WWW.KONF.X-PDF.RU
БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА - Авторефераты, диссертации, конференции
 


Pages:     | 1 | 2 || 4 | 5 |

«Анохина Елена Николаевна ПОЛИМОРФИЗМЫ ГЕНОВ ПРО- И ПРОТИВОВОСПАЛИТЕЛЬНЫХ ЦИТОКИНОВ, МУТАЦИИ ГЕНОВ BRCA1/2 ПРИ ЗЛОКАЧЕСТВЕННЫХ НОВООБРАЗОВАНИЯХ ОРГАНОВ ЖЕНСКОЙ РЕПРОДУКТИВНОЙ СИСТЕМЫ ...»

-- [ Страница 3 ] --

Me- медиана; t- критерий Стьюдента для: 1- уровня дифференцировки аденокарциномы; 2вовлеченности регионарных лимфатических узлов; * р0,05 Достоверное повышение спонтанной продукции IL-2 PBMC отмечено при низкодифференцированной аденокарциноме (t=2.30; р0.05). Вовлеченность лимфатических узлов в опухолевый процесс не оказывает влияния на содержание IL-2 в исследованных образцах биоматериалов (табл. 37).

IL-4 Патогенетическая роль цитокинов в неопластических процессах обусловлена преимущественно их гипо- или гиперпродукцией, которая зависит от полиморфных вариантов промоторных регионов, регулирующих уровни экспрессии мРНК генов и синтез белкового продукта [Gooch et al.

, 1998; Nagai et al., 2000]. Влияние SNP гена IL-4 на сывороточные концентрации, уровни спонтанной и стимулированной in vitro ФГА продукции медиатора практически не исследовано (HuGEN, Pubmed), но может иметь важное значение в процессах канцерогенеза, т.к. IL-4 регулирует экспрессию молекул МНС и состояние протвоопухолевого иммунитета [Morga, 1996; Zhong, 1996].

Поэтому нами исследовано содержание противовоспалительного IL-4 в биологических средах (сыворотке, культуральной среде PBMC) доноров и больных в общих группах (табл. 38), а также изменение его концентрации в зависимости от степени дифференцировки аденокарциномы и вовлеченности регионарных лимфатических узлов в опухолевый процесс (табл. 39).

Таблица 38. Уровни IL-4 в сыворотках, культуральной среде PBMC доноров и больных со ЗНО

–  –  –

Согласно данным, представленным в таблице 38, концентрации IL-4 в нативной сыворотке доноров и онкологических больных не превышают физиологических значений (Me = 63,5-78,5) и достоверно не отличаются.

Интактные и стимулированные ФГА PBMC в норме и при онкопатологии секретируют невысокие уровни противовоспалительного IL-4.

Таблица 39. Продукция IL-4 PBMC больных в зависимости от степени дифференцировки аденокарциномы и метастазирования в регионарные лимфатические узлы

–  –  –

Сыворотка крови 80,5±10,6 64,5 132,9±38,1 81,9 1,16 108,4±26,7 82,2 113,0±40,7 65,4 0,09 Культура ннтактных PBMC 90,9±13,6 75,8 74,9±7,6 68,4 1,09 87,4±10,7 79,6 74,3±9,3 66,8 0,89 (спонтанная продукция) Культура стимулированных 65,8±4,5 65,9 72,8±9,0 58,9 0,62 68,1±4,7 66,1 72,2±11,6 58,6 0,36 PBMC+ФГА Примечания: М – средняя арифметическая; m – стандартная ошибка среднего;

Me- медиана; t- критерий Стьюдента для: 1- уровня дифференцировки аденокарциномы; 2вовлеченности регионарных лимфатических узлов У больных с низкодифференцированной аденокарциномой молочной железы, тела и шейки матки сывороточные концентрации, уровни спонтанной и стимулированной продукции IL-4 достоверно не различаются. Аналогичные закономерности отмечены и при метастазировании неоплазий в регионарные лимфатические узлы (табл. 39).

Таким образом, у здоровых и больных женщин со злокачественными новообразованиями органов репродуктивной системы не выявлено различий в сывороточных уровнях, спонтанной и стимулированной in vitro продукции PBMC основного противовоспалительного Это подтверждается данными, IL-4.

полученными в исследованиях Тугуз А.Р. (2002) на онкологических больных со злокачественными новообразованиями разных локализаций.

3.4 Влияние генотипов и гаплотипов промоторных регионов генов цитокинов на продукцию медиаторов.

Продукция IL-17А в зависимости от G197A полиморфизмов.

Продукция медиаторов иммунной системы обусловлена SNP, расположенными в промоторных регионах соответствующих генов. Влияние G197A (rs2275913) полиморфизмов на продукцию IL-17А PBMC в норме и при онкопатологии в международных базах данных не представлены (HuGEN, Pubmed). Роль SNP rs2275913 в развитии злокачественных новообразований женских репродуктивных органов посредством влияния на уровни спонтанной и стимулированной in vitro ФГА продукции IL-17А PBMC 20 больных с гистологически верифицированными диагнозами РМЖ (n=17), РТМ (n=3) и доноров (n=17) исследована нами в зависимости от носительства G197G, G197A, А197А генотипов (табл. 40).

Таблица 40. Уровни продукции IL-17А PBMC больных и доноров в зависимости от генотипа

–  –  –

Примечания: М – средняя арифметическая; m – стандартная ошибка среднего; Me- медиана;

t1- критерий Стьюдента для больных и t2 – для доноров между: a-GG/GA; b-GG/AA; c-GA/AA; t3критерий Стьюдента в сравнении уровней цитокинов в зависимости от генотипов: g-GG; h-GA;

* р0,05 В обследованной группе доноров не типированы A197A генотипы IL-17А, поэтому продукция основного провоспалительного цитокина IL-17А исследована в культуре среде мононуклеарных клеток периферической крови с G197G и G197A вариантами генотипов. Как следует из данных, представленных в таблице 40, уровни спонтанной и стимулированной in vitro ФГА продукции IL-17А PBMC доноров не зависят от сочетания аллельных вариантов. Интактные и инкубированные с ФГА PBMC G197G генотипов онкологических больных по сравнению с донорами in vitro не секретируют IL-17А (табл. 40).

Таким образом, нами впервые экспериментально установлено, что G197A полиморфизмы (rs2275913) промоторного региона гена IL-17 не влияют на продукцию триггерного воспалительного медиатора в культуре PBMC.

Влияние 1082G/A, 819C/T, 592C/A SNP на продукцию гена IL-10

Патогенетическая роль SNP G1082A (rs1800896), C819Т (rs1800871) и C592A (rs1800872) и соответствующих генотипов в развитии злокачественных новообразований женских репродуктивных органов посредством влияния на уровни спонтанной и стимулированной in vitro ФГА продукции IL-10 PBMC онкологических больных в мировых популяциях практически не исследована (HuGEN, Pubmed), поэтому нами впервые экспериментально проанализирована зависимость концентраций IL-10 в культуральной среде мононуклеарных клеток периферической крови от вариантов генотипов промоторного региона гена медиатора в норме и при неоплазиях (табл. 41).

Обобщая данные по трем исследованным полиморфизмам гена IL-10 можно предположить их опосредованную роль в канцерогенезе, т.к. у больных и доноров одни и те же генотипы действуют разнонаправлено на продукцию противовоспалительного цитокина в культуре PBMC.

Таблица 41. Уровни спонтанной и стимулированной продукции IL-10 PBMC онкологических больных и доноров в зависимости от вариантов генотипа

–  –  –

Примечания: М – средняя арифметическая; m – стандартная ошибка среднего; Me- медиана;

t1- критерий Стьюдента для больных и t2 – для доноров между генотипами: a- GG/GA; b- GG/AA; cGA/AA; n- CC/CT; p- CC/TT; r- CT/TT; o- CC/CA; q- CC/AA; u- CA-AA;

t3-критерий Стьюдента в сравнении уровней цитокинов в зависимости от генотипов: g- GG; h- GA; iAA; d- TT; s- CC; w- CT; x- CC; y- CA; * р0,05 Мутантный гомозиготный А1082А генотип IL-10 у здоровых женщин ассоциирован с достоверно повышенной, а G аллель в гомо- и гетерозиготном состоянии (G1082G, G1082А) - со сниженной спонтанной продукцией IL-10. У онкологических больных в отличие от доноров А1082А генотип подавляет, а GA, GG генотипы повышают способность интактных PBMC продуцировать следовые количества IL-10 и отвечать на стимулирующее воздействие поликлонального активатора ФГА (табл. 41).

С819Т SNP гена IL-10 влияют преимущественно на стимулированную продукцию медиатора. Несмотря на низкие общие уровни спонтанной продукции IL-10 PBMC доноров, у лиц с гетерозиготным С819Т генотипом по сравнению гомозиготным мутантным С819С, статистически значимо повышена продукция IL-10. Таким образом, «мутантный» 819Т полиморфизм в гетерозиготном состоянии у доноров повышает продукцию IL-10. Между донорами и больныминосителями определенных генотипов 819 сайта выявлены достоверные различия также по стимулированной ФГА продукции этого in vitro противовоспалительного интерлейкина: С819Т генотип у доноров в отличие от больных ассоциирован с повышенной секрецией IL-10. PBMC доноров, но не больных, независимо от генотипа повышают стимулированную in vitro ФГА продукцию IL-10 (табл. 41).

С592А SNP IL-10 сходны с G1082A аллелями по своему действию на продукцию медиатора PBMC (табл. 41). У больных и доноров С592А полиморфизмы гена не влияют на сывороточные концентрации IL-10 противовоспалительного медиатора. Интактные и инкубированные с ФГА PBMC доноров по сравнению с PBMC онкологических больных продуцируют достоверно более высокие уровни IL-10, которые в свою очередь определяются генотипом.

Наиболее низкие концентрации IL-10 детектированы в культуральной среде интактных и инкубированных с ФГА PBMC доноров с гомозиготным «мутантным» генотипом; носительство «нормального» С592 аллельного варианта в гетерозиготном (С592А) и в гомозиготном (С592С) состоянии сопряжено с более высокой спонтанной продукцией IL-10. Низкие уровни IL-10 в культуральной среде PBMC больных со ЗНО женских репродуктивных органов не зависят от генотипов.

Влияние гаплотипов гена IL-10 (592, 819, 1082) на продукцию цитокина

Сочетанное влияние полиморфизмов трех сайтов (1082, 819, 592) промоторного региона – гаплотипов гена IL-10 на способность PBMC секретировать противовоспалительный цитокин практически не исследовано.

Уровни IL-10 в образцах нативных сывороток, супернатантов интактных и стимулированных ФГА PBMC доноров и больных проанализированы в зависимости от 8 типированных гаплотипов (табл. 42-43).

Таблица 42. Концентрации IL-10 в сыворотках, культуральной среде PBMC у доноров в зависимости от гаплотипов

–  –  –

Примечания: М – средняя арифметическая; m – стандартная ошибка среднего; Me- медиана;

t- критерий Стьюдента при сравнении концентраций цитокинов: 1- сывороточных значений и интактных PBMC, 2- сывороточных значений и стимулированных PBMC, 3- интактных и стимулированных PBMC.

У доноров в зависимости от исследованных гаплотипов не установлено достоверных различий по сывороточным концентрациям IL-10 (M±m = 3,2-42,6).

Интактные PBMC доноров – носителей пяти из 8 гаплотипов продуцируют достоверно (р0,05) более высокие уровни медиатора (Me = 42,9-60,1). PBMC доноров с GCA, GTA, ACA гаплотипами с общей для трех вариантов А592 аллелью синтезируют значительно меньшие количества IL-10. Присутствие этой аллели в гаплотипе не сказывается на уровне секреции A1082T819A592 противовоспалительного цитокина. Продукция IL-10 при стимуляции ФГА повышается у PBMC доноров с GCC гаплотипом.

–  –  –

Примечания: М – средняя арифметическая; m – стандартная ошибка среднего; Me- медиана;

t- критерий Стьюдента при сравнении концентраций цитокинов: 1- сывороточных значений и интактных PBMC, 2- сывороточных значений и стимулированных PBMC, 3- интактных и стимулированных PBMC.

Следовые концентрации IL-10 в образцах сывороток, культуральной среде интактных и стимулированных ФГА PBMC онкологических больных не зависят от гаплотипов, варьируют в узком диапазоне значений (0,06-5,5 pg/ml), не превышающих чувствительность метода ИФА (табл. 43).

В образцах биоматериалов доноров и больных с исследованными вариантами гаплотипов достоверные различия обнаружены только по спонтанной и стимулированной продукции IL-10. Интактные и индуцированные ФГА PBMC доноров по сравнению с PBMC больных-носителей исследованных гаплотипов (кроме GCA и АСА) секретируют более высокие концентрации IL-10 (табл. 44).

Таблица 44. Концентрации IL-10 в сыворотках, культуральной среде PBMC онкологических больных и доноров в зависимости от гаплотипов

–  –  –

GCA 4,45±0,9 4,15 3,9±0,9 4,0 0,45 2,9±1,0 1,19 17,5±6,4 11,8 2,26 1,6±0,5 2,26 37,2±17 14,5 2,18 GCC 5,5±1,4 3,9 3,9±0,7 3,32 0,69 2,6±0,8 1,07 42,7±13 37,1 4,84 2,9±1,5 0,44 156±44 150, 5,66 GTA 3,9±1,0 3,9 4,6±1,4 4,5 0,45 3,4±1,3 4,8 24,8±7,4 19,5 3,05 1,9±0,5 2,3 65,9±23 50,1 3,12 ACA 5,2±1,1 5,4 3,6±1,5 4,0 0,19 2,5±1,3 1,13 27,9±11 19,5 2,89 1,5±0,6 1,38 50,7±32 23,5 1,95 ATC 5,5±1,9 4,78 28,6±14 8,5 0,93 2,7±2,6 0,06 66,6±13 60,1 2,79 1,6±0,8 2,26 97,5±18 124, 2,89 GTC 4,9±1,1 4,15 5,1±1,1 4,5 0,19 2,8±1,8 0,06 44,0±13 41,0 3,16 1,5±0,6 2,26 130±36 135, 3,53 Примечания: М – средняя арифметическая; m – стандартная ошибка среднего; Me- медиана;

t – коэффициент достоверности между больными и донорами для: 1- сывороточных значений, 2- интактных PBMC, 3- стимулированных PBMC Отсутствие каких-либо достоверных различий в продукции противовоспалительного IL-10 PBMC больных в зависимости от вариантов гаплотипов может быть обусловлено влиянием других SNP, что требует дальнейшего исследования или секвенирования гена IL-10.

Таким образом, отдельные полиморфные варианты трех сайтов промоторного региона гена IL-10 (1082, 819, 592) в норме оказывают более значимый эффект на экспрессию гена и секрецию белкового продукта, чем исследованные варианты гаплотипов. Это вероятнее всего подтверждает отсутствие взаимного влияния G1082A, C819T, С592А SNP гена IL-10 на продукцию медиатора. Следует отметить, что и при онкопатологии исследованные полиморфизмы и гаплогруппы не регулируют секрецию IL-10 PBMC.

Продукция IL-2 в зависимости от T330G генотипов промоторного региона гена Влияние T330G полиморфизмов гена IL-2 на продукцию медиатора при злокачественных новообразованиях органов женской репродуктивной сферы ранее не исследовано, поэтому в соответствии с поставленными задачами нами проанализировано содержание IL-2 в образцах сыворотки, культуральной среде интактных и стимулированных ФГА PBMC больных и доноров в зависимости от генотипов IL-2 (табл. 45).

Таблица 45. Влияние генотипов на уровни спонтанной и стимулированной продукции IL-2 PBMC

–  –  –

Примечания: М – средняя арифметическая; m – стандартная ошибка среднего; Me- медиана;

t1- критерий Стьюдента для больных и t2 – для доноров между: a-TT/TG; b-TT/GG; c-TG/GG; t3критерий Стьюдента в сравнении уровней цитокинов в зависимости от генотипов: d-TT генотипам; e TG генотипам; f- GG генотипам; * р0,05 Согласно экспериментальным данным, интактные и стимулированные PBMC доноров по сравнению с больными продуцируют достоверно более высокие концентрации медиатора, не зависящие от генотипа. Таким образом, Т330Т, Т330G и G330G генотипы промоторного региона IL-2 не влияют на уровни спонтанной и стимулированной ФГА продукции in vitro как у доноров, так и у онкологических больных.

Влияние C589Т полиморфизмов гена на спонтанную и стимулированную продукцию IL-4 Продукция основного противовоспалительного медиатора в зависимости от SNP гена IL-4 в норме и при онкопатологии органов женской репродуктивной системы не была исследована ранее. В работах Тугуз А.Р. (2002), Lyon D. (2008), Алимходжаевой Л.Т. (2009) представлены малоинформативные данные о сывороточных концентрациях IL-4, однако исследование способности PBMC продуцировать in vitro один из важнейших противовоспалительных цитокинов, обуславливающих экспрессию молекул MHC II, важно для понимания механизмов реализации противоопухолевого иммунитета. С этой целью проанализировано влияние SNP (rs2243250) промоторного региона гена IL-4 на уровни спонтанной и стимулированной ФГА продукции медиатора интактными PBMC доноров и онкологических больных РМЖ, РТМ, РШМ, РЯ (табл. 46).

–  –  –

Концентрации IL-4 в образцах сывороток, культурах PBMC онкологических больных не различаются и не зависят от исследуемых генотипов. Интактные PBMC доноров-носителей 589Т аллели в гетерозиготном состоянии (С589Тгенотип) продуцируют IL-4 в меньшей степени, чем PBMC доноров с гомозиготным «нормальным» и «мутантным» генотипами (табл. 46).

Обсуждение результатов Неоплазии женских репродуктивных органов имеют самые высокие показатели заболеваемости и смертности в большинстве стран мира, что связано с отсутствием надежных маркеров и скрининговых программ, позволяющих выявить злокачественные новообразования на ранних стадиях.

ЗНО относятся к мультифакториальным заболеваниям с неясным этиологическим генезом, но выраженной наследственной предрасположенностью, связанной с генетическим аппаратом половых или соматических клеток. Из идентифицированных генов и генных мутаций, вовлеченных в канцерогенез, наиболее исследованы мутации в генах-супрессорах опухолевого роста BRCA1/2, нормальная функция которых связана с поддержанием стабильности генетического аппарата клеток, репарации ДНК, обеспечивающей целостность генома [Miki et al., 1994; Wooster et al., 1995; Wang et al., 2000; Карпухин и др., 2002; Любченко и др., 2007; Kadouri et al., 2007].

Следует отметить, что мутации генов BRCA1/2, в мировых популяциях распределены с разной частотой и информативны в качестве ранних маркеров злокачественных новообразований молочной железы, яичников, тела и шейки матки, а также других органов только для некоторых этнических групп: евреекАшкенази, жительниц таких европейских стран как Польша, Дания [Levy-Lahad et al., 1997; Phelan et al., 2002; Osorio et al., 2002; Gorski et al., 2004; Pohlreich et al., 2005; Vinodkumar et al., 2007; Soumittra et al., 2009; Порханова, 2009; Любченко, 2009; Negura et al., 2010; El-said El-Debaky et al., 2011; Лобейко, 2012].

Для жителей РА данных по распределению мутаций BRCA1/2, их возможной ассоциации с онкопатологией и, в частности с ЗНО органов репродуктивной системы нет, поэтому нами проведен скрининг восьми наиболее известных полиморфных вариантов генов BRCA1/2 у больных с гистологически верифицированными диагнозами РМЖ, РЯ, РТМ, РШМ в сравнении со здоровыми женщинами. Экспериментально только у одной (1,8%) из 56 обследованных женщин с онкопатологией нами выявлена 5382insC – вторая по распространенности в мире мутация гена BRCA1. Это подтверждает мнения многих исследователей о низкой диагностической и прогностической значимости мутаций генов BRCA1/2 в развитии злокачественных новообразований женских репродуктивных органов. Более того, эти мутации вовлечены в патогенез не только неоплазий женских репродуктивных органов, но и ЗНО желудочнокишечного тракта, предстательной железы, мочевого пузыря, желчевыводящих путей и др. [Mai et al., 2009; Gallagher et al., 2010; Manguoglu et al., 2010; Slater et al., 2010; Hughes et al., 2012; Iqbal et al., 2012; Lucas et al., 2014].

Низкий процент выявляемости 5382insC у жительниц РА сравним с населением Испании (0%), Дании (0,8%), Германии (1,1%), Ирана (0%), Чили (0%) и других стран Европы, возможно вследствие неоднородности этнических популяций [Diez et al., 1999; Bergthorsson et al., 2001; Hamann et al., 2003; Jara et al., 2006; Mehdipour et al., 2006]. Мутация BRCA1 5382insС – founder mutation для некоторых народов мира является причиной возникновения РМЖ и РЯ в 30 % случаев. В Европе частота мутации 5382insС гена BRCA1 колеблется от 1,9% (у жительниц Бельгии) до 34% (в Польше), а в России чаще регистрируется в Центральном округе (4,0-28,6%), Сибирском регионе (1,9%), Северо-Западном (9,3-9,7%), Приволжском (3,3-4,6%) и Южно-федеральном округах (19,1%) [Sermijn et al., 2004; Gorski et al., 2004; Grudinina et al., 2005; Смирнова, 2008;

Любченко, 2009; Порханова, 2009; Ходорович, 2009; Chasovnikova et al., 2010;

Поспехова, 2011; Шубин, 2011; Фарахтдинова, 2012; Лобейко, 2012].

Отсутствие других мутаций генов BRCA1/2 (185delAG, 4153delA, 300T/G, 2080delA, 3819delGTAAA, 3875delGTCT, 6174delT) у онкологических больных как РА, так и других регионов России, мира подтверждают нецелесообразность использования их в качестве диагностических панелей для донозологической диагностики неоплазий у женщин не-Ашкенази. Характерные для многих популяций минорные мутации BRCA1/2 не встречаются в других регионах мира, поэтому актуален поиск иных, более информативных и прогностически значимых полиморфизмов других генов-кандидатов, и в частности, про- и противовоспалительных цитокинов IL-2, IL-4, IL-10, IL-12В, IL-17А, IL-17F – иммунорегуляторных низкомолекулярных медиаторов, регулирующих системные воспалительные реакции организма и вовлеченные в канцерогенез [Osorio et al., 2002; Suter et al., 2004; Sugano et al., 2008; Soumittra et al., 2009; Donenberg et al., 2010; Kang et al., 2013].

IL-17A, F. По данным немногочисленных исследований, включенных в международные базы данных, только для жительниц Китая показана ассоциация полиморфных вариантов IL-17А с РМЖ и РШМ. Wang L. et al. указывают на А197А генотип и 197А аллель IL-17А как ассоциированные с РМЖ (р=0,0016;

р=0,0029 соответственно). По данным Quan Y. et al. (2012) с РШМ сопряжена 197А аллель IL-17А (р=0,008), для Arg161His (rs763780) SNP IL-17F достоверных различий между здоровыми женщинами и больными с онкопатологией (РМЖ и РШМ) в этих работах не выявлено [Wang et al., 2012, Quan et al., 2012].

В России G197A полиморфизмы IL-17А (rs2275913) исследованы А.Д.

Еникеевой с соавт. (2012), однако частоты G197/197A аллелей IL-17А у доноров и больных со злокачественными новообразованиями желудочно-кишечного тракта достоверно не различались. G197/197A полиморфизмы IL-17А и H161/161A аллелей IL-17F по другим локализациям ЗНО в РФ не исследованы (HuGEN, Pubmed). В отличие от данных Еникеевой с соавт. (2012), полученных при обследовании жителей Кемеровской области, нами впервые подтверждена ассоциация полиморфизма с верифицированным РМЖ G197 IL-17А преимущественно у русских женщин. По IL-17F также впервые в мире и РФ, в нами экспериментально выявлены достоверные различия в распределении частот His161Arg (A7488G) SNP у здоровых и больных женщин РА: A7488G генотип ILF независимо от этнической принадлежности, повышает риск развития РМЖ, РТМ, РШМ, РЯ. Наши данные не подтверждаются результатаыми других мировых исследований [Wang et al., 2012, Quan et al., 2012]. Противоречивые данные по распределению частот G197A аллелей IL-17А у больных женщин, проживающих в разных регионах мира – России (Республика Адыгея) и в Китае может быть обусловлено этногенетическими особенностями, географической разобщенностью популяций, историческим происхождением народов.

В международных базах HuGEN, Pubmed не упоминаются сведения о возможной ассоциации полиморфных вариантов генов провоспалительных цитокинов IL-17F с гистотипами неоплазий. В проспективном IL-17А, исследовании на репрезентативной группе больных нами подтверждена достоверная связь аллели (р=0,031) с прогностически G197 IL-17A неблагоприятным гистотипом низкодифференцированной аденокарциномы молочной железы.

Пролиферативная активность основного провоспалительного IL-17 определяет исследования сывороточных концентраций, уровней спонтанной и стимулированной ФГА продукции медиатора in vitro в культуре PBMC больных со ЗНО женских репродуктивных органов [Zhu X. et al., 2008; Martin-Orozco et al., 2009; Chen S. et al., 2010]. Участие IL-17 в канцерогенезе по данным международных баз рассматривается на основании анализа сывороточных концентраций медиатора, однако у онкологических больных с РМЖ и доноров Lyon D. et al. (2008) не выявили достоверных различий по содержанию в крови свободного IL-17 (130pg/ml и 165pg/ml соответственно), что позволило им утверждать о неинформативности сывороточных уровней медиатора при онкопатологии у жительниц Канады. В более поздних работах Souza J. et al.

(2013) отмечают достоверное повышение концентраций IL-17 в сыворотке больных РШМ по сравнению с донорами (22,50 и 12,208pg/ml, соответственно).

По данным Zhu X. et al. (2008) прогрессирование ЗНО сопровождается значительным повышением сывороточных уровней IL-17А, что может быть следствием медиаторного дисбаланса.

Согласно нашим данным, у онкологических больных и здоровых жителей РА выявлены чрезвычайно высокие сывороточные концентрации IL-17 (соответственно 2218,2±214,8pg/ml и 2561,6±62,8pg/ml), в несколько десятков раз превышающие физиологические уровни других провоспалительных цитокинов, но достоверно не различающиеся у обследованных групп. Значительные расхождения в полученных нами результатах по сравнению с другими работами могут зависеть от условий проведения и используемых тест-систем в ИФА.

Следует отметить, что в работах Lyon et al. (2008) усредненные значения концентраций IL-17 представлены без статистического анализа, а обсуждаемые Souza J. et al. (2013) различия сывороточных уровней IL-17 у больных (22,50 pg/ml) и доноров (12,208 pg/ml) не превышают физиологических значений, что при отсутствии других работ затрудняет сравнение наших экспериментальных данных с мировыми.

Наиболее информативным показателем участия IL-17A в канцерогенезе, на наш взгляд, является способность PBMC продуцировать IL-17A и отвечать in vitro на стимулирующее влияние ФГА, однако подобные исследования представлены в единичных работах. В диссертационной работе Селиховой Ю.Б. (2008) способность стимулированных ЛПС и ФГА PBMC больных РМЖ продуцировать более высокие концентрации по сравнению с доноров IL-17 PBMC (соответственно 302±51 и 106±6,3) проанализирована на небольших выборках больных (n=13) и доноров (n=13). Кроме этого, не исследовано распределение SNP гена IL-17A в норме, при онкопатологии и их влияние на экспрессию медиатора in vitro PBMC.

В отличие от Селиховой Ю.Б. (2008) экспериментально нами выявлена способность интактных и стимулированных доноров in vitro PBMC продуцировать достоверно более высокие уровни IL-17A (134,5±49,0/ 198,9±51,8) по сравнению с PBMC онкологических больных (15,8±15,4/ 24,1±9,5), которые в 95% случаев не синтезировали IL-17A (Me=0). Полученные нами результаты косвенно подтверждают ареактивность иммунной системы онкологических больных, подавление защитной воспалительной реакции, что в определенной степени может быть характерно для онкопатологии.

Продукция медиаторов иммунной системы обусловлена SNP, расположенными в промоторных регионах соответствующих генов, однако влияние G197A (rs2275913) полиморфизмов на продукцию IL-17А PBMC в норме и при онкопатологии не исследовано и не отражено в международных базах данных. Нами установлено, что G197A аллельные варианты промотора гена ILА у доноров и онкологических больных не влияют на продукцию медиатора.

IL-10. В промоторных регионах гена IL-10 идентифицирован ряд SNP, из которых наиболее изучены G1082A (rs1800896), C819Т (rs1800871) и C592A (rs1800872), воздействующие на транскрипцию мРНК, экспрессию гена и, следовательно, играющие определенную роль в патогенезе и клиническом течении ЗНО женских репродуктивных органов [Turner D. et al., 1997; Gibson A. et al., 2001; Kingo K. et al., 2005]. В немногочисленных исследованиях по распределению SNP IL-10 в норме и при неоплазиях показаны неоднозначные результаты. В европейских популяциях превалирует 592A аллель, А1082А генотип ассоциированные преимущественно с РМЖ [Giordani et al., 2003;

Langsenlehner et al., 2005; Благодатских А.Е. и др., 2011]. У китайских женщин с риском развития РМЖ связывают C819Т генотип IL-10 [He et al., 2012]. В других работах не выявлено достоверных различий у доноров и больных по частотам генотипов и аллелей гена IL-10, их ассоциированности с онкопатологией [Smith et al., 2004; Abdolrahim-Zadeh et al., 2005; Onay et al., 2006; Ivansson et al., 2007; Singh et al., 2009; Kong et al., 2010; Wang et al., 2011; Barbisan et al., 2012].

Типирование SNP трех локусов гена IL-10 в геномной ДНК обследованных женщин Республики Адыгея подтвердило данные европейских и китайских исследований о вовлеченности полиморфных вариантов в канцерогенез. Между донорами и больными установлены достоверные различия по распределению частот аллелей гена IL-10 в зависимости от этнической принадлежности: 592A аллель ассоциирована (р=0,02) с РМЖ, РШМ, РТМ у адыгов, а 819T аллель – у русских женщин (р=0,04).

Распределение генотипов и аллелей гена IL-10 в зависимости от степени дифференцировки аденокарциномы и вовлечения в опухолевый процесс регионарных лимфатических узлов, исследованное для европейцев, жителей Южной Азии, Индии и Китая, нашло подтверждение и для населения РА, но по разным аллельным вариантам [Langsenlehner U. et al., 2005; Singh H. et al., 2009;

Giordani L. et al., 2003; Kong F. et al., 2010; Благодатских А.Е. и др., 2011]. Если по данным Kong F. et al. с высокой вероятностью лимфогенного метастазирования в Китае ассоциирован A1082A генотип, в России (г.Новосибирск) – С592С генотип гена IL-10, то в РА с опухолевой прогрессией ассоциирована 819T аллель; а с низкодифференцированными вариантами аденокарциномы – G1082 полиморфизм гена IL-10. По C592A SNP IL-10 в обследованных популяциях каких-либо закономерностей при опухолевой прогрессии не выявлено.

Гаплотипы по трем локусам гена IL-10 в мире недостаточно исследованы и сочетанное носительство аллельных вариантов промоторного региона гена IL-10 в виде гаплотипов проанализировано только для популяций Китая, Ирана и Турции с весьма противоречивыми результатами [Roh J. et al., 2002; Abdolrahim-Zadeh H.

et al., 2005; Gonullu G. et al., 2007; Kong F. et al.; 2010]. Наши экспериментальные исследования показали, что факторами риска развития РМЖ у жительниц РА по трем сайтам промоторного региона (592, 819, 1082) гена IL-10 являются гаплотипы ATA и GCA. Полученные нами данные согласуются с работами Gonullu G. et al. для больных РМЖ, проживающих в Турции, однако другими авторами не выявлены достоверные различий по частотам гаплотипов rs1800896, rs1800871, rs1800872 гена IL-10 при онкопатологии [Roh J. et al., 2002;

Abdolrahim-Zadeh H. et al., 2005; Kong F. et al., 2010].

Данные по сывороточным концентрациям IL-10 у доноров и больных РМЖ проанализированые в немногочисленных работах, весьма противоречивы, фрагментарны и малоинформативны (HuGEN, Pubmed). В сыворотке жителей РА IL-10 детектируется в следовых количествах (2-5 pg/ml), уровни медиатора в норме и при онкопатологии достоверно не различаются, что согласуется с данными Roh J. et al. (2002) для кореянок, англичан, жительниц Индии и России [Rao V. et al., 2008; Pooja S., 2012; Тугуз А.Р., 2002]. Другими авторами отмечается статистически значимое повышение концентрации IL-10 в сыворотках больных РМЖ по сравнению с донорами [Kozowski et al., 2003; Lyon et al., 2008;

Althwani et al., 2011; Злобнова, 2013; Алимходжаева, 2009]. Следует отметить, что в этих случаях обсуждаемые сывороточные уровни IL-10 в норме и при онкопатологии не превышают пределы физиологических концентраций медиатора у жительниц разных стран: Узбекистана – 8.22±1.5; 14.85±2.04pg/ml [Алимходжаева Л.Т., 2009], России (г. Саратов) – 8.4±0.75; 14.1±1.11 pg/ml [Злобнова О.А., 2013], Ирака – 5.74 ± 0.37; 27.54 ± 1.16pg/ml [Althwani A.N. et al., 2011], Канады – 76.5; 121.0pg/ml [Lyon D. et al., 2008], Польши – 5.7; 24.7 [Kozowski L. et al., 2003].

В РФ и мире информация по продукции IL-10 мононуклеарными клетками крови больных с неоплазиями женских репродуктивных органов представлена в единичных работах. Так, Я.В. Кухарев (г. Томск, 2010), сравнивая функциональные возможности PBMC больных РМЖ до и после химиотерапии, отмечает, что стандартные курсы полихимиотерапии угнетают in vitro спонтанную и стимулированную ФГА продукцию IL-10. Merendino R.A. et al., (1999) однако, выявили значительное повышение уровня продукции IL-10 интактными PBMC больных РМЖ по сравнению с донорами. Данные, полученные для жителей РА также свидетельствуют о снижении способности онкологических больных продуцировать основной PBMC противовоспалительный медиатор: в культуральной среде интактных и индуцированных ФГА PBMC больных РМЖ, РТМ, РШМ, IL-10 детектируется в следовых количествах (2,8±0,5 / 2,1±0,9pg/ml) и достоверно отличается от уровней IL-10 в культуральной среде PBMC доноров (41,2±26,7 / 208,1±70,2pg/ml).

Сывороточные концентрации IL-10, уровни спонтанной и стимулированной in vitro ФГА продукции медиатора мононуклеарными клетками крови при развитии ЗНО репродуктивных органов могут зависеть от SNP промоторного региона гена IL-10 (G1082A, C819Т, C592A), однако аналогичные исследования в мире не проводились. Впервые нами экспериментально показана взаимосвязь полиморфных вариантов гена с сывороточными концентрациями, уровнями продукции IL-10 интактными и стимулированными ФГА PBMC доноров и больных РМЖ, РШМ, РТМ. Установлено влияние разных SNP на продукцию ILу доноров G1082 аллель в гомо- и гетерозиготном состояниях достоверно снижают, а C819Т, С592А, С592С полиморфизмы повышают спонтанную продукцию IL-10. У больных с ЗНО исследованные концентрации IL-10 в культуральной среде интактных и стимулированныхй ФГА PBMC не зависят от генотипов трех полиморфизмов, но статистически значимо снижены по сравнению с донорами.

По сочетанному влиянию гаплотипов или полиморфизмов трех сайтов промоторного региона гена IL-10 на способность PBMC секретировать противовоспалительный цитокин в электронных базах HuGEN, Pubmed нет данных. Нами показано, что исследованные варианты гаплотипов при ЗНО женских репродуктивных органов не регулируют секрецию IL-10 PBMC, тем самым подтверждая отсутствие взаимного влияния SNP на продукцию медиатора.

IL-2. Пролиферативная активность в отношении антигенIL-2 активированных Т-лимфоцитов предполагает его вовлеченность в патогенез новообразований. Участие IL-2 в канцерогенезе, в особенности злокачественных новообразований женских репродуктивных органов, недостаточно исследовано, что подтверждается единичными ссылками в мировых базах данных. В большинстве исследований отражена роль рецептора IL-2 (IL-2R), но не полиморфизмов гена IL-2 [Tesarova, 2000; Тугуз, 2002; Kuhn, 2005]. Возможная связь аллельных вариантов гена IL-2 с РМЖ по 384, 475 и 631 сайтам промоторного региона SNP проанализирована в двух работах, однако ни Erdei E. et al. (2010) по 384G/T полиморфизмам, ни Горева Е.П. с соавт. для 631G/A и 475A/T полиморфных вариантов гена IL-2 не выявили ассоциации с РМЖ.

Аналогичные выводы получены нами при сравнении распределения частот T330G аллельных вариантов промоторного региона гена IL-2 в выборках доноров и онкологических больных с РМЖ, РТМ, РШМ: по частотам аллелей и генотипов T330G IL-2 статистически значимых отличий для сравниваемых групп не установлено, что противоречит данным Hu X.B. et al. (2013) об ассоциации гетерозиготного T330G (р=0,0021) и гомозиготного G330G генотипов (р0,0001) IL-2 с РМЖ. Впервые нами у больных РА установлено достоверное повышение частот нормальной Т330 аллели при раке молочной железы, тела и шейки матки с метастазированием в регионарные лимфатические узлы.

Содержание IL-2 в образцах сыворотки у доноров и онкологических больных исследовано для некоторых мировых популяций. Достоверные повышения сывороточных уровней IL-2 по сравнению с донорами отмечены Forones N. et al. (2001) у больных раком желудка (Бразилия), Lyon D. et al., (2008) при РМЖ (Канада), Тугуз А.Р., 2002 (Россия) при ЗНО разных локализаций, Садвакасовой Г.С. и др., 2010 (Казахстан) и Erdei E. et al., 2010 (США) для больных РМЖ. В отличие от цитируемых работ, в наших исследованиях высокие концентрации сывороточного у доноров (279,2±149,3 и IL-2 pg/ml) онкологических больных РА (244,5±101,6pg/ml) достоверно не различались. Это может быть обусловлено небольшими выборками больных и доноров, сопутствующей патологией или этническими особенностями обследованных групп населения, что требует дальнейших исследований в первую очередь, как свободных, так и связанных уровней IL-2.

Информативным показателем участия IL-2 в канцерогенезе может быть способность PBMC онкологических больных in vitro продуцировать медиатор и отвечать на стимулирующее влияние ФГА, однако в международных базах данные о продукции IL-2 PBMC при онкопатологии немногочисленны и противоречивы. Экспериментально нами показано достоверное снижение спонтанной продукции IL-2 в культуральной среде интактных PBMC больных с РМЖ, РШМ, РТМ по сравнению с донорами. Поликлональный митоген ФГА при инкубации с PBMC этих же больных не оказывал стимулирующего эффекта.

Влияние T330G полиморфизмов гена на сывороточные уровни, спонтанную и стимулированную ФГА продукцию IL-2 PBMC доноров, а тем более больных с неоплазиями женских репродуктивных не исследованы. Впервые нами показано, что Т330G SNP и генотипы промоторного региона IL-2 не влияют на уровни медиатора в сыворотке, культуральной среде интактных и инкубированных с ФГА in vitro PBMC доноров и онкологических больных.

– основной противовоспалительный цитокин, фактор IL-4 дифференцировки Т- и В-лимфоцитов с широким спектром биологических свойств, участвующий в неопластических процессах, проявляя как противоопухолевую активность, так и способствуя опухолевому росту [Hillman et al.

, 1994; Gooch et al., 1998; Nagai et al., 2000]. В мировых базах данныхHuGEN, Pubmed сведения о влиянии SNP промоторного региона гена IL-4 на канцерогенез неоплазий женских репродуктивных органов весьма немногочисленны. 1098G/T и 524C/T полиморфные варианты гена IL-4 исследованы Erdei E. et al., 2010 (США) у доноров и больных РМЖ, однако значимые различия определены только для 1098G/T генотипов.

В наших экспериментальных исследованиях показана ассоциация по другим полиморфным вариантам промоторного региона гена IL-4. Так по C589T SNP установлены достоверные различия в частотах 589T аллеля и Т589T генотипа у доноров и больных с ЗНО женских репродуктивных органов, что не согласуется с данными Yannopoulos A. et. al. (2007) для больных с колоректальным раком (Греция) и Konwar R. et al. (2009) для РМЖ (Индия). Ни одним из авторов не исследована взаимосвязь C589T полиморфизмов гена IL-4 с опухолевой прогрессией, нами установлена ассоциированность «мутантного» 589T аллеля с метастазированием неоплазий в регионарные лимфатические узлы при РМЖ, РШМ, РТМ.

Концентрации IL-4 в нативной сыворотке доноров и онкологических больных в мире исследованы немногими авторами. Достоверное повышение уровня медиатора в сыворотке больных РМЖ по сравнению с донорами отмечено Алимходжаевой Л.Т., 2009 (6,55±1,68 / 3,86±1,15) и Lyon D. et al., 2008 (481,50 / 236,75). В диссертационном исследовании Тугуз А.Р. (2002), наоборот, показано достоверное повышение концентрации IL-4 в сыворотках доноров по сравнению с больными ЗНО разных локализаций (56,5±8,7 / 24±6,5). В соответствии с нашими экспериментальными данными, содержание медиатора в нативной сыворотке доноров и больных РМЖ, РШМ, РТМ достоверно не различались (111,4±47,5 / 110,5±22,5), возможно вследствие небольшой выборки обследуемых групп.

Сведений о спонтанной и стимулированной продукции IL-4 в норме и при ЗНО женских репродуктивных органов в мировых базах данных нет. В ранних работах по РМЖ отражена роль рецептора IL-4 (IL-4R) и только в культуре клеточных линий [Jennifer L. et al., 1998; Leland P. et al., 2000], но не обсуждается продукция самого противовоспалительного медиатора. Нами впервые экспериментально показано, что интактные PBMC в норме и при онкопатологии секретируют невысокие концентрации IL-4 (108,2±16,8 / 81,8±7,3), уровни которых не стимулируются in vitro ФГА.

Влияние C589T SNP на продукцию IL-4 у доноров и онкологических больных ранее никем не исследовалось. Впервые нами установлено, что концентрации в образцах сывороток, супернатантов интактных и IL-4 стимулированных ФГА PBMC больных не зависят от C589T полиморфных вариантов гена, однако, у доноров наоборот, гетерозиготный С589Т генотип IL-4 достоверно снижает спонтанную продукцию медиатора.

IL-12В. Участие А1188С SNP промоторного региона гена IL-12В – провоспалительного цитокина, индуктора синтеза IFN и других цитокинов, генерирующего клеточный иммунитет против опухолевых клеток, в канцерогенезе изучено недостаточно. Kaarvatn M.H. et al., 2012 (Норвегия) отмечают достоверное повышение частот нормальной А1188 аллели и гомозиготного А1188А генотипа гена IL-12В у больных РМЖ по сравнению с донорами, что согласуется с полученными нами экспериментальными данными для русских женщин РА.

Для жителей других стран (Польши, Китая и Южной Кореи) установлена ассоциация мутантного 1188С аллеля IL-12В с РШМ [Roszak A. et al., 2012; Chen X. et al., 2009; Han S.S. et al., 2008]. Кроме того, нами впервые установлено, что А1188 имеет неблагоприятное прогностическое значение при SNP метастазировании в региональные лимфатические узлы у больных РМЖ, РТМ, РШМ.

Таким образом, по ряду исследованных параметров, таких как частоты полиморфизмов генов цитокинов, их влиянию на сывороточные уровни, спонтанную и стимулированную продукцию спектра медиаторов нами получены эксклюзивные, не имеющие аналогов в мире, данные, которые могут быть использованы для разработки медиаторной концепции канцерогенеза.

99 Выводы

1. Мутации генов-супрессоров опухолевого роста BRCA1/2 5382insC, 185delAG, 4153delA, Cys61Gly, 2080delA, 3819delGTAAA, 3875delGTCT, 6174delT BRCA1 у жителей Республики Адыгея не ассоциированы с гистологически верифицированной аденокарциномой молочной железы, яичников, тела и шейки матки.

2. Аллельные варианты и генотипы IL-17А (G197), IL-17F (161Аrg, His161Аrg генотип), IL-12В (А1188, А1188А генотип), IL-4 (589T, T589T генотип) у жителей Республики Адыгея ассоциированы со злокачественными новообразованиями органов женской репродуктивной системы. Этнические различия установлены по полиморфизмам гена IL-10: у русских женщин чаще выявляется 819T, а у адыгов - 592A аллель.

3. Метастазирование в регионарные лимфатические узлы у больных ЗНО связано с повышением частот аллелей: Т330 гена IL-2, 589T IL-4, 819T ILА1188 – IL-12В. Маркерами прогностически неблагоприятных гистотипов низкодифференцированной аденокарциномы молочной железы являются G197 аллель IL-17A и G1082 полиморфизм гена IL-10.

4. Полиморфные варианты промоторных регионов генов IL-4 и IL-10 влияют на продукцию соответствующих медиаторов PBMC доноров: С589Тгенотип IL-4, гомозиготные G1082G и гетерозиготный G1082А генотипы IL-10 снижают, а C819Т, С592А, С592С генотипы IL-10 in vitro повышают спонтанную продукцию цитокинов PBMC.

Практические рекомендации:

Рекомендовать при диспансеризации населения Республики Адыгея 1.

использование в качестве молекулярно-генетических маркеров повышенного риска развития злокачественных новообразований органов женской репродуктивной системы G197 аллель гена IL-17A, 161Arg полиморфизм IL-17F и 819T, 592A SNP гена IL-10.

2. Включить SNP-типирование генов IL-17A (G197), IL-10 (G1082, 819T), IL-2 (Т330), IL-4 (589T), IL-12В (А1188) в стандартное обследование онкологических больных для прогноза течения основного заболевания.

Литература:

1. Алимходжаева, Л.Т. Диагностическое значение изучения уровней про - и противовоспалительных цитокинов иммунной системы у больных раком молочной железы / Л.Т. Алимходжаева // Опухоли женской репродуктивной системы. – 2009. – № 3(4). – С. 49-52.

2. Алифирова, В.М. Полиморфизм гена интерлейкина-12 (IL-12B) у больных рассеянным склерозом и здоровых лиц / В.М. Алифирова [и др.] // Бюллетень сибирской медицины. – 2008. – № 5. – С. 13-18.

3. Антонеева, И.И. Цитокиновый статус сыворотки крови при распространенном раке яичников и на фоне полихимиотерапии / И.И.

Антонеева [и др.] // Фундаментальные исследования. – 2014. – № 4. – С. 233Антонов, А.Г. Патогенез онкологических заболеваний. Цитоплазматические и молекулярно-генетические механизмы иммунной резистентности малигнизированных клеток / А.Г. Антонов, В.К. Козлов // Цитокины и воспаление. – 2004. – Т. 3. – № 2. – С. 23-33.

5. Белецкий, И.П. Пути передачи цитотоксического сигнала рецепторами семейства TNF Rs / И.П. Белецкий, А.Б. Мошникова, О.В. Прусакова // Биохимия. – 2002. – Т. 67. – вып. 4. – С. 377-395.

6. Бережная, Н.М. Роль клеток системы иммунитета в микроокружении опухоли / Н.М. Бережная // Онкология. – 2009. – № 1. – С. 6-17.

7. Бережная, Н.М. Система интерлейкинов и рак / Н.М. Бережная, В.Ф. Чехун.

– Киев: ДИА. – 2000. – 224 с.

8. Биохимия: Учеб. для вузов. Раздел 4. Биосинтез нуклеиновых кислот и белков (матричные биосинтезы). Основы молекулярной генетики / В.А.

Голенченко, С.А. Силаева, под ред. Е.С. Северина. – 2003, М.: Издательская группа ГЕОТАР-Мед. – С. 212.

9. Благодатских, А.Е. Функциональный полиморфизм гена ИЛ-10 при раке молочной железы / А.Е. Благодатских [и др.] // Вестник Новосибирского государственного университета. – 2011. – № 9(4). – C. 161-166.

10.Витковский, Ю.А. Влияние интелейкинов 4 и 10 на систему гемостаза in vitro / Ю.А. Витковский, Б.И. Кузник, Д.А. Еделев, А.В. Солпов // Иммунология. – 2001. – № 1. – С. 43-46.

11.Голвизин, М.В. Вмешательство раковых клеток в процессы созревания и селекции Т-лимфоцитов как фактор опухолевой прогрессии / М.В. Голвизин // Иммунология. – 2001. – № 6. – С. 4-10.

12.Горева, Е.П. Аллельный полиморфизм генов IL-2 и IL-18 и риск развития рака молочной железы / Е.П. Горева [и др.] // Сибирский онкологический журнал: материалы конференции, 2010. – С. 36-37.

13.Еникеева, А.Д. Изучение полиморфизма маркера rs2275913 гена IL17A в группе лиц с онкозаболеваниями желудочно-кишечного тракта и среди здоровых индивидуумов Кемеровской области / А.Д. Еникеева [и др.] // Сибирский Онкологический Журнал. – 2012. - №1. – С. 67.

14.Злобнова, О. А. Динамические изменения показателей цитокинового профиля периферической крови при раке молочной железы в динамике распространения опухолевого процесса / О. А. Злобнова // Актуальные вопросы современной медицины: материалы международной заочной научно-практической конференции (14 января 2013г.). – 2013. – С. 1-5.

15.Злокачественные новообразования в России в 2012 году (заболеваемость и смертность) / под ред. А.Д. Каприна, В.В. Старинского, Г.В. Петровой. – 2014, М.: ФГБУ «МНИОИ им. П.А. Герцена» Минздрава России, 250 с.

16.Злокачественные новообразования в России в 2013 году (заболеваемость и смертность) / под ред. А.Д. Каприна, В.В. Старинского, Г.В. Петровой. – 2015, М.: ФГБУ «МНИОИ им. П.А. Герцена» Минздрава России, 250 с.

17.Имянитов, Е.Н. Наследственный рак молочной железы / Е.Н. Имянитов // Практическая Онкология. – 2010. – № 11(4). – С. 258-266.

18.Карпухин, А.В. Наследственная предрасположенность к раку молочной железы / А.В. Карпухин, А.Н. Логинова, Е.Н. Хомич, Н.И. Поспехова // Медицинская генетика. – 2002. – № 1. – С. 254-261.

19.Кетлинский, С.А. Цитокины / С.А. Кетлинский, А.С. Симбирцев. – СПб.:

ООО «Издательство Фолиант», 2008. – 552 с.

20.Ковальчук, Л.В. Система цитокинов, комплемента и современные методы иммунного анализа / Л.В. Ковальчук, Л.В. Ганковская, М.В. Хорева, Е.В.

Соколова. – М.: РГМУ, 2001. – 158 с.

21.Кологривова, И.В. Молекулярные аспекты функционирования T-хелперов 17-го типа / И.В. Кологривова [и др.] // Бюллетень сибирской медицины. – 2011. – № 4. – С. 93-99.

22.Кутихин, А.Г. Влияние полиморфизмов IL-10 G1082A, IL-17A G197A И TLR4 A896G на риск развития колоректального рака / А.Г. Кутихин [и др.] // Медицинский альманах. – 2012. – № 3(22). – С. 166-169.

23.Кухарев, Я.В. Сопряженность параметров иммунного статуса с эффективностью неоадъювантной терапии рака молочной железы / Я.В.

Кухарев, А.В. Дорошенко, Н.А. Тарабановская, Ю.Л. Кокорина // Сибирский онкологический журнал: материалы конференции, 2010. – С. 65-66.

24.Лобейко, О.С. Мутации гена BRCA1 5382 insC у больных раком яичников:

автореф. дис. … канд. мед. наук: 14.01.12 / Лобейко Оксана Сергеевна. – СПб., 2012. – 21 с.

25.Любченко, Л.Н. Клинико-молекулярные аспекты наследственного рака молочной железы / Л.Н. Любченко [и др.] // Молекул. мед. – 2007. – № 1. – С. 8-15.

26.Любченко, Л.Н. Наследственный рак молочной железы и/или яичников:

ДНК-диагностика, индивидуальный прогноз, лечение и профилактика:

автореф. дис. … д-ра. мед. наук: 14.00.14 / Любченко Людмила Николаевна.

– М., 2009. – 50 с.

27.Молчанов, О.Е. Современные тенденции иммунотерапии злокачественных опухолей [монография] / О.Е. Молчанов, И.А. Попова, В.К. Козлов, М.И.

Карелин. – Санкт-Петербург: Изд-во СпбГУ, 2001. – 85 с.

28.О состоянии здоровья населения и организации здравоохранения в Республике Адыгея за 2013 год: гос. доклад / Министерство здравоохранения Республики Адыгея. – Майкоп: Качество, 2014. – 98 с.

29.Порханова Н.В. Роль генетического скрининга в профилактике, диагностике и лечении рака яичников: автореф. дис. … д-ра. мед. наук: 14.00.14 / Порханова Наталья Владимировна. – Ростов-на-Дону, 2009. – 47 с.

30.Поспехова, Н.И. Комплексный анализ наследственной формы рака молочной железы и/или яичников: молекулярно-генетические и фенотипические характеристики: автореф. дис. … д-ра биол. наук: 03.02.07 / Поспехова Наталья Ивановна. – М., 2011. – 47 с.

31.Садвакасова, Г. С. Особенности иммуно-эндокринного профиля при доброкачественных и злокачественных новообразованиях молочной железы:

автореф. дис. … канд. мед. наук: 14.00.36 / Садвакасова Галия Садвакасовна.

– Алматы, 2010. – 26 с.

32.Свердлов, Е.Д. Некоторые принципы организации сигнальных систем клетки: геном — инструктор или исполнитель / Е.Д. Свердлов // Вестник РАМН. – 2001. – № 10. – С. 8-19.

33.Селихова, Ю.Б. Характеристика иммунной и кроветворной систем у больных раком молочной железы на различных этапах противоопухолевой терапии: автореф. дис. … канд. мед. наук: 14.00.36 / Селихова Юлия Борисовна. – Новосибирск, 2008. – 22 с.



Pages:     | 1 | 2 || 4 | 5 |
 

Похожие работы:

«МИГИНА ЕЛЕНА ИВАНОВНА ФАРМАКОТОКСИКОЛОГИЯ И ЭФФЕКТИВНОСТЬ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ КОРМОВОЙ ДОБАВКИ ТРИЛАКТОСОРБ В МЯСНОМ ПЕРЕПЕЛОВОДСТВЕ 06.02.03 – ветеринарная фармакология с токсикологией Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: доктор биологических наук, профессор Кощаев Андрей...»

«Якимова Татьяна Николаевна Эпидемиологический надзор за дифтерией в России в период регистрации единичных случаев заболевания 14.02.02 эпидемиология диссертация на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Научный руководитель: доктор...»

«Сафранкова Екатерина Алексеевна КОМПЛЕКСНАЯ ЛИХЕНОИНДИКАЦИЯ ОБЩЕГО СОСТОЯНИЯ АТМОСФЕРЫ УРБОЭКОСИСТЕМ Специальность 03.02.08 – экология (биологические науки) Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: доктор...»

«БОЛОТОВ ВЛАДИМИР ПЕТРОВИЧ ОЦЕНКА СОДЕРЖАНИЯ И МИГРАЦИЯ ТЯЖЕЛЫХ МЕТАЛЛОВ В ЭКОСИСТЕМАХ ВОЛГОГРАДСКОГО ВОДОХРАНИЛИЩА Специальность: 03.02.08. Экология Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: доктор биологических наук,...»

«Шемякина Анна Викторовна БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫЕ ВЕЩЕСТВА ДАЛЬНЕВОСТОЧНЫХ ПРЕДСТАВИТЕЛЕЙ РОДА BETULA L. 03.02.14 – Биологические ресурсы Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: доктор биологических наук, профессор Колесникова Р.Д. Хабаровск – 20 СОДЕРЖАНИЕ ВВЕДЕНИЕ.. ГЛАВА 1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ ПО ТЕМЕ ИССЛЕДОВАНИЙ. 1.1 Общие...»

«_ ТЕМИРОВ Николай Николаевич КОРРЕКЦИЯ АФАКИИ РАЗЛИЧНОГО ГЕНЕЗА МУЛЬТИФОКАЛЬНЫМИ ИНТРАОКУЛЯРНЫМИ ЛИНЗАМИ С АСИММЕТРИЧНОЙ РОТАЦИОННОЙ ОПТИКОЙ Специальность 14.01.07 – «Глазные болезни» ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Научный руководитель: доктор медицинских...»

«Абдуллоев Хушбахт Сатторович ИММУНОБИОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА ВИРУСА ИНФЕКЦИОННОГО БРОНХИТА КУР ГЕНОТИПА QX 06.02.02 «ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология» Диссертация на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук Научный руководитель: доктор биологических наук, профессор Макаров Владимир Владимирович...»

«Доронин Максим Игоревич ЭКСПРЕСС-МЕТОДЫ ВЫЯВЛЕНИЯ ВИРУСА ИНФЕКЦИОННОГО НЕКРОЗА ГЕМОПОЭТИЧЕСКОЙ ТКАНИ ЛОСОСЕВЫХ РЫБ 03.02.02 «Вирусология» Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: доктор биологических наук, Мудрак Наталья Станиславовна Владимир 2015 ОГЛАВЛЕНИЕ 1 ВВЕДЕНИЕ 2 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 2.1 Характеристика возбудителя инфекционного...»

«КОЖАРСКАЯ ГАЛИНА ВАСИЛЬЕВНА КЛИНИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ МАРКЕРОВ КОСТНОГО МЕТАБОЛИЗМА У БОЛЬНЫХ РАКОМ МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ 14.01.12 онкология Диссертация на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Научные руководители: доктор биологических наук, Любимова Н.В. доктор медицинских наук, Портной С.М. Москва, 2015 г....»

«Шапурко Валентина Николаевна РЕСУРСЫ И ЭКОЛОГИЧЕСКОЕ КАЧЕСТВО ЛЕКАРСТВЕННЫХ РАСТЕНИЙ (НА ПРИМЕРЕ БРЯНСКОЙ ОБЛАСТИ) Специальность 03.02.08 – экология (биологические науки) Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: доктор...»

«Радугина Елена Александровна РЕГУЛЯЦИЯ МОРФОГЕНЕЗА РЕГЕНЕРИРУЮЩЕГО ХВОСТА ТРИТОНА В НОРМЕ И В УСЛОВИЯХ ИЗМЕНЕННОЙ ГРАВИТАЦИОННОЙ НАГРУЗКИ 03.03.05 – биология развития, эмбриология Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: Доктор биологических наук Э.Н. Григорян Москва – 2015 Оглавление Введение Обзор литературы 1 Регенерация...»

«СЕРГЕЕВА ЛЮДМИЛА ВАСИЛЬЕВНА ПРИМЕНЕНИЕ БАКТЕРИАЛЬНЫХ ЗАКВАСОК ДЛЯ ОПТИМИЗАЦИИ ФУНКЦИОНАЛЬНО-ТЕХНОЛОГИЧЕСКИХ СВОЙСТВ МЯСНОГО СЫРЬЯ И УЛУЧШЕНИЯ КАЧЕСТВА ПОЛУЧАЕМОЙ ПРОДУКЦИИ Специальность 03.01.06 – биотехнология ( в том числе бионанотехнологии) Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель Доктор биологических наук, профессор Кадималиев Д.А. САРАНСК 2014 ОГЛАВЛЕНИЕ ВВЕДЕНИЕ.....»

«ТУРТУЕВА ТАТЬЯНА АНАТОЛЬЕВНА РАЗРАБОТКА СБОРА НЕЙРОПРОТЕКТИВНОГО И ЭКСТРАКТА СУХОГО НА ЕГО ОСНОВЕ 14.04.02 фармацевтическая химия, фармакогнозия ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук Научный руководитель: доктор фармацевтических наук, профессор НИКОЛАЕВА ГАЛИНА ГРИГОРЬЕВНА Улан-Удэ – 2015 ОГЛАВЛЕНИЕ...»

«Цвиркун Ольга Валентиновна ЭПИДЕМИЧЕСКИЙ ПРОЦЕСС КОРИ В РАЗЛИЧНЫЕ ПЕРИОДЫ ВАКЦИНОПРОФИЛАКТИКИ. 14.02.02 – эпидемиология ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени доктора медицинских наук Научный консультант: заслуженный деятель науки РФ, лауреат Государственной премии СССР профессор, доктор медицинских наук Ющенко Галина Васильевна Москва – 20 Содержание...»

«Вафула Арнольд Мамати РАЗРАБОТКА ЭЛЕМЕНТОВ ТЕХНОЛОГИИ ВЫРАЩИВАНИЯ ПАПАЙИ ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ ЗДОРОВОГО ПОСАДОЧНОГО МАТЕРИАЛА И ЭКСТРАКТОВ С БИОПЕСТИЦИДНЫМИ СВОЙСТВАМИ ДЛЯ ЗАЩИТЫ ЕЕ ОТ ВРЕДНЫХ ОРГАНИЗМОВ Специальности: 06.01.07 – защита растений 06.01.01 – общее земледелие и растениеводство Диссертация на соискание ученой степени кандидата сельскохозяйственных...»

«Петренко Дмитрий Владимирович Влияние производства фосфорных удобрений на содержание стронция в ландшафтах Специальность 03.02.08 экология Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: доктор биологических наук, профессор Белюченко Иван Степанович Москва – 2014 г. Содержание Введение Глава 1.Состояние изученности вопроса и цель работы 1.1 Экологическая...»

«Брит Владислав Иванович «Эффективность методов вакцинации против ньюкаслской болезни в промышленном птицеводстве» Специальность: 06.02.02 ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени кандидат ветеринарных наук Научный руководитель:...»

«Петухов Илья Николаевич РОЛЬ МАССОВЫХ ВЕТРОВАЛОВ В ФОРМИРОВАНИИ ЛЕСНОГО ПОКРОВА В ПОДЗОНЕ ЮЖНОЙ ТАЙГИ (КОСТРОМСКАЯ ОБЛАСТЬ) Специальность: 03.02.08 экология (биологические науки) Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: доктор биологических наук, профессор В.В. Шутов...»

«СИДОРОВА ТАТЬЯНА АЛЕКСАНДРОВНА ОСОБЕННОСТИ АДАПТИВНЫХ РЕАКЦИЙ У ДЕВУШЕК К УСЛОВИЯМ ГОРОДСКОЙ СРЕДЫ 03.02.08 Экология Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: доктор биологических наук, доцент Драгич О.А. Омск-2015 СОДЕРЖАНИЕ Введение.. Глава 1 Обзор литературы.. 1.1. Механизмы адаптации организма человека к окружающей среде 1.2. Закономерности развития...»

«Палаткин Илья Владимирович Подготовка студентов вуза к здоровьесберегающей деятельности 13.00.01 общая педагогика, история педагогики и образования Диссертация на соискание ученой степени кандидата педагогических наук Научные руководители: доктор биологических наук, профессор,...»







 
2016 www.konf.x-pdf.ru - «Бесплатная электронная библиотека - Авторефераты, диссертации, конференции»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.