WWW.KONF.X-PDF.RU
БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА - Авторефераты, диссертации, конференции
 


Pages:     | 1 |   ...   | 3 | 4 || 6 |

«СПЕЦИАЛИЗИРОВАННЫЙ ПРОДУКТ ДИЕТИЧЕСКОГО ПРОФИЛАКТИЧЕСКОГО ПИТАНИЯ НА ОСНОВЕ КОКТЕЙЛЯ БАКТЕРИОФАГОВ: КОНСТРУИРОВАНИЕ, ТЕХНОЛОГИЯ ПРОИЗВОДСТВА, ОЦЕНКА БЕЗОПАСНОСТИ И ЭФФЕКТИВНОСТИ ПРИМЕНЕН ...»

-- [ Страница 5 ] --

А 24 часа после введения продукта В 48 часов после введения продукта

Рисунок 22 Результаты определения эшерихиозного бактериофага в фекалиях опытной группы мышей на 6 - 7 сутки эксперимента (spot-тест) С целью повышения достоверности проведенного эксперимента данные микробиологического исследования подтверждали молекулярно-генетическим методом. До заражения животных штамм E. coli K12 C600 отсутствовал во всех образцах фекалий. На 6-ые сутки эксперимента E. coli K12 C600 присутствовал у мышей контрольной группы вплоть до 3-го разведения фекалий и не был обнаружен в образцах животных из опытной группы (рисунок 23).

Праймеры для ампли- K12-R (59-ATCCTGCGCACC AATCAACAA-39), фикации фрагмента K12IS-L (59-CGCGATGGAAGATGCTCTGTA-39).

гена orf 264 E. coli K12 Длина ампликона 969 п.н.

C600 Сутки эксперимента 1 (до инфицирования) 6-ые сутки эксперимента Опытная группа мышей Контрольная группа мышей Рисунок 23 Результаты ПЦР - исследования фекалий мышей

Примечания:

1,2,3 – образцы фекалий;

1 kb – маркер молекулярных весов DNA Ladder Mix («Fermentas», Литва);

К+ – ДНК, выделенная из чистой культуры E. coli K12 C600;

К- – вода для молекулярно-биологических исследований.

152

2.5.Оценка безопасности и эффективности специализированного продукта диетического профилактического питания «Фудфаг» в ограниченных клинических испытаниях 2.5.1 Ограниченные клинические испытания специализированного продукта диетического профилактического питания в рамках программы медицинской реабилитации лиц с хроническими заболеваниями органов пищеварения Комплексная оценка безопасности и эффективности специализированного продукта диетического профилактического питания «Фудфаг» на основе бактериофагов проводилась в рамках программы медицинской реабилитации лиц с хроническими заболеваниями органов пищеварения, одобренной этическим комитетом лечебно-профилактического учреждения (ЛПУ).

Типовая программа реабилитации включала: дието-, фито-, бальнео-, кинезотерапия, тренинги, гастрошколы и т.д. В исследование были включены 46 пациентов (мужчин) в возрасте 18-65 лет со следующей патологией:

синдром раздраженного кишечника с диареей – 14 пациентов; синдром раздраженного кишечника без диареи – 20 пациентов; запор – 12 пациентов.

При бактериологическом исследовании фекалий у пациентов были выявлены Staphylococcus aureus, энтеропатогенная Escherichia coli, грибы рода Candida и другие представители условно-патогенной микрофлоры (УПМ), типичные для дисбиотического состояния кишечника. Все пациенты были разделены на две группы: в основной группе пациентов (30 человек) в типовую программу реабилитации был дополнительно включен фаговый коктейль, который назначался по следующему алгоритму: 50 мл 3 раза в день во время еды, курсом 10 дней. У 16 пациентов группы сравнения реабилитацию осуществлялт в рамках типовой программы.

Оценка эффективности проведенной медицинской реабилитации в сравниваемых группах осуществлялась по динамике клинических проявлений и степени изменения микробиологических показателей. Анализ клинических симптомов показал (рисунок 24), что у пациентов основной группы достоверно раньше (р 0,05), чем в группе сравнения, купировались жалобы на боли в животе (на 4 день и 6 день, соответственно), диспепсические проявления (3 и 6 сутки, соответственно), очистился язык (3 и 5 день, соответственно), появился ежедневный самостоятельный стул (на 5 и 8 день, соответственно).

–  –  –

Рисунок 24 Динамика купирования клинических симптомов Эффективность применения специализированного продукта диетического профилактического питания «Фудфаг» по предложенному алгоритму клинического использования подтверждали элиминацией Staphylococcus aureus, энтеропатогенной Escherichia coli, грибов рода Candida у всех пациентов основной группы. Элиминация грибов рода Candida также может быть отнесена к эффектам специализированного продукта в связи с установленной стимуляцией роста этих грибов в результате их симбиоза со Staphylococcus aureus.

Включение в типовую программу медицинской реабилитации алгоритма клинического использования фагового коктейля позволило на 33,3 % снизить количество пациентов с дисбактериозом кишечника второй и третьей степени за счет элиминации условно-патогенной микрофлоры (УПМ), а у 36,7 % пациентов основной группы добиться полной нормализации показателей микробиоценоза (рисунок 25).

Встречаемость среди пациентов, % * 90 80 70 60 51,3 41 * 43

–  –  –

2.5.2.Ограниченные клинические испытания специализированного продукта диетического профилактического питания при моделировании эшерихиоза у здоровых добровольцев В рамках изучения специфической эффективности специализированного продукта диетического профилактического питания («Фудфаг») была проведена работа по оценке профилактического алгоритма применения продукта в модельном эксперименте эшерихиоза в организованном коллективе, вызванном непатогенным штаммом Escherichia coli К12 С600.

Экспериментальную инфекцию вызывали путем перорального однократного введения по 20 мл E. coli K12 C600 в титре 5107 КОЕ/мл в сутки натощак в течение 3-х дней. Добровольцев опытной группы подвергали заражению на фоне профилактического приема специализированного продукта «Фудфаг» 2 раза по 50 мл «Фудфага» в сутки на прием до, во время и спустя сутки после периода инфицирования. Добровольцы контрольной группы вместо профилактического продукта получали физиологический раствор в таком же количестве. В эксперименте принимали участие 45 здоровых добровольцев в возрасте 25-45 лет из числа сотрудников МНИИЭМ им Г.Н.Габричевского и ограниченного контингента Федеральной Службы Безопасности (ФСБ) г. Астрахани. 30 добровольцев составляли опытную группу и 15 – контрольную. В эксперименте принимали участие только добровольцы, не имеющие в исходном анализе кала лактозонегативных штаммов E. coli (таблица 46).

Таблица 46. Пилотное исследование по моделированию эшерихиоза

–  –  –

В ходе эксперимента у добровольцев в контрольной группе на 6-е сутки в кале обнаружена лактозонегативная E. coli. В то время как в фекалиях участников опытных групп идентифицировали исключительно кишечную палочку с нормальными ферментативными свойствами (таблица 47).

–  –  –

С целью повышения достоверности проведенного эксперимента данные микробиологического исследования подтверждали молекулярно-генетическим методом. На рисунке 26 представлены электрофореграммы, позволяющие визуализировать результаты амплификации (горизонтальный электрофорез ПЦРпродукта). До заражения испытуемых штамм E. coli K12 C600 отсутствовал во всех образцах фекалий. На 6-ые сутки эксперимента E. coli K12 C600 присутствовал у членов контрольной группы вплоть до 5-го разведения фекалий и не был обнаружен в образцах от людей из опытных групп.

Праймеры для K12-R (59-ATCCTGCGCACC AATCAACAA-39), амплификации K12IS-L (59-CGCGATGGAAGATGCTCTGTA-39).

фрагмента гена orf Длина ампликона 969 п.н.

264 E. coli K12 C600 Сутки 1-ые сутки (до инфицирования) 6-ые сутки эксперимента эксперимента Опытная группа добровольцев Контрольная группа добровольцев

РЕЗУЛЬТАТЫ ПЦР-АНАЛИЗА

Рисунок 26 Результаты ПЦР - исследования образцов фекалий добровольцев Примечания: 1, 2, 3, 4, 5 – образцы фекалий;

1 kb – маркер молекулярных весов DNA Ladder Mix («Fermentas», Литва);

К+ – ДНК, выделенная из чистой культуры E. coli K12 C600;

К- – вода для молекулярно-биологических исследований.

Таким образом, в ходе данного эксперимента была подтверждена эффективность применения специализированного продукта диетического профилактического питания «Фудфаг» по предложенному алгоритму клинического использования, в качестве средства профилактики эшерихиоза.

Последнее имеет существенное значение для клинической практики, потому что два оригинальных колифага, включенные в специализированный продукт «Фудфаг», обладают широким спектром литической активности. Они лизируют E.coli серогрупп: О104, О157, О156, О126, О121, О26, О146, О55, вызывающие тяжелые случаи инфекции, передающейся пищевым путем.

ГЛАВА 3. ПЕРСПЕКТИВЫ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ БАКТЕРИОФАГОВ

НА МЕЖДУНАРОДНОЙ КОСМИЧЕСКОЙ СТАНЦИИ (МКС)

Одной из основных проблем медико-биологического обеспечения жизнедеятельности человека в условиях воздействия на него экстремальных факторов агрессивной среды в процессе длительной изоляции в герметичных помещениях (например, пребывание на орбитальной космической станции), является предотвращение возможности развития инфекционных заболеваний у членов экипажей.
Пребывание человека в среде с изменёнными параметрами неизбежно ведёт к развитию синдрома нарушения колонизационной резистентности: снижению реактивности организма и возрастанию численности представителей патогенной и условно-патогенной микрофлоры. Это может провоцировать развитие острых воспалительных заболеваний. В условиях эксплуатации Международной космической станции (МКС) при частой сменяемости членов экипажей, прибывающих из различных географических регионов, серьезно возрастает опасность развития оппортунистических инфекций у космонавтов. В связи с этим особую актуальность приобретают профилактические мероприятия. Несмотря на обилие и разнообразие лекарственных средств, имеющихся в настоящее время на фармацевтическом рынке, проблема создания «идеального» препарата, эффективно и безопасно предохраняющего человеческий организм от микроэкологического дисбаланса остаётся открытой. Так, результаты исследований, проведенные в рамках космической и экстремальной медицины, показали, что пробиотики помогают эффективно скорректировать доклинические проявления дисбаланса микрофлоры, развивающиеся у космонавтов в непривычных условиях обитания, вследствие снижения колонизационной резистентности и, тем самым, предотвратить инфекционно-воспалительные процессы, вызываемые условнопатогенной микрофлорой [9]. Однако настороженность, появившаяся в последние годы в отношении бактериальных препаратов, с одной стороны, увеличивающих антигенную нагрузку на макроорганизм, а с другой, проявляющих неспецифический антагонистический эффект в отношении негомологичных видов микроорганизмов, предполагает продолжение поиска эффективных и безопасных лечебно-профилактических средств И такими средствами, не [41, 61].

содержащими бактериальные клетки и обладающими специфическим бактерицидным действием в отношении конкретных видов микроорганизмов, могут выступать бактериофаги и препараты на их основе. Долгосрочной задачей является создание профилактического препарата на основе бактериофагов, обладающего специфическим литическим действием в отношении потенциально опасных в условиях МКС микроорганизмов, позволяющего эффективно и безопасно предохранять человеческий организм от микроэкологического дисбаланса и, соответственно, развития инфекционного процесса бактериального генеза, что приобретает особую важность при длительной изоляции людей в герметичных помещениях. На первом этапе исследования, проводимого в рамках долгосрочной программы научно-прикладных исследований и экспериментов, планируемых на РС МКС и космического эксперимента «Бактериофаг», стало изучение влияния факторов космического полета на биологические свойства и ДНК штаммов бактериофагов в жидкой и лиофилизированной формах.

В 2013-2014 годах ампулы с образцами «Фудфага» в специальных пеналах с помощью транспортного грузового космического корабля «Прогресс»

отправлялись на МКС на срок от 1,5 до 3 месяцев. В процессе эксперимента сравнивали фенотипические свойства (спектр литической активности, титр вирусных частиц, морфологию бляшек и устойчивость фагов к повышенным температурам и изменениям pH) и ДНК (полученные на основании полно геномного секвенирования фагов на секвенаторе IonTorrent PGM с последующим биоинформационным анализом) одноименных штаммов до космического полета, после 1,5 и 3 месяцев пребывания бактериофагов на МКС, а также после синхронного хранения контрольных образцов на Земле при постоянной температуре 21-22°С.

–  –  –

После 1,5 месяцев хранения на МКС титр бактериофагов, входивших в состав «Фудфага», в жидкой и лиофилизированной форме снижался в среднем на один порядок, максимальное снижение было зафиксировано у бактериофага SI3 из жидкого образца коктейля «Фудфаг» и достигало двух порядков. Штаммы бактериофагов, синхронно хранившиеся в ампулах на Земле при температуре 21С, продемонстрировали стабильность как в жидкой, так и в сухой форме, несмотря на высокую для иммунобиологических препаратов температуру хранения.

Образцы, вернувшиеся с МКС на транспортном грузовом кос мическом корабле «Прогресс» после трехмесячного хранения, также тестировали по методу Грациа. В среднем титр фаговых штаммов из лиофилизированной формы коктейля «Фудфаг» падал на 2 порядка, жидкой – на один. Половина из образцов, хранившихся на Земле при тех же температурных условиях, которые постоянно поддерживается на МКС, сохранили титр бактериофагов в пределах одного порядка исходной концентрации вирусных частиц.

Одновременно с определением количества негативных колоний методом агаровых слоев проводили визуальное сравнение их морфологии до и после космического полета и синхронного хранения на Земле. Нам не удалось отметить существенных различий в морфологии бляшек ни у одного из бактериофагов, включенных в эксперимент.

Спектр литической активности всех образцов бактериофагов как после полутора, так и после трехмесячного хранения на МКС оставался неизменным.

Синхронно хранившиеся на Земле при тех же температурных условиях штаммы бактериофагов ожидаемо лизировали лишь штаммы гомологичного вида бактерий в таком же проценте случаев, как и до закладки на хранение.

Достоверного изменение данного биологического свойства не было обнаружено ни у одного из фагов, участвовавших в эксперименте.

Интервалы значений pH, при которых образцы бактериофагов стабильно сохраняли исходный титр вирусных частиц после полутора- и трехмесячного хранения на МКС, оставались неизменными.

ДНК всех бактериофагов, включенных в эксперимент, были отсеквенированы до и после трехмесячного хранения на МКС при помощи полупроводникового секвенатора второго поколения IonTorrent PGM. Результаты выравнивания собранных полногеномных последовательностей представлены на рисунках 27 Consensus identity Фаг CH1 Фаг CH1 после полета Рисунок 27 Выравнивание геномов стафилококковго фагаCH1 до и после трехмесячного космического полета Consensus identity Фаг ST11 Фаг ST11 после полета Рисунок 28 Выравнивание геномов сальмонеллезного фага ST11 до и после трехмесячного космического полета Consensus identity фаг SI3 фаг SI3 после полета Рисунок 29 Выравнивание геномов сальмонеллезного фага SI3 до и после трехмесячного космического полета Consensus identity фагSE40 фагSE40 после полета Рисунок 30 Выравнивание геномов сальмонеллезного фага SE40 до и после трехмесячного космического полета Consensus identity E. coli EсD7 E. coli EсD7 после полета Рисунок 31 Выравнивание геномов фага E. coli ECD7 до и после трехмесячного космического полета Consensus identity E. coli V18 E. coli V18 после полета Рисунок 32 Выравнивание геномов фага E. coli V18 до и после трехмесячного космического полета Consensus identity Фаг Lm1 Фаг Lm1 после полета Рисунок 33 Выравнивание геномов листериозного фага Lm1 до и после трехмесячного космического полета В результате проведенной работы можно сделать вывод о том, что полногеномные последовательности штаммов бактериофагов, находящихся в условиях космической станции не претерпели изменений по отношению к штаммам, находившимся на Земле.

Таким образом, полученные данные подтвердили неизменность фенотипических свойств (за исключением концентрации вирусных частиц) у всех штаммов бактериофагов в жидкой и лиофилизированной форме после полутора- и трехмесячного их пребывания на МКС. Кроме того, не обнаружено вставок и делеций в ДНК бактериофагов после их возвращения из космоса. В процессе исследования отмечена большая стабильность титра бактериофагов в жидкой форме препарата по сравнению с лиофилизированной формой при хранении в условиях орбитальной космической станции. В целях получения экспериментальных данных на временных промежутках, соизмеримых со сроком годности специализированного продукта диетического профилактического питания «ФудФаг», нами в сотрудничестве с ОАО «Биопрепарат» запланировано на 2015 год увеличение срока пребывания фагов в космосе до одного года.

Предварительные результаты, полученные в ходе данного этапа исследования, открывают возможность безопасного и эффективного использования бактериофагов для нормализации дисбиотических состояний у космонавтов в условиях МКС.

164

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Широкое распространение бактерий с множественной и полной устойчивостью к антибиотикам и биоцидам значительно осложняет борьбу с инфекционными заболеваниями и приводит к резкому ухудшению эпидемиологической ситуации во многих странах мира. Устойчивость к антибиотикам и биоцидам связана с бесконтрольным и неэффективным использованием антибиотиков при лечении и профилактике инфекций, в том числе, нозокомиальных, а так же с массовым применением консервантов и бактерицидных препаратов в пищевой промышленности и сельском хозяйстве.

Для улучшения качества медицинской помощи, а также перехода на потребление экологически чистых, не обработанных антибактериальными средствами продуктов питания, необходим поиск новых и возрождение известных ранее форм и методов профилактики и лечения инфекционных заболеваний, способов деконтаминации инструментария и помещений ЛПУ, а также консервации пищевой продукции.

В июне 2011 г. Ученым Советом Роспотребнадзора по инициативе 2-х ведущих научно-исследовательских институтов ФБУН ГНЦ ПМБ (п. Оболенск) и ФБУН МНИИЭМ им. Г.Н. Габричевского было принято решение о разработке новых средств профилактики пищевых инфекций на основе бактериофагов, послужившее отправной точкой данного исследования. Целью данной диссертационной работы стала разработка рецептуры специализир ованного продукта диетического профилактического питания на основе бактериофагов, технологии производства и процедуры контроля, обеспечивающей его безопасность и эффективность в качестве средства профилактики ОКИ и пищевых токсикоинфекций.

Отсутствие в Российской Федерации прецедента по созданию, регистрации и применению фагосодержащего продукта питания поставило перед нами задачу по созданию собственного алгоритма разработки специализированного продукта профилактического питания на основе бактериофагов от выделения и селекции вирулентных штаммов бактериофагов, отработки технологии получения высокоактивных стерильных фаголизатов, подтверждения их безопаснос ти на молекулярно-генетическом уровне и создания готовой формы фагового коктейля через подтверждение его безопасности и эффективности на животных и в рамках ограниченных клинических испытаний до государственной регистрации специализированного продукта профилактического питания. Перечисленные этапы послужили задачами настоящего диссертационного исследования.

На основании статистического анализа эпидемиологических данных за последние десять лет, включавших как отечественные, так и зарубежные источники, нами отобраны наиболее значимые виды бактерий, вызывающие ОКИ и пищевые токсикоинфекции – это Escherichia coli энтеропатогенной, энтеротоксигенной и энтерогеморрагической групп, Salmonella Enteritidis, Salmonella Infantis, Salmonella Typhimurium, Listeria monocytogenes, Staphylococcus aureus.

В процессе формировании банка потенциальных бактериальных штаммовмишеней проводилась их видовая идентификация. Бактериальные штаммы, обладающие характерными видовыми свойствами, использовались для изолирования и определения спектра литической активности фагов-кандидатов.

Культуры, на которых удавалось достичь высоких значений титра бактериофагов, отбирали как индикаторные штаммы для получения одноименного бактериофага, лиофилизировали и закладывали на хранение. Для штаммов, используемых в качестве посевного материала при культивировании бактериофагов, дополнительно подтверждалось отсутствие в них лизогенных факторов с помощью модифицированного нами метода химической индукции митомицином С.

В ходе исследований нами отобраны и изучены 7 производственноперспективных штаммов бактериофагов, активных в отношении бактерий – возбудителей инфекций, передаваемых пищевым путем, которые составили основу специализированного профилактического продукта. Вирулентные штаммы фагов отбирали на основании их фенотипической и молекулярно-генетической характеристики. Основными биологическими свойствами, которые служили критериями отбора, были спектр литической активности, высокая урожайность на штамме-хозяине и устойчивость к негативным физическим и химическим факторам внешней среды. Так, все штаммы воспроизводились в титре от 10 10 (Lm1) до 1012 (ST11, SE40 и Si3) БОЕ/мл, имели широкий спектр литической активности, определявшийся процентом лизируемых штаммов внутри вида (серовара), от 64 % (S. Infantis) до 100 % (E.coli O157:H7 и E.coli O104:H4) и сохраняли стабильный титр вирусных частиц как при 30 минутной обработке хлороформом, так и при повышении температуры от 55 °С (CH1) до 80 °С (SE40) и значениях рН от 3,6 (ST11) до 9,6 (V18). Устойчивость бактериофагов к кислой среде позднее нашло свое отражение при фармакокинетических исследованиях – мы подтвердили незначительное падение титра для основной массы фагов, включенных в специализированный продукт, после прохождения желудка.

Спектр литической активности у бактериофаговых штаммов-кандидатов был ограничен исключительно культурами патогенных бактерий. В эксперименте in vitro фаги не подавляли рост производственных пробиотических штаммов бифидобактерий, лактобацилл, E.coli M-17 и нормальной микрофлоры, выделенной из фекалий 100 пациентов КДЦ ФБУН МНИИЭМ им. Г.Н.

Габричевского.

В ходе отбора производственно-перспективных штаммов бактериофагов изучена их молекулярно-генетическая характеристика, позволявшая судить об оригинальности и вирулентной природе вирусных частиц. Результаты, полученные при секвенированных ДНК бактериофагов, показали, что их размеры колеблются от 18 (CH1) до 167 (EcD7) т.п.н. По данным биоинформационного анализа ДНК бактериофагов, геномы всех 7 штаммов не содержали гены интеграз, репрессоров транскрипции и других генов, характерных для умеренных бактериофагов. Не были обнаружены также и известные локусы патогенности, кодирующие бактериальные токсины штаммов-хозяев, антибиотикорезистентности и прочие нежелательные гены. Процент идентичности ДНК бактериофагов, отобранных для специализированного продукта, с близкородственными штаммами, депонированными в GenBank, составлял от 62 % до 93 %, что свидетельствовало об оригинальности бактериофагов. Полученные при сравнении нуклеотидных последовательностей данные позволили подтвердить таксономическое положение, определенное при электронном микроскопировании бактериофагов: сальмонеллезные (ST11, Si3), стафилококковый, колифаги и листериозный относятся к семейству Myoviridae, сальмонеллезный SE40 – Siphoviridae.

На следующем этапе создания специализированного продукта на основе бактериофагов разработан метод получения фаговой биомассы с высокой литической активностью и предельно низким содержанием эндо- и экзотоксинов.

В процессе отработки пилотной технологии производства штаммы бактериофагов в титре от 1010 до 1012 БОЕ/мл получали выращиванием на плотных питательных средах в матрасах с последующей стерилизующей фильтрацией и освобождением от эндотоксина на хроматографической колонке. Ноу-хау предусматривало также использование непатогенных штаммов-хозяев для получения второй генерации фаговых частиц в случае обнаружения экзотоксинов (например, шига-токсина) в фаголизате первого поколения бактериофагов. В готовом коктейле бактериофагов с помощью бактериального посева контролировали микробиологическую чистоту, отсутствие экзотоксинов подтверждали методом ИФА, а содержание эндотоксина на уровне не выше 50 ЕЭ/мл контролировали ЛАЛ-тестом. После проверки литической активности методом Грациа фаголизат использовали в качестве основного действующего вещества для создания рецептуры специализированного продукта диетического профилактического питания. В состав разработанного специализированного продукта также были включены:

стерильный сироп корня солодки, пектин яблочный и глицин, обладающие пребиотическими, противовоспалительными и антиоксидантными свойствами. В качестве вспомогательных компонентов использовали коммерческий уравновешивающий буферный раствор (набор EndoTrap, Hyglos, Германия) и стерилизованная дистиллированная вода, обеспечивающие стабильность действующих веществ при хранении и необходимый объем готовой формы – 100 мл. Физико-химические показатели, пищевая и энергетическая ценность, содержание токсичных элементов разработанной рецептуры специализированного продукта полностью соответствовали нормативным данным, утвержденным комиссией ЕврАзЕс в рамках Технического Регламента Таможенного Союза ТР ТС 027/2012 «О безопасности отдельных видов специализированной пищевой продукции, в том числе диетического лечебного и диетического профилактического питания». Специфическую активность специализированного продукта оценивали по показателю «титр фаговых частиц в готовой форме» и определяли на уровне 106 БОЕ/мл, что, с одной стороны, соответствовало положению ТР ТС 021/2011 «О безопасности пищевой продукции», регламентирующему концентрацию действующих веществ в пищевой продукции на уровне не выше лекарственного препарата, а, с другой, подтверждено доклиническими и клиническими испытаниями по безопасности и эффективности специализированого продукта диетического профилактического питания «Фудфаг». Контрольные процедуры, обеспечивающие нормативное качество специализированного продукта, явились основой Технических условий Санитарно-гигиеническая экспертиза 9197-163-78095326-2012.

экспериментально-производственных серий продукта проведена в независимых лабораториях на базе ФГБУ «НИИ питания» РАМН и филиале ФБУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии в г. Москве» в САО. Высокое качество готовой формы специализированного продукта диетического профилактического питания обеспечено четко структурированной пилотной технологией его получения, включавшей цепочку этапов от подготовки исходного сырья через наработку посевного материала (стартерных) культур, получения фаголизата, его очистки, фасовки во флаконы и укупорки в промаркированную потребительскую тару.

Контрольные мероприятия, в том числе, оценка микробиологической чистоты и специфической активности специализированного продукта, осуществляли на каждой из 6 основных технологических процедур.

На основании многократно воспроизведенного технологического процесса подготовлена и утверждена Технологическая инструкция, являющаяся, наряду с ТУ, рецептурой и проектом этикеточной надписи, неотъемлемой частью нормативно-технической документации. Последняя в полном объеме вместе с образцами специализированного продукта прошла экспертизу ФГБУ «НИИ Питания» и государственную регистрацию в Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека. Репрезентативную выборку образцов из экспериментальных серий специализированного продукта закладывали на хранение на срок годности, в полтора раза превышающий.

определенный в НТД. Регламентированный при регистрации титр вирусных частиц сохранялся в процессе всего срока гарантийного хранения специализированного продукта диетического профилактического питания «Фудфаг».

На следующем этапе диссертационного исследования нами была проведена оценка безопасности специализированного продукта «Фудфаг» в опытах по изучению острой и хронической (подострой) токсичности на двух видах лабораторных животных. В результате проведенных экспериментов показано, что при всех возможных способах однократного введения максимальной дозы (1,0 мл

– внутрибрюшинно мышам и 5 мл – морским свинкам, 1,0 мл – подкожно и 0,5 мл per os мышам) исследуемого продукта признаков интоксикации у мышей и морских свинок не наблюдали.

Поведенческие реакции, внешний вид и привес мышей в экспериментальной и контрольной группах при длительном пероральном приеме специализированного продукта также не отличались. Для исключения вероятности возникновения побочных эффектов по влиянию бактериофагов на нормальную микрофлору кишечника in vivo (на модели беспородных белых мышей) дополнительно определяли изменение количества основных представителей микробиоценоза толстого кишечника на фоне 10-ти дневного внутрижелодучного введения фагового коктейля. Компоненты разработанной рецептуры не влияли на нормальную микрофлору кишечника мышей.

Далее на модели лабораторных животных были проведены фармакокинетические исследования фагосодержащего продукта. В процессе эксперимента определяли количество вирусных частиц в фекалиях животных в различные промежутки времени после однократного внутрижелудочного введения специализированного продукта «Фудфаг». Через 9 часов после введения продукта сальмонеллезные фаги обнаруживали в экскрементах мышей в наибольшей концентрации. В меньшем количестве в мышиных экскрементах определяли листериозный, эшерихиозный (EсD7) и стафилококковый фаги. В дальнейшем количество специфических вирусных частиц снижалось, и к 48 часам в мышиных фекалиях оставались только незначительные количества сальмонеллезных фагов.

Изучение специфической антибактериальной эффективности фагового продукта проводили на модели экспериментальной сальмонеллёзной инфекций у беспородных белых мышей, которых заражали штаммом S. Enteritidis 92Rifr.

Оценивали как профилактическую, так и лечебную схемы введения коктейля бактериофагов. Введение препарата через 48 часов после заражения животных в течение 5 дней в дозе 0,5 мл/сут продлевало их жизнь до 9,6 дня, против 8 в контрольной группе. При профилактическом режиме использования фагового коктейля (введение за 24 часа до заражения и далее в течение 5 дней в дозе 0,5 мл/сут) выжило 70 % мышей, средний срок жизни павших мышей составил 11,4 дня. Бактериологический анализ органов и фекалий выживших животных на 14 сутки после окончания терапии подтвердил 100 % санацию внутренних органов животных от S. Enteritidis 92Rifr. Полученные результаты подтвердили высокую профилактическую эффективность специализированного продукта «Фудфаг» в отношении сальмонеллезной инфекции, что имеет существенное клиническое значение, так как в состав испытуемого средства входят три сальмонеллезных бактериофага, лизирующих широкий спектр штаммов сероваров Enteritidis, Typhimurium и Infantis, выступающих этиологическим фактором более чем в 70 % подтвержденных случаев сальмонеллезной инфекции в Российской Федерации.

Оценку специфической антибактериальной эффективности специализированного продукта профилактического питания на основе бактериофагов проводили также в рамках программы медицинской реабилитации у лиц с хроническими заболеваниями органов пищеварения. Типовая программа реабилитации включала: дието-, фито-, бальнео-, кинезотерапию, тренинги, гастрошколы и т.д. При бактериологическом исследовании фекалий у пациентов выявлены Staphylococcus aureus, энтеропатогенная Escherichia coli, грибы рода Candida и другие представители условно-патогенной микрофлоры, типичные для дисбиотического состояния кишечника. 30 пациентам основной группы дополнительно к типовой программе реабилитации был назначен фаговый коктейль по 50 мл 3 раза в день во время еды, курсом 10 дней. У 16 пациентов группы сравнения реабилитацию осуществляли в рамках типовой программы.

Включение в программу медицинской реабилитации фагового коктейля позволило на 33,3 % снизить количество пациентов с дисбактериозом кишечника второй и третьей степени, а у 36,7 % пациентов основной группы добиться полной нормализации показателей микробиоценоза за счет элиминации S. aureus и энтеропатогенной E. coli. Полученные результаты подтверждают высокую терапевтическую эффективность специализированного продукта «Фудфаг» в отношении возбудителя эшерихиоза и стафилококковой пищевой токсикоинфекции.

В рамках расширения доказательной базы в плане профилактической эффективности специализированного продукта «Фудфаг» нами были продолжены пострегистрационные исследования данного средства, включавшие испытания, как на лабораторных животных, так и на добровольцах. Используя принцип моделирования инфекционного процесса, предложенный Дроздовой О.М. (1988), мы апробировали на 40 лабораторных животных, а затем на 45 здоровых добровольцах следующий алгоритм применения специализированного продукта:

контрольные группы в обоих исследованиях заражали непатогенным штаммом E.

coli К12 С600 в течение 3-х дней в дозе 5107 КОЕ/мл в сутки, опытные группы подвергали такому же заражению на фоне профилактического приема специализированного продукта «Фудфаг» до, во время и спустя сутки после периода инфицирования. В опыт отбирали животных и здоровых добровольцев, не имеющих в кале лактозонегативных штаммов E. coli. Животные и люди в контрольных группах вместо специализированного продукта получали физиологический раствор по схеме приема специализированного продукта «Фудфага». В результате у представителей контрольных групп на 6-ые сутки эксперимента в экскрементах обнаруживалась лактозонегативная E. сoli. В то время как в фекалиях участников опытных групп идентифицировали исключительно E. сoli с нормальными ферментативными свойствами. С целью повышения достоверности проведенного эксперимента данные микробиологического исследования подтверждали молекулярно-генетическим методом: до заражения испытуемых штамм E. coli K12 C600 по данным ПЦР отсутствовал во всех образцах фекалий, в то время как на 6-ые сутки эксперимента E. coli K12 C600 присутствовал у членов контрольной группы вплоть до 5-го разведения фекалий и не был обнаружен в образцах от людей и животных из опытных групп. Таким образом, на экспериментальной модели эшерихиоза у лабораторных животных и ограниченной группе добровольцев была подтверждена эффективность предложенного алгоритма использования специализированного продукта «Фудфаг» в качестве средства специфической фагопрофилактики кишечной инфекции, вызванной непатогенной кишечной палочкой. Полученные результаты имеют существенное значение для клинической практики, потому что два оригинальных колифага, входящие в состав специализированого продукта обладают широким спектром литической активности, включающим следующие сероварианты E.coli: O26, O55, O103, O104, O121, O125, O127, O128, O145, O146, O157, вызывающие тяжелые случаи инфекции, передающейся пищевым путем.

Расширяя спектр возможного применения продуктов на основе бактериофагов, мы провели исследования, открывающие в будущем перспективу по использованию бактериофагов на международной космической станции (МКС). Различные факторы космического полета, гиподинамия, стресс, особенности питания, ограниченность и специфичность микрофлоры на МКС вызывают дисбиотические нарушения ЖКТ, которые могут провоцировать развитие тяжелых патологических состояний у космонавтов.

Пробиотики помогают эффективно скорректировать доклинические проявления дисбаланса микрофлоры, развивающиеся у космонавтов в непривычных условиях обитания. Новый класс пробиотиков – фагобиотики могут быть использованы для улучшения состояния их здоровья. В рамках долгосрочной пр ограммы научноприкладных исследований и экспериментов, планируемых на Российском сегменте Международной космической станции и космического эксперимента «Бактериофаг», мы провели сравнение фено- и генотипических свойств бактериофагов, входящих в специализированных продукт «Фудфаг» до, после 1,5 и 3 месяцев хранения на Земле и на МКС. В результате проведенных в 2013-2014 гг. экспериментов нами подтверждена неизменность фенотипических (за исключением концентрации вирусных частиц) и генотипических свойств у 7 штаммов бактериофагов из коктейля «Фудфаг» в жидкой и лиофилизированной формах, что открывает возможность безопасного и эффективного использования в будущем бактериофагов для нормализации дисбиотических состояний у космонавтов в условиях Международной космической станции.

Таким образом, разработанный в рамках данного диссертационного исследования специализированный продукт диетического профилактического питания «Фудфаг» (свидетельство о государственной регистрации № от 20.02.2013 г.), содержащий коктейль RU.77.99.19.004.Е.001234.02.13 бактериофагов, активных в отношении Escherichia coli, Salmonella Enteritidis, Salmonella Infantis, Salmonella Typhimurium, Listeria monocytogenes, Staphylococcus aureus, безопасен для человека и животных и может применяться в качестве средства фагопрофилактики декретированных контингентов работников предприятий различных отраслей с целью снижения риска развития спорадических случаев и вспышек инфекций, передающихся пищевым путем.

174

ВЫВОДЫ:

1. На основе оригинальных вирулентных штаммов эшерихиозных V18 и EcD7, сальмонеллезных ST11, SI3, SE40, стафилококкового CH1 и листериозного Lm1 бактериофагов создан специализированный продукт диетического профилактического питания, с подтвержденной в доклинических исследованиях безопасностью и широким спектром специфической антибактериальной эффективности в отношение условно-патогенных и патогенных бактерий родов Staphylococcus, Listeria, Salmonella, Escherichia coli, Shigella flexneri и sonnei.

2. Разработанная технология культивирования производственных штаммов бактериофагов оптимизирует качество фагового коктейля как по титру содержащихся в нем вирусных частиц, так и по степени его очистки от эндо- и экзотоксинов.

3. Предложенный алгоритм клинического использования готовой формы коктейля бактериофагов подтвердил терапевтическую эффективность специализированного продукта диетического профилактического питания «Фудфаг» при коррекции дисбиотических состояний в рамках программы медицинской реабилитации у лиц с хроническими заболеваниями органов пищеварения и профилактике эшерихиоза, искусственно вызванного непатогенной кишечной палочкой у добровольцев.

4. Разработанная и полностью реализованная процедура оценки безопасности и эффективности производственно-перспективных штаммов бактериофагов, включающая их фено- и генотипический анализ, а также фармакологическую, токсикологическую и фармакокинетическую характеристику готовой формы, позволила впервые в РФ провести регистрацию фагосодержащего препарата в качестве специализированного продукта диетического профилактического питания.

175

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Разработанный специализированный продукт диетического профилактического питания на основе коктейля бактериофагов может быть использован для фагопрофилактики декретированных контингентов работников предприятий различных отраслей с целью снижения риска возникновения спорадических случаев, вспышек ОКИ и пищевых токсикоинфекций.

2. Рекомендовать для введения в практику биофармацевтических компаний процедуру оценки безопасности и эффективности производственноперспективных штаммов фагов, обеспечивающую отбор исключительно вирулентных бактериофагов и уменьшающую вероятность формирования в окружающей среде фагорезистентных штаммов патогенных бактерий.

ПЕРСПЕКТИВЫ НАПРАВЛЕНИЯ ДАЛЬНЕЙШЕЙ РАЗРАБОТКИ ТЕМЫ

Дальнейшие исследования будут направлены на мониторинг фагочувствительности персистирующих бактериальных штаммов гомологичных бактериофагам, включенным в специализированный продукт «Фудфаг», и на поддержание эффективности коктейля бактериофагов за счет своевременного включения в него новых штаммов фагов с полной фено- и генотипической характеристикой, которые будут обладать широким спектром литической активности в отношение основных возбудителей инфекций, передающихся пищевым путем.

177

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

БОЕ – бляшкообразующие единицы ВО – вспомогательная операция ГУС – гемолитико-уремический синдром ГРМ – гидролизат рыбной муки ИБПЛ – иммунобиологические лекарственные препараты ДОУ – дошкольное обучающее учреждение ДНК – дезоксирибонуклеиновая кислота ЖКТ – желудочно-кишечный тракт ЖСА – желточно-солевой агар ЗО – заключительная операция ИФА – иммуноферментный анализ КОЕ – колониеобразующие единицы ЛД – летальная доза ЛПУ – лечебно-профилактическое учреждение МКС – международная космическая станция MRSA метициллин-резистентные штаммы S.

aureus МРС - 2 – среда Мозера - Рогоза - Шарпа МПА – мясопептонный агар МПБ – мясопептонный бульон НТД – научно-техническая документация ОУ обучающее учреждение ОКИ – острые кишечные инфекции ПТИ – пищевая токсикоинфекция ПЦР – полимеразная цепная реакция ПЖА – полужидкий агар СЖ – сахарозо-желатиновая среда ТУ – технические условия ТП – технологический процесс Т.П.О. – технологическая подготовительная операция УПМ – условно-патогенные микроорганизмы У.М. упаковка, маркировка продукта EAEC (ЭАКП) – enteroaggregative E. coli (энтероагрегативная кишечная палочка) EIEC (ЭИКП) – enteroinvasive E. coli (энтероинвазивная кишечная палочка) EHEC (ЭГКП) – enterohaemorrhagic E. coli (энтерогеморрагическая кишечная палочка) EPEC (ЭПКП) – enteropathogenic E. coli (энетропатогенная кишечная палочка) ETEC (ЭТКП) – enterotoxigenic E. coli (энтеротоксигенная кишечная палочка) ЕЭ – единица эндотоксина EFSA - European Food Safety Authority (Европейская организация по безопасности продовольствия) FBI – «food-borne infection» (инфекция, передающаяся пищевым путем) NCBI – National Center for Biotechnology Information (национальный центр биотехнологической информации, США) STEC – шига-токсин продуцирующие штаммы E.coli US FDA - United States Food and Drug Administration (Управление по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов Министерства здравоохранения и социальных служб США) 179

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ:

1. Акимкин, В.Г. Бактериофаги: исторические и современные аспекты их применения: опыт и перспективы / В.Г. Акимкин, О.С. Дарбеева, В.Ф. Колков // Клиническая практика. – 2010. – №4 – С.48–54.

2. Акимкин, В.Г. Нозокомиальный сальмонеллез взрослых / В.Г. Акимкин, В.И.

Покровский М.: из-во РАМН, 2002. – С.136.

3. Акимкин, В.Г. Клинико-эпидемиологические особенности нозокомиального сальмонеллеза у больных с хирургической патологией / В.Г. Акимкин, Р.А.

Трунилина, Е.В. Шахлин // ООО «АС» – Магнитогорск.– 2008. – С.172.

4. Алешкин, А.В. Бактериофаги как пробиотики и средства деконтаминации пищевых продуктов / А.В. Алешкин, Н.В. Воложанцев, Э.А. Светоч, В.А.

Алешкин, С.С. Афанасьев, А.И. Борзилов, Д.А. Васильев, С.Н. Золотухин, А.В.

Караулов, Х.М. Галимзянов, Ю.Ф. Космачев, И.А. Киселева, М.С. Афанасьев, Е.О. Рубальский,М.О. Рубальский // Астраханский медицинский журнал. – 2012.

– №3. – С.31-39.

5. Алешкин, А.В. Области применения бактериофагов / А.В. Алешкин // Бактериофаги микроорганизмов, значимых для животных, растений и человека. – Ульяновск: Ульяновская ГСХА, 2013. – С.29-32.

6. Алешкин, А.В. Фагобиотики в профилактике кишечных инфекций/ А.В.

Алешкин, С.С. Афанасьев, Э.А. Светоч, Н.В. Воложанцев // Материалы VI Ежегодного Всероссийского Конгресса по инфекционным болезням. – Москва, 2014. – С.28.

7. Алешкин, А.В. Возможности применения бактериофагов в качестве пробиотических средств деконтаминации в области питания/ А.В. Алешкин, М.В.

Зейгарник // Вопросы диетологии. – 2012. – Т.2, №4. – С.24 – 34.

8. Алешкин, А.В Бактериофаги пробиотические средства регуляции микробиоценозов и деконтаминации микроорганизмами продуктов питания, животных и растений / А.В. Алешкин, А.В. Караулов, Э.А. Светоч, Н.В.

Воложанцев, В.А. Алёшкин, С.С. Афанасьев, О.В. Рубальский, Д.А. Васильев, С.Н. Золотухин, М.С. Афанасьев, В.М. Лахтин, М.О Рубальский // Иммунопатология, аллергология, инфектология. – 2013. – №3. – С.80-89.

9. Алешкин, А.В. Бактериофаги в условиях длительного космического полета / А.В. Алешкин, Е.О. Рубальский, А.В. Попова, В.И. Евстигнеев, С.Ю. Пчелинцев, С.С. Афанасьев, Э.А. Светоч, Н.В. Воложанцев, В.В. Веревкин, И.А. Киселева, С.С. Бочкарева // Материалы второй международной научно-практической конференции «Бактериофаги: теоретические и практические аспекты применения в медицине, ветеринарии и пищевой промышленности». Инфекция и иммунитет.

Специальный выпуск. 2014. – С.64.

10. Алешкин, А.В. Фагопрофилактика «диареи путешественников» / А.В.

Алешкин, Е.О. Рубальский, И.А. Киселева, С.С. Бочкарева, О.Ю. Борисова, С.С.

Афанасьев // Материалы второй международной научно-практической конференции «Бактериофаги: теоретические и практические аспекты применения в медицине, ветеринарии и пищевой промышленности». Инфекция и иммунитет.

Специальный выпуск. 2014. – С.63 - 64.

11. Алешкин, В.А. Бактериофаги в России – прошлое, настоящее и будущее / В.А.

Алешкин, А.В. Алешкин, С.С. Афанасьев // Материалы 1 международной научнопрактической конференции «Бактериофаги: теоретические и практические аспекты применения в медицине, ветеринарии и пищевой промышленности».

Сборник конгресса. – Ульяновск, 2013. –Т.1. – С.139-144.

12. Анганова, Е.В. Анализ заболеваемости ОКИ по Иркутской области / Е.В.

Анганова, А.В. Духанина, Е.Л. Кичигина // Сибирский медицинский журнал. – 2011.– №6. – С.230-232.

13. Анпилов, Н.И. Профилактическая эффективность сухого поливалентного дизентерийного бактериофага в организованных коллективах / Н.И Анпилов, А.А Прокудин // Военно-медицинский журнал. – 1984.– №5. – С.39-40.

14. Асланов, Б.И. Эпидемиологические особенности формирования патогенных свойств E.coli в урологическом стационаре / Б.И. Асланов, А.А. Долгий, А.Е.

Гончаров, А.И. Архангельский // Профилактическая и клиническая медицина. – 2012. – № 1 (42). – С.117-121.

15. Ахмедов Д.Р. Сальмонеллезы / Д.Р. Ахмедов. – М.:ГЭОТАР-Медиа, 2010. – С.292.

16. Бабалова, Г.Г. О профилактическом значении дизентерийного сухого бактериофага / Г.Г. Бабалова, К.Т. Кацитадзе, Л.А. Сакварелидзе // Журнал микробиологии. – 1968.– №2. – С.143-145.

17. Байко, С.В. Гемолитико-уремический синдром: эпидемиология, классификация, клиника, диагностика, лечение (Обзор литературы. Часть 1) / С.В.

Байко // Нефрология и диализ.– 2007.– Т. 9,№ 4. – С.370-377.

18. Бакулов, И.А. Листерии и листериоз: монография / И.А. Бакулов, Д.А.

Васильев, Д.В. Колбасов, Т.И. Кольпикова, Ю.О. Селянинова, И.Ю. Егорова – Ульяновск: Ульяновская УГСХА, 2008. – С.168.

19. Бакулов, И.А. Листериоз как пищевая инфекция: монография / И.А. Бакулов, Д.А. Васильев Ульяновск: Ульяновская УГСХА, 1991. – С.78.

20. Бакулов, И.А. Листериоз на рубеже тысячелетий / И.А. Бакулов // Материалы международного симпозиума ВНИИВВиМ. – Покров,1999. – С.262.

21. Баннов, В.А. Детекция генетических детерминант вирулентности в геномах бактериофагов / В.А. Баннов, Н.К. Фурсова, Н.В. Воложанцев, С.А. Коровкин, Э.А. Светоч // Материалы 1 международной научно-практической конференции «Бактериофаги: Теоретические и практические аспекты применения в медицине, ветеринарии и пищевой промышленности». Сборник конгресса. – Ульяновск, 2013. – Т.1. – С.19-22.

22. Бойцов, А.Г. Бактериофаги / А.Г. Бойцов, А.А. Порин, О.Н. Ластовка; под общ. ред. В.П. Иванова СПб: Санкт-Петербургская медицинская академия, 2006.

– 99 с.

23. Болотский, М.Н. Биологические особенности популяции и совершенствования популяции L. monocytogenes в продовольственном сырье: автореф. дис.… канд.

биол. наук: 16.00.06 / Болотский Михаил Николаевич – М., 2008. – 24 с.

24. Бондаренко, В.М. Клинический эффект и пути рационального использования лечебных бактериофагов в медицинской практике / В.М. Бондаренко // Приложение к журналу инфектологии. – 2011. – Т. 3.– №3. – С.15-19.

25. Бондаренко, В.М. Роль условно-патогенных бактерий кишечника в полиорганной патологии человека / В.М. Бондаренко – Тверь: изд-во «Триада», 2007. – 64 с.

26. Борисов, Л.Б. Медицинская микробиология, вирусология, иммунология:

учебник / Л.Б. Борисов М.: ООО «Медицинское информационное агентство», 2005. – 734 с.

27. Брусина, Е.Б. Принципы профилактики внутрибольничных гнойносептических инфекций в хирургических стационарах / Е. Б. Брусина // Главная медицинская сестра. – 2002. – № 11. – С.113 – 115.

28. Бузинов, Р. В. Динамика заболеваемости острыми кишечными инфекциями населения Архангельской области / Р.В. Бузинов, Т.А. Гордиенко, А.Б. Гудков, И.И. Бобун, В.М. Агафонов, В.П. Болтенков // Экология человека. – 2011.– № 9.

С.3 8.

29. Бузолева, Л.С. Об эпидемиологической опасности хранения пищевых продуктов при низкой температуре /Л.С. Бузолева, Г.П. Сомов // Гигиена и санитария. – 2000. – №3. – С.31 - 34.

30. Вербицкая, Н.Б. Особенности получения и использования бактериальных пробиотиков на борту МКС в условиях длительных космических экспедиций / Н.Б. Вербицкая, О.В. Добролеж, А.И. Кобатов, Л.Н. Петров Л.Н. // Космонавтика и ракетостроение. – 2011.– № 3 (64).– С.130 - 135.



Pages:     | 1 |   ...   | 3 | 4 || 6 |
 

Похожие работы:

«СЕТДЕКОВ РИНАТ АБДУЛХАКОВИЧ РАЗРАБОТКА НОВЫХ СРЕДСТВ СПЕЦИФИЧЕСКОЙ ПРОФИЛАКТИКИ И ЛЕЧЕНИЯ ЭШЕРИХИОЗОВ ТЕЛЯТ И ПОРОСЯТ 06.02.02 – ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология Диссертация на соискание ученой степени доктора ветеринарных наук Научный консультант: доктор ветеринарных наук, профессор, заслуженный деятель науки РФ и РТ Юсупов...»

«ГУЛЬ ШАХ ШАХ МАХМУД БИОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ ЦИТРУСОВОЙ МИНУРУЮЩЕЙ МОЛИ (Phyllocnistis citrella Stainton) В УСЛОВИЯХ ЮГО-ВОСТОЧНОГО АФГАНИСТАНА Специальность 06.01.07 – Защита растений ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени кандидата сельскохозяйственных наук НАУЧНЫЙ РУКОВОДИТЕЛЬ: доктор с.-х. наук, профессор КАХАРОВ К.Х. Душанбе, 2015 СОДЕРЖАНИЕ ВВЕДЕНИЕ..4 ГЛАВА I. СОВРЕМЕННОЕ СОСТОЯНИЕ ПРОБЛЕМЫ...»

«Шапурко Валентина Николаевна РЕСУРСЫ И ЭКОЛОГИЧЕСКОЕ КАЧЕСТВО ЛЕКАРСТВЕННЫХ РАСТЕНИЙ (НА ПРИМЕРЕ БРЯНСКОЙ ОБЛАСТИ) Специальность 03.02.08 – экология (биологические науки) Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: доктор...»

«Рагимов Александр Олегович ЭКОЛОГО-ФУНКЦИОНАЛЬНАЯ РОЛЬ ПОЧВ В ФОРМИРОВАНИИ УРОВНЯ БЛАГОПОЛУЧИЯ НАСЕЛЕНИЯ ВЛАДИМИРСКОЙ ОБЛАСТИ 03.02.08 – экология (биология) Диссертация на соискание ученой степени кандидата...»

«_ ТЕМИРОВ Николай Николаевич КОРРЕКЦИЯ АФАКИИ РАЗЛИЧНОГО ГЕНЕЗА МУЛЬТИФОКАЛЬНЫМИ ИНТРАОКУЛЯРНЫМИ ЛИНЗАМИ С АСИММЕТРИЧНОЙ РОТАЦИОННОЙ ОПТИКОЙ Специальность 14.01.07 – «Глазные болезни» ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Научный руководитель: доктор медицинских...»

«Сухарьков Андрей Юрьевич РАЗРАБОТКА МЕТОДОВ ОЦЕНКИ ОРАЛЬНОЙ АНТИРАБИЧЕСКОЙ ВАКЦИНАЦИИ ЖИВОТНЫХ 03.02.02 «Вирусология» Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: кандидат ветеринарных наук, Метлин Артем Евгеньевич Владимир 2014 ОГЛАВЛЕНИЕ 1 ВВЕДЕНИЕ 2 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 2.1 Характеристика возбудителя бешенства 2.2 Эпизоотологические...»

«Шумилова Анна Алексеевна ПОТЕНЦИАЛ БИОРАЗРУШАЕМЫХ ПОЛИГИДРОКСИАЛКАНОАТОВ В КАЧЕСТВЕ КОСТНОПЛАСТИЧЕСКИХ МАТЕРИАЛОВ Специальность 03.01.06 – биотехнология (в том числе бионанотехнологии) ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: доктор биологических наук Шишацкая Екатерина Игоревна Красноярск...»

«ХАПУГИН Анатолий Александрович РОД ROSA L. В БАССЕЙНЕ РЕКИ МОКША 03.02.01 – ботаника Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель Силаева Татьяна Борисовна д.б.н., профессор САРАНСК ОГЛАВЛЕНИЕ ВВЕДЕНИЕ Глава 1. ИСТОРИЯ ИЗУЧЕНИЯ РОДА ROSA L. В БАССЕЙНЕ МОКШИ. Глава 2. КРАТКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РОДА ROSA L. 2.1. Характеристика рода Rosa L. 2.2. Систематика рода Rosa L. Глава 3....»

«ПОРЫВАЕВА Антонина Павловна ТЕОРЕТИЧЕСКИЕ И ПРАКТИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ МОДЕЛИРОВАНИЯ ХРОНИЧЕСКОЙ ГЕРПЕСВИРУСНОЙ ИНФЕКЦИИ 03.02.02 Вирусология ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени доктора биологических наук Научный консультант: доктор медицинских наук, профессор Глинских Нина Поликарповна Екатеринбург 2015 ОГЛАВЛЕНИЕ 1 ВВЕДЕНИЕ 2 ОСНОВНАЯ ЧАСТЬ 2.1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ...»

«ШУБНИКОВА ЕЛЕНА ВЛАДИМИРОВНА ВЛИЯНИЕ ФИЗИКО-ХИМИЧЕСКИХ ФАКТОРОВ И ФОРМ АДАПТИВНОЙ ИЗМЕНЧИВОСТИ НА ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТЬ ПАТОГЕННЫХ БУРКХОЛЬДЕРИЙ К ХИМИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИМ ПРЕПАРАТАМ 03.02.03 –...»

«Петренко Дмитрий Владимирович Влияние производства фосфорных удобрений на содержание стронция в ландшафтах Специальность 03.02.08 экология Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: доктор биологических наук, профессор Белюченко Иван Степанович Москва – 2014 г. Содержание Введение Глава 1.Состояние изученности вопроса и цель работы 1.1 Экологическая...»

«ШИТОВ АЛЕКСАНДР ВИКТОРОВИЧ ВЛИЯНИЕ СЕЙСМИЧНОСТИ И СОПУТСТВУЮЩИХ ГЕОЛОГИЧЕСКИХ ПРОЦЕССОВ НА АБИОТИЧЕСКИЕ И БИОТИЧЕСКИЕ КОМПОНЕНТЫ ЭКОСИСТЕМ (НА ПРИМЕРЕ ЧУЙСКОГО ЗЕМЛЕТРЯСЕНИЯ И ЕГО АФТЕРШОКОВ) 25.00.36 – Геоэкология (науки о Земле) Диссертация на соискание ученой степени доктора геолого-минералогических наук Горно-Алтайск 201...»

«Анохина Елена Николаевна ПОЛИМОРФИЗМЫ ГЕНОВ ПРОИ ПРОТИВОВОСПАЛИТЕЛЬНЫХ ЦИТОКИНОВ, МУТАЦИИ ГЕНОВ BRCA1/2 ПРИ ЗЛОКАЧЕСТВЕННЫХ НОВООБРАЗОВАНИЯХ ОРГАНОВ ЖЕНСКОЙ РЕПРОДУКТИВНОЙ СИСТЕМЫ 14.03.09 – клиническая иммунология, аллергология Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: доктор биологических наук Тугуз А.Р. Майкоп 2015 Оглавление Список сокращений.. 3 Введение.. 5 Глава I....»

«Кириллин Егор Владимирович ЭКОЛОГИЯ ОВЦЕБЫКА (OVIBOS MOSCHATUS ZIMMERMANN, 1780) В ТУНДРОВОЙ ЗОНЕ ЯКУТИИ 03.02.08 – экология Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: д. б. н., профессор Мордосов И. И. Якутск – 2015 Содержание Введение.. Глава 1. Краткая физико-географическая...»

«Усов Николай Викторович Сезонная и многолетняя динамика обилия зоопланктона в прибрежной зоне Кандалакшского залива Белого моря в связи с изменениями температуры воды 25.00.28 – океанология Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Руководители: доктор биологических наук, главный научный сотрудник А.Д. Наумов доктор биологических наук, ведущий...»

«Алексеев Иван Викторович РАЗВИТИЕ КОМПЛЕКСНОГО ИНЖЕНЕРНО-ГЕОЛОГИЧЕСКОГО И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОГО МОНИТОРИНГА НА ЯКОВЛЕВСКОМ РУДНИКЕ ДЛЯ ПОВЫШЕНИЯ БЕЗОПАСНОСТИ ВЕДЕНИЯ ОЧИСТНЫХ РАБОТ ПОД НЕОСУШЕННЫМИ ВОДОНОСНЫМИ ГОРИЗОНТАМИ Специальность 25.00.08 – Инженерная геология,...»

«Иртегова Елена Юрьевна РОЛЬ ДИСФУНКЦИИ СОСУДИСТОГО ЭНДОТЕЛИЯ И РЕГИОНАРНОГО ГЛАЗНОГО КРОВОТОКА В РАЗВИТИИ ГЛАУКОМНОЙ ОПТИЧЕСКОЙ НЕЙРОПАТИИ 14.01.07 – глазные болезни ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Научный руководитель: доктор медицинских наук, профессор...»

«Аканина Дарья Сергеевна РАЗРАБОТКА СРЕДСТВ ДЕТЕКЦИИ ВЫСОКОВИРУЛЕНТНОГО ШТАММА ВИРУСА ГРИППА А ПОДТИПА Н5N 03.02.02 – вирусология Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель Д.б.н., профессор Гребенникова Т. В. Москва 20 ОГЛАВЛЕНИЕ Список использованных сокращений 1. Введение 2. Обзор литературы 2.1. Описание заболевания 2.2. Общая характеристика вируса гриппа 2.3. Эпидемиология вируса гриппа А...»

«Карачевцев Захар Юрьевич ОЦЕНКА ПИЩЕВЫХ (АКАРИЦИДНЫХ) СВОЙСТВ РЯДА СУБТРОПИЧЕСКИХ И ТРОПИЧЕСКИХ РАСТЕНИЙ В ОТНОШЕНИИ ПАУТИННОГО КЛЕЩА TETRANYCHUS ATLANTICUS MСGREGOR Специальность: 06.01.07 – защита растений Диссертация на соискание учёной степени кандидата биологических наук Научный руководитель: Попов Сергей...»

«Доронин Максим Игоревич ЭКСПРЕСС-МЕТОДЫ ВЫЯВЛЕНИЯ ВИРУСА ИНФЕКЦИОННОГО НЕКРОЗА ГЕМОПОЭТИЧЕСКОЙ ТКАНИ ЛОСОСЕВЫХ РЫБ 03.02.02 «Вирусология» Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: доктор биологических наук, Мудрак Наталья Станиславовна Владимир 2015 ОГЛАВЛЕНИЕ 1 ВВЕДЕНИЕ 2 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 2.1 Характеристика возбудителя инфекционного...»







 
2016 www.konf.x-pdf.ru - «Бесплатная электронная библиотека - Авторефераты, диссертации, конференции»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.