WWW.KONF.X-PDF.RU
БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА - Авторефераты, диссертации, конференции
 


Pages:     | 1 |   ...   | 5 | 6 || 8 | 9 |   ...   | 10 |

«Фирстова Виктория Валерьевна ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНО-ИММУНОЛОГИЧЕСКОЕ ОБОСНОВАНИЕ ВЫБОРА СТРАТЕГИИ ОЦЕНКИ ПОСТВАКЦИНАЛЬНОГО ИММУНИТЕТА ПРОТИВ ЧУМЫ И ТУЛЯРЕМИИ 14.03.09 – Клиническая ...»

-- [ Страница 7 ] --

6.4. Изменение активности синтеза цитокинов иммунокомпетентными клетками, полученными от невакцинированных и иммунизированных живой чумной вакциной людей, под влиянием антигенов чумного микроба 6.4.1. Изменение активности синтеза цитокинов ИФН- и ФНОсубпопуляциями Т лимфоцитов под влиянием антигенов чумного микроба Задачи исследования – сравнить количество клеток, синтезирующих ИФНи ФНО-, после культивирования их в полной питательной среде в присутствии антигенов чумного микроба и без них. Сравнить количество ИФН- и ФНО--синтезирующих клеток, полученных от людей, иммунизированных живой чумной вакциной и контрольных доноров.

Процентное содержание лимфоцитов, синтезирующих ИФН-, представлено в таблице 23. Количество ИФН--синтезирующих лимфоцитов, после инкубации клеток крови в питательной среде было незначительным и не превышало 1 % от общей популяции лимфоцитов. В субпопуляции лимфоцитов, экспрессирующих CD69 маркер, свидетельствующий об активации клеток, количество ИФН--синтезирующих клеток составило (4,04±2,16) %.

Таблица 23 – Процентное содержание ИФН-- синтезирующих Т лимфоцитов и их субпопуляций, полученных из крови людей, иммунизированных живой чумной вакциной и контрольных доноров Условия Процентное содержание субпопуляций, % + СD3+ СD4+ СD3+ СD8+ СD3+ СD69+ инкубации СD3 ИФН-+ ИФН-+ ИФН-+ ИФН-+ Клетки, полученные от вакцинированных против чумы доноров Среда 0,31 ± 0,19 0,75 ± 0,35 0,13 ± 0,11 4,04 ± 2,16 Среда + F1 4,58 ± 1,55 15,21 ± 4,86 9,17 ± 2,41 23,55 ± 5,01 Среда +V 0,41 ± 0,15 0,85 ± 0,47 0,45 ± 0,09 0,92 ± 0,32 Среда +Pla 1,35 ± 0,47 0,96 ± 0,12 0,65 ± 0,35 1,25 ± 0,47 Клетки, полученные от контрольных доноров Среда 0,45 ± 0,21 0,98 ± 0,78 0,35 ± 0,11 1,65 ± 0,74 Среда + F1 3,22 ± 1,15 8,21 ± 4,34 5,19 ± 1,95 5,95 ± 2,21 Среда +V 1,12 ± 0,35 1,33 ± 0,78 0,57 ± 0,34 1,12 ± 0,42 Среда +Pla 1,44 ± 0,67 1,65 ± 0,37 0,84 ± 0,57 1,15 ± 0,79

–  –  –

Статистически значимыми оказались различия в содержании субпопуляции СD3+СD69+ ИФН-+ между культурами активированных F1 антигеном клеток, полученных от вакцинированных против чумы людей и контрольных доноров.

Присутствие в среде V или Pla антигенов чумного не оказывало влияния на изменение содержания ИФН--синтезирующих субпопуляций лимфоцитов, полученных как от вакцинированных против чумы людей, так и от контрольных доноров.

6.4.2. Изменение активности синтеза цитокинов иммунокомпетеными клетками крови под влиянием антигенов чумного микроба Задачи исследования – провести сравнительный анализ количества цитокинов ИФН-, ИЛ-17, и ИЛ-4 в надосадочной жидкости лимфоцитов крови, полученной от людей иммунизированных живой чумной вакциной и контрольных доноров, через 24 ч после инкубации клеток в полной питательной среде в присутствии F1 антигена чумного микроба и без него.

ИФН- не детектировался в надосадочной жидкости лимфоцитов крови, полученных от людей иммунизированных живой чумной вакциной и контрольных доноров, через 24 ч после инкубации клеток в полной питательной среде без F1 антигена чумного микроба (рисунок 46). Присутствие F1 антигена чумного микроба в полной питательной среде приводило к выраженному повышению концентрации ИФН- (выше 1000 пкг/мл) во всех образцах, полученных от вакцинированных против чумы доноров. В группе контрольных доноров в 4 из 10 образцов выявили высокую концентрацию ИФН- (выше 1000 пкг/мл) в надосадочной жидкости лимфоцитов крови, стимулированных F1 антигеном чумного микроба. У шести контрольных доноров концентрация ИФНв надосадочной жидкости лимфоцитов крови, стимулированных F1 антигеном чумного микроба, не превышала 539 пкг/мл.

ИЛ-17 не детектировали в надосадочной жидкости лимфоцитов крови, полученных от людей иммунизированных живой чумной вакциной и контрольных доноров, через 24 ч после инкубации клеток в полной питательной среде без F1 антигена чумного микроба.

А Б В Рисунок 46 – Концентрация ИФН- (А), ИЛ-17 (Б) и ИЛ-4 (В) в культуре лимфоцитов, полученных от людей, иммунизированных живой чумной вакциной и контрольных доноров Присутствие F1 антигена чумного микроба в полной питательной среде приводило к повышению концентрации ИЛ-17 как в культуральной жидкости клеток, полученных от контрольных доноров, так и в культуральной жидкости клеток, полученных от вакцинированных против чумы людей. Концентрация ИЛ-17 колебалась от 32,4 до 400,7 пкг/мл. Содержание ИЛ-4 во всех образцах не зависимо от донора и условий инкубации клеток не превышало 2,6 пкг/мл.

Обсуждение В настоящее время об эффективности вакцинации живой чумной вакциной судят по выявлению титров антител к F1. Вместе с тем известно, что для формирования напряженного иммунитета к чуме необходимо участие и гуморального и клеточного звеньев иммунитета. Поэтому для оценки эффективности вакцинации необходимо оценивать как наличие противочумного гуморального, так и наличие противочумного клеточного иммунного ответа. В наших исследованиях мы изучили оба звена специфического иммунитета.

У людей, переболевших чумой или после иммунизации живой чумной вакциной, в сыворотках крови большинство противочумных антител специфичны к F1 антигену [303, 393]. Исходя из этих данных и из ряда экспериментов, проведенных на животных, большинство исследователей склоняется к мнению, что ключевую роль в формировании протективного иммунитета против чумы играет F1 антиген [399]. Высокие титры антител к F1 антигену сохраняются в течение одного года после вакцинации. Через год и более (до 30 лет) после вакцинации Y. pestis EV НИИЭГ только у половины привитых доноров выявляют антитела к F1 антигену [131].

В наших исследованиях было показано, что уровень антител к F1 Y. pestis в сыворотках крови людей постоянно вакцинирующихся против чумы (до 30 лет), через месяц после иммунизации живой чумной вакциной, колеблется в пределах 1:100-1:1600. Также было показано, что у 4 из 12 контрольных доноров обнаруживали антитела к F1 антигену чумного микроба в титрах от 1:100 до 1:400. Это свидетельствует о возможных перекрестных реакций антител к F1 антигену чумного микроба с антигенами других микробов.

Протективный иммунитет против чумы подразумевает наличие антител против не только F1, но также и против V антигена [317]. В частности, высокие титры антител против F1 и V антигенов в сыворотке крови мышей коррелируют с выживаемостью животных после заражения их вирулентным штаммом Y. pestis [400]. Синтез V антигена кодируется 70-kb плазмидой (плазмида вирулентности – кальций-зависимости), которая также кодирует синтез Yops и Ysc системы секреции III типа [110]. V антиген представляет собой высококонсервативный белок, который выявляется в эпидемически значимых штаммах Y. pestis [48].

Результаты наших исследований показали, что антитела к V антигену выявляются в сыворотках иммунизированных живой чумной вакциной людей в титрах от 1:100 до 1:800. Анализ сывороток контрольных доноров показал, что у троих контольных доноров титры антител V антигену колебались в пределах 1:400 и 1:800.

Таким образом, как к F1, так и к V антигену Y. pestis могут выявляться перекрестные реакции в сыворотке крови у людей. Y. pestis принадлежит к роду Yersinia. Этим объясняются перекрестные реакции антигенов Y. pestis с антигенами других бактерий рода Yersinia (Y. pseudotuberculosis и Y. enterocolitica) и энтеробактериями (Е. coli, Salmonella spp.) [411]. V антиген продуцируется всеми патогенными для человека йерсиниями: Y. pestis, Y. pseudotuberculosis и Y. enterocolitica. Кроме того антигены Y. pestis могут реагировать с эритроцитами человека О-группы [316]. Микроэррэй анализ белков, содержащихся в бактериях Y. pestis, и антител, синтезированных животными после иммунизации Y. pestis, Burkholderia mallei, Burkholderia cepecia, Burkholderia pseudomallei, Pseudomonas aeruginosa, Salmonella typhimurium, Shigella flexneri, и Escherichia coli показал, что часть белков, способных индуцировать синтез антител, являются общими для всех проанализированных микроорганизмов, часть белков – содержится в двух или более штаммах и лишь незначительная часть белков являются строго специфичными для Y. pestis [219]. По всей видимости, вышеперечисленными фактами можно объяснить выявленное нами наличие антител к антигенам Y. pestis у некоторых не вакцинированных против чумы людей.

Учитывая возможные перекрестные реакции до вакцинации против чумы необходимо выявлять наличие антител к F1 и V антигенам Y. pestis. Мы пытались выявить усиление титров антител у серопозитивных людей после вакцинации или ревакцинации (у людей постоянное вакцинирующихся против чумы более 10 лет).

Однако усиление титров антител отмечалось не у всех доноров.

Антитела, как известно, синтезируют плазматические клетки, дифференцирующиеся из активированных В лимфоцитов. Активацию В лимфоцитов индуцирует взаимодействие BCR рецептора В клетки с антигеном при участии цитокинов. Одним из первых признаков, свидетельствующих о начале активации клетки, является усиление на ее поверхности экспрессии CD69 рецепторной молекулы [379].

Мы оценили изменение экспрессии CD69 рецептора на В лимфоцитах под влиянием антигенов чумного микроба. Результаты наших исследований показали, что под влиянием УЗД или F1 Y. pestis, но не V или Pla антигенов чумного микроба, происходило увеличение численности В лимфоцитов, экпрессирующих маркер ранней активации CD69. Однако активация В лимфоцитов под влиянием F1 и УЗД Y. pestis не являлась специфической, так как мы выявили усиление экспрессии CD69 рецептора на поверхности В лимфоцитов и в культуре клеток, полученных от невакцинированных доноров.

После активации В лимфоциты дифференцируются в плазматические клетки, синтезирующие антитела. Одним из маркеров плазматических клеток является CD138 рецептор, который начинает активно экспрессироваться на цитоплазматической поверхности клетки [90, 274]. Мы оценили изменение экспрессии CD138 рецептора под влиянием F1 или V антигенов чумного микроба на поверхности CD19+ В лимфоцитов в крови, полученной от людей, вакцинированных и невакцинированных Y. pestis EV НИИЭГ. Нами было обнаружено, что содержание CD19+СD138+ субпопуляции лимфоцитов в крови, полученной от иммунизированных живой чумной вакциной людей, под влиянием F1, но не V антигена Y. pestis, увеличивается. Содержание CD19+СD138+ популяции, полученной от невакцинированных доноров, под влиянием F1 или V антигена не увеличивалось. Таким образом, по изменению содержания CD19+СD138+ популяции лимфоцитов под влиянием антигена F1 можно судить о наличии специфических клеток, способствующих дифференцировке В лимфоцитов в плазматические клетки.

В лимфоциты кроме синтеза антител способны также принимать участие в активации Т лимфоцитов, способствуя таким образом формированию клеточного ответа [30]. Для специфической активации Т лимфоцитов через TCR клеточный рецептор необходимо предоставление им антигена возбудителя антигенпрезентирующими клетками с участием главного комплекса гистосовместимости (МНС). Первоначальное взаимодействие Т-клеток с антиген-презентирующими клетками происходит путем неспецифического связывания через молекулы адгезии. Такое транзиторное адгезивное взаимодействие позволяет Т лимфоцитам контактировать с большим числом комплексов МНС-пептид, представленных на антиген-презентирующей клетке. При отсутствии специфического взаимодействия Т лимфоцита с комплексом МНС-пептид на поверхности антиген-презентирующей клетке связи распадаются. При наличии специфического взаимодействия Т лимфоцита с комплексом МНС-пептид на антиген-презентирующей клетке образовавшаяся пара может существовать длительное время. Однако для последующей пролиферации и дифференцировки Т лимфоцитов необходимы ко-стимулирующие молекулы. Наиболее эффективные ко-стимулирующие молекулы – члены суперсемейства иммуноглобулиновых молекул, включающие CD80 и CD86 рецепторы, которые взаимодействуют с CD28 или CTLA-4 рецепторами Т лимфоцитов [319]. В роли антиген-презентирующих клеток могут выступать В лимфоциты [65].

Наши эксперименты показали, что под влиянием F1 антигена происходило усиление экспрессии CD86, но не CD80 рецептора на поверхности В лимфоцитов.

В ряде работ [104, 188, 357] показано, что CD86 молекула имеет большую авидность к CD28 рецептору, взаимодействие с которым приводит к активации CD4+ T лимфоцитов. CD80 характеризуется большей авидностью к CTLA-4 молекуле, взаимодействие с которым приводит к снижению функциональной активности Т лимфоцитов. По всей видимости, под влиянием F1 антигена происходит активация не только В лимфоцитов, но и CD4+ T лимфоцитов за счет комплементарного взаимодействия CD86 рецептора, экспрессирующегося на В клетках, с CD28 рецептором экспрессирующемся на поверхности CD4+ T лимфоцитов.

Данные литературы также подтверждают, что F1 антиген индуцирует формирование не только гуморального иммунного ответа, но и клеточного, о чем свидетельствует выработка иммуноглобулинов подклассов G1 и G2a в ответ на иммунизацию экспериментальных животных антигеном F1 [368, 401].

Результаты проведенных нами исследований показали, что уровень экспрессии CD86 рецептора на поверхности В лимфоцитов в присутствии F1 антигена чумного микроба был более выраженным в группе доноров, иммунизированных живой чумной вакциной, по сравнению с В лимфоцитами, выделенными от невакцинированных людей. Вероятно, это отражает более выраженную активацию иммунокомптентных клеток вакцинированных против чумы доноров под влиянием F1 антигена.

Антитела, безусловно, являются показателем иммунитета против чумы.

Однако до сих пор не ясно, какому(им) из многочисленных антигенов чумного микроба принадлежит решающая роль в иммуногенезе [159, 160]. Протективные свойства известных на сегодняшний день специфических антител выражены относительно слабо, о чем свидетельствуют ряд неудачных попыток серопрофилактики и серотерапии чумы, а также отсутствие влияния циклофосфана на уровень приобретенного иммунитета у лабораторных и диких грызунов [58]. Имеются примеры, когда у вакцинированных против чумы людей даже при отсутствии антител к F1 антигену Y. pestis может формироваться напряженный клеточный иммунитет, которого достаточно для защиты от заражения чумой [86, 157]. Поэтому сложно однозначно ответить свидетельствует ли отсутствие увеличения титров антител в изученных сыворотках сотрудников о недостаточной напряженности специфического поствакцинального иммунитета к возбудителям чумы. По всей видимости, заключение о напряженности противочумного иммунитета у людей после иммунизации живой чумной вакциной не может быть сделано только на основании выявления антител к F1 антигену чумного микроба в сыворотке крови. Также нельзя полностью исключать возможность ложноположительных результатов.

Протективный иммунитет против чумы подразумевает наличие специфического гуморального и клеточного иммунитета. Ведущая роль клеточного ответа в формировании противочумного иммунитета подтверждается данными о создании адаптивного иммунитета к чуме при переносе лимфоидных клеток, проявлении иммунодепрессирующего эффекта антилимфоцитарных и антимоноцитарных сывороток у иммунизированных морских свинок и повышении в процессе иммуногенеза в крови числа Т хелперов и в меньшей степени Т супрессоров [8, 14].

В-клетки, продуцирующие специфические антитела, как правило – короткоживущие клетки. В лимфоциты памяти, живущие в течение длительного срока, как правило, локализуются в костном мозге, селезенке и периферических лимфатических узлах, что, безусловно, делает проблематичным их исследование у вакцинированных людей. В противоположность В-клеткам, СD4+ T-клетки памяти являются долгоживущими клетками и могут находиться в периферической крови вакцинированных людей в течение десятков лет. Как уже говорилось выше, на ранних этапах активации лимфоцитов на их поверхности усиливается экспрессия CD69 маркера. CD69 рецептор является одним из рецепторов, появляющихся на клетках памяти при их специфической активации [241, 276].

Мы оценили активацию Т лимфоцитов под влиянием антигенов чумного микроба. Полученные нами данные показали, что под влиянием антигена F1 происходило увеличение пула CD3+CD4+CD69+ и CD3+CD8+CD69+ клеток, полученных как от вакцинированных против чумы людей, так и от контрольных доноров. Антигены чумного микроба Pla или V не вызывали усиления экспрессии CD69 рецептора на поверхности Т хелперов или цитотоксических лимфоцитов, полученных от вакцинированных против чумы или контрольных доноров.

Бактерии Y. pestis обладают способностью супрессировать активацию Т лимфоцитов, индуцируюя апоптоз Т лимфоцитов, тем самым уменьшая количество клеток участвующих в активации врожденных реакций иммунной системы и формировании специфического иммунного ответа [55]. Мы не выявили влияния F1, Pla или V антигенов чумного микроба на жизнеспособность и апоптотическую активность лимфоцитов.

Одним из факторов защиты макроорганизма против внутриклеточных патогенов является активация клеточной цитотоксичности. Цитотоксической активностью обладают цитотоксические лимфоциты и натуральные киллеры.

Натуральные киллеры распознают клетки не экспрессирующие молекулы главного комплекса гистосовместимости I, либо проявляют антителозависимую цитотоксическую активность при взаимодействии своих Fc рецепторов с антителами, связавшимися с антигеном на поверхности клеток-мишеней [30].

Цитотоксические лимфоциты распознают специфические антигены, презентированные главным комплексом гистосовместимости I или II.

Активированные цитотоксические лимфоциты содержат многочисленные цитоплазматические гранулы, включая CD107a и CD107b. В процессе дегрануляции цитотоксические лимфоциты выбрасывают часть гранул на поверхность клетки [406].

Мы оценили влияние F1 или V антигенов Y. pestis на изменение экспрессии CD107b рецептора на поверхности цитотоксических лимфоцитов через 4 ч после начала активации клеток F1 антигеном. Достоверных изменений в содержании CD107b-позитивной субпопуляции лимфоцитов под влиянием антигенов чумного микроба не выявили.

После вакцинации против чумы в организме человека появляются лимфоциты, поддерживающие иммунологическую память. В отличие от зрелых Т лимфоцитов, несущих на своей поверхности рецепторы CD45RA высокомолекулярной формы, Т лимфоциты памяти экспрессируют низкомолекулярную форму CD45RO, тесно связанную с TCR, и усиливают экспрессию MHC II – молекул главного комплекса гистосовместимости II класса (HLA-DR) [186]. Активация CD45RO-позитивных клеток сопровождается появлением HLA-DR рецептора на поздних этапах активации клеток.

Ряд попыток оценивать противочумный клеточный иммунитет по анализу клеток памяти в крови вакцинированных доноров не привели к успеху, что связано с целым рядом факторов: с небольшим процентным содержанием клеток памяти в кровотоке, присутствием клеток памяти к другим инфекционным агентам, нестабильностью активационных молекул in vivo [30].

CD45RO+HLA-DR+ Мы проанализировали изменение количества Т лимфоцитов, полученных от вакцинированных против чумы людей и невакцинированных доноров, под влиянием антигенов чумного микроба. Анализ субпопуляций Т лимфоцитов показал, что маркер поздней активации HLA-DR, под влиянием F1 антигена Y. pestis появляется и на поверхности CD45RO+ CD45RO+ Т-хелперов и на поверхности цитотоксических лимфоцитов, полученных только от людей, иммунизированных живой чумной вакциной, но не от контрольных доноров.

Цитокины ИФН- и ФНО- обеспечивают неспецифическую активацию профессиональных фагоцитов и формирование продуктивных гранулем при чуме [2]. По данным ряда авторов антигены чумного микроба способны модулировать цитокиновую активность иммунокомпетентных клеток [272, 299, 347].

Мы сравнили изменение синтеза ИФН-, ИЛ-17 и ИЛ-4 лимфоцитами, полученными от контрольных и иммунных доноров, под влиянием F1 антигена чумного микроба. Результаты исследований показали, что достоверные различия между анализируемыми группами отсутствуют.

Таким образом, у первично вакцинируемых против чумы людей перед иммунизацией необходимо определять уровень антител к F1 антигену, чтобы исключить ложноположительные результаты. У постоянно прививающихся против чумы людей титры антител к F1 антигену Y. pestis могут быть низкими. Об уровне противочумного иммунитета можно судить по увеличению содержания CD19+СD138+ популяции лимфоцитов под влиянием антигена F1, свидетельствующее о наличии специфических клеток, способствующих дифференцировке В лимфоцитов в плазматические клетки.

О наличии противочумного клеточного иммунитета можно судить по увеличению количества CD45RO+HLA-DR+ Т лимфоцитов под влиянием F1 антигена чумного микроба.

Глава 7. ОЦЕНКА СПЕЦИФИЧЕСКОГО КЛЕТОЧНОГО

ИММУННОГО ОТВЕТА ПОСЛЕ ИММУНИЗАЦИИ ПРОТИВ

СИБИРСКОЙ ЯЗВЫ

Неблагополучная ситуация по сибирской язве на территории РФ определяется социально-экономическими условиями жизни населения, а также активацией почвенных очагов, хотя уровень заболеваемости не высок. Тем не менее, по профессиональным показаниям на эндемичных по сибирской язве территориях проводят иммунизацию против сибирской язвы.

Для выявления клеточного иммунитета против сибирской язвы используют кожную пробу с антраксином (in vivo). Однако взамен кожных проб лучше использовать тесты in vitro, чтобы исключить дополнительную антигенную нагрузку на организм. Альтернативные кожной пробе тесты in vitro не разработаны.

Постановка реакции с антраксином аналогична проведению реакции с тулярином для выявления противотуляремийного иммунитета. У людей при наличии противотуляремийного иммунитета интенсивность повреждения нейтрофильных лейкоцитов цельной крови под влиянием тулярина in vitro (реакция лейкоцитолиза) в присутствии специфических антител коррелирует с результатами постановки кожных проб [32].

Повреждение лейкоцитов может иметь различную степень выраженности, начиная от внутриклеточных дегенеративных изменений включая дегрануляцию, пикноз и фрагментацию ядер, и заканчивая полным лизисом клетки как в случае с тулярином [4].

Использование флуоресцирующих и люминесцентной микроскопии, особенно в сочетании с количественной оценкой интенсивности флуоресценции клеточных ядер и цитоплазмы характеризуется более высокой информативностью теста повреждения лейкоцитов [43].

Цель данной главы – оценить реакцию повреждения сенсибилизированных лейкоцитов под влиянием антраксина в условиях in vitro для оценки напряженности иммунитета после иммунизации коммерческой вакциной B. anthracis СТИ-1.

На модели мышей проводили оценку клеточного иммунитета с in vitro.

использованием антраксина в реакции Аналогично реакции лейкоцитолиза с тулярином оценивали уровень гибели клеток под влиянием антраксина между группами животных вакцинированных и невакцинированных против сибирской язвы. Планируя экспериментальные исследования, мы предполагали, что, как и в реакции лейкоцитолиза с тулярином, через 2 ч контакта лейкоцитов крови вакцинированных животных с антраксином будут появляться погибшие клетки.

Учет результатов реакции микроскопическим методом не показал в этот срок изменений относительно исходной концентрации лейкоцитов ни у вакцинированных, ни у интактных мышей (таблица 23).

Таблица 23 – Сравнительная оценка изменения количества лейкоцитов в крови у мышей линии BALB/c иммунизированных B. anthracis СТИ-1 и интактных животных в ответ на стимуляцию клеток антраксином in vitro Исследуемый материал Количество лейкоцитов в 1 мл Коэффициент

–  –  –

Для выявления повреждений клетки на уровне генетического аппарата мы провели сравнительную оценку изменения относительного содержания ДНК в лейкоцитах крови, выделенных от иммунизированных и интактных мышей, под влиянием антраксина in vitro. Для выявления механизма повреждения (апоптоз или некроз) лейкоцитов крови под влиянием антраксина оценивали одновременно содержание РНК и ДНК.

Типичная ДНК-гистограмма лейкоцитов крови интактных мышей отображена на рисунке 47.

А Б С Разная степень повреждения лейкоцитов крови, полученной от иммунизировнных B. anthracis СТИ-1 (Б) и интактных (С) мышей линии BALB/c в ответ нстимуляцию клеток антраксином in vitro. А – ДНК-гистограмма лейкоцитов без добавления антраксина.

–  –  –

Каждая из ДНК-гистограмм отражает распределение лейкоцитов по относительному содержанию ДНК на клетку (по клеточному циклу) в условных единицах (каналах от 0 до 512) интенсивности зеленой флуоресценции (по оси абсцисс).

По оси ординат – число клеток на единицу измерения (канал). На гистограмме, характерной для лейкоцитов крови интактных животных, видно фактическое отсутствие повреждающего эффекта антигена – подавляющее число клеток регистрируется в диплоидном пике с одинаковым (ровно 2С) содержанием ДНК. В крови мышей, иммунизированных B. anthracis СТИ-1, антраксин индуцировал появление окло 30 % поврежденных лейкоцитов, несущих менее 2С ДНК на клетку (в апоптозе). На гистограмме пик поврежденных клеток расположен слева от диплоидного пика.

В крови основная масса клеток находилась в покоящемся состоянии и детектировалась в «диплоидном» G1-пике (83,41±3,82). Величина гиподиплоидных лейкоцитов составила (9,16±2,51) % от общей популяции.

Инкубирование лейкоцитов в среде в течение 2 ч достоверно не изменяла (P 0,05) процентного соотношения гиподиплоидных ((14,04±4,35) %), диплоидных ((78±7,91) %) и пролиферирующих ((7,96±4,14) %) клеток.

Присутствие в среде с лейкоцитами, полученными от интактных животных, антраксина не влияло на изменение пролиферативной активности ((13,01±3,42) %) и повреждение генетического аппарата (количество гиподиплоидных клеток (16,22±1,77) %).

Под влиянием антраксина относительное содержание поврежденных лейкоцитов, несущих ДНК на стадии деградации (менее 2С ДНК на клетку), достоверно увеличивалось до (29,01±2,69) %, P 0,01 только в клеточной культуре, выделенной от иммунизированных B. anthracis СТИ-1, что наглядно демонстрирует ДНК гистограмма на рисунке 47 С.

Полученные результаты, свидетельствующие о повышении повреждающего эффекта антраксина на лейкоциты крови, полученной от иммунизированных B. anthracis СТИ-1животных согласуются с результатами других исследователей [1,44].

После выполнения физиологической функции, активированные лейкоциты (нейтрофилы) подвергаются гибели по типу апоптоза [27]. Различная интенсивность повреждения лейкоцитов антигеном косвенно свидетельствовала о различной степени функциональной активации лейкоцитов крови у интактных животных и у животных с приобретенным противосибиреязвенным иммунитетом.

Повышение функциональной активации лейкоцитов сопровождается усилением синтеза в них РНК. Данные цитофлуориметрии показали выраженное усиление синтеза РНК под влиянием антраксина только в культуре клеток, полученных от вакцинированных животных (рисунок 48).

А Б С Разная степень активации РНК лейкоцитов крови, полученной от иммунизированных B. anthracis СТИ-1 (Б) и интактных (С) мышей линии BALB/c в ответ на стимуляцию клеток антраксином in vitro. А – РНК-гистограмма лейкоцитов без добавления антраксина.

–  –  –

Гистограммы на рисунке 48 отражают распределение лейкоцитов по интенсивности красной флуоресценции цитоплазмы (по относительному содержанию РНК на клетку) в условных единицах от 0 до 512 (каналах). По оси ординат указано количество клеток на канал. РНК-гистограмма (Б) отражает низкий уровень содержания РНК в лейкоцитах крови интактных животных спустя 2 ч контакта клеток с антигеном, а также однородность лейкоцитарной популяции по количеству РНК. На РНК гистограмме (В) видно, что в популяции лейкоцитов животных иммунизированных B. anthracis СТИ-1 появляются активированные клетки, несущие повышенное содержание РНК на клетку.

Выраженное окрашивание клеточной цитоплазмы красителем акридиновым оранжевым отразило целостность лейкоцитарной цитоплазматической мембраны [125]. Это свидетельствовало о том, что антраксин индуцировал гибель (деградацию ДНК) лейкоцитов крови животных по типу апоптоза, а не по типу некроза.

Таким образом, через 2 ч инкубирования с антракисном клеток, полученных от иммунных мышей, не происходило лизиса лейокцитов. Исследования состояния ядерного хроматина и содержания азурофильных лизосомальных гранул, несущих активноть эластазы и миелопероксидазы, выявили, что у мышей иммунизированных B. anthracis СТИ-1 отмечалось специфическое увеличение гиподиплоидных клеток и активация РНК под влиянием антраксина.

Использование данного метода на лимфоцитах, полученных от вакцинированных против сибирской язвы доноров, позволил выявить положительные реакции не у всех людей. Попытка оценить клеточный иммунитет против сибирской язвы с использованием антраксина или протективного антигена по усилению экспрессии CD69 рецептора на поверхности Т лимфоцитов не показал достоверных различий между вакцинированными против сибирской язвы людей и неиммунными донорами. Уровень изменения экспрессии CD69 рецептора на поверхности Т лимфоцитов, синтеза РНК, количества гиподиплоидных клеток под влиянием антраксина или протективного антигена характеризовались индивидуальными различиями между донорами не зависимо от наличия специфического иммунитета.

Глава 8. ОЦЕНКА ИММУННОГО СТАТУСА ЛЮДЕЙ ПОСТОЯННО

ПРИВИВАЮЩИХСЯ ПРОТИВ ОСОБО ОПАСНЫХ ИНФЕКЦИЙ

Вакцинация обеспечивает формирование специфической защиты против инфекции/инфекций и является эффективным и доступным способом профилактики инфекционных заболеваний. Однако при периодических вакцинациях могут развиваться иммунодефицитные состояния. Поэтому необходимо проводить периодическую оценку иммунного статуса до проведения вакцинопрофилактики.

Цель данной главы состояла в проведении оценки иммунного статуса у лиц периодически подвергающихся вакцинации против туляремии, чумы и сибирской язвы.

В группу отбирали доноров, вакцинирующихся по профилактическим показаниям на протяжении 15-20 лет вакцинными препаратами F. tularensis 15 НИИЭГ, Y. pestis EV линии НИИЭГ, B. anthracis CТИ-1. Оценивали содержание субпопуляций Т и В лимфоцитов, цитотоксических лимфоцитов, Т хелперов, натуральных киллеров и концентрации иммуноглобулинов (А, G, E). Результаты исследований, приведенные в таблице 24, свидетельствуют об отсутствии отклонений от показателей контрольных доноров.

–  –  –

Таким образом, у людей, вакцинирующихся по профилактическим показаниям на протяжении 15-20 лет против туляремии, чумы и сибирской язвы отклонений от показателей иммунограммы контрольных доноров не выявлено.

ВЫВОДЫ

1. Усиление экспрессии CD69 рецептора на поверхности Т лимфоцитов, синтеза ИФН- и ИЛ-17 спленоцитами в ответ на реактивацию кислотонерастворимым комплексом, а также наличие антител к липополисахариду и кислото-нерастворимому комплексу F. tularensis коррелируют с наличием протективного иммунитета у мышей против подкожного заражения бактериями F. tularensis 503 (subsp. holarctica).

2. Для формирования протективного иммунитета у мышей против заражения более вирулентными (по сравнению с F. tularensis 503 subsp. holarctica) бактериями F. tularensis Schu (subsp. tularensis) необходимо участие не только специфических антител, ИФН-, ИЛ-17 и Т хелперов, но также активация цитотоксических лимфоцитов. В реакциях in vitro увеличение процентного содержания CD3+CD4+CD69+, CD3+CD8+CD69+ субпопуляций и усиление синтеза ИФН- и ИЛ-17 под влиянием тулярина и кислото-нерастворимого комплекса F. tularensis коррелируют с защитой мышей от заражения F. tularensis Schu.

3. На протяжении шести месяцев после иммунизации мышей F. tularensis 15 животные были полностью защищены от подкожного заражения бактериями F. tularensis 503, что коррелировало с наличием антител к липополисахариду и кислото-нерастворимому комплексу F. tularensis, усилением экспрессии CD69 рецептора на поверхности Т лимфоцитов, синтезом ИФН- и ИЛ-17 спленоцитами в ответ на активацию клеток кислото-нерастворимым комплексом. 100 % и 75 %защита животных от подкожного и аэрозольного заражения, соответственно, бактериями высоковирулентного штамма F. tularensis Schu была выявлена только на ранних сроках после иммунизации мышей F. tularensis 15 (30-е сутки) с последующим снижением протективного иммунитета. Снижение протективного иммунитета у мышей коррелировало с снижением активности синтеза ИФН-, ИЛ-17 и отсутствием увеличения CD3+CD8+CD69+ субпопуляции и пролиферативной активности лимфоцитов под влиянием кислото-нерастворимого комплекса in vitro.

4. В зависимости от степени воспаления, регистрируемого по уровню падения веса и изменению цитокиновой активности, у мышей наблюдается усиление (при низких дозах иммунизации) или подавление (при дозе 135 КОЕ/мышь) клеточных реакций in vitro на кислото-нерастворимый комплекс, а уровень гуморального ответа – усиливается по мере увеличения иммунизирующей дозы.

5. По изменению количества клеток, экспрессирующих CD69 рецептор на поверхности Т хелперов и HLA-DR маркер на поверхности СD3+СD4+СD45RO+ клеток, под влиянием тулярина можно судить о наличии противотуялермийного клеточного иммунитета у людей.

6. Усиление пролиферативной активности В лимфоцитов, синтеза ИЛ-17, количества CD3+CD4+ и CD3+CD8+ субпопуляций, экспрессирующих CD69 и CD154 рецепторы, в ответ на активацию спленоцитов in vitro F1 антигеном Y. pestis отражает наличие клеточного противочумного иммунитета. Антигены V, Pla и ультразвукового дезинтеграт Y. pestis не вызывают специфических изменений функциональной активности лимфоцитов, полученных от мышей, иммунизированных против чумы.

7. Активация Т лимфоцитов под влиянием тулярина или кислотонерастворимого комплекса у вакцинированных против туляремии доноров инициируется через CD28 и CD154 рецепторную молекулы. Лимфоциты неиммунных доноров активируюся без участия CD154, что свидетельствует о ингибировании Th1 иммунного ответа. В крови полученной от доноров, иммунизированных живой чумной вакциной, под влиянием F1 антигена на поверхности В лимфоцитов происходит усиление экспрессии CD86, что способствует активации Т лимфоцитов.

8. По увеличению экспрессии маркера поздней активации HLA-DR, под влиянием F1 антигена Y. pestis на поверхности CD45RO+ лимфоцитов можно судить о наличии противочумного клеточного иммунитета у людей.

9. Иммунный статус у людей постоянно вакцинирующихся против чумы, туляремии и сибирской язвы находится в пределах нормальных показателей.

10. Для выявления клеточного иммунитета против B. anthracis необходимо продолжить поиск маркеров.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

В ходе проведенных нами исследований предложен алгоритм оценки напряженности иммунитета к чуме и туляремии с учетом специфических клеточных реакций in vitro.

Моделирование туляремийной инфекции на мышах позволило выявить маркеры клеточной активации лимфоцитов, коррелирующие с напряженным иммунитетом против туляремии. В частности, усиление экспрессии CD69 рецептора на поверхности Т хелперов, увеличение синтеза ИФН- и ИЛ-17 спленоцитами в ответ на активацию клеток кислото-нерастворимым комплексом свидетельствует о наличии иммунной защиты у мышей против заражения F. tularensis 503 (subsp. holarctica). Важным дополнительным критерием для выявления протективного клеточного иммунитета против заражения штаммом Schu F. tularensis subsp. tularensis является оценка активации цитотоксических лимфоцитов под влиянием кислото-нерастворимого комплекса.

Использование мышиной биологической модели позволило экстраполировать и обосновать нам целесообразность применения методов оценки клеточного поствакцинального иммунитета на людях. Было показано, что у людей, иммунизированных против туляремии, специфически усиливается активированных лимфоцитов (CD3+CD4+CD69+ процентное содержание и CD3+CD8+CD69+) и активированных клеток памяти (CD3+CD4+CD45RО+HLADR+) под влиянием кислото-нерастворимого комплекса и тулярина в реакциях in vitro.

В процессе анализа активации Т лимфоцитов под влиянием тулярина или кислото-нерастворимого комплекса у невакцинированных и вакцинированных против туляремии доноров были выявлены разные пути активации клеток. Под влиянием тулярина или кислото-нерастворимого комплекса лимфоциты вакцинированных доноров активировались через CD28 и CD154 рецепторные молекулы. Лимфоциты неиммунных доноров активировались без участия CD154, что свидетельствовало об отсутствии активации Th1 иммунного ответа.

Моделирование чумной инфекции на мышах позволило выявить маркеры, коррелирующие с напряженностью поствакцинального иммунитета к чуме:

усиление экспрессии CD69 и CD154 рецепторов на поверхности Т хелперов и цитотоксических лимфоцитов и CD86 рецептора на поверхности CD22 лимфоцитов в ответ на стимуляцию in vitro F1 Y. pestis коррелировали с напряженностью поствакцинального иммунитета к чуме, индуцированного иммунизацией F1 или смесью F1 и V антигенов.

Попытка выявлять клеточный противочумный иммунитет у людей по появлению CD69 и CD154 рецепторов на поверхности лимфоцитов под влиянием F1 оказалась неудачной в связи с неспецифической активацией клеток у некоторых контрольных доноров. Специфические изменения под влиянием F1 антигена Y. pestis были выявлены в субпопуляции CD45RO+ Т хелперов CD45RO+ цитотоксических лимфоцитов, полученных от иммунизированных живой чумной вакциной доноров, на поверхности которых появлялся маркер поздней активации HLA-DR.

ПЕРЕЧЕНЬ СОКРАЩЕНИЙ, УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ, СИМВОЛОВ,

ЕДИНИЦ И ТЕРМИНОВ

ИИ – индекс иммунитета ИЛ – интерлейкин ИФА – иммуноферментный анализ ИФН- – интерферон гамма КНК – кислотонерастворимый комплекс F. tularensis КОЕ – колониеобразующая единица ЛПС – липополисахарид п.к. – подкожно РБТЛ – реакция бласттрансформации лимфоцитов УЗД – ультразвуковой дезинтеграт ФНО- – фактор некроза опухоли альфа CD – кластер дифференцировки F1 – Ф1 антиген Y. pestis HLA-DR – главный комплекс гистосоместимости LF – летальный фактор PA – протективный антиген Pla – активатор плазминогена Y. pestis Th1 – Т хелперы 1-го типа Th2 – Т хелперы 2-го типа TLRs – толл-подобные рецепторы V – Ви антиген Y. pestis

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Ада, Г. Вакцины, вакцинация и иммунный ответ / Г. Ада, А. Рамсей. – М.: Медицина, 2002. – 344 с.

2. Анисимов, А.П. Факторы Yersinia pestis, обеспечивающие циркуляцию и сохранение возбудителя чумы в экосистемах природных очагов // Молекулярная генетика. – 2002. – № 3. – С. 3-23.

Francisella

3. Аронова, Н.В. Липополисахарид бактерий рода как иммунодоминантные антигены и их фазовые вариации в условиях in vivo:

автореф. дис. … канд. биол. наук: 03.00.07/ Аронова Надежда Валентиновна. – Саратов, 2005. – 112 с.

4. Артюхов, В.Г. Апоптоз и некроз лимфоцитов, индуцированные ультрафиолетовым облучением в присутствии аутологичной плазмы / В.Г. Артюхов, О.В. Земченкова, О.В. Башарина, С.В. Рязанцев, М.В. Пашков // Цитология. – 2014. – № 56 (1). – Р. 77-83.

5. Балахонов, С.В., Первый случай выделения Yersinia pestis subsp. pestis в Алтайском горном природном очаге чумы. Сообщение 1. Микробиологическая характеристика, молекулярно-генетическая и масс-спектрометрическая идентификация изолята / С.В. Балахонов, М.В. Афанасьев, М.Ю. Шестопалов, А.С. Остяк, С.А. Витязева, В.М. Корзун, Д.Б. Вержуцкий, Е.П. Михайлов, А.И. Мищенко, А.В. Денисов, Н.И. Ивженко, Е.Н. Рождественский, Е.Н. Висков, Л.А. Фомина // Проблемы особо опасных инфекций. – 2013. – Вып. 2. – С. 5-11.

6. Бугоркова, С.А., Исторические и современные представления о проблеме специфической профилактики чумы / С.А. Бугоркова, З.Л. Девдариани, Т.Н. Щуковская, В.В. Кутырев // Проблемы особо опасных инфекций. – 2013. – № 3. – С. 63-69.

7. Бывалов, А.А. Иммунобиологические свойства антигенов Yersinia pestis (обзорная статья) / А.А. Бывалов, Ю.С. Оводов // Биоорганическая химия. – 2011.

– № 37 (4). – С. 452-463.

8. Васильева, Г.И. Роль взаимодействия Y. pestis с клетками системы мононуклеарных фагоцитов в реализации вакцинального и инфекционного процессов:

автореф. дис. д-ра мед. наук: 03.00.07 / Васильева Галина Ивановна.– Саратов, 1990. – 40 с.

9. Витязева, С.М. Изменения в иммунокомпетентных органах морских свинок, иммунизированных липополисахаридом Francisella tularensis / С.М. Витязева, К.М. Корытов, С.А. Татарников, В.Б. Николаев, В.В. Войткова, А.С. Сорокоумова, В.И. Дубровина, Т.П. Старовойтова // Бюллетень восточносибирского научного центра СО РАМН. – 2013. – № 6. – С. 127-131.

10. Дентовская, С.В. Молекулярные основы вакцинопрофилактики чумы / С.В. Дентовская, П.Х. Копылов, С.А. Иванов, С.А. Агеев, А.П. Анисимов // Молекулярная генетика, микробиология и вирусология. – 2013. – № 3. – С. 3-12.

11. Домарадский, И. В. Чума: К 100-летию противочумной службы России.

–М.: Медицина, 1998. – 176 с.

12. Емельянова, Н.В. Влияние антигенов и штаммов чумного микроба с экспрессией различных детерминант иммуногенности и вирулентности на уровень бласттрансформации лимфоцитов и активность интерлейкинов (1 и 2) при формировании иммунитета к чуме: автореф. дис. … канд. биол. наук: 14.00.36 / Емельянова Наталья Вячеславовна. – Саратов, 1993. – 175 с.

13. Зарецкая, Ю.М. Новые антигены тканевой совместимости человека (НLA-DR: теория, клиника, практика) / Ю.М. Зарецкая, В.Ю.Абрамов. – М.:

Медицина, 1986. – 176 с.

14. Исупов, И.В. Изучение влияния различных антигенов Yersinia pestis на клеточное звено иммунитета / И.В. Исупов, Л.С. Назарова, Л.П.Павлова // ЖМЭИ.

– 1990. –№ 9. – С. 85-89.

15. Караулов, А.В. Клиническая иммунология и аллергология. – М.: МИА, 2002. – 651 с.

16. Караулов, А.В. Клиническая иммунология. – М.: МИА, 1999. – 324 с.

17. Кетлинский, С.А. Th17 – новая линия дифференцировки Т хелперов:

обзор данных // Цитокины и воспаление. – 2009. – Т. 8, № 2. – С. 3-15.

18. Книрель, Ю.А. Липополисахарид чумного микроба Yersenia pestis:

структура, генетика, биологические свойства / Ю.А. Книрель, А.П. Анисимов // Acta Naturae. – 2012. – № 3 (4). – С. 49-60.

19. Ковальчук, Л.В. Клиническая иммунология и аллергология с основами общей иммунологии / Л.В. Ковальчук, Л.В. Ганковская, Р.Я. Мешкова.– М., 2011.

– 453 с.

20. Кологривова, И.В. Молекулярные аспекты функционирования T-хелперов 17-го типа / И.В. Кологривова, Е.Н. Кологривова, Т.Е. Суслова // Бюллетень сибирской медицины. – 2011. – № 4. – С 93-98.

21. Коробкова, Е.И. Живая противочумная вакцина. – М.: Медгиз, 1956. – 206 с.

22. Кравцов, А.Л. Секреторная дегрануляция нейтрофилов как триггер воспаления и регулятор иммунного ответа: роль сериновых лейкоцитарных протеаз и протеолитически активируемых рецепторов / А.Л. Кравцов, Т.П. Шмелькова // Эпидемиология и вакцинопрофилактика. – 2011. – № 1. – С. 79-85.

23. Кравцов, А.Л. Влияние противочумной вакцинации на функциональную активность клеток врожденного иммунитета человека / А.Л. Кравцов, Т.П.Шмелькова, Щуковская Т.Н. // Проблемы особо опасных инфекций. – 2011. – № 107. – С. 77-80.

24. Лебедев, К.А. Иммунология образраспознающих рецепторов / К.А. Лебедев, И.Д. Понякина. – М.: Книжный дом «Либроком», 2009. – 256 с.

25. Лившиц, Ю.И. Требования к качеству лабораторных животных и условиям их содержания. Руководство по вакцинному и сывороточному делу. – М: Медицина, 1978. – С. 24-36.

26. Литвинова, Л.С. Основные поверхностные маркеры функциональной активности Т-лимфоцитов / Л.С. Литвинова, А.А. Гуцол, Н.А. Сохоневич, К.А. Кофанова, О.Г. Хазиахматова, В.В. Шуплецова, Е.В. Кайгородова, А.Г. Гончаров // Медицинская иммунология. – 2014. – Т.16. – № 1. – С. 7-26.

27. Лушников, Е.Ф. Гибель клетки (апоптоз) / Е.Ф. Лушников, А.Ю. Абросимов. – М.: Медицина, 2001. – 192 с.

28. Малая медицинская энциклопедия: в 6 т. – М.: Медицинская энциклопедия, 1991-1996. – 3 т.

29. Медуницын, Н.В. Вакцинология. – 3-е изд., перераб. и доп. – М.: ТриадаХ, 2010. – 512 с.

30. Мейл, Д. Иммунология / Д. Мейл, Дж Бростофф, Д.Б. Рот, А. Ройт; пер. с англ. – М.: Литосфера, 2007. – 568с.

31. Мокриевич, А.Н. Выделение среднеазиатского подвида туляремийного микроба на территории Алтайского края / А.Н. Мокриевич, В.С. Тимофеев, Т.Ю. Кудрявцева, Г.И. Уланова, С.Б. Карбышева, Р.И. Миронова, Г.М. Вахрамеева, Т.И. Губарева, В.М. Павлов, И.А. Дятлов // Проблемы особо опасных инфекций. – 2013. – Вып. 1. – С. 66-69.

32. МУ 3.1.2007-05 Эпидемиологический надзор за туляремией.

Методические указания: утв. Главным государственным санитарным врачом РФ 09.09.2005 г.

33. Наумов, А.В. Иммунология чумы. Руководство / А.В. Наумов, М.Ю. Ледванов, И.Г. Дроздов. – Саратов, 1992. – 172 с.

34. Оноприенко, Н.Н. Сравнительная характеристика липополисахаридов бактерий рода Francisella: автореф. … канд. биол. наук: 03.00.07/ Оноприенко Наталья Николаевна. – Саратов, 2011. – 142 с.

35. Первая медицинская помощь. – М.: Большая Российская Энциклопедия, 1994.

36. Попов, Н.В. Эпизоотическая активность природных очагов чумы Российской Федерации в 2013 г. и прогноз на 2014 г. / Н.В. Попов, В.Е. Безсмертный, В.П. Топорков, А.Н. Матросов, Т.В. Князева, А.А. Кузнецов, В.П. Попов, Д.Б. Вержуцкий, В.М. Корзун, Е.В. Чипанин, В.М. Дубянский, О.В. Малецкая, М.П. Григорьев, С.В. Балахонов А.Н., Куличенко, В.В. Кутырев // Проблемы особо опасных инфекций. – 2014. – Вып. 2. – С. 13-19.

37. Ройт, А. Иммунология / А. Ройт, Дж. Бростофф, Д. Мейл. – М: Медицина, 2012. – 592 с.

38. Светоч, Т.Э. Структурно-функциональный и генетический анализ V антигена Yersinia pestis: дис. … канд. биол. наук: 03.02.03, 03.01.06 / Светоч Татьяна Эдуардовна. – Оболенск, 2011. – 106 с.

39. Сибиряк, С.В. Оценка апоптоза в иммунологических исследованиях.

Краткое методическое руководство / С.В. Сибиряк, С.В. Хайдуков, А.В. Зурочка, В.А. Черешнев. – Екатеринбург: УрО РАН, 2008. – 59 с.

40. Смолькова, Е.А. Влияние бактерий Yersinia pestis, Francisella tularensis и их антигенов на экспрессию тoll-подобных рецепторов (TLR2, TLR4) клетками врожденного и адаптивного иммунитета: автореф. дис. … канд. мед. наук:

03.02.03, 14.03.09 / СмольковаЕлена Анатольевна – Саратов, 2012. – 22 с.

41. Тараненко, Т.М. Углеводсодержащие антигены чумного и псевдотуберкулезного микробов: дис. … д-ра мед. наук: 03.00.07 / Тараненко Татьяна михаловна – Саратов, 1988. – 260 с.

42. Узенцов, С.А. Кожная реактивность к аллергенам чумного микроба у иммунных морских свинок при одновременной постановке нескольких кожных проб / С.А. Узенцов, Л.И. Кузнецова, А.Ф. Филиппов, P.A. Белобородов, Т.М. Тараненко // Проблемы особо опасных инфекций. –1973. – Вып. 4 (32). – С. 62-67.

43. Фрадкин, В.А. Аллергодиагностика in vitro. – М.: Медицина, 1975. – 142 с.

44. Фрадкин, В.А. Диагностика аллергии реакциями нейтрофилов крови. – М.: Медицина, 1985 – 176 с.

45. Хаитов, Р.М. Иммунология / Р.М. Хаитов, Г.А. Игнатьева, И.Г. Сидорович. – М.: Медицина, 2000. – 432 с.

46. Щуковская, Т.Н. Индуцированная продукция IFN- и IL-4 как показатель функциональной активности Th1- и Th2-клеток у вакцинированных против чумы людей / Т.Н. Щуковская, Е.А. Смолькова, Т.П. Шмелькова, С.Н. Клюева, С.А. Бугоркова // Эпидемиология и вакцинопрофилактика. – 2011. – Вып. 6 (61). – С. 78-83.

47. Abplanalp, A.L. TLR-dependent control of Francisella tularensis infection and host inflammatory responses / A.L. Abplanalp, I.R. Morris, B.K. Parida, J.M. Teale, M.T. Berton // PLoS ONE. – 2009. – N 4. – Р. e7920.

48. Adair, D.M. Diversity in a Variable-Number Tandem Repeat from Yersinia pestis / D.M. Adair, P.L. Worshan Orsham, K.K. Hill, A.M. Klevytska, P.J. Jackson, A.M. Frielander, P. Keim // J. of Clinical Microbology. – 2000. – P. 1516-1519.

49. Akira, S. Toll-like receptors: critical proteins linking innate and acquired immunity / S. Akira, K. Takeda, T. Kaisho // Nat. Immunol. – 2001. – N 2. – Р. 675-680.

50. Alari-Pahissa, E. Differential effect of CD69 targeting on bystander and antigen-specific T cell proliferation / E. Alari-Pahissa, J. Vega-Ramos, J.G. Zhang, A.R.

Castao, S.J. Turley, J.A. Villadangos, P. Lauzurica // J. Leukoc. Biol. – 2012. – N 92 (1). – Р. 145-158.

51. Alberts, B. T Cells and MHC Proteins / B. Alberts, A. Johnson, J. Lewis, M. Raff, K. Roberts, P. Walter. – 4th edition // Molecular Biology of the Cell. – New York: Garland Science. – 2002. – 120 р.

52. Alderson, M.R. CD40 expression by human monocytes: regulation by cytokines and activation of monocytes by the ligand for CD40 / M.R. Alderson, R.J.

Armitage, T.W. Tough, L. Strockbine, W.C. Fanslow, M.K. Spriggs // J. Exp. Med. – 1993. – N 178. – Р. 669-674.

53. Ali, R. B and T cell epitope mapping and study the humoral and cell mediatedimmune response to B-T constructs of YscF antigen of Yersinia pestis / R. Ali, S. Kumar, R.A. Naqvi, D.N. Rao // Comp. Immunol. Microbiol. Infect. Dis. – 2013. – N 36 (4). – Р. 365-78.



Pages:     | 1 |   ...   | 5 | 6 || 8 | 9 |   ...   | 10 |
 

Похожие работы:

«Якимова Татьяна Николаевна Эпидемиологический надзор за дифтерией в России в период регистрации единичных случаев заболевания 14.02.02 эпидемиология диссертация на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Научный руководитель: доктор...»

«Доронин Максим Игоревич ЭКСПРЕСС-МЕТОДЫ ВЫЯВЛЕНИЯ ВИРУСА ИНФЕКЦИОННОГО НЕКРОЗА ГЕМОПОЭТИЧЕСКОЙ ТКАНИ ЛОСОСЕВЫХ РЫБ 03.02.02 «Вирусология» Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: доктор биологических наук, Мудрак Наталья Станиславовна Владимир 2015 ОГЛАВЛЕНИЕ 1 ВВЕДЕНИЕ 2 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 2.1 Характеристика возбудителя инфекционного...»

«Вафула Арнольд Мамати РАЗРАБОТКА ЭЛЕМЕНТОВ ТЕХНОЛОГИИ ВЫРАЩИВАНИЯ ПАПАЙИ ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ ЗДОРОВОГО ПОСАДОЧНОГО МАТЕРИАЛА И ЭКСТРАКТОВ С БИОПЕСТИЦИДНЫМИ СВОЙСТВАМИ ДЛЯ ЗАЩИТЫ ЕЕ ОТ ВРЕДНЫХ ОРГАНИЗМОВ Специальности: 06.01.07 – защита растений 06.01.01 – общее земледелие и растениеводство Диссертация на соискание ученой степени кандидата сельскохозяйственных...»

«ПОДОЛЬНИКОВА ЮЛИЯ АЛЕКСАНДРОВНА ОСОБЕННОСТИ СВОБОДНОРАДИКАЛЬНОГО СТАТУСА МОЛОКА КОРОВ УРБАНИЗИРОВАННОЙ ТЕРРИТОРИИ (НА ПРИМЕРЕ ОМСКОЙ ОБЛАСТИ) Специальность: 03.02.08 – экология ДИССЕРТАЦИЯ на соискание степени кандидата биологических наук Научный руководитель: Заслуженный работник высшей школы РФ доктор...»

«Ульянова Онега Владимировна МЕТОДОЛОГИЯ ПОВЫШЕНИЯ БЕЗОПАСНОСТИ БАКТЕРИАЛЬНЫХ ВАКЦИН НА МОДЕЛИ ВАКЦИННЫХ ШТАММОВ BRUCELLA ABORTUS 19 BA, FRANCISELLA TULARENSIS 15 НИИЭГ, YERSINIA PESTIS EV НИИЭГ 03.02.03 – микробиология Диссертация на соискание ученой степени доктора биологических наук Научный консультант:...»

«Головань Екатерина Викторовна Ресурсы декоративных растений для озеленения внутриквартальных территорий (на примере г. Владивостока) 03.02.14 – биологические ресурсы Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: д.б.н., доцент О.В. Храпко Владивосток — Оглавление Введение Глава 1. Современные подходы...»

«Шумилова Анна Алексеевна ПОТЕНЦИАЛ БИОРАЗРУШАЕМЫХ ПОЛИГИДРОКСИАЛКАНОАТОВ В КАЧЕСТВЕ КОСТНОПЛАСТИЧЕСКИХ МАТЕРИАЛОВ Специальность 03.01.06 – биотехнология (в том числе бионанотехнологии) ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: доктор биологических наук Шишацкая Екатерина Игоревна Красноярск...»

«МИГИНА ЕЛЕНА ИВАНОВНА ФАРМАКОТОКСИКОЛОГИЯ И ЭФФЕКТИВНОСТЬ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ КОРМОВОЙ ДОБАВКИ ТРИЛАКТОСОРБ В МЯСНОМ ПЕРЕПЕЛОВОДСТВЕ 06.02.03 – ветеринарная фармакология с токсикологией Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: доктор биологических наук, профессор Кощаев Андрей...»

«Кириллин Егор Владимирович ЭКОЛОГИЯ ОВЦЕБЫКА (OVIBOS MOSCHATUS ZIMMERMANN, 1780) В ТУНДРОВОЙ ЗОНЕ ЯКУТИИ 03.02.08 – экология Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: д. б. н., профессор Мордосов И. И. Якутск – 2015 Содержание Введение.. Глава 1. Краткая физико-географическая...»

«Будилова Елена Вениаминовна Эволюция жизненного цикла человека: анализ глобальных данных и моделирование 03.02.08 – Экология Диссертация на соискание ученой степени доктора биологических наук Научный консультант доктор биологических наук, профессор А.Т. Терехин Москва 2015 Посвящается моим родителям, детям и мужу с любовью. Содержание Введение.. 5 1. Теория эволюции жизненного цикла. 19...»

«Артеменков Алексей Александрович КОНЦЕПЦИЯ ОПТИМИЗАЦИИ ФУНКЦИОНАЛЬНОГО СОСТОЯНИЯ И ПОВЫШЕНИЯ АДАПТАЦИОННЫХ ВОЗМОЖНОСТЕЙ ЧЕЛОВЕКА 03.03.01 – Физиология Диссертация на соискание ученой степени доктора биологических наук Научный консультант: доктор биологических наук, профессор Брук...»

«АСБАГАНОВ Сергей Валентинович БИОЛОГИЧЕСКИЕ ОСНОВЫ ИНТРОДУКЦИИ РЯБИНЫ (SORBUS L.) В ЗАПАДНОЙ СИБИРИ 03.02.01 – «Ботаника» ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: к.б.н., с.н.с. А.Б. Горбунов Новосибирск 2014 ОГЛАВЛЕНИЕ ВВЕДЕНИЕ.. 4 Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.. 8 Ботаническая...»

«ФЕДОРОВА Екатерина Алексеевна ХАРАКТЕРИСТИКИ ВИРУСА ГРИППА, ВЛИЯЮЩИЕ НА ПОКАЗАТЕЛИ ГУМОРАЛЬНОГО ИММУННОГО ОТВЕТА В ЭКСПЕРИМЕНТЕ И ПРИ ВАКЦИНАЦИИ 03.02.02 – вирусология ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: Доктор биологических наук, доцент И.В. КИСЕЛЕВА Санкт-Петербург – ОГЛАВЛЕНИЕ Раздел 1....»

«БОЛОТОВ ВЛАДИМИР ПЕТРОВИЧ ОЦЕНКА СОДЕРЖАНИЯ И МИГРАЦИЯ ТЯЖЕЛЫХ МЕТАЛЛОВ В ЭКОСИСТЕМАХ ВОЛГОГРАДСКОГО ВОДОХРАНИЛИЩА Специальность: 03.02.08. Экология Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: доктор биологических наук,...»

«СИДОРОВА ТАТЬЯНА АЛЕКСАНДРОВНА ОСОБЕННОСТИ АДАПТИВНЫХ РЕАКЦИЙ У ДЕВУШЕК К УСЛОВИЯМ ГОРОДСКОЙ СРЕДЫ 03.02.08 Экология Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: доктор биологических наук, доцент Драгич О.А. Омск-2015 СОДЕРЖАНИЕ Введение.. Глава 1 Обзор литературы.. 1.1. Механизмы адаптации организма человека к окружающей среде 1.2. Закономерности развития...»

«Иртегова Елена Юрьевна РОЛЬ ДИСФУНКЦИИ СОСУДИСТОГО ЭНДОТЕЛИЯ И РЕГИОНАРНОГО ГЛАЗНОГО КРОВОТОКА В РАЗВИТИИ ГЛАУКОМНОЙ ОПТИЧЕСКОЙ НЕЙРОПАТИИ 14.01.07 – глазные болезни ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Научный руководитель: доктор медицинских наук, профессор...»

«БРИТАНОВ Николай Григорьевич ГИГИЕНИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ ПЕРЕПРОФИЛИРОВАНИЯ ИЛИ ЛИКВИДАЦИИ ОБЪЕКТОВ ПО ХРАНЕНИЮ И УНИЧТОЖЕНИЮ ХИМИЧЕСКОГО ОРУЖИЯ 14.02.01 Гигиена Диссертация на соискание ученой степени доктора медицинских наук Научный консультант: доктор медицинских наук, профессор...»

«Храмцов Павел Викторович ИММУНОДИАГНОСТИЧЕСКАЯ СИСТЕМА ДЛЯ ОЦЕНКИ НАПРЯЖЕННОСТИ ПОСТВАКЦИНАЛЬНОГО ИММУНИТЕТА К КОКЛЮШУ, ДИФТЕРИИ И СТОЛБНЯКУ 14.03.09 – Клиническая иммунология, аллергология Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: доктор биологических наук, Раев Михаил Борисович...»

«Кузнецова Наталья Владимировна СОВРЕМЕННОЕ ГИДРОБИОЛОГИЧЕСКОЕ СОСТОЯНИЕ РЕКИ ЯХРОМА КАК МОДЕЛЬНОЙ МАЛОЙ РЕКИ ПОДМОСКОВЬЯ 03.02.10 – гидробиология Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук...»

«ПОРЫВАЕВА Антонина Павловна ТЕОРЕТИЧЕСКИЕ И ПРАКТИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ МОДЕЛИРОВАНИЯ ХРОНИЧЕСКОЙ ГЕРПЕСВИРУСНОЙ ИНФЕКЦИИ 03.02.02 Вирусология ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени доктора биологических наук Научный консультант: доктор медицинских наук, профессор Глинских Нина Поликарповна Екатеринбург 2015 ОГЛАВЛЕНИЕ 1 ВВЕДЕНИЕ 2 ОСНОВНАЯ ЧАСТЬ 2.1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ...»







 
2016 www.konf.x-pdf.ru - «Бесплатная электронная библиотека - Авторефераты, диссертации, конференции»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.