WWW.KONF.X-PDF.RU
БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА - Авторефераты, диссертации, конференции
 


Pages:   || 2 | 3 | 4 | 5 |   ...   | 6 |

«ЦИТОАРХИТЕКТОНИКА И СВОЙСТВА ПОВЕРХНОСТИ ЛИМФОЦИТОВ У ЗДОРОВЫХ ЛЮДЕЙ (ДОНОРОВ) И ПРИ РАЗВИТИИИ ЛИМФОПРОЛИФЕРАТИВНЫХ ПРОЦЕССОВ НА ОСНОВЕ АТОМНО-СИЛОВОЙ МИКРОСКОПИИ ...»

-- [ Страница 1 ] --

Федеральное государственное автономное образовательное учреждение

высшего профессионального образования

«Белгородский государственный национальный

исследовательский университет»

На правах рукописи

СЛАДКОВА

Евгения Анатольевна

ЦИТОАРХИТЕКТОНИКА И СВОЙСТВА ПОВЕРХНОСТИ

ЛИМФОЦИТОВ У ЗДОРОВЫХ ЛЮДЕЙ (ДОНОРОВ)

И ПРИ РАЗВИТИИИ ЛИМФОПРОЛИФЕРАТИВНЫХ ПРОЦЕССОВ

НА ОСНОВЕ АТОМНО-СИЛОВОЙ МИКРОСКОПИИ

03.03.04 – клеточная биология, цитология, гистология Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Научный руководитель доктор биологических наук, доцент М.Ю. Скоркина Белгород – 2015

ОГЛАВЛЕНИЕ

ВВЕДЕНИЕ

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Глава 1. МОРФОФУНКЦИОНАЛЬНАЯ ОРГАНИЗАЦИЯ БЕЛОЙ КРОВИ В НОРМЕ И ПРИ ЛИМФОИ МИЕЛОПРОЛИФЕРАТИВНЫХ ПРОЦЕССАХ

1.1. Развитие лейкоцитов. Регуляция лейкопоэза

1.1.1. Развитие нейтрофилов и лимфоцитов из гемопоэтической стволовой клетки

1.1.2. Нейрогуморальная регуляция лейкопоэза

1.2. Морфофункциональная организация лейкоцитов здоровых людей

1.3. Общая характеристика лейкозов

1.3.1. Механизмы возникновения лейкозов

1.3.2. Классификация лейкозов

1.3.3. Реологические свойства крови больных лейкозом................. 27

1.4. Морфофункциональная организация лейкоцитов больных лейкозом

1.5. Митогены, механизмы действия

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

Глава 2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Организация эксперимента

2.2. Общий клинический анализ крови и цитохимическая диагностика лейкозов

2.3. Морфофункциональные методы исследования лимфоцитов..........

2.3.1. Культивирование лимфоцитов

2.3.2. Методы исследования клеток крови на АСМ

2.3.3. Изучение функциональной активности лимфоцитов.............

2.3.4. Морфологические методы анализа цитологических фиксированных препаратов лимфоцитов

2.4. Методы статистической обработки

Глава 3. ЦИТОАРХИТЕКТОНИКА И ФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ

СВОЙСТВА ЛИМФОЦИТОВ КРОВИ

ЗДОРОВЫХ ЛЮДЕЙ И БОЛЬНЫХ ЛЕЙКОЗОМ

3.1. Гематологические показатели крови больных лейкозом................ 52

3.2. Структурно-функциональные свойства лимфоцитов крови больных лейкозом и здоровых людей

Глава 4. ЦИТОАРХИТЕКТОНИКА И ФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ

СВОЙСТВА МИТОГЕН-СТИМУЛИРОВАННЫХ

ЛИМФОЦИТОВ

4.1. Структурно-функциональные свойства Кон А-стимулированных лимфоцитов

4.2. Структурно-функциональные свойства ФГА-стимулированных лимфоцитов

4.3. Сравнительный анализ структурно-функциональных свойств лимфоцитов в условиях митогенной стимуляции........... 112 Глава 5. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЯ............ 131 ВЫВОДЫ

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы. Действие целого спектра стимулов (вирусов, канцерогенов и т.п.) наряду с трансформацией функционального состояния клетки сопровождается изменением структуры ее поверхности, что в итоге приводит к появлению у нее новых биологических свойств (Wroblewski J.M. et al., 2002; McLead I.X. et al., 2011). В зависимости от природы и интенсивности возмущающего воздействия, адаптивные реакции клеток проявляются неодинаково, однако общим их признаком является изменение формы и цитоархитектоники поверхности (Wolf K. et al., 2003). В связи с этим одной из актуальных проблем клеточной биологии является изучение функциональных свойств и структуры поверхности лимфоцитов в норме и при патологии (например, развитии опухолей в системе крови). Решение данной проблемы позволит установить ранние изменения структурно-функциональных свойств лимфоцитов, характерных для неопластической клетки, а также разработать терапевтические подходы, направленные на уничтожение аномальных клеток.

Степень разработанности темы исследования. В настоящее время в литературе представлены данные многочисленных научных исследований, касающихся вопросов опухолевого перерождения клеток (Зуева Е.Е., 2008;

Тамкович С.Н. и др., 2008; Чеботкевич В.Н. и др., 2010), метастазирования и образования лейкостазов (Сорокин Ю.Н. и др., 2013). Нарушение пролиферации и дифференцировки лимфоцитов при развитии лимфопролиферативных заболеваний обусловлены изменением их генетической и метаболической систем (Lopez J.I. et al., 2008), что отражается на особенностях их метастатического потенциала, механизмах формирования и функционирования поверхностного аппарата клетки (Шутова М.С., 2010; Dong C. et al., 2005;

Kraning-Rush C.M. et al., 2012). Доказано, что процесс развития неопластических лимфоидных клеток сопровождается изменением заряда (Тарасова И.М., 1985) и свойств плазмалеммы (Горло Е.И., 2000). Несмотря на многочисленные экспериментальные данные, представленные в источниках литературы, открытым остатся вопрос об особенностях цитоархитектоники, механических и электрических свойств клеточной поверхности, изменяющихся в процессе опухолевого перерождения.

Решение данной проблемы стало возможным благодаря внедрению в экспериментальные исследования технологий сканирующей зондовой микроскопии, использующей различные модификации атомно-силовых микроскопов. Преимуществами атомно-силовой микроскопии, по сравнению с традиционными способами исследования, являются: трехмерная визуализация топографии (Kamruzzaham A.S.M. et al., 2004); интеграция морфологических изображений клеточной поверхности с ее механическими свойствами (Simone A., Durrieu M.C., 2006); получение информации об упруго-эластических (Сладкова Е.А., Скоркина М.Ю., 2013) и электрических свойствах клеток (Сладкова Е.А., Скоркина М.Ю., 2014). Внедрение атомно-силовой микроскопии создает новые направления в изучении морфологических и функциональных особенностей клеточной поверхности.

С учетом вышесказанного сформулированы цель и поставлены задачи исследования.

Цель работы: охарактеризовать цитоархитектонику и свойства поверхности лимфоцитов в норме (у здоровых людей) и при развитии лимфопролиферативных процессов на основе метода атомно-силовой микроскопии.

Задачи исследования:

1. Измерить поверхностный потенциал лимфоцитов в норме и при развитии лимфопролиферативных процессов.

2. Изучить цитоархитектонику поверхности и упруго-эластические свойства лимфоцитов в норме и в условиях пролиферации.

3. Охарактеризовать миграционную активность и организацию элементов цитоскелета лимфоцитов в норме и в условиях пролиферации.

4. Проанализировать цитоархитектонику и функциональные свойства лимфоцитов здоровых людей и больных лейкозом на моделях митогенстимулированной пролиферации.

Научная новизна. На основе комплексного подхода с использованием современных методов атомно-силовой микроскопии получены новые данные о структуре и функциональных свойствах нормальных и трансформированных лимфоцитов. Впервые показано, что развитие миелопролиферативного процесса сопровождается изменением морфологии, упруго-эластических свойств и миграционной активности лимфоцитов. Установлены различия архитектоники, жесткости и организации цитоскелета лимфоцитов в условиях острого и хронического типов лимфобластной пролиферации. Показано, что в период ремиссии лимфобластного лейкоза лимфоциты сохраняют свойство, характерное для клеток в стадии обострения болезни – способность распластываться на подложке. Установлено повышение потенциала поверхности лимфоцитов при развитии лимфопролиферативных процессов как миело-, так и лимфобластного ростков кроветворения.

Научная новизна работы заключается так же в том, что на модели митоген-стимуллированной пролиферации лимфоцитов удалось доказать и подтвердить ранние изменения свойств и структуры поверхности различных субпопуляций лимфоцитов в норме и при развитии лимфопролиферативных заболеваний. Так, установлено, что реакция лимфоцитов на митогенную стимуляцию, проявляется в образовании клеток с повышенным потенциалом поверхности и сниженной двигательной активностью.

Теоретическая и практическая значимость. В выполненном исследовании представлены новые сведения о структурной организации и функциональных свойствах лимфоцитов в норме и при развитии пролиферативных процессов. Полученные данные имеют важное теоретическое и практическое значение в области клеточной биологии в качестве критерия, позволяющего объективно дифференцировать нормальные лимфоциты от клеток, обладающих злокачественными свойствами.

Комплексное исследование цитоархитектоники и функциональных свойств лимфоцитов в условиях пролиферации позволило установить объективные маркеры, которые можно использовать для прогноза степени и тяжести течения острых и хронических типов лимфопролиферативных заболеваний. На основе полученных данных, а также с учетом ранее разработанных способов («Способа исследования нативных клеток крови»; патент РФ № 2398234; «Способа определения упругости клеток крови»; патент РФ № 2466401), создан «Способ прогнозирования течения острого и хронического типов лимфобластного лейкоза» (патент РФ № 2541189). Разработаны рекомендации по оценке локомоторной активности опухолевых лимфоцитов при выполнении исследований в рамках Федеральной целевой программы 1.3.2.

«Проведение научных исследований целевыми аспирантами», соглашение № 14.132.21.1320 от 01.10.2013.

На модели митогенстимулированной пролиферации клеток показано, что образовавшиеся лимфобласты больных острым лимфобластным лейкозом в ремиссии и хроническим лимфолейкозом после лечения обладают функциональными свойствами сходными с агрессивными лимфобластами больных острым лимфолейкозом. Подобная реакция клеток на митоген, в отсутствие противоопухолевой терапии, указывает на способность лимфоцитов сохранять злокачественные свойства у больных как острым лимфолейкозом в ремиссии, так и хроническим лимфолейкозом после лечения.

Полученные результаты используются в учебном процессе на кафедре экологии, физиологии и биологической эволюции НИУ «БелГУ» при разработке учебно-методических пособий по дисциплинам «Физиология крови»

для магистров по направлению 020400.68 – Физиология человека и животных, «Иммунология» для студентов направления подготовки 020200.62 – Биология; «Цитология и гистология» для студентов направления подготовки 020400.62 – Биология.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Развитие острых и хронических лимфопролиферативных процессов в системе крови сопровождается повышением поверхностного потенциала лимфоцитов.

2. Упруго-эластические свойства и тонкая организация цитоархитектоники поверхности лимфоцитов специфична для каждого типа пролиферации.

3. Пролиферативные процессы сопровождаются изменением миграционной активности лимфоцитов: снижение ее у больных хроническим лимфолейкозом после лечения и острым лимфолейкозом в фазу ремиссии, и увеличение – у больных острым миелобластным и острым лимфобластным лейкозом в фазу обострения.

4. Адаптивный ответ лимфоцитов на моделях митогенной стимуляции, как в группе здоровых людей, так и больных лейкозом проявляется в образовании трех морфологически разнородных субпопуляций клеток с характерными особенностями цитоархитектоники, повышенным потенциалом поверхности и сниженной миграционной активностью, однако в изменении упругоэластических свойств клеток однозначной зависимости не установлено.

Степень достоверности полученных результатов и выводов диссертации обусловлена теоретическим анализом, личным участием автора во всех сериях экспериментального исследования, использованием современных высокоточных методов атомно-силовой микроскопии, соответствующих компьютерных программ обработки и анализа изображений, большим объемом фактического материала, который обработан с использованием традиционных методов статистики, получением патентов на изобретения, публикацией данных диссертации в статьях, докладах на международных конференциях и научных семинарах.

Апробация работы. Основные результаты диссертационных исследований представлены на III Евразийском конгрессе по медицинской физике и инженерии «Медицинская физика – 2010» (Москва, 2010); 14-ой Международной Пущинской школе-конференции молодых ученых «Биология – наука XXI века» (Пущино, 2010); VII Сибирском съезде физиологов (Красноярск, 2012); XVII Российском симпозиуме по растровой и электронной микроскопии и аналитическим методам исследования твердых тел (РЭМ – 2012) (Черноголовка, 2012); 16-ой Международной Пущинской школе-конференции молодых ученых «Биология – наука XXI века» (Пущино, 2012); X Всероссийской молодежной научной конференции Института физиологии Коми «Физиология человека и животных: от эксперимента к клинической практике» (Сыктывкар, 2012); 17-ой Международной Пущинской школеконференции молодых ученых «Биология – наука XXI века» (Пущино, 2013);

IX Международной конференции «Микроциркуляция и гемореология» (Ярославль, 2013); XXII съезде физиологического общества имени И.П. Павлова (Москва-Волгоград, 2013); IV Международной научно-практической конференции «Научные перспективы XXI века. Достижения и перспективы нового столетия» (Новосибирск, 2014), расширенном заседании кафедры экологии, физиологии и биологической эволюции НИУ «БелГУ» (Белгород, 2015).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 20 научных работ, в том числе 5 статей в научных журналах, рекомендованных ВАК РФ для защиты кандидатских диссертаций, 3 патента на изобретения\:

1. Патент на изобретение РФ № 2398234 «Способ исследования нативных клеток», заявка № 2009125268, дата приоритета 01.07.2009. Авторы: Федорова М.З., Скоркина М.Ю., Чернявских С.Д., Сладкова Е.А., Забиняков Н.А.

2. Скоркина М.Ю., Федорова М.З., Чернявских С.Д., Сладкова Е.А., Забиняков Н.А. Методика оценки морфометрических параметров нативных клеток крови с использованием АСМ // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. – 2010. – Т. 150, № 8. – С. 238-240.

3. Скоркина М.Ю., Федорова М.З., Сладкова Е.А., Забиняков Н.А. Упругие свойства клеток крови больных лейкозом // Сборник материалов III Евразийского конгресса по медицинской физике и инженерии «Медицинская физика – 2010». – Москва. – 2010. – Т. 1. – С. 349-352.

4. Сладкова Е.А., Забиняков Н.А. Использование наномеханического сенсора для изучения морфофункциональных профилей клеток крови // Всероссийский конкурс научно-исследовательских работ студентов вузов в области нанотехнологий и наноматериалов. – Москва. – 2010. – С. 210-214.

5. Скоркина М.Ю., Федорова М.З., Чернявских С.Д., Забиняков Н.А., Сладкова Е.А. Сравнительная оценка морфофункциональных характеристик нативных и фиксированных эритроцитов // Цитология. – 2011. – Т. 53, № 1.

– С. 17-21.

6. Патент на изобретение РФ № 2466401 «Способ определения упругости клеток крови», заявка № 2011109741 от 15.03.2011. Авторы: Скоркина М.Ю., Федорова М.З., Сладкова Е.А., Забиняков Н.А.

7. Скоркина М.Ю., Федорова М.З., Муравьев А.В., Сладкова Е.А. Использование наномеханического сенсора для изучения морфофункциональных свойств лимфоцитов здоровых доноров и больных хроническим лимфобластным лейкозом // Клеточные технологии в биологии и медицине. – 2012. – № 3. – С. 172-175.

8. Сладкова Е.А. Мембранный потенциал и упругие свойства лимфоцитов больных острым лимфобластным лейкозом // Материалы VII сибирского съезда физиологов. – Красноярск. – 2012. – С. 483-484.

9. Сладкова Е.А. Сравнительная характеристика архитектоники лимфоцитов здоровых доноров и больных острым лимфобластным лейкозом // XVII Российский симпозиум по растровой электронной микроскопии и аналитическим методам исследования твердых тел (РЭМ-2012). – Черноголовка. – 2012. – С. 488-489.

10. Сладкова Е.А. Морфологические параметры и модуль упругости лимфоцитов, активированных митогенами // Сб. мат. 16-ой Международной Пущинской школы-конференции молодых ученых «Биология – наука XXI века». – Пущино. – 2012. – C. 444.

11. Сладкова Е.А. Роль длины микротрубочек и морфологии клеточной поверхности в подвижности лимфоцитов, трансформированных митогенами // Сборник материалов X Всероссийской молодежной научной конференции Института физиологии Коми «Физиология человека и животных: от эксперимента к клинической практике». – Сыктывкар. – 2012. – С.218-220.

12. Сладкова Е.А., Скоркина М.Ю. Структурно-функциональные особенности лимфоцитов больных лимфобластным лейкозом // Цитология. – 2013. – Т. 55, № 6. – С. 388-393.

13. Патент на изобретение РФ № 2541189 «Способ прогнозирования течения острого и хронического типов лимфобластного лейкоза», заявка № 2013131646 от 09.07.2013. Авторы: Сладкова Е.А., Скоркина М.Ю., Шамрай Е.А.

14. Сладкова Е.А. Влияние митогенов на структуру и механические свойства плазмалеммы лимфоцитов больных ОЛЛ // Сборник материалов 17ой Международной Пущинской школы-конференции молодых ученых «Биология – наука XXI века». – Пущино. – 2013. – C. 453-454.

15. Сладкова Е.А. Сравнительная оценка морфофизиологических параметров лимфоцитов больных ОЛЛ и ОМЛ методом АСМ // XVIII Российский симпозиум по растровой электронной микроскопии и аналитическим методам исследования твердых тел (РЭМ-2013). – Черноголовка. – 2013.

16. Сладкова Е.А. Сравнительная оценка локомоторного потенциала лимфоцитов больных ОЛЛ, ХЛЛ и ОЛЛ в ремиссии // Сборник материалов IX Международной конференции «Микроциркуляция и гемореология». – Ярославль. – 2013. – С. 43.

17. Сладкова Е.А. Влияние фитогемагглютинина на структурномеханические свойства клеточной поверхности лимфоцитов // Сборник материалов XXII съезда физиологического общества имени И.П. Павлова. – Москва-Волгоград, 2013. – С. 486-489.

18. Сладкова Е.А., Скоркина М.Ю. Оценка поверхностного потенциала лимфоцитов больных лейкозом методом зонда Кельвина // Биофизика. – 2014. – Т. 59, вып. 2. – С. 310-313.

19. Сладкова Е.А. Использование модифицированного сенсора для определения жесткости клеточной поверхности // Сборник материалов IV Международной научно-практической конференции «Научные перспективы XXI века. Достижения и перспективы нового столетия». – Новосибирск. – 2014. – С. 151-152.

20. Сладкова Е.А. Оценка структурно-функционального статуса митоген-трансформированных лимфоцитов // Научный результат. – 2014. – № 1 (1). – С. 12-20.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Глава I. МОРФОФУНКЦИОНАЛЬНАЯ ОРГАНИЗАЦИЯ

БЕЛОЙ КРОВИ В НОРМЕ И ПРИ ЛИМФОИ МИЕЛОПРОЛИФЕРАТИВНЫХ ПРОЦЕССАХ

1.1. Развитие лейкоцитов. Регуляция лейкопоэза.

1.1.1. Развитие нейтрофилов и лимфоцитов из гемопоэтической стволовой клетки Форменные элементы крови, циркулирующие в периферическом русле, образуются в костном мозге в процессе гемопоэза (Шиффман Дж., 2001).

Клетки крови регулярно погибают и заменяются новыми. Гемопоэз происходит непрерывно в течение всей жизни, что способствует удовлетворению постоянной потребности организма в новых клетках.

В основе современной схемы гемопоэза лежит унитарная теория происхождения форменных элементов крови из единой стволовой клетки (Чертков И.Л. и др., 2006; Bellantuono J., 2004). Стволовые клетки представляют собой малочисленную популяцию морфологически не идентифицированных предшественников (Викторов И.В., 2011; Gield B., Punzel M., 2008), генерирующих различные ростки кроветворения (Чертков И.Л. и др., 1991; Kondo M. et al., 2003).

Стволовые клетки обладают мультипотентными свойствами (Bonnet D., 2002), способностью к митотическому делению (Colvin G.A. et al., 2004;

Dykstra B. et al., 2007) и самообновлению (Wilson A., 2008).

Дифференцировочный потенциал кроветворных предшественников изучен in vitro с использованием метода клонирования и представлен в ряде обзоров (Morita Y. et al., 2011; Kennedy M. et al., 2012; Kyoizumi S. et al., 2013), в которых показано, что выбор направления дифференцировки осуществляется стохастически и не зависит от запроса на тот, или иной вид кроветворных клеток (Leenansaksiri W., Dechsukum C., 2006; Sieburg H.B. et al., 2006), но размер дифференцирующегося клона зависит от потребности организма в определенных клетках крови и регулируется соответствующими клеточными, гуморальными и внеклеточными факторами микроокружения (Wiess L.P., 1995; Metcalf D., 2007).

Пролиферативная активность ГСК поддерживается гемопоэтическими факторами роста, вырабатываемыми стромальными клетками (Ko K.H. et al., 2010; Maurer U.et al., 2014).

Нейтропоэз. ГСК в костном мозге дает начало коммитированным клеткам, из которых формируются миелобласты. Этот процесс регулируется синергическими взаимодействиями ГМ-КСФ, ФСК и ИЛ-3. Последующее развитие нейтрофильного ряда из миелобласта индуцируется Г-КСФ (Richards M.K., 2003; Link D.C., 2005; Walker F., 2008).

К морфологически распознаваемым предшественникам сегментноядернорго нейтрофила относят: миелобласт, промиелоцит, миелоцит, метамиелоцит и палочкоядерный гранулоцит (Романова А.Ф., 2000). За исключением палочкоядерного гранулоцита другие предшественники образуют группу, способную как к делению (Дризе Н.И. и др., 1996), так и к дифференцировке (Романова А.Ф., 2000).

В нейтрофильном ряду от миелобласта к сегментноядерному гранулоциту форма ядра изменяется от округлой до фрагментированной (Чертков И.Л., Дризе Н.И., 1997). Азурофильная цитоплазматическая зернистость промиелоцита сменяется на коричнево-фиолетовую пылевидную у нейтрофильного миелоцита. Для более зрелых форм характерно наличие специфической нейтрофильной зернистости. Диаметр клеток в нейтрофильном ряду варьирует от 10 до 25 мкм (Kolaczkowska E., Kubes P., 2013).

Лимфопоэз начинается в костном мозге. В процессе дифференцировки и созревания предшественники лимфоцитов заселяют центральные иммунные органы, где пре-В-лимфоциты проходят дифференцировку до В-клеток, а пре-Т-лимфоциты – до Т-клеток (Fahl S.P. et al., 2009). Зрелые Т- и Влимфоциты заселяют периферические органы иммунной системы (Bosco N.

et al., 2009).

К морфологически распознаваемым предшественникам лимфоцитов относят: лимфобласт и пролимфоцит (Mckenna R.W. et al., 2004). Диаметры лимфобласта колеблются от 15 до 20 мкм, пролимфоцита – от 11 до 13 мкм, для зрелого лимфоцита характерен диаметр в пределах от 7 до 12 мкм. Ядро клеток лимфоидного ряда округлое, бледно-фиолетовое у лимфобласта и пролимфоцита, темно-фиолетовое у зрелого лимфоцита. Цитоплазма пролимфоцита иногда содержит азурофильную зернистость (Theml H. et al., 2004). Среди зрелых лимфоцитов встречаются малые с узким ободком голубой цитоплазмы, средние и большие, цитоплазма которых занимает большую часть клетки (Романова А.Ф., 2000).

1.1.2. Нейрогуморальная регуляция лейкопоэза Образование клеток крови находится под контролем нервной и гуморальной систем, механизмы действия, которых, подразделяются на локальные и длиннодистантные. (Elencov I.J.et al., 2000; Metcalf D., 2008) Действие локальных механизмов в основном распространяется на ранние предшественники клеток крови за счет тканевого, микрососудистого и нервного компонентов (Шиффман Дж., 2001).

Гуморальная регуляция развития клеток крови осуществляется по средствам эндо- и экзогенных компонентов. К эндогенной группе факторов регуляции лейкопоэза относят: лейкопоэтины, интерлейкины, ингибиторы клеточного деления, гормоны.

1. Лейкопоэтины. Продуцируют ФСК костномозговые стромальные элементы, фибробласты, эндотелий и клетки Сертоли (Гривенников И.

А., 2008). Основные клетки-мишени ФСК – гемопоэтическая стволовая клетка, ранние коммитированные предшественники миелоидного, лимфоидного и эритроидного кроветворных рядов. ФСК активируют специализацию мультипотентных клеток предшественников совместно с ИЛ-3, ГМ-КСФ и ИЛ-7 (Burdon T., 2002). Они участвуют в обеспечении пролиферации наиболее юных предшественников Т-лимфоцитов в тимусе (Wei H., 2005). К ФСК относят интерлейкины 3, 4 и 5 (Крылова Т.А. и др., 2003).

ГМ-КСМ – полипептид, продуцируемый Т-лимфоцитами, моноцитами, фибробластами и клетками эндотелия. ГМ-КСМ тормозит апоптоз эозинофилов и моноцитов, увеличивает адгезию нейтрофилов, оказывая влияние на молекулы CD11b и LAM-1 (Lieder J.G. et al., 2004; Alenzi F.Q., 2008). ГМКСФ широко применяется в клинической практике для стимулирования антимикробной активности лейкоцитов у онкогематологических больных (Сизякина Л.П. и др., 2000; Ashitani J. et. al., 2000).

Г-КСФ выделяют из нейтрофилов, моноцитов, макрофагов, фибробластов, стромальных и эндотелиальных клеток (Козлов В.А., 2004; Пучков И.А.

и др., 2012). Этот фактор продуцируют клетки эпителиальной карциномы (Воробьев А.И. и др., 2006) и острой миелоидной лейкемии (Blume K.G., Thomas E.D., 2000). Синтез Г-КСФ индуцируют провоспалительные цитокины (TNFa и IL-1), ГМ-КСФ. Г-КСФ активирует киназы JAK-семейства, которые способствуют фосфорилированию тирозина, фактора транскрипции STAT3, который непосредственно стимулирует пролиферацию и индуцирует дифференцировку гранулоцитарных предшественников. Г-КСФ применяется при мобилизации периферических стволовых клеток (Gutierrez-Delgado F. et al., 2001).

2. Интерлейкины. Группа цитокинов, которые регулируют пролиферацию иммунокомпетентных клеток во время иммунного ответа, а также контролируют процессы миелопоэза и эритропоэза (Симбирцев А.С., 2004). Интерлейкины вырабатываются макрофагами, дендритными клетками, эндотелиоцитами, фибробластами, NK и кератиноцитами (Шаглинова В.А. и др., 2004), Т-лимфоцитами и В-лимфоцитами (Бойчук С.В., Дунаев П.В., 2008;

Мордвинов В.А., Фурман Д.П., 2009; Копылова Д.А., 2012), стволовыми клетками костного мозга (Симбирцев А.С., 2002; Белова О.В. и др., 2008). Регулирующее влияние интерлейкинов на гемопоэз заключается в ускорении созревания Т- и В-лимфоцитов, дифференцировке субпопуляций Т-хэлперов (Кетлинский С.А., 2005; Diakovska D. et al., 2006) и Т-киллеров (Прохоренко Т.С. и др., 2011), стимуляции роста предшественников стволовых клеток (Симбирцев А.С., 2004; Oh J.W. et al., 2002), пролиферации и дифференцировке стимулированных В-лимфоцитов (Белова О.В. и др., 2008; Вострикова Н.В. и др., 2009; Долгих Т.И. и др., 2011; Barnes P.J., 2003; Amiro O. et al., 2010).

3. Ингибиторы клеточного деления. Важную роль в регуляции процессов пролиферации кроветворных клеток играют кейлоны – термолабильные гликопротеины с молекулярной массой 4000 Д. Механизм их действия состоит в инактивации ферментов, участвующих в репликации ДНК, и подавлении процесса пролиферации (Симбирцев А.С., 2002). Существуют специфические кейлоны – нейтрофильные и лимфоцитарные – выделенные из зрелых клеток крови, работающие по принципу обратной связи с лейкопоэтинами. Источником кейлонов могут служить селезенка и тимус (Симбирцев А.С., 2004). К факторам ингибиторам нейтропоэза относят так же лактоферрин и кислый изоферрин, содержащиеся в мембране макрофагов.

4. Гормоны. Показано, что на кинетику лейкоцитов значительное влияние оказывают гормоны адаптации (Pedersen B.K., Hoffman-Goetz L., 2000).

Усиление продукции АКТГ, глюкокортикоидов и катехоламинов ведет к развитию гранулоцитоза. Изменение количества лейкоцитов в периферической крови связано с перераспределением гранулоцитов под влиянием катехоламинов и обусловлено выходом лейкоцитов в кровоток из мест депонирования крови (Cosentino M. et al., 2007).

Реализация эффектов гормонов, в том числе глюкокортикоидов, на лимфоциты обеспечивается за счет аденилатциклазной системы, обнаруженной в этих клетках. Избыточные концентрации глюкокортикоидов оказывают лимфопенический эффект, обусловленный инволюцией лимфоидной ткани, уменьшением поступления лимфоцитов из депо, уменьшением количества незрелых предшественников. Глюкокортикоиды угнетают деление малых и средних лимфоцитов, ускоряют созревание больших лимфоцитов (Brewer J.A., 2002; Galon G. et al., 2002).

Простагландины оказывают разнонаправленное действие на различные популяции лимфоцитов. Так, простагландин Е1 усиливает активность Тлимфоцитов, а на В-клетки оказывает подавляющий эффект. Простагландин Е2 ингибирует митоз Т-клеток, но не влияет на деятельность В-лимфоцитов (Pelus L.M., Hoggatt J., 2011).

Гормоны щитовидной железы стимулируют лейкоцитоз (Whitfield J., 2005; Song Y. et al., 2011). Андрогены являются стимуляторами лейкопоэза, действующими непосредственно на стволовые клетки (Kim S.W. et al., 2005).

К экзогенной группе гуморальных факторов регуляции лейкопоэза относят витамины группы В, витамин С, фолиевую кислоту, железо и микроэлементы, такие как кобальт, медь, марганец. Эти факторы, влияя на ферментативные процессы в кроветворных органах, способствуют дифференцировке форменных элементов и синтезу их компонентов.

Нервная регуляция лейкопоэза осуществляется посредством отделов ЦНС и ВНС, нервные волокна которых расположены в паренхиме костного мозга. Прямые контакты между нервными отростками и кроветворными клеткам отсутствуют (Mignini F. et al., 2003). Механизмы регуляции основаны на работе нейромедиаторов, воздействующих на адрено- и холинэргические рецепторы, обнаруженные на мембране клеток костного мозга и периферической крови, причем чем более дифференцирована клетка тем меньше на ней рецепторов (Steidl U. et al., 2004).

Центры регуляции лейкопоэза локализуются в субталомической области промежуточного мозга и стволе мозга. Раздражение различных участков подкорковой области приводит к изменению лейкоцитарной формулы и появлению в периферической крови незрелых форм (Katayama Y. et al., 2006).

Эмоциональные перегрузки и болевое раздражение вызывают лейкоцитоз.

Известны работы по исследованию условнорефлекторных лейкоцитозов (Grisaru D. et al., 2001).

ВНС и гипоталамус оказывают разнонаправленное влияние на образование форменных элементов крови (Mignini F. et al., 2003). Возбуждение симпатического отдела сопровождается стимуляцией лейкопоэза, парасимпатического – его торможением (Spigel A. et al., 2008). Раздражение n. vagus приводит к перераспределительной лейкопении, в результате которой происходит уменьшение количества лейкоцитов в крови периферических сосудов, но увеличение кровотока в мезентеральных сосудах (Katayama Y. et al., 2006).

Нервная регуляция лейкопоэза помимо прямого воздействия осуществляется опосредованно через изменение функциональной активности стромального микроокружения. Цитокины, Г-КСФ и ГМ-КСФ, синтезируемые фибробластами и клетками эндотелия, усиливают экспрессию рецепторов к нейромедиаторам на СКК, что приводит к усилению пролиферации и двигательной активности клеток-предшественниц (Kalinkovich A. et al., 2009).

Рядом работ показано, что на поверхности клеток лимфоцитарного ряда присутствуют рецепторы к кальцитонину, стимуляция которых увеличивает синтез цАМФ (Harzenetter M.D. et al., 2002), рецепторы к опиоидам, воздействие на которые сопровождается активацией МАР-киназы (Rozenfeld-Granot G., 2002), и рецепторы к вазоактивному белку, управляющему гомеостазом костномозговых клеток (Kawakami M. et al., 2004).

1.2. Морфофункциональная организация лейкоцитов здоровых людей

Морфология лейкоцитов. Лейкоциты выполняют важную роль в обеспечении защитных функций организма, их общее количество в крови взрослого человека колеблется от 4000 до 9000 в 1 мкл (Романова А.Ф., 2000). По содержанию зернистости в протоплазме лейкоциты подразделяют на гранулоциты (зернистые) и агранулоциты (незернистые). Гранулоциты бывают трех видов: нейтрофильные, эозинофильные и базофильные, агранулоциты представлены лимфоцитами и моноцитами.

Данные литературы относительно размеров лейкоцитов разнятся, показано, что средний диаметр нейтрофилов в мазках – 10-12 мкм, эозинофилов – 12-14 мкм, базофилов – 11-12 мкм, моноцитов – 8-22 мкм, в популяции лимфоцитов представлены малые клетки – 6-8 мкм, средние – 9-11 мкм и большие – более 11 мкм (Козинец Г.И., 1997; Романова А.Ф., 2000).

Время продолжительности жизни лейкоцитов различно. Среди лимфоцитов существуют короткоживущие (недели) и долгоживущие (до нескольких лет). Так, нейтрофильные гранулоциты живут 8 дней, в крови находятся меньше суток. Морфологической особенностью нейтрофилов является сегментированное ядро и мелкие гранулы в цитоплазме, окрашивающиеся в слабо оксифильный цвет (Романова А.Ф., 2000). Эозинофилы имеют двухсегментное ядро и крупную оксифильную зернистость в цитоплазме, состоящую из двух типов гранул: специфические азурофильные содержат фермент пероксидазу, неспецифические – кислую фосфатазу (Козинец Г.И., 1997). Базофилы характеризуются наличием крупного слабо сегментированного ядра, в цитоплазме находятся крупные гранулы, содержащие гликозоаминогликаны (Theml H. et al., 2004). На плазмалемме эозинофилов и базофилов обнаружены редкие округлые образования в диаметре до 20 мкм (Козинец Г.И. и др., 2001).

Лимфоциты имеют относительно крупное округлое ядро, в центре которого находится эухроматин, а по периферии – гетерохроматин (Хомутовский О.А., 1984). Количество цитоплазмы варьирует от узкого ободка у малых лимфоцитов до широкого участка у больших клеток. Плазмалемма лимфоцитов характеризуется наличием коротких шиповидных выростов, которые в совокупности формируют ворсинчатую поверхность (Кругликов Г.Г., Пекарский М.И., 2005). Моноциты имеют крупное бобовидное или подковообразное ядро и базофильную цитоплазму, на их поверхности прослеживаются узкие длинные выступы плазмалеммы (Новодержкина Ю.К. и др., 2004).

Организация цитоскелета лейкоцитов. Цитоскелет – совокупность нитевидных белковых структур (филаментов), составляющих опорно-двигательную систему клетки. Выделяют три типа филаментов, которые различаются между собой по ультраструктуре, химическому составу и функциональным свойствам. Наиболее тонкие нити состоят из белка актина и называются микрофиламентами, их диаметр составляет около 6 нм. Другая группа структур представлена микротрубочками, состоящими из белка тубулина, которые имеют диаметр 25 нм. К третьей группе относятся промежуточные филаменты с диаметром около 10 нм, состоящие из различных родственных белков.

Микрофиламенты. Встречаются во всех клетках эукариот, в том числе и клетках крови, где образуют пучки в цитоплазме и кортикальный слой под плазматической мембраной. Основным белком микрофиламентов является актин. Это неоднородный белок с молекулярной массой около 42 тыс., в различных клетках могут быть разные его варианты. В лейкоцитах присутствуют две немышечные цитоплазматические - и -изоформы актина. -актин расположен в участках клетки, задействованных в передвижении, в то время как -актин локализован в покоящихся участках (Ono S., 2007). В клетках крови актин может присутствовать в мономерной форме в виде глобулы (Gактин), включающей в свой состав молекулу АТФ. В результате полимеризации актина образуется тонкая фибрилла (F-актин) толщиной 8 нм (Хайтлина С.Ю., 2007;).

Хемотаксис и фагоцитоз лейкоцитов обусловлены способностью элементов цитоскелета к сокращению (Morley S.C., 2012). Нейтрофильный миозин состоит из легкой и тяжелой цепей с молекулярными массами 180000 и 200000 соответственно. Длина нитей миозинов в гранулоцитах составляет 250 нм, ширина – 6-12 нм (Eddy R.J. et al., 2000).

Микротрубочки. Микротрубочки – это динамичные структуры, принимающие активное участие, как в организации митоза, так и в жизнедеятельности интерфазной клетки (Чернобельская О.А. и др., 2001). Микротрубочки организованы в виде длинных полых цилиндров с внешним диаметром 25 нм, их стенка построена из полимеризованных молекул тубулина (Alberts B. et al., 2002). В процессе полимеризации тубулина образуются 13 продольных протофиламентов, скручивающихся в полую трубку (Holmfeld P. et al., 2007).

Промежуточные филаменты представлены фибриллярными мономерами, организованными по типу каната толщину около 8-10 нм. Местом локализации промежуточных филаментов является околоядерная область под плазматической мембраной, встречаются в пучках фибрилл, отходящих к краю клеток.

В клетках крови встречается белок виментин и белки ядерной ламины, имеющие ядерную локализацию (Wang N., Stamenovic D., 2002).

Функциональные свойства лейкоцитов. Функция нейтрофилов заключается в защите организма от возбудителей инфекций, они принимают участие во всех типах иммунных реакций (Антониcкис Ю.А., 2006). В основе этого процесса лежит хемотаксис, адгезия, фагоцитоз и уничтожение микроорганизмов. Хемотаксис представляет собой способность нейтрофилов к обнаружению и целенаправленному движению по направлению к очагу инфекции (Wang F., 2009). Подобные перемещения обусловлены наличием на поверхности гранулоцитов специфических рецепторов для С5а-компонента системы комплемента (Ritis K. et al., 2006), протеаз, выделяемых при повреждении тканей и для N-форменных пептидов, синтезируемых бактериями. Нейтрофилы движутся к очагам воспаления по градиенту хемотаксиса, за счет сложного взаимодействия между молекулами на их поверхности и рецепторами эндотелиальных тканей (Khajah M. et al., 2013).

Адгезия характеризует способность нейтрофилов прилипать к поверхности бактериальных клеток, вступать в межклеточные контакты. Адгезия зависит от сдвигового напряжения крови, электростатического взаимодействия клеточных поверхностей, функционального состояния нейтрофилов и клеток эндотелия, семейства молекул адгезии (Pearson M.J. et al., 2000).

Нейтрофильные гранулоциты распознают чужеродные организмы при помощи рецепторных комплексов к опсонинам, которые индуцируют процессы захвата и поглощения инородных объектов. Нейтрофилы фагоцитируют опсонизированные микроорганизмы с помощью цитоплазматических пузырьков-фагосом, сливающихся с гранулами посредством энергетического процесса, сопровождаемого гликолизом и гликогенолизом в гранулоцитах (Lee W.L. et al., 2003). Дегрануляция клетки сопровождается выбросом содержимого гранул в фагосому и выделением ферментов деградации (лизоцим, кислая и щелочная фосфатазы, эластаза и лактоферрин). В результате, нейтрофилы разрушают бактерии, метаболизируя кислород с образованием токсичных для микроорганизмов продуктов (Pearson M.J. et al., 2000).

Лимфоциты осуществляют специфическую защиту организма от антигенов, основанную на выработке антител (гуморальный иммунитет) или контактном взаимодействии клеток-эффектров (клеточный иммунитет) (McCullough K.C., Summerfield A., 2005). Лимфоциты, подобно нейтрофилам, способны к миграции и адгезии. По функциональным характеристикам лимфоциты делят на Т-, В-лимфоциты и NK-клетки (натуральные киллеры).

Популяция Т-лимфоцитов включает в себя (Luckheeram R.V. et al., 2012):

1) Tk (Т-киллеры), участвующие в клеточной форме защиты организма, непосредственно осуществляющие контакт с клеткой-мишенью, обеспечивают противовирусную и противоопухолевую защиту, реакции гиперчувствительности замедленного типа;

2) Th (Т-хелперы) стимулируют трансформацию В-лимфоцитов в клон клеток, продуцирующих антитела;

3) Ts (Т-супрессоры), действуя на В-клетки, подавляют выработку антител;

4) клетки памяти образуются под действием антигенного стимула, оставаясь недифференцированными в лимфатических узлах;

5) клетки-амплифаеры представляют собой зрелые Т-лимфоциты, способствующие размножению популяции Т-клеток.

Среди В-лимфоцитов выделяют В1-клетки, осуществляющие функцию первой линии защиты организма от инфекций, и В2-лимфоциты, связывающие врожденный и адаптивный иммунитет (Петров Р.В., Хаитов Р.М., 2000).

Основная функция NK-клеток заключается в выявлении и уничтожении собственных поврежденных клеток организма.

Важную роль в двигательной активности лейкоцитов, включающую процессы хемотаксиса и этапы миграции, играют структуры цитоскелета.

Миграционная активность нейтрофилов и лимфоцитов. Подвижность клеток представляет собой фундаментальный биологический процесс, необходимый для миграции клеток при эмбриогенезе, иммунном ответе, заживлении ран и других физиологически жизненно важных функциях (Ненашева Т.А., 2008). У лейкоцитов хорошо выражены хемотаксис и случайная миграция.

Процесс миграции лейкоцитов из сосудистого русла в ткани происходит в несколько фаз (Хаитов Р.М., 2005; Gillitzer R., 2001; Zoller M. et al., 2007;

Friedl P., Weigelin B., 2008). Первая фаза представляет собой краевое стояние, при котором передвижение лейкоцитов по венуле замедляется в результате действия селектинов, что приводит в конечном итоге к остановке лейкоцита.

Вторая – фаза активации, которая происходит в три этапа:

- инициация, в процессе которой хемотаксические факторы воздействуют на рецепторы лейкоцитов, ориентируют их в направлении хемоаттрактанта;

- трансдукция, в течение которой происходит передача сигнала двигательному аппарату клетки;

- эффекторная фаза характеризуется активацией двигательного аппарата.

Третья фаза характеризуется взаимодействием интегриновых рецепторов лейкоцитов и эндотелиальных молекул межклеточной адгезии, что необходимо для дальнейшей активация клетки и миграции. Четвертая фаза представляет собой собственно миграцию клеток, в процессе которой лейкоциты проходят через базальную мембрану эндотелия. Заключительная фаза характеризуется миграцией лейкоцитов в ткань за счет разрушения коллагена и других компонентов мембраны эндотелия лизирующими ферментами.

В процессе миграции лейкоциты претерпевают существенные морфофункциональные изменения (Frield P., Borgmann S., 2001), опосредованные полимеризацией и деполимеризацией актиновых структур. Полимеризация актина включает в себя стадию активации мономера, нуклеацию и ассоциацию или диссоциацию нитей (Смурова К.М., 2004; Birukov A. et al., 2004;

Smurova К. et al., 2004). Закономерности образования актиновых филаментов показаны в ряде работ (Ferron F. et. al., 2007).

Структура и динамика актина в клетках регулируется актинсвязывающими белками, к которым относят формин и леомодин (Disanza A.

et. al., 2004; Cooher J.A., 2008; Chesarone M.A., 2009); кофилин и гельзолин (Paavilainen V.O. et. al., 2004; Ono S., 2007; Saarikangas J. et. al., 2011); тропомиозин, филамин и -актинин (Araki N. et. al., 2000; Huang М., 2005; Tang A.H. et. al., 2001; Yamashita A. et. al., 2003; Ferron F. et. al., 2007); семейство белков Rho (Chimini G., Chavrier P., 2000).

На переднем крае мигрирующей клетки происходит полимеризация актина, в результате чего она приобретает эллиптическую форму. На широком переднем крае клетки образуются одна или несколько ламеллоподий, на узком заднем конце – уропода (Myers S.A. et al., 2005), затем происходит удлинение ведущей псевдоподии. Дальнейшее взаимодействие псевдоподий с субстратом осуществляется посредствам молекулярных механизмов клеточной адгезии, что ведет к прикреплению переднего края клетки к субстрату и обеспечивает ее перемещение. После того как адгезионная связь между задней частью клетки и субстратом прерывается, лейкоцит подтягивает свободный участок клетки. Во время передвижения на нижней поверхности лейкоцита формируются тонкие выросты, богатые актином, которые выступают в качестве точек прикрепления к субстрату (Frield P., Gunzer M., 2001).

Кроме миграции из сосудистого русла в ткани, Т-лимфоциты способны к амебоидным движениям по поверхности других клеток, в основе которого лежат чередующиеся циклы расширения и сокращения клеточной мембраны (Friedl P., Brocker E.B., 2000; Gunzer M. et al., 2000).

Лимфоциты на разных стадиях своего жизненного цикла проходят разные пути миграции. Клетки, не взаимодействовавшие с антигеном (непримированные), передвигаются из костного мозга и тимуса во вторичные лимфоидные органы (Zecchinon L. et al., 2006). Т-клетки, активированные антигеном, мигрируют в очаг воспаления, В-лимфоциты и клетки иммунологической памяти проникают в соседние лимфоидные образования.

Подвижность клеток зависит от многих факторов, которые можно объединить в несколько групп:

1. Перестройка актинового цитоскелета, опосредованная действием миозинов. Миозины способствуют образованию ламеллоподий и стимулируют движение клетки, соединяясь со стрессовыми волокнами, могут обеспечивать их натяжение. Миозиновые белки обеспечивают механическую связь между цитоскелетом и плазматической мембраной клетки, так как принимают участие в присоединении актиновых филаментов к интегринам мембраны. Миозины стимулируют образование филлоподий, концентрируясь на их кончиках, что увеличивает подвижность клеток (Ненашева Т.А., 2008; Большакова А.В. и др., 2009). Организация нитей миозина лейкоцитов, актомиозинового комплекса и механизм сокращения сходны с мышечными миозинами (Ненашева Т.А., 2008; Большакова А.В. и др., 2009; Ono S., 2007).

2. Динамические преобразования микротрубочек. Биохимическая организация микротрубочек описана в ряде работ (Воробьев И.А., Григорьева И.С., 2003; Ломакин А.Ю., 2009; Fuchs A., Karakesisoglou C., 2001). Процесс полимеризации тубулина зависит от ряда факторов и происходит в центрах организации микротрубочек (Воробьев И.А., Малый И.В., 2008).

Цитоплазматические микротрубочки выполняют скелетную и двигательную функцию (Чернобельская О.А. и др., 2011). Скелетная функция заключается в стабилизации формы клетки (Fukata Y. et al., 2002). Двигательная роль микротрубочек заключается в направленном транспорте органелл в цитоплазме и в передвижении собственно клетки (Ломакин А.Ю., 2009;

Fuchs A., Karakesisoglou C., 2001; Wittmann T., Warerman-Storer C.M., 2001;

Salmon G. et al., 2002; Rodriguez N. et al., 2003).

Исследования подвижности нейтрофилов, подверженных хемотаксису, показали, что воздействие антагонистов (колхицин, нокодазол) на микротрубочки вызывает нарушение полярности в мигрирующих клетках (Pallard T.D.

et al., 2003; Tsujita K. et al., 2006). Установлены два механизма участия микротрубочек в полярности клеток. У нейтрофилов разрушение микротрубочек вызывает Rho-обусловленную контрактильность в хвосте клетки, которая распространяется до ведущего края, устраняя способность клеток к протрузии (Jaffe A.B., Hall A., 2005). Молекулярной основой этого механизма является способность микротрубочек регулировать Rho GTPases, которые контролируют образование протрузий. Разрушение микротрубочек с помощью нокодазола или колхицина активирует Rho-белки с одновременным увеличением их контрактильности (Korb T. et al., 2004).

Второй механизм проявляется в способности микротрубочек влиять на актин в мигрирующих клетках путем воздействия на фокальные адгезии. Исследования показали, что динамические микротрубочки, контактируя с фокальными адгезиями, запускают разборку, как адгезий, так и ассоциированных с ними актиновых стрессовых волокон (Mooren O.L., 2009).

Молекулы, регулирующие миграцию лейкоцитов. На подвижность белых клеток крови оказывают влияние как молекулы адгезии эндотелиального происхождения (Praefcke G.J., McMahou H.T., 2004; Van Haaster P.J., Veltman P.M., 2007), так и лейкоцитарного (Zamir E., Geiger B., 2001; Witke W., 2004;

Sheetz M.P et al., 2006).

1.3. Общая характеристика лейкозов 1.3.1. Механизмы возникновения лейкозов Лейкозы представляют собой группу опухолевых заболеваний, развивающихся в результате злокачественного перерождения гемопоэтических клеток в красном костном мозге и лимфоидной ткани (Леонова Е.В. и др., 2009).

В дальнейшем трансформированные клетки поступают в кровоток, инфильтруют другие органы и ткани (Шиффман Дж., 2001; Богданов К.В., 2009).

При гемобластозах пролиферируют атипичные гемопэтические клетки неспособные к дифференцировке в нормальные зрелые элементы крови (Focosi D. et al., 2014). Клон опухолевых лейкоцитов способен продуцировать цитокины, подавляющие нормальную пролиферацию стволовых клеток (Reuben J.M. et al., 2000). Увеличивающиеся в количестве опухолевые клетки заселяют костный мозг и вызывают его функциональную аплазию. Одновременно поражаются вторичные органы кроветворения, что способствует нарушению нормальных функций неопухолевых популяций клеток крови (Kearns W.G. et al., 2004). Линии опухолевых лейкоцитов не тождественны бластным элементам костного мозга при нормальном кроветворении (Schroeder M.A., DiPersio J.F., 2012).

Основной причиной возникновения гемобластозов является активация онкогенов в результате возникновения хромосомных перестроек (Aplan P.D.,

2006) К настоящему времени описаны различные типы нарушений хромосом, способные активировать лейкозогенез (Долинский Д.А., 2012):

1) образование Ph-хромосомы (Филадельфийской) в результате объединения 5/-области гена BCR и 3/-области гена ABL в процессе хромосомной транслокации (Hazlehurst L. et al., 2009);



Pages:   || 2 | 3 | 4 | 5 |   ...   | 6 |
 

Похожие работы:

«БРИТАНОВ Николай Григорьевич ГИГИЕНИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ ПЕРЕПРОФИЛИРОВАНИЯ ИЛИ ЛИКВИДАЦИИ ОБЪЕКТОВ ПО ХРАНЕНИЮ И УНИЧТОЖЕНИЮ ХИМИЧЕСКОГО ОРУЖИЯ 14.02.01 Гигиена Диссертация на соискание ученой степени доктора медицинских наук Научный консультант: доктор медицинских наук, профессор...»

«Ядрихинская Варвара Константиновна ЭКОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ РАСПРОСТРАНЕНИЯ ОСТРЫХ КИШЕЧНЫХ ИНФЕКЦИЙ В Г. ЯКУТСКЕ И РЕСПУБЛИКЕ САХА (ЯКУТИЯ) 03.02.08 – экология Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель кандидат биологических наук, доцент М.В. Щелчкова Якутск 2015...»

«_ ТЕМИРОВ Николай Николаевич КОРРЕКЦИЯ АФАКИИ РАЗЛИЧНОГО ГЕНЕЗА МУЛЬТИФОКАЛЬНЫМИ ИНТРАОКУЛЯРНЫМИ ЛИНЗАМИ С АСИММЕТРИЧНОЙ РОТАЦИОННОЙ ОПТИКОЙ Специальность 14.01.07 – «Глазные болезни» ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Научный руководитель: доктор медицинских...»

«Анохина Елена Николаевна ПОЛИМОРФИЗМЫ ГЕНОВ ПРОИ ПРОТИВОВОСПАЛИТЕЛЬНЫХ ЦИТОКИНОВ, МУТАЦИИ ГЕНОВ BRCA1/2 ПРИ ЗЛОКАЧЕСТВЕННЫХ НОВООБРАЗОВАНИЯХ ОРГАНОВ ЖЕНСКОЙ РЕПРОДУКТИВНОЙ СИСТЕМЫ 14.03.09 – клиническая иммунология, аллергология Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: доктор биологических наук Тугуз А.Р. Майкоп 2015 Оглавление Список сокращений.. 3 Введение.. 5 Глава I....»

«Шемякина Анна Викторовна БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫЕ ВЕЩЕСТВА ДАЛЬНЕВОСТОЧНЫХ ПРЕДСТАВИТЕЛЕЙ РОДА BETULA L. 03.02.14 – Биологические ресурсы Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: доктор биологических наук, профессор Колесникова Р.Д. Хабаровск – 20 СОДЕРЖАНИЕ ВВЕДЕНИЕ.. ГЛАВА 1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ ПО ТЕМЕ ИССЛЕДОВАНИЙ. 1.1 Общие...»

«ШУБНИКОВА ЕЛЕНА ВЛАДИМИРОВНА ВЛИЯНИЕ ФИЗИКО-ХИМИЧЕСКИХ ФАКТОРОВ И ФОРМ АДАПТИВНОЙ ИЗМЕНЧИВОСТИ НА ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТЬ ПАТОГЕННЫХ БУРКХОЛЬДЕРИЙ К ХИМИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИМ ПРЕПАРАТАМ 03.02.03 –...»

«Очиров Джангар Сергеевич НАРУШЕНИЯ МИКРОНУТРИЕНТНОГО СТАТУСА ОВЕЦ И ИХ КОРРЕКЦИЯ ВИТАМИННО-МИНЕРАЛЬНЫМИ КОМПЛЕКСАМИ 06.02.01 – диагностика болезней и терапия животных, патология, онкология и морфология животных ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: доктор ветеринарных...»

«ДОРОНИН Игорь Владимирович Cистематика, филогения и распространение скальных ящериц надвидовых комплексов Darevskia (praticola), Darevskia (caucasica) и Darevskia (saxicola) 03.02.04 – зоология Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: доктор биологических наук, заслуженный эколог РФ Б.С. Туниев Санкт-Петербург Оглавление Стр....»

«КУДРЯШОВА ЛЮДМИЛА ЮРЬЕВНА ОСОБЕННОСТИ БИОЛОГИИ АМЕРИКАНСКОГО ТРИПСА ECHINOTHRIPS AMERICANUS MORGAN И ПРИЁМЫ БОРЬБЫ С НИМ В ОРАНЖЕРЕЯХ СЕВЕРО-ЗАПАДА РФ Специальность 06.01.07 – Защита растений ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: доктор сельскохозяйственных наук, профессор, заслуженный...»

«Алексеев Иван Викторович РАЗВИТИЕ КОМПЛЕКСНОГО ИНЖЕНЕРНО-ГЕОЛОГИЧЕСКОГО И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОГО МОНИТОРИНГА НА ЯКОВЛЕВСКОМ РУДНИКЕ ДЛЯ ПОВЫШЕНИЯ БЕЗОПАСНОСТИ ВЕДЕНИЯ ОЧИСТНЫХ РАБОТ ПОД НЕОСУШЕННЫМИ ВОДОНОСНЫМИ ГОРИЗОНТАМИ Специальность 25.00.08 – Инженерная геология,...»

«ХАФИЗОВ ТОИР ДАДАДЖАНОВИЧ ОСОБЕННОСТИ РОСТА, РАЗВИТИЯ И ПРОДУКТИВНОСТИ ЧАЙОТА (SECHIUM EDULE L. – CHAYOTE) В УСЛОВИЯХ ГИССАРСКОЙ ДОЛИНЫ ТАДЖИКИСТАНА Специальность: 06.01.01. – общее земледелие, растениеводство ДИССЕРТАЦИЯ на соискание учёной степени кандидата сельскохозяйственных наук НАУЧНЫЙ РУКОВОДИТЕЛЬ: доктор биологических наук, профессор, Гулов С.М. Душанбе – 201 ОГЛАВЛЕНИЕ...»

«ТУРТУЕВА ТАТЬЯНА АНАТОЛЬЕВНА РАЗРАБОТКА СБОРА НЕЙРОПРОТЕКТИВНОГО И ЭКСТРАКТА СУХОГО НА ЕГО ОСНОВЕ 14.04.02 фармацевтическая химия, фармакогнозия ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук Научный руководитель: доктор фармацевтических наук, профессор НИКОЛАЕВА ГАЛИНА ГРИГОРЬЕВНА Улан-Удэ – 2015 ОГЛАВЛЕНИЕ...»

«ПОПОВ ВИКТОР СЕРГЕЕВИЧ ТЕОРЕТИЧЕСКОЕ И ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЕ ОБОСНОВАНИЕ ИССЛЕДОВАНИЙ СРЕДСТВ И СПОСОБОВ ИММУНОМЕТАБОЛИЧЕСКОЙ КОРРЕКЦИИ У СВИНЕЙ 06.02.02 – ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени доктора ветеринарных наук Научный консультант: доктор...»

«Абдуллоев Хушбахт Сатторович ИММУНОБИОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА ВИРУСА ИНФЕКЦИОННОГО БРОНХИТА КУР ГЕНОТИПА QX 06.02.02 «ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология» Диссертация на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук Научный руководитель: доктор биологических наук, профессор Макаров Владимир Владимирович...»

«Кошелева Оксана Владимировна НАЕЗДНИКИ СЕМЕЙСТВА EULOPHIDAE (HYMENOPTERA, CHALCIDOIDEA) СТАВРОПОЛЬСКОГО КРАЯ СО СПЕЦИАЛЬНЫМ ОБСУЖДЕНИЕМ ПОДСЕМЕЙСТВА TETRASTICHINAE 03.02.05 – энтомология Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: доктор биологических наук, С. А. Белокобыльский Санкт-Петербург...»

«Карачевцев Захар Юрьевич ОЦЕНКА ПИЩЕВЫХ (АКАРИЦИДНЫХ) СВОЙСТВ РЯДА СУБТРОПИЧЕСКИХ И ТРОПИЧЕСКИХ РАСТЕНИЙ В ОТНОШЕНИИ ПАУТИННОГО КЛЕЩА TETRANYCHUS ATLANTICUS MСGREGOR Специальность: 06.01.07 – защита растений Диссертация на соискание учёной степени кандидата биологических наук Научный руководитель: Попов Сергей...»

«ФЕДОРОВА Екатерина Алексеевна ХАРАКТЕРИСТИКИ ВИРУСА ГРИППА, ВЛИЯЮЩИЕ НА ПОКАЗАТЕЛИ ГУМОРАЛЬНОГО ИММУННОГО ОТВЕТА В ЭКСПЕРИМЕНТЕ И ПРИ ВАКЦИНАЦИИ 03.02.02 – вирусология ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: Доктор биологических наук, доцент И.В. КИСЕЛЕВА Санкт-Петербург – ОГЛАВЛЕНИЕ Раздел 1....»

«Черкасова Анна Владимировна НОВЫЕ КАРОТИНСОДЕРЖАЩИЕ БАД: ПОЛУЧЕНИЕ, СВОЙСТВА И ПРИМЕНЕНИЕ ДЛЯ ОБОГАЩЕНИЯ МОЛОЧНЫХ ПРОДУКТОВ Специальность: 05.18.07– Биотехнология пищевых продуктов и биологических активных веществ Диссертация на соискание ученой степени кандидата технических наук Научный руководитель: доктор технических наук,...»

«Коротких Алина Сергеевна БИОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА И СЕЛЕКЦИОННАЯ ОЦЕНКА ВИДОВ И СОРТОВ РОДА NARCISSUS L. В УСЛОВИЯХ ЮГО-ЗАПАДА ЦЧЗ (НА ПРИМЕРЕ БЕЛГОРОДСКОЙ ОБЛАСТИ) 06.01.05 – селекция и семеноводство сельскохозяйственных растений ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой...»

«БОЛГОВА Светлана Борисовна РЫБНЫЕ КОЛЛАГЕНЫ: ПОЛУЧЕНИЕ, СВОЙСТВА И ПРИМЕНЕНИЕ Специальность: 05.18.07 Биотехнология пищевых продуктов и биологических активных веществ Диссертация на соискание ученой степени кандидата технических наук Научный руководитель: Заслуженный деятель науки РФ, доктор технических наук, профессор Антипова...»







 
2016 www.konf.x-pdf.ru - «Бесплатная электронная библиотека - Авторефераты, диссертации, конференции»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.