейшем до 1998 г. было зарегистрировано еще 12 вспышек псевдотуберкулеза и кишечного иерсиниоза (Егоров И.Я. и соавт., 2000).

В 90-х годах в Якутии при групповых заболеваниях кишечным иерсиниозом от людей выделяли Y. kristensenii. Этот вид иерсиний способен продуцировать энтеротоксин YKST, вызывающий симптомы пищевого отравления. Данные по распространению редких видов иерсиний ограничены, требовалось уточнение значимости их этиологической роли (Sulakvelidze A., 2000).

Использование многопраймерной ПЦР - перспективное направлением детекции видов бактерий рода Yersinia. Обнаружение генетического материала непатогенных - Y. kristensenii, Y. frederiksenii, Y. intermedia, Y. bercovieri, Y. mollaretii, Y. rohdei в биологических образцах больного человека может свидетельствовать о том, что клинические проявления инфекционного заболевания могут быть вызваны видами иерсиний, считавшимися ранее непатогенными (Cтенкова А.М. и соавт., 2008).

Вопреки установившемуся мнению, что температурный оптимум для размножения патогенных микробов находится в пределах +37 °С, и они являются мезофилами, полученные данные на модели (Y. pseudotuberculosis, Y. еnterocolitica) позволили подтвердить другую концепцию в экологии этих микробов. Культивирование Y. pseudotuberculosis при +8 °С в условиях низкой аэрации увеличивает их адгезивную и инвазивную активность (Cомов Г.П. и соавт., 2001). Эти свойства могут быть следствием адаптации микроорганизма к разным условиям обитания в различных географических зонах. Между тем, сведения о распространении ведущих серо-биотипов и их биологических характеристиках по отдельным географическим зонам России представлены не полностью.

Y. enterocolitica 1А не имеет классических факторов патогенности: плазмиды (pYV), гена адгезии (ail), энтеротоксина (ystА). Однако, у непатогенных представителей биотипа 1А обнаружен ген ystВ, кодирующий термостабильный энтеротоксин YST В, который может играть роль в патогенезе диарей (Ramamurthy T., 1997). До настоящего времени циркулирующие на Севере Y. enterocolitica биотипа 1А по признаку патогенности не изучались, равно, как и больные с диарейным синдромом на иерсиниозы не обследовались.

Цель исследования: микробиологическая характеристика штаммов иерсиний, циркулирующих на территории Якутии, и разработка тактики микробиологического мониторинга иерсиниозов.

Задачи исследования:

Установить распространенность представителей рода Yersinia на территории Якутии в различных объектах окружающей среды, в том числе, в популяциях мелких млекопитающих.

Охарактеризовать штаммы по наличию генетических детерминант вирулентности. Оценить генетическое родство штаммов иерсиний различных видов, изолированных в антропургических и природных очагах Якутии.

Оценить заболеваемость иерсиниозами и этиологическую значимость 3.

иерсиний, циркулирующих на территории Якутии, при ретроспективном иммунологическом обследовании людей и сельскохозяйственных животных.

Разработать тактику микробиологического мониторинга за циркуляцией иерсиний для территорий Якутии.

Научная новизна На основе комплексного микробиолого-эпидемиологического изучения возбудителей иерсиниозов у людей, животных и в объектах окружающей среды установлена циркуляция различных видов бактерий рода Yersinia (Y.

pseudotuberculosis, Y. enterocolitica, Y. kristensenii, Y.intermedia, Y.frederiksenii) на территориях народно-хозяйственного освоения Якутии.

Получены новые знания о выделении и частоте распространения иерсиний «редких» видов (Y. kristensenii; Y.intermedia) от грызунов и из воды открытых водоемов. Выделенные на территории Якутии Y._enterocolitica биотипа 1А от грызунов, из овощей и других объектов окружающей среды, ранее, отнесенные к непатогенным иерсиниям, обладают патогенным потенциалом.

Выявлено, что в 80% случаев штаммы Y._enterocolitica биотипа 1А, считающиеся непатогенными, содержат ген ystB, опосредующий продукцию термостабильного энтеротоксина, что позволяет судить о наличии патогенного потенциала у бактерий, и может обуславливать диарейные проявления у больных с острыми кишечными инфекциями неустановленной этиологии.

На основе выявленных положительных результатов серологических исследований проб больных, страдающих ОКИ, гастроэнтероколитами, здоровых людей, а также животных, получена информация о распространенности иерсиниозов на территории Якутии, которые свидетельствуют о широкой циркуляции иерсиний на изученной территории.

Теоретическая и практическая значимость работы Установлена широкая распространенность бактерий рода Yersinia различных видов (Y. enterocolitica, Y. kristensenii, Y. рseudotuberculosis; Y. intermedia; Y.

frederiksenii; Yersinia spp.) на территории Якутии в «условиях вечной мерзлоты».

Доказано, что наиболее часто встречается Y. enterocolitica и Y. kristensenii, основным резервуаром которых в природных и антропургических очагах являются разные виды мелких млекопитающих (серые крысы, полевки, лемминги), что является особенностью территории.

Для исследованных штаммов Y. kristensenii и Y. intermedia раскрыты филогенетические связи и установлены генетические различия, обусловленные полиморфизмом гена gyrB, что вносит существенный вклад в характеристику популяции иерсиний данных видов.

На основе полученных данных, комплексного изучения иерсиний на территории Якутии, разработан алгоритм микробиологического мониторинга за иерсиниями, включающий порядок организации и проведения лабораторной диагностики с учетом климатических условий, который будет способствовать осуществлению эффективного эпидемиологического надзора за иерсиниозной инфекцией.

Изученные штаммы и их характеристики представлены в коллекции Референс центра по мониторингу за иерсиниозами при ФБУН НИИ эпидемиологии и микробиологии имени Пастера.

Для повышения эффективности диагностики псевдотуберкулеза и кишечного иерсиниоза в организациях здравоохранения Якутии внедрены методы ИФА (акт внедрения от 26.12.2011 г. и 26.11.2013 г.) и ПЦР (акт внедрения от 25.12.2012 г.).

В ФГБУ «НЦЭСМП» МЗ России депонирован штамм Y. kristensenii № 1511, выделенный со смыва из местного картофеля и содержащий хромосомный ген термостабильного энтеротоксина ykst, который может быть использован в качестве тест-штамма при проведении мониторинга за Y. kristensenii.

Полученные данные были использованы при создании документов:

1. Профилактика иерсиниоза: санитарно-эпидемиологические правила СП 3.1.7.2615-10 / Ю.В. Демина, С.В. Сенников, Г.Я. Ценева, Е.А Воскресенская, Е.

А. Богумильчик, О.Н. Софронова, М.В. Чеснокова, В.Т. Климов, К.А Тирских, О.А. Бургасова, Л.К. Иванова, Т.В. Каримова, Л.В. Саяпина - М.: Изд-во ФГУЗ «ФЦГЭ Роспотребнадзора». - 2010. - 19 с.

2. Микробиологический мониторинг циркуляции иерсиний в Республике Саха (Якутия): республиканские методические рекомендации. (МР) / И.Ю. Самойлова, В.И. Григорьева, О.Н. Софронова, В.Ф. Чернявский, О.Н. Никифоров, И.А.Романова, П.С. Дьячковская, Е.А. Воскресенская, Г.Я, Ценева - СПб.: ВМемА - 2013. – 84 с.

Методология и методы исследования Методология данной работы соответствует поставленной цели. Предметом исследования явилось выделение иерсиний с целью изучения распространения штаммов, обитающих на территории Якутии, их молекулярно-генетическая характеристика. Анализ научной литературы, посвященной проблеме, проведен на основе формально-логических методов исследования. Планирование и проведение исследований, направленных на решение поставленных задач, проводилось на основе общенаучных и специфических методов.

В работе использован материал и следующие методы (Таблица 1).

Штаммы. Всего на территории Якутии бактериологическим методом выделено 237 штаммов бактерий рода Yersinia. Исследовано молекулярногенетическими методами 171 свежевыделенных штаммов и 3 штамма, выделенные в 1994, 2000, 2001 гг., которые хранились при - 800 С. Также использованы референс - штаммы Y. enterocolitica IP 8081 (из коллекции института Пастера, Париж); охраноспособный штамм Y. enterocolitica КМ 205 и охраноспособный штамм Y. pseudotuberculosis КМ 211 (из Государственной коллекции патогенных бактерий «Микроб», г. Саратов).

Бактериологический метод. Выделение, идентификацию и культивирование иерсиний проводили в соответствии с МУ 3.1.1.2438 - 09 «Эпидемиологический надзор и профилактика псевдотуберкулеза и кишечного иерсиниоза» посевом в 1% пептонно-калиевую среду накопления с «холодовым» обогащением при температуре +4 - +8 0С и с последующим высевом материала на 2-3, 5-7, 10-14 сутки на плотную питательную среду с бромтимоловым синим (ФБУН ГНЦ ПМБ, п.

Оболенск). Видовую идентификацию выделенных культур проводили с использованием набора реактивов, питательных сред для идентификации энтеробактерий (ФБУН ГНЦ ПМБ, п. Оболенск; ФГУП НПО «Микроген», г. Махачкала), «Тестсистемы для дифференциации видов и биотипов бактерий рода Yersinia» (Патент на изобретение № 2518297 от 08.04.2014.), разработана во ФБУН НИИ эпидемиологии и микробиологии имени Пастера.

–  –  –

** Работа выполнялась в лаборатории особо опасных инфекций Центра гигиены и эпидемиологии в Республике Саха (Якутия) с участием автора.

*** Работа выполнялась в лаборатории ФБУН НИИ эпидемиологии и микробиологии имени Пастера, С- Петербург и ФГБУН « Тихоокеанский институт биоорганической химии» ДВО РАН, Владивосток.

Серотипирование штаммов Y. pseudotuberculosis проводили с использованием моновалентных сывороток к серотипам Y. pseudotuberculosis О:1 и О:3; штаммов Y. enterocolitica с использованием набора моновалентных сывороток к 13 серотипам (ФБУН НИИ эпидемиологии и микробиологии имени Пастера, г. СанктПетербург). Серотипирование 2 штаммов Y. pseudotuberculosis осуществляли в мультиплексной ПЦР по методике Bogdanovich T. (Bogdanovich, 2003).

Идентификацию вирулентных иерсиний проводили с использованием диагностической сыворотки СВИ (ФБУН НИИ эпидемиологии и микробиологии имени Пастера, г. Санкт-Петербург).

Молекулярно-генетические методы. Для выделения ДНК из образцов фекалий, эмульсий органов грызунов, помета птиц, погадок хищных птиц использовали коммерческий набор "ДНК-сорб-В" (ФБУН ЦНИИЭ Роспотребнадзора, г. Москва); ДНК из смывов, овощей, воды, почвы выделяли с использованием набора "ДНК-сорб-С" (ФБУН ЦНИИЭ Роспотребнадзора, г. Москва), согласно прилагаемым инструкциям.

Для выявления участков ДНК Y. enterocolitica и Y. pseudotuberculosis в пробах использовали коммерческие тест-системы:

- «АмплиСенс® Yersinia enterocolitica-Eph, «АмплиСенс® Yersinia pseudotuberculosis-Eph (ФБУН ЦНИИЭ Роспотребнадзора, г. Москва), ПЦР проводили в термостате ТП4-ПЦР-01-«Терцик» (ЗАО «НПФ ДНК-Технология», Россия) с электрофоретической детекцией продукта амплификации в 1% агарозном геле с окрашиванием бромистым этидием;

- «АмплиСенс® Yersinia enterocolitica/Yersinia pseudotuberculosis-FL», вариант FEP/FRT-50, с набором реагентов ПЦР - смесь -1- FEP/FRT Y. еnterocolitica/ Y.

рseudotuberculesis и ПЦР- смесь -1- FEP/FRT Y. enterocolitica type (ФБУН ЦНИИЭ Роспотребнадзора, г. Москва) с гибридизационно - флуоресцентной детекцией.

Амплификацию, анализ и учет результатов проводили при помощи прибора Rotor

- Gene Q (Qiagen, Германия), в режиме «реального времени» (FRT) или детекцию результатов проводили с помощью ПЦР- детектора Ala с версией программного обеспечения 5.1.0.,согласно прилагаемым инструкциям.

Методом ПЦР штаммы изучены на наличие генетических детерминант вирулентности: Y. enterocolitica - аil, ystА, ystB, yscQ (рYV) ykst; Y. pseudotuberculosis

- ypm А/С, yscQ, irp2. Штаммы Yersinia других видов были исследованы на наличие всех вышеперечисленных генов.

Для получения лизатов бактерии выращивали на агаре Хоттингера, готовили взвесь с концентрацией 108 м.к./мл в стерильной дистиллированной воде, 100 мкл взвеси кипятили 5 мин, центрифугировали при 10 тыс. об/мин - 1 мин, использовали надосадок. Применяли пары праймеров (ООО «Синтол», г. Москва).

Реакционную смесь для проведения ПЦР готовили с использованием стандартных реагентов («Fermentas», Литва) согласно прилагаемой инструкции. ПЦР проводили в термостате ТП4-ПЦР-01-«Терцик» (ЗАО «НПФ ДНК-Технология», Россия) по программе: 1 цикл 95 оС – 2 мин; 30 циклов 94 оС – 45 сек, 55 оС ; 72 оС – 45 сек; 1 цикл 72 оС – 10 мин. Результаты учитывали с помощью электрофореза в 1,5% агарозном геле с окрашиванием бромистым этидием.

Изучение генетических особенностей популяционной структуры иерсиний выполнялось на основе генотипирования гена gyrB, кодирующего В-субъединицу ДНК-гиразы, и гена ompF, кодирующего белок наружной мембраны. Для gyrBгенотипирования геномную ДНК выделяли из штаммов стандартным методом фенол-хлороформной депротеинизации с протеиназой К и набором Genomics DNA Purification Kit («Fermentas», Литва). Видовую идентификацию иерсиний проводили на основе секвенирования и анализа участка гена gyrB (Stenkova A.M.,2012). Фрагменты получали с использованием прямого YgyrF 5`CCCACTTTATACCT-3` и обратного YgyrR 5`-CCCACTTTATACCT-3` праймеров (ЗАО «Евроген», г. Москва). ПЦР проводили в 25 мкл реакционной смеси с использованием HSТaq- полимеразы («Евроген», Россия). Амплификацию осуществляли в термоциклере Gene Amp 2700 (Applied Biosystems, США) по программе: 1 цикл 950 С – 5 мин, 40 циклов: 940 С -20 с, 600 С – 20с, 720 С – 30с. Результаты ПЦР учитывали с помощью электрофореза в 1,5 % агарозном геле с окрашиванием бромистым этидием. ПЦР-фрагменты очищали с помощью набора DNA Extraction Kit («Fermentas», Литва) и секвенировали на автоматическом ДНК анализаторе 3130хL (Applied Biosystems, США) методом флюоресцентномеченых терминаторов – 2-, 3-дидезоксинуклеозидтрифосфатов Big Dye™ с использованием вышеприведенных праймеров. Последовательности анализировали с использованием программы MEGA v.4. (Tamura K., 2007).

Идентификацию патогенных видов рода Yersina осуществляли методом многопраймерной ПЦР на основе выявления гена ompF (Стенкова А.М., 2008).

Результаты ПЦР учитывали с помощью электрофореза в 2 % агарозном геле с окрашиванием бромистым этидием.

Иммунологические методы. Для специфической индикации возбудителя псевдотуберкулеза в пробах (селезенке и печени грызунов) и для идентификации выделенных культур использовали прямой МФА. Применяли «Иммуноглобулины диагностические флуоресцирующие псевдотуберкулезные, адсорбированные лошадиные» (ФКУЗ РосНИПЧИ «Микроб», г. Саратов).

Для выявления антигена возбудителя псевдотуберкулеза использовали тестсистему «Тест – система иммуноферментная для выявления антигенов иерсиний псевдотуберкулеза I серовара» (ФБУН НИИ эпидемиологии и микробиологии имени Пастера, г. Санкт-Петербург), согласно инструкции.

Для выявления антител к иерсиниям использовали РНГА с эритроцитарными диагностикумами: псевдотуберкулезным и кишечноиерсиниозными О:3 и О:9

(производство НИИВС, г. Санкт-Петербург), согласно прилагаемым инструкциям.

Для выявления иерсиниозных антител методом ИФА использовали:

1) Коммерческие тест-системы «Иерсиниоз-ИФА-IgA», «Иерсиниоз-ИФАIgA», «Иерсиниоз-ИФА-IgM» (ООО «Омникс», г. Санкт-Петербург; ЗАО «Вектор Бест», Россия). Постановку реакций проводили согласно инструкциям.

2) Тест-системы, разработанные в ФГБУН ТИБОХ ДВО РАН, г. Владивосток, на основе видо - и родоспецифических белков–поринов НМ Y.

рseudotuberculosis и Y. еnterocolitica (Портнягина О.Ю., 2010). Анализ проводили согласно МУ 3.1.1.001-98 «Определение антител в сыворотках людей методом ИФА для диагностики псевдотуберкулеза».

3) Конструировали дополнительный набор для выявления антител к возбудителю кишечного иерсиниоза, используя стандартные ингредиенты. Применяли непрямой вариант ИФА. В лунках планшета сорбировали антиген по 1 мкг. В качестве антивидовых антител использовали иммуноферментные конъюгаты («Invitrogen», США). Результаты учитывали на спектрофотометре Quant, BIO-TEK («INSTRUMENTS.INC», США) при 492 нм.

Эпидемиологический метод. Анализ заболеваемости населения в республике Саха (Якутия) проводили за период с 2002 г. по 2012 г. по статистическим данным и историям болезни.

Cтатистический метод. Статистическая обработка данных проведена методами статистического анализа при помощи программного пакета Microsoft Exel.

Достоверность различий оценивали по критерию Стьюдента (t) и величины вероятности (p). За достоверность различий принимали значение р0,05, вероятность различий составляла 95% и более. Оценка 95% доверительных интервалов для показателя с бинарным типом шкалы произведена по методу Клоппера-Пирсона, критерий хи-квадрат применяли для сравнения категориальных переменных.

Основные положения диссертации, выносимые на защиту:

На территории Якутия в природных и антропургических очагах установлено распространение иерсиний 5 видов. Популяции мелких млекопитающих, объекты животного и растительного происхождения инфицированы в подавляющем большинстве Y. enterocolitica биотипов 1А, и биотипов 2 и 4, серотипов О:3;

О:9; О:7,8; О:5; О:6,31.

Охарактеризованы патогенные штаммы Y. pseudotuberculosis, Y.

2.

еnterocolitica биотипов 2, 4, выделенные от больных и из объектов окружающей среды, а также Y. еnterocolitica биотипа 1А и Y. kristensenii в качестве возможных этиологически значимых на основании содержания генетических детерминант вирулентности – хромосомных генов термостабильных энтеротоксинов ystB и ykst. Для штаммов Y. еnterocolitica и других видов, выделенных в «условиях вечной мерзлоты», выявлено генетическое разнообразие и экологические особенности: Y. еnterocolitica биотипа 1А формирует собственную генетическую ветвь в пределах вида, а для штаммов Y. kristensenii, Y. intermedia свойственна высокая генетическая гетерогенность, что обусловлено полиморфизмом гена gyrB.

На территории Якутии наблюдается спорадическая заболеваемость 3.

без клинического симптомокомплекса болезни, характерна неравномерность территориального распространения, широкая циркуляция иерсиний на территориях обследования. Разработан алгоритм микробиологического мониторинга циркуляции иерсиний, включающий порядок организации и проведения лабораторной диагностики учреждениями Роспотребнадзора с учетом климатических условий и медико-географических зон территории Якутии.

Степень достоверности и апробация результатов Штаммы, представленные в работе, выделены от больных, животных, с объектов окружающей среды в ходе расследования вспышек кишечного иерсиниоза и/или псевдотуберкулеза, а также спорадических случаев.

Полученные данные обработаны и систематизированы с помощью методов описательной статистики, пакетов компьютерных программ и информационных баз данных и представлены в виде таблиц и графических изображений.

Диссертация апробирована на заседании Ученого совета Федерального бюджетного учреждения науки «Санкт-Петербургский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. Пастера», протокол №6 от 24.09.2014 г.

Основные результаты исследований доложены на российских и международных конференциях: III Всероссийской НПК с международным участием «Инфекции, обусловленные иерсиниями» (г. Санкт- Петербург, 2011 г.); межрегиональной НПК «Инфекционные болезни: вчера, сегодня, завтра» (г. Якутск, 2012 г.); I Республиканской НПК «Проблемы антибиотикорезистентности в многопрофильном стационаре» (г. Якутск, 2012 г.); V Региональной НПК с международным участием «Актуальные вопросы инфекционной патологии на Дальнем Востоке» (г. Хабаровск, 2012 г.); семинаре по подготовке бактериологов республики на базе Центра гигиены и эпидемиологии (г. Якутск, 2010, 2011, 2012 гг.);

семинаре по подготовке кадров специалистов по ветеринарии Якутской государственной сельскохозяйственной академии (г. Якутск, 2010, 2011 гг.); семинаре по стандартизации лабораторного мониторинга иерсиниозов (НИИЭМ им. Пастера, г. Санкт-Петербург, 2013 г.); конгрессе «Экология и здоровье человека на Севере»

(СВФУ г. Якутск, 2013 г.).

Публикации. Основное содержание диссертации отражено в 19 печатных работах, в том числе, 4 статьи опубликованы в рецензируемых изданиях, 8 – в других изданиях, 7 – в материалах конференций.

Личный вклад автора. Автором составлен план исследования, проведен аналитический обзор литературы, выполнен весь объем бактериологических исследований, сформирована выборка исследуемых штаммов; иммунологические исследования ОСК пациентов методами РНГА и ИФА. Исследования проб методом ПЦР, осуществлены автором совместно с бактериологом Романовой И.А. в лаборатории особо опасных инфекций ФБУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии в Республике Саха (Якутия)». Дифференциация вирулентных штаммов, серотипирование, определение генетических детерминант вирулентности проведены совместно с к.б.н.

Воскресенской Е.А. и н.с. Богумильчик Е.А на базе ФБУН НИИ эпидемиологии и микробиологии имени Пастера, г. Санкт-Петербург. Определение родственных связей иерсиний на основе gyrB-генотипирования, исследования ОСК методом ИФА с использованием тест- системы на основе поринов НМ проведено совместно с к.м.н. Исаевой М.П., к.б.н. Портнягиной О.Ю. на базе ФГБУН ТИБОХ ДВО РАН, г. Владивосток. Соискатель провела систематизацию, статистическую обработку полученных данных, сформулировала выводы и практические рекомендации.

Структура и объем диссертации. Основной текст диссертации изложен на 123 страницах машинописного текста и состоит из введения, аналитического обзора литературы, 4 глав собственных исследований, заключения, выводов, практических рекомендаций, перспективы дальнейшей разработки, сокращений, литературы. Диссертация содержит 24 таблицы и 11 рисунков. Список литературы содержит 60 источников отечественных и 34 источника зарубежных авторов.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Характеристика заболеваемости иерсиниозами на территории Якутии Первичные регистрационные данные по заболеваемости в Якутии были получены в 1974 г. В период с 1974 по 1998 гг. зарегистрировано 13 вспышек псевдотуберкулеза и кишечного иерсиниоза. Заболевания возникали в детских учреждениях и в рабочих поселках в весенне-осенний периоды года. Все вспышки носили пищевой характер и были связаны с употреблением салатов из «свежих овощей». Иерсиниозная этиология заболеваний обоснована клиникоэпидемиологическими данными, выделением культур иерсиний и обнаружением специфических антител.

Ретроспективный анализ заболеваемости псевдотуберкулезом и кишечным иерсиниозом показал, что иерсиниозы в Якутии встречаются повсеместно, с неравномерным их распределением по территории республики – чаще регистрируют в крупных городах (Нерюнгри, Мирный, Якутск), а также в некоторых сельскохозяйственных центральных районах (Горный). В 2009-2010 гг. отмечена тенденция к подъему заболеваемости кишечным иерсиниозом.

Заболеваемость населения региона кишечным иерсиниозом во все годы была ниже среднероссийского уровня в 2 – 4,5 раза. Из числа заболевших дети составляли 55,6%. Заболеваемость регистрировали как среди детей дошкольного, так и школьного возраста (Рисунок 1).

Рисунок 1. Заболеваемость детей кишечным иерсиниозом в районах Якутии в 2002 - 2013 гг.

За аналогичный период зарегистрировано 6 случаев псевдотуберкулеза, в том числе, среди детей до 14 лет; 4 случая, из них по 1 случаю в Булунском, Горном, Нерюнгринском, районах и в г. Якутске.

В феврале 2014 г. выделены 2 культуры Y. kristensenii из испражнений двух больных детей с острым аппендицитом. Изоляция таких штаммов от больных, при отсутствии других возбудителей, свидетельствовала об их потенциальной роли в качестве этиологических агентов.

Можно полагать, что истинная распространенность иерсиниозов значительно выше регистрируемой, поскольку в большом проценте случаев ОКИ, с которыми иерсиниоз имеет общие симптомы, этиологический агент не был выявлен, а исследований на иерсиниозы не проводилось.

Особенности распространения иерсиний на территории Якутии В течение 2002-2012 гг. из объектов окружающей среды бактериологическим методом выделено 237 культур, в том числе 4 культуры Y. рseudotuberculosis (1,7%), 122 культуры Y. enterocolitica биотипов 1А, 2, 4 (51,5%), а также 111 культур других видов иерсиний (Y. kristensenii, Y. intermedia, Y. frederiksenii)- 46,8% (Таблица 2). Чаще иерсинии выделяли от мелких млекопитающих.

–  –  –

Для идентификации иерсиний в ходе мониторинговых исследований объектов окружающей среды используется метод ПЦР. Его применение позволило существенно чаще обнаруживать иерсинии. Доля положительных результатов, полученных этим методом (детекция ДНК Y. рseudotuberculosis, Y. enterocolitica), составила 72% от всех положительных находок в исследовании.

При бактериологическом исследовании мелких млекопитающих частота выделения Y. рseudotuberculosis составила 0,13%, Y. enterocolitica биотипов 1А, 2, 4 - 0,62%, Y. kristensenii - 3,3%.

Всего выделено 124 культуры иерсиний, из которых Y. рseudotuberculosis составляет 3,2%; Y. enterocolitica -15,3%; Y. kristensenii - 63,7%; Y. frederiksenii Yersinia не идентифицированные до вида - 16,1%.

Из объектов окружающей среды выделено 113 культур, в том числе, 98 штаммов Y. enterocolitica биотипа 1А (86,8%), 5 культур биотипа 2 и 4 (4,4%), а также 10 штаммов других видов иерсиний (8,8%). При исследовании смывов методом ПЦР из различных объектов окружающей среды частота находок ДНК Y.

enterocolitica составила 6,4 % от общего числа исследованных смывов.

С 2002 г. в районах промышленного освоения Якутии впервые начали проводить микробиологический мониторинг за иерсиниями.

Установлено, что в районах промышленного освоения территорий Якутии:

строительства нефтепровода «ВСТО», в зонах алмазодобывающего комплекса в Арктических районах, на участках прохождения железной дороги - иерсинии обнаруживали значительно чаще, по сравнению с сельскохозяйственными районами, бактериологическим методом: 0,86±0,06% и 0,03±0,01%, соответственно, а также методом ПЦР: 41±1,96% и 2,9±0,36%, соответственно. В таблице 3 представлены данные наблюдений за 10 лет.

–  –  –

Установление источников и факторов распространения иерсиний на территориях промышленного освоения Якутии позволяет сделать заключение о циркуляции на указанных территориях не только Y. enterocolitica (патогенных биотипов), но и Y. kristensenii, патогенность которых в данном исследовании установить не удалось.

Результаты ПЦР могут служить сигнальными показателями для дальнейших целенаправленных бактериологических исследований.

Полученные результаты исследований подтвердили необходимость проведения ретроспективных серологических обследований населения в промышленных районах с целью установления истинной заболеваемости иерсиниозами.

Характеристика биологических свойств иерсиний, циркулирующих в условиях изменения климата Якутии В результате проведенных исследований получены данные о распространении на территории Якутии Y. pseudotuberculosis серотипа О:1 и Y. enterocolitica пяти серотипов – О:3 (биотип 4) - 7,1%; О:9 (биотип 2) -3%; О:5; О:6,31; О:7,8 (биотип 1А) -89,9%. Наибольшее число штаммов Y. enterocolitica принадлежало серотипу О:5 биотипу 1А (44,4%) (Таблица 4).

–  –  –

Применение ПЦР для исследования проб из объектов окружающей среды и клинического материала от больных За 2006-2012 гг. методом ПЦР проведено 2810 исследований проб из объектов окружающей среды. В результате исследования обнаружены ДНК Y.

рseudotuberculоsis в 5 пробах (от грызунов (0,1%) и из воды открытых водоемов (0,6%), Y. enterocolitica в 319 пробах (от грызунов (12%), из воды открытых водоемов (5,5%), почвы (1,4%) и других пробах (8%), что составило 0,17% и 11,3%, соответственно.

В 2013 г. методом ПЦР исследовано 447 проб из объектов окружающей среды, обнаружены ДНК Y. enterocolitica - в 119 пробах (26,6%); из 164 смывов, в том числе, с овощей - в 47 пробах (28,6%), из 199 проб органов мелких млекопитающих - в 45 (22,6%), из 15 проб воды открытых водоемов в 9 пробах (60%), из 28 образцов фекалий крупного рогатого скота - в 4 пробах (14,2%), из 23 образцов органов свиней - в 14 (60,8%).

В 2011-2012 гг. метод ПЦР был внедрен в клиническую практику. В результате обследования 203 больных, в том числе, 32 детей с состоянием дисбиоза (амбулаторные пациенты) и 171 стационарных больных из кишечного отделения Якутской городской инфекционной клинической больницы с диагнозами ОКИ, ОГЭК, частота обнаружения ДНК Y. enterocolitica у больных составила 6,4%, в том числе, у взрослых - 5,8%, у детей - 9,3%.

Комплексный подход, сочетающий ПЦР с бактериологическим методом исследования, существенно повышает эффективность лабораторной диагностики, равно как и мониторинговых исследований за циркуляцией иерсиний.

Молекулярно-генетическая характеристика штаммов по наличию некоторых генетических детерминант вирулентности Впервые изучена генетическая характеристика штаммов, выделенных на территории Якутии, по плазмидным и хромосомным факторам вирулентности: аil, ystА, ystB, ypm a/c, irp2, рYV (yscQ), ykst методом ПЦР.

С целью выявления генетических детерминант вирулентности исследован 171 штамм, в том числе Y. pseudotuberculosis - 3 штамма, Y. enterocolitica – 99, Y.

kristensenii - 50, Y. intermedia – 2, Y. frederiksenii – 2, не идентифицированные до вида Yersinia –15 штаммов.

Результаты исследования показали, что у 3 штаммов Y. рseudotuberculosis выявлен хромосомный ген, кодирующий суперантиген (ypm А/С), а также ген, локализованный на плазмиде вирулентности иерсиний pYV 42-48 МДа (yscQ). У 10 штаммов Y. еnterocolitica биотипов 2, 4 обнаружены генетические детерминанты вирулентности: локус прикрепления и инвазии (аil), ген термостабильного энтеротоксина ystА. У 71 штамма Y. еnterocolitica биотипа 1А при анализе генома выявлено наличие хромосомного гена ystВ, с которым связывают продукцию термостабильного энтеротоксина, играющего важную роль в патогенезе диарей. Полученные данные свидетельствуют о том, что изолированные культуры иерсиний обладают детерминантами патогенности. У 4 штаммов Y. kristensenii также определен ген ykst.

Изучение генетических характеристик штаммов, обусловленных генами gyrB и ompF Идентификацию патогенных видов рода Yersinia осуществляли методом многопраймерной ПЦР по выявлению гена ompF, кодирующего порин OmpF.

Изучены 68 штаммов, выделенных из объектов окружающей среды и от больных, в том числе, 6 – Y. pseudotuberculosis, 45 – Y. enterocolitica 1А, 2,4 биотипов; 2 – Y. kristensenii, 15- Y. spp.

Рисунок 2. Филогенетическое дерево иерсиний, построенное методом ближайших соседей на основе гена gyrB.

1 1 Символом показаны штаммы исследуемых иерсиний, последовательности остальных штаммов иерсиний представлены в базе данных GeneBank.

Для быстрой детекции бактерий рода Yersinia и дифференциации патогенных видов Y. pestis, Y. pseudotuberculosis и Y. enterocolitica штаммы были разделены на четыре группы: Y. spp. (один ПЦР-фрагмент длиной 450 п.н.), Y.

pseudotuberculosis (два ПЦР-фрагмента - 426 и 756 п.н.), Y. enterocolitica (два ПЦР-фрагмента - 465 и 663 п.н.). и Y. enterocolitica subsp. palearctica (три ПЦРфрагмента - 465, 663 и 270 п.н.).

Распределение по группам было следующим: в группе Y. spp - 22 штамма, из них 17 были определены как Y. enterocolitica 1A, 2 штамма - Y. kristensenii и 3 штамма - Y. spp. В группе Y. pseudotuberculosis – 6 штаммов; в группе Y. enterocolitica – 11 штаммов и в группе Y. enterocolitica subsp. palearctica - 20 штаммов Y.

enterocolitica. Была найдена группа, которая включала 9 штаммов, дающих два ПЦР-фрагмента длиной 465 и 270 п.н. Проведен углубленный анализ исследуемых штаммов Y. enterocolitica для точной видовой идентификации и молекулярно-генетической характеристики. В результате исследования определены нуклеотидные последовательности участка гена gyrB у 18 штаммов, представляющих все установленные ранее группы. На общем филогенетическом дереве штаммы Y. enterocolitica биотипа 1А группируются с типовыми штаммами биотипа 1А, формируя собственную ветвь в пределах вида Y. еnterocolitica (Рисунок 2). Определен высокий уровень дивергенции у некоторых штаммов Y. kristensenii и Y. intermedia.

GyrB-генотипирование подтверждает гетерогенную структуру Y. enterocolitica биотипа 1А.

Серологический скрининг антител к возбудителям псевдотуберкулеза и кишечного иерсиниоза в районах Якутии В 2002-2012 гг. серологическими методами обследовано 1687 больных и здоровых лиц с диагностической целью и ретроспективно в целях мониторинга заболеваемости иерсиниозами.

С помощью РНГА исследовано 1687 ОСК, обнаружены антитела к возбудителю псевдотуберкулеза – в 93 ОСК (5,5%), к возбудителю кишечного иерсиниоза О:3 – в 337 ОСК (19,9%), О:9 – в 14 ОСК (0,8%) (Рисунок 3).

n=1687 Рисунок 3. Результаты определения антител к возбудителям иерсиниозов методом РНГА, (%) В течение 2002-2012 гг. в Якутии с диагностической целью обследовано 415 пациентов.

Больные были разделены на несколько групп:

- с подозрением на псевдотуберкулез и кишечный иерсиниоз; - с острыми кишечными заболеваниями; - с гастроэнтероколитами; - с аллергическими заболеваниями; - длительно лихорадящие. ОСК от пациентов были исследованы с помощью РНГА. Установлено, что антитела к Y. pseudotuberculosis обнаружены в 29 ОСК, к Y. еnterocolitica О:3 в 108 ОСК, что составило 6,9% и 26%, соответственно. Антитела к возбудителям иерсиниозов обнаружены среди всех групп больных.

Для изучения содержания специфических антител к Y. enterocolitica и Y.

pseudotuberculosis впервые проведено ретроспективное серологическое исследование сывороток крови здорового населения. Всего обследовано 719 человек с помощью РНГА. Антитела к возбудителю псевдотуберкулеза выявлены у 38 человек, к возбудителю кишечного иерсиниоза серовара О:3 у 139 человек; О:9 - у 4 человек, что составило 5,2%, 19,3% и 0,5%, соответственно (Рисунок 4).

В ОСК, полученных от здорового населения из сельскохозяйственных и промышленных районов, методом РНГА обнаружено практически одинаковое количество ОСК, содержащих противоиерсиниозные антитела – 22,7% и 25,1%, соответственно. ОСК, полученные от больных людей с различной патологией, чаще содержали противоиерсиниозные антитела по сравнению с ОСК, полученными от здоровых людей – 33%±2,31 и 24,1%±1,2 (р0,05), соответственно.

Рисунок 4. Результаты определения антител у здоровых людей микрометодом РНГА, % Полученные данные свидетельствуют об инфицировании обследованных лиц иерсиниями.

Серологический скрининг иерсиниозов у сельскохозяйственных животных Исследовано 125 ОСК сельскохозяйственных животных (крупный рогатый скот – 88, лошади частных фермеров – 37). В результате обнаружены антитела к Y. рseudotuberculosis серотипа О:1 в 11 ОСК от общего количества ОСК (8,8%), в том числе, от крупного рогатого скота - 9, от лошадей - 2 и к Y. enterocolitica серотипа О:3 в 48 ОСК (38,4%), в том числе, крупного рогатого скота – в 40, лошадей -18; к Y. enterocolitica серотипа О:9 в 23 ОСК (18,4%), в том числе, крупного рогатого скота - 17, лошадей – 6 (Рисунок 5).

–  –  –

18,4 Рисунок 5. Частота обнаружения антител к возбудителям иерсиниозов у сельскохозяйственных животных, %.

Таким образом, высокие показатели содержания специфических антител к возбудителям иерсиниозов у сельскохозяйственных животных свидетельствуют об интенсивной циркуляции иерсиний на территориях животноводческих хозяйств.

Разработка системы микробиологического мониторинга за циркуляцией иерсиний в условиях Крайнего Севера На основании полученных результатов, предложен алгоритм микробиологического мониторинга за циркуляцией иерсиний (Рисунок 6). Наблюдение за циркуляцией возбудителей иерсиниозов рекомендуется проводить с профилактической целью в плановом порядке и по эпидемическим показаниям с учетом климатических условий и медико- географических зон территории Якутии.

Планово обследуют объекты общепита, жилые дома, детские и образовательные, лечебные учреждения и др. с целью определения степени заселенности грызунами. Проводят лабораторные исследования, чтобы определить частоту и динамику инфицированности грызунов, обсемененности сырья и продуктов питания (овощи-фрукты, молоко, мясо), обсемененности окружающей среды (тара, отсеки, емкости, оборудование, инвентарь и т.д.).

Отбор проб и исследования овощей, фруктов, смывов инвентаря, тары, оборудования проводятся специалистами центра гигиены и эпидемиологии по плану контрольно-надзорных мероприятий за соблюдением санитарного законодательства в соответствующих организациях (1 раз в 3 года), а так же бактериологические исследования проводятся с учетом Программы производственного контроля (СП 1.1.1058-01), ответственными за эту работу являются руководители соответствующих организаций (объекты общественного питания, образовательных учреждений, ЛПО, цеха обработки овощей, овощехранилища, продуктовые склады, птицефабрика и теплицы).

–  –  –

Исследования проб от людей и из объектов окружающей среды При контрольно-надзорных По программе производственного По ведомственной целевой мероприятиях,осуществляемых контроля, осуществляются программе «Стоп инфекция»

по предписанию УРПН Р(С)Я предприятиями производства, проводят специалисты хранения и реализации ЦГиЭ в Р(С)Я растительной продукции

–  –  –

Рисунок 6. Алгоритм микробиологического мониторинга С профилактической целью рекомендуется выборочно проводить серологический скрининг сельскохозяйственных животных и групп профессионального риска, особое значение также имеет выявление иерсиний среди мелких млекопитающих в природных и антропургических очагах.

По эпидемическим показаниям рекомендуем обследовать детей и взрослых из очагов инфекции. Лабораторному исследованию подлежит готовая продукция (яйца, тушки птиц, пастеризованное молоко, мясные продукты, салаты и др.), отбор и исследования проводится специалистами ФБУЗ «ЦГиЭ в РС (Я)».

Предложенный алгоритм позволит усовершенствовать микробиологический мониторинг за циркуляцией иерсиний, улучшить диагностику инфекций, обусловленных возбудителями иерсиниозов на территории Якутии.

Выводы Установлено, что на территории Якутии распространены различные 1.

виды бактерий рода Yersinia; с преобладанием Y. enterocolitica – 51,6%; Y.

kristensenii – 35,8%, а также циркуляция Y. рseudotuberculosis – 1,6%; Y. intermedia

– 0,8%; Y. frederiksenii – 1,2%; Yersinia spp.- 8,9%. Основным резервуаром в природных и антропургических очагах являются разные виды мелких млекопитающих, в основном серые крысы, полевки, лемминги.

На основе gyrB-генотипирования установлено, что штаммы Y. enterocolitica биотипа 1А имеют родство с типовыми штаммами биотипа 1А, формируя собственную ветвь в пределах вида Y. enterocolitica. Штаммы Y. kristensenii и Y.

intermedia имеют генетическое различие, обусловленное полиморфизмом гена gyrB. Из числа изученных штаммов Y. enterocolitica биотипа 1А серотипов О:6,31;

О:5; О:7,8 традиционно отнесенных к непатогенным, 80% содержат хромосомный ген термостабильного энтеротоксина ystB.

Эпидемический процесс при иерсиниозах на территории Якутии характеризуется спорадической заболеваемостью, неравномерностью ее распределения по городам и районам. Серологическими методами подтверждена иерсиниозная природа заболеваний людей с различной патологией (ОКИ; гастроэнтероколиты; длительно лихорадящие) в 33% случаев. Антитела к иерсиниям обнаружены также у здоровых лиц в 25,1% и в 22,7% из промышленных и сельскохозяйственных районов, соответственно.

Разработанная тактика микробиологического мониторинга, циркулирующих штаммов иерсиний, на основе использования лабораторных методов (ИФА, ПЦР, в том числе, многопраймерной ПЦР, генотипирования, серотипирования) позволит на территории Якутии осуществлять эффективный эпидемиологический надзор за иерсиниозной инфекцией.

Практические рекомендации

1. Эпидемиологам центра гигиены и эпидемиологии, в том числе, филиалов и структурных подразделений Республики Саха (Якутия) при проведении плановых контрольно-надзорных мероприятий необходимо обследовать объекты общепита, жилые, детские, образовательные и лечебные учреждения с целью определения степени заселенности объектов грызунами.

2. Специалистам бактериологических лабораторий филиалов и структурных подразделений центра гигиены и эпидемиологии в соответствии с планами контрольно-надзорных мероприятий и производственного контроля проводить бактериологическое исследование сырья, продуктов питания и объектов окружающей среды с целью определения частоты и степени обсемененности иерсиниями.

3. Специалистам лаборатории особо опасных инфекций центра гигиены и эпидемиологии в соответствии с планами контрольно-надзорных мероприятий, производственного контроля и ведомственной целевой программы «Стоп инфекция» определять частоту и динамику инфицированности грызунов, частоту и степень обсемененности иерсиниями сырья, продуктов питания и объектов окружающей среды бактериологическим методом и методом ПЦР.

4.Специалистам лаборатории особо опасных инфекций центра гигиены и эпидемиологии проводить серологический скрининг групп людей профессионального риска и сельскохозяйственных животных. По эпидемическим показаниям с целью установления источника инфекции и фактора передачи параллельно с бактериологическим методом использовать метод ПЦР.

5. Врачам клинико-диагностических лабораторий первичного звена с целью выявления заболеваний, обусловленных возбудителями псевдотуберкулеза и кишечного иерсиниоза, рекомендуется проводить диагностические исследования на иерсиниозы больных с диагнозами ОКИНЭ и ГЭК бактериологическим, иммунологическим методами и ПЦР.

Перспективы дальнейшей разработки темы

1. Планируется продолжить проведение микробиологического мониторинга за циркуляцией иерсиний на территории Якутии.

2. Продолжить углубленное изучение штаммов, выделенных на территории Якутии, с целью определения их генетических детерминант вирулентности и возможного влияния, обнаруженных генетических детерминант на патологический процесс, связанный с особенностями клинического проявления иерсиниозов.

3. Для определения этиологической значимости иерсиний продолжить обследования больных с диагнозом острая кишечная инфекция неустановленной этиологии на территории Якутии.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Кершенгольц, Б.М. Влияние глобальных климатических изменений на реализацию потенциала инфекционных заболеваний населения в Российской Арктике (на примере Якутии)», обзор. / Б.М. Кершенгольц, В.Ф. Чернявский, В.Е. Репин, О.И. Никифоров, О.Н. Софронова // Экология человека. – 2009. – №6. – С.

34–39.

2. Никифоров, О.И. Эпидемиологический потенциал природно-очаговых инфекций в зонах прохождения меганефтепровода ВСТО на территории Республики Саха (Якутия) / О.И. Никифоров, В.Ф. Чернявский, В.Т. Климов, Е.И. Андаев, О.Н. Софронова, Н.А. Антонов, И.А. Романова // Журнал инфекционной патологии. – Иркутск, 2009. – том 16, №3. – С. 160-162.

3. Софронова, О.Н. К вопросу циркуляции Yersinia pseudotuberculоsis среди мелких млекопитающих в Якутии / О.Н. Софронова, И.А. Романова, О.И. Никифоров, В.Ф.

Чернявский, С.С. Теленков, Е.А. Богумильчик // Журнал инфекционной патологии. – Иркутск, 2009. – том 16, №3. – С. 202.



Pages:   || 2 |

Похожие работы:

«АБДУЛЛОЕВ ХУШБАХТ САТТОРОВИЧ ИММУНОБИОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА ВИРУСА ИНФЕКЦИОННОГО БРОНХИТА КУР ГЕНОТИПА QX 06.02.02 – ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук Владимир – 2015 Работа выполнена в ФГАОУ ВО «Российский университет дружбы народов» и ФГБУ «Федеральный центр охраны здоровья животных» (ФГБУ «ВНИИЗЖ»). Макаров Владимир Владимирович,...»

«Герасимов Максим Александрович Аэрозольная санация воздушной среды кролиководческих помещений при профилактике респираторных заболеваний кроликов 06.02.05ветеринарная санитария, экология, зоогигиена и ветеринарносанитарная экспертиза АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание учёной степени кандидата биологических наук Москва 2015 Работа выполнена ФГБОУ ВПО «Московская государственная сельскохозяйственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии им. К.И. Скрябина» на кафедре...»

«Филимонова Марина Владимировна ФАРМАКОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА И РАДИОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ЭФФЕКТЫ ЛИНЕЙНЫХ И ЦИКЛИЧЕСКИХ ПРОИЗВОДНЫХ ИЗОТИОМОЧЕВИНЫ – КОНКУРЕНТНЫХ ИНГИБИТОРОВ СИНТАЗ ОКСИДА АЗОТА 14.03.06 – фармакология, клиническая фармакология 03.01.01 – радиобиология Автореферат диссертации на соискание учной степени доктора биологических наук Обнинск 2015 Работа выполнена в Медицинском радиологическом научном центре им. А.Ф. Цыба – филиале Федерального государственного бюджетного...»

«Потапова Анна Викторовна ВЛИЯНИЕ ЗАГРЯЗНЕНИЯ ТРОФИЧЕСКИХ СУБСТРАТОВ ТЯЖЁЛЫМИ МЕТАЛЛАМИ И ХЛОРОРГАНИЧЕСКИМИ СОЕДИНЕНИЯМИ НА КАЧЕСТВО ЛОСИНОГО МОЛОКА 03.02.08 – Экология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание учёной степени кандидата биологических наук Москва 2015 Работа выполнена в ФГБОУ ВПО «Костромской государственный университет им. Н. А. Некрасова» Научный руководитель: доктор биологических наук, Баранов Александр Васильевич Официальные оппоненты: Марзанов Нурбий...»

«ПОПОВ Игорь Юрьевич ВЫМИРАНИЕ MARGARITIFERA MARGARITIFERA (L.) НА ЮГЕ АРЕАЛА В РОССИИ И МОДЕЛЬ ПРИРОДОХРАННОГО ИССЛЕДОВАНИЯ 03.02.08 – экология Автореферат диссертации на соискания учёной степени доктора биологических наук Санкт-Петербург Работа выполнена в Санкт-Петербургском государственном университете Официальные оппоненты: Иешко Евгений Павлович, доктор биологических наук, Институт биологии Карельского научного центра РАН заведующий лабораторией паразитологии животных и...»

«ЛЮТОВА ЕКАТЕРИНА ВЛАДИМИРОВНА СОВЕРШЕНСТВОВАНИЕ ТЕХНОЛОГИИ ПЛАВЛЕНОГО СЫРА, ОБОГАЩЕННОГО ИКРОЙ И МОЛОКАМИ СЕЛЬДИ БАЛТИЙСКОЙ (CLUPEA HARENGUS MEMBRAS) 05.18.04 Технология мясных, молочных, рыбных продуктов и холодильных производств 05.18.07 Биотехнология пищевых продуктов и биологических активных веществ Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата технических наук Калининград 2015 Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном образовательном...»

«АСКАРОВ АЙБУЛАТ ДАМИРОВИЧ ОЦЕНКА СОСТОЯНИЯ И ЗАЩИТНЫХ ХАРАКТЕРИСТИК ДРЕВЕСНО-КУСТАРНИКОВЫХ НАСАЖДЕНИЙ В УСЛОВИЯХ Г. УФЫ ПРИ ДЕЙСТВИИ ИОНИЗИРУЮЩЕГО ИЗЛУЧЕНИЯ Специальности: 03.02.01. – Ботаника (биология), 03.02.08 – Экология (биология) Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Оренбург – 2015 Диссертационная работа выполнена на кафедре экологии и природопользования ФГБОУ ВПО «Башкирский государственный педагогический университет...»

«ВОЛОДИНА ИРИНА АЛЕКСАНДРОВНА ОЦЕНКА ИСХОДНОГО МАТЕРИАЛА ЛЮЦЕРНЫ ИЗМЕНЧИВОЙ ДЛЯ СЕЛЕКЦИИ ВЫСОКОПРОДУКТИВНЫХ СОРТОВ В УСЛОВИЯХ СРЕДНЕГО ПОВОЛЖЬЯ 06.01.05 – селекция и семеноводство сельскохозяйственных растений АВТОРЕФЕРАТ диссертация на соискание ученой степени кандидата сельскохозяйственных наук Пенза 2015 Диссертационная работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном научном учреждении «Поволжский научно-исследовательский институт селекции и семеноводства имени...»

«НАУМОВ Юрий Анатольевич АНТРОПОГЕННАЯ ТРАНСФОРМАЦИЯ ПРИБРЕЖНО-ШЕЛЬФОВЫХ ГЕОСИСТЕМ ОКРАИННЫХ МОРЕЙ ДАЛЬНЕГО ВОСТОКА РОССИИ 25.00.36 – Геоэкология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора географических наук Томск 2008 Работа выполнена на кафедре экологии и природопользования Владивостокского государственного университета экономики и сервиса Научный консультант: доктор географических наук, профессор Кочуров Борис Иванович Официальные оппоненты: доктор...»

«Жакова Светлана Николаевна РЕПРОДУКТИВНАЯ БИОЛОГИЯ НЕКОТОРЫХ ВИДОВ И КУЛЬТИВАРОВ РОДА СИРЕНЬ (SYRINGA L.) 03.02.01 – ботаника Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Пермь – 2015 Работа выполнена на кафедре ботаники и генетики растений Федерального государственного бюджетного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Пермский государственный национальный исследовательский университет» Научный руководитель:...»

«Фирстова Виктория Валерьевна Экспериментально-иммунологическое обоснование выбора стратегии оценки поствакцинального иммунитета против чумы и туляремии 14.03.09 Клиническая иммунология, аллергология АВТОРЕФЕРАТ диссертация на соискание ученой степени доктора биологических наук Оболенск 2015 Работа выполнена в ФБУН «Государственный научный центр прикладной микробиологии и биотехнологии» Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека...»

«ЧУЛКОВ Евгений Георгиевич МЕХАНИЗМЫ ВЛИЯНИЯ ФЛАВОНОИДОВ НА КАНАЛООБРАЗУЮЩУЮ АКТИВНОСТЬ НИСТАТИНА 03.01.03 — молекулярная биология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Санкт-Петербург Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном учреждении науки Институт цитологии Российской академии наук, Санкт-Петербург Научный руководитель: кандидат биологических наук, доцент Ольга Сергеевна Остроумова Институт цитологии РАН...»

«Новикова Любовь Александровна СТРУКТУРА И ДИНАМИКА ТРАВЯНОЙ РАСТИТЕЛЬНОСТИ ЛЕСОСТЕПНОЙ ЗОНЫ НА ЗАПАДНЫХ СКЛОНАХ ПРИВОЛЖСКОЙ ВОЗВЫШЕННОСТИ И ПУТИ ЕЕ ОПТИМИЗАЦИИ 03.02.01 – ботаника Автореферат диссертации на соискание учёной степени доктора биологических наук Саратов – 2011 Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Пензенский государственный педагогический университет имени В.Г. Белинского»...»

«Солнцев Роман Викторович Лесоводственная эффективность осушительной мелиорации в заболоченных сосняках и на их вырубках в условиях Среднего Урала (на примере стационара «Северный»). 06.03.02. – Лесоведение, лесоводство, лесоустройство и лесная таксация. АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата сельскохозяйственных наук Екатеринбург – 2014 Работа выполнена на кафедре лесной таксации и лесоустройства ФГБОУ ВПО «Уральский государственный лесотехнический...»

«Мечов Максим Павлович КЛИНИКО-МОРФОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ РЕПАРАТИВНОГО ОСТЕОГЕНЕЗА ПРИ ИМПЛАНТАЦИИ ФИКСАТОРОВ С ПОКРЫТИЕМ НА ОСНОВЕ МЕТАЛЛОВ IV ГРУППЫ 06.02.04 – ветеринарная хирургия Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук Москва – 2015 Работа выполнена на кафедре ветеринарной хирургии ФГБОУ ВПО «Казанская государственная академия ветеринарной медицины им. Н.Э. Баумана» Научный руководитель Шакирова Фаина Владимировна доктор...»

«УДК 574.587 Барбашова Марина Александровна МАКРОБЕНТОС ЛАДОЖСКОГО ОЗЕРА И ЕГО ИЗМЕНЕНИЯ ПОД ВЛИЯНИЕМ ФАКТОРОВ СРЕДЫ 03.02.08 – экология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Санкт-Петербург Работа выполнена в лаборатории гидробиологии Федерального государственного бюджетного учреждения науки Институт озероведения Российской академии наук Научные руководители: Слепухина Татьяна Дмитриевна, доктор биологических наук Курашов Евгений...»

«Шумилова Анна Алексеевна ПОТЕНЦИАЛ БИОРАЗРУШАЕМЫХ ПОЛИГИДРОКСИАЛКАНОАТОВ В КАЧЕСТВЕ КОСТНОПЛАСТИЧЕСКИХ МАТЕРИАЛОВ 03.01.06 – Биотехнология (в том числе бионанотехологии) АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Красноярск – 2015 Работа выполнена на базовой кафедре биотехнологии Института фундаментальной биологии и биотехнологии, Федерального государственного автономного образовательного учреждения высшего профессионального образования...»

«Бадтиев Юрий Саламович МЕТОДОЛОГИЯ БИОДИАГНОСТИКИ КАЧЕСТВА ОКРУЖАЮЩЕЙ СРЕДЫ ВОЕННЫХ ОБЪЕКТОВ 03.00.16 – Экология, 05.26.02 Безопасность в чрезвычайных ситуациях АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук Москва 2006 Работа выполнялась в период с 1986 по 2006 г.г. в НИИ «Медстатистика», НИЦ информационных технологий экстремальных проблем, Экологическом центре...»

«Чичерина Екатерина Александровна БИОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА ВИРУЛЕНТНЫХ ШТАММОВ ВИРУСА БОЛЕЗНИ МАРЕКА 06.02.02. «Ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология» АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук Владимир 2015 Работа выполнена в федеральном государственном бюджетном учреждении «Федеральный центр охраны здоровья животных» (г. Владимир) Ирза Виктор Николаевич, доктор ветеринарных...»

«Потапов Григорий Сергеевич СТРУКТУРА НАСЕЛЕНИЯ ШМЕЛЕЙ (HYMENOPTERA: APIDAE, BOMBUS LATR.) ЕВРОПЕЙСКОГО СЕВЕРА РОССИИ 03.02.08 – Экология (биология) АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Томск – 2015 Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном учреждении науки Институте экологических проблем Севера Уральского отделения Российской академии наук, в лаборатории экологии популяций и сообществ. Научный руководитель: доктор...»







 
2016 www.konf.x-pdf.ru - «Бесплатная электронная библиотека - Авторефераты, диссертации, конференции»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.