WWW.KONF.X-PDF.RU
БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА - Авторефераты, диссертации, конференции
 

«ОКУЛОФАРИНГЕАЛЬНАЯ МИОДИСТРОФИЯ И ВАРИАБЕЛЬНОСТЬ ЛОКУСА ОФМД В ПОПУЛЯЦИЯХ ЯКУТИИ ...»

На правах рукописи

КУРТАНОВ

Харитон Алексеевич

ОКУЛОФАРИНГЕАЛЬНАЯ МИОДИСТРОФИЯ

И ВАРИАБЕЛЬНОСТЬ ЛОКУСА ОФМД

В ПОПУЛЯЦИЯХ ЯКУТИИ

03.02.07 – генетика

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени

кандидата медицинских наук

Томск – 2015

Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном научном учреждении «Научно-исследовательский институт медицинской генетики» и в Федеральном государственном бюджетном научном учреждении «Якутский научный центр комплексных медицинских проблем»

Научный руководитель:

доктор биологических наук, профессор Степанов Вадим Анатольевич

Официальные оппоненты:

Полоников Алексей Валерьевич, доктор медицинских наук; Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Курский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации, профессор кафедры биологии, медицинской генетики и экологии;

Масленников Аркадий Борисович, кандидат медицинских наук; Государственное бюджетное учреждение здравоохранения Новосибирской области «Государственный Новосибирский областной клинический диагностический центр», заведующий Областной научно-практической лабораторией ДНК-диагностики

Ведущая организация: Федеральное государственное бюджетное научное учреждение «Федеральный исследовательский центр Институт цитологии и генетики Сибирского отделения Российской академии наук» (г. Новосибирск)

Защита состоится «__» ________ 2015 года в _____часов на заседании диссертационного совета ДМ 001.045.01 при ФГБНУ «Научно-исследовательский институт медицинской генетики» при участии ГБОУ ВПО «Сибирский государственный медицинский университет» Минздрава России и ФГБНУ «Томский НИИ онкологии» по адресу: 634050, г. Томск, ул. Московский тр., д. 3.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Федерального государственного бюджетного научного учреждения «Научно-исследовательский институт медицинской генетики» (г. Томск, ул. Набережная реки Ушайки, 10) и на сайте института (www.medgenetics.ru)

Автореферат разослан «____» ____________ 2015 г.

Ученый секретарь диссертационного совета кандидат биологических наук Хитринская И.Ю.

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность исследования. Низкий уровень генетического разнообразия в популяциях якутов по сравнению с другими популяциями Евразии был показан при анализе линий митохондриальной ДНК [Федорова С.А. и др., 2003], Y-хромосомы [Пузырев В.П. и др., 2003, Харьков В.Н. и др., 2008], аутосомных микросателлитных локусов (STR) и локусов Alu-повторов [Степанов В.А., 2002]. Также данными генетикоэпидемиологических исследований якутского населения обосновано выделение нескольких форм этноспецифической патологии, названных "якутскими" наследственными болезнями [Пузырев В.П. и др., 2008]. Помимо окулофарингеальной миодистрофии к «якутским наследственным болезням» относят такие заболевания, как:

спиноцеребеллярная атаксия I типа (OMIM 164400) [Коротов М.Н., 1994; Зинченко Р.А., 2001; Банщикова Е.С., 2002; Платонов Ф.А. и др., 2004; Гинтер Е.К., 2006; Иллариошкин С.Н. и др., 2006; Конева Л.А. и др., 2010], миотоническая дистрофия (OMIM 160900) [Harper P.S. et al., 2004; Сухомясова А.Л., 2005; Федорова С.А., 2005], наследственная энзимопеническая метгемоглобинемия I типа (OMIM 250800) [Тарская Л.А. и др., 2004;

Галеева Н.М. и др., 2006], «якутский синдром низкорослости» или синдром 3-М (OMIM 273750) [Maksimova N.R. et al., 2007], аутосомно-рецессивная глухота типа 1А (OMIM 220290) [Barashkov N.A. et al., 2011; Барашков Н.А. и др., 2013], синдром низкорослости с атрофией зрительных нервов и пельгеровской аномалией лейкоцитов или SOPHсиндром (OMIM 614800) [Maksimova N.R. et al., 2010]. Распространённость этих болезней значительно выше, чем в мировом народонаселении. Для каждого заболевания выявлены особенности молекулярной природы, отличающие их от сходных фенотипов в других популяциях, в которых они встречаются реже [Пузырев В.П. и др., 2008].

Окулофарингеальная миодистрофия (ОФМД, OMIM 164300) – наследственное нервно-мышечное заболевание c аутосомно-доминантным (АД) типом наследования, клинические симптомы появляются после 40-50 лет [Tome F.M.S., 1994; Blumen S.C. et al., 2000]. Болезнь проявляется птозом век, расстройством глотания и фонации, парезом глазодвигательных мышц, слабостью лицевой мускулатуры, прогрессирующей слабостью и атрофией мышц проксимальных отделов конечностей [Witting N. et al., 2014; Neel A.T. et al., 2015].

В Европе распространенность ОФМД низкая 1:100000 чел. Но в отдельных странах или популяциях ОФМД встречается с очень высокой частотой. Так, во франкоканадской популяции в Квебеке (Канада) частота ОФМД составляет 1:1000 чел.

[Bouchard J.-P. et al., 1997]. Самая высокая частота ОФМД в мире на сегодняшний день выявлена у бухарских евреев (Израиль) - 1:600 чел. [Blumen S.C. et al., 2000].

ОФМД в популяциях России мало изучена. Предположительно, частота ОФМД у русских сравнима с европейскими данными. Трудность постановки диагноза связана с поздним началом заболевания и низкой продолжительностью жизни россиян по сравнению с гражданами европейских стран [Иллариошкин С.Н. и др., 2002; Симанов Р.В. и др., 2010]. В Якутии ОФМД была описана М. Зак [1932] и П.А. Петровым [1987].

Последние работы по изучению ОФМД в популяциях Якутии выявили высокую частоту этого заболевания [Максимова Н.Р., 2009].

Мутацию, вызывающую ОФМД, открыли канадский врач невролог Бернард Браис с коллегами в 1998 г. Ген PABPN1 картирован на 14 хромосоме (14q11.2-13). Мутация находится в 1-м экзоне гена и представляет собой увеличение числа копий тринуклеотидных GCN-повторов. У здоровых людей нормальное количество GCNповторов 10, у больных ОФМД число повторов достигает 11-17 копий.

Исследования, касающиеся гаплотипического анализа ОФМД с использованием в качестве маркеров коротких тандемных повторов (STR) или однонуклеотидных полиморфизмов (SNP), в мире единичны [Максимова Н.Р., 2009; Blumen S.C. et al., 2000, Rodriguez M. et al., 2005, Rivera D. et al., 2008, Pulkes T. et al., 2011].

Таким образом, учитывая территориальную и генетическую подразделенность между разными этносами и популяциями, населяющими Якутию [Максимова Н.Р., 2002;

Кучер А.Н., 2005], представляется актуальной необходимость проведения всестороннего исследования ОФМД, с последующей разработкой программы профилактической медико-генетической помощи населению Республики Саха (Якутия).

Цель работы: Клинико-генеалогический анализ, изучение молекулярногенетических основ и раскрытие возможных механизмов накопления окулофарингеальной мышечной дистрофии в РС (Я).

Задачи исследования:

1. Проанализировать распространенность ОФМД в РС (Я).

2. Провести клинико-генеалогический анализ больных с ОФМД в Якутии.

3. Исследовать молекулярную структуру мутации гена PABPN1 больных ОФМД.

4. Описать генетическую вариабельность, выявить структуру и распространённость SNP-гаплотипов в локусе гена PABPN1 в популяциях, проживающих на территории Якутии (якуты, эвенки, эвены, юкагиры), и у больных ОФМД.

5. Оценить возможные популяционно-генетические механизмы накопления ОФМД в Якутии.

Научная новизна исследования:

В данном исследовании проведен анализ распространенности и особенности этнотерриториального распределения ОФМД в РС (Я). Изучены клинические проявления болезни у якутов. Впервые охарактеризовано генетическое разнообразие локуса ОФМД по 11 полиморфным вариантам (rs2231301, rs1950252, rs1535094, rs7142474, rs2239579, rs8020117, rs2295126, rs1054084, rs2268330, rs7161120, rs4981469) в популяциях Якутии.

При анализе структуры неравновесия по сцеплению в локусе ОФМД, выявлен единственный гаплотип (ATCG), связанный с мутацией (GCN)14. Произведена оценка возраста генерации разнообразия по 9 исследованным STR-маркерам локуса ОФМД, составившая 3783±1254 года.

Практическая значимость:

Полученные в работе данные существенно расширили знания о частой в республике болезни (ОФМД). Получены новые данные по распространенности, этнотерриториальному распределению и показали неоднородность распределения заболевания на территории РС (Я). Информация о выявленных в работе гаплотипах локуса ОФМД, сцепленных с мутацией, может быть использована в сегрегационном анализе семей пробандов. Результаты молекулярно-генетических исследований уже нашли применение в практической медицине, полученные результаты внедрены в практическую деятельность перинатального центра РБ № 1 НЦМ РС (Я) с 2010 г.

Полученные данные молекулярно-генетических исследований локуса ОФМД могут найти применение в лабораторной ДНК-диагностике болезни. Знания о единственной мутации у якутов, наличии этой же мутации у индивидов другого этнического происхождения, о времени происхождения мутации и механизмах ее распространения указывают на необходимость исследования ОФМД, в сопредельных с Якутией областях и использовать полученные информацию в работе медико-генетических служб Якутии, Сибири и Дальнего Востока. Материалы могут быть использованы при преподавании клинической и медицинской генетики студентам медицинских и биологических факультетов и врачам на курсах повышения квалификации.

Положения, выносимые на защиту:

Распространенность ОФМД (12,5 на 100 тыс. населения) в Якутии превышает 1.

мировые значения в десятки раз и позволяет отнести редкое в мире заболевание к частым наследственным заболеваниям у якутов. Клинико-генеалогическая характеристика больных с ОФМД в РС (Я) сопоставима с клиникой больных, описанных ранее (проживающих на других территориях).

Молекулярно-генетической причиной ОФМД у якутов является экспансия 2.

(GCN)14-повторов в гене PABPN1. При анализе гаплотипа, построенного на основе связанного с мутацией второго блока неравновесия по сцеплению (LD) у якутов (rs7142474, rs2239579, rs8020117, rs2295126), у всех исследованных носителей мутации (GCN)14 выявлен единственный гаплотип (ATCG). Таким образом, распространение ОФМД в РС (Я) обусловлено накоплением единственной мутации (GCN)14 в гене PABPN1 в результате эффекта основателя.

Возраст мутации (GCN)14, рассчитанный на основании анализа STR – гаплотипов 3.

больных ОФМД, составил 189,2±62,7 поколений или 3783±1254 года.

Апробация работы: Основные материалы диссертационной работы доложены и обсуждены: на международной конференции «Генетика человека и патология» (Томск, 28-30 ноября 2007); форуме научной молодежи Республики Саха (Якутия), посвященном году академика В.П. Ларионова (Якутск, 1 февраля 2008); 2-й научнопрактической конференции с международным участием «Актуальные проблемы медицинской генетики на Крайнем Севере» (Якутск, 4-5 июня 2009); VI съезде Российского общества медицинских генетиков (Ростов-на-Дону, 14-18 мая 2010);

научно-практической конференции «Медицина в современном мире, взгляд научной молодежи» (Якутск, 25 марта 2010); ежегодной конференции Европейского общества генетиков человека (Амстердам, Нидерланды, 28-31 мая 2011), конференции «Генетика человека и патология. Актуальные проблемы современной цитогенетики» (Томск, 2011), VII съезде Российского общества медицинских генетиков (Санкт-Петербург, 2015).

Публикации: По теме диссертации опубликовано 14 работ, из них 3 в рецензируемых журналах перечня ВАК РФ, рекомендованных для защиты по медицине.

Структура и объем диссертации: Диссертационная работа изложена на 138 стр.

машинописного текста и состоит из введения, трех глав (Обзор литературы, Материалы и методы, Результаты и обсуждение), заключения, выводов, списка литературы и 3 приложений. Данные проиллюстрированы 14 таблицами и 11 рисунками. Список литературы включает 184 источника, из них 121 зарубежные.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

В работе использованы данные Республиканского генетического регистра наследственной и врожденной патологии РС (Я), созданного на базе медикогенетической консультации РБ №1-Национального центра медицины МЗ РС(Я), а также данные, собранные в ходе экспедиционных выездов в улусы республики. Лабораторная часть работы выполнена в лабораториях эволюционной генетики НИИ МГ (г. Томск) и в отделе молекулярной генетики ЯНЦ КМП (г. Якутск).

Материалом для исследования послужили образцы ДНК 60 больных с клиническим диагнозом ОФМД из 47 неродственных семей. Из них 54 больных из 42 якутских семей, 5 больных из 4 русских семей и 1 больная из эвенкийской семьи. И здоровые родственники больных ОФМД (103 чел.). Популяционную выборку составили четыре этнические группы Якутии (445 чел.). Всего в исследовании приняло участие 608 чел. (табл. 1). Для популяционных сравнений в работе использованы данные по четырем популяционным выборкам из международного проекта HapMap (китайцы из г.

Пекин, Китай (n = 45); японцы из г. Токио, Япония (n = 45); выходцы из Северной и Западной Европы, проживающие в штате Юта, США (n = 60); народность йоруба из г.

Ибадан, Нигерия (n = 60)) (http://hapmap.ncbi.nlm.nih.gov/).

Для уточнения клинического диагноза ОФМД и с целью выявления мутации в 1-м экзоне гена PABPN1 был проведен молекулярно-генетический анализ 163 исследуемым из 47 семей. Амплификация области гена, содержащего тринуклеотидные повторы GCN, проводилась стандартными парами праймеров для анализа мутации ОФМД [Bouchard J.P. et al., 1997]. Проведено секвенирование участка гена PABPN1 с целью уточнения типа мутации у больных ОФМД в якутской популяции. Секвенирование проводилось по методу Сэнгера на автоматическом ДНК-анализаторе ABI PRISM 3100 (Applied Biosystems).

В качестве маркеров для изучения локуса ОФМД были выбраны 11 однонуклеотидных полиморфизмов (SNP) в локусе ОФМД (табл. 2). Полиморфизмы охватывают область с мутацией PABPN1 размером 20581 п.н.. Генотипирование проводили методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) и анализа полиморфизма длин рестрикционных фрагментов (ПДРФ). В работу были включены два SNPs, описанные в литературе (rs2239579 и rs1054084) [Rodriguez M. et al., 2005, Rivera D. et al., 2008]. Для остальных 9 SNPs условия генотипирования были подобраны в данной работе. После генотипирования SNP rs1054084 был исключен из дальнейшего анализа из-за мономорфности в исследованных популяциях. В базе данных NCBI нет информации о вариабельности этого SNP. Для шести SNPs (rs2231301, rs1535094, rs7142474, rs2268330, rs7161120, rs4981469) не существует ферментов для детекции полиморфизма. С целью

–  –  –

Таблица 3 Распространенность ОФМД в этнических популяциях, проживающих на территории РС (Я) Количество Доля от Числен- Распространенность Популяция больных общего числа ность* ОФМД на 100 тыс. чел.

ОФМД Больных, % Якуты 432290 54 90 12,5 Русские 390671 5 8,3 1,3 Эвенки 18232 1 1,7 5,5 Все население 949280 60 100,0 6,3 *Данные Всероссийской переписи населения Госкомстата РС (Я) 2002 г.

Таким образом, локальное накопление больных с ОФМД на территории Якутии, возможно, явилось результатом эффекта родоначальника вследствие появления мутации в раннем периоде. Это предположение нуждается в подтверждении путем выявления популяционно-генетических механизмов накопления ОФМД на основании построения гаплотипов в локусе ОФМД с привлечением ДНК-маркеров.

Клинико-генеалогическая характеристика больных с ОФМД Было обследовано 60 больных с клинически выставленным диагнозом ОФМД (31 мужчина и 29 женщин). Средний возраст больных во время обследования был 63,9±7,89 года. Средний возраст начала манифестации болезни у обследованных 49,95±8,30 года (от 31 года до 65 лет).

Одним из первых симптомов заболевания больные отмечали:

двусторонний птоз – 37 чел. (61,8%), дисфонию – 9 (15), дисфагию – 6 (10), одновременный птоз и дисфагию отметило 4 чел. (6,8%). Гораздо реже начало заболевания сопровождалось одновременным появлением дисфагии и дисфонии (1,8%), общей слабости (1,8), птоза и дисфонии (1,8%). Полученные данные сопоставимы с результатами исследований в других странах [Blumen S.C. et al., 1993; Medici M. et al., 1997; Fardeau M., 1997; Bouchard J.-P. et al., 1997; Meola G. et al., 1997; Codere F. et al., 2001; Muller T. et al., 2001; Becher M.W. et al., 2001; Sluijs B.M. et al., 2004; Shan J. et al., 2014]. У больных ОФМД в Якутии клиническая картина представлена двусторонним птозом (97,5%), наружной офтальмоплегией (67,5), дисфагией (95), дисфонией (65) и слабостью мимической мускулатуры (35%). При длительном течении заболевания у большинства больных наблюдается слабость конечностей и гипотрофия нескольких групп мышц (лица, плечевого пояса, межлопаточных, проксимальных отделов конечностей). Возникают осложнения течения болезни со стороны дыхательной системы из-за нарушения глотания пищи (хронический обструктивный бронхит, пневмония) [Anvar S.Y. et al., 2013; Witting N. et al., 2014; Youssof S. et al., 2015].

Национальных особенностей клинического течения ОФМД обнаружено не было.

Анализ родословных продемонстрировал, что в 47 случаях наблюдался АД тип наследования, в 13 случаях семейной отягощенности выяснить не удалось.

Молекулярно-генетический анализ. ПЦР диагностика ОФМД Для уточнения клинического диагноза ОФМД и с целью выявления мутации в 1-м экзоне гена PABPN1 был проведен молекулярно-генетический анализ 163 исследуемым из 47 семей. Анализ выявил у всех клинически больных ОФМД и у 24 (14 семей) из 103 родственников больных (без клиники ОФМД) в одном из аллелей удлинение GCNповторов от 10 до 14 повторов. В итоге, выявлено всего 84 гетерозиготных носителя патологического аллеля, из них 24 – здоровые члены семей. Остальные 79 здоровых членов семей, больных ОФМД, имеют два аллеля с 10 GCN-повторами. Таким образом, в РС (Я) у всех носителей мутации выявлен только один тип мутации ((GCN)14) в гене PABPN1, которая является причиной развития ОФМД.

Прямое секвенирование участка 1 экзона гена PABPN1 Мутация в 1 экзоне гена PABPN1 - это экспансия тринкулеотидных GCN-повторов.

В нормальном аллеле 10 GCN повторов, область гена, кодирующая аланины имеет следующую структуру – (GCG)6(GCA)3(GCG). Удлинение этого участка может происходить за счет простого удлинения GCG-триплетов [Blumen S.C. et al., 1999;

Gambelli R.K. et al., 2004] или за счет GCA-вставок вместе с увеличением GCGтриплетов [Mirabella M. et al., 2000; Nakamoto M. et al., 2002; Robinson D.O. et al., 2006], поэтому проведено секвенирование участка ДНК с мутацией (GCN)14 с целью расшифровки структуры (GCN)-повторов у больных с ОФМД в РС (Я).

Секвенирование проведено всего 17 больным (16 якутских семей и 1 русская семья из Иркутска) с мутацией (GCN)14 и 1 члену семьи без мутации. Определена структура «якутской» мутации (GCN)14 (GCG)10(GCA)3(GCG). Расшифровка результатов исследования показала, что увеличение количества GCN повторов до 14 происходит вследствие вставки четырех GCG-повторов.

Генетическая вариабельность локуса ОФМД по частотам аллелей и генотипов в группах больных, здоровых родственников и в популяционных выборках Якутии Распределение генотипов и частоты аллелей исследованных SNPs локуса ОФМД приведено в табл. 4. Полученные данные находятся в пределах вариаций частот аллелей и генотипов полиморфизмов локуса ОФМД, представленных в базах данных для монголоидных популяций (http://hapmap.ncbi.nlm.nih.gov/). Практически по всем маркерам во всех популяциях распределение частот генотипов соответствовало равновесию Харди-Вайнберга (исключение составили локусы rs2231301, rs1950252, rs7142474, rs8020117 в выборке здоровых родственников якутов, rs4981469 в группе больных якутов и популяции эвенков, rs2239579 в группе больных якутов).

Наблюдаемое отклонение от равновесия Харди-Вайнберга в перечисленных группах, вероятно, объясняется тем, что в данных выборках большой процент родственников.

Оценка генетического разнообразия (FST) четырех этнических групп на основании частот аллелей и гаплотипов Генетическая дифференциация трех локальных популяций якутов оказалась статистически значимой. Уровень генетической подразделенности якутов составил по генотипам FST=6,96%, по гаплотипам FST=9,03%. Между популяциями Якутии (якуты, эвенки, эвены, юкагиры) FST по генотипам составил 2,31% и по гаплотипам 7,68%. При попарном сравнении дифференциация популяций Якутии статистически значима за исключением популяций эвенов и юкагиров на уровне гаплотипов.

–  –  –

rs7161120 G 2,24 1,85 1,5 1,5 2,5 1 1,43 2 rs4981469 CC 36,76 14,81 30 30 28 28 22,86 52 CG 58,82 50 44 56 53 64 54,29 44 GG 4,42 35,19 26 14 19 8 22,86 4 G 33,82 60,19 48 42 45,5 40 50 26 Число найденных гаплотипов 13 14 11 23 14 12 13 10 Примечание. N – количество индивидуумов в выборке.

Эти данные свидетельствуют в пользу гипотез этнографов, которые считают, что эвенский этнос появился в процессе ассимиляции эвенками юкагирских и корякских племен [Гоголев А.И., 2000]. При сравнении популяций Якутии и популяций европейцев, японцев, китайцев и народности йоруба из проекта HapMap уровень генетической подразделенности составил по генотипам FST=13,86%, по гаплотипам FST=18,71%. Статистически незначимые различия показали только китайцы с японцами, как по генотипам, так и по гаплотипам p0,05). Это, вероятно, объясняется общностью их происхождения.

Анализ филогенетических взаимоотношений в этнических группах якутов, эвенков, эвенов и юкагиров Проведен анализ генетических взаимоотношений этнических групп посредством филогенетического анализа частот генотипов и гаплотипов десяти SNPs между популяциями Якутии и популяциями из проекта HapMap. Филогенетические деревья строились для двух массивов данных. Первый массив данных включал 6 локальных популяций РС (Я). Во втором древе три якутские популяции объединены в одну группу.

Четыре этнические группы сравнены с мировыми популяциями из базы данных HapMap. Сравнивая результаты филогенетического анализа, можно отметить совпадения основной конфигурации древ, но есть и различия (рис. 1). Три основных ветви представлены ветвью негроидов, ветвью европеоидов и кластером монголоидов.

Вилюйские и северные якуты группируются рядом с эвенками и эвенами, как на древе генотипов, так и на древе на основе гаплотипов. Центральные якуты также ближе к эвенам, но на древе генотипов четко отделяются и образуют отдельную ветвь между эвенками и остальными группами якутов и юкагирами.

Структура гаплотипов и неравновесия по сцеплению (LD) в локусе ОФМД (в исследованных группах) В современных популяциях человека характер структуры гаплотипов является результатом комплексного эволюционного процесса (демографическая история популяций: миграции, изменение эффективной численности, подразделенность, и геноспецифические факторы: темп мутирования, давление отбора, рекомбинации) [de la Vega F.M. et al., 2005]. В исследованных выборках в программе Arleqiun с помощью EMалгоритма обнаружено 52 гаплотипа. Больше всего гаплотипов наблюдается у вилюйских якутов (23), меньше всего у больных русских (2), у европейцев и йоруба – по 6 гаплотипов. Частота гаплотипов составила от 0,3 до 71,8%.

–  –  –

Примечание. n – количество индивидуумов в выборке. Жирным шрифтом выделены основные гаплотипы, курсивом предковый гаплотип. Порядок SNP в гаплотипе: 1 - rs2231301, 2 - rs1950252, 3 - rs1535094, 4 - rs7142474, 5 - rs2239579, 6 - rs8020117, 7 - rs2295126, 8 - rs2268330, 9 - rs7161120, 10 - rs4981469.

Центральные якуты Вилюйские якуты Северные якуты Якуты

–  –  –

Рис. 2. Структура неравновесия по сцеплению в локусе ОФМД в исследованных популяциях. Цветовая гамма отображает силу сцепления между SNPs: ярко-красный – сильное (D’=1, LOD2), красный и розовый – значительное (D’1, LOD2), белый – слабое (D’1, LOD2). Ячейка сиреневого цвета обозначает невозможность расчета неравновесия по сцеплению вследствие низкой частоты минорного аллеля полиморфизма (D’=1, LOD2).

В выборке носителей мутации (GCN)14 (больных и здоровых носителей) общей численностью 73 чел., из которых 68 являлись якутами и 5 - русскими, всего обнаружено 15 мультилокусных генотипов по 10 SNPs. По результатам генотипирования выявлено, что все исследованные индивиды являлись гетерозиготными носителями мутации (GCN)14. В результате из полученных данных методом сегрегационного анализа, из гомозиготных мультилокусных генотипов получено 3 гаплотипа, ассоциированных с данной мутацией. Двенадцать якутов и 2 русских оказались гомозиготами по всем 10 SNPs, с единственным возможным гаплотипом GGGATCGCCC (табл. 5, гаплотип № 1). То есть этот гаплотип непосредственно наблюдается у больных и ассоциирован с мутацией. Этот гаплотип является наиболее частым у больных якутов (48,6%) и по результатам расчетов в Arlequin. Аналогично, 7 образцов якутов и 3 русских имеют гомозиготный генотип по всем 10 SNPs с единственно возможным гаплотипом, ассоциированным с мутацией (GCN)14, GGGATCGGCC (табл. 5, гаплотип № 3). Один образец больных якутов также имеет гомозиготный генотип по всем 10 SNPs с третьим возможным гаплотипом, ассоциированным с мутацией, GGGATCGGCG (табл. 5, гаплотип № 9). Таким образом, у носителей мутации непосредственно из гомозиготных мультилокусных генотипов восстанавливаются три гаплотипа, однозначно ассоциированные с мутацией. Два гаплотипа, обнаруживающие ассоциацию, являются наиболее частыми и встречаются как у якутов-носителей мутации, так и у больных русских, а третий относительно редок и обнаружен только у якутов.

Гаплотипы № 1 и № 3 могут быть получены один из другого путем рекомбинации между двумя блоками SNP, выявленными в HaploView 4.1. Гаплотип № 9, вероятно, является результатом рекомбинации внутри третьего блока SNP, произошедшей в гаплотипе № 3.

У 8 якутов-носителей мутации, гетерозиготных по различным SNP, ассоциация мутации с гаплотипом GGGATCGCCC (№ 1) установлена путем проведения генеалогического анализа. Данные по генотипам их родственников позволяют установить, какие именно аллели могли получить эти индивиды от родителей-носителей мутации, а какие – от здоровых.

Филогенетический анализ взаимоотношений гаплотипов, выстроенных на основе однонуклеотидных полиморфизмов, определяемых по диаллельным маркерам, проводили, конструируя филогенетическое древо (сеть) гаплотипов по алгоритму медианных сетей [Bandelt H.J. et al., 1995; 1999], реализованному в программе Network.

Для постройки сети взят рассчитанный с использованием программы «HaploView 4.1»

второй (rs7142474, rs2239579, rs8020117 и rs2295126) блок LD якутов. Мутация (GCN)14 находится в сцеплении со вторым блоком между rs2239579 и rs8020117. Медианная сеть гаплотипов приведена на рис. 3. Размер узла соответствует числу хромосом, относящихся к данному гаплотипу, цифра на отрезке между узлами обозначает SNP в гаплотипе, в котором произошла мутация. Цвет узла указывает на этническую принадлежность индивида. Предковый гаплотип, определенный по предковым аллелям по базе NCBI, показанный на рисунке стрелкой (Ht4), обнаружен почти во всех выборках кроме больных русских и эвенков и имеет аллельную структуру ATCA (рис.

3). Он чаще встречается в выборке йоруба (42,8%) и у якутов (23,8%).

–  –  –

Рис. 3. Медианная сеть гаплотипов групп больных ОФМД, выборки здоровых родственников больных ОФМД якутов и 8 этнических выборок на основе 4 SNP (2-й LD блок).

У африканской популяции йоруба по сравнению с другими выборками относительно маленькое разнообразие гаплотипов - 6 (1 ОГ), противоречащее современным взглядам о большом генетическом разнообразии африканских популяций.

Возможно, это связано с небольшим размером выборки (n=60) и с высокой степенью родства в этой популяционной выборке. Всего найдено 7 (2 ОГ) гаплотипов, у якутов обнаружено 5 гаплотипов, из них 2 основных. Из 11 гаплотипов 4 (2 ОГ) у больных ОФМД и 5 у здоровых родственников. В результате обработки полученных данных методом сегрегационного анализа (исходя из гомозиготных мультилокусных генотипов) получен гаплотип, ассоциированный непосредственно с мутацией (GCN)14 у больных, который, вероятно, является гаплотипом – основателем (ATCG (Ht5)). У больных ОФМД русской национальности обнаружен лишь один гаплотип (1 ОГ). Он отстоит от предкового гаплотипа на один мутационный шаг (ATCG) и является, возможно, гаплотипом-основателем у больных якутов. Имеется два образца ДНК двух неродственных русских семей с ОФМД родом из Иркутской области. Оба больных – носители гаплотипа ATCG. Этот же гаплотип наблюдается у всех больных русских.

Другие три гаплотипа (ACCG, ATCA, GTTG), обнаруженные у больных якутов, вероятно, не несут мутацию.

Предковый гаплотип ATCA находится на минимальном числе мутационных шагов от всех остальных гаплотипов и располагается в сети соответственно принципу максимальной экономии мутационных шагов (рис. 3). На древе гаплотипы, производные от предкового гаплотипа, разделяются на две группы. В первую группу входят 4, во вторую - 5 гаплотипов. От предкового гаплотипа в обеих ветвях самые дальние гаплотипы отстоят на 4 мутационных (рекомбинантных) шага.

Анализ возраста мутации (GCN)14 в гене PABPN1 в якутской популяции Высокое накопление ОФМД в якутской популяции, найденная единственная мутация (GCN)14 – ((GCG)10(GCA)3(GCG)) и обнаруженый единственный гаплотип (ATCG), сцепленный с мутантным аллелем (GCN)14, дают право предполагать возможность накопления мутации в результате эффекта основателя в якутской популяции. В работе Максимовой Н.Р. [2009] было проведено исследование 9 STRмаркеров в локусе ОФМД у 29 больных ОФМД из разных семей (28 якутские семьи и 1 русская семья). Были выявлены аллели, ассоциированные с ОФМД, и определен гаплотип, связанный с мутацией (GCN)14.

Оценка возраста происхождения мутации проведена по 6 STR-маркерам, с известной хромосомной и генетической локализацией: D141003, D14S283, D14S990, D14S581, D14S972, D14S264, маркеры D14S50, D14S64, D14S1041 не были включены в анализ возраста мутации, так как частота аллелей, ассоциированных с болезнью, оказалась выше в группе здоровых родственников, не несущих мутацию, по сравнению с больными [Близнец и др., 2006; Вассерман и др., 2007].

Среднее число поколений, прошедшее после распространения мутации (GCN)14 в якутской популяции, составило 189,169±62,703. При условии, что одно поколение равняется 20 годам, время распространения мутации равно 3783,378±1254,069 года.

Доверительный интервал для среднего значения оценки возраста появления мутации с вероятностью 95% составляет от 559,7 до 7007,1 года.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Настоящее исследование посвящено клинико-генеалогическому анализу, изучению молекулярно-генетических основ и раскрытию механизмов накопления ОФМД в Якутии. В работе показано, что распространенность ОФМД на территории РС (Я) составляет 6,3 на 100 тыс. населения, тогда как среди коренного якутского населения 12,5 на 100 тыс. якутов, что превышает мировые значения в десятки раз и позволяет отнести данное заболевание, редко встречаемое в мире, к частым наследственным заболеваниям у якутов. Клиническая картина ОФМД у больных в Якутии характеризовалась типичными для заболевания симптомами: двусторонним птозом (97,5%), наружной офтальмоплегией (67,5), дисфагией (95), дисфонией (65) и слабостью мимической мускулатуры (35%). Национальных особенностей клинического течения ОФМД обнаружено не было. Анализ родословных продемонстрировал, что в 47 случаях из 60 наблюдался аутосомно-доминантный тип наследования заболевания.

Установлено, что причиной развития ОФМД во всех семьях, исследованных в настоящей работе, является одинаковое увеличение GCN повторов до 14 копий в гене PABPN1. Определена структура выявленной мутации (GCN)14 – (GCG)10(GCA)3(GCG).

Показано, что структура неравновесия по сцеплению в гене PABPN1 носит популяционно-специфичный характер для всех 6 изученных популяций.

Определен возраст мутации – 189,2±62,7 поколений или 3783±1254 года.

По данным литературы, на сегодняшний день ОФМД описана более чем в 30 странах, в большинстве источников описаны единичные случаи ОФМД. С высокой частотой ОФМД встречается только в 3 популяциях. Проведенные исследования в этих популяциях показали сильный эффект основателя. Вероятно, высокая частота ОФМД в якутской популяции вызвана эффектом основателя и тем, что, возможно, на ранних этапах своего этногенеза популяция якутов прошла через «горлышко бутылки». В последнем случае в момент прохождения «горлышка бутылки» у якутов должно было быть очень низкое гаплотипическое разнообразие с последующим его ростом из одного гаплотипа-основателя. Гаплотип, найденный в двух неродственных русских семьях с ОФМД из Иркутской области и идентичный гаплотипу больных ОФМД якутов, может свидетельствовать о том, что мутация (GCN)14 была привнесена из других мест, а не возникла на территории Якутии. Учитывая, что было найдено три гаплотипа, сконструированных по 10 SNP-локусам, ассоциированных с мутацией у якутов, можно предположить – мутация была занесена в Якутию не один раз, а, вероятно, разными волнами мигрантов, или же разнообразие гаплотипов по 10 SNPs с мутацией, вероятно, возникло уже на территории Якутии в результате рекомбинаций. Низкий уровень генетического разнообразия у якутов по сравнению с другими народами был показан при анализе линий митохондриальной ДНК, Y-хромосомы, аутосомных микросателлитных локусов и локусов Alu-повторов [Федорова С.А. и др., 2003; Пузырев В.П. и др., 2003; Харьков В.Н. и др., 2008; Федорова С.А., 2008]. Также возможно, на территорию Якутии мутация попала уже после того, как у больных семей сформировалось большое гаплотипическое разнообразие вне Якутии. Учитывая все вышеизложенное, - возможно, мутация (GCN)14 возникла давно, где-то в Евразии, и была распространена с низкой частотой. А когда попала в Якутию, получила большое распространение в результате «эффекта основателя». Данные о случаях ОФМД в Сибири и Дальнем Востоке отсутствуют. Это, вероятно, говорит о несовершенной диагностике ОФМД из-за недостаточной осведомленности врачей и из-за того, что болезнь начинается в позднем возрасте. Поэтому важно информирование врачей для повышения диагностирования и выявления новых семей, отягощенных ОФМД, с целью повышения качества оказания медико-генетической помощи больным ОФМД в Сибири и на Дальнем Востоке. Выявленные биологические маркеры ОФМД позволят обоснованно формировать группы риска для своевременной реализации в них мероприятий по профилактике развития данного заболевания в Якутии и других регионах РФ.

ВЫВОДЫ

Распространенность ОФМД на территории РС (Я) составляет 6,3 на 100 тыс.

1.

населения, тогда как среди коренного якутского населения заболевание встречается с частотой 12,5 на 100 тыс. якутов, с преимущественным накоплением в центральной и вилюйской группах улусов Якутии.

Клиническая картина ОФМД у больных в Якутии характеризуется двусторонним 2.

птозом (97,5%), наружной офтальмоплегией (67,5), дисфагией (95), дисфонией (65) и слабостью мимической мускулатуры (35%). Анализ родословных продемонстрировал, что из 60 обследованных семей в 47 наблюдался аутосомно-доминантный тип наследования заболевания, в остальных случаях семейной отягощенности выяснить не удалось.

Мутация (GCN)14, выявленная в гене PABPN1, является единственной известной 3.

причиной возникновения ОФМД в РС (Я). Структура выявленной мутации (GCN)14 – (GCG)10(GCA)3(GCG), участок кодирует 14 аланинов.

Структура неравновесия по сцеплению в гене PABPN1 носит популяционноспецифичный характер для всех 6 изученных популяций. Максимальное количество гаплотипических блоков (3) отмечено у якутов, тогда как у эвенков два блока, а у эвенов и юкагиров выявлен только один блок сцепления. Наблюдаемая в исследованных популяциях различная степень гаплотипического разнообразия характеризовалась наличием одинаковых для всех выборок основных гаплотипов.

С учетом блочной структуры неравновесия по сцеплению в пределах блока 5.

неравновесия, включающего точку мутации, обнаружен 1 гаплотип (ATCG), сцепленный с мутантным аллелем (GCN)14, что свидетельствует о возможном накоплении мутации в результате эффекта основателя. Возраст мутации, рассчитанный на основании анализа STR-гаплотипов больных составил 189,2±62,7 поколений или 3783±1254 года.

Список работ, опубликованных по теме диссертации:

Максимова, Н.Р. Клинические и молекулярно-генетические аспекты 1.

окулофарингеальной миодистрофии в Республике Саха (Якутия) / Н.Р. Максимова, М.Н.

Коротов, И.А. Николаева, Х.А. Куртанов и др. // Генетика человека и патология: сб.

научных трудов. – Томск, 2007. – Вып. 8. – С.160-161.

Максимова, Н.Р. Окулофарингеальная миодистрофия в Республике Саха (Якутия):

2.

клинические и молекулярно-генетические аспекты / Н.Р. Максимова, И.А. Николаева, М.Н. Коротов, Х.А. Куртанов и др. // Экология и здоровье человека на Севере: сб.

научных трудов. – Якутск, 2007. – С. 34-36.

Максимова, Н.Р. Клиника-генеалогическая и молекулярно-генетическая 3.

характеристика окулофарингеальной миодистрофии в Республике Саха (Якутия) / Н.Р.

Максимова, И.А. Николаева, М.Н. Коротов, Т. Икеучи, О. Онодера, М. Нишизава, С.К.

Степанова, Х.А. Куртанов и др. // Журнал неврологии и психиатрии им. С.С.

Корсакова. – 2008. – №6. – С. 32-35.

Куртанов, Х.А. Внедрение ДНК-диагностики окулофарингеальной 4.

миодистрофии в практику медико-генетического консультирования Республики Саха (Якутия) / Х.А. Куртанов, Н.Р. Максимова, В.А. Степанов и др. // Якутский медицинский журнал. – Якутск, 2008. – №4. – С. 43-46.

Куртанов, Х.А. Полиморфизм локуса ОФМД в популяциях Якутии / Х.А.

5.

Куртанов, Н.Р. Максимова, А.В. Марусин, В.А. Степанов // Якутский медицинский журнал. – Якутск, 2009. – №2. – С. 54-58.

Куртанов, Х.А. Окулофарингеальная мышечная дистрофия (ОФМД):

6.

полиморфизм локуса в популяциях Якутии / Х.А. Куртанов, Н.Р. Максимова, А.В.

Марусин, В.А. Степанов // Матер. Республиканской научно-практической конференции.

– Якутск, 2010. – С. 30-32.

Куртанов, Х.А. Окулофарингеальная мышечная дистрофия: внедрение ДНКдиагностики в практику медико-генетического консультирования в Республике Саха (Якутия) / Х.А. Куртанов, Н.Р. Максимова, С.К. Степанова и др. // Матер.

Республиканской научно-практической конференции. - Якутск, 2010. – С. 32-33.

Куртанов, Х.А. Окулофарингеальная мышечная дистрофия (ОФМД) - миопатия с 8.

поздней манифестацией / Х.А. Куртанов, Н. Р. Максимова, М.Н. Коротов и др. // Матер.

конференции «Здоровье и качество жизни пожилого населения Якутии». – Якутск, 2010.

– С. 68-70.

Куртанов, Х.А. Окулофарингеальная мышечная дистрофия: анализ 9.

однонуклеотидных полиморфизмов локуса в популяциях Якутии / Х.А. Куртанов, Н.Р.

Максимова, А.В. Марусин, В.А. Степанов // Медицинская генетика. – 2010. – С. 100.

Куртанов, Х.А. Анализ полиморфизмов локуса ОФМД в популяциях Якутии. / 10.

Х.А. Куртанов // Матер. VII Всероссийская научно-практическая конференция с международным участием «Молекулярная диагностика - 2010». – М., 2010. – С. 32-33.

11. Marusin, A.V. Mutation and haplotipe analysis of oculopharyngeal muscular dystrophy in Yakut population:

Abstract

of the European Human Genetics conference / A.V. Marusin, K.A. Kurtanov, N.R. Maximova, V.A. Stepanov. – Amsterdam, 2011. – P. 432.

12. Куртанов, Х. А. Окулофарингеальная миодистрофия в Якутии / Х. А. Куртанов, Н. Р. Максимова, В. А. Степанов // Генетика человека и патология. Актуальные проблемы современной цитогенетики. - Томск, 2011. - Вып. 9. - С. 154-158

13. Куртанов, Х.А. Окулофарингеальная миодистрофия в Республике Саха (Якутия) / Х.А.Куртанов, Н.Р. Максимова, В.А. Степанов, О. Онодера // Сб. материалов межрегиональной научно-практической конференции с международным участием, посвященной 70-летию организации неврологической помощи в Республике Саха (Якутия) и 90-летию иностранного члена АН РС (Я), лауреата Нобелевской премии К.Д.Гайдушека, Якутск, Северо-Восточный федеральный университет им. М.К.

Аммосова, 4-5 октября 2013 г. [Электронный ресурс] / под ред. Т.Я. Николаевой, Э.Э.

Конниковой. - Электрон. текст. дан. (1 файл 3,8 Мб). - Киров: МЦНИП, 2013.- 192 с.-1 электрон. опт. диск (CD-ROM). - С. 139-141

14. Марусин, А.В. Вариабельность локуса окулофарингеальной миодистрофии в популяциях Якутии / А.В. Марусин, Х.А. Куртанов, Н.Р. Максимова, М.Г. Сваровская, В.А. Степанов // Медицинская генетика. Материалы VII съезда Российского общества медицинских генетиков, 19-23 мая 2015. – 2015. - СПб.: Гениус Медиа, 2015. - Т. 14, № 3 (153). - С. 40.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ДНК – дезоксирибонуклеиновая кислота ОФМД – окулофарингеальная мышечная дистрофия РС (Я) – Республика Саха (Якутия)

– гаплотип Ht

– кодон кодирующий аминокислоту аланин GCN

– linkage disequilibrium, неравновесие по сцеплению LD

– National Center for Biotechnology Information, Национальный центр NCBI биотехнологической информации

– Online Mendelian Inheritance in Man, номер наследственной болезни или OMIM признака в международном каталоге МакКьюсика

– poly(A) binding protein nuclear 1, полиаланин связывающий ядерный PABPN1 белок 1

– single nucleotide polymorphism, однонуклеотидный полиморфизм SNP

– short tandem repeat, короткие тандемные повторы STR

Просьба высылать отзывы на автореферат по адресу:

ФГБНУ «НИИ медицинской генетики»

634050 г. Томск, Набережная реки Ушайки, 10 Ученому секретарю Диссертационного совета ДМ 001.045.01 канд. биол. наук Хитринской И.Ю.

Факс +7(3822) 51-37-73 E-mail: i.khitrinskaya@medgenetics.ru



 

Похожие работы:

«Курбонов Косим Муродович СОВРЕМЕННЫЕ ЭПИЗООТОЛОГО-ЭПИДЕМИОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ И НАДЗОР ЗА БРУЦЕЛЛЕЗОМ В РЕСПУБЛИКЕ ТАДЖИКИСТАН 14.02.02 – эпидемиология Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Москва – 2015 Работа выполнена в Таджикском научно-исследовательском институте профилактической медицины Министерства здравоохранения и социальной защиты населения Республики Таджикистан Научные руководители: Доктор медицинских наук, профессор...»

«Запольских Анна Михайловна Особенности эпидемиологии и профилактики пандемического гриппа в условиях мегаполиса 14.02.02 – эпидемиология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Москва – 2015 Работа выполнена в Федеральном бюджетном учреждении науки «Центральный научно исследовательский институт эпидемиологии» Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека Научный руководитель: Доктор медицинских...»

«Арбузова Елена Николаевна ПРОЕКТИРОВАНИЕ РЕФЛЕКСИВНОЙ СИСТЕМЫ ОБУЧЕНИЯ С ПРИМЕНЕНИЕМ ИННОВАЦИОННОГО УЧЕБНО-МЕТОДИЧЕСКОГО КОМПЛЕКСА ПО МЕТОДИКЕ ОБУЧЕНИЯ БИОЛОГИИ Специальность 13.00.02 – Теория и методика обучения и воспитания (биология, уровень профессионального образования) АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора педагогических наук Москва Работа выполнена на кафедре биологии, экологии и методики обучения биологии ГБОУ ВПО города Москвы «Московский...»

«Дандал Али Шебли ПАТОГЕНЕТИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА ВИРУСА ИНФЕКЦИОННОГО БРОНХИТА КУР 06.02.02 «ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология» АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук Владимир-2015 Работа выполнена в ФГБУ «Федеральный центр охраны здоровья животных» (ФГБУ «ВНИИЗЖ) Россельхознадзора и в ФГБАОУ ВПО «Российский университет дружбы народов» Научный руководитель: Макаров Владимир...»

«ШАХТАМИРОВ Иса Янарсаевич КАРИОПАТОЛОГИЯ У ЖИВОТНЫХ В ЗОНАХ СТОЙКИХ ОРГАНИЧЕСКИХ ЗАГРЯЗНИТЕЛЕЙ ВНЕШНЕЙ СРЕДЫ 03.02.07 – генетика АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук Санкт-Петербург Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном учреждении высшего профессионального образования «Чеченский государственный университет» Научный консультант: доктор биологических наук, профессор Кравцов Вячеслав Юрьевич Официальные оппоненты:...»

«Цвиркун Ольга Валентиновна ЭПИДЕМИЧЕСКИЙ ПРОЦЕСС КОРИ В РАЗЛИЧНЫЕ ПЕРИОДЫ ВАКЦИНОПРОФИЛАКТИКИ. 14.02.02 эпидемиология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук Москва – 2014 Работа выполнена в Федеральном бюджетном учреждении науки « Московский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. Г.Н. Габричевского» Роспотребнадзора Научный консультант: Заслуженный деятель науки РФ, профессор, доктор медицинских наук Ющенко...»

«АНДРЕЕВА НАДЕЖДА МИХАЙЛОВНА МЕТОДИКА ИСПОЛЬЗОВАНИЯ ДОРОЖНЫХ КАРТ ПРИ ЭЛЕКТРОННОМ ОБУЧЕНИИ СТУДЕНТОВ ИНФОРМАТИКЕ (на примере экономических и биологических направлений подготовки) 13.00.02 – Теория и методика обучения и воспитания (информатика, уровень профессионального образования) АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата педагогических наук Красноярск – 2015 Работа выполнена в Федеральном государственном автономном образовательном учреждении высшего...»

«СЕЛИФОНОВА Жанна Павловна СТРУКТУРНО-ФУНКЦИОНАЛЬНАЯ ОРГАНИЗАЦИЯ ЭКОСИСТЕМ ЗАЛИВОВ И БУХТ ЧЕРНОГО И АЗОВСКОГО МОРЕЙ (РОССИЙСКИЙ СЕКТОР) Специальность 25.00.28 – Океанология Д 002.140.01 Диссертация на соискание ученой степени доктора биологических наук Мурманск, 2015 Работа выполнена в ФГБУН Мурманском морском биологическом институте КНЦ РАН и ФГБОУ...»

«НЕСТЕРОВ Александр Александрович УСОВЕРШЕНСТВОВАНИЕ ТЕХНОЛОГИИ ИЗГОТОВЛЕНИЯ ВАКЦИН ПРОТИВ ИНФЕКЦИОННОГО РИНОТРАХЕИТА КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА 06.02.02 «Ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология» Aвтореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук Владимир – 2015 Работа выполнена в федеральном государственном бюджетном учреждении «Федеральный центр охраны здоровья животных» (ФГБУ «ВНИИЗЖ»)....»

«Худоногова Елена Геннадьевна БИОЛОГИЯ, ЭКОЛОГИЯ И ПРОДУКТИВНОСТЬ ПОЛЕЗНЫХ РАСТЕНИЙ ПРЕДБАЙКАЛЬЯ: АНАЛИЗ, ПРОГНОЗИРОВАНИЕ И ОПТИМИЗАЦИЯ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ Специальность 03.02.01 – ботаника (биологические науки) АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук Оренбург 2015 Работа выполнена на кафедре ботаники, плодоводства и ландшафтной архитектуры в ФГБОУ ВО «Иркутский государственный аграрный университет имени А.А. Ежевского» Научный консультант:...»

«Фирстова Виктория Валерьевна Экспериментально-иммунологическое обоснование выбора стратегии оценки поствакцинального иммунитета против чумы и туляремии 14.03.09 Клиническая иммунология, аллергология АВТОРЕФЕРАТ диссертация на соискание ученой степени доктора биологических наук Оболенск 2015 Работа выполнена в ФБУН «Государственный научный центр прикладной микробиологии и биотехнологии» Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека...»

«НАУМОВ Юрий Анатольевич АНТРОПОГЕННАЯ ТРАНСФОРМАЦИЯ ПРИБРЕЖНО-ШЕЛЬФОВЫХ ГЕОСИСТЕМ ОКРАИННЫХ МОРЕЙ ДАЛЬНЕГО ВОСТОКА РОССИИ 25.00.36 – Геоэкология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора географических наук Томск 2008 Работа выполнена на кафедре экологии и природопользования Владивостокского государственного университета экономики и сервиса Научный консультант: доктор географических наук, профессор Кочуров Борис Иванович Официальные оппоненты: доктор...»

«Абдуллоева Елена Юрьевна БИВАЛЕНТНАЯ ВАКЦИНА ПРОТИВ БОЛЕЗНИ МАРЕКА ИЗ ВИРУСА 1 И 3 СЕРОТИПОВ 03.02.02 «Вирусология» АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Владимир – 2015 Работа выполнена в федеральном государственном бюджетном учреждении «Федеральный центр охраны здоровья животных» ФГБУ «ВНИИЗЖ» доктор ветеринарных наук Камалова Научный руководитель: Наталья Евгеньевна Еремец Владимир Иванович – доктор Официальные оппоненты:...»

«Солнцев Роман Викторович Лесоводственная эффективность осушительной мелиорации в заболоченных сосняках и на их вырубках в условиях Среднего Урала (на примере стационара «Северный»). 06.03.02. – Лесоведение, лесоводство, лесоустройство и лесная таксация. АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата сельскохозяйственных наук Екатеринбург – 2014 Работа выполнена на кафедре лесной таксации и лесоустройства ФГБОУ ВПО «Уральский государственный лесотехнический...»

«ДРОБОТ Елена Игоревна РЕАКТИВНОСТЬ КЛЕТОК ВРОЖДЕННОГО ИММУНИТЕТА ПРИ ИНФЕКЦИИ, ВЫЗВАННОЙ РАЗНЫМИ ПЛАЗМИДНЫМИ ВАРИАНТАМИ YERSINIA PSEUDOTUBERCULOSIS 03.03.04 – клеточная биология, цитология, гистология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Владивосток – 2014 Работа выполнена в лаборатории клеточной биологии и гистопатологии ФГБУ «Научно-исследовательского института эпидемиологии и микробиологии имени Г.П. Сомова» СО РАМН. Научный...»

«УШАКОВ АЛЕКСЕЙ ВЛАДИМИРОВИЧ ЭКОЛОГИЧЕСКИЕ ОСНОВЫ СОЧЕТАННОСТИ ПРИРОДНЫХ ОЧАГОВ БИОГЕЛЬМИНТОЗОВ Специальность: 03.02.11 – Паразитология Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук Тюмень-2015 Работа выполнена в Федеральном бюджетном учреждении науки «Тюменский научно-исследовательский институт краевой инфекционной патологии» Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека Научный консультант: Степанова...»

«ФЕДИН АНДРЕЙ ВИКТОРОВИЧ КЛИНИКО-ИММУНОЛОГИЧЕСКАЯ ОЦЕНКА ЭФФЕКТИВНОСТИ ЛЕЧЕНИЯ ОСТРЫХ БАКТЕРИАЛЬНЫХ РИНОСИНУСИТОВ 14.03.09. – аллергология и иммунология 14.01.03. – болезни уха, горла и носа АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Пенза – 2015 Работа выполнена в Государственном бюджетном образовательном учреждении дополнительного профессионального образования «Пензенский институт усовершенствования врачей» Министерства здравоохранения...»

«УДК 572 КАРАПЕТЯН Марина Кареновна АНТРОПОЛОГИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ МОРФОЛОГИЧЕСКОЙ ИЗМЕНЧИВОСТИ КОСТНОГО ПОЗВОНОЧНИКА (ПО МЕТРИЧЕСКИМ И ОСТЕОСКОПИЧЕСКИМ ДАННЫМ) 03.03.02 – «антропология» по биологическим наукам АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Москва – 2015 Работа выполнена в НИИ и Музее антропологии...»

«ГОРЕЛИК Светлана Гиршевна МЕДИКО-СОЦИАЛЬНАЯ РЕАБИЛИТАЦИЯ ПАЦИЕНТОВ ХИРУРГИЧЕСКОГО ПРОФИЛЯ В СТАРЧЕСКОМ ВОЗРАСТЕ 14.01.30 – геронтология и гериатрия Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук Самара 2015 Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном образовательном учреждении дополнительного профессионального образования «Институт повышения квалификации Федерального медико-биологического агентства» доктор медицинских наук, доцент...»

«УДК 574.587 Барбашова Марина Александровна МАКРОБЕНТОС ЛАДОЖСКОГО ОЗЕРА И ЕГО ИЗМЕНЕНИЯ ПОД ВЛИЯНИЕМ ФАКТОРОВ СРЕДЫ 03.02.08 – экология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Санкт-Петербург Работа выполнена в лаборатории гидробиологии Федерального государственного бюджетного учреждения науки Институт озероведения Российской академии наук Научные руководители: Слепухина Татьяна Дмитриевна, доктор биологических наук Курашов Евгений...»







 
2016 www.konf.x-pdf.ru - «Бесплатная электронная библиотека - Авторефераты, диссертации, конференции»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.