WWW.KONF.X-PDF.RU
БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА - Авторефераты, диссертации, конференции
 


Pages:     | 1 | 2 || 4 | 5 |

«РАЗРАБОТКА СРЕДСТВ ДЕТЕКЦИИ ВЫСОКОВИРУЛЕНТНОГО ШТАММА ВИРУСА ГРИППА А ПОДТИПА Н5N ...»

-- [ Страница 3 ] --

Из рисунка 24 видно, что белок большей частью выделяется в денатурирующих условиях, т.е. в буфере, содержащем 50 мМ имидазола и 6М мочевины.

Это подтверждается анализом рекомбинантного белка NS1 в ПААГ электрофорезе в 12% полиакриламидном геле и методом иммуноблоттинга с моноклональными антителами (мАТ) против полигистидиновых групп, меченных пероксидазой хрена (рисунок 25).

На рисунке 25 на дорожках №5 и №6 хорошо видна специфическая полоса, с молекулярным весом 45 кДа, что соответствует молекулярной массе полученного рекомбинантного белка NS1 в комплексе с гистидиновыми остатками.

–  –  –

97.0 66.2 14.4 А- иммуноблоттинг с использованием мкАТ к His B- SDS-электрофорез тех же фракций Дорожки: 1. лизат микробной массы,

2. фракция, элюированная с сорбента буфером ТБР с 50 мМ имидазола (нативные условия),

3. фракция, элюированная с сорбента буфером ТБР с 250 мМ имидазола (нативные условия),

4. осадок, полученный в нативных условиях, растворённый в ТБР буфере с 6мМ гуанидина гидрохлоридом,

5. фракция, элюированная содержащим мочевину буфером ТБР с 50 мМ имидазола (денатурирующие условия),

6. фракция, элюированная буфером ТБР с 250 мМ имидазола, содержащим мочевину (денатурирующие условия),

7. маркер молекулярного веса в кДа

–  –  –

4.6.2. Проведение непрямого ИФА с рекомбинантным белком NS1.

Рекомбинантный белок NS1 может быть использован для сенсибилизации планшетов в ИФА при определении антител к данному белку в сыворотках крови птиц. Предварительное шахматное титрование с референтными сыворотками показало, что оптимальная концентрация белка NS1 составляет 1 мкг/мл, а сыворотки следует разводить в 100 раз.

Были проверены 5 сывороток от кур, привитых «Флупротект H5»

инактивированной эмульгированной вакциной против гриппа птиц типа А подтипа H5 производства ФГУП «Ставропольская Биофабрика» (серия

040306) и 3 референтные сыворотки от кур, инфицированных вирусом H5N1 (LPAI), предоставленные Др. Д. Л. Суарэсом (USDA Agricultural Research Service (USDA-ARS), South East Poultry Research Laboratory, Атенс, Джорджия, США) (рисунок 26).

Рисунок 26. Результаты иммуноферментного анализа сывороток кур на наличие антител к белку NS1 Как показали результаты эксперимента (рис. 26) уровень антител в референтных сыворотках от кур, инфицированных инактивированным вирусом H5N1, значительно превышает таковой в сыворотках вакцинированных кур. Полученные результаты указывают на возможность применения разработанного метода для дифференциальной диагностики привитых инактивированными вакцинами и инфицированных птиц.

5. Обсуждение результатов.

В настоящее время грипп является одним из самых распространённых заболеваний на планете (Newmann G., 2011, Слёпушкин, 2001).

Постоянно существует серьезная угроза возникновения новой пандемии среди людей, которая может быть вызвана вирусом гриппа А подтипа H5N1 (Dawood F.S., 2009; Fraser C., 2009; Tumpey T.M., 2009). Первый подтверждённый случай передачи вируса гриппа птиц H5N1 человеку был зафиксирован в Гонконге в 1997 году. В результате заболело 18 человек, 6 из которых умерли.

В такой ситуации очень важен мониторинг вируса гриппа среди людей и птиц, быстрое и надежное выявление возбудителя у людей с симптомами острого респираторного заболевания для принятия эффективных мер по лечению и предотвращению дальнейшего распространения вируса (Львов Д.К., 2010; Коновалова Н.И., 2010).

Сейчас традиционными методами диагностики вируса гриппа А являются вирусологические методы. Это надежные и чувствительные методы, однако, они трудоемки и на их выполнение требуется от 1 до 2 недель. В последнее время широкое распространение получили молекулярные методы диагностики. Время анализа инфекционного материала сокращается до одного дня, их чувствительность не уступает чувствительности традиционных методов.

Всемирная организация здравоохранения рекомендует использовать метод твердофазного иммуноферментного анализа (ELISA), реакцию ингибирования гемагглютинации (HI) и реакцию ингибирования нейраминидазы (NI), выделение вируса с помощью куриных эмбрионов и культур клеток (Quilivan M., 2000), иммунодиффузии в агарозном геле (AGID), а также ПЦР и ПЦР в реальном времени для диагностики вируса гриппа А (World Health Organ. 1980; Schild G.C., 1980). Золотым стандартом в диагностике вируса гриппа птиц является метод ELISA (Takimoto S., 1991.).

Однако ни данный метод, ни реакции ингибирования не могут быть пригодны для идентификации вновь возникших штаммов, т.к. зависят от специфических антител. Наращивание вируса на куриных эмбрионах или культурах тканей позволяет получить большое количество вируса для последующей диагностики и типирования (Соминина А.А., 2006; Бурцева Е.И., 2001), однако это занимает от 3 до 7 дней.(Wang R., 2010.) Метод иммунодиффузии в агарозном геле требует большого количества антигена, что предполагает его предварительное пассирование на куриных эмбрионах.

В отличие от традиционных методов современные молекулярные методы диагностики вируса гриппа не имеют таких ограничений. Их отличают такие преимущества как быстрота, надёжность и экономичность (Sakurai A., 2012.).

Для молекулярной диагностики и типирования вируса гриппа А в настоящее время применяются такие методы как ОТ-ПЦР (Herrmann B., 2001.) и ПЦР в реальном времени (van Elden L.J., 2008, Лободанов С.А., 2012), также её модификации, такие как высокоскоростная ПЦР в реальном времени (Sakurai A., 2011.) и количественная ПЦР в реальном времени (Aguero M., 2007; Ellis J.S., 2007.), лигазная цепная реакция, реакция транскрипционной амплификации (Lau L. T., 2004; Moore C., 2004.), изотермальная петлевая реакция (Poon L. L. M., 2005; Imai M., 2006; Ito M., 2006.) и микрочипы (Kessler N., 2004; Li J., 2001; Lodes M. J., 2006; Townsend M. B., 2006, Fesenko E.E. 2007).

Исходя из вышеизложенного, актуальной проблемой данного исследования стало создание комплекса методов молекулярной диагностики, позволяющего определить наличие вируса гриппа А подтипа H5N1 в пробе.

Данный комплекс включает создание тестов для диагностики и типирования высокопатогенного вируса гриппа А подтипа H5N1 методом ПЦР и ПЦР в реальном времена, а также количественной модификации ПЦР в реальном времени.

Первой разработкой в рамках данного исследования стало создание теста для определения высокопатогенного вируса гриппа А подтипа H5N1 методом одностадийной ПЦР.

Среди опубликованных работ по разработке праймеров для амплификации РНК вирусов гриппа А есть работы, описывающие как одностадийные (Fouchier R. A. M., 2000; Vabred A., 2000; Wright K. E., 1995), так и “гнездовые” ПЦР (Oxburgh L., 1999). Причем заявленная авторами чувствительность одностадийной ПЦР не уступает чувствительности гнездового варианта ПЦР ( Qiu B.F., 2009).

В начале данного исследования не было отечественных тест-систем для определения высокопатогенного вируса гриппа А подтипа H5N1.

Праймеры для данного теста подбирались на основании известных последовательностей, размещенных в банках данных GenBank (www.ncbi.nlm.nih.gov) и ISD (www.flu.lanl.gov). Всего для анализа было использовано порядка четырёхсот последовательностей генов гемагглютинина пятого подтипа и нейраминидазы первого подтипа, учитывались исследования относительно циркулирующих в Российской Федерации штаммов вируса гриппа А подтипа H5N1. Разработанные праймеры были копмлементарны консервативным областям генов HA пятого подтипа и NA первого подтипа и теоретически с их помощью можно было детектировать наличие РНК вируса гриппа А подтипа Н5N1.

Для проверки этого на практике нами была использована панель, состоящая из 26 референтных штаммов вируса гриппа, включающих эпидемические штаммы вируса гриппа В и вируса гриппа А, относящиеся к 9 различным подтипам по гену гемагглютинина и 7 – по гену нейраминидазы. Специфичность разработанных праймеров была проверена анализом ряда штаммов вируса гриппа В и вирусов гриппа А других подтипов и теоретически с помощью программы BLAST (Basic Были Local Alignment Search Tool, www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST/).

обнаружены все вирусы гриппа А подтипов Н5 и N1 и не было выявлено ни одного ложно положительного результата при тестировании вирусов гриппа типа В или вирусов гриппа других подтипов. Показано, что нет перекрестных реакций с вирусами других семейств (Paramyxoviridae, Coronaviridae, Birna Viridae).

Минимальное количество вируса, обнаруженное с помощью разработанного теста, равнялось 102 - 103 ЭИД50/мл. Данные результаты аналитической чувствительности кореллируют с чувствительностью одностадийных ПЦР тест-систем для диагностики вируса гриппа А подтипа H5N1, разработанными рядом исследователей (Boonsuk P, 2008, Шипулин Г.А., 2006).

При проведении диагностики с помощью тест-систем на основе ПЦР важным условием является контроль диагностики. Для этой цели служат «положительный» и «отрицательный» контроли (Kwok S., 1989).

«Отрицательный» контроль подразумевает отсутствие матрицы для синтеза специфичного фрагмента кДНК. Отрицательным контролем может служить бидистиллированная вода. С помощью данного контроля можно проверить аккуратность выполнения анализа и наличие контаминации. Для правильной интерпретации результатов ПЦР служит «положительный» контроль. Если на электрофореграмме не будет выявлено светящейся полосы, соответствующей «положительному» контролю, то, вероятно, вирус был потерян во время проведения анализа. Это может быть связано с тем, что нарушился технологический процесс проведения анализа или образцы для анализа могли хранить не надлежащим образом. Чаще всего, в качестве положительного контроля используется референтный штамм вируса параллельно с исследуемыми пробами.

В тест-системах для диагностики и типирования вируса гриппа А подтипа H5N1 методом ПЦР наличие вируса в качестве «положительного»

контроля недопустимо. Поэтому был разработан генно-инженерный «положительный» контроль, представляющий собой искусственный вектор (плазмиду), в который клонирован участок гена, имеющий места посадки праймеров, используемых в тест-системе.

«Положительный» контроль для разработанного теста синтезировался с помощью плазмиды pGEM-T Easy, в которую были клонированы фрагменты генома референтного штамма вируса гриппа А подтипа Н5N1 Разработанный генноA/Grebe/Novosibirsk/29/05 инженерный «Положительный» контроль является безопасным для оператора и может быть использован в разработанной тест-системе. При этом потребовались дополнительные исследования для того, чтобы понять, можно ли плазмидный контроль использовать для контроля определения РНК вируса. Для этого был оптимизирован метод проведения ОТ-ПЦР в одной пробирке. При этом были исключены дополнительные манипуляции по перенесению кДНК в пробирку для ПЦР, оптимизированы буферные и температурные условия. Наши исследования показали, что в данной постановке, реакция обратной транскрипции не вносит изменения в исходное количество РНК, следовательно в данной постановке генноинженерный контроль может быть использован как для количественного, так и для качественного определения генома вируса гриппа А подтипа Н5N1.

В ряде тест-систем используют т. н. внутренний контроль проведения реакции. В такой постановке, конструируют генноинженерную конструкцию, в которой используются специфические места посадки диагностических праймеров, но размер получаемого при этом ампликона больше, чем тот, который синтезируется на матрице генома вируса. Использование такого контроля помогает контролировать эффективность ПЦР в каждой пробирке, но при этом уменьшает чувствительность анализа, поскольку при использовании внутреннего контроля мы проводим т. н. множественную ПЦР. Поэтому в ряде случаев, когда проводится «одностадийная» ПЦР, многие диагностические компании отказываются от использования внутренних контролей. Мы в нашей тест-системе также не использовали такой контроль, поскольку предполагали, что тест-система будет использоваться не только во время эпизоотий, но и для определения носительства вируса у диких птиц. А в случае носительства данного вируса у диких птиц, даже небольшое снижение чувствительности тест-системы не желательно.

В последнее время большое распространение приобрела ПЦР в реальном времени, так как она имеет ряд преимуществ, таких как: снижение времени проведения анализа, снижение вероятности возникновения контаминации, возможность инструментальной детекции и интерпретации результатов, возможность проводить количественные тесты.

Эти качества вместе с сохранением высокой чувствительности реакции делают ПЦР в реальном времени очень привлекательным методом для диагностики инфекционных заболеваний.

Исходя из вышеизложенного, следующим этапом данной работы стало разработка и оптимизация качественного и количественного обнаружения вируса гриппа А подтипа H5N1 и дифференциации его от других подтипов вируса гриппа А и других вирусов на основе ПЦР в реальном времени.

Специфические олигонуклеотиды и зонд были разработаны на основании последовательностей, которые использовались при разработке теста для обнаружения РНК вирусов гриппа А подтипов Н5 и N1 методом ПЦР. Специфичность разработанных праймеров и зонда была доказана при помощи панели штаммов вируса гриппа, включающей в себя эпидемические штаммы вируса гриппа, выделенные от птиц и животных. Чувствительность была определена путем анализа раститровки вируса гриппа A/Grebe/Novosibirsk/29/05. Пределом чувствительности оказалось количество вируса, равное 10-102 ЭИД50. В опубликованных работах, описывающих применение метода ПЦР в реальном времени для диагностики вируса гриппа А подтипа H5N1, авторы также определяли чувствительность разработанных тестов. В разных публикациях она варьировалась от 10 до 103 ЭИД50 (Sakurai A W. 2012).

Преимуществом ПЦР в реальном времени является возможность проводить не только качественный, но и количественный анализ, т.е.

выявлять количество возбудителя в исследуемом материале с точностью до нескольких десятков копий молекул РНК. Для проведения такого теста необходимо построение калибровочного графика с использованием стандартных растворов с известной концентрацией матрицы. При этом построенный график будет выражать линейную зависимость значений порогового цикла Ct от десятичного логарифма концентрации РНК. По найденному значению порогового цикла с помощью компьютерной программы проводится расчёт концентрации искомой РНК в исследуемых образцах.

Необходимым условием проведения количественного анализа является наличие стандартных растворов для калибровочного графика (Dovas C.I., 2010). В нашей работе мы использовали десятикратные разведения полученной нами рекомбинантной плазмиды, содержащей фрагмент гена НА. Исходя из этого, построили калибровочный график и проанализировали содержание РНК вируса гриппа в нескольких полевых образцах. В результате, концентрация вируса в этих образцах составила (молекул/мкл):

106, 105, 104, 103 и 102 (рис. 20). Полученные данные говорят о достаточной диагностической чувствительности тест-системы и о возможности определения количества вируса в довольно широком диапазоне концентраций.

Одним из самых современных подходов молекулярной вирусологии является метод обратной генетики, который можно определить как методический прием, посвященный воссозданию функционального генетического материала. Инфекционная копия вируса позволяет вносить изменения, как в генетический материал, так и в факторы, влияющие на его функции. Создание такой копии позволяет проводить как фундаментальные научные исследования, так и конструировать различные вакцинные препараты, обладающие заданными свойствами. В лаборатории молекулярной диагностики ФГБУ «ФНИЦЭМ им.Н.Ф.Гамалеи» Минздрава России «Институт вирусологии им.Д.И.Ивановского» методом обратной генетики на основе вируса гриппа А (Н1N1) был получен pR8 рекомбинантный вирус гриппа А подтипа H5N1. У одной из 8 плазмид инфекционного клона, ген гемагглютинина H1 был заменен на ген гемагглютинина вируса гриппа А/Курган/05/2005 (H5N1). С помощью разработанного метода количественного определения был проверен рекомбинантный вирус в культуре клеток MDCK и в первом и во втором пассаже на куриных эмбрионах. Результаты анализа показали увеличение количества рекомбинантного вируса и уменьшение количества плазмиды, с помощью которой он синтезировался (рис. 21).

Следующей частью нашей работы было применение разработанных тестов для выявления высоковирулентного вируса гриппа А подтипа H5N1 в биологических образцах.

Разработанные тест-системы были применены для анализа 648 полевых проб от диких и домашних птиц, отобранных во время эпизоотий 2005-2008 г.г.. Проведенное исследование показало, что разработанные тест-системы являются универсальными и позволяют выявлять высоковирулентный вирус гриппа А подтипа H5N1, Цинхай-Сибирского генотипа H5J 2.2 четырех генетических подгрупп (Цинхайской, Западносибирской, ТувинскоСибирской и Ирано-Северокавказской), а также Уссурийского генотипа H5J 2.3.2 двух генетических подгрупп (Дальневосточно-Южнокитайской и Западномонгольской). Выявление вирусов молекулярными методами было подтверждено классическими методами идентификации вирусов в лаборатории экологии вирусов ФГБУ «ФНИЦЭМ им.Н.Ф.Гамалеи»

Минздрава России «Институт вирусологии им.Д.И.Ивановского»

(руководитель д.б.н. М. Ю. Щелканов).

Анализ полученных результатов показал возможность диагностики вируса гриппа А подтипа H5N1 не только у свежепогибших и больных птиц, но также и у птиц без клинических признаков заболевания. Все пробы, положительные при обнаружении их методом одностадийной ПЦР также оказались положительными при диагностике их с помощью ПЦР в реальном времени.

Валидация разработанных тест-систем является гарантом воспроизводимости результатов. Для созданной тест-системы для диагностики вируса гриппа А подтипа H5N1 методом ПЦР разработано СТО (Прил. 1) и Инструкция по использованию тест-системы (Прил.3). Также данная тест-система имеет патент (Прил.4) и сертификат соответствия (Прил.2).

Разработанные тест-системы были успешно использованы для тестирования 9-й панели, в ходе международной интеркалибрации WHO External Quality Assessment Programm (EQAP) по молекулярной диагностике гриппа, проходившей в марте 2011. По результатам анализа получен Международный сертификат WHO об успешном прохождении теста и соответствии лаборатории международным стандартам по молекулярному анализу вируса гриппа.

В настоящее время ВОЗ продолжает мониторинг вируса гриппа А подтипа H5N1 из-за его пандемической опасности. Каждый год при аттестации контрольных лабораторий по обнаружению гриппа ВОЗ присылает панель вирусов гриппа различных подтипов, но обязательно с несколькими штаммами вируса гриппа А подтипа H5N1. Это указывает на исключительную важность наблюдения за данным подтипом, который способен мутировать и начать передаваться от человека к человеку. Для специфической профилактики вируса гриппа используются вакцины (Osterholm M T., 2012; Steel J., 2011; Hoffmann E., 2002). К настоящему времени накоплен большой опыт применения, как живых, так и инактивированных гриппозных вакцин (Гендон Ю.З., 2007).

В геноме вируса гриппа А присутствует ген неструктурного белка NS1 (S.J.Flint, 2000.). Этот белок не пакуется в вирионы, таким образом, у инактивированного вируса этого белка практически нет. Существует гипотеза, что по уровню антител к неструктурному белку NS1, возможно различить живые и инактивированные вирусы (Tumpey T.M., 2005).

Поэтому в ходе исследования был синтезирован рекомбинантный белок NS1 на основе вектора pET32b+ с последующей химической трансформацией штамма E. Coli BL21trxB(DE3)pLysS. Белок был очищен метало-хелатной аффинной хроматографией, поскольку на С-конце белка были транслированы 6 гистидинов. Данный рекомбинантный белок был использован как специфический компонент в непрямом ИФА для выявления антител к белку вируса гриппа NS1.

С использованием разработанного непрямого ИФА, были проверены 5 сывороток от кур, привитых «Флупротект H5» инактивированной эмульгированной вакциной против гриппа птиц типа А подтипа H5 производства ФГУП «Ставропольская Биофабрика» (серия 040306) и 3 референтные сыворотки от кур, инфицированных вирусом H5N1 (LPAI), предоставленные Др. Д. Л. Суарэсом (USDA Agricultural Research Service (USDA-ARS), South East Poultry Research Laboratory, Атенс, Джорджия, США). Как показали результаты эксперимента (рис. 26), существует различие в уровне антител в сыворотках инфицированных и вакцинированных инактивированной вакциной кур. В референтных сыворотках от кур, инфицированных вирусом H5N1, уровень антител значительно превышает таковой в сыворотках вакцинированных кур.

Безусловно, необходимы дальнейшие статистические исследования. Однако можно сделать вывод, что полученные результаты указывают на возможность применения разработанного метода для дифференциальной диагностики инфицированных птиц и привитых инактивированными вакцинами.

6. Выводы

1. Разработана «Тест-система для обнаружения и дифференциации вируса гриппа А подтипа H5N1 методом ПЦР» с аналитической чувствительностью 102 – 103 ЭИД50/мл, специфичностью 100%, которая позволяет проводить дифференциальный анализ возбудителя в культурах, зараженных вирусом и в образцах биологического материала.

2. Разработан и оптимизирован молекулярно-генетический метод качественного и количественного обнаружения вируса гриппа А подтипа H5N1 и дифференциации его от других подтипов вируса гриппа А и других вирусов на основе ПЦР в реальном времени с аналитической чувствительностью 10 – 102 ЭИД50/мл, специфичностью 100%, который позволяет выявлять патоген в культурах, зараженных вирусом и в образцах биологического материала.

3. Показана возможность использования генно-инженерных положительных контролей на основе плазмиды и pGEM-T Easy клонированных фрагментов генома вируса гриппа подтипа Н5N1 для качественного и количественного контроля определения генома высоковирулентного вируса гриппа А подтипа H5N1.

4. Показано, что метод количественного определения содержания РНК вируса гриппа А подтипа H5N1 методом ПЦР в реальном времени может быть использован для контроля накопления рекомбинантного вируса гриппа H5N1, полученного методом обратной генетики.

5. Показано, что разработанные тест-система и методики на основе ПЦР, ПЦР в реальном времени могут быть использованы при эпидемиологическом обследовании территорий с целью изучения циркуляции вируса гриппа А подтипа H5N1 среди диких и домашних птиц в различных районах РФ. Показана возможность определения вируса гриппа А подтипа H5N1 не только у погибших и больных птиц, но также и у птиц без клинических признаков заболевания.

6. Показано, что рекомбинантный белок NS1 на основе вектора pET32b+ с последующей химической трансформацией штамма E. Coli BL21trxB(DE3)pLysS, очищенный метало-хелатной аффинной хроматографией, может быть использован как специфический компонент в непрямом ИФА для выявления антител к белку вируса гриппа NS1.

7. Показан различный уровень антител к белку NS1 у вакцинированных инактивированной вакциной и инфицированных птиц. Это позволит разработать тест-систему для дифференциального выявления вакцинированных инактивированной вакциной и инфицированных птиц на основе выявления антител к белку вируса гриппа NS1 методом непрямого ИФА.

7. Библиография

1. Белоусов Ю.Б. Введение в клиническую фармакологию / Ю.Б.Белоусов, М.В.Леонова. М.: МИА, 2002. – 128 с.

2. Белякова Н.В. Изучение чувствительности эпидемических штаммов вируса гриппа А (H1N1), изолированных в России в сезоны 2006-2009 гг., к озельтамивиру (TamufluTM) с помощью молекулярно-генетических методов / Н.В. Белякова, С.В. Альховский, Е.С. Шевченко и др. // Вопр. Вирусол. – 2010. - №5. – С.10-13

3. Биргер М.О. Справочник по микробиологическим и вирусологическим методам исследования / Под ред. М.О.Биргера. – 3-е изд., перераб. и доп. – М.: Медицина, 1982. – 464с.

4. Брюханов А.Л. Молекулярная микробиология/ А.Л. Брюханов, К.В. Рыбак, А.И. Нетрусов // М.:Изд. МГУ, 2012 – 480 с.

5. Бурцева Е.И. Свойства вирусов гриппа А и В, выделенных на куриных эмбрионах и в культуре клеток MDCK / Е.И. Бурцева, В.Е. Иванова, Т.А.

Оскерно, А.Н. Слепушкин // Вопр.Вирусол. – 2001. - №1. – С.29-33

6. Бурцева Е.И. Специфическая профилактика гриппа в условиях современного эпидемического процесса: Автореф. дис… д–ра мед. наук.

М., 2005. – 52 с.

7. Величко Т.В. Грипп: современные средства терапии и профилактики / Т.В.Величко // Русский медицинский журнал. – 2006. – №21. – С. 1576– 1582.

8. ВОЗ Глобальное предупреждение и ответные действия, Новости о вспышках болезней, 2013

9. Гендон Ю.З. Вакцины и химиопрепараты для профилактики гриппа/ Ю.З.

Гендон // Вопр. Вирусол. – 2007. – Т.52, №1. – С. 4-10 Глик Б. Молекулярная биотехнология. Принципы и применение / Б.

10.

Глик, Дж. Пастернак. Пер. с англ – М.: Мир, 2002. – 589 с.

Гребенникова Т.В. Метод ПЦР в диагностике и мониторировании 11.

лечения инфекционных заболеваний / Т.В. Гребенникова // Методические указания для студентов медицинского факультета РУДН. – М., 2005. – С.21-23.

Даниленко Д.М. Пандемический грипп 2009 г. в России. Особенности 12.

выделения и биологические свойства вирусов/ Д.М. Даниленко, Н.И.

Коновалова, М.Ю. Еропкин, Т.М. Гудкова, В.А. Григорьева, А.В. Иванова, С.М. Щеканова, Т.Д. Смирнова, О.И. Киселев // Вопр.Вирусол. – 2011. – Т.56, №2. – С.4-9 Егоров А.М. Теория и практика иммуноферментного анализа/ А.М.

13.

Егоров, А.П. Осипов, Б.Б. Дзантиев, Е.М. Гаврилова // М.: Высшая школа, 1991. – 288 с.

Игнатьева А.В. Высокопродуктивный вирус-реассортант, содержащий 14.

гемагглютинин и нейраминидазу пандемического вируса гриппа А/Moscow/01/2009 (H1N1) / А.В. Игнатьева, И.А. Руднева, Т.А. Тимофеева, А.А. Шилов, А.Д. Забережный, Т.И. Алипер, Н.В. Каверин, Д.К. Львов// Вопр.Вирусол. – 2011. – Т.56,№4. – С.9-14 Каверин Н. В. Межвидовая трансмиссия вирусов гриппа А и проблема 15.

пандемий / Н. В. Каверин, Ю. А. Смирнов // Вопросы вирусологии. – 2003.

– № 3. – С. 4-10 Карпухин Г.И. Грипп. Руководство для врачей. Издание 2–е. / Под ред.

16.

Г.И.Карпухина. – СПб.: «Гиппократ», 2001. – 360 с.

Карпухин Г.И. Диагностика, профилактика и лечение острых 17.

респираторных заболеваний / Г.И. Карпухин, О.Г. Карпухина – СПб.:

Гиппократ, 2000. – 184 с.

Киселев О.И. Грипп и другие респираторные вирусные инфекции:

18.

эпидемиология, профилактика, диагностика и терапия / Под ред. О.И.

Киселева и др. – СПб., 2003 – 245 с.

Киселёва Н.М. Противовирусные препараты в общей практике / 19.

Н.М.Киселёва, Л.Г.Кузьменко // Лечащий врач. – 2007.– № 9. – С. 61–64 Коновалова Н.И. Этиологическая характеристика эпидемий гриппа 20.

2006-2009 гг. в Российской Федерации (по данным НИИ гриппа СЗО РАМН) / Н.И. Коновалова, М.Ю. Еропкин, Т.М. Гудкова, В.А. Григорьева, Д.М. Даниленко, А.В. Иванова, Т.С. Смирнова, Т.Г. Лобова, С.М.

Щеканова // Вопр.Вирусол. – 2010. – Т.55,№4. – С.9-16 Лободанов С.А. Оценка эффективности дифференциальной 21.

диагностики гриппа методом мультиплексной ПЦР с детекцией в режиме реального времени / С.А. Лободанов, А.А. Никонова, Е.Б. Файзулоев, С.В.

Трушакова, Ю.И. Забияка, М.А. Калинкина, В.Т. Иванова, Е.С. Шевченко, В.В. Зверев, Е.И. Бурцева // Вопр. Вирусол. – 2012. – Т.57, №1. – С.42-45 Львов Д.К. Возможная связь летальной пневмонии с мутациями 22.

пандемического вируса гриппа А/H1N1 swl в рецепторсвязывающем сайте субединицы НА1 гемагглютинина / Д.К. Львов, Е.И. Бурцева, А.Г.

Прилипов, В.С. Богданова, М.Ю. Щелканов, Н.В. Бовин, Е.И. Самохвалов, И.Т. Федякина, П.Г. Дерябин, Л.В. Колобухина и др. // Вопр.Вирусол. – 2010. – Т.55, №4. – С.4-9 Львов Д.К. Грипп, вызванный новым пандемическим вирусом 23.

A(H1N1)swl: клиника, диагностика, лечение: Метод. Рекомендации / Д.К.

Львов, Н.А. Малышев, Л.В. Колобухина и др. – М., 2009. – С.1-17 Львов Д.К. Распространение нового пандемического вируса гриппа 24.

A(H1N1)v в России / Д.К. Львов, Е.И. Бурцева, М.Ю. Щелканов, А.Г.

Прилипов, Л.В. Колобухина, Н.А. Малышев, М.В. Базарова с соавт. // Вопр. Вирусол. – 2010. – Т.55, №3. – С.4-9 Маниатис Т Методы генетической инженерии. Молекулярное 25.

клонирование / Т. Маниатис, Э. Фрич, Дж Сэмбрук: Пер. с англ. – М.: Мир, 1984. – 480 с.

Петров Р.В. Вакцинация против гриппа: проблемы и успехи / 26.

Р.В.Петров // Лечащий врач. – 2007. – № 9.– С. 93–96 Поздеев О.К. Медицинская микробиология : учебное пособие / под ред.

27.

В.И. Покровского 4е изд., стереот.М. : ГЭОТАРМедиа, 2010. – 768 с.

Покровский В.И. Инфекционные болезни и эпидемиология / В.И 28.

Покровский, С.Г. Пак, Н.И. Брико, Б.К. Данилкин М.:Изд.группа «ГеотарМедиа»ю – 2007. – 344 с.

Птичий грипп: оценка угрозы пандемии, ВОЗ, 2005г. -64 с., 29.

Романцов М.Г. Тактика терапии и подходы к экстренной профилактике 30.

при гриппе и ОРВИ / М.Г.Романцов, Т.В.Сологуб // Лечащий врач. – 2007.

– №8. – С. 55–58 Сергеев В.А. Вирусы и вирусные вакцины / В.А. Сергеев, Е.А.

31.

Непоклонов, Т.И. Алипер – М.: Библионика, 2007.-524с.

Слёпушкин А.Н. Профилактика гриппа и ОРВИ./ Слёпушкин А.Н., 32.

Власова Л.Н. // РМЖ. – 2001 – Том 9. №16. – C.717-719 Соминина А.А. Выделение вирусов гриппа в клеточных культурах и 33.

куриных эмбрионах и их идентификация: Метод. Рекомендации / А.А.

Соминина, Е.И. Бурцева, Т.Г. Лобова и др. – СПб., 2006. – С.24 Шигина Ю.В. Клиническая иммунология / Ю.В. Шигина // М.: РИОР, 34.

2006. - 302 с.

Шипулин Г. А. Разработка и апробация ПЦР-тест-систем для 35.

выявления вирусов гриппа птиц / Г. А. Шипулин, И. Л. Обухов, А. Н.

Панин // Рос. Мед. Вести. – 2006. – №1. – С. 60-61

36. Aguero M. A real-time TaqMan RT-PCR method for neuraminidase type 1 (N1) gene detection of H5N1 Eurasian strains of avian influenza virus / M.

Aguero, A. Sanchez, E. San Miguel, C. Gomez-Tejedor, M.A. Jimenez-Clavero //Avian. Dis. – 2007. – Vol.51 – P.378–381

37. Alexander D.J. Avian influenza - diagnosis / D.J. Alexander // Zoonoses Public Health. – 2008. – Vol.55. – P.16-23.

Alexander D.J. Avian influenza – diagnosis /Alexander D.J. // Zoonoses 38.

Public Health. – 2008. Vol.55. – P.16–23

39. Beare A.S. Replication of avian influenza viruses in humans / A.S. Beare, R.G. Webster // Arch Virol.- 1991. – Vol. 119. – N 1-2. - P.37-42

40. Belser J.A. Past, present, and possible future human infection with influenza virus A subtype H7 / J.A. Belser, C.B. Bridges, J.M. Katz, T.M. Tumpey// Emerg. Infect. Dis. – 2009. – Vol.15. – P.859–865

41. Boonsuk P. Detection of influenza virus types A and B and type A subtypes (H1, H3, and H5) by multiplex polymerase chain reaction / P. Boonsuk, S.

Payungporn, T. Chieochansin, et al. // Tohoku J Exp Med. – 2008. – Vol.

215(3):247-55. – P.247-255

42. Brown I.H. The role of pigs in interspecies transmission. Avian influenza.

Monogr. Virol. / I.H. Brown, H.D. Klenk et al. – Basel, 2008. – Vol.27. – P.88Bustin S.A. Quantification of mRNA using real-time reverse transcription PCR (RT-PCR): trends and problems / S.A. Bustin // J.Mol.Endocrinol. – 2002.

– Vol.29,№1. – P.23-39

44. Bustin, S.A. A-Z of quantitative PCR / ed. Bustin, S.A., La Jolla C.A:

International University Line. – 2004. – P.882.

45. Claas E.C. Human influenza A H5N1 virus related to a highly pathogenic avian influenza virus / E.C. Claas, A.D. Osterhaus, R. van Beek, J.C. De Jong, G.F. Rimmelzwaan, D.A. Senne, S. Krauss, K.F. Shortridge, R.G. Webster // Lancet. – 1998. – P.472–477

46. Claas E.C. Human influenza virus A/HongKong/156/97 (H5N1) infection / E.C. Claas, J.C. de Jong, R. van Beek, G.F. Rimmelzwaan, A.D. Osterhaus // Vaccine. – 1998. – Vol.16. – P.977-978.

47. Clough E.A. Growth and development of Oenothera fruticosa is influenced by vernalization duration, photoperiod, forcing temperature, and plant growth regulators / E.A. Clough; A.C. Cameron; R.D. Heins; W.H. Carlson// J.Am.Soc.Hortic.Sc. – 2001. -Vol.126,N 3. - P. 269-274

48. Consultation on Human Influenza A/H5 / The Writing Committee of the World Health Organization (WHO // N. Engl. J. Med. - 2005

49. Dawood F.S. Emergence of a novel swine-origin influenza A (H1N1) virus in humans / F.S. Dawood, S. Jain, L. Finelli et al. // N.Engl.J.Med. – 2009. – Vol.360. – P. 2605-2615

50. de Jong J.C. A pandemic warning?/ de Jong J.C., Claas E.C., Osterhaus A.D., Webster R.G., Lim W.L.// Nature. – 1997. – Р.389.

51. de Jong M.D. Avian influenza A (H5N1) / M.D. de Jong, T.T. Hien // J Clin Virol. – 2006. – Vol.35(1). – P.2–13 de Jong M.D. Fatal Avian influenza A (H5N1) in a child presenting with 52.

diarrhea followed by coma / M.D. de Jong, B.V. Cam, P.T. Qui, et al. // N. Engl.

J. Med. – 2005. – Vol.352. – P.686-691.

de Jong M.D. Fatal Avian influenza A (H5N1) in a child presenting with 53.

diarrhea followed by coma / M.D. de Jong, B.V. Cam, P.T. Qui et al. // N. Engl.

J. Med. – 2005. – Vol.352. – P.686-691.

54. Dovas C.I. Detection and quantification of infectious avian influenza A (H5N1) virus in environmental water by using real-time reverse transcriptionPCR/ C.I. Dovas, M. Papanastassopoulou, M.P. Georgiadis et al.// Appl.

Environ. Microbiol. – 2010. – Vol.76, №7. – P.2165-2174

55. Ellis J. S. Combined PCR-Heteroduplex Mobility Assay for Detection and Differentiation of Influenza A Viruses from Different Animal Species / J. S.

Ellis, M. C. Zambon // J. Clin. Microbiol. – 2001. – Vol. 39(11). – P. 4097-4102

56. Ellis J. S. Molecular diagnosis of influenza / J. S. Ellis, M. C. Zambon // Rev. Med. Virol. – 2002. – Vol. 12. – P. 375-389

57. Ellis J.S. Design and validation of an H5 TaqMan real-time one-step reverse transcription-PCR and confirmatory assays for diagnosis and verification of influenza A virus H5 infections in humans / J.S. Ellis, J.W. Smith, S. Braham, M. Lock, K. Barlow, M.C. Zambon. // Journal of clinical microbiology. – 2007.

– Vol.45. – P.1535–1543

58. Enders K.O. Influenza A H5N1 Detection/ K.O. Enders, K.C. Peter, Y.Y.Antia, T.L. Hoang // Emerg.Infect.Dis. – 2005. – Vol.11(8). – P/1303-1305

59. Fauquet C. M. Virus taxonomy, eighth report / C. M. Fauquet, M. A. Mayo, Maniloff J., et al. // Elsevier. – 2005. – P. 681-693

60. Fesenko E.E., Oligonucleotide Microchip For Subtyping Of Influenza A Virus,/ Kireyev D.E., Gryadunov D.A., Mikhailovich V.M., Grebennikova T.V., L’vov D.K., Zasedatelev A.S. // Influenza And Other Respiratory Viruses. – 2007. – Vol. 1. – P. 121-129.

61. Flint S.J. Principles of virology: molecular biology, pathogenesis, and control / S.J.Flint, L.W.Enquist, R.M.Krug, V.R. Racaniello // A.M. Skala. – Washington, D.C.: ASM Press, 2000. – 804 p

62. Fouchier R. A. M. Detection of influenza A viruses from different species by PCR amplification of conserved sequences in the matrix gene / R. A. M.

Fouchier, T. M. Bestebroer, S. Herfst, et al. // J. Clin. Microbiol. – 2000. – Vol.

38. – P. 4096-4101

63. Fouchier R.A. Avian influenza A virus (H7N7) associated with human conjunctivitis and a fatal case of acute respiratory distress syndrome / R.A.

Fouchier, P.M. Schneeberger, F.W. Rozendaal, J.M. Broekman, S.A. Kemink, V. Munster, T. Kuiken, G.F. Rimmelzwaan, M. Schutten, G.J. Van Doornum, G.

Koch, A. Bosman, M. Koopmans, A.D. Osterhaus// Proc. Natl. Acad. Sci. U S A. – 2004. - Vol. 101 – P.1356–1361

64. Fraser C. Pandemic potential of a strain of influenza A (H1N1): early findings / C. Fraser, C.A. Donnely, S. Cauchemez et al. // Science. – 2009. – Vol.324. – P.1557-1561

65. Freeman W.M. Quantitative RT-PCR: pitfalls and potential / W.M. Freeman, S.J. Walker, K.E. Vrana // Biotechniques. – 1999. – Vol.26,№1. – P.124-125

66. Gambotto A. Human infection with highly pathogenic H5N1 influenza virus / A. Gambotto, S.M. Barratt-Boyes, M.D. de Jong, G. Neumann, Y. Kawaoka// Lancet. – 2008. – Vol.371. – P.1464–1475

67. Gavin P. J. Review of Rapid Diagnostic Tests for Influenza / P. J. Gavin, R.

B. Jr. Thompson // Clin. And Appl. Immunol. Reviews. – 2003. – Vol. 4. – P.

151-172

68. Guan Y. Molecular epidemiology of H5N1 avian influenza / Y. Guan, G.J.

Smith, R. Webby, R.G. Webster // Rev Sci Tech. – 2009. – Vol.28. – P. 39-47.

Heid C.A. Real-time quantitative PCR / C.A. Heid // Genome Res. – 1996. – 69.

Vol. 6. – P. 986-994

70. Herrmann B. Simultaneous detection and typing of influenza viruses A and B by a nested reverse transcription-PCR: comparison to virus isolation and antigen detection by immunofluorescence and optical immunoassay (FLU OIA) / B. Herrmann, C. Larsson, B.W. Zweygberg // Journal of clinical microbiology.

– 2001. – Vol.39. – P.134–138 Hien T.T. Avian influenza A (H5N1) in 10 patients in Vietnam / T.T. Hien, 71.

N.T. Liem, N.T. Dung, et al. // N. Engl. J. Med. – 2004. - Vol.350. – P.1179Hoffmann E. Eight-plasmid system for rapid generation of influenza virus vaccines/ E. Hoffmann, S. Krauss, D. Perez, R. Webby, R.G. Webster // Vaccines. – 2002. – Vol.20. – P.3165-3170

73. Imai M. Development of H5-RT-LAMP (loop-mediated isothermal amplification) system for rapid diagnosis of H5 avian influenza virus infection / M. Imai, A. Ninomiya, H. Minekawa, et al. // Vaccine. – 2006. – Vol. 24. – P.

6679-6682

74. Ito M. Rapid detection and typing of influenza A and B by loop-mediated isothermal amplification: comparison with immunochromatography and virus isolation / M. Ito, M. Watanabe, N. Nakaqawa, et al. // J. Virol. Methods. – 2006. – Vol. 135. – P. 272-275

75. Johnson R.D. Multipoint binding and heterogeneity in immobilized metal affinity chromatography/ R.D. Johnson, F.H. Arnold// Biotechnol.and Bioengin.

– 1995. – Vol.48. – P.437-443 Keawcharoen J. Avian influenza H5N1 in tigers and leopards / J.

76.

Keawcharoen, K. Oraveerakul, T. Kuiken, R.A.M. Fouchier, A. Amonsin, S.

Payungporn, S. Noppornpanth, S. Wattanodorn, A. Theamboonlers, R.

Tantilertcharoen // Em. Inf.Dis. – 2004. – Vol.10. – P. 2189-2191.

77. Kessler N. Use of the DNA Flow-Thru chip, a three-dimensional biochip, for typing and subtyping of influenza viruses / N. Kessler, O. Ferraris, K.

Palmer, et al.// J. Clin. Microbiol. – 2004. – Vol. 32. – P. 2173-2185

78. Khalenkov A. Detection and isolation of H5N1 influenza virus from large volumes of natural water/ A. Khalenkov, W.G. Laver, R.G. Webster // J.Virol.

Methods. – 2008. – Vol.149,№1. – P.180-183

79. Koopmans M.Transmission of H7N7 avian influenza A virus to human beings during a large outbreak in commercial poultry farms in the Netherlands / M. Koopmans, B. Wilbrink, M. Conyn, G. Natrop, H. van der Nat, H. Vennema, A. Meijer, J. van Steenbergen, R. Fouchier, A. Osterhaus, A. Bosman // Lancet.

– 2004. – Vol.363. – P.587–593

80. Kuiken T. Avian H5N1 influenza in cats / T. Kuiken, G. Rimmelzwaan, D.

van Riel, G. van Amerongen, M. Baars, R. Fouchier, A. Osterhaus // Science. –

2004. Vol.306. – P.241-241.

Kwok S. Avoiding false positives with PCR/ S.Kwok, R.Higuchi // Nature. – 81.

1989. – Vol.339. – P.237-238

82. Lau L. T Nucleic acid sequence-based amplification methods to detect avian influenza virus / L. T. Lau, J. Banks, R. Aherne, et al. // Biochem. Biophys. Res.

Commun. – 2004. – Vol. 313. – P. 336-342.

83. Laver W. The origin and control of pandemic influenza/ W. Laver, N.

Bischofberger, R. Webster // Perspect. Biol. Med. – 2000. – Vol.43, №2- P. 173Lee C. W. Application of real-time RT-PCR for the quantitation and competitive replication study of H5 and H7 subtype avian influenza virus / C.

W. Lee, D. L. Suarez // J. Virol. Methods. – 2004. – Vol. 119. – P. 151-158

85. Leonardi G. P. Comparison of rapid detection methods for influenza A virus and their value in health-care management of institutionalized geriatric patients / G. P. Leonardi, H. Leib, G. S. Birkhead, et al. // J. Clin. Microbiol. – 1994. – Vol. 32(1). – P. 70-74

86. Lequin R. Enzyme immunoassay (EIA)/enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA)/ R. Lequin // Clin. Chem. – 2005. – Vol.51,№12. – P. 2415–2418

87. Leung C.H. Clinical characteristics of children and adults hospitalized for influenza virus infection/ C.H. Leung, H.K. Tseng, W.S. Wang, H.T. Chiang, A.Y. Wu, C.P. Liu // J.Microbiol. Immunol. Infect. - 2013

88. Li J. Typing and subtyping influenza virus using DNA microarrays and multiplex reverse transcriptase PCR / J. Li, S. Chen, D. H. Evans // J. Clin.

Microbiol. – 2001. – Vol. 39. – P. 696-704 Liem N.T. Lack of H5N1 avian influenza transmission to hospital 89.

employees, Hanoi, 2004 / N.T. Liem, W. Lim // Emerg. Infect. Dis. – 2005. – Vol.11. – P.210-215.

90. Lipatov A.S. Influenza: emergence and control/ A.S. Lipatov, E.A.

Govorkova, A.J. Webby // J.Virol. – 2004. – Vol.78 – P.8951-8959

91. Lodes M. J. Use of semiconductor-based oligonucleotide microarrays for influenza A virus subtype identification and sequencing / M. J. Lodes, D. Suciu, M. Elliott, et al. // J. Clin. Microbiol. – 2006. – Vol. 44. – P. 1209-1218

92. Maines T.R. Avian influenza (H5N1) viruses isolated from humans in Asia in 2004 exhibit increased virulence in mammals / T.R. Maines, X.H. Lu, S.M.

Erb, L. Edwards, J. Guarner, P.W. Greer, D.C. Nguyen, K.J. Szretter, L.M.

Chen, P. Thawatsupha, M. Chittaganpitch, S. Waicharoen, D.T. Nguyen, T.

Nguyen, H.H. Nguyen, J.H. Kim, L.T. Hoang, C. Kang, L.S. Phuong, W. Lim, S. Zaki, R.O. Donis, N.J. Cox, J.M. Katz, T.M. Tumpey// J. Virol. – 2005. – Vol.79 – P.11788–11800 Mnz B. Adaptation of avian influenza A virus polymerase in mammals to 93.

overcome the host species barrier / B. Mnz, M. Schwemmle, L. Brunotte //J Virol. – 2013. – Vol.87. – P. 7200-7209.

94. Mateo C. One-step purification, covalent immobilization, and additional stabilization of poly-His-tagged proteins using novel heterofunctional chelateepoxy supports/ C. Mateo, G. Fernandez-Lorente, E. Cortes, J.L. Garcia et al./ Biotechnol. And Bioengin. – 2001. – Vol.76,№3. – P.269-276

95. Menno D. de Jong Avian influenza A (H5N1)/ Menno D. de Jong, Tran Tinh Hien // J. of Clin. Virology. – 2006. - № 35. – P. 2–13

96. Moore C. Development and evaluation of a real-time nucleic acid sequence based amplification assay for rapid detection of influenza A / C. Moore, S.

Hibbitts, N. Owen, et al. // J. Med. Virol. – 2004. – Vol. 74. – P. 619-628

97. Mosley V. M. Electron microscopy of the virus of influenza / V. M. Mosley, R. W. G. Wycoff // Nature. – 1946. – Vol. 157. – P. 263

98. Mounts A.W. Case-Control Study of Risk Factors for Avian Influenza A (H5N1) Disease, Hong Kong, 1997 / A.W. Mounts, H. Kwong, H.S. Izurieta, Y.

Ho, T. Au, M. Lee, C.B. Bridges, S.W. Williams, K.H. Mak, J.M. Katz, W.W.

Thompson, N.J. Cox, K. Fukuda // J.Infect. Dis. – 1999. – Vol. 180. – P. 505Newmann G. The first influenza pandemic of the new millennium / G.

Newmann, Y. Kawaoka // Influenza Respir. Virus. – 2011. – Vol.5. – P.157-166

100. Nucleic acid amplification techniques / European Pharmacopoeia 7.0. – 2010. – P.181-183

101. Osterholm M T. Efficacy and effectiveness of influenza vaccines: a systematic review and meta-analysis / M.T. Osterholm, N.S. Kelley, A.

Sommer, E.A. Belongia // Lancet Infect.Dis. – 2012. – Vol.12,№1. – P.36-44

102. Oxburgh L. A PCR based method for the identification of equine influenza virus from clinical samples / L. Oxburgh, A. Hagstrom // Vet. Microbiol. – 1999. – Vol. 67. – P. 161-174

103. Payungporn S. Single-step multiplex reverse transcription-polymerase chain reaction (RT-PCR) for influenza A virus subtype H5N1 detection / S.

Payungporn, P. Phakdeewirot,S. Chutinimitkul et al. // Viral.immunol. – 2004.

– Vol. 17(4). – P.588-593 Peiris J.S. Re-emergence of fatal human influenza A subtype H5N1 disease / 104.

J.S. Peiris, W.C. Yu, C.W. Leung, et al. // Lancet – 2004. Vol.363. – P.617-619.

105. Poon L. L. M. Detection of human influenza A viruses by loop-mediated isothermal amplification / L. L. M. Poon, C. S. W. Leung, K. H. Chan, et al. // J.

Clin. Microbiol. – 2005. – Vol. 43. – P. 427-430

106. Qigai He. Detection of H5 Avian Influenza Viruses by Antigen-Capture Enzyme-Linked Immunosorbent Assay using H5-specific monoclonal antibody/ He Qigai, S. Velumani, D. Qingyun et al. // Clin. Vaccine Immunol. – 2007. – Vol.14,№5. – P.617-623

107. Qiu B.F. A reverse transcription-PCR for subtyping of the neuraminidase of avian influenza viruses / B.F. Qiu, W.J. Liu, D.X. Peng, S.L. Hu, Y.H. Tang, X.F. Liu // J Virol Methods. – 2009. – Vol.155(2). – P.193-198

108. Quilivan M. Comparison of Sensitivities of Virus Isolation, Antigen Detection and Nucleic Acid Amplification for Detection of Equine Influenza Virus / M. Quilivan, A. Cullinane, M. Nelly, et al. // J. Clin. Microbiol. – 2000.

– Vol. 42. – P. 759-763

109. Rhorer J. Efficacy of live attenuated influenza vaccine in children: A metaanalysis of nine randomized clinical trials/ J. Rhorer, C.S. Ambrose, S.

Dickinson, H. Hamilton, N.A. Oleka, F.J. Malinoski, J. Wittes // Vaccine. – 2009. – Vol.27,№7. – P.1101-1110

110. Russell C.A. The potential for respiratory droplet-transmissible A/H5N1 influenza virus to evolve in a mammalian host / C.A. Russell, J.M. Fonville, A.E. Brown, D.F. Burke, D.L. Smith, S.L. James, S. Herfst, S. van Boheemen, M. Linster, E.J. Schrauwen, L. Katzelnick, A. Mostern, T.

Kuiken, E. Maher, G. Neumann, A.D. Osterhaus, Y. Kawaoka, R.A.

Fouchier, D.J. Smith // Science – 2012. – Vol. 336. - N6088. – P.1541-1548

111. Sakurai A. Rapid typing of influenza viruses using super high-speed quantitative real-time PCR / A. Sakurai, N. Nomura, R. Nanba, T. Sinkai, T.

Iwaki, T. Obayashi, K. Hashimoto, M. Hasegawa, Y. Sakoda, A. Naito, Y.

Morizane, M. Hosaka, K. Tsuboi, H. Kida, A. Kai, F. Shibasaki // J. Virol.

Methods. – 2011. – Vol.178. – P.75–81

112. Sakurai A. Updated Values for Molecular Diagnosis for Highly Pathogenic Avian Influenza Virus / A. Sakurai, F. Shibasaki // Viruses. – 2012. – Vol. 4(8).

– P.1235–1257

113. Sakurai A. Updated Values for Molecular Diagnosis for Highly Pathogenic Avian Influenza Virus / A. Sakurai, F. Shibasaki // Viruses. – 2012. Vol.4. – P.1235-1257.

114. Sasbn J.S. Influenza A (pH1N1) infection in children admitted to a pediatric intensive care unit: differences with other respiratory viruses/ J.S.

Sasbn, M.A. Centeno, M.D. Garca, N.B. Boada et al. // Pediatr.Crit. Care Med. – 2011. – Vol.12. – P.136-140

115. Saunders N.A. Quantitative real-time PCR/ In: Real-Time PCR, An Essential Guide. / N.A. Saunders // Horizon Bioscence, Wymondham. – 2004.

116. Schild G.C. Antigenic analysis of influenza A virus surface antigens:

considerations for the nomenclature of influenza virus / G.C. Schild, R.W.

Newman, R.G. Webster, D. Major, V.S. Hinshaw // Comp. Immunol. Microbiol.

Infect. Dis. – 1980. – Vol.3. – P.5–18

117. Shortridge K.F. Characterization of avian H5N1 influenza viruses from poultry in Hong Kong / K.F. Shortridge, N.N. Zhou, Y. Guan, P. Gao, T. Ito, Y.

Kawaoka, S. Kodihalli, S. Krauss, D. Markwell, K.G. Murti, M. Norwood, D.

Senne, L. Sims, A. Takada, R.G. Webster // Virology. – 1998. – Vol.252. – P.

331-342.

118. Smith C.J. Advantages and limitations of quantitative PCR (Q-PCR)-based approaches in microbial ecology / C.J. Smith, A.M. Osborn // FEMS Microbiol.

Ecol. – 2009. – Vol.67, №1. – P.6-20

119. Stamboulian D. Influenza / D. Stamboulian, P. E. Bonvehi, F. M.

Nacinovich, N. Cox // Infect. Dis. Clin. North. Am. – 2000.– Vol. 14. – P. 141Steel J. Live attenuated influenza viruses containing NS1 truncations as vaccine candidates against H5N1 highly pathogenic avian influenza/ J. Steel, A.C. Lowen, L. Pena, M. Angel, A. Solrzano, R. Albrecht, D.R. Perez, A.

Garca-Sastre, P. Palese // J.Virol. – 2009. – Vol.83,№4. – P.1742-1753

121. Steel J. New strategies for the development of H5N1 subtype influenza vaccines: progress and challenges/ J. Steel //BioDrugd. – 2011. – Vol.25, №5. – P.285-298

122. Steinhauer D. A. Genetics of influenza viruses / D. A. Steinhauer, J. J.

Skehel // Annu. Rev. Genet. - 2002. – Vol. 36. – P. 305-332

123. Stone B. Rapid detection and simultaneous subtype differentiation of influenza A viruses by real time PCR/ B.Stone, J. Barrows, S. Schepetiuk, G.



Pages:     | 1 | 2 || 4 | 5 |
 

Похожие работы:

«Вафула Арнольд Мамати РАЗРАБОТКА ЭЛЕМЕНТОВ ТЕХНОЛОГИИ ВЫРАЩИВАНИЯ ПАПАЙИ ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ ЗДОРОВОГО ПОСАДОЧНОГО МАТЕРИАЛА И ЭКСТРАКТОВ С БИОПЕСТИЦИДНЫМИ СВОЙСТВАМИ ДЛЯ ЗАЩИТЫ ЕЕ ОТ ВРЕДНЫХ ОРГАНИЗМОВ Специальности: 06.01.07 – защита растений 06.01.01 – общее земледелие и растениеводство Диссертация на соискание ученой степени кандидата сельскохозяйственных...»

«Алексеев Иван Викторович РАЗВИТИЕ КОМПЛЕКСНОГО ИНЖЕНЕРНО-ГЕОЛОГИЧЕСКОГО И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОГО МОНИТОРИНГА НА ЯКОВЛЕВСКОМ РУДНИКЕ ДЛЯ ПОВЫШЕНИЯ БЕЗОПАСНОСТИ ВЕДЕНИЯ ОЧИСТНЫХ РАБОТ ПОД НЕОСУШЕННЫМИ ВОДОНОСНЫМИ ГОРИЗОНТАМИ Специальность 25.00.08 – Инженерная геология,...»

«Ядрихинская Варвара Константиновна ЭКОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ РАСПРОСТРАНЕНИЯ ОСТРЫХ КИШЕЧНЫХ ИНФЕКЦИЙ В Г. ЯКУТСКЕ И РЕСПУБЛИКЕ САХА (ЯКУТИЯ) 03.02.08 – экология Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель кандидат биологических наук, доцент М.В. Щелчкова Якутск 2015...»

«Моторыкина Татьяна Николаевна ЛАПЧАТКИ (РОД POTENTILLA L., ROSACEAE) ФЛОРЫ ПРИАМУРЬЯ И ПРИМОРЬЯ 03.02.01 – Ботаника Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: доктор биологических наук, старший научный сотрудник Н.С. Пробатова Хабаровск Содержание Введение... Глава 1. Природные...»

«Петренко Дмитрий Владимирович Влияние производства фосфорных удобрений на содержание стронция в ландшафтах Специальность 03.02.08 экология Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: доктор биологических наук, профессор Белюченко Иван Степанович Москва – 2014 г. Содержание Введение Глава 1.Состояние изученности вопроса и цель работы 1.1 Экологическая...»

«Брит Владислав Иванович «Эффективность методов вакцинации против ньюкаслской болезни в промышленном птицеводстве» Специальность: 06.02.02 ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени кандидат ветеринарных наук Научный руководитель:...»

«Карачевцев Захар Юрьевич ОЦЕНКА ПИЩЕВЫХ (АКАРИЦИДНЫХ) СВОЙСТВ РЯДА СУБТРОПИЧЕСКИХ И ТРОПИЧЕСКИХ РАСТЕНИЙ В ОТНОШЕНИИ ПАУТИННОГО КЛЕЩА TETRANYCHUS ATLANTICUS MСGREGOR Специальность: 06.01.07 – защита растений Диссертация на соискание учёной степени кандидата биологических наук Научный руководитель: Попов Сергей...»

«АБДУЛЛАЕВ Ренат Абдуллаевич ГЕНЕТИЧЕСКОЕ РАЗНООБРАЗИЕ МЕСТНЫХ ФОРМ ЯЧМЕНЯ ИЗ ДАГЕСТАНА ПО АДАПТИВНО ВАЖНЫМ ПРИЗНАКАМ Шифр и наименование специальности 03.02.07 – генетика 06.01.05 – селекция и семеноводство сельскохозяйственных растений ДИССЕРТАЦИЯ на соискание учёной степени кандидата...»

«КОЖАРСКАЯ ГАЛИНА ВАСИЛЬЕВНА КЛИНИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ МАРКЕРОВ КОСТНОГО МЕТАБОЛИЗМА У БОЛЬНЫХ РАКОМ МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ 14.01.12 онкология Диссертация на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Научные руководители: доктор биологических наук, Любимова Н.В. доктор медицинских наук, Портной С.М. Москва, 2015 г....»

«АСБАГАНОВ Сергей Валентинович БИОЛОГИЧЕСКИЕ ОСНОВЫ ИНТРОДУКЦИИ РЯБИНЫ (SORBUS L.) В ЗАПАДНОЙ СИБИРИ 03.02.01 – «Ботаника» ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: к.б.н., с.н.с. А.Б. Горбунов Новосибирск 2014 ОГЛАВЛЕНИЕ ВВЕДЕНИЕ.. 4 Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.. 8 Ботаническая...»

«Храмцов Павел Викторович ИММУНОДИАГНОСТИЧЕСКАЯ СИСТЕМА ДЛЯ ОЦЕНКИ НАПРЯЖЕННОСТИ ПОСТВАКЦИНАЛЬНОГО ИММУНИТЕТА К КОКЛЮШУ, ДИФТЕРИИ И СТОЛБНЯКУ 14.03.09 – Клиническая иммунология, аллергология Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: доктор биологических наук, Раев Михаил Борисович...»

«Любас Артем Александрович ПАЛЕОРЕКОНСТРУКЦИЯ СРЕДЫ ОБИТАНИЯ ПРЕСНОВОДНЫХ МОЛЛЮСКОВ В НЕОГЕН-ЧЕТВЕРТИЧНЫХ ВОДОТОКАХ С ЭКСТРЕМАЛЬНЫМИ ПРИРОДНЫМИ УСЛОВИЯМИ Специальность 25.00.25 – геоморфология и эволюционная география Диссертация на соискание ученой степени кандидата географических наук Научный руководитель: доктор биологических наук...»

«ТУРТУЕВА ТАТЬЯНА АНАТОЛЬЕВНА РАЗРАБОТКА СБОРА НЕЙРОПРОТЕКТИВНОГО И ЭКСТРАКТА СУХОГО НА ЕГО ОСНОВЕ 14.04.02 фармацевтическая химия, фармакогнозия ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук Научный руководитель: доктор фармацевтических наук, профессор НИКОЛАЕВА ГАЛИНА ГРИГОРЬЕВНА Улан-Удэ – 2015 ОГЛАВЛЕНИЕ...»

«Палаткин Илья Владимирович Подготовка студентов вуза к здоровьесберегающей деятельности 13.00.01 общая педагогика, история педагогики и образования Диссертация на соискание ученой степени кандидата педагогических наук Научные руководители: доктор биологических наук, профессор,...»

«Будилова Елена Вениаминовна Эволюция жизненного цикла человека: анализ глобальных данных и моделирование 03.02.08 – Экология Диссертация на соискание ученой степени доктора биологических наук Научный консультант доктор биологических наук, профессор А.Т. Терехин Москва 2015 Посвящается моим родителям, детям и мужу с любовью. Содержание Введение.. 5 1. Теория эволюции жизненного цикла. 19...»

«АБДУЛЛАЕВ Ренат Абдуллаевич ГЕНЕТИЧЕСКОЕ РАЗНООБРАЗИЕ МЕСТНЫХ ФОРМ ЯЧМЕНЯ ИЗ ДАГЕСТАНА ПО АДАПТИВНО ВАЖНЫМ ПРИЗНАКАМ Шифр и наименование специальности 03.02.07 – генетика 06.01.05 – селекция и семеноводство сельскохозяйственных растений ДИССЕРТАЦИЯ на соискание учёной степени кандидата...»

«_ ТЕМИРОВ Николай Николаевич КОРРЕКЦИЯ АФАКИИ РАЗЛИЧНОГО ГЕНЕЗА МУЛЬТИФОКАЛЬНЫМИ ИНТРАОКУЛЯРНЫМИ ЛИНЗАМИ С АСИММЕТРИЧНОЙ РОТАЦИОННОЙ ОПТИКОЙ Специальность 14.01.07 – «Глазные болезни» ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Научный руководитель: доктор медицинских...»

«Цвиркун Ольга Валентиновна ЭПИДЕМИЧЕСКИЙ ПРОЦЕСС КОРИ В РАЗЛИЧНЫЕ ПЕРИОДЫ ВАКЦИНОПРОФИЛАКТИКИ. 14.02.02 – эпидемиология ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени доктора медицинских наук Научный консультант: заслуженный деятель науки РФ, лауреат Государственной премии СССР профессор, доктор медицинских наук Ющенко Галина Васильевна Москва – 20 Содержание...»

«ДОРОНИН Игорь Владимирович Cистематика, филогения и распространение скальных ящериц надвидовых комплексов Darevskia (praticola), Darevskia (caucasica) и Darevskia (saxicola) 03.02.04 – зоология Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: доктор биологических наук, заслуженный эколог РФ Б.С. Туниев Санкт-Петербург Оглавление Стр....»

«СИДОРОВА ТАТЬЯНА АЛЕКСАНДРОВНА ОСОБЕННОСТИ АДАПТИВНЫХ РЕАКЦИЙ У ДЕВУШЕК К УСЛОВИЯМ ГОРОДСКОЙ СРЕДЫ 03.02.08 Экология Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: доктор биологических наук, доцент Драгич О.А. Омск-2015 СОДЕРЖАНИЕ Введение.. Глава 1 Обзор литературы.. 1.1. Механизмы адаптации организма человека к окружающей среде 1.2. Закономерности развития...»







 
2016 www.konf.x-pdf.ru - «Бесплатная электронная библиотека - Авторефераты, диссертации, конференции»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.