WWW.KONF.X-PDF.RU
БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА - Авторефераты, диссертации, конференции
 


Pages:     | 1 || 3 | 4 |   ...   | 5 |

«Анохина Елена Николаевна ПОЛИМОРФИЗМЫ ГЕНОВ ПРО- И ПРОТИВОВОСПАЛИТЕЛЬНЫХ ЦИТОКИНОВ, МУТАЦИИ ГЕНОВ BRCA1/2 ПРИ ЗЛОКАЧЕСТВЕННЫХ НОВООБРАЗОВАНИЯХ ОРГАНОВ ЖЕНСКОЙ РЕПРОДУКТИВНОЙ СИСТЕМЫ ...»

-- [ Страница 2 ] --

(2012). Немногочисленные исследования SNP гена IL-12В в патогенезе ЗНО женских репродуктивных органов предполагают проведение частотного анализа распределения для выявления ассоциации полиморфных вариантов промоторного региона гена IL-12В с онкопатологией для разных этнических групп.

1.2. Сывороточные уровни, спонтанная и стимулированная продукция цитокинов in vitro PBMC больных и доноров Пролиферативная активность основного провоспалительного IL-17А.

цитокина, вовлеченного в патогенез онкологических заболеваний определяет направление исследования сывороточных концентраций уровней IL-17А, спонтанной и стимулированной ФГА продукции медиатора in vitro в культуре PBMC больных со ЗНО женских репродуктивных органов [Zhu X. et al., 2008;

Martin-Orozco et al., 2009; Chen S. et al., 2010].

Концентрации IL-17А в нативных сыворотках, среде инкубации интактных и стимулированных in vitro PBMC доноров и больных с неоплазиями проанализированы в немногочисленных работах. Lyon D. et al., 2008 не выявили достоверных различий между уровнями IL-17 в сыворотках больных РМЖ и доноров (Канада). Souza J. et al., 2013 отмечают, что РШМ ассоциирован с достоверным повышением уровня IL-17 в сыворотке больных по сравнению с донорами.

Способность PBMC продуцировать IL-17A и отвечать in vitro на стимулирующее влияние ФГА исследованы в единичных работах (HuGEN, Pubmed). Селихова Ю.Б., 2008 отмечает, что у больных РМЖ на этапе завершения радиотерапии и хирургического лечения наблюдается возрастание индуцированной ЛПС и ФГА продукции IL-17 PBMC, связанное с изменениями цитокин-продуцирующей функции клеток.

Противоречивый характер немногочисленные работ, отсутствие данных по влиянию SNP гена IL-17A на уровни медиатора в сыворотках, спонтанную и стимулированную продукцию предполагает проведение in vitro PBMC исследований концентраций IL-17А между донорами и больными с неоплазиями женских репродуктивных органов.

IL-10. Плейотропный IL-10 – иммуносупрессивный цитокин, исторически определяемый как противовоспалительный, подавляет пролиферацию и активность Т-клеток, продукцию синтеза ряда цитокинов, развитие гиперчувствительности замедленного типа, снижает активность макрофагов и моноцитов, стимулирует пролиферацию В-лимфоцитов, тимоцитов и синтез IgM и IgA. Показано, что опухолевые клетки способны продуцировать повышенные концентрации IL-10, оказывая негативное влияние на онкологических больных с подавлением Т-клеточного иммунного ответа, стимуляции опухолевого роста [Turner et al., 1997; Bidwell et al., 1999; Hamidullah et al., 2012; Бережная, 2009].

Несмотря на многочисленные работы в области изучения уровней цитокинов, многие вопросы комплексного анализа цитокинов при онкологических заболеваниях, в частности, при РМЖ, РЯ, РШМ, РТМ требуют дальнейшего изучения.

Статистически значимое повышение концентрации IL-10 в сыворотках больных РМЖ по сравнению с донорами отмечено для жительниц Европы, Азии и Канады [Kozowski et al., 2003; Lyon et al., 2008; Althwani et al., 2011; Злобнова, 2013; Алимходжаева, 2009]. Данные Садвакасовой Г.С. (2010) по сывороточным концентрациям IL-10 у больных РМЖ и здоровых жительниц Казахстана отличаются от цитируемых источников: при аденокарциноме молочной железы IIIа стадии сывороточные уровни IL-10 достоверно превышают аналогичные показатели доноров. Антонеева И.И. с соавт. (2014) проанализировали концентрации противовоспалительного IL-10 в сыворотке больных РЯ: отмечено, что уровень цитокина достоверно повышался по сравнению с донорами в зависимости от стадии заболевания и проведения химиотерапии. В исследованиях для жительниц Индии, Кореи, Великобритании, России значимых различий по уровням IL-10 в сыворотках доноров и больных с неоплазиями женских репродуктивных органов не найдено [Roh J. et al., 2002; Rao V. et al., 2008; Pooja S. et al., 2012; Тугуз А.Р. и др., 2003].

Продукция IL-10 in vitro PBMC больных с неоплазиями женских репродуктивных органов в мировых базах данных представлена единичными работами. Merendino R.A. et al. (1999) отмечают повышение уровня продукции ILинтактными PBMC больных РМЖ по сравнению с донорами. Я.В. Кухарев (г.

Томск, 2010), сравнивая функциональные возможности PBMC больных РМЖ до и после химиотерапии, отмечает, что высокая эффективность неоадъювантной химиотерапии прямо коррелирует с уровнем повышенной секреции противовоспалительного IL-10: спонтанная и стимулированная in vitro продукция IL-10 PBMC до лечения у больных с полной регрессией достоверно выше в сравнении с прогрессирующими формами.

В опубликованных работах обсуждаемые сывороточные концентрации медиатора не превышают физиологических значений, продукция IL-10 PBMC онкологических больных изучена недостаточно, исследования по влиянию полиморфных вариантов гена IL-10 на уровни медиатора не проводились, поэтому необходимо провести анализ концентраций IL-10 в сыворотке, интактных и стимулированных PBMC в регионах между донорами и больными со злокачественными новообразованиями женских репродуктивных органов.

IL-2. Концентрация IL-2 в сыворотке у доноров и онкологических больных исследована в немногочисленных работах для некоторых мировых популяций.

Forones N. et al., 2001 (Бразилия) отмечают достоверные (р=0,002) повышения сывороточных уровней IL-2 у больных аденокарциномой желудка III-IV стадии по сравнению с донорами. Тугуз А.Р. (2002, Россия) выявлены статистически значимые различия (р0,05) концентраций IL-2 в сыворотках у больных ЗНО разных локализаций. Lyon D. et al., 2008 (Канада) и Erdei E. et al., 2010 (США) отмечают достоверные повышения IL-2 в сыворотках больных РМЖ по сравнению с донорами. В диссертационной работе Садвакасовой Г.С., 2010 (Казахстан) выявлены достоверные различия (р0,05) по сывороточным уровням IL-2 между больными РМЖ IIIа клинической стадии и контрольной группой.

В электронных базах данных (HuGEN, Pubmed) представлены весьма пртиворечивыерезультаты по продукции IL-2 в культуральной среде интактных и стимулированных in vitro PBMC при онкопатологии. Тугуз А.Р. (2002) отмечает снижение продукции IL-2 в группе онкологических больных различных локализаций, что обусловлено блокированием экспрессии мРНК медиатора.

Влияние SNP гена IL-2 на сывороточные уровни, спонтанную и стимулированную in vitro продукцию PBMC в мировых базах данных практически не отражены поэтому представляется (HuGEN, Pubmed), целесообразным провести анализ уровней IL-2 в нативных сыворотках, культуральной среде интактных, стимулированных in vitro PBMC у доноров и больных с неоплазиями в разных этнических группах.

IL-4. Сывороточные уровни IL-4, спонтанная и стимулированная in vitro продукции медиатора у доноров и онкологических больных в мире практически не исследованы. Lyon D. et al. (2008) установили достоверное повышение уровня IL-4 в сыворотке больных РМЖ по сравнению с донорами. Алимходжаева Л.Т.

(2009) отмечает функциональную активность противовоспалительного IL-4 у больных РМЖ. Достоверное повышение концентрации IL-4 в сыворотках доноров по сравнению с больными ЗНО разных локализаций показано в диссертационном исследовании Тугуз А.Р. (2002).

В работах Gooch J. et al. (1998) и Leland P. et al. (2000) отражена роль только в культуре клеточных линий, но не продукция самого IL-4R противовоспалительного медиатора Кухарев Я.В. (2010), исследуя IL-4.

функциональные возможности PBMC больных РМЖ до и после химиотерапии, отмечает, что недостаточная эффективность неоадъювантной химиотерапии сопряжена с низкой спонтанной секрецией IL-4 и высоким относительным и абсолютным содержанием CD16+-клеток в периферической крови.

Влияние C589T (rs2243250) полиморфизмов гена IL-4 на сывороточные уровни медиатора, спонтанную и стимулированную in vitro продукцию PBMC при злокачественных новообразованиях женских репродуктивных органов в мире не исследованы и не отражены в базах данных Резюме. Актуальность исследования цитокинов в патогенезе злокачественных новообразований обусловлена их ролью в регуляции клеточных эффектов, однако системная циркуляция цитокинов в ряде случаев выходит за пределы медиаторных функций и запускает патологические реакции [Ковальчук Л.В. и др., 2001]. Среди возможных причин нарушения цитокиновой регуляции выделяют мутации и полиорфные варианты генов, ассоциированные с социально значимыми онкологическими и другими заболеваниями.

–  –  –

2.1. Реактивы, тест-системы и материалы Реактивы и среды для выделения и культивирования PBMC Фиколл (плотность 1,077 г/см3), «ПанЭко», г.

Москва Гентамицин (10 мг/мл, 10 мл 1000х раствора), «ПанЭко», г. Москва HEPES (Na-соль, 1М раствор, pH 7,2-7,4), «ПанЭко», г. Москва L-глютамин («ПанЭко», г. Москва) Фитогемагглютинин («ПанЭко», г. Москва) Эмбриональная сыворотка телят (FS) («HyClone», Россия) Среда 199 с солями Хенкса и глутамином («ПанЭко», г. Москва) Среда RPMI-1640 («ПанЭко», г. Москва) Тест-системы для определения уровня цитокинов Концентрации цитокинов IL-2, IL-4, IL-10, IL-17А определены ИФАметодом с использованием коммерческих тест-систем OOO “Цитокин” (г. СанктПетербург).

Тест-системы для выделения ДНК из лейкоцитов периферической крови «ДНК-ЭКСПРЕСС-кровь», НПФ «ЛИТЕХ», г. Москва «ПРОБА–ГС», ООО «НПО ДНК-Технология», г. Москва Тест-системы для SNP-типирования полиморфизмов генов цитокинов Комплекты реагентов для постановки полимеразной цепной реакции (ПЦР) с электрофоретической детекцией результатов (НПФ «Литех», Россия);

Тест-системы для типирования мутаций генов BRCA1/2 Комплекты реагентов для постановки полимеразной цепной реакции в режиме реального времени (РCR-Real Time) - ООО «ДНК-технология», Россия В работе использованы праймеры, синтезированные НПФ «Литех» и ООО «ДНК-технология», Россия (табл. 6).

Таблица 6. Список праймеров, использованных в эксперименте

–  –  –

2.2 Экспериментальные методы 2.2.1 Молекулярно-генетические методы.

Выделение ДНК. Образцы геномной ДНК обследованных лиц выделены из лейкоцитов цельной крови, стабилизированной ЭДТА в вакуумных пробирках «VACCUETTE» (Австрия) с помощью реагентов «ДНК-экспресс-кровь» (НПФ «Литех», Россия) и «ПРОБА-ГС-ГЕНЕТИКА» (ООО «ДНК-Технология», Россия).

Выделение ДНК по методу НПФ «Литех», Россия. 1000 мкл цельной крови отобраны в пластиковые пробирки на 1,5 мл («Эппендорф» с замком «PCR®TUBES», Axygen, США) отцентрифугированы в режиме 3000 об/мин при комнатной температуре (+18...+25°С) в течение 5 мин для разделения крови.

После удаления плазмы, замороженные при -20°С 1 час форменные элементы разморожены при комнатной температуре. смешаны с равным объемом реактива «ДНК-экспресс-кровь», тщательно перемешаны (10 сек) на вортексе и на 15 минут помещены в предварительно прогретый до 98°С термостат. Затем пробирки охлаждены до 70°С, отцентрифугированы при 8000-14000 об/мин в течение 15 сек (+18...+25°С). Полученный супернатан отобран в пластиковые пробирки и использован в качестве исследуемого образца ДНК с режимом хранениния -30°С до 6 месяцев.

Вылеление ДНК с использованием наборов «ПРОБА-ГС-ГЕНЕТИКА» ООО «ДНК-Технология», Россия. Смешивали в отдельной пробирке: 150х(N+1) мкл лизирующего раствора, 20х(N+1) предварительно ресуспендированного сорбента, (где N – количество анализируемых образцов с учётом отрицательного контроля).

Вносили по 170 мкл полученной смеси в промаркированные пробирки и добавляли 100 мкл периферической крови, перемешанной на вортексе и термостатировали при 50°С в течение 10 мин. Затем пробирки центрифугировали в микроцентрифуге СМ-50 ПЦР («Elmi», Латвия) при 13000 об/мин 1 мин, удаляли надосадочную жидкость и добавляли к осадку 400 мкл промывочного раствора №1, 200 мкл – №2, 200 мкл – №3, встряхивали на вортексе, центрифугировали при 13000 об/мин в течение 1 мин. удаляли надосадочную жидкость, 5 мин термостатировали при 50°С, добавляли 300 мкл элюирующего раствора, повторно термостатировали и центрифугировали при тех же условиях.

Аликвоты надосадочной жидкости, содержащей геномную ДНК использовали при SNP-типировании или хранили в замороженном состоянии при -30°С в течение года.

Анализ качества образцов геномной ДНК. Чистота образцов ДНК тестирована на спектрофотометре «NanoDrop 2000c» (Termo Scientific, США), основанном на измерении оптической плотности раствора ДНК в области белкового и нуклеинового спектров поглощения: 280 и 260 нм. Соотношение оптических плотностей, полученных при 280/260 нм превышало 1.8, что соответствует высокой чистоте образцов ДНК [В.А. Голенченко, 2003].

ПЦР с электрофоретической детекцией (ПЦР-ЭФ).

Амплификация ПЦР. В соответствии с инструкциями фирмы исготовителя амплификация проб и отрицательного контроля проводен в пластиковых пробирках на 200 мкл с плоскими крышками PCR®TUBES (Axygen, США). Для

–  –  –

Электрофорез в агарозном геле. Детекция продуктов амплификации проведена методом горизонтального электрофореза в 3% агарозном геле с 1% бромистым этидием (НПФ «Литех», Россия) в электрофоретической камере (SUB

– CELL GT «Bio-Rad», США) при напряженности электрического поля 10-15 В/См, после внесения в лунки агарозного геля амплификата (15-20 мкл) в последовательности, соответствующей нумерации проб. Контроль над электрофоретическим разделением осуществлен визуально по движению полосы красителя от старта на 1,5-2 см (время разгонки 30±2 мин.).

Визуализация и интерпретация результатов электрофореза. Результаты исследований визуализированы при УФ-облучении (длина волны 310 нм) в трансиллюминаторе (Gel Doc XR, «Bio-Rad», США) с помощью программы США). Наличие сигнала определялось по «Quantity One» («Bio-Rad», интенсивности свечения полос ампликонов (рис. 9):

Рис.9 Иинтерпретация результатов горизонтального электрофореза в агарозном геле:

N – нормальная аллель; Р – патологическая аллель;

1 – контрольный образец;

2,3,5,7– гетерозигота;

4,6,8 – нормальная гомозигота;

9 – мутантная гомозигота.

ПЦР в режиме реального времени. РCR-Real Time проводили в термоциклере ДТ-Lite (ООО «ДНК-Технология», Россия) в объеме 35 мкл реакционной смеси по программе амплификации, представленной в таблице 8.

Состав реакционной смеси: по 0,20 мкМ каждого оригинального праймера; по 200 мкМ нуклеозидтрифосфата; 1,0 единица активности Тaq-полимеразы; буфер для ПЦР (670 мМ трис pH 8,4, 166 мМ сульфата аммония, 20 мМ MgCl2 и 100 мМ меркаптоэтанол); сигнальные зонды с флуоресцентными метками FAM и HEX, минеральное масло в объеме 20 мкл. Детекция и учёт результатов осуществлялись амплификатором автоматически. На графике (рис. 10) отображена зависимость флуоресценции от температуры плавления для каждой пробирки в термоблоке.

Рис. 10 Пример интерпретации результатов ПЦР-РВ (5382insC)

–  –  –

2.2.2 Культуральные работы.

Подготовка сыворотки. После забора в пробирки с Serum Clot Activator «VACCUETTE» (Австрия), образцы венозной крови инкубированы 30 мин в термостате при 37оС. Образовавшиеся сгустки обведены пастеровской пипеткой для отделения от стенки пробирки и помещены для ретракции сгустка в холодильник при 4оС и через 30 мин отцентрифугированы в режиме 3000 об/мин (15 мин). Аликвоты сыворотки отобраны в промаркированные пластиковые пробирки и помещены в морозильную камеру при -70 о С.

Выделение Мононуклеарные клетки периферической крови PBMC.

выделены из стабилизированной гепарином (25ед/мл) периферической крови на одноступенчатом градиенте фиколла («Histopaque», плотность 1.077, «Sigma», США), центрифугированием при 4oС и 400g в течение 30 минут. Лимфоидные клетки, образовавшие интерфазное кольцо, собраны пипеткой и трехкратно отмыты средой 199 («ПанЭко», Москва). После каждой отмывки в 10-кратном объеме среды, клетки осаждены центрифугированием при 1000 об/мин и 4oС.

Ресуспендированные в 1 мл среды PBMC разведены рабочей культуральной средой (фосфатным солевым буфером) до концентрации 2-5106 клеток/мл.

Подсчет PBMC проведен в 25 больших квадратах камеры Горяева по формуле:

N = a501000, где: N – общее количество нейтрофилов в 1 мл среды, а – количество нейтрофилов в 25 больших квадратах камеры Горяева Постановка спонтанной и стимулированной продукции цитокинов.

При исследовании продукции цитокинов выделенные PBMC культивированы в концентрации 2-5106 кл/мл в 24-луночных плоскодонных планшетах в среде RPMI-1640 с добавлением 10% эмбриональной сыворотки крови телят, 80 мкг/мл гентамицина в течение 18 часов в СО2 – инкубаторе («Sanyo», Япония) при 37°С и 5% СО2 (спонтанная продукция) и в присутствии ФГА (5 мкг/мл, «ПанЭко», Москва) (стимулированная продукция).

45 ELISA – твердофазный иммуноферментный анализ.

Для определения уровня цитокинов использован твердофазный сэндвичИФА. Антитела к одному из эпитопов сорбированы на твердой фазе, испытуемая проба добавлена к твердой фазе и инкубирована при соответствующих условиях.

После трехкратной отмывки, в лунки добавлены коньюгированные с биотином антитела ко второму эпитопу определяемого антигена – вторые антитела. В тестсистемах для определения IL-2, IL-4, IL-17А, IL-10 в качестве индикаторного фермента использована пероксидаза хрена, конъюгированная со стрептавидином, имеющим сродство к биотину. После инкубации в лунки внесен субстрат с пероксидом водорода (Н2О2) для измерения активности связанного фермента;

реакция остановлена добавлением 1N раствор Н2SO4.

Учет результатов произведен на в 96-плашечном спектрофотометре («BioRad», США) при длине волны 450 нм. Образцы сыворотки протестированы в триплетах, в расчетах использованы вычисленные средние значения оптической плотности.

2.3 Контингент обследованных лиц

В проспективное исследование включено 343 женщин, представленных этническими группами адыгов (n=83), русских (n=242) и других национальностей (n=18), проживающих в Республике Адыгея, (табл. 9-10). Группа онкологических больных сформирована из 172 пациенток (средний возраст 52,8±9,8 лет) Адыгейского республиканского клинического онкологического диспансера (АРКОД) г. Майкопа (2011-2013гг.) с гистологически верифицированными диагнозами злокачественных новообразований женских репродуктивных органов, без учета семейной истории заболевания. Доноры (n=171) 18-72 лет (средний возраст 31,3±13,8 лет) подобраны эмпирически, без клинических проявлений онкопатологии. Исследование проведено с соблюдением принципов добровольности и конфиденциальности в соответствии с ФЗ РФ от 21 ноября 2011 г. № 323-ФЗ «Об основах охраны здоровья граждан в Российской Федерации».

Таблица 9. Этнический и возрастной состав доноров

–  –  –

21-30 7 26 1 34 31-40 3 8 0 11 41-50 3 20 0 23 51-60 8 14 0 22 61-70 1 6 0 7

–  –  –

21-30 0 4 0 4 31-40 1 5 1 7 41-50 7 30 2 39 51-60 8 41 6 55 61-70 7 30 1 38

–  –  –

Группа онкологических больных распределена с учетом основного заболевания, гистологических вариантов и стадий по системе TNM (TNM.

Classification of malignant tumours) (табл. 11-12).

Таблица 11. Распределение больных по нозологиям и гистологическим вариантам

–  –  –

2.4. Статистическая обработка данных Распределение генотипов по исследованным полиморфным локусам проверяли на соответствие равновесию Харди-Вайнберга с помощью критерия 2 (хи - квадрат). Описательная статистика групп представлена в формате: значения медианы (Ме), 25-го и 75-го квартилей (Ме, 25% 75%). Под частотой генотипа и аллеля понимали долю, отнесенную к общему количеству генотипов (или аллелей) в исследуемой группе. Частоты генотипов, гаплотипов и аллелей генов цитокинов выражали в долях единицы.

Сравнительный статистический анализ частот генотипов, гаплотипов и аллелей генов цитокинов опытной и контрольной групп проведен с использованием U-критерия Манна-Уитни. Достоверность различий концентраций цитокинов в образцах сывороток, культуральной среде мононуклеарных клеток периферической крови доноров и больных определяли с использованием параметрического критерия Стьюдента (t). Различия считались статистически значимыми при р0,05. Расчеты проводили с использованием пакета программ SPSS Statistics 17.0 (Inc., Chicago, USA).

–  –  –

3.1 Мутации генов BRCA1/2 при злокачественных новообразованиях женских репродуктивных органов у жителей РА Функции генов-супрессоров опухолевого роста BRCA1/2, связанные с поддержанием стабильности генетического аппарата клеток, репарации ДНК, обеспечивают целостность генома [Wang Y. et al., 2000]. Мутации и многочисленные полиморфные варианты генов BRCA1/2, снижающие супрессивный эффект продуктов генов BRCA1/2 на опухолевые клетки и обуславливающие развитие ЗНО молочной железы, желудка и др. локализаций, неравномерно распределены в мировых популяциях, исследованы для жителей центральных регионов России, Сибири, г. Краснодара без учета их этнической принадлежности [Grudinina et al., 2005; Krylova et al., 2006; Смирнова, 2008;

Порханова, 2009; Любченко, 2009; Часовникова и др., 2010; Поспехова, 2011;

Шубин, 2011; Фарахтдинова, 2012; Лобейко, 2012]. В соответствии с поставленными задачами, впервые у жителей Республики Адыгея проанализированы этногенетические особенности в распределении мутаций генов BRCA1/2 в норме и при онкопатологии.

Частоты мутаций генов BRCA1/2 у доноров и онкологических больных.

Распределение мутаций генов-супрессоров BRCA1/2 при злокачественных новообразованиях женских репродуктивных органов проанализировано у 153 женщин, в том числе 83 онкологических больных и 70 доноров двух этнических групп (адыгов и русских), проживающих в РА (табл. 13).

Таблица 13. Частоты исследованных мутаций генов BRCA1/2 у онкологических больных РА

–  –  –

В обследованной группе больных РА (n=56) только у одной (1,8%) женщины в возрасте 33 лет с протоковым раком, инфильтрирующим в регионарные лимфоузлы и гистологически верифицированной низкодифференцированной аденокарциномой молочной железы (IIIa стадии), выявлена мутация гена BRCA1 – 5382insC, наиболее распространенная преимущественно у евреек-Ашкенази и европейских женщин, проживающих в Румынии, Белоруссии, Украине, Италии, других странах Европы и мира (табл.2).

Однако мутация гена BRCA1 – 5382insC в других этнических группах населения мира не является маркерной при ЗНО женских репродуктивных органов (Приложение А).

Полученные данные по РА согласуются с результатами, опубликованными в международных базах (HuGEN, Pubmed) для жителей Бельгии (0,2% - K.Claes et al., 2004), Германии (1,1% - U.Hamann et al., 2003), Польши (1,9% - I.Brozek et al.,

2011) и Чили (0% - L.Jara et al., 2006), некоторых регионов России (1,9% O.B.Chasovnikova et al., 2010), но существенно отличаются от результатов, полученных для жительниц граничащего с РА Краснодарского края, где частота мутации гена BRCA1 – 5382insC при РМЖ составила 19,1% [Порханова Н.В., 2009]. Следовательно, мутации генов BRCA1/2, в том числе и 5382insC BRCA1, используемые в мировых популяциях для диагностики наследственных форм РМЖ и других новообразований, у жительниц РА не имеют прогностической значимости и не могут быть рекомендованы в качестве маркерных генов при неоплазиях.

3.2 Полиморфизмы генов про- и противовоспалительных цитокинов Низкий процент выявляемости мутаций BRCA1/2 у жителей РА, как и в других регионах мира, предполагает необходимость поиска более информативных генов-кандидатов, вовлеченных в патогенез неоплазий женских репродуктивных органов. В соответствии с медиаторной концепцией канцерогенеза или так называемой цитокиновой теорией развития заболеваний [Симбирцев А.С., 2013], перспективными маркерами опухолевого роста являются гены про- и противовоспалительных цитокинов. Полиморфные варианты промоторных и кодирующих регионов генов цитокинов могут запускать патогенетические механизмы цитокин-опосредованных заболеваний, в том числе и онкологических.

Распределение SNP промоторных регионов генов IL-17 (IL-17А и ILF) у доноров и онкологических больных.

В основе многих патологических состояний организма – трансформация базовой воспалительной реакции, в которой ведущая роль принадлежит провоспалительным цитокинам и, в частности, IL-17 – основному медиатору воспаления [Numasaki et al., 2003; Paunovic et al., 2008; Zhu X. et al., 2008; Chen S.

et al., 2010]. IL-17А и IL-17F, гены которых возможно сцеплено наследуются, кодируют идентичные на 50% белковые молекулы. Полиморфизмы генов IL-17А (rs2275913) и IL-17F (rs763780), вовлеченные в патогенез многих системных заболеваний, в том числе и онкологических, рассматриваются совместно [Wu, 2010; Paradowska-Gorycka et al., 2010; Quan Y. et al., 2012], однако в России, ЮФО и в РА не исследованы.

Для исследования роли полиморфных вариантов G197A гена IL-17А и His161Arg (7488A/G) гена IL-17F в патогенезе злокачественных новообразований

–  –  –

Учитывая этногенетические особенности распределения полиморфизмов генов в мировых популяциях, проанализированы частоты исследуемых аллелей в этнических группах доноров и больных РА (табл. 15).

–  –  –

В группах русских женщин с РМЖ, РШМ, РТМ и РЯ преобладают гомозиготные генотипы: G197G IL-17A (р=0,11) и His161His IL-17F (р=0,08), достоверно (р=0,017) повышена частота G197 аллели IL-17A, ассоциированная с ЗНО женских репродуктивных органов преимущественно у этнических русских.

Для этнических адыгов по G197/197А генотипам и G/A аллелям гена IL-17А достоверных различий не выявлено (р0,05), тогда как носительство гетерозиготного His161Arg (A7488G) генотипа и 161Arg (7488G) аллели гена ILF ассоциировано с риском развития ЗНО женских репродуктивных органов (соответственно р=0,002 и 0,003).

Таким образом, для разных этнических групп экспериментально установлены достоверные различия по SNP двух представителей семейства IL-17 (IL-17А, IL-17F). У русских женщин с неоплазиями ассоциированы SNP промоторного региона гена IL-17А, а у адыгов – SNP IL-17F, влияющий на структуру белкового продукта.

G197/197A полиморфизмы гена IL-17А и His161/161Arg гена IL-17F при опухолевой прогрессии.

Частоты G197/197A полиморфизмов гена IL-17А и His161/161Arg гена ILF исследованы в зависимости от степени дифференцировки аденокарциномы и вовлеченности регионарных лимфатических узлов (таблицы 16-17).

–  –  –

В зависимости от метастазирования опухолевого процесса в лимфатические узлы выявлены достоверные различия по частотам SNP, генотипам IL-17A и ILF. При распространенных формах ЗНО женских репродуктивных органов достоверно чаще выявляются G197 аллель (р=0,008) и G197G генотип IL-17A (р=0,040), A7488 (His161) аллельный вариант и A7488А (His161His) генотип (р=0,050 и 0,037 соответственно) IL-17F, что определяет их как прогностически неблагоприятный маркер опухолевой прогрессии.

Таблица 17. Соотношение частот rs2275913 IL-17А и rs763780 IL-17F с уровнем дифференцировки аденокарциномы

–  –  –

С прогностически неблагоприятными гистотипами низкодифференцированной аденокарциномы ассоциирована G197 аллель IL-17A (р=0,031).

Статистически значимых различий по His161 (A7488) и 161Arg (7488G) аллелям гена и генотипам IL-17F не установлено.

При анализе сочетанного носительства полиморфизмов генов двух исследованных цитокинов IL-17А (G197/197A) и IL-17F (His161/161Arg) у больных со злокачественными новообразованиями женских репродуктивных органов частоты G197-161Arg и 197А-His161 полиморфизмов двух генов у онкологических больных повышены и достоверно (р=0,008) отличаются от группы контроля. Наличие 161Arg полиморфизма в структурной области гена ILF и G аллели в 197 позиции промоторного региона гена IL-17А является фактором повышенного риска развития ЗНО.

G1082A, C819Т и C592A полиморфизмы гена противовоспалительного IL-10

В промоторном регионе гена IL-10 идентифицирован ряд SNP, из которых наиболее изучены G1082A (rs1800896), C819Т (rs1800871) и C592A (rs1800872), влияющие на транскрипцию мРНК и экспрессию IL-10 [Gibson et al., 2001; Jong et al., 2002].

С целью выявления SNP IL-10, ассоциированных у жительниц РА с онкопатологией, обследовано 114 женщин двух этнических групп (адыгов и русских), в том числе 49 доноров, 65 онкологических больных с I-IV стадиями ЗНО женских репродуктивных органов: РМЖ (n=54), РТМ (n=10); РШМ (n=1).

Гистологически у 63 женщин верифицирована аденокарцинома 1-3 степени злокачественности. Распределение генотипов и аллельных вариантов IL-10 проанализировано в норме и при онкопатологии в общих выборках доноров и больных с ЗНО женских репродуктивных органов (табл. 18).

В общих выборках доноров и онкологических больных, независимо от гистотипов, локализации и распространенности опухолевого процесса достоверных различий по частотам трех исследованных SNP не выявлено, что согласуется с исследованиями, проведенными в других регионах мира [Onay et al., 2006; Ivansson et al., 2007; Singh et al., 2009].

Таблица 18. Частоты SNP гена IL-10 в общих выборках доноров и онкологических больных

–  –  –

Учитывая этногенетические особенности распределения полиморфизмов генов в мировых популяциях, нами проанализированы частоты исследуемых аллелей в норме и при РМЖ для этнических групп адыгов и русских, проживающих в РА (табл. 19).

РМЖ у жительниц РА в зависимости от их этнической принадлежности ассоциирован с разными SNP гена IL-10: у этнических адыгов по аналогии с европейцами повышена частота 592A аллели (р=0,02), а у русских женщин – 819T полиморфизма гена IL-10 (р=0,04) [Langsenlehner et al., 2005; Благодатских А.Е. и др., 2011].

–  –  –

Распределение SNP гена IL-10 при опухолевой прогрессии.

Влияние 1082G/A, 819C/T, 592C/A полиморфизмов гена IL-10 на опухолевую прогрессию проанализировано при РМЖ в зависимости от степени дифференцировки аденокарциномы и вовлеченности регионарных лимфатических узлов (табл. 20).

При анализе распределения частот генотипов и аллелей исследованных SNP трех локусов (1082, 819 и 592) промоторного региона гена IL-10 у больных РМЖ в зависимости от опухолевой прогрессии статистически значимые различия выявлены по двум SNP: G1082A (rs1800896) и C819T (rs1800871).

–  –  –

Примечание: * р0,05 У больных с метастазами в регионарные лимфатические узлы достоверно (р=0,05) повышена частота 819T аллели, ассоциированная с опухолевой прогрессией РМЖ (табл. 20). Низкодифференцированная аденокарцинома в сравнении с высокодифференцированным гистотипом сопряжена с G1082 аллелью гена IL-10 (р=0,03), что является неблагоприятным фактором прогнозом.

Аллельная гетерогенность и гаплотипы 592, 819, 1082 локусов гена IL-10

Фенотипические различия в устойчивости и предрасположенности к целому ряду заболеваний обусловлены единичными нуклеотидными заменами (SNP) и «аллельным полиморфизмом генов». В промоторных регионах генов SNP регулируют экспрессию генов и уровни продукции медиаторов иммунной системы, что особенно важно в отношении основного противовоспалительного подавляющего активность макрофагов, продукцию цитокинов ТIL-10, хелперами, цитотоксический ответ, противоопухолевый иммунитет и др.

защитные реакции организма [Turner et al., 1997; Bidwell et al., 1999]. IL-10 вовлечен в патогенез широкого спектра онкологических заболеваний и при некоторых неоплазиях оверэкспрессия IL-10 сочетается с выраженной опухолевой прогрессией, что является плохим прогностическим признаком [Turner et al., 1997;

Gibson et al., 2001].

В современных базах данных (HuGEN, Pubmed) сочетанное носительство аллельных вариантов промоторного региона гена IL-10 в виде гаплотипов исследовано только для азиатских популяций, Ирана, Турции [Roh et al., 2002;

Abdolrahim-Zadeh et al., 2005; Gonullu et al., 2007; Kong et al., 2010]. При отсутствии аналогичных работ в России, научный интерес представляет поиск возможных гаплотипов, ассоциированных с онкопатологией в этнических группах населения РА. По всем возможным вариантам ATA, ACC, GCA, GCC, GTA, ACA, ATC, GTC гаплотипов трех сайтов промоторного региона (592, 819, 1082) гена ILпроанализирована ассоциация с РМЖ (табл. 21).

Статистически значимые различия в группах доноров и онкологических больных (табл. 21) выявлены по трем парам гаплотипов IL-10: ATA/ACC (р=0,047), ACC/GCA (р=0,004) и GCA/GCC (р=0,039).

Таблица 21. Частоты гаплотипов промоторного региона гена IL-10 у доноров и больных РМЖ

–  –  –

Примечания: * р0,05 при сравнении ATA/ACC; ** р0,05 при сравнении ACC/GCA; *** р0,05 при сравнении GCA/GCC С неоплазиями молочной железы ассоциированы ATA и GCA гаплотипы противовоспалительного IL-10. Экспериментально установлено, что 1082G/A, 819C/T, 592C/A полиморфизмы промоторного региона гена IL-10 у жительниц РА ассоциированы со злокачественными новообразованиями женских репродуктивных органов в зависимости от их этнической принадлежности: 592A аллель (р=0,02) у адыгов и 819T аллель – у русских женщин (р=0,04).

Таким образом, опухолевая прогрессия с вовлечением регионарных лимфоузлов (T1-4N1-3M0), у русских и адыгов с диагнозом РМЖ ассоциирована с 819T аллелью, а с прогностически неблагоприятным гистотипом низкодифференцированной аденокарциномы – 1082G полиморфизм гена IL-10.

ATA или GCA гаплотипы IL-10 являются информативными маркерами риска развития РМЖ.

T330/330G аллели и генотипы гена IL-2

Противоопухолевые эффекты реализуются путем повышения IL-2 цитотоксичности Т-лимфоцитов, лимфокин-активированных и естественных киллеров [Rosenberg, 2001; Oppenheim, 2007; Malek et al., 2010]. Однако пролиферативная активность IL-2 в отношении антиген-активированных Тлимфоцитов предполагает его вовлеченность в патогенез новообразований, Участие IL-2 в канцерогенезе связано с полиморфизмами гена в промоторных регионах, регулирующих интенсивность экспрессии и биологические эффекты медиатора [Motoyama et al., 2011; Song et al., 2012].

Роль T330G SNP (rs2069762) гена IL-2 в патогенезе злокачественных новообразований исследована у 104 женщин двух этнических групп (адыгов и русских), проживающих в РА, в том числе в образцах ДНК 51 донора и 53 онкологических больных (табл. 22).

–  –  –

Частоты аллелей и генотипов гена IL-2 в общих выборках доноров и онкологических больных не различались (р0,05), поэтому нами проанализированы частоты T330G (rs2069762) SNP в зависимости от этнической принадлежности обследованных лиц (табл. 23).

Таблица 23. Этногенетический анализ распределения SNP гена IL-2 в норме и при неоплазиях женских репродуктивных органов

–  –  –

По частотам исследованных SNP гена IL-2 в обследованных группах русских и адыгов экспериментально не установлено межэтнических различий, что не согласуется с данными, полученными в работах для жителей других регионов мира [Hu X.B. et al., 2013].

В международных электронных базах данных HuGEN, Pubmed не представлена информация об ассоциации T330G полиморфизмов гена IL-2 с опухолевой прогрессией, поэтому нами впервые в мире проанализировано распределение аллельных вариантов гена в зависимости от степени дифференцировки аденокарциномы, вовлеченности регионарных лимфатических узлов в опухолевый процесс у больных с верифицированным диагнозом рака молочной железы (табл. 24).

Таблица 24. Распределение SNP гена IL-2 у больных РМЖ в зависимости от степени дифференцировки аденокарциномы и метастазирования в регионарные лимфоузлы

–  –  –

Примечание: * р0,05 У больных с метастазами в регионарные лимфатические узлы достоверно (р=0,03) повышена частота Т330 аллеля IL-2, ассоциированная с опухолевой прогрессией и неблагоприятным фактором прогноза течения РМЖ. Достоверных различий по частотам генотипов и аллелей Т330G гена IL-2 в зависимости от степени дифференцировки аденокарциномы не выявлено (табл. 24).

C589Т полиморфизмы гена IL-4

Противовоспалительный IL-4 – фактор дифференцировки Т- и Влимфоцитов с широким спектром биологических свойств, участвует в иммунных реакциях и неопластических процессах, способствуя опухолевому росту и может проявлять противоопухолевую активность. Двойственность поведения основного противовоспалительного медиатора обусловлена единичными нуклеотидными заменами, регулирующими уровень его экспрессии и биологическую активность [Gooch et al., 1998; Nagai et al., 2000].

В промоторном регионе гена IL-4 при неоплазиях типированы полиморфные варианты, из которых наиболее изучен С589Т (rs2243250) в основном для жителей Китая, Индии [Konwar R. et al., 2009; Joshi N. et al., 2013].

Аналогичные исследования в России не проводились, поэтому с целью выявления возможной ассоциации полиморфного локуса rs2243250 гена IL-4 с ЗНО женских репродуктивных органов, генотипировано 103 образца ДНК в группах здоровых и больных женщин двух этнических групп (адыгов и русских), проживающих в РА, в том числе 51 доноров, 52 больных (табл. 25).

Таблица 25. Частоты C589Т полиморфизмов гена IL-4 в общих выборках доноров и больных

–  –  –

Примечание: * р0,05 В общей выборке онкологических больных по сравнению с донорами статистически значимо повышены частоты T589T генотипа (р=0,007) и 589T аллеля (р=0,0009). Экспериментальные данные, полученные для жителей РА, отличаются от результатов аналогичных исследований в разных регионах мира:

Китае, Индии [Konwar R. et al., 2009; Joshi N. et al., 2013].

Учитывая этногенетические особенности распределения полиморфных вариантов генов в мировых популяциях и ассоциированности с заболеваниями, нами типированы частоты исследуемых SNP гена IL-4 в этнических группах адыгов и русских (табл. 26).

Таблица 26. Анализ распределения SNP гена IL-4 в норме и при злокачественных новообразованиях органов женской репродуктивной системы

–  –  –

Примечание: * р0,05 В группе обследованных больных независимо от этнических различий статистически значимо повышена частота 589Т аллели IL-4 (табл.26), ассоциированная с онкопатологией. Следовательно, 589Т аллель гена IL-4 может быть использована в качестве маркера риска развития злокачественных новообразований у русских и адыгов.

Частоты полиморфизмов гена IL-4 при метастазировании в регионарные лимфатические узлы, а также в зависимости от степени дифференцировки аденокарциномы проанализированы нами при РМЖ (табл. 27).

Впервые на основе экспериментальных данных показано, что метастазирование в регионарные лимфатические узлы достоверно (р=0,03) сопряжено с повышением частоты 589T аллеля, ассоциированной с опухолевой прогрессией и неблагоприятным фактором прогноза течения РМЖ (табл. 27).

Таблица 27. Частоты SNP гена IL-4 при РМЖ в зависимости от степени дифференцировки аденокарциномы и метастазирования в регионарные лимфатические узлы

–  –  –

Примечание: * р0,05 В зависимости от степени дифференцировки аденокарциномы статистически значимых различий по C589С, С589T, Т589T генотипам и C589/589T аллелям гена IL-4 не установлено. Патогенетическая роль 589T аллеля гена IL-4 в опухолевой прогрессии, возможно, связана с регуляцией уровня экспрессии медиатора и сочетанием с другими единичными нуклеотидными заменами [Zhu J. et al., 2010; Kwon et al., 2011].

А1188/1188С аллели и генотипы гена IL-12В

–  –  –

физиологические эффекты в качестве сильного индуктора IFN и других цитокинов T- и NK-клетками периферической крови, генерирует противоопухолевый клеточный иммунитет [Paunovic et al., 2008; Rao et al., 2008;

Кетлинский, 2008].

Наиболее изученные в мировых популяциях А1188С SNP гена IL-12B в РФ и РА не типированы. Ассоциации A1188C SNP гена IL-12B со злокачественными новообразованиями женских репродуктивных органов проанализированы в общих группах доноров (n=51) и больных (n=53) (табл. 28).

Таблица 28. Распределение генотипов и А1188/1188С аллелей гена IL-12В в общих выборках доноров и онкологических больных

–  –  –

Примечание: * р0,05 В общих выборках доноров и онкологических больных статистически значимые отличия (р=0,05) найдены по частотам аллельных вариантов, но не генотипов провоспалительного IL-12В (табл. 28). Аналогично исследованиям Kaarvatn M.H. et al. (2012) для жительниц Норвегии с диагнозом РМЖ, экспериментально нами показано достоверное повышение частоты А1188 аллели в группе больных по сравнению с донорами.

Этнические особенности в распределении частот исследуемых SNP гена ILВ в норме и при онкопатологии представлены в табл. 29. В группе русских женщин выявлены определенные закономерности: у больных по сравнению с донорами достоверно повышены частоты А1188А генотипа (р=0,004) и А1188 аллели (р=0,002) гена IL-12В. Полученные данные не согласуются с работами авторов Европы, Китая, Индии и Южной Кореи, которые отмечают ассоциированность «мутантного» 1188С аллеля и гетерозиготного A1188C генотипа гена IL-12В с РШМ [Han S.S. et al., 2008; Chen X. et al., 2009; Tamandani D. et al., 2009; Roszak A. et al., 2012].

Таблица 29. Этногенетический анализ распределения SNP гена IL-12В в норме и при неоплазиях

–  –  –

Примечание: * р0,05 Для этнических адыгов статистически значимых отличий по исследованным SNP нами не установлено.

Ассоциация полиморфизмов гена IL-12В с опухолевой прогрессией в зависимости от степени дифференцировки аденокарциномы и вовлеченности регионарных лимфатических узлов в опухолевый процесс при раке молочной железы отражена в таблице 30.

Таблица 30. Частоты SNP гена IL-12В при РМЖ в зависимости от степени дифференцировки аденокарциномы и метастазирования в регионарные лимфоузлы

–  –  –

Примечание: * р0,05 У больных с метастазами в регионарные лимфатические узлы достоверно (р=0,04) повышена частота А1188 аллели IL-12В, что позволяет рассматривать ее как ассоциированную с опухолевой прогрессией и неблагоприятным фактором прогноза течения РМЖ. Однако в зависимости от степени дифференцировки гистотипов аденокарциномы достоверных различий по генотипам и аллелям провоспалительного гена IL-12В не выявлено.

3.3 Сывороточные уровни, спонтанная и стимулированная in vitro продукция цитокинов PBMC IL-17А Вовлеченность IL-17А в патогенез аутоиммунных, сердечно-сосудистых и онкологических заболеваний путем активации Т-лимфоцитов, клеточной адгезии, стимулирования пролиферации эндотелиоцитов, мезенхимальных стволовых клеток, опухолевых клеток in vitro обуславливает необходимость исследования сывороточных концентраций, продукции в культуре интактных IL-17А мононуклеарных клеток периферической крови и при активации in vitro ФГА у доноров и обследованных больных со злокачественными новообразованиями огранов женской репродуктивной системы (табл. 31).

Таблица 31. Уровни IL-17A в сыворотках, культуральной среде PBMC доноров и больных ЗНО женских репродуктивных органов

–  –  –

Примечания: М – средняя арифметическая; m – стандартная ошибка среднего;

Me- медиана; t- критерий Стьюдента Для большинства медиаторов иммунной системы низкие сывороточные концентрации, в норме не превышающие 100 pg/ml, сочетаются с высоким уровнем спонтанной и стимулированной продукции в культуре PBMC. Однако по IL-17А у обследованных больных и доноров выявлены чрезвычайно высокие сывороточные уровни IL-17A, варьирующие в диапазоне значений 2003-2624 превышающие pg/ml (M±m=2218,2±214,8/2561,6±62,8; Me=2308,8/2496,6), физиологические нормы для других провоспалительных цитокинов в десятки раз и не имеющие научной ценности. В культуральной среде интактных и стимулированных ФГА доноров и больных с онкопатологией PBMC концентрации IL-17A достоверно отличались от сывороточных значений (табл.

31). Интактные PBMC онкологических больных по сравнению с донорами характеризовались достоверно сниженной продукцией IL-17A и отсутствием стимуляции при инкубации с ФГА (Me: 0/36,8; 0/92,1 соответственно).

Полученные данные по спонтанной и стимулированной продукции IL-17A PBMC больных подтверждают клеточную ареактивность онкологических больных по медиаторному звену иммунной системы.

Уровни спонтанной и стимулированной продукции IL-17A PBMC больных в зависимости от степени дифференцировки аденокарциномы, вовлечения регионарных лимфатических узлов проанализированы при РМЖ (таблицы 32-33).

Таблица 32. Концентрации IL-17А в сыворотке, PBMC больных РМЖ в зависимости от степени дифференцировки аденокарциномы

–  –  –

Примечания: М – средняя арифметическая; m – стандартная ошибка среднего; Meмедиана; t- критерий Стьюдента Таблица 33. Уровни продукции IL-17А PBMC больных с метастазами в регионарные лимфатические узлы

–  –  –

При высоко- и низкодифференцированных гистотипах аденокарциномы с вовлечением регионарных лимфатических узлов, интактные PBMC больных в подавляющем большинстве случаев (95%, Me =0) не продуцируют IL-17А (табл.

32-33). В отличие от других медиаторов иммунной системы, ФГА не оказывает стимулирующего влияния на синтез этого провоспалительного цитокина.

Согласно полученным экспериментальным данным можно предположить, что in vivo PBMC онкологических больных не являются продуцентами IL-17А, обуславливающими повышенные сывороточные концентрации медиатора.

Поэтому наиболее информативным критерием экспрессии гена IL-17А является способность PBMC продуцировать медиатор и отвечать на стимулирующее влияние ФГА.

IL-10 Ключевой регулятор иммунного ответа IL-10 ингибирует синтез других цитокинов, подавляет экспрессию MHC II класса. При некоторых неоплазиях системное повышение IL-10 сочетается с опухолевой прогрессией и является плохим прогностическим признаком [Gibson et al., 2001], однако, при злокачественных новообразованиях женских репродуктивных органов спонтанная и стимулированная in vitro продукции IL-10 практически не исследованы (HuGEN, Pubmed). Экспериментально нами определены концентрации медиатора в сыворотках, культуральной среде интактных и стимулированных ФГА PBMC у доноров и больных с неоплазиями (табл. 34).

–  –  –

В культуральной среде интактных PBMC больных со ЗНО женских репродуктивных органов IL-10 детектируется в следовых количествах (0-3 pg/ml).

ФГА не оказывает стимулирующего влияния. PBMC доноров в отличие от больных способны к спонтанной и индуцированной ФГА продукции IL-10 (t = 4,99 и 10,32 соответственно).

Уровни продукции IL-10 интактными и стимулированными ФГА PBMC больных с разными вариантами прогностически неблагоприятных гистотипов аденокарциномы, вовлеченности регионарных лимфатических узлов при ЗНО женских репродуктивных органов представлены в таблице 35.

Таблица 35. Продукция IL-10 в культуральных средах PBMC больных в зависимости от опухолевой прогрессии

–  –  –

Примечания: М – средняя арифметическая; m – стандартная ошибка среднего;

Me- медиана; t- критерий Стьюдента: 1- уровня дифференцировки аденокарциномы; 2вовлеченности регионарных лимфатических узлов В зависимости от степени дифференцировки аденокарциномы и метастазирования в лимфатические узлы концентрации IL-10 в сыворотках, культуральной среде интактных и стимулированных ФГА PBMC больных не превышали физиологических значений (Me= 0,4-3,9) и достоверно не различались (табл. 35).

IL-2 Потенциальная роль IL-2 как фактора пролиферации Т-лимфоцитов в канцерогенезе определяется его сигнальными путями, которые ведут к клеточным онкогенам. Содержание этого медиатора иммунной системы в образцах сыворотки (но не в культуральной среде интактных и стимулированных PBMC) исследованы в мировых популяциях для немногочисленных групп доноров и больных со ЗНО различных локализаций [Forones N. et al., 2001; Lyon D. et al., 2008; Тугуз А.Р., 2002]. Экспериментально нами проанализированы концентрации IL-2 у доноров и больных с РМЖ, РТМ, РШМ (табл. 36) в зависимости от степени дифференцировки аденокарциномы и метастазирования в регионарные лимфоузлы (табл. 37).

Таблица 36. Уровни IL-2 в сыворотках, культуральных средах PBMC доноров и больных ЗНО женских репродуктивных органов

–  –  –

Примечания: М – средняя арифметическая; m – стандартная ошибка среднего;

Me- медиана; t- критерий Стьюдента По сравнению с другими цитокинами, сывороточные концентрации IL-2 колеблются в широком диапазоне значений (M±m = 0-428), у доноров и больных со ЗНО достоверно не различаются. Интактные PBMC доноров продуцируют более высокие уровни IL-2 (р0,05), но не стимулируются поликлональным митогеном ФГА.

Таблица 37. Продукция IL-2 в культурах PBMC больных в зависимости от степени дифференцировки аденокарциномы и метастазирования в регионарные лимфатические узлы

–  –  –

Примечания: М – средняя арифметическая; m – стандартная ошибка среднего;



Pages:     | 1 || 3 | 4 |   ...   | 5 |
 

Похожие работы:

«Шинкаренко Андрей Семенович Формирование безопасного и здорового образа жизни школьников на современном этапе развития общества Специальность 13.00.01– общая педагогика, история педагогики и образования Диссертация на соискание ученой степени кандидата педагогических наук Научные...»

«Алексеев Иван Викторович РАЗВИТИЕ КОМПЛЕКСНОГО ИНЖЕНЕРНО-ГЕОЛОГИЧЕСКОГО И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОГО МОНИТОРИНГА НА ЯКОВЛЕВСКОМ РУДНИКЕ ДЛЯ ПОВЫШЕНИЯ БЕЗОПАСНОСТИ ВЕДЕНИЯ ОЧИСТНЫХ РАБОТ ПОД НЕОСУШЕННЫМИ ВОДОНОСНЫМИ ГОРИЗОНТАМИ Специальность 25.00.08 – Инженерная геология,...»

«Цховребова Альбина Ирадионовна ВЛИЯНИЕ ФАКТОРОВ СРЕДЫ НА РАЗВИТИЕ БЕСХВОСТЫХ АМФИБИЙ СЕВЕРНЫХ СКЛОНОВ ЦЕНТРАЛЬНОГО КАВКАЗА Специальность 03.02.14 – биологические ресурсы Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель доктор биологических наук профессор Калабеков Артур Лазаревич Владикавказ 2015 Содержание Ведение..3 Глава I. Обзор литературных данных. 1.1....»

«СЕТДЕКОВ РИНАТ АБДУЛХАКОВИЧ РАЗРАБОТКА НОВЫХ СРЕДСТВ СПЕЦИФИЧЕСКОЙ ПРОФИЛАКТИКИ И ЛЕЧЕНИЯ ЭШЕРИХИОЗОВ ТЕЛЯТ И ПОРОСЯТ 06.02.02 – ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология Диссертация на соискание ученой степени доктора ветеринарных наук Научный консультант: доктор ветеринарных наук, профессор, заслуженный деятель науки РФ и РТ Юсупов...»

«Доронин Максим Игоревич ЭКСПРЕСС-МЕТОДЫ ВЫЯВЛЕНИЯ ВИРУСА ИНФЕКЦИОННОГО НЕКРОЗА ГЕМОПОЭТИЧЕСКОЙ ТКАНИ ЛОСОСЕВЫХ РЫБ 03.02.02 «Вирусология» Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: доктор биологических наук, Мудрак Наталья Станиславовна Владимир 2015 ОГЛАВЛЕНИЕ 1 ВВЕДЕНИЕ 2 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 2.1 Характеристика возбудителя инфекционного...»

«ШУБНИКОВА ЕЛЕНА ВЛАДИМИРОВНА ВЛИЯНИЕ ФИЗИКО-ХИМИЧЕСКИХ ФАКТОРОВ И ФОРМ АДАПТИВНОЙ ИЗМЕНЧИВОСТИ НА ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТЬ ПАТОГЕННЫХ БУРКХОЛЬДЕРИЙ К ХИМИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИМ ПРЕПАРАТАМ 03.02.03 –...»

«АБДУЛЛАЕВ Ренат Абдуллаевич ГЕНЕТИЧЕСКОЕ РАЗНООБРАЗИЕ МЕСТНЫХ ФОРМ ЯЧМЕНЯ ИЗ ДАГЕСТАНА ПО АДАПТИВНО ВАЖНЫМ ПРИЗНАКАМ Шифр и наименование специальности 03.02.07 – генетика 06.01.05 – селекция и семеноводство сельскохозяйственных растений ДИССЕРТАЦИЯ на соискание учёной степени кандидата...»

«Ядрихинская Варвара Константиновна ЭКОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ РАСПРОСТРАНЕНИЯ ОСТРЫХ КИШЕЧНЫХ ИНФЕКЦИЙ В Г. ЯКУТСКЕ И РЕСПУБЛИКЕ САХА (ЯКУТИЯ) 03.02.08 – экология Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель кандидат биологических наук, доцент М.В. Щелчкова Якутск 2015...»

«Куяров Артём Александрович РОЛЬ НОРМАЛЬНОЙ МИКРОФЛОРЫ И ЛИЗОЦИМА В ВЫБОРЕ ПРОБИОТИЧЕСКИХ ШТАММОВ ДЛЯ ПРОФИЛАКТИКИ АЛЛЕРГИЧЕСКИХ ЗАБОЛЕВАНИЙ У СТУДЕНЧЕСКОЙ МОЛОДЕЖИ СЕВЕРА 03.02.03 – микробиология 03.01.06 – биотехнология (в том числе бионанотехнологии) Диссертация на соискание учёной степени кандидата...»

«КЛЁНИНА АНАСТАСИЯ АЛЕКСАНДРОВНА УЖОВЫЕ ЗМЕИ (COLUBRIDAE) ВОЛЖСКОГО БАССЕЙНА: МОРФОЛОГИЯ, ПИТАНИЕ, РАЗМНОЖЕНИЕ Специальность 03.02.08 – экология (биология) (биологические науки) Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: кандидат биологических наук, доцент Бакиев А.Г. Тольятти – 2015 СОДЕРЖАНИЕ ВВЕДЕНИЕ ГЛАВА 1. К...»

«Кириллин Егор Владимирович ЭКОЛОГИЯ ОВЦЕБЫКА (OVIBOS MOSCHATUS ZIMMERMANN, 1780) В ТУНДРОВОЙ ЗОНЕ ЯКУТИИ 03.02.08 – экология Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: д. б. н., профессор Мордосов И. И. Якутск – 2015 Содержание Введение.. Глава 1. Краткая физико-географическая...»

«Цвиркун Ольга Валентиновна ЭПИДЕМИЧЕСКИЙ ПРОЦЕСС КОРИ В РАЗЛИЧНЫЕ ПЕРИОДЫ ВАКЦИНОПРОФИЛАКТИКИ. 14.02.02 – эпидемиология ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени доктора медицинских наук Научный консультант: заслуженный деятель науки РФ, лауреат Государственной премии СССР профессор, доктор медицинских наук Ющенко Галина Васильевна Москва – 20 Содержание...»

«АУЖАНОВА АСАРГУЛЬ ДЮСЕМБАЕВНА ОЦЕНКА ДЕЙСТВИЯ АБИОТИЧЕСКИХ ФАКТОРОВ И БИОПРЕПАРАТА РИЗОАГРИН НА МИКРОБИОЛОГИЧЕСКУЮ АКТИВНОСТЬ ПОЧВЫ, АДАПТИВНОСТЬ И ПРОДУКТИВНОСТЬ ЯРОВОЙ МЯГКОЙ ПШЕНИЦЫ 03.02.08 – Экология Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: доктор...»

«Вафула Арнольд Мамати РАЗРАБОТКА ЭЛЕМЕНТОВ ТЕХНОЛОГИИ ВЫРАЩИВАНИЯ ПАПАЙИ ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ ЗДОРОВОГО ПОСАДОЧНОГО МАТЕРИАЛА И ЭКСТРАКТОВ С БИОПЕСТИЦИДНЫМИ СВОЙСТВАМИ ДЛЯ ЗАЩИТЫ ЕЕ ОТ ВРЕДНЫХ ОРГАНИЗМОВ Специальности: 06.01.07 – защита растений 06.01.01 – общее земледелие и растениеводство Диссертация на соискание ученой степени кандидата сельскохозяйственных...»

«АСБАГАНОВ Сергей Валентинович БИОЛОГИЧЕСКИЕ ОСНОВЫ ИНТРОДУКЦИИ РЯБИНЫ (SORBUS L.) В ЗАПАДНОЙ СИБИРИ 03.02.01 – «Ботаника» ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: к.б.н., с.н.с. А.Б. Горбунов Новосибирск 2014 ОГЛАВЛЕНИЕ ВВЕДЕНИЕ.. 4 Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.. 8 Ботаническая...»

«Брит Владислав Иванович «Эффективность методов вакцинации против ньюкаслской болезни в промышленном птицеводстве» Специальность: 06.02.02 ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени кандидат ветеринарных наук Научный руководитель:...»

«Мансуров Рашид Шамилович Применение препарата Солунат при выращивании бройлеров 06.02.08. – кормопроизводство, кормление сельскохозяйственных животных и технология кормов Диссертация на соискание ученой степени кандидата сельскохозяйственных наук Научный руководитель: доктор биологических наук, профессор, Заслуженный деятель науки Российской...»

«Петро ва Ю лия Геннад ь евна «ШКОЛА УХОДА ЗА ПАЦИЕНТАМИ» ПР И ПР ОВЕДЕНИИ МЕДИЦИНСКОЙ Р ЕАБИЛИТАЦИИ ПОСЛЕ ЦЕР ЕБР АЛЬНОГО ИНСУЛЬ ТА 14.01.11 – нервные болезни ДИССЕРТАЦИЯ на соискание учёной степени кандидата медицинских наук Научный руководитель: доктор медицинских наук, Пряников И.В. профессор Москва – 2015 стр ВВЕДЕНИЕ ГЛАВА 1. СПЕЦИФИКА И ОСОБЕННОСТИ ПРОВЕДЕНИЯ МЕДИЦИНСКОЙ...»

«НГУЕН ВУ ХОАНГ ФЫОНГ ОЦЕНКА ЭКОЛОГИЧЕСКОЙ СИТУАЦИИ КРУПНЫХ ГОРОДОВ В СОЦИАЛИСТИЧЕСКОЙ РЕСПУБЛИКЕ ВЬЕТНАМ Специальность: 03.02.08экология (биология) Диссертация на соискание учёной степени кандидата биологических наук Научный руководитель: доктор биологических наук, профессор Чернышов В.И. Москва ОГЛАВЛЕНИЕ ГЛАВА 1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА...»

«Петухов Илья Николаевич РОЛЬ МАССОВЫХ ВЕТРОВАЛОВ В ФОРМИРОВАНИИ ЛЕСНОГО ПОКРОВА В ПОДЗОНЕ ЮЖНОЙ ТАЙГИ (КОСТРОМСКАЯ ОБЛАСТЬ) Специальность: 03.02.08 экология (биологические науки) Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: доктор биологических наук, профессор В.В. Шутов...»







 
2016 www.konf.x-pdf.ru - «Бесплатная электронная библиотека - Авторефераты, диссертации, конференции»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.