WWW.KONF.X-PDF.RU
БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА - Авторефераты, диссертации, конференции
 


Pages:     | 1 | 2 || 4 | 5 |   ...   | 6 |

«ЦИТОАРХИТЕКТОНИКА И СВОЙСТВА ПОВЕРХНОСТИ ЛИМФОЦИТОВ У ЗДОРОВЫХ ЛЮДЕЙ (ДОНОРОВ) И ПРИ РАЗВИТИИИ ЛИМФОПРОЛИФЕРАТИВНЫХ ПРОЦЕССОВ НА ОСНОВЕ АТОМНО-СИЛОВОЙ МИКРОСКОПИИ ...»

-- [ Страница 3 ] --

Учет числа ядрышек в лимфоцитах. Подсчет числа ядрышек в лимфоцитах периферической крови несет прогностическую и диагностическую значимость при различных формах онкопатологии (Минина В.И., 2004). Цитологические препараты ядрышек из суспензии лейкоцитов готовили по следующей схеме: каплю лейкосуспезии наносили на чистые обезжиренные предметные стекла и проводили селективную окраску азотонокислым серебром по методу Howell W.M., Black D.A. (1980). На подсохшую суспензию лейкоцитов наносили 15 мкл 50% раствора нитрата серебра, 5 мкл дистиллированной воды и 10 мкл 2% раствора желатина, приготовленного на 0,1% муравьиной кислоте. Препараты инкубировали в термостате 10 мин при 55°С. Затем промывали водопроводной водой и окрашивали в течение 3 мин красителем Гимза, с последующей промывкой в проточной воде.

Учет показателей осуществляли следующим образом: на препаратах, полученных из суспензии лейкоцитов, инкубированных с митогенами, выделяли разные типы лимфоцитов по размерам, для анализа на таких препаратах учитывали нормоциты и лимфобласты с хорошо различимыми ядрышками.

На препаратах, приготовленных из лейкозуспензии, инкубированной без воздействия митогенов, учитывали все лимфоцитарные клетки. С использованием светового микроскопа Zeiss Axiostar plus (Германия, 2006) подсчитывали общее количество ядрышек на 100 клеток и среднее арифметическое на ядро одного лимфоцита.

Метод оценки пролиферативного потенциала лимфоцитов. С целью исследования функциональной активности иммунокомпетентных клеток в работе проведена оценка реакции бласттрансформации лимфоцитов здоровых людей и больных лейкозом морфологическим способом (Маркина Т.Н. и др., 2011). На мазках лимфоцитов из крови больных лейкозом, культивированных без митогенов, проводили подсчет бластных форм. Цитологические препараты готовили по стандартным общепринятым методикам, окраску проводили по Романовскому-Гимзе.

Показатель пролиферативной активности определяли, подсчитывая на мазках число лимфобластов на 1000 лимфоидных клеток. Индекс пролиферации вычисляли как соотношение бластных форм к общему количеству клеток и выражали в процентах.

2.4. Методы статистической обработки

Экспериментальные данные обработаны методами вариационной статистики с использованием пакета анализа «Microsoft Excel 7.0» на персональном компьютере. Результаты исследований представлены в виде среднеарифметических значений с их средними стандартными ошибками. Исследуемые параметры находятся в пределах нормального распределения. Статистический анализ проведен с использованием критерия Стьюдента для 5%-го уровня значимости (Лакин Г.Ф., 1968; Платонов А.Е., 2000).

Глава 3. ЦИТОАРХИТЕКТОНИКА И ФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ

СВОЙСТВА ЛИМФОЦИТОВ КРОВИ

ЗДОРОВЫХ ЛЮДЕЙ И БОЛЬНЫХ ЛЕЙКОЗОМ

3.1. Гематологические показатели крови больных лейкозом По данным исследования гематологического профиля больных лейкозом установлено снижение числа эритроцитов у пациентов с диагнозом острый миелоблатстный тип. Так, число эритроцитов и концентрация гемоглобина снижены соответственно на 35% и 39% (р0,05) по сравнению с показателями крови доноров. Число тромбоцитов и их средний объем в группе больных ОМЛ были в пределах нормы (табл. 1).

Таблица 1. Гематологические показатели крови

–  –  –

В группах больных острым и хроническим лимфобластным типами лейкоза показатели системы красной крови были в пределах, характерных для здоровых людей.

Лейкоформула крови больных, как острой, так и хронической формами лимфобластного лейкоза, существенно изменилась по сравнению с контролем (табл. 2).

<

–  –  –

Количество лейкоцитов в крови больных ОЛЛ и ХЛЛ возросло соответственно на 975% и 503% (р0,05), а в стадии ремиссии острого лейкоза снизилось на 34% (р0,05) по сравнению с контролем. Также изменилось процентное соотношение различных субпопуляций лейкоцитов. У больных ОЛЛ в стадии обострения и ХЛЛ наблюдали увеличение числа лимфоцитов соответственно на 82% и 57% (р0,05), и снижение числа нейтрофилов соответственно на 57% и 30% (р0,05). Несмотря на снижение общего числа лейкоцитов в крови больных ОЛЛ на стадии ремиссии, продукция лимфоцитов и моноцитов возросла соответственно на 79% и 317% (р0,05), а нейтрофилов и эозинофилов снизилась соответственно на 60% и 70% (р0,05) по сравнению с контролем.

В группе больных ОМЛ изменение общего числа лейкоцитов не выявлено, однако количество эозинофилов снизилось на 46% (р0,05) по сравнению с контролем.

Бласты миелоидного ряда определяли цитохимической реакцией по активности миелопероксидазы (МПО). На рисунке 7 показаны клетки со слабоположительной реакцией на МПО.

–  –  –

Рис. 8. Лимфобласты в крови больного ОЛЛ.

а – лимфобласты. Окраска гематоксилином и эозином; б – положительная PAS-реакция в лимфобласте (стрелка).

В крови больных лимфобластным лейкозом на стадии ремиссии бластных форм не обнаружено. Морфологически лимфоциты не отлич ались от клеток здоровых людей (рис. 9).

Рис. 9. Лимфоцитов в крови больных ОЛЛ в ремиссии.

ХЛЛ дифференцировали при помощи стандартного набора антител для Т- и В-лимфоцитов. Морфология клеток лимфоидного ряда в крови больных ХЛЛ и результаты проточно-цитометрического анализа CD19+ клеток показаны на рисунке 10. На точечных графиках выделена популяция злокачественных клеток позитивная по CD5 антигену.

–  –  –

Таким образом, показатели красной крови у больных как острой, так и хронической формой лимфобластного лейкоза соответствуют норме. Для больных миелобластным лейкозом характерно снижение числа эритроцитов и концентрации гемоглобина. В лейкоформуле выявлены изменения в группах больных ОЛЛ в стадии обострения и ХЛЛ после лечения. В частности, увеличен процент лимфоцитов и снижен процент нейтрофилов. В группе больных ОЛЛ на стадии ремиссии на фоне снижения общего числа лейкоцитов, в лейкоформуле отмечен сдвиг в сторону увеличения продукции мононуклеаров и снижения числа нейтрофилов. В группе больных ОМЛ в лейкоформуле установлено снижение процентного содержания эозинофилов. В группе больных ХЛЛ установлено присутствие в периферическом русле популяции злокачественных клеток, которые экспрессируют на своей поверхности легкие цепи иммуноглобулинов CD19+, вследствие чего относятся к Впопуляции, клетки которой позитивны по CD 5 антигену.

3.2. Структурно-функциональные свойства лимфоцитов крови больных лейкозом и здоровых людей В культуре лимфоцитов из крови больных ОМЛ, так же как и в культуре клеток доноров не обнаружено бластных форм лимфоидного ряда. Лимфоциты больных ОМЛ имели правильную округлую форму, модуль Юнга которых возрастал на 64% (р0,05) по сравнению с клетками доноров (табл. 3).

–  –  –

При исследовании свойств клеточной поверхности были построены карты локальной упругости, анализируя которые выявлены участки плазмалеммы, характеризующиеся различной жесткостью. Для лимфоцитов больных ОМЛ было характерно снижение жесткости по краю цитоплазмы в среднем на 43,5% (р0,05). В области ядра жесткость клеток увеличилась на 164,3% (р0,05) в сравнении с лимфоцитами доноров (табл. 4).

–  –  –

Изменение механических свойств клеточной поверхности лимфоцитов больных ОМЛ происходит одновременно с повышением потенциала поверхности и миграционной активности клеток. Так, ПП лимфоцитов больных ОМЛ увеличился на 8% (р0,05) по сравнению с лимфоцитами доноров (см.

табл. 3).

Число мигрировавших лимфоцитов в группе больных ОМЛ возросло на 162% (р0,05) по сравнению с лимфоцитами доноров (табл. 5).

–  –  –

На поверхности лимфоцитов больных ОМЛ выявлены однотипные глобулярные выступы, которые локально были собраны в структуры дугообразной формы, что придавало ее «рифленость» (рис. 11).

–  –  –

Рис. 11. Рельеф поверхности лимфоцитов: а – доноров, б – больных ОМЛ (стрелками показаны дугообразные скопления глобулярных выступов).

Высота глобулярных выступов лимфоцитов больных ОМЛ увеличилась на 91% (р0,05), на фоне уменьшения ширины и их общего количества соответственно на 25% и 61% (р0,05) по сравнению с лимфоцитами доноров.

Ширина углублений плазмалеммы увеличилась на 450% (р0,05), а их количество – уменьшилось на 77% (р0,05; табл. 7).

–  –  –

В лимфоцитах больных ОМЛ и доноров выявлена сеть цитоскелетных структур, расходящаяся от ядра радиально. Плотность расположения фибрилл, при наблюдении в световой микроскоп была настолько велика, что идентифицировать отдельные нити не представлялось возможным, ввиду чего проводили анализ пучков цитоскелетных структур, состоящих из скопления фибрилл (рис. 12).

–  –  –

Рис. 12. Элементы цитоскелета в лимфоцитах: а – доноров, б – больных ОМЛ (стрелкой показаны пучки структур цитоскелета, располагающиеся вокруг ядра).

Визуальных различий в строении и расположении элементов цитоскелета лимфоцитов больных ОМЛ по сравнению с клетками доноров не выявлено. Длина пучков в группе больных ОМЛ достоверно не отличалась от контроля (табл. 9).

–  –  –

В группе больных ОМЛ пролиферирующих лимфоцитов не обнаружено, но число ядрышек в клетках увеличилось на 95% (р0,05) по сравнению с лимфоцитами доноров (см. табл. 8).

В группе больных ОЛЛ при микрокопировании мазков обнаружены бластные формы с неправильными контурами цитоплазмы и ядром, занимающим большую часть клетки. Жесткость поверхности таких клеток снижалась с одновременным повышением ПП. Модуль Юнга лимфоцитов больных ОЛЛ уменьшился на 54% (р0,05) по сравнению с группой доноров (см. табл. 3).

У больных ОЛЛ установлено снижение модуля упругости по краю цитоплазмы лимфоцитов в среднем на 57% (р0,05), в области ядра на 66% (р0,05) по сравнению с группой доноров (см. табл. 4). По периферии цитоплазмы лимфоцитов больных ОЛЛ зафиксировано наименьшее значение модуля Юнга (точки 1 и 25) – 1,2±0,3 мПа.

Потенциал поверхности лимфоцитов больных ОЛЛ был повышен на 34% (р0,05) по сравнению с лимфоцитами доноров (см. табл. 3).

Количество мигрировавших лимфоцитов в группе больных ОЛЛ возросло на 79% (р0,05) по сравнению с лимфоцитами доноров (см. табл. 5).

Площадь поверхности, объем и диаметр лимфоцитов больных ОЛЛ возросли соответственно на 67%, 101% и 68% (р0,05), при этом их высота снизилась на 44% (р0,05) по сравнению с дифференцированными лимфоцитами доноров (см. табл. 6).

Рельеф поверхности лимфоцитов больных ОЛЛ был сглажен (рис. 13) по сравнению с клетками доноров. Высота и ширина глобулярных выступов плазмалеммы лимфоцитов больных ОЛЛ были снижены на 85% и 78% (р0,05), при этом их количество уменьшилось на 57% (р0,05) по сравнению с лимфоцитами доноров. Глубина инвагинаций на поверхности мембраны и их количество уменьшились соответственно на 55% и 44% (р0,05) по сравнению с лимфоцитами доноров (см. табл. 7).

Рис. 13. Рельеф поверхности лимфоцитов больных ОЛЛ.

Элементы цитоскелета в подвижных лимфоцитах больных ОЛЛ были собраны в тонкие длинные отдельно лежащие пучки, расходящиеся от ядра радиально (рис. 14).

Рис. 14. Элементы цитоскелета в лимфоцитах больных ОЛЛ (стрелкой показаны пучки структур цитоскелета, располагающиеся вокруг ядра).

Длина пучков цитоскелетных структур лимфоцитов больных ОЛЛ увеличилась на 126% (р0,05) по сравнению с группой доноров (см. табл. 8).

В суспензии культивированных лимфоцитов больных ОЛЛ установлено наличие пролиферирующих клеток лимфоидной линии (рис. 15).

%

–  –  –

Рис. 15. Пролиферативный потенциал лимфоцитов больных различными формами лейкоза.

Число ядрышек в лимфоцитах больных ОЛЛ увеличилось на 505% (р0,05) по сравнению с лимфоцитами доноров (см. табл. 8). В лимфоцитах больных ОЛЛ отмечено достоверное увеличение числа ядрышек на одно ядро на 146% (р0,05) по сравнению с клетками доноров.

В суспензии культивированных лимфоцитов больных ОЛЛ в ремиссии не выявлено бластных форм лимфоидного ряда. Модуль Юнга лимфоцитов уменьшился на 36% (р0,05) по сравнению с группой доноров (см. табл. 3).

У больных ОЛЛ в ремиссии установлено снижение модуля упругости по краю цитоплазмы лимфоцитов в среднем на 56% (р0,05), в области ядра на 62% (р0,05) по сравнению с группой доноров (см. табл. 4).

Потенциал поверхности лимфоцитов больных ОЛЛ в ремиссии был повышен на 29% (р0,05) по сравнению с лимфоцитами доноров (см. табл. 3).

Количество мигрировавших лимфоцитов в группе больных ОЛЛ в ремиссии снизилось на 28% (р0,05) по сравнению с лимфоцитами доноров (см. табл. 5).

Диаметр и объем клеток увеличились соответственно на 41% и 32% (р0,05) по сравнению с лимфоцитами доноров. В лейкосуспезии больных ОЛЛ в ремиссии выделены два типа лимфоцитов с разной конфигурацией поверхности плазмалеммы (рис. 16).

–  –  –

Рис. 16. Рельеф поверхности лимфоцитов.

а – больных ОЛЛ в ремиссии (1 тип), б – больных ОЛЛ в ремиссии (2 тип) (1– крупные инвагинации плазмалеммы; 2 – глобулярные выступы).

Для лимфоцитов с первым типом клеточной поверхности характерно наличие мелких глобулярных структур. Одновременно с выступами встречались крупные инвагинации плазмалеммы. Для лимфоцитов больных ОЛЛ в ремиссии со вторым типом рельефа клеточной поверхности характерно наличие глобулярных образований сферической формы и редко встречающиеся мелкие инвагинации.

Высота и ширина глобулярных структур лимфоцитов 1 типа уменьшились на 89% и 80% (р0,05), при этом их число возросло на 72% (р0,05) по сравнению с клетками доноров. Глубина и ширина инвагинаций плазмалеммы увеличились на 304% и 1275% (р0,05) по сравнению с аналогичными структурами лимфоцитов доноров. Ширина глобулярных образований лимфоцитов 2 типа больных ОЛЛ в ремиссии увеличилась на 47% (р0,05), а их высота снизилась на 15% (р0,05) по сравнению с лимфоцитами доноров.

Инвагинации на клеточной поверхности лимфоцитов больных ОЛЛ в ремиссии практически не встречались, их число уменьшилось на 89% (р0,05), а глубина – на 54% (р0,05) в сравнении с клетками доноров.

В лимфоцитах больных ОЛЛ в ремиссии со сниженной миграционной активностью основная масса элементов цитоскелета располагалась отдельными структурами в области околоядерного пространства (рис. 17).

Рис. 17. Элементы цитоскелета в лимфоцитах больных ОЛЛ в ремиссии (стрелкой показаны пучки структур цитоскелета, располагающиеся вокруг ядра).

Число ядрышек в лимфоцитах больных ОЛЛ в ремиссии увеличилось соответственно на 80% (р0,05) по сравнению с лимфоцитами доноров (см.

табл. 8).

В группе больных ХЛЛ после лечения были обнаружены лимфобласты.

Форма клеток варьировала от округлой до неправильной. Цитоплазма клеток располагалась в виде тонкого ободка, околоядерное пространство было четко выражено. Жесткость таких лимфоцитов возросла на 187% (р0,05) по сравнению с клетками доноров (см. табл. 3). Модуль упругости лимфоцитов увеличился по периферии клетки и в области околоядерного пространства в среднем соответственно на 176% и 259% (р0,05) по сравнению с клетками доноров. Наиболее жесткие участки поверхности выявлены в области ядра лимфоцитов больных ХЛЛ (точка 14) – 15,7±0,2 мПа.

Потенциал поверхности лимфоцитов больных ХЛЛ был повышен на 456% (р0,05) по сравнению с лимфоцитами доноров (см. табл. 3).

Миграционная активность «жестких» лимфоцитов больных ХЛЛ была снижена. Число вышедших из капилляра клеток уменьшилось на 30% (р0,05) по сравнению с лимфоцитами доноров (см. табл. 5).

Площадь поверхности, объем, диаметр и высота лимфоцитов больных ХЛЛ увеличились на 53%, 88%, 49% и 89% (р0,05) по сравнению с клетками доноров (см. табл. 6).

Конфигурация поверхности лимфоцитов больных ХЛЛ имела ярко выраженный рифленый характер. Для клеток была характерна группировка глобулярных выступов на поверхности плазмалеммы, которые имели неправильную форму (рис. 18).

Рис. 18. Рельеф поверхности лимфоцитов больных ХЛЛ (стрелкой показаны скопления глобулярных выступов).

Высота и ширина глобулярных образований плазмалеммы лимфоцитов больных ХЛЛ увеличились на 13% и 120% (р0,05), их количество снизилось на 43% (р0,05) по сравнению с контролем. Глубина и ширина инвагинаций плазмалеммы клеток возросли на 85% и 571% (р0,05), при этом общее количество инвагинаций уменьшилось на 67% (р0,05; см. табл. 7).

Для малоподвижных лимфоцитов больных ХЛЛ характерна максимальная локализация цитоскелетных структур в околоядерной зоне по сравнению с клетками доноров. Пучки фибрилл были как прямой, так и извитой структуры, располагающиеся в околоядерной зоне (рис. 19).

Рис. 19. Элементы цитоскелета в лимфоцитах больных ХЛЛ (стрелкой показаны пучки структур цитоскелета, располагающиеся вокруг ядра).

В группе пациентов с ХЛЛ среди пролиферирующих лимфобластов встречались пролимфоцитарные формы клеток. Число ядрышек в лимфоцитах больных ХЛЛ увеличилось на 380% (р0,05) по сравнению с лимфоцитами доноров (см. табл. 8). В лимфоцитах отмечено достоверное увеличение числа ядрышек на одно ядро на 115% (р0,05).

Таким образом, как для лимфоцитов больных разными формами лимфоцитарных лейкозов, так и больных миелобластным лейкозом установлено увеличение размеров клеток, числа ядрышек в ядре и увеличение ПП клеточной мембраны. В рельефе поверхности лимфоцитов больных ОМЛ и ХЛЛ увеличилась высота глобулярных структур, которые формировали скопления дугообразной и неправильной формы. Упругость клеток снижена. Жесткие лимфоциты больных ХЛЛ имели наименьшую миграционную активность.

В группе больных ОЛЛ жесткость клеток снижена, при этом морфологические образования рельефа поверхности менее выражены. В культуре клеток больных ОЛЛ в ремиссии обнаружены лимфоциты с двумя морфологическими типами клеточной поверхности. Однако, несмотря на существенное различие в морфологии между этими типами клеток, упругоэластические свойства их были сходны.

Соответствия между жесткостью клеточной поверхности и миграционной активность лимфоцитов не установлено. Так, жесткие лимфоциты больных ОМЛ более подвижны, чем лимфоциты больных ОЛЛ в ремиссии с меньшей жесткостью. У лимфоцитов больных ОЛЛ одновременно с уменьшением жесткости и увеличением миграционной активности происходила перестройка структур цитоскелета, которые группировались в тонкие длинные фибриллы, расходящиеся от ядра клетки.

Глава 4. ЦИТОАРХИТЕКТОНИКА И ФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ

СВОЙСТВА МИТОГЕН-СТИМУЛИРОВАННЫХ

ЛИМФОЦИТОВ

4.1. Структурно-функциональные свойства Кон А-стимулированных лимфоцитов В проведенном исследовании изучены морфология и функциональные свойства нормальных и опухолевых лимфоцитов, трансформированных митогенами Кон А и ФГА.

В лейкосуспензиях больных лейкозом и доноров, инкубированных с Кон А, обнаружены популяции клеток разных размеров. Микроциты и нормоциты лейкосуспензии доноров имели округлую форму. Лимфобласты обладали неправильными контурами цитоплазмы, располагающейся широким ободком вокруг ядра.

В рельефе поверхности микроцитов доноров отмечено присутствие глобулярных образований (рис. 20).

Рис. 20. Рельеф поверхности микроцитов доноров (стрелкой показаны глобулярные выступы).

Элементы цитоскелета в субпопуляции микроцитов доноров представлены сетью, направленной радиально от ядра клетки к периферии (рис. 21).

Рис. 21. Элементы цитоскелета микроцитов доноров (стрелкой показаны пучки цитоскелетных структур, располагающихся вокруг ядра).

Анализируя рельеф поверхности культивированных лимфоцитов больных лейкозом и доноров, стимулированных Кон А, установлено изменение клеточной поверхности в ряду микроциты – нормоциты – бласты. Переход субпопуляции микроцитов в более зрелые формы – нормоциты – сопровождался потерей большей части морфологических образований плазмалеммы.

Глобулярные выступы плазмалеммы нормоцитов доноров имели различные размеры, крупных инвагинаций не выявлено (рис. 22).

Рис. 22. Рельеф поверхности нормоцитов доноров.

В субпопуляции нормоцитов доноров наблюдали смещение ядра к полюсу клетки, в результате чего сеть элементов цитоскелета располагалась с одной стороны, пронизывая слой не полностью лизированной цитоплазмы (рис. 23).

Рис. 23. Элементы цитоскелета нормоцитов доноров (стрелкой показаны пучки цитоскелетных структур, располагающихся вокруг ядра).

Рельеф лимфобластов доноров был сглажен (рис. 24).

Рис. 24. Рельеф поверхности лимфобластов доноров.

В лимфобластах доноров, инкубированных с Кон А, визуализировали густую сеть из тонких пучков элементов цитоскелета, располагающихся в зоне перинуклеарного пространства, отдельные пучки которых расходились радиально к периферии (рис. 25).

Микроциты больных ОМЛ имели округлую форму, сходную с культивированными клетками доноров, ядро занимало большую часть микроцита.

Под влиянием Кон А жесткость микроцитов больных ОМЛ увеличилась на 64% (р0,05) по сравнению с лимфоцитами доноров (табл. 9).

Рис. 25. Элементы цитоскелета лимфобластов доноров (стрелкой показаны пучки цитоскелетных структур, располагающихся вокруг ядра).

–  –  –

Рельеф микроцитов больных ОМЛ представлен мелкими глобулярными выступами, формирующими возвышенные структуры на поверхности клетки (рис. 26).

Рис. 26. Рельеф поверхности микроцитов больных ОМЛ.

Высота и ширина глобулярных выступов микроцитов ОМЛ уменьшились соответственно на 96% и 93% (р0,05) по сравнению с аналогичными параметрами лимфоцитов доноров. Общее число глобулярных структур лимфоцитов больных ОМЛ увеличилось на 137% (р0,05) по сравнению с микроцитами в контроле (табл. 12).

Таблица 12. Рельеф поверхности лимфоцитов в условиях стимуляции Кон А

–  –  –

Примечание: а – статистически достоверные различия между значениями лимфоцитов доноров и больных лейкозом по критерию Стьюдента при р0,05.

Различий в пространственном расположении пучков, а также длине цитоскелетных структур в субпопуляции микроцитов между группами больных ОМЛ и доноров не наблюдали (табл. 13; рис. 27).

Таблица 13. Длина пучков элементов цитоскелета лимфоцитов в условиях стимуляции Кон А, мкм <

–  –  –

Примечание: а – статистически достоверные различия между значениями лимфоцитов доноров и больных лейкозом по критерию Стьюдента при р0,05.

Рис. 27. Элементы цитоскелета микроцитов больных ОМЛ (стрелкой показаны пучки цитоскелетных структур, располагающихся вокруг ядра).

В субпопуляции нормоцитов больных ОМЛ встречались формы с цитоплазмой, расположенной в виде тонкого ободка, либо широкого участка, причем ядро в таких клетках было смещено к полюсу. Жесткость нормоцитов снизилась в зоне ядра в среднем на 71% (р0,05), а по периферии клетки возросла в среднем на 114% (р0,05) по сравнению с лимфоцитами доноров (см.

табл. 11). Площадь поверхности и объем нормоцитов увеличились соответственно на 35% и 133% (р0,05) по сравнению с нормоцитами доноров (см.

табл. 12). Высота глобулярных структур нормоцитов больных ОМЛ снизилась на 89% (р0,05) по сравнению с клетками доноров (рис. 28). Ширина выступов лимфоцитов больных ОМЛ уменьшилась на 58% (р0,05) по сравнению с клетками в контроле (см. табл. 13). Под влиянием Кон А на поверхности нормоцитов увеличилось количество глобулярных выступов у больных ОМЛ на 110% (р0,05) по сравнению с клетками доноров.

Рис. 28. Рельеф поверхности нормоцитов больных ОМЛ.

Глубина инвагинаций плазмалеммы нормоцитов больных ОМЛ снизилась на 76% (р0,05) по сравнению с нормоцитами здоровых людей. Ширина углублений поверхности клеток больных ОМЛ уменьшилась на 26% (р0,05) по сравнению с нормоцитами доноров.

Цитоскелетные структуры нормоцитов больных ОМЛ располагались плотной сетью в зоне околоядерного пространства (рис. 29).

Рис. 29. Элементы цитоскелета нормоцитов больных ОМЛ (стрелкой показаны пучки цитоскелетных структур, располагающихся вокруг ядра).

Достоверных различий между значениями длины пучков цитоскелетных структур нормоцитов больных ОМЛ и донорами не установлено (см. табл. 13).

В лейкосуспензии из крови больных ОМЛ, инкубированной с Кон А, бластных форм не обнаружено.

Под влиянием Кон А ПП лимфоцитов больных различными формами лейкоза увеличился (табл. 14). Так, в группе больных ОМЛ ПП возрастал на 298% (р0,05) по сравнению с клетками доноров.

Таблица 14. Потенциал поверхности (ПП) лимфоцитов в условиях стимуляции Кон А

–  –  –

Примечание: а – статистически достоверные различия между значениями лимфоцитов доноров и больных лейкозом по критерию Стьюдента при р0,05.

В результате проведенных исследований установлено снижение двигательной активности лимфоцитов больных разными формами лейкоза под влиянием Кон А. Число мигрировавших клеток больных ОМЛ уменьшился на 57% (р0,05) по сравнению с лимфоцитами доноров. Двигательную активность клеток анализировали, используя индекс торможения миграции лимфоцитов (ИТМЛ). Достоверное увеличения ИТМЛ наблюдали в группе больных ОМЛ на 56% (р0,05) по сравнению с донорами (табл. 15).

–  –  –

Число ядрышек на одно ядро в лимфоцитах больных ОМЛ уменьшилось на 52% (р0,05) по сравнению с группой доноров.

В группе больных ОЛЛ микроциты имели правильную округлую форму и ядро, занимающее большую часть клетки. Модуль клеток снизился в среднем на 5% (р0,05) по сравнению с лимфоцитами доноров (см. табл. 11). Модуль упругости микроцитов больных ОЛЛ по периферии клеток увеличился в среднем на 22% (р0,05) по сравнению с микроцитами доноров.

Под влиянием Кон А площадь поверхности, объем, диаметр и высота микроцитов снизились соответственно на 64%, 81%, 49% и 67% (р0,05) по сравнению с культивированными клетками доноров (см. табл. 11).

В рельефе поверхности микроцитов больных ОЛЛ под влиянием Кон А наблюдали появление крупных глобулярных образований и глубоких инвагинаций (рис. 30).

Рис. 30. Рельеф поверхности микроцитов больных ОЛЛ (1- глобулярные выступы, 2 – инвагинации).

Глубина и ширина инвагинаций поверхности, а так же высота глобулярных выступов микроцитов больных ОЛЛ увеличились соответственно на 781%, 321% и 133% (р0,05), при этом количество выступов возросло на 77% (р0,05) по сравнению с клетками доноров (см. табл. 12).

Различий в пространственном расположении пучков цитоскелетных структур в субпопуляции микроцитов между группами больных ОЛЛ и доноров не наблюдали (рис. 31).

Рис. 31. Элементы цитоскелета микроцитов больных ОЛЛ (стрелкой показаны пучки цитоскелетных структур, располагающихся вокруг ядра).

Нормоциты больных ОЛЛ имели округлые контуры цитоплазмы и ядра.

Для них характерно снижение жесткости в зоне ядра в среднем на 51% (р0,05), а по периферии клетки – ее повышение в среднем на 100% (р0,05) по сравнению с лимфоцитами доноров.

Площадь поверхности нормоцитов уменьшилась на 15% (р0,05) по сравнению с клетками доноров. Высота глобулярных структур нормоцитов больных ОЛЛ снизилась на 65% (р0,05) по сравнению с клетками доноров.

Под влиянием Кон А на поверхности нормоцитов увеличилось количество глобулярных выступов у больных ОЛЛ на 370% (р0,05) по сравнению с клетками доноров (рис. 32).

Рис. 32. Рельеф поверхности нормоцитов больных ОЛЛ.

Глубина инвагинаций плазмалеммы нормоцитов больных ОЛЛ снизилась на 56% (р0,05) по сравнению с нормоцитами доноров. Ширина углублений поверхности клеток больных ОЛЛ уменьшилась на 16% (р0,05). Количество углублений на поверхности клеток больных ОЛЛ уменьшилось на 54% (р0,05) по сравнению с нормоцитами доноров.

В популяции нормоцитов больных ОЛЛ пучки элементов цитоскелета располагались в области околоядернного пространства в виде расходящихся от ядра структур (рис. 33).

Достоверных различий между значениями длины пучков цитоскелетных структур нормоцитов у больных ОЛЛ и доноров не установлено (см. табл.

13).

Рис. 33. Элементы цитоскелета нормоцитов больных ОЛЛ (стрелкой показаны пучки цитоскелетных структур, располагающихся вокруг ядра).

Бласты больных ОЛЛ были правильной округлой формы, среди преобладающих широкоцитоплазматических клеток встречались лимфобласты с узким ободком цитоплазмы. По данным атомно-силовой спектроскопии установлено увеличение модуля Юнга лимфобластов больных ОЛЛ на 20% (р0,05) в зоне ядра и уменьшение его на 21% (р0,05) по периферии цитоплазмы по сравнению с клетками доноров.

Площадь поверхности бластов увеличилась на 25% (р0,05), а их высота снизилась на 50% (р0,05) по сравнению с донорами. Глобулярные выступы плазмалеммы бластов больных ОЛЛ после инкубации с Кон А варьировали по высоте и имели четко выраженные контуры по сравнению с бластами доноров (рис. 34).

Рис. 34. Рельеф поверхности бластов больных ОЛЛ (стрелками показаны складчатые структуры поверхности).

Высота глобул лимфобластов больных ОЛЛ возросла на 235% (р0,05) по сравнению с донорами. В то же время их ширина у лимфобластов больных ОЛЛ уменьшилась на 28% (р0,05) по сравнению с бластами в контроле (см. табл. 12). Количество глобулярных выступов под влиянием Кон А в бластах больных ОЛЛ увеличилось на 252% (р0,05) по сравнению с лимфобластами доноров. Глубина инвагинаций плазмалеммы бластов больных ОЛЛ возросла на 830% (р0,05), а ширина углублений увеличилась на 121% (р0,05) по сравнению с клетками доноров. Количество инвагинаций на клеточной поверхности лимфобластов больных ОЛЛ уменьшилось на 81% (р0,05) по сравнению с клетками доноров.

Для бластов больных ОЛЛ были характерны более крупные пучки филаментов, отходящие от ядра к периферии клетки, по сравнению с группой доноров (рис. 35).

Рис. 35. Элементы цитоскелета бластов больных ОЛЛ (стрелкой показаны пучки цитоскелетных структур, располагающиеся вокруг ядра).

В группе больных ОЛЛ ПП возрастал на 51% (р0,05) по сравнению с клетками доноров. Число мигрировавших клеток больных ОЛЛ уменьшился на 56% (р0,05) по сравнению с лимфоцитами доноров (см. табл. 15). Достоверные увеличения ИТМЛ наблюдали в группах больных ОЛЛ на 48% (р0,05) по сравнению с донорами.

Под воздействием Кон А индекс пролиферации лимфоцитов больных ОЛЛ снизился на 69% (р0,05) по сравнению с группой доноров (рис. 36).

25

–  –  –

Рис. 36. Пролиферативный потенциал лимфоцитов в условиях стимуляции Кон А.

Общее число ядрышек в пролиферирующих лимфоцитах больных ОЛЛ под влиянием Кон А возросло соответственно на 35% (р0,05) по сравнению с донорами. Число ядрышек на одно ядро в лимфоцитах больных ОЛЛ увеличилось соответственно на 112% (р0,05) по сравнению с группой доноров.

Микроциты больных ОЛЛ в ремиссии округлой формы, их жесткость уменьшилась на 70% (р0,05) по сравнению с микроцитами доноров (см.

табл. 9). Для микроцитов больных ОЛЛ в ремиссии наибольшая жесткость характерна в области околоядерного пространства, однако в сравнении с клетками доноров в целом жесткость снижена на 59% (р0,05). Модуль упругости микроцитов больных ОЛЛ в ремиссии по периферии уменьшился на 73% (р0,05) по сравнению с микроцитами доноров.

Площадь поверхности и объем микроцитов больных ОЛЛ в ремиссии снизились соответственно на 15% и 60% (р0,05) по сравнению с клетками доноров.

На поверхности плазмалеммы клеток установлено наличие шероховатостей, сформированных многочисленными выступами небольшого размера (рис. 37).

Рис. 37. Рельеф поверхности микроцитов больных ОЛЛ в ремиссии (стрелкой показана шероховатость на поверхности).

Высота и ширина глобулярных выступов микроцитов больных ОЛЛ в ремиссии снизились соответственно на 86% и 89% (р0,05) по сравнению с аналогичными параметрами в контроле. Общее количество глобулярных структур лимфоцитов больных ОЛЛ в ремиссии увеличилось на 227% (р0,05) по сравнению с микроцитами доноров.

Нормоциты из суспензии больных ОЛЛ в ремиссии были округлой формы с выраженным ядром. Для них характерно снижение модуля Юнга на 78% (р0,05) в сравнении с клетками доноров. Под влиянием Кон А наблюдали снижение модуля Юнга нормоцитов больных ОЛЛ в ремиссии в области ядра и цитоплазмы соответственно на 84% и 44% (р0,05) по сравнению с клетками доноров (см. табл. 10).

Площадь поверхности и объем нормоцитов больных ОЛЛ в ремиссии снизились соответственно на 28% и 40% (р0,05) по сравнению с клетками доноров. Высота глобулярных структур нормоцитов снизилась на 86% (р0,05) по сравнению с клетками доноров. Ширина выступов лимфоцитов больных ОЛЛ в ремиссии возросла на 71% (р0,05) по сравнению с клетками доноров (см. табл. 12). Под влиянием Кон А на поверхности нормоцитов увеличилось количество глобулярных выступов у больных ОЛЛ в ремиссии на 40% (р0,05) по сравнению с клетками доноров (рис. 38).

Рис. 38. Рельеф поверхности нормоцитов больных ОЛЛ в ремиссии.

Глубина инвагинаций плазмалеммы нормоцитов больных ОЛЛ в ремиссии снизилась на 93% (р0,05), при этом ширина углублений поверхности клеток увеличилась на 29% (р0,05) по сравнению с нормоцитами доноров.

В популяции нормоцитов больных ОЛЛ в ремиссии пучки элементов цитоскелета располагались в области околоядернного пространства в виде расходящихся от ядра структур (рис. 39).

Рис. 39. Элементы цитоскелета нормоцитов больных ОЛЛ в ремиссии (стрелкой показаны пучки цитоскелетных структур, располагающихся вокруг ядра).

Лимфобласты больных ОЛЛ в ремиссии имели неровные контуры цитоплазмы, располагающейся широким ободком. Под действием Кон А жесткость бластных форм больных ОЛЛ в ремиссии снизилась на 58% (р0,05) по сравнению с лимфобластами доноров (см. табл. 9).

Площадь поверхности и объем лимфобластов больных ОЛЛ в ремиссии увеличились соответственно на 114% и 41% (р0,05) по сравнению с клетками доноров. Для клеток характерно наличие крупных глобулярных структур и глубоких инвагинаций между ними (рис. 40).

Рис. 40. Рельеф поверхности бластов больных ОЛЛ в ремиссии.

Высота глобул лимфобластов больных ОЛЛ в ремиссии возросла на 2424% (р0,05) по сравнению с лимфобластами доноров. В то же время их ширина увеличилась на 431% (р0,05) по сравнению с бластами доноров (см.

табл. 13). Количество глобулярных выступов под влиянием Кон А в группе больных ОЛЛ в ремиссии снизилось на 37% (р0,05) по сравнению с лимфобластами доноров. Глубина инвагинаций плазмалеммы бластов больных ОЛЛ в ремиссии возросла на 413% (р0,05), а ширина углублений увеличилась на 238% (р0,05) по сравнению с лимфобластами доноров. Количество инвагинаций на клеточной поверхности лимфобластов больных ОЛЛ в ремиссии уменьшилось на 40% (р0,05).

Элементы цитоскелета лимфобластов больных ОЛЛ в ремиссии формировали разветвленную сеть из пучков, расходящихся по направлению к краю цитоплазмы, причем в околоядерной зоне присутствовали плотные широкие пучки, а на периферии преобладали более тонкие структуры (рис. 41).

Рис. 41. Элементы цитоскелета бластов больных ОЛЛ в ремиссии (стрелкой показаны пучки цитоскелетных структур, располагающиеся вокруг ядра).

Длина пучков лимфобластов больных ОЛЛ в ремиссии превышала длину аналогичных структур в контроле на 292% (р0,05). В группе больных ОЛЛ в ремиссии ПП возрастал на 240% (р0,05) по сравнению с клетками доноров. Число мигрировавших клеток больных ОЛЛ в ремиссии уменьшился на 42% (р0,05) по сравнению с лимфоцитами доноров (см. табл. 15). Под воздействием Кон А индекс пролиферации лимфоцитов больных ОЛЛ в ремиссии снизился на 9% (р0,05) по сравнению с группой доноров. В группе больных ОЛЛ в ремиссии число ядрышек снизилось соответственно на 27% (р0,05) по сравнению с донорами (см. табл. 16).

В лейкосуспензии больных ХЛЛ, культивированной с Кон А, все клеточные формы имели правильную округлую форму с ядром, занимающим большую часть клетки. Жесткость микроцитов больных ХЛЛ уменьшилась на 43% (р0,05) по сравнению с лимфоцитами доноров (см. таблица 9).

Площадь поверхности, объем и высота микроцитов уменьшились соответственно на 12%, 33% и 34% (р0,05) по сравнению с микроцитами доноров. На поверхности клеток были обнаружены ребристые структуры, располагающиеся плотными группами по несколько образований в каждой (рис.

42).

Рис. 42. Рельеф поверхности микроцитов больных ХЛЛ (стрелками показана группа из трех ребристых структур).

Высота и ширина глобулярных выступов микроцитов больных ХЛЛ снизились соответственно на 86% и 85% (р0,05) по сравнению с аналогичными параметрами лимфоцитов доноров. Общее количество глобулярных структур лимфоцитов больных ХЛЛ уменьшилось на 40% (р0,05) по сравнению с микроцитами в контроле (см. табл. 12).

В субпопуляции лимфоцитов больных ХЛЛ выявлены крупные пучки элементов цитоскелета (рис. 43).

Под влиянием Кон А длина пучков фибрилл цитоскелета микроцитов больных ХЛЛ увеличилась на 59% (р0,05) по сравнению с клетками доноров (см. табл. 13).

Рис. 43. Элементы цитоскелета микроцитов больных ХЛЛ (стрелкой показаны пучки цитоскелетных структур, располагающихся вокруг ядра).

Для нормоцитов больных ХЛЛ характерно снижение модуля Юнга на 72% (р0,05) в сравнении с клетками доноров. По данным наноидентировая жесткость отдельных участков клеточной поверхности снизилась. Так, в субпопуляции нормоцитов больных ХЛЛ модуль Юнга в зоне ядра и по периферии цитоплазмы уменьшился соответственно на 89% и 52% (р0,05) по сравнению с клетками доноров (см. табл. 10). Минимальное значение жесткости нормоцитов больных ХЛЛ было установлено в области ядра (1±0,5 мПа).

Площадь поверхности и объем нормоцитов в группе пациентов с ХЛЛ возросли соответственно на 27% и 237% (р0,05) по сравнению с контролем. Высота глобулярных структур нормоцитов снизилась на 49% (р0,05), а их ширина возросла на 93% (р0,05) по сравнению с клетками доноров (рис. 44).

Рис. 44. Рельеф поверхности нормоцитов больных ХЛЛ.

Глубина инвагинаций плазмалеммы нормоцитов больных ХЛЛ снизилась на 25% (р0,05) по сравнению с нормоцитами доноров. Ширина углублений поверхности клеток больных ХЛЛ увеличилась на 200% (р0,05), а их количество – на 61% (р0,05) по сравнению с нормоцитами доноров.

Структуры цитоскелета нормоцитов больных ХЛЛ, при визуальном изучении менее выражены по сравнению с клетками доноров (рис. 45). Достоверных различий между значениями длины пучков цитоскелетных структур нормоцитов у больных лейкозом и доноров не установлено. Максимальная длина пучков цитоскелетных структур была характерна для нормоцитов больных ХЛЛ – 1,2±0,2 мкм.

Рис. 45. Элементы цитоскелета нормоцитов больных ХЛЛ (стрелкой показаны пучки цитоскелетных структур, располагающихся вокруг ядра).

Для бластных форм больных ХЛЛ характерно снижение модуля Юнга на 80% в сравнении с клетками доноров, в частности, в зоне ядра жесткость бластных форм больных ХЛЛ снизилась на 76% (р0,05; см. табл. 9).

Площадь поверхности и объем лимфобластов в группе пациентов больных ХЛЛ возросли соответственно на 125% и 90% (р0,05) по сравнению с клетками доноров. Диаметр и высота лимфобластов увеличились на 30% и 75% (р0,05) соответственно в сравнении с контролем. Рельеф поверхности в ряду нормоциты – лимфобласты больных ХЛЛ был сглажен (рис. 46). Высота глобул лимфобластов больных ХЛЛ снизилась на 67% (р0,05). Глубина инвагинаций плазмалеммы бластов больных ХЛЛ возросла на 141% (р0,05) по сравнению с клетками доноров. Количество инвагинаций на клеточной поверхности лимфобластов больных ХЛЛ уменьшилось на 45% (р0,05) по сравнению с клетками доноров.

Рис. 46. Рельеф поверхности бластов больных ХЛЛ.

В группе больных ХЛЛ бласты содержали более крупные пучки цитоскелетных фибрилл по сравнению с клетками доноров (рис. 47).

Рис. 47. Элементы цитоскелета бластов больных ХЛЛ (стрелкой показаны пучки цитоскелетных структур, располагающиеся вокруг ядра).

Длина пучков филаментов лимфобластов больных ХЛЛ превышала длину элементов цитоскелета клеток доноров на 84% (р0,05).

ПП в группе больных ХЛЛ возрастал на 744% (р0,05) по сравнению с клетками доноров. Одновременно с увеличением заряда поверхности лимфоцитов больных ХЛЛ происходило снижение их двигательной активности клеток на 48% (р0,05) по сравнению с контролем (см. табл. 15). Под воздействием Кон А индекс пролиферации лимфоцитов больных ХЛЛ снизился на 59% (р0,05) по сравнению с группой доноров. При этом общее число ядрышек уменьшилось на 69% (р0,05) по сравнению с донорами (см. табл. 16), а количество ядрышек на одно ядро в лимфоцитах больных ХЛЛ увеличилось на 56% (р0,05).

Таким образом, под влиянием Кон А лимфоциты как здоровых людей, так и больных лейкозом вступали в цикл деления, результатом которого было появление нескольких субпопуляций клеток, различающихся как морфологически, так и функционально. Пролиферация клеток в условиях стимуляции Кон А проходит наиболее интенсивно в лимфоцитах доноров.

Микроциты доноров больших размеров по сравнению с аналогичными клетками больных лейкозом. Самые мелкие микроциты встречались в субпопуляции больных ОЛЛ. Рельеф поверхности микроцитов представлен разнообразными по своей конфигурации морфологическими структурами, причем глобулы и инвагинации на поверхности клеток больных ОЛЛ имели наибольшие линейные размеры по сравнению с клетками больных другими типами лейкоза и доноров. Одновременно с образованием крупных структур на плазмалемме микроцитов больных ОЛЛ поверхность была менее упругой в сравнении с микроцитами других групп.

В популяции клеток больных ОМЛ встречались нормоциты, площадь поверхности и объем которых превышали аналогичные параметры клеток больных лейкозами и здоровых людей. Под влиянием Кон А плазмалемма лимфоцитов как доноров, так и больных лейкозом теряла морфологические структуры в ряду микроциты – нормоциты. Одновременно происходило снижение жесткости нормоцитов во всех группах по сравнению с микроцитами. Наименьшее значение модуля Юнга было характерно для нормоцитов ОЛЛ в ремиссии. Сглаживание рельефа поверхности нормоцитов сопровождалось изменением структуры и увеличением длины филаментов цитоскелета.

В популяции лимфоцитов больных ХЛЛ присутствовали самые крупные бластные формы. При переходе нормоцитов в бластные формы в группах доноров и больных ХЛЛ наблюдали сглаживание рельефа поверхности. Для лимфобластов больных ОЛЛ и ОЛЛ в ремиссии характерно образование новых структур в виде крупных складок и глубоких инвагинаций. Бласты как здоровых людей, так и больных лейкозом имели наименьшую жесткость по сравнению с другими субпопуляциями клеток. Причем, для больных ОЛЛ в ремиссии и ХЛЛ характерны самые «мягкие» клетки.

Под влиянием Кон А отмечено увеличение ПП лимфоцитов больных различными типами лейкоза на фоне снижения их двигательной активности по сравнению с клетками доноров.

4.2. Структурно-функциональные свойства ФГА-стимулированных лимфоцитов В данной серии экспериментов представлены результаты исследования ФГА-стимулированных лимфоцитов здоровых людей и больных лейкозом. В лейкосуспензиях всех экспериментальных проб наблюдали появление субпопуляций микроцитов, нормоцитов и бластов.

В группе доноров микроциты представляли собой округлые клетки с узким ободком цитоплазмы вокруг ядра, иногда встречались формы, у которых цитоплазма отсутствовала. Поверхность микроцитов представлена однотипными округлыми глобулярными выступами и незначительным количеством инвагинаций (рис. 48).

Рис. 48. Рельеф поверхности микроцитов доноров.

Структуры цитоскелета микроцитов организованы в виде широких пучков (рис. 49).

Нормоциты доноров имели неровные контуры и четко выраженное околоядерное пространство. Под влиянием ФГА на поверхности клеток фиксировали появление однотипных по размерам глобулярных выступов (рис. 50).

Структуры цитоскелета нормоцитов доноров располагались длинными тонкими пучками от ядра к периферии (рис. 51).

Рис. 49. Элементы цитоскелета микроцитов доноров (стрелкой показаны пучки цитоскелетных структур).

Рис. 50. Рельеф поверхности нормоцитов доноров (стрелкой показаны округлые выступы).

Рис. 51. Элементы цитоскелета нормоцитов доноров (стрелкой показаны пучки цитоскелетных структур).

Лимфобласты в суспензии доноров имели правильную округлую форму с крупным эксцентрично расположенным ядром. На поверхности бластов присутствовали пирамидообразные выступы (рис. 52).

Рис. 52. Рельеф поверхности лимфобластов доноров (стрелкой показаны пирамидообразные выступы).

Пучки элементов цитоскелета лимфобластов доноров представляли собой плотно упакованные структуры (рис. 53).

Рис. 53. Элементы цитоскелета лимфобластов доноров (стрелкой показаны пучки цитоскелетных структур).

Микроциты больных ОМЛ имели округлую форму, модуль Юнга которых снизился на 58% (р0,05) по сравнению с клетками доноров (табл. 17).

–  –  –

По данным точек наноидентирования, модуль Юнга в разных участках клеточной поверхности больных ОМЛ снизился: в зоне ядра на 44% (р0,05), в перинуклеарной области – на 47% (р0,05) по сравнению с группой доноров (табл. 18).

<

–  –  –

Площадь поверхности, объем и высота микроцитов больных ОМЛ снизились соответственно на 79%, 54% и 75% (р0,05) по сравнению с микроцитами доноров (табл. 19).

Из всех субпопуляций лейкосуспензии больных ОМЛ у микроцитов наиболее сглаженный рельеф поверхности (рис. 54).

Глубина инвагинаций плазмалеммы микроцитов больных ОМЛ снизилась на 67% (р0,05), а их количество – на 70% (р0,05) по сравнению с группой доноров (табл. 20).

Таблица 19. Геометрические параметры лимфоцитов в условиях стимуляции ФГА

–  –  –

Примечание: а – статистически достоверные различия между значениями лимфоцитов доноров и больных лейкозом по критерию Стьюдента при р0,05.

Рис. 54. Рельеф поверхности микроцитов больных ОМЛ.

–  –  –

Структуры цитоскелета микроцитов представлены пучками, расходящимися радиально от ядра к периферии (рис. 54).

Рис. 54. Элементы цитоскелета микроцитов больных ОМЛ.

Достоверных различий между значениями длины пучков элементов цитоскелета микроцитов среди экспериментальных групп не обнаружено (табл. 21).

Нормоциты больных ОМЛ правильной округлой формы. Модуль Юнга нормоцитов повысился в области ядра на 29% (р0,05) по сравнению клетками доноров (см. табл. 17).

–  –  –

Площадь поверхности и диаметр клеток увеличились соответственно на 22% и 34% (р0,05), а объем уменьшился на 64% (р0,05) по сравнению с клетками доноров (см. табл. 19).

Структура поверхности нормоцитов больных ОМЛ представлена валикоподобными скоплениями глобул, последовательно располагающимися относительно друг друга (рис. 55).

Рис. 55. Рельеф поверхности нормоцитов больных ОМЛ.

Высота и ширина глобулярных выступов нормоцитов больных ОМЛ снизилась соответственно на 13% и 36% (р0,05) по сравнению с клетками доноров. Количество глобул на поверхности клеток увеличилось на 173% (р0,05). Для нормоцитов больных ОМЛ характерно снижение глубины инвагинаций плазмалеммы на 29% (р0,05), на фоне увеличения их количества на 56% (р0,05) по сравнению с клетками доноров (см. табл. 20).

В околоядерной зоне нормоцитов наблюдали небольшое количество коротких пучков элементов цитоскелета (рис. 56).

Рис. 56. Элементы цитоскелета нормоцитов больных ОМЛ (стрелкой показаны пучки цитоскелетных структур).

Длина цитоскелетных структур нормоцитов снизилась на 56% (р0,05) по сравнению с клетками доноров (см. табл. 21).

В субпопуляции лимфобластов больных ОМЛ встречались клетки, как с правильными округлыми контурами, так и овальной формы, цитоплазма и тех и других форм располагалась широким ободком вокруг ядра.

Жесткость таких лимфобластов снижена на 50% (р0,05) по сравнению с группой доноров (см. табл. 17). Модуль Юнга ФГА-трансформированных клетки больных ОМЛ снизился в околоядерной области и по периферии клетки соответственно на 39% и 43% (р0,05; см. табл. 18). Наибольшая вариация значений жесткости в популяции лимфоцитов больных ОМЛ после воздействия ФГА была характерна для лимфобластов – от 1,7±0,8 до 7,1±0,6 мПа.

Площадь поверхности, объем и высота лимфобластов увеличились соответственно 227%, 140% и 122% (р0,05) по сравнению клетками доноров (см.

табл. 19). Рельеф поверхности лимфобластов больных ОМЛ сглажен (рис. 57).

Рис. 57. Рельеф поверхности лимфобластов больных ОМЛ.

Высота и ширина глобулярных образований плазмалеммы бластов больных ОМЛ снизились соответственно на 88% и 78% (р0,05) по сравнению с клетками доноров. Глубина инвагинаций и их количество на поверхности клеток больных ОМЛ снизились соответственно на 83% и 14% (р0,05). Ширина углублений плазмалеммы у больных ОМЛ уменьшилась на 59% (р0,05) по сравнению с донорами (см. табл. 20).

Фибриллы цитоскелета лимфобластов расходились от ядра радиально (рис. 58).

Рис. 58. Элементы цитоскелета лимфобластов больных ОМЛ (стрелкой показаны пучки цитоскелетных структур).



Pages:     | 1 | 2 || 4 | 5 |   ...   | 6 |
 

Похожие работы:

«Сигнаевский Воладимир Дмитриевич МОРФОГЕНЕТИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ ПРОДУКТИВНОСТИ ЯРОВОЙ МЯГКОЙ ПШЕНИЦЫ СОРТОВ САРАТОВСКОЙ СЕЛЕКЦИИ Специальность 03.02.01 — ботаника Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: д.б.н.,...»

«БРИТАНОВ Николай Григорьевич ГИГИЕНИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ ПЕРЕПРОФИЛИРОВАНИЯ ИЛИ ЛИКВИДАЦИИ ОБЪЕКТОВ ПО ХРАНЕНИЮ И УНИЧТОЖЕНИЮ ХИМИЧЕСКОГО ОРУЖИЯ 14.02.01 Гигиена Диссертация на соискание ученой степени доктора медицинских наук Научный консультант: доктор медицинских наук, профессор...»

«ШИТОВ АЛЕКСАНДР ВИКТОРОВИЧ ВЛИЯНИЕ СЕЙСМИЧНОСТИ И СОПУТСТВУЮЩИХ ГЕОЛОГИЧЕСКИХ ПРОЦЕССОВ НА АБИОТИЧЕСКИЕ И БИОТИЧЕСКИЕ КОМПОНЕНТЫ ЭКОСИСТЕМ (НА ПРИМЕРЕ ЧУЙСКОГО ЗЕМЛЕТРЯСЕНИЯ И ЕГО АФТЕРШОКОВ) 25.00.36 – Геоэкология (науки о Земле) Диссертация на соискание ученой степени доктора геолого-минералогических наук Горно-Алтайск 201...»

«БАБЕШКО Кирилл Владимирович ЭКОЛОГИЧЕСКИЕ ПРЕДПОЧТЕНИЯ СФАГНОБИОНТНЫХ РАКОВИННЫХ АМЕБ И ИХ ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ДЛЯ РЕКОНСТРУКЦИИ ГИДРОЛОГИЧЕСКОГО РЕЖИМА БОЛОТ В ГОЛОЦЕНЕ Специальность 03.02.08 – экология (биология) диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: кандидат биологических наук Цыганов...»

«Киселева Ирина Анатольевна СПЕЦИАЛИЗИРОВАННЫЙ ПРОДУКТ ДИЕТИЧЕСКОГО ПРОФИЛАКТИЧЕСКОГО ПИТАНИЯ НА ОСНОВЕ КОКТЕЙЛЯ БАКТЕРИОФАГОВ: КОНСТРУИРОВАНИЕ, ТЕХНОЛОГИЯ ПРОИЗВОДСТВА, ОЦЕНКА БЕЗОПАСНОСТИ И ЭФФЕКТИВНОСТИ ПРИМЕНЕНИЯ 03.01.06 – биотехнология (в том числе...»

«Тюрин Владимир Анатольевич МАРАЛ (CERVUS ELAPHUS SIBIRICUS SEVERTZOV, 1873) В ВОСТОЧНОМ САЯНЕ (РАСПРОСТРАНЕНИЕ, ЭКОЛОГИЯ, ОПТИМИЗАЦИЯ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ) Специальность 03.02.08 – Экология (биологические науки) Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: Д-р биол. наук, профессор М.Н. Смирнов Красноярск 201 Содержание Введение.. 4 Глава 1. Изученность экологии марала.. Биология марала.. 9...»

«ГУЛЬ ШАХ ШАХ МАХМУД БИОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ ЦИТРУСОВОЙ МИНУРУЮЩЕЙ МОЛИ (Phyllocnistis citrella Stainton) В УСЛОВИЯХ ЮГО-ВОСТОЧНОГО АФГАНИСТАНА Специальность 06.01.07 – Защита растений ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени кандидата сельскохозяйственных наук НАУЧНЫЙ РУКОВОДИТЕЛЬ: доктор с.-х. наук, профессор КАХАРОВ К.Х. Душанбе, 2015 СОДЕРЖАНИЕ ВВЕДЕНИЕ..4 ГЛАВА I. СОВРЕМЕННОЕ СОСТОЯНИЕ ПРОБЛЕМЫ...»

«ХАПУГИН Анатолий Александрович РОД ROSA L. В БАССЕЙНЕ РЕКИ МОКША 03.02.01 – ботаника Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель Силаева Татьяна Борисовна д.б.н., профессор САРАНСК ОГЛАВЛЕНИЕ ВВЕДЕНИЕ Глава 1. ИСТОРИЯ ИЗУЧЕНИЯ РОДА ROSA L. В БАССЕЙНЕ МОКШИ. Глава 2. КРАТКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РОДА ROSA L. 2.1. Характеристика рода Rosa L. 2.2. Систематика рода Rosa L. Глава 3....»

«ПОРЫВАЕВА Антонина Павловна ТЕОРЕТИЧЕСКИЕ И ПРАКТИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ МОДЕЛИРОВАНИЯ ХРОНИЧЕСКОЙ ГЕРПЕСВИРУСНОЙ ИНФЕКЦИИ 03.02.02 Вирусология ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени доктора биологических наук Научный консультант: доктор медицинских наук, профессор Глинских Нина Поликарповна Екатеринбург 2015 ОГЛАВЛЕНИЕ 1 ВВЕДЕНИЕ 2 ОСНОВНАЯ ЧАСТЬ 2.1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ...»

«Ядрихинская Варвара Константиновна ЭКОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ РАСПРОСТРАНЕНИЯ ОСТРЫХ КИШЕЧНЫХ ИНФЕКЦИЙ В Г. ЯКУТСКЕ И РЕСПУБЛИКЕ САХА (ЯКУТИЯ) 03.02.08 – экология Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель кандидат биологических наук, доцент М.В. Щелчкова Якутск 2015...»

«Коротких Алина Сергеевна БИОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА И СЕЛЕКЦИОННАЯ ОЦЕНКА ВИДОВ И СОРТОВ РОДА NARCISSUS L. В УСЛОВИЯХ ЮГО-ЗАПАДА ЦЧЗ (НА ПРИМЕРЕ БЕЛГОРОДСКОЙ ОБЛАСТИ) 06.01.05 – селекция и семеноводство сельскохозяйственных растений ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой...»

«Цвиркун Ольга Валентиновна ЭПИДЕМИЧЕСКИЙ ПРОЦЕСС КОРИ В РАЗЛИЧНЫЕ ПЕРИОДЫ ВАКЦИНОПРОФИЛАКТИКИ. 14.02.02 – эпидемиология ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени доктора медицинских наук Научный консультант: заслуженный деятель науки РФ, лауреат Государственной премии СССР профессор, доктор медицинских наук Ющенко Галина Васильевна Москва – 20 Содержание...»

«Моторыкина Татьяна Николаевна ЛАПЧАТКИ (РОД POTENTILLA L., ROSACEAE) ФЛОРЫ ПРИАМУРЬЯ И ПРИМОРЬЯ 03.02.01 – Ботаника Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: доктор биологических наук, старший научный сотрудник Н.С. Пробатова Хабаровск Содержание Введение... Глава 1. Природные...»

«УДК 256.18(268.45) ШАВЫКИН АНАТОЛИЙ АЛЕКСАНДРОВИЧ ЭКОЛОГО-ОКЕАНОЛОГИЧЕСКОЕ СОПРОВОЖДЕНИЕ ОСВОЕНИЯ НЕФТЕГАЗОВЫХ МЕСТОРОЖДЕНИЙ АРКТИЧЕСКОГО ШЕЛЬФА (НА ПРИМЕРЕ БАРЕНЦЕВА МОРЯ) Приложения Специальность 25.00.28 «океанология» Диссертация на соискание ученой степени доктора географических наук Мурманск – 2015 ОГЛАВЛЕНИЕ ПРИЛОЖЕНИЕ А...»

«Шинкаренко Андрей Семенович Формирование безопасного и здорового образа жизни школьников на современном этапе развития общества Специальность 13.00.01– общая педагогика, история педагогики и образования Диссертация на соискание ученой степени кандидата педагогических наук Научные...»

«Хохлова Светлана Викторовна ИНДИВИДУАЛИЗАЦИЯ ЛЕЧЕНИЯ БОЛЬНЫХ РАКОМ ЯИЧНИКОВ 14.01.12-онкология ДИССЕРТАЦИЯ На соискание ученой степени доктора медицинских наук Научный консультант: Доктор медицинских наук, профессор Горбунова В.А Москва 2015 ОГЛАВЛЕНИЕ Введение Глава 1. Обзор литературы 1.1. Общая характеристика рака яичников 1.1.1. Молекулярно-биологические и...»

«Трубилин Александр Владимирович СРАВНИТЕЛЬНАЯ КЛИНИКО-МОРФОЛОГИЧЕСКАЯ ОЦЕНКА КАПСУЛОРЕКСИСА ПРИ ПРОВЕДЕНИИ ФАКОЭМУЛЬСИФИКАЦИИ КАТАРАКТЫ НА ОСНОВЕ ФЕМТОЛАЗЕРНОЙ И МЕХАНИЧЕСКИХ ТЕХНОЛОГИЙ 14.01.07 – глазные болезни Диссертация на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Научный...»

«ШАРАВИН Дмитрий Юрьевич IN SITU / EX SITU ИДЕНТИФИКАЦИЯ МИКРООРГАНИЗМОВ ФИЛЬТРАЦИОННЫХ ВОД ПОЛИГОНА ТВЁРДЫХ БЫТОВЫХ ОТХОДОВ 03.02.03 Микробиология Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: доктор биологических наук, профессор А.И. Саралов Пермь – 2015 ОГЛАВЛЕНИЕ СТР. ВВЕДЕНИЕ.. 4...»

«Будилова Елена Вениаминовна Эволюция жизненного цикла человека: анализ глобальных данных и моделирование 03.02.08 – Экология Диссертация на соискание ученой степени доктора биологических наук Научный консультант доктор биологических наук, профессор А.Т. Терехин Москва 2015 Посвящается моим родителям, детям и мужу с любовью. Содержание Введение.. 5 1. Теория эволюции жизненного цикла. 19...»

«ДЕНИСЕНКО ВАДИМ СЕРГЕЕВИЧ ОПЕРЕЖАЮЩАЯ ФИЗИЧЕСКАЯ ПОДГОТОВКА СТУДЕНТОВ УЧЕБНЫХ ЗАВЕДЕНИЙ СФЕРЫ ФИЗИЧЕСКОЙ КУЛЬТУРЫ В КОНТЕКСТЕ ОБЕСПЕЧЕНИЯ НЕПРЕРЫВНОСТИ ПРОФЕССИОНАЛЬНОГО ОБРАЗОВАНИЯ 13.00.04 – Теория и методика физического воспитания, спортивной тренировки, оздоровительной и адаптивной физической культуры ДИССЕРТАЦИЯ на соискание...»







 
2016 www.konf.x-pdf.ru - «Бесплатная электронная библиотека - Авторефераты, диссертации, конференции»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.