WWW.KONF.X-PDF.RU
БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА - Авторефераты, диссертации, конференции
 

Pages:     | 1 || 3 |

«РАЗРАБОТКА НОВЫХ СРЕДСТВ СПЕЦИФИЧЕСКОЙ ПРОФИЛАКТИКИ И ЛЕЧЕНИЯ ЭШЕРИХИОЗОВ ТЕЛЯТ И ПОРОСЯТ ...»

-- [ Страница 2 ] --

Отечественной биологической промышленностью выпускаются «Поливалентная антитоксическая сыворотка против паратифа и колибациллеза телят, ягнят, овец и птиц». Основными недостатками указанных лечебнопрофилактических сывороток являются низкий титр антител или полное отсутствие их к адгезивным антигенам К88, К99, 987Р и F41, а также ТЛ- и ТС-энтеротоксинам (Малахов Ю.А. и др., 1993).

Однако наличие большого множества серотипов, сложная антигенная структура возбудителя эшерихиоза, несмотря на определенные успехи в борьбе с колидиареей молодняка сельскохозяйственных животных, до настоящего времени вопросы специфической профилактики и лечения данной патологии остаются несовершенными.

Анализ литературы показывает, что для конструирования антиэшерихиозного профилактического (вакцинного) препарата является использование не цельноклеточных, а субъединичных вакцин на основе адгезивных антигенов, полученных из очищенных пилий (фимбрий) из наиболее важных штаммов К88, К99, 987Р и F41. При этом, с учетом литературных данных о том, что сочетание антигенов с иммуномодуляторами ведет к существенному повышению иммунного ответа, мы поставили перед собой задачу получения комплексных антигенов на основе пилезных антигенов и продуктов пчеловодства, как одного из эффективных иммуномодуляторов, а в качестве депонирующих агентов -субъединичные фракции природных адсорбентов - монтмориллонитов.

Следовательно, разработка композиционного полиглобулинового комплекса, включающего глобулины, продукты пчеловодства, продукты метаболизма пробиотических микроорганизмов и природные адсорбенты, а также полиантигенного комплекса на основе антиадгезивных пилезных (фимбриальных) антигенов в сочетании хитин-хитозансодержащими (продукты пчеловодства) и высокодисперсными депонирующими агентами природными адсорбентами (класс монтмориллонитов), представляется вполне реальной и перспективной, что и явилось предметом наших исследований, результаты которых приведены в последующих разделах диссертации и автореферата.

3.1 Изготовление полиантигенного комплекса на основе пилезных антигенов и иммуномодуляторов В качестве продуцентов адгезивных антигенов (пилий) использовали референтные энтеротоксигенные штаммы E. coli: «ПЛ-6» - синтезирующий адгезивный антиген К88, «КВ-1» - синтезирующий адгезивный антиген К99, «УК-2» - синтезирующий адгезивный антиген 987Р и «ПЗ-3» - синтезирующий адгезивный антиген F41, выделенные из организма больных эшерихиозной диареей поросят и телят, хранящиеся в лаборатории коллекции микроорганизмов ФГБУ «ФЦТРБ-ВНИВИ».

Изолирование и очистку пили осуществляли согласно методике, разработанной Kuzuya M. et al. (1988).

В результате проведенных исследований на этом этапе работы нами были получены 4 пили – антигены E. coli (К88, К99, 987Р и F41), которые стандартизировали по белку до 10%-ной концентрации и оставляли на хранение для конструирования комплексной субъединичной (пилезной) вакцины.

Учитывая, что в настоящее время в ветеринарной и медицинской практике широко применяются иммуномодуляторы различного происхождения для повышения иммунного ответа организма на введение любого антигена, в следующей серии опытов проводили исследования по отбору оптимальных модулирующих препаратов, которые были бы более активными по сравнению с известными и не оказывали бы инактивирующего воздействия на серологическую (антигенную) активность полученных пили антигенов.

С учетом сообщений ряда авторов о том, что совместное применение Тактивина и инактивированной вакцины против колибактериоза приводит к повышению иммунного ответа организма (Гаффаров Х.З. и др., 2002), в качестве одного из испытуемых иммуномодуляторов мы выбрали препарат Тактивин.Как известно Т-активин представляет собой препарат полипептидной природы, получаемый из вилочковой железы (тимуса) крупного рогатого скота. Кроме того в опытах использовали новый препарат апизан, полученный в отделе радиобиологии ФГБУ «ФЦТРБ-ВНИВИ».

По данным литературы апизан способен прочно удерживать в своей структуре растворитель, а также растворенные и взвешенные в нем вещества, поэтому апизан обладает более выраженными сорбционными свойствами в растворенном виде, способен связывать (адсорбировать) большое количество органических нерастворимых веществ, в том числе бактериальные клетки, антигены, токсины, а также токсины, образующиеся в тонком и толстом отделе кишечника.

Вышеперечисленные уникальные свойства хитозана (апизана) послужили основанием для использования его в качестве одного из потенциальных адъювантов (иммуномодуляторов и иммуностимуляторов) при конструировании антиэшерихиозных лечебно-профилактических препаратов.

Для конструирования субъединичных противоэшерихиозных 4-пили вакцин, 0,1%-ные пили-антигены в равных объемах смешивали друг с другом и добавляли к смеси антигенов равные объемы соответствующих иммуномодуляторов (0,01%-ные растворы тимогена, Т-активина и апизана), а в качестве депонирующих иммуносорбентов - (гидросиликаты алюминия и монтмориллонитовую высокодисперсную фракцию природного минерала – бентонита.

В результате исследований нами были сконструированы пять вариантов субъединичных противоэшерихиозных вакцинных препаратов. При этом экспериментальный образец вакцины № 1 представляет собой полиантиген, содержащий в 1 мл (по 1 мг каждого) пилезные антигены К88, К99, 987Р и F41 и 1 мг адъюванта тимогена. Состав вакцины № 2 аналогичен, но с той разницей, что в качестве адъюванта содержит 1 мг Т-активина. Вакцина № 3имеет тот же антигенный состав, но включающий в качестве адъюванта биополимер – апизан в количестве 1 мг/мл и 1 мг высокодисперсной фракции бентонита; состав вакцины № 4 аналогичен предыдущим, но с той разницей, что в качестве адъюванта содержит 1 мг гидроокиси алюминия (ГОА) и состав вакцины № 5 аналогичен предыдущим, но с той разницей, что в качестве адъюванта содержит 1 мг высокодисперсной фракции монтмориллонита.

Полученные на предыдущем этапе работы антигенные комплексы на основе пили - антигенов и адъювантов, были использованы в качестве иммунизирующих средств с целью получения лечебных антиэшерихиозных сывороток. Основанием для проведения этих исследований явилось то, что результаты изучения антигенности и иммуногенности полученных антигенных комплексов показали, что они, будучи введенными в организм, способны индуцировать синтез антител с различной иммунологической компетентностью, обладающие поликлональными свойствами, осуществляя поликлональную активацию В-лимфоцитов и осуществить синтез специфических антиэшерихиозных антител (Р.Р. Гайзатуллин, 2012).

С учетом изложенного и с целью получения экспериментальных образцов поликлональных антител, обладающих лечебно-профилактическими свойствами при изучаемой патологии (эшерихиозной интоксикации), опыты проводили на 20 кроликах.

В результате проведенных исследований были получены 12 образцов кроличьих антисывороток и 7 образцов элюатов из органов животных – реконвалесцентов.

Из гипериммунных сывороток и элюатов из органов выделяли глобулины методом высаливания насыщенным раствором сульфата аммония. Полученные сывороточные и тканевые иммуноглобулины, после скрининговых исследований, были использованы в качестве основных компонентов при конструировании противоэшерихиозных лечебных препаратов.

Первичная оценка эффективности потенциальных 3.1.1 иммунопрофилактических препаратов в модельной in vitro тест-системе Перед началом основных опытов по оценке иммунопрофилактической эффективности испытуемых экспериментальных образцов субъединичных противоэшерихиозных пили антигенов E. coli, изучали чувствительность культуры клеток (лимфоцитов) к патогенному агенту – эшерихиозному эндотоксину, полученному из энтеротоксигенного штамма E. coli «КВ1». При этом исходили из того, что летальная доза (ЛД100) эшерихиозного эндотоксина, полученного из указанного вирулентного штамма кишечной палочки, для белых мышей составляла 7,9 мг (39,5 мг/кг), в модельных опытах на культуре клеток испытывали различные концентрации токсина в диапазоне доз от 1 до 100 мкг/мл с шагом 10 мкг (Р.Р. Гайзатуллин, 2012).

Для определения летальных доз эндотоксина E. coli для тест-культур клеток, испытуемые концентрации эндотоксина и лимфоциты инкубировали в стандартной питательной среде при 37оС в течение 24 ч, затем во флаконы с культивируемыми клетками вносили испытуемые концентрации энтеротоксина E. coli и вновь инкубировали в течение 24 ч при указанной температуре.

В качестве критерия оценки жизнеспособности клеток на фоне воздействия на них испытуемого энтеротоксина использовали выживаемость и гибель иммуноцитов, выражая конечный эффект в количестве или процентах погибших или выживших лимфоцитов.

Результаты цитометрирования окрашенных эритрозином мазков культур клеток показали, что внесение в инкубационную среду энтеротоксина E. coli «КВ1» в концентрации 42,59 мкг/мл последовало полное (99,07%) ингибирование роста культуры клеток (лимфоцитов). Поэтому при моделировании поражения клеток эндотоксином E. coli использовали концентрацию токсина 42,6 мкг/мл.

Исследования показали, что гибель клеток тест-культуры наступает при внесении в суспензию клеток лимфоцитов эшерихиозного энтеротоксина в концентрации 42,6 мкг/мл.

Параллельно изучали влияние испытуемых иммунопротекторов – субъединичных вакцинных препаратов – пили антигенов К88, К99, 897Р и F41 на жизнеспособность культуры клеток – лимфоцитов при совместном культивировании иммуногенов и испытуемых препаратов. Результаты исследований показали, что внесение в инкубационную среду с лимфоцитами испытуемых антигенов в концентрациях от 1 до 1000 мкг/мл токсического действия не оказывало – в окрашенных эритрозином мазках увеличения количества окрашенных (нежизнеспособных) клеток по сравнению с контролем не происходило. С учетом полученных результатов концентрации вносимых в инкубационные среды испытуемых субъединичных антигенов, в зависимости от состава испытуемых вакцинных препаратов, составляли от 10 до 50 мкг/мл.

Полученные в предварительных опытах данные по определению летальных доз эшерихиозного эндотоксина для клеток in vitro тест-системы (лимфоцитов) и оптимально переносимые дозы испытуемых антигенов на культивируемые клетки послужили основанием для проведения скрининговых исследований по определению протективной активности антигенов.

Для этой цели в культивируемую лимфоциты среду вносили различные концентрации (10, 20, 30, 40, 50 мкг/мл) антигенов, затем инкубировали лимфоциты в течение 4 ч и по истечении указанной экспозиции в эти же среды вносили по 42,6 мкг/мл эшерихиозного энтеротоксина, лимфоциты повторно инкубировали в течение 4, 24 и 48 ч в присутствии энтеротоксина. По истечении указанных экспозиций оценивали защитный эффект испытуемых антигенов путем подсчета живых (неокрашенных) и нежизнеспособных (окрашенных) клеток по сравнению с контролем.

Результаты микроцитометрического анализа мазков показали, что предварительное внесение в инкубационную среду испытуемых антигенов за 4, 24 и 48 ч до поступления в питательную среду поражающего агента (энтеротоксина E. coli) и последующая инкубация обработанных испытуемыми протекторами (субъединичными антигенами) оказывала защитный эффект, который зависел от состава испытуемого антигенного препарата.

Установлено, что наиболее высокой протективной активностью из испытанных вариантов экспериментальных образцов вакцин обладали субъединичная 4-пили вакцина № 3, изготовленная путем смешивания равных объемов 0,1%-ных растворов антигенов К88, К99, 987Р и F41 + 0,1%-ный апизан + 0,1%-ная высокодисперсная фракция монтмориллонита (0,6%-ный раствор антигенов, иммуномодулятора и иммуносорбента), которая обеспечивала защиту от эшерихиозной гибели 75,6% лимфоцитов.

В другой серии опытов проводили первичную оценку иммунотерапевтической активности сывороточных и тканевых глобулинов.

Для первичной оценки лечебной эффективности полученных в предыдущей серии экспериментов сывороточных и тканевых глобулинов, во второй серии опытов использовали ту же in vitro модель – клеточную культуру лимфоцитов.

Для моделирования поражения иммуноцитов эндотоксином, в инкубационную среду с лимфоцитами вносили эндотоксин E. coli в концентрации 42,6 мкг/мл (ЛД70), затем инкубировали лимфоциты в течение 30 мин и по истечении указанной экспозиции вносили испытуемые лечебные препараты (сывороточные и тканевые – гистоглобулины) в количестве от 0,010 до 0,020 мг/мл, инкубировали в течение 4, 24 и 48 часов.

Установлено, что из испытанных иммуноглобулинов, наиболее высокой иммунопротекторной активностью обладала антисыворотка, полученная на 30 сут опыта от выживших после экспериментального заражения возбудителем эшерихиоза животных, которая обеспечивала выживаемость 85,9% пораженных энтеротоксином E. coli лимфоцитов при совместном культивировании подвергнутых токсическому воздействию клеток с испытуемыми глобулинами.

В результате проведенных скрининговых исследований установлено, что из испытанных 20 потенциальных иммунотерапевтических препаратов (сывороточных и тканевых глобулинов), в модельной in vitro тест-системе обладали наиболее высоким иммунотерапевтическим потенциалом три препарата: 1) антисыворотка, полученная от переболевших и выживших после экспериментального заражения возбудителем эшерихиоза животных – реконвалесцентов; 2) антисыворотка, полученная от 1-кратно иммунизированных 4-пили антигеном (субъединичной 4-пили вакциной) животных и 3) гистоглобулины, полученные из элюатов печени (или почек, селезенки, лимфатических узлов, костного мозга, скелетных мышц) выживших после экспериментального эшерихиоза животных – реконвалесцентов.

В целом препараты при совместном постинкубационном культивировании лимфоцитов обеспечивали 79,3-85,9%-ную выживаемость пораженных энтеротоксином E. coli иммуноцитов. Поэтому указанные глобулины были отобраны в качестве основных компонентов для конструирования антиэшерихиозных лечебных препаратов.

В результате проведенных на этом этапе исследований, целью которых являлось изучение возможности повышения биологической активности антиэшерихиозных полиглобулинов путем использования биологически активных веществ – усилителей зоогенного, фитогенного, микробного и минерального происхождения, установлено, что добавление в определенных соотношениях к базовому препарату – полиглобулинам на основе иммунных антиэшерихиозных сывороток экстракта из натуральной биологически активной кормовой добавки «Вита-Форце М» (аписоген), продукта метаболизма бифидобактерий (бифидоген), природного сорбционнодетоксицирующего агента монтмориллонита, оказывало усиливающее действие на базовый компонент (полиглобулины), повышая выживаемость пораженных эшерихиозным энтеротоксином лимфоцитов при постинкубационном культивировании их с полученной многокомпонентной композицией.

Таким образом, стандартизированный окончательный вариант комплексного полиглобулино-аписогенного, бифидогенного и минералосорбционного препарата, который сокращено назван «Пабисорб»

(полиглобулиновый, аписогенный, бифидогенный и сорбционный), представляет собой 10%-ный раствор, содержащий в 100 мл 6800 мг полиглобулинов, 1200 мг сухих экстрактивных веществ препарата «ВитаФорце М», 200 мг продуктов метаболизма B. bifidum и 1800 мг высокодисперсной фракции монтмориллонита.

3.2 Изучение влияния композиционного препарата «Пабисорб» на организм интактных животных 3.2.1 Изучение токсичности и безвредности препарата «Пабисорб» на организм Для изучения острой токсичности использовали 10%-ный раствор инъекционной формы препарата, содержащего 10,0 мг/мл активно действующего вещества (АДВ). Исследования проводили в условиях областной ветеринарной лаборатории.

Опыты проводили на 50 белых мышах массой 18-20 г обоего пола, разделенных на 10 групп по 5 животных в каждой. Мышам 1-й группы препарат вводили перорально в дозе 500 мг/кг (10 мг на мышь), 2-й – 1000, 3-й

– 1500, 4-й – 2000, 5-й – 2500, 6-й – 3000, 7-й – 3500, 8-й – 4000, 9-й – 4500 мг/кг, 10-я группа животных служила контролем. Препарат давали внутрь в объеме от 0,1 до 0,9 мг. Установлено, что в первых 5 группах мышей, получавших 2500 мг/кг препарата, наблюдали гибель двух из 5 использованных животных. Расчеты ЛД50, проведенные по Г.Н. Першину (1971) показали, что ЛД50 для белых мышей при пероральном поступлении составляла 3047 мг/кг.

Во втором варианте опытов изучали токсичность препарата при парентеральном (подкожном) введении его белым мышам (50 животных) с использованием тех же доз испытуемого препарата. Установлено, что при однократном подкожном введении препарата ЛД 50 для белых мышей составила 2635 мг/кг. Полученные данные свидетельствуют о низкой токсичности препарата «Пабисорб» и согласно ГОСТу 12.1.007-76 соответствует IV классу опасности.

Поскольку порошковая форма препарата предполагает длительное использование его в виде кормовой добавки, в следующей серии опытов изучали влияние препарата «Пабисорб» при длительном пероральном поступлении в организм. Для этой цели опыты проводили на 20 крысятах – отъемышах, исходной живой массой 43+2 г и разделенных на 2 группы по 10 животных в каждой. Крысята 1-й группы получали препарат ПАББ из расчета 100 мг/кг корма, животные 2-й группы получали обычный рацион без кормовой добавки. Препарат скармливали в течение 30 суток.

Динамические наблюдения за животными показали, что крысята опытной группы с охотой принимали корм с добавкой, проявляли повышенный аппетит, были более активными, имели более опрятный внешний вид, темпы роста у получавших кормовую добавку крысят были выше, чем у контрольных животных (табл. 7).

–  –  –

Из представленных в таблице материалов видно, что у крысят, получавших препарат «Пабисорб» в течение месяца, наблюдалось увеличение общей живой массы на 21,2 г (11,3%), а привесов – на 19,4 г (11,7%), чем у крысят, получавших обычный рацион (контроль).

–  –  –

Результаты параллельных гематологических исследований крысят, получавших в составе рациона испытуемый препарат, показали, что длительное скармливание (в течение 30 сут) крысятам глобулиноапифитопрепарата гематоксического действия на систему гемопоэза не оказывало (табл. 8).

С целью изучения характера патоморфологических изменений в органах и тканях животных на фоне длительного кормления их препаратом ПАББ, по окончании срока кормления (через 30 сут после начала опытов), животные опытной и контрольной групп были убиты и извлечены внутренние органы (тимус, селезенка, надпочечники) для определения их развития.

Результаты исследований показали, что длительное поступление изучаемого препарата в организм морфологических изменений не вызывало.

Результаты определения развития (коэффициента) внутренних органов показали, что длительное поступление испытуемого препарата в составе рациона сопровождалось более интенсивным увеличением массы, тимусного, селезеночного и надпочечного индексов крысят.

3.2.2 Оценка влияния препарата «Пабисорб» на факторы неспецифической резистентности организма Опыты проводили на 20 белых крысах массой 170-200 г, разделенных на 2 группы по 10 животных в каждой. Животным опытной группы испытуемый препарат вводили внутрижелудочно в дозе 25 мг/кг в виде 0,5%-ного экстракта в течение 10 суток. Через 10, 20 и 30 сут после введения препарата брали пробы крови и изучали функциональную активность перитониальных макрофагов и нейтрофилов, лизоцимную, общую бактерицидную активность сыворотки крови, а также определяли содержание общего белка, альбуминов,

-, -, -глобулинов.Результаты проведенных исследований приведены в таблице 9.

Из представленных в таблице материалов видно, что внутрижелудочное поступление препарата «Пабисорб» в организм белых крыс в дозе 25 мг/кг в течение 10 дней оказывало стимулирующее влияние на факторы неспецифической защиты, увеличивая содержание общего белка в 1,15 раза, альбуминов – в 1,08, -глобулинов – 1,11, -глобулинов – 1,24, -глобулинов – 1,21, бактерицидной активности – 1,04, лизоцимной – 1,14, ФАН – 1,05, ФЧ – 1,05 и ФИ – 1,03 раза.

–  –  –

3.2.3 Влияние препарата «Пабисорб» на систему иммуногемопоэза Опыты по оценке влияния препарата на иммуногематологические показатели организма проводили на 20 крысятах-отъемышах, разделенных на 2 группы по 10 животных в каждой. Крысята 1-й группы получали ежедневно в течение 10 дней перорально жидкую форму препарата «Пабисорб» в дозе 25 мг/кг. Крысята 2-й группы препарат не получали – они служили контролем.

Для изучения иммуноморфологического состава крови у животных в динамике (исход, через 5 и 10 дней) брали пробы крови из хвостовой вены и определяли содержание эритроцитов, лейкоцитов путем подсчета их количества в камере Горяева и качественной характеристики клеток путем анализа окрашенных по Романовскому-Гимза мазков.

Результаты гематологических исследований приведены в таблице 10.

–  –  –

Из данных таблицы видно, что поступление в организм крысят препарата «Пабисорб» оказывало положительное влияние на гематологические показатели, вызывая увеличение содержания в крови эритроцитов, гемоглобина, лейкоцитов, лимфоцитов и уменьшение юных форм нейтрофилов, эозинофилов и базофилов, которые приближались к таковому у здоровых взрослых животных. Полученные данные свидетельствуют о положительном влиянии использованного препарата на систему гемопоэза у растущих животных.

Результаты изучения влияния экспериментального образца многокомпонентного композиционного препарата «Пабисорб» на организм интактных (здоровых) животных показали, что он является малотоксичным (IV класс опасности), оказывает стимулирующее влияние на факторы неспецифической резистентности организма, которые в совокупности могут обеспечить эффективную защиту организма в условиях воздействия на него инфекционных агентов.

3.3 Изучение профилактической эффективности субъединичной вакцины СП4ПВ для телят Производственное комиссионное испытание эффективности разработанной нами субъединичной вакцины против колибактериоза, проводили в условиях СПК им. 1 Мая Краснооктябрьского района Нижегородской области, неблагополучного по колибактериозу телят.

Предварительно испытанием в условиях областной ветеринарной лаборатории было установлено, что испытуемая вакцина безвредна, стерильна, обладает антигенной активностью в ИФА. Под опытом находилось 30 стельных коров черно-пестрой породы, разделенных на 3 группы. Коров (10 гол.) 1-й группы иммунизировали подкожно субъединичной 4-пили вакциной в дозе 5 мл за 6 недель до отела в соответствии с «Методическими указаниями по диагностике, профилактике и лечению колибактериоза телят и поросят с применением средств, полученных на основе бионанотехнологии», утвержденными Отделением ветеринарной медицины Россельхозакадемии РФ 07.10.2013 года. Коровам 2-й группы (10 гол.) аналогичного срока стельности вводили внутримышечно, двукратно с интервалом в 14 дней в дозе по 15 мл на каждое введение формолвакцину поливалентную гидроокисьалюминиевую (ФВ ПВ ГОА) против колибактериоза (эшерихиоза) телят и ягнят согласно действующей инструкции. Коров 3-й группы не иммунизировали и они служили контролем.

У вакцинированных и контрольных коров до и после иммунизации в динамике в сыворотке крови определяли уровень антител в ИФА тест-системе.

Параллельно до и после отела в молочной сыворотке и сыворотке крови телят, полученных от иммунизированных двумя различными вакцинами коров, определяли уровень антител к К88, К99, 987Р и F41 – антигену в ИФА тестсистеме.

За народившимися телятами вели клиническое наблюдение, регистрируя число заболевших и павших от диареи животных.

–  –  –

Из материалов табл. 11 видно, что оба использованных варианта противоэшерихиозных вакцин индуцировали в организме коров синтез специфических антител, уровень которых зависел от состава использованных препаратов. Так, если у иммунизированных регламентированной антиэшерихиозной вакциной титры специфических антител в сыворотке крови на 15-й день после введения вакцины повышались в 2,08 раза (Р0,01), то после применения субъединичной вакцины титры антител превышали контрольный уровень в 3,02 раза (Р0,001), а уровень сравниваемой вакцины – в 1,48 раза (Р0,05).

Результаты параллельных серологических исследований проб сывороток молозива вакцинированных и невакцинированных коров, а также сывороток крови полученных от них телят показали достоверную разницу титров антител, полученных от иммунизированных и неиммунизированных животных. При этом установлено, что сыворотка молозива коров и сыворотка крови телят, полученных от иммунизированных коров, содержали достоверно высокий уровень специфических антител.

Как видно из табл. 12, сыворотка молозива иммунизированных регламентированной при эшерихиозе ФВ ПВ ГОА коров титр антител в ИФА тест-системе составил 5,78 log2, а применение субъединичной 4-пили вакцины оказывало на иммунную систему более высокое антигенное воздействие – уровень специфических антител в сыворотке молозива составил 8,57 log2.

Результаты изучения сохранности, народившихся от иммунизированных 2 видами вакцин и невакцинированных коров, представлены в табл. 13.

Из данных таблицы видно, что в контрольной группе телят (от невакцинированных коров) из 10 народившихся телят 7 заболело диареей и пало 4 в течение 24-72 часов. Из 10 телят, полученных от коров, иммунизированных субъединичной 4-пили вакциной (СП4ПВ), заболело 3 гол.

(в т.ч. 2 в легкой форме), а один теленок пал с признаками колибактериоза. Из 10 телят, полученных от коров, иммунизированных двукратно с интервалом в 14 дней внутримышечно ФВ ПВ ГОА заболело 6 и пало 2 животных в течение 24-72 часов. Сохранность составила 80%.

–  –  –

Таким образом, испытание субъединичной вакцины против колибактерилза телят и поросят в производственных условиях на крупном рогатом скоте показало, что вакцина безвредна, ареактогенна и обеспечивает напряженный иммунный ответ после однократной иммунизации и обеспечивает сохранность 90% телят в очаге колибактериоза, а биофабричная вакцина в тех же условиях обеспечила сохранность 80% телят.

3.4 Изучение профилактической эффективности субъединичной вакцины СП4ПВ для поросят Производственное комиссионное испытание эффективности субъединичной вакцины для защиты поросят проводили в условиях СТФ ООО «Авангард» Лукояновского района Нижегородской области, неблагополучного по эшерихиозу.

Предварительно испытанием в областной ветеринарной лаборатории было установлено, что испытуемая вакцина безвредна, стерильна, обладает антигенной активностью в ИФА.

Вакцину применяли в соответствии с «Методическими указаниями по диагностике, профилактике и лечению колибактериоза телят и поросят с применением средств, полученных на основе бионанотехнологии», утвержденными Отделением ветеринарной медицины Россельхозакадемии РФ 07.10.2013 года.

Для этой цели использовали 36 супоросных свиноматок, разделенных на 3 группы по принципу аналога по 12 голов. Животных 1-й группы за 5-6 недель до опороса однократно подкожно иммунизировали субъединичной (4 пилезной) вакциной (СП4ПВ) в дозе 5 мл. Животных 2-й группы двукратно с интервалом в 14 дней внутримышечно иммунизировали формолвакциной поливалентной гидроокисьалюминиевой (ФВ ПВ ГОА) против колибактериоза (эшерихиоза) поросят согласно действующей инструкции в дозе по 5 мл на первое и 6 мл на второе введение. Супоросных свиноматок 3-й группы не иммунизировали, и они служили контролем.

У вакцинированных животных до и после иммунизации в динамике в сыворотке крови определяли уровень специфических антител, а также до и после опороса в молочной сыворотке, иммунизированных различными вакцинами свиноматок, определяли уровень специфических антител к поли – К88, К99, 987Р и F41 – антигену в ИФА тест-системе.

За народившимися поросятами вели клиническое наблюдение, регистрируя число заболевших и павших от диареи животных.

В группах поросят, полученных от свиноматок, иммунизированных субъединичной и фабричной вакцинами число случаев заболевания колибактериозной диареей было незначительно (табл. 14).

Как видно из данных табл. 14 в группе поросят, матери которых были иммунизированы субъединичной вакциной из 98 народившихся заболело с признаками колибактериоза 9 гол.

и 8 поросенка пали, в то время как во второй группе поросят, полученных от свиноматок, вакцинированных биофабричной вакциной заболело 37 гол., сохранность составила 78,1%. В контрольной группе поросят, матери которых не были вакцинированы, заболели с признаками колибактериоза 67 и пало 54 гол, т.е. выживаемость в очаге колибактериоза составила 41,9%. Эти данные были подтверждены и при исследовании сывороток крови свиней.

–  –  –

Таким образом, введение субъединичной вакцины свиноматкам в дозе 5 мл за 5-6 недель до опороса обеспечивает выживаемость 91,8% новорожденных поросят в неблагополучном по колибактериозу хозяйстве, а иммунизация свиноматок биофабричной вакциной ВФ ПВ ГОА согласно действующей инструкции обеспечивала сохранность 78,1% поросят.

3.5 Определение оптимальной лечебной дозы препарата «Пабисорб»

для поросят и телят Перед проведением производственных испытаний по оценке терапевтической эффективности экспериментального образца препарата «Пабисорб», предварительно проводили определение его оптимальной лечебной дозы.

Эксперименты проводили в одном из хозяйств Нижегородской области, стационарно неблагополучном по эшерихиозной диарее поросят. Для определения оптимальной лечебной дозы испытуемого препарата на основе полиглобулинов, экстракта апифитопрепарата, продуктов метаболизма B.bifidum и природного минерального сорбента, было сформировано 6 групп новорожденных поросят живой массой 1,0-1,2 кг по 12 голов в каждой.

Животным опытных групп однократно подкожно вводили композиционный препарат в дозах 1,0; 3,0; 5,0; 7,0 и 10 см3. При этом исходный препарат, имеющий концентрацию сухого вещества (активно действующего вещества – АДВ) 100 мг/см3 (10%-ный раствор глобулинов и апипрепарата), разводили в 10 раз, создавая концентрацию действующего вещества 10 мг/см3. Таким образом, животные 1-й группы получали испытуемый препарат 10 мг/кг, 2-й – 15 мг/кг, 3-й – 25 мг/кг, 4-й – 35 мг/кг и 5-й – 50 мг/кг. Животным 6-й группы в качестве лечебных средств применяли антибиотики и противоэшерихиозную сыворотку.

Результаты титрации (определения) терапевтической дозы полиглобулинового препарата на поросятах представлены в табл. 17.

Таблица 17 – Терапевтическая эффективность препарата «Пабисорб» для новорожденных поросят в зависимости от вводимой дозы Группа Доза Количество % Вводимый объем Выжил животн препарата, животных Пало сохранпрепарата, см3 о ых мг/кг в опыте ности 1 10 1,0 12 5 7 58,3 2 15 3,0 12 4 8 66,6 3 25 5,0 12 3 9 75,0 4 35 7,0 12 2 10 83,3 5 50 10,0 12 2 10 83,3 6 50 15,0 12 5 7 58,3 Из данных таблицы видно, что однократное применение препарата «Пабисорб» в дозах 5 и 7 см3 (25 и 35 мг/кг) оказывало выраженное лечебное действие при колибактериозе поросят, обеспечивая 75-83,3%-ную выживаемость больных животных. Параллельное применение регламентированных при колибактериозе поросят средств – противоэшерихиозной сыворотки и антибиотиков позволило защитить лишь 58,3% больных эшерихиозом поросят, что в 1,57 раза ниже, чем в 4-й группе, получавшей подкожно испытуемый препарат «Пабисорб» в дозе 35 мг/кг.

Применение испытуемого препарата в дозе 50 мг/кг (15 см3) также обеспечивало 83,3%-ную выживаемость больных диареей поросят, однако увеличение дозы композиционного препарата нецелесообразно, поскольку, несмотря на увеличение его дозы повышения лечебного эффекта не последовало. Следовательно, оптимальной лечебной дозой препарата «Пабисорб» для новорожденных поросят является 7,0 см3 (35 мг/кг живой массы). Полученные данные по титрации оптимальной лечебной дозы испытуемого препарата послужили основанием для продолжения опытов по определению оптимальной лечебной дозы препарата «Пабисорб» на другом виде сельскохозяйственных животных – телятах.

Эксперименты проводили в ООО «Развитие» Нижегородской области, стационарно неблагополучном по эшерихиозной диарее телят.

Для экспериментов по отработке оптимальной лечебной дозы полиглобулиновоапипрепарата в условиях неблагополучного хозяйства были сформированы 5 групп (по 5 голов в каждой) телят черно-пестрой породы 5-7 дневного возраста с массой тела 35-40 кг. Животным 1-й группы однократно подкожно вводили 10%-ный раствор препарата «Пабисорб» в дозе 0,5 см3 (50 мг на 1 голову), телятам второй группы – 1,0 см3 (100 мг), третьей – 1,5 см3 (150 мг), четвертой – 2,0 см3 (200 мг на 1 голову). Телятам 5-й группы внутримышечно вводили поливалентную противоэшерихиозную сыворотку в дозе 15 см 3 (750 мг на 1 голову). Наблюдение за животными вели в течение 14 сут, учитывая заболеваемость, день начала болезни, длительность болезни, количество павших и выживших, а также среднесуточный прирост живой массы телят за 1-й месяц. Результаты определения оптимальной терапевтической дозы композиционного препарата на телятах представлены в табл. 18.

Таблица 18 – Терапевтическая эффективность препарата «Пабисорб» для новорожденных телят в зависимости от вводимой дозы Объем Доза Количество вводимого Заболело, Пало, % Группа препарата, животных препарата, гол. гол. выживших мг/кг в группе см3 1-я 16,6 0,5 5 4 3 40 2-я 33,2 1,0 5 3 2 60 3-я 55,5 1,5 5 2 1 80 4-я 66,4 2,0 5 2 1 80 5-я 50,0 15,0 5 4 3 40 Таким образом, однократное подкожное введение инъекционного препарата «Пабисорб» в дозах 1,0-1,5 см3 (33,2-55,5, средняя 44,3 мг/кг) оказывало выраженное профилактическое действие при колибактериозе телят, предохраняя от заболевания 60-80% животных против 50%-ной защиты при применении регламентированной при колибактериозе поливалентной противоэшерихиозной сыворотки.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Выполненные исследования по разработке эффективных средств и способов профилактики и лечения эшерихиозов телят и поросят путем создания композиционных препаратов, включающих глобулины, продукты пчеловодства, продукты метобализма пробиотических микроорганизмов и природных адсорбентов, а также полиантигенного комплекса на основе пилезных (фимбриальных) антигенов и анализ полученных результатов обосновывают следующие выводы:

1. Из энтротоксигенных штаммов E. coli с помощью метода Kuzuya выделены адгезивные антигены К88, К99, 987Р и F41 (фимбрии или пили), играющие ключевую роль как в развитии эшерихиозов, так и в формировании противоэшерихиозного иммунитета.

2. Впервые разработана субъединичная противоэшерихиозная вакцина на основе пили - антигенов E. coli, аписогенного иммуностимулятора – апизана и минерального иммуносорбента – монтмориллонита.

3. Комплексный субъединичный полиантиген представляет собой 0,6%ный раствор, содержащий в 1 мл препарата 6 мг антигенного вещества, из которых на долю К88 пили – антигена приходится 1 мг, К99 – 1 мг, 987Р – 1 мг, F41 – 1 мг, апизана – 1 мг и высокодисперсной фракции монтмориллонита (размеры частиц 60-90 мкм) – 1 мг при объемном соотношении компонентов 1:1.

4. Одно- и многократное (до 4 раз) подкожное и внутрибрюшинное введение полиантигенного комплекса лабораторным животным (белые мыши, белые крысы, кролики), изменений общего состояния организма и патологических изменений тканей на месте инъекции (абсцессы, некрозы, гранулемы) не вызывало, что свидетельствует об отсутствии токсичности и реактогенности препарата.

5. Однократное подкожное введение субъединичной вакцины в дозе 5 мл за 6 недель до отела коров и 5-6 недель до опороса свиноматок обеспечивало в неблагополучных по колибактериозу хозяйствах выживаемость новорожденных телят и поросят соответственно 90% и 91,8% благодаря колостральному иммунитету.

6. Для профилактики эшерихиозов изготовлена экспериментальная серия субъединичной 4-пили вакцины в количестве 10000 доз (50 л).

Для получения 10000 доз вакцины необходимо приготовить 4000 мг пили антигенов. На выделение 1 мг антигенов расходуется 10 мл бакмассы E.coli (1:10) с содержанием 21010 м.к/мл.

7. Сконструирован композиционный противоэшерихиозный лечебнопрофилактический препарат «Пабисорб», базовыми составляющими которого являются полиглобулины сыворотки крови иммунизированных 4-пилезной субъединичной вакциной (компонент I) и этаноловый экстракт биологически активной кормовой добавки «Вита-Форце М» (компонент II), в которых растворены порошки из продуктов метаболизма B. bifidum и микрочастицы минерального иммуносорбента – монтмориллонита.

8. В состав композиционного инъекционного препарата «Пабисорб»

входят базовые компоненты (Андреева А.В., 2003; Кивалкина В.П., 1948) в следующих объемных и количественных соотношениях: 0,7 объема глобулинов из сыворотки иммунизированных субъединичной 4-пили вакциной животных (компонент I), 0,3 объема 4%-ного апифитоэкстракта «Вита-Форце М» (компонент II), в которых растворены порошки из продуктов метаболизма B. bifidum (0,2%) (компонент III) и микрочастицы монтмориллонита в количестве 2% от общего объема препарата (компонент IV).

9. Однократное подкожное введение инъекционного препарата «Пабисорб» в дозах 1,0-1,5 см3 оказывало выраженное профилактическое действие при колибактериозе телят, предохраняя от заболевания 60-80% животных.

10. Однократное пероральное применение препарата «Пабисорб» в дозах 25,35 и 50 мг/кг обеспечивало сохранность поросят в 85%. В группе поросят, которым вводили антибиотики и противоэшерихиозную биофабричную сыворотку, сохранность составила 58,3%.

11. На основе комплексного субъединичного антигена разработаны тестсистемы для выявления специфических антител к E.coli в сыворотке крови КРС и свиней методами ИФА, РБФ и РНГА. Лабораторные и производственные испытания доказали специфичность компонентов тестсистемы и их высокую активность и рекомендуются в качестве средств серологического мониторинга КРС и свиней в отношении эшерихиозов.

12. Механизм формирования антиэшерихиозного иммунитета при применении субъединичной 4-пилезной вакцины реализуется путем синтеза антиадгезивных (анти К88, К99, 987Р и F41) антител. Пили – антигены вакцины, адсорбируясь на микрочастицах иммуносорбента (монтмориллонита), доставляются иммунокомпетентным В-клеткам, минуя стадию захвата и переваривания антигена макрофагами. Иммуносорбент (монтмориллонит), десорбируя антигены, одновременно, отдавая микро- и макроэлементы, адсорбирует токсические продукты метаболизма и выводится через желудочно-кишечный тракт из организма животного.

Обобщая результаты наших исследований, анализируя сведения, имеющиеся в литературе можно отметить, что перспективным направлением научных исследований является разработка полупромышленных и промышленных технологий изготовления субъединичных вакцин и лечебных средств для профилактики эшерихиозов молодняка различных видов сельскохозяйственных животных. Другим современным направлением является разработка новых иммуномодуляторов для предупреждения у новорожденных телят и поросят первичных иммунодефицитов, пробиотиков для борьбы с условно-патогенной микрофлорой, гипериммунных сывороток, иммуноглобулинов для повышения резистентности животных.

Достижения генной инженерии и биотехнологии создают принципиальную возможность для совершенствования вакцин против эшерихиозов и других инфекций, которые будут обладать целым рядом преимуществ перед традиционными вакцинами. Внедрение таких биопрепаратов в ветеринарную практику в будущем может иметь чрезвычайно важную роль в профилактике и защите поголовья скота от наиболее распространенных инфекций.

Рекомендации производству На основании проведенных исследований разработаны и предложены для внедрения в ветеринарную практику субъединичная вакцина, методы серологической диагностики на применении которых составлены следующие

НТД:

Методические указания по диагностике, профилактике и лечению 1.

колибактериоза телят и поросят с применением средств, полученных на основе бионанотехнологии (в порядке производственного испытания) //Утв.

академиком-секретарем Отделения ветеринарной медицины, академиком РАСХН Смирновым А.М. 17.10.2013. Тираж 100 экз.

Инструкция по применению субъединичной вакцины против 2.

колибактериоза телят и поросят (в порядке производственного опыта) //Утв.

директором ФГБУ «ФЦТРБ-ВНИВИ, член-корр. РАН, профессором Ивановым А.В., согласовано нач. ГУВ КМ РТ Хисамутдиновым А.Г.

Инструкция по применению «Набора препаратов для выявления 3.

антител к бактериям Echerichia coli методом иммуноферментного анализа» (в порядке производственного испытания) / //Утв. директором ФГБУ «ФЦТРБВНИВИ, член-корр. РАН, профессором Ивановым А.В., согласовано нач. ГУВ КМ РТ Хисамутдиновым А.Г.

Технические условия на «Набор препаратов для выявления 4.

антител к бактериям Echerichia coli методом иммуноферментного анализа»

//Утв. директором ФГБУ «ФЦТРБ-ВНИВИ, член-корр. РАН, профессором Ивановым А.В., согласовано нач. ГУВ КМ РТ Хисамутдиновым А.Г.

Инструкция по применению «Набора препаратов для выявления 5.

антител к бактериям Echerichia coli методом реакции непрямой гемагглютинации». Утв. директором ФГБУ «Федеральный центр токсикологической, радиационной и биологической безопасности», член-корр.

РАН, профессором А.В. Ивановым.

Инструкция по применению «Набора препаратов на основе 6.

бентонитового диагностикума для выявления антител к бактериям Echerichia coli методом реакции бентонитовой флокуляции». Утв. директором ФГБУ «Федеральный центр токсикологической, радиационной и биологической безопасности», член-корр. РАН, профессором А.В. Ивановым.

Список использованной литературы Андреева, А.В. Влияние сочетанного применения 1.

иммуностимуляторов на показатели бактерицидной, лизоцимной активности сыворотки крови и фагоцитарной активности лейкоцитов /А.В. Андреева // Ветеринарная патология. – 2003. – № 3(7). – С.35-37.

Гайзатуллин, Р.Р. Модифицирующее действие композиционного 2.

препарата «Полиаписоген» на течение комбинированного радиационного биологического поражения /Р.Р. Гайзатуллин //Ветеринарный врач. – 2012. – №2. –С.5-6.

Гаффаров, Х.З. Полиспецифическая сыворотка как средство 3.

экстренной профилактики и лечения рота-, коронавирусной и эшерихиозной диареи новорожденных телят /Х.З. Гаффаров, Г.Н. Спиридонов, М.З. Абдеева и др. // Науч. основы технологии производства вет. биол. препаратов. – Щелково, 1996. – С.84-85.

Гаффаров, Х.З. Моно-смешанные инфекционные диареи 4.

новорожденных телят и поросят: монография / Х.З. Гаффаров, А.В. Иванов, Е.А. Непоклонов, А.З. Равилов // Казань: изд-во «Фэн», 2002. – 590с.

Дворкин, Г.Л. Динамика иммунологических изменений в организме 5.

коров, привитых поливалентной гидроокись-алюминиевой формолтиомерсаловой вакциной против колибактериоза (эшерихиоза) телят / Г.Л. Дворкин, В.А. Ленькова // Проблемы ветеринарной иммунологии: науч.тр.

– М., 1985. – С.108-112.

Джупина, С.И. Факторные инфекционные болезни /С.И. Джупина // 6.

Ветеринария. – 2001. - № 1. – С.6-9.

Зароза, В.Г. Эшерихиоз телят / В.Г. Зароза – М.: Агропромиздат, 7.

1991. – 239 с.

Иванов, А.А. Результаты испытания вакцины ассоциированной 8.

против анаэробной энтеротоксемии и эшерихиозной диареи телят на лабораторных животных /А.А. Иванов, Г.Н. Спиридонов и др. //Ветеринарный врач. – 2012. – № 2. – С.10-12.

Иванов, А.В. Инфекционные болезни свиней (этиология, 9.

эпизоотология, диагностика, профилактика) /А.В. Иванов, Р.Х. Юсупов – М.:

ФГНУ «Росинформагротех». – 2006. – 108 с.

10. Исмагилов, А.М. Естественный микробиоценоз кишечника при мелофагозе овец, лечении медиатрепсом и иммуностимуляции оксиметилурауилом, эракондом и прополисом / А.М. Исмагилов, Р.Т. Маннапова // Апитерапия сегодня – с биологической аптекой пчел в XXI век: Матер. II Междунар. научно-практ. конф. по апитерапии – Уфа, 2000. – С.

145-152.

11. Кивалкина, В.П. Бактерицидные свойства прополиса / В.П.

Кивалкина // Пчеловодство. – 1948. – № 10. – С.50-51.

12. Кивалкина, В.П. Лекарственные формы прополиса /В.П. Кивалкина, А.А. Барскова // Пчеловодство. – 1991. – №11. – С.36-37.

13. Лавровская, В.М. Вакцина ассоциированная против диареи телят / В.М. Лавровская, Е.С. Воронин, Д.А. Девришев, Н.Ф. Брусничина // Патент РФ. – 1993. - № 2035916

14. Малахов, Ю.А. Вакцина против колибактериоза телят / Ю.А.

Малахов, О.А. Тугаринов и др. – Патент РФ, 1993, № 1149467.

15. Малахов, Ю.А. Способ получения сыворотки адгезивной и антитоксической против эшерихиоза сельскохозяйственных животных / Ю.А. Малахов, О.А. Тугаринов, М.К. Пирожков, В.С. Солодков – Патент РФ. – 1993. – № 2043772.

16. Маннапова, Р.Т. Влияние прополиса и нового препарата из группы пиримидинов на естественную резистентность / Р.Т. Маннапова, Н.В.

Гребенкова, В.П. Кривоногов // Апитерапия сегодня – с биологической аптекой пчел в XXI век: Мат. II-й Междунар. науч.-практич. конф. – Уфа. С.304-307.

17. Мищенко, В.А. Экологические особенности заболеваний пищеварительной системы новорожденных телят / В.А. Мищенко, Д.К.

Павлов и др. // Ветеринарная патология. – 2005. – № 3. – С.34-37.

18. Новак, Д.Д. Способ получения вакцины против эшерихиоза телят / Д.Д. Новак, В.Т. Вольф – Патент РФ. – 1996. – № 2070819.

19. Панин, А.Н. Динамика массы, структурных компонентов тимуса, тимического индекса и Т-лимфоцитов телят, полученных от вакцинированных и стимулированных прополисом и оксиметилурацилом коров / А.Н. Панин, А.Г. Маннапов и др. // Апитерапия сегодня – с биологической аптекой пчел в XXI век: Матер. II Междунар. научно-практ. конф. по апитерапии – Уфа, 2000.

– С.90-93.

20. Папуниди, К.Х. Технологические загрязнения окружающей среды как фактор заболеваемости животных / К.Х. Папуниди // Ветеринарный врач. – 2000. – № 2. – С.56-58.

21. Петрянкин, Ф.П. Иммунобиология комплекса «мать – плод – новорожденный» у животных: монография / Ф.П. Петрянкин. – Чебоксары, 2008. – 72 с.

22. Пирожков, М.К. Способ получения вакцины против колибактериоза поросят / М.К. Пирожков, О.А. Тугаринов – Патент РФ. – 1994. – №2022563.

23. Попов, Е.М. Новый антиген адгезии эшерихий – возбудителей колидиареи телят / Е.М. Попов, Е.А. Светоч // Совершенствование методов гос. контроля вет. препаратов: Тезисы докл. Всесоюзной науч. конф. – М., 1991. – С.210-211.

24. Светоч, Е.А. Фено-генотипические свойства штаммов E. coli, продуцирующих антиген К88 / Е.А. Светоч, Е.М. Попов, В.В. Гусев // Ветеринария. – 1997. – № 11. – С.19-23.

Сидоров, М.А. Основы профилактики желудочно-кишечных 25.

заболеваний новорожденных животных / М.А. Сидоров, В.В. Субботин // Ветеринария сельскохозяйственных животных. – 2008. – № 3. – С.8-12.

26. Сисягин, П.Н. Лечебно-профилактическое средство для молодняка крупного рогатого скота / П.Н. Сисягин, Р.Е. Ким и др. – Патент РФ. – 2001. – № 2169558.

27. Сисягина, Е.П. Разработка средств и способов терапии и профилактики респираторных болезней телят: автореф. дис… д-ра вет. наук:

06.02.02 / Елена Павловна Сисягина. – Нижний Новгород, 2010. – 46с.

28. Смирнов, А.М. Актуальные вопросы ветеринарно-санитарных мероприятий на территориях загрязненных экотоксикантами /А.М. Смирнов, В.И. Дорожкин, П.Н. Рубченко / под общ. ред. Смирнова А.М. и др. // Проблемы ветеринарной санитарии, гигиены и экологии – М., 2010. – № 2. – С.7-13.

29. Спиридонов, Г.Н. Вакцина ассоциированная против анаэробной энтеротоксемии и эшерихиозной диареи телят / Г.Н. Спиридонов, А.А. Иванов и др. – Патент РФ. – 2011. – № 242820.

30. Тетерев, И.И. Прополис в животноводстве и ветеринарии:

монография / И.И. Тетеров – Киров. – 1998. – 88 с.

31. Тугаринов, О.А. Факторы вирулентности энтеропатогенных эшерихий и оптимальные среды /О.А. Тугаринов, М.К. Пирожков, Т.И.

Исхакова // Профилактика и эффективность специфических средств защиты животных и методы контроля качества биопрепаратов: Сб. науч. тр. – М., 1991

– Т.53. – С.17-24.

32. Федоров, Ю.Н. Этиологическая структура и иммунопрофилактика желудочно-кишечных болезней телят в ранний постнатальный период /Ю.Н. Федоров, А.А. Частов // Мат. междунар. конф., посвящ. 80-летию Самарской НИВС. – Самара, 2009. – С.506-513.

33. Шахов, А.Г. Профилактика и терапия желудочно-кишечных и респираторных болезней молодняка с применением химических и биологических препаратов / А.Г. Шахов, А.И. Ануфриев, Ю.Н. Бригадиров // Итоги и перспективы науч. иссл. по проблеме патологии животных и различных средств и методов терапии и профилактики: Сб. науч. тр. – Воронеж, 1995. – С.82-89.

34. Шахов, А.Г. Этиология и профилактика желудочно-кишечных и респираторных болезней телят и поросят / А.Г. Шахов // Ветеринарная патология. – 2003. – № 2. – С.25-28.

35. Asai, Т. Phylogenetic groups and cephalosporin resistance genes of Escherichia coli from diseased food-producing animals in Japan / Т. Asai, К.

Masani, С. Sato, et al. // Acta Veterinaria Scandinavica. – 2011. – Vol.53 – p.4-5.



Pages:     | 1 || 3 |

Похожие работы:

«Шапурко Валентина Николаевна РЕСУРСЫ И ЭКОЛОГИЧЕСКОЕ КАЧЕСТВО ЛЕКАРСТВЕННЫХ РАСТЕНИЙ (НА ПРИМЕРЕ БРЯНСКОЙ ОБЛАСТИ) Специальность 03.02.08 – Экология (биологические науки) АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Брянск 2014 Работа выполнена на кафедре экологии и рационального природопользования ФГБОУ ВПО «Брянский государственный университет имени академика И.Г. Петровского» доктор сельскохозяйственных наук, профессор Научный...»

«Степина Елена Владимировна ЭКОЛОГО-ФЛОРИСТИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА СТЕПНОЙ РАСТИТЕЛЬНОСТИ ЮГО-ЗАПАДНЫХ РАЙОНОВ САРАТОВСКОЙ ОБЛАСТИ 03.02.08 – экология (биологические науки) Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Саратов – 2015 Работа выполнена в Балашовском институте (филиале) федерального государственного бюджетного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Саратовский государственный университет имени Н.Г....»

«Потапов Григорий Сергеевич СТРУКТУРА НАСЕЛЕНИЯ ШМЕЛЕЙ (HYMENOPTERA: APIDAE, BOMBUS LATR.) ЕВРОПЕЙСКОГО СЕВЕРА РОССИИ 03.02.08 – Экология (биология) АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Томск – 2015 Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном учреждении науки Институте экологических проблем Севера Уральского отделения Российской академии наук, в лаборатории экологии популяций и сообществ. Научный руководитель: доктор...»

«Худоногова Елена Геннадьевна БИОЛОГИЯ, ЭКОЛОГИЯ И ПРОДУКТИВНОСТЬ ПОЛЕЗНЫХ РАСТЕНИЙ ПРЕДБАЙКАЛЬЯ: АНАЛИЗ, ПРОГНОЗИРОВАНИЕ И ОПТИМИЗАЦИЯ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ Специальность 03.02.01 – ботаника (биологические науки) АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук Оренбург 2015 Работа выполнена на кафедре ботаники, плодоводства и ландшафтной архитектуры в ФГБОУ ВО «Иркутский государственный аграрный университет имени А.А. Ежевского» Научный консультант:...»

«АНДОСОВА ЛАРИСА ДМИТРИЕВНА КЛИНИКО-ЛАБОРАТОРНЫЕ АСПЕКТЫ В ОЦЕНКЕ ЗАБОЛЕВАНИЙ ШЕЙКИ МАТКИ ПРИ ПАПИЛЛОМАВИРУСНОЙ ИНФЕКЦИИ 14.03.10 – клиническая лабораторная диагностика Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук Нижний Новгород – 2014 Работа выполнена в ГБОУ ВПО «Нижегородская государственная медицинская академия» Минздрава России Научный консультант: Конторщикова Клавдия Николаевна – доктор биологических наук, профессор Официальные оппоненты:...»

«ПРОКОПЬЕВА Елена Александровна ФЕНОТИПИЧЕСКИЕ И ГЕНОТИПИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА ПАНДЕМИЧЕСКОГО ВИРУСА ГРИППА А(H1N1)pdm09 ПРИ АДАПТАЦИИ К МЫШАМ РАЗЛИЧНОГО ГЕНОТИПА 03.02.02 вирусология Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Санкт-Петербург, 2015 г. Работа выполнена в Федеральном бюджетном учреждении науки Государственном научном центре вирусологии и биотехнологии «Вектор», р.п. Кольцово, г. Новосибирск Научный руководитель: Шестопалов...»

«ГУЛЬ ШАХ ШАХ МАХМУД БИОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ ЦИТРУСОВОЙ МИНИРУЮЩЕЙ МОЛИ (Phyllocnistis citrella Stainton) В УСЛОВИЯХ ЮГО-ВОСТОЧНОГО АФГАНИСТАНА Специальность 06.01.07 – Защита растений АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата сельскохозяйственных наук Душанбе – 2014 Работа выполнена на кафедре защиты растений Таджикского аграрного университета им. Шириншоха Шотемура Научный руководитель: Кахаров Кахар Хабибуллаевич доктор сельскохозяйственных наук,...»

«Фомина Светлана Григорьевна ПЕЙЗАЖ ЭНТЕРОВИРУСОВ У ДЕТЕЙ С ОСТРОЙ КИШЕЧНОЙ ИНФЕКЦИЕЙ 03.02.02. – вирусология Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Москва – 2013 Работа выполнена в Федеральном бюджетном учреждении науки «Нижегородский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. академика И.Н. Блохиной» Роспотребнадзора. Новикова Научный руководитель: доктор биологических наук, профессор Надежда Алексеевна...»

«Малышев Алексей Владиславович КОМПЛЕКСНАЯ СИСТЕМА ПЕРСОНАЛИЗИРОВАННЫХ МЕРОПРИЯТИЙ ПО ПОВЫШЕНИЮ КЛИНИКОФУНКЦИОНАЛЬНОЙ ЭФФЕКТИВНОСТИ ХИРУРГИЧЕСКОГО ЛЕЧЕНИЯ ВИТРЕОРЕТИНАЛЬНОЙ ПАТОЛОГИИ 14.01.07 – глазные болезни Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук Москва 2015 Работа выполнена на кафедре офтальмологии Федерального государственного бюджетного образовательного учреждения дополнительного профессионального образования «Институт повышения...»

«УСАЧЕВ ИВАН ИВАНОВИЧ Микробиоценоз кишечника, его оценка и контроль у овец, целенаправленное формирование у новорожденных ягнят 06.02.02 – ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора ветеринарных наук Москва-2014 Работа выполнена в ФГБОУ ВПО «Брянская государственная сельскохозяйственная академия», на кафедре терапии, хирургии, ветеринарного акушерства и...»

«Гафаров Рамиз Рафикович Совершенствование лабораторной диагностики краснухи в условиях проведения массовой вакцинопрофилактики 03.02.02 Вирусология 14.03.10 Клиническая лабораторная диагностика АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Москва-2014 Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном учреждении «Научно-исследовательский институт вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова» Российской академии медицинских наук Научные...»

«ДОМНИНА Виктория Леонидовна ИССЛЕДОВАНИЕ ЭКОЛОГИЧЕСКОГО СОСТОЯНИЯ ВОДНЫХ ОБЪЕКТОВ Г. ТУЛА МЕТОДАМИ БИОИНДИКАЦИИ И БИОТЕСТИРОВАНИЯ 03.02.08 – экология (биология) Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Тула 2015 Работа выполнена на кафедре биологии и экологии Федерального государственного бюджетного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Тульский государственный педагогический университет имени Л.Н....»

«СЕЛИФОНОВА Жанна Павловна СТРУКТУРНО-ФУНКЦИОНАЛЬНАЯ ОРГАНИЗАЦИЯ ЭКОСИСТЕМ ЗАЛИВОВ И БУХТ ЧЕРНОГО И АЗОВСКОГО МОРЕЙ (РОССИЙСКИЙ СЕКТОР) Специальность 25.00.28 – Океанология Д 002.140.01 Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук Мурманск, 2016 -2Работа выполнена в ФГБУН Мурманском морском биологическом институте...»

«РАДУГИНА Елена Александровна РЕГУЛЯЦИЯ МОРФОГЕНЕЗА РЕГЕНЕРИРУЮЩЕГО ХВОСТА ТРИТОНА В НОРМЕ И В УСЛОВИЯХ ИЗМЕНЕННОЙ ГРАВИТАЦИОННОЙ НАГРУЗКИ 03.03.05 – Биология развития, эмбриология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Москва 2015 ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность темы исследования. Исследования в области регенерации, начавшиеся еще в XVIII веке, вновь приобрели актуальность с появлением современных методов исследования....»

«Фирстова Виктория Валерьевна Экспериментально-иммунологическое обоснование выбора стратегии оценки поствакцинального иммунитета против чумы и туляремии 14.03.09 Клиническая иммунология, аллергология АВТОРЕФЕРАТ диссертация на соискание ученой степени доктора биологических наук Оболенск 2015 Работа выполнена в ФБУН «Государственный научный центр прикладной микробиологии и биотехнологии» Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека...»

«Новикова Любовь Александровна СТРУКТУРА И ДИНАМИКА ТРАВЯНОЙ РАСТИТЕЛЬНОСТИ ЛЕСОСТЕПНОЙ ЗОНЫ НА ЗАПАДНЫХ СКЛОНАХ ПРИВОЛЖСКОЙ ВОЗВЫШЕННОСТИ И ПУТИ ЕЕ ОПТИМИЗАЦИИ 03.02.01 – ботаника Автореферат диссертации на соискание учёной степени доктора биологических наук Саратов – 2011 Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Пензенский государственный педагогический университет имени В.Г. Белинского»...»

«Сафина Лейсэн Фаритовна Анафилактический шок на ужаления перепончатокрылыми насекомыми (частота встречаемости, иммунодиагностика и прогнозирование) 14.03.09. – клиническая иммунология, аллергология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Москва 2016 Работа выполнена в Федеральном бюджетном учреждении науки «Казанский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии» Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав...»

«Чичерина Екатерина Александровна БИОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА ВИРУЛЕНТНЫХ ШТАММОВ ВИРУСА БОЛЕЗНИ МАРЕКА 06.02.02. «Ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология» АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук Владимир 2015 Работа выполнена в федеральном государственном бюджетном учреждении «Федеральный центр охраны здоровья животных» (г. Владимир) Ирза Виктор Николаевич, доктор ветеринарных...»

«ЕРМОШ ЛАРИСА ГЕОРГИЕВНА НАУЧНО-ПРАКТИЧЕСКОЕ ОБОСНОВАНИЕ ПОЛУЧЕНИЯ ПРОДУКТОВ ПОВЫШЕННОЙ ПИЩЕВОЙ ЦЕННОСТИ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ КЛУБНЕЙ ТОПИНАМБУРА 05.18.01 – Технология обработки, хранения и переработки злаковых, бобовых культур, крупяных продуктов, плодоовощной продукции и виноградарства АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора технических наук Красноярск – 2015 Работа выполнена в ФГАОУ ВПО «Сибирский федеральный университет» доктор биологических наук, профессор...»

«Запольских Анна Михайловна Особенности эпидемиологии и профилактики пандемического гриппа в условиях мегаполиса 14.02.02 – эпидемиология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Москва – 2015 Работа выполнена в Федеральном бюджетном учреждении науки «Центральный научно исследовательский институт эпидемиологии» Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека Научный руководитель: Доктор медицинских...»







 
2016 www.konf.x-pdf.ru - «Бесплатная электронная библиотека - Авторефераты, диссертации, конференции»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.