WWW.KONF.X-PDF.RU
БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА - Авторефераты, диссертации, конференции
 


Pages:     | 1 |   ...   | 2 | 3 || 5 | 6 |   ...   | 7 |

«РАЗРАБОТКА СБОРА НЕЙРОПРОТЕКТИВНОГО И ЭКСТРАКТА СУХОГО НА ЕГО ОСНОВЕ ...»

-- [ Страница 4 ] --

Проведенный анализ показал, что в водном извлечении сбора нейропротективного присутствуют моносахариды (глюкоза, рамноза), дисахариды (сахароза, лактоза), органическая кислота (янтарная кислота) и многоатомный спирт (ксилит), среди которых в количественном отношении преобладает рамноза.

Жирные кислоты Полиненасыщенные жирные кислоты являются эссенциальными нутриентами. Они обладают выраженным антиатерогенным действием [70].

Регулярное дополнительное введение в рацион человека полиненасыщенных жирных кислот позволяет значительно снизить риск развития и прогрессирования заболеваний, вызванных атеросклерозом, таких как ишемическая болезнь сердца, дисциркуляторная энцефалопатия и облитирирующие заболевания артерий нижних конечностей. Экспериментальные исследования показали, что потребление матерью незаменимых полиненасыщенных жирных кислот во время беременности и лактации воздействует на поведение, показатели двигательных и когнитивных функций потомства [29].

Для извлечения общих липидов из сбора нейропротективного применяли модифицированный метод Блайя и Дайэра [199]. Анализ метиловых эфиров проводили методом ГХ-МС (рисунок 29 и таблица 29).

Рисунок 29 - Хроматограмма метиловых эфиров жирных кислот сбора нейропротективного (1 – пальмитиновая кислота, 2 – олеиновая кислота, 3 – линолевая кислота, 4 – -линоленовая кислота)

–  –  –

Результаты исследования компонентного состава общих липидов, выделенных из сбора, и процентное содержание жирных кислот представлены в таблице 29 и на рисунке 29. Анализ показал наличие 15 соединений – насыщенные и ненасыщенные жирные кислоты, их производные. Выявлено наибольшее содержание ненасыщенных – линолевой (42,80%), олеиновой (27,15%), линоленовой (3,07%) и насыщенных – пальмитиновой (9,35%) кислот.

Компонентный состав эфирного масла Эфирные масла – особая группа органических соединений. Они влияют на ключевые моменты роста и жизнедеятельности растений: служат для защиты от инфекций, теплорегуляции, способствуют за счет характерного запаха привлечению или отпугиванию насекомых. Эфирные масла, как правило, являются сложной многокомпонентной смесью моно- и сесквитерпеноидов:

углеводородов, спиртов, альдегидов, кетонов, сложных эфиров, производных фенолов и других соединений, что обеспечивает их многогранные фармакологические свойства [8,16,173].

Количественное определение эфирного масла проводили из навески массой 50,0 г, согласно ГФ ХI изд., вып. 1, с. 290, метод 1. Содержание эфирного масла в сборе нейропротективном составило 0,08 %. Определение компонентов эфирного масла сбора выполняли методом ГХ-МС (глава 2, п. 2.2., с. 49). Результаты проведенного исследования приведены в таблице 30 и на рисунке 30.

Рисунок 30 - Хроматограмма эфирного масла сбора нейропротективного (1 – гексаналь, 2 - пинен, 3 - -мирцен, 4 - 3-карен, 5 – лимонен, 6 – ацетофенон, 7 – терпинолен, 8 – диметиловый эфир тимогидрохинона, 9 - -селинен, 10 – спатуленол, 11 - эвдесма-3,7(11)диен-8-он) Таблица 30 – Компонентный состав эфирного масла сбора нейропротективного

–  –  –

В результате проведенного исследования установлено, что эфирное масло сбора содержит 86 компонентов, из которых идентифицировано 74. Наибольшее количество составляют лимонен (52,17%), терпинолен (5,21%), -фелландрен (3,84%), эвдесма-3,7(11)-диен-8-он (3,58%), 3-карен (3,39%), -селинен (2,82%), мирцен (1,96%), ацетофенон (1,72%), п-цимол (1,47%), спатуленол (1,46%), пинен (1,40%). В эфирном масле сбора обнаружены 31 компонент, характерные для эфирного масла корневищ и корней вздутоплодника сибирского, а также 5 118

–  –  –

Как известно, дефицит Мg приводит к различным патологическим состояниям сердечно-сосудистой и нервной систем организма. Кроме того, при различных формах цереброваскулярных заболеваний отмечается дефицит Se, Mn, Zn и избыточное накопление Na, токсичных элементов. Препараты Мg оказывают нейропротективное действие засчет ингибирования глутаматных рецепторов, блокады эксайтотоксичности, улучшения процессов энергетического обмена, вазодилятации, снижения апоптоза нейронов и обеспечения более эфективной передачи сигнала в каскадах нейротрофических факторов [30].

Приведенные данные в таблице 31 свидетельствуют о том, что в составе сбора нейропротективного присутствуют макроэлементы К – 0,64%, Са – 0,43%, Mg – 0,26%, P – 0,14%, причем в наименьшем количестве присутствует Na – 0,03%. Микроэлементный состав сбора представлен 23 элементами, среди которых преобладают Fe – 244,00 мг/кг, Mn – 26,20 мг/кг, Zn – 17,50 мг/кг и B – 14,70 мг/кг. Полученные результаты подтверждают возможность использования сбора в составе комплексной терапии цереброваскулярных заболеваний.

4.7.7. Количественное содержание биологически активных веществ в сборе нейропротективном 4.7.7.1. Количественное определение суммы органических кислот Органические кислоты – значимая группа БАВ, которая встречается практически во всех растениях. Они обладают антиоксидантным, антигипоксическим, антиацидотическим, антикетогенным и антистрессорным действием, стимулируют стероидогенез, поддерживают транспорт кальция в организме, ослабляют токсическое действие некоторых лекарственных веществ через повышение детоксицирующей активности печени [36, 141]. Определение суммы органических кислот в сборе нейропротективном проводили титриметрическим методом в пересчёте на яблочную кислоту по ГФ ХI изд., вып.1, ст. 38 [26]. Метрологические характеристики методики представлены в таблице 32.

Таблица 32 – Метрологические характеристики методики количественного определения суммы органических кислот в сборе нейропротективном

–  –  –

Таким образом, содержание суммы органических кислот в сборе нейропротективном составляет 1,22±0,05 %.

4.7.7.2. Определение дубильных веществ Дубильные вещества обладают вяжущими, кровоостанавливающими, противовоспалительными, антимикробными и антиоксидантными свойствами.

Установлено, что гидролизуемые и конденсированные дубильные вещества проявляют высокую Р-витаминную активность, антигипоксическое и антисклеротическое действие. Для количественного определения дубильных веществ в сборе нейропротективном использовали комплексонометрический метод титрования [125]. Метрологические характеристики методики приведены в таблице 33.

Таблица 33 – Метрологические характеристики методики количественного определения дубильных веществ в сборе нейропротективном

–  –  –

В результате проведенного анализа установлено, что содержание дубильных веществ в сборе нейропротективном составляет 1,38±0,02%.

4.7.7.3. Определение аскорбиновой кислоты Аскорбиновая кислота обладает сильными антиоксидантными свойствами, что позволяет использовать ее совместно с нейропротекторами при комплексном лечении глаукомы. [190]. Для определения содержания аскорбиновой кислоты в сборе нейропротективном использована методика, приведенная в ФС 42-2668-95 на экстракт шиповника сухой. Методика основана на реакции окисления кислоты аскорбиновой фосфорномолибденовым реактивом и последующем спектрофотометрическом определении образующегося комплекса (рисунок 31) [126], ее метрологические характеристики приведены в таблице 34.

0,7 0,6 0,5 0,4

–  –  –

Рисунок 31 - Спектры поглощения продуктов взаимодействия сбора нейропротективного (водного извлечения) и аскорбиновой кислоты с фосфорномолибденовым реактивом

–  –  –

Таким образом, содержание аскорбиновой кислоты в сборе нейропротективном составляет 1,55±0,06%.

4.7.7.4. Количественное определение витаминов группы В в сборе нейропротективном и его компонентах Витамины группы В, прежде всего В1 (тиамин), В6 (пиридоксин), В12 (цианокобаламин), относятся к нейротропным и многие годы применяются в лечении заболеваний центральной и периферической нервной системы [109].

Определение содержания витаминов группы В в сборе нейропротективном проводили с помощью системы капиллярного электрофореза КАПЕЛЬ-105/105М (глава 2, п. 2.2, с. 49). Также данным методом исследовали исходные компоненты сбора. Результаты проведенного анализа представлены на рисунках 32 – 35 и в таблице 35.

Рисунок 32 - Электрофореграмма извлечения сбора нейропротективного Рисунок 33 - Электрофореграмма извлечения корней астрагала перепончатого Рисунок 34 - Электрофореграмма извлечения корней шлемника байкальского

–  –  –

Проведенные исследования показали, что сбор нейропротективный является богатым источником витаминов группы В, содержание витамина В1 составило 0,65·10-2%, В2 – 4,91·10-2%, В3 – 12,50·10-2%, В5 – 152,00·10-2%, В6 – 5,30·10-2%, Вс

– 2,70·10-2%.

4.7.7.5. Определение суммы восстанавливающих моносахаров полисахаридного комплекса сбора Растительные полисахариды изучаются уже в течение длительного времени в связи с их ценными техническими свойствами и высокой физиологической активностью [78, 83, 112].

При определении количественного содержания полисахаридов в сборе применена спектрофотометрическая методика количественного определения полисахаридов в листьях мать-и-мачехи [9], основанная на способности моносахаридов, образовавшихся после гидролиза полисахаридного комплекса, восстанавливать в щелочной среде пикриновую кислоту до пикрамовой. В методику внесены изменения: степень измельчения сырья – 1 мм, 2-хкратная экстракция 70% спиртом -1 час и 30 минут – для максимального очищения сырья от флавоноидов (см. гл. 4, п. 4.8.1) и сапонинов. Кроме того, увеличен объем водного раствора А до 35 мл, для реакции комплексообразования использовался 0,05% водный раствор пикриновой кислоты, максимум оптической плотности наблюдался в области 460±2 нм (рисунок 36).

–  –  –

где D2 – оптическая плотность испытуемого раствора;

D1 – оптическая плотность раствора РСО глюкозы;

m2 – масса сбора нейропротективного, г;

m1 – масса РСО глюкозы в пересчете на безводную глюкозу, г;

W – влажность сбора нейропротективного, %.

Массу навески РСО глюкозы в пересчете на безводную глюкозу в граммах

–  –  –

Таким образом, содержание суммы восстанавливающих моносахаров полисахаридного комплекса в сборе нейропротективном составляет 4,59±0,20 %.

4.7.7.6. Определение тритерпеновых сапонинов Тритерпеновые сапонины – сложные по структуре природные полициклические соединения гликозидного характера, состоящие из полярной углеводной части и неполярного агликона. Для лекарственного растительного сырья и препаратов, содержащих сапонины, характерно адаптогенное, отхаркивающее [52], диуретическое, нейролептическое, седативное, противовоспалительное [235], противовирусное [117], слабительное действие [87]. Они стимулируют и тонизируют центральную нервную систему [99].

Количественную оценку тритерпеноидов в сборе проводили спектрофотометрическим методом с использованием галохромной реакции тритерпеноидов с серной кислотой концентрированной[103]. Так как сбор содержит большое количество флавоноидов и кумаринов, во много раз превышающее содержание сапонинов, то при выполнении стандартных методик появляются дополнительные максимумы поглощения, мешающие количественному определению сапонинов в сборе (рисунок 37(2)), поэтому в методику введены дополнительные стадии очистки от флавоноидов (на стеклянной колонке с окисью алюминия) и кумаринов (жидкость - жидкостная экстракция с помощью 3% водного раствора Na2CO3).

Рисунок 37 - Спектры реакции взаимодействия сапонинов с концентрированной серной кислотой - хлороформного извлечения сбора нейропротективного и раствора РСО олеаноловой кислоты 1- после очистки извлечения от флавоноидов и кумаринов 2 – до очистки извлечения от флавоноидов и кумаринов Методика. Аналитическую пробу сырья измельчали до размера частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями диаметром 1 мм.

Около 5 г (точная навеска) измельченного сырья смачивали 5 - 6 мл 10% фосфорной кислоты и помещали в плоскодонную колбу со шлифом вместимостью 250 мл, прибавляли 50 мл хлороформа. Колбу присоединяли к обратному холодильнику и экстрагировали на водяной бане при температуре 60°С в течение 60 минут. Извлечение фильтровали, фильтр предварительно промывали 10 мл хлороформа. Экстракцию повторяли еще дважды. Объединенные извлечения выпаривали досуха, растворяли в хлороформе, переносили в мерную колбу вместимостью 25 мл и доводили объем раствора до метки хлороформом.

Далее из полученного извлечения отбирали аликвоту объемом 12,5 мл и помещали в делительную воронку, прибавляли 25 мл 3% водного раствора Na2CO3 и взбалтывали в течение 15 - 20 минут. После расслоения жидкостей из воронки удаляли нижний хлороформный слой. Оставшийся водный бикарбонатный экстракт подкисляли до рН = 3 - 4 с помощью 20% серной кислоты. Затем в воронку наливали 25 мл хлороформа и снова взбалтывали в течение 15-20 минут. После расслоения жидкостей из воронки сливали хлороформный слой в колбу через стеклянную колонку (h = 25 см, d = 2 см) c 10 г окиси алюминия для хроматографии II степени активности (по Брокману).

Хлороформный элюат упаривали на кипящей водяной бане примерно до объема мл, остаток растворителя удаляли продуванием воздуха. Сухой остаток переносили 95% спиртом в мерную колбу вместимостью 25 мл и доводили объем раствора этим же растворителем до метки (раствор А). 4 мл раствора А выпаривали досуха на кипящей водяной бане, сухой остаток растворяли в 1 мл 95% спирта и прибавляли к нему 4 мл серной кислоты концентрированной, тщательно перемешивали. Через 10 минут измеряли оптическую плотность полученного раствора на спектрофотометре при длине волны 310±2 нм, раствор сравнения – серная кислота концентрированная.

Параллельно измеряли оптическую плотность раствора РСО олеаноловой кислоты в аналогичных условиях проведения эксперимента (к 1 мл раствора РСО олеаноловой кислоты прибавляли 4 мл серной кислоты концентрированной, тщательно перемешивали). Полученные спектры (220-450 нм) продуктов реакции суммы тритерпеновых сапонинов сбора и стандарта олеаноловой кислоты представлены на рисунке 37(1).

Содержание суммы тритерпеновых сапонинов в сборе в пересчете на олеаноловую кислоту и абсолютно сухое сырье в процентах (Х) вычисляли по формуле:

D m0 25 25 1 100 100 D m0 5000 X ;

D0 m 12,5 4 25 (100 W ) D0 m (100 W ) где D – оптическая плотность испытуемого раствора;

D0 – оптическая плотность раствора РСО олеаноловой кислоты;

m– масса сбора нейропротективного, г;

m0 – масса РСО олеаноловой кислоты, г;

W – влажность сбора нейропротективного, %.

Метрологические характеристики методики приведены в таблице 37.

Таблица 37 - Метрологические характеристики методики количественного определения тритерпеновых сапонинов в сборе нейропротективном

–  –  –

1.2 2,5 Absorbance (AU)

–  –  –

0.6 0.4 0,5 0.2

–  –  –

Около 10 г (точная навеска) измельченного сбора помещали в коническую колбу вместимостью 250 мл, прибавляли 50 мл хлороформа и экстрагировали на водяной бане при температуре 60°C с обратным холодильником в течение 1 часа.

Извлечение фильтровали через бумажный фильтр в плоскодонную колбу вместимостью 250 мл. Экстракцию повторяли еще дважды. Полученные объединенные извлечения упаривали на водяной бане до объема 5 мл, а затем под вакуумом досуха, остаток растворяли в 95% спирте и количественно переносили в мерную колбу вместимостью 50 мл, доводили объем 95% спиртом до метки.

Полученный раствор использовали для нанесения на пластину Sorbfill в объеме 0,5 мл в виде полосы длиной 1 см. Параллельно на расстоянии 3 см от анализируемого раствора наносили раствор ГСО фловерина в объеме 0,5 мл в виде полосы длиной 1 см. Далее пластину помещали в систему гексан-бензолметанол (5:4:1) и при достижении фронта растворителя 10 см вынимали из камеры и сушили на воздухе до исчезновения запаха растворителей. После чего пластинку просматривали в УФ-свете при 360 нм и отмечали зоны, содержащие дигидросамидин и виснадин. Силикагель с отмеченных зон извлечения и контроля количественно переносили в мерные колбы вместимостью 50 мл, приливали 20-30 мл 95% спирта, закрывали колбы крышками, перемешивали на «вибрационном встряхивателе» в течение 2 ч. Доводили растворы в колбах до меток 95% спиртом, перемешивали и фильтровали через беззольные фильтры.

Измеряли оптическую плотность фильтратов на спектрофотометре в кювете с толщиной слоя 1 см при 322±2 нм, раствор сравнения – 95% спирт.

Содержание суммы дигидросамидина и виснадина в сборе в пересчете на фловерин и абсолютно сухое сырье в процентах (Х) вычисляют по формуле:

D m0 5000 D m0 25 25 1 100 100 X ;

D0 m 12,5 4 25 (100 W ) D0 m (100 W ) где D – оптическая плотность испытуемого раствора;

D0 – оптическая плотность раствора ГСО фловерина;

m – масса сбора нейропротективного, г;

m0 – масса ГСО фловерина, г;

W – влажность сбора нейропротективного, %.

Метрологические характеристики методики приведены в таблице 38.

Таблица 38 - Метрологические характеристики методики количественного определения кумаринов в сборе нейропротективном

–  –  –

Таким образом, установлено содержание кумаринов (сумма дигидросамидина и виснадина) в сборе нейропротективном - 0,80±0,03% %.

4.8. Стандартизация и разработка нормативной документации на сбор нейропротективный Для практического использования лекарственных средств необходимо решить комплекс вопросов, связанных с их стандартизацией и разработать на основе полученных данных соответствующую НД. В соответствии ОФС «Сборы»

[26] нами разработаны показатели качества сбора нейропротективного: 1) подлинность, включающая внешние признаки (морфологическеие признаки, характерные для компонентов сбора, запах и вкус водного извлечения), микроскопические признаки диагностические признаки), (анатомические качественные реакции и тонкослойная хроматография; 2) доброкачественность (содержание действующих веществ, влажность, зола общая и зола не растворимая в 10% растворе хлористоводородной кислоты, измельченность и содержание примесей); 3) стабильность сбора в процессе хранения в естественных условиях с измерением показателей качества в течение 2,5 лет с периодичностью 6 месяцев (срок годности сбора нейропротективного установлен в 2 года - Приложение 5).

Характерные внешние и микроскопические признаки сбора нейропротективного приведены в главе 4, п.4.5. и п.4.6.

Также для определения подлинности сбора нейропротективного разработаны методики качественных реакций и тонкослойной хроматографии обнаружения флавоноидов и свободных аминокислот:

- 2 г сбора помещают в коническую колбу вместимостью 50 мл, прибавляют 20 мл 60% спирта, присоединяют колбу к обратному холодильнику и нагревают на кипящей водяной бане в течение 30 минут. Извлечение охлаждают, фильтруют через бумажный фильтр. 2 мл полученного извлечения переносят в пробирку и прибавляют к нему 50 мг порошка металлического магния и 1 мл хлористоводородной кислоты концентрированной, нагревают 5 минут на водяной бане. Появляется красно-оранжевое окрашивание (флавоноиды).

- 2 г сбора помещают в коническую колбу вместимостью 50 мл, прибавляют 20 мл воды очищенной, присоединяют колбу к обратному холодильнику и нагревают на кипящей водяной бане в течение 30 минут. Извлечение охлаждают, фильтруют через бумажный фильтр, концентрируют в выпарительной чашке до 2 мл и переносят в пробирку. К извлечению прибавляют 4 капли 1% раствора нингидрина в 70% спирте, нагревают на кипящей водяной бане в течение 20 минут. Появляется красно-фиолетовое окрашивание (аминокислоты).

- На линию старта хроматографической пластинки ПТСХ-ПА-УФ «Sorbfil»

размером 1515 см или 1015 см наносят дробно в первую точку 0,05 мл 60% спиртового извлечения сбора нейропротективного 1:10 (полученного на кипящей водяной бане с обратным холодильником в течение 1 часа).

Рядом на расстоянии 3 см от первой точки во вторую точку наносят 0,005 мл раствора РСО байкалина. Пластинку с нанесенными пробами высушивают на воздухе и помещают в камеру со смесью растворителей хлороформ-метанол (60:40) и хроматографируют восходящим способом.

После прохождения фронтом растворителей 13 см, пластинку вынимают из камеры и высушивают на воздухе до удаления следов растворителей, опрыскивают 10% раствором серной кислоты и нагревают в сушильном шкафу при температуре 100С в течение 2 - 3 минут. На уровне зонысвидетеля должна обнаруживаться доминирующая оранжевая зона Rf ~ 0,19.

Допускается наличие других желтых зон.

- На линию старта хроматографической пластинки ПТСХ-ПА-УФ «Sorbfil»

размером 1515 см или 1015 см наносят дробно в первую точку 0,05 мл водного извлечения сбора нейропротективного 1:10 (полученного на кипящей водяной бане с обратным холодильником в течение 1 часа и упаренного до объема, равного 1/4 первоначального объема). Рядом на расстоянии 3 см от первой точки во вторую точку наносят 0,005 мл раствора РСО аргинина. Пластинку с нанесенными пробами высушивают на воздухе и помещают в камеру со смесью растворителей пропанол - вода (70:30) и хроматографируют восходящим способом. После прохождения фронтом растворителей 10 см, пластинку вынимают из камеры и высушивают на воздухе до удаления следов растворителей, опрыскивают 0,2% спиртовым раствором нингидрина и нагревают в сушильном шкафу при температуре 100С в течение 2 - 3 минут. На уровне зоны-свидетеля должна обнаруживаться доминирующая фиолетовая зона аргинина с Rf~0,06.

Допускается наличие других фиолетовых, розово-оранжевых зон.

В качестве критериев доброкачественности сбора нейропротективного предложены методики количественного определения суммы флавоноидов в пересчете на байкалин и суммы свободных аминокислот в пересчете на аргинин, а также числовые показатели, полученные в результате товароведческого анализа сбора (глава 4, п. 4. 4).

Разработка методики количественного определения суммы флавоноидов в пересчете на байкалин в сборе нейропротективном Флавоноиды являются одним из классов растительных полифенолов, проявляющих разнообразную фармакологическую активность и придающих окраску растениям. В последнее время показано, что флавоноиды помимо антиоксидантного эффекта, проявляют противовоспалительный, противоаллергический, кардиопротекторный, антигипертензивный, гепатопротекторный, антибактериальный, противоопухолевый, эстрогенный и даже антиэстрогенный эффекты [95]. В качестве стандартного образца выбран байкалин, спектр поглощения которого находится в одной области 279±2 нм со

–  –  –

Для интенсификации процесса экстракции и полноты выхода флавоноидов изучены влияние времени и кратности экстракции (таблица 40).

Таблица 40- Содержание суммы флавоноидов в извлечениях сбора нейропротективного в зависимости от времени и кратности экстракции

–  –  –

Исходя из полученных данных установлены оптимальные условия анализа:

степень измельчения сырья – 1 мм, экстрагент – 60% спирт, соотношение сырье:

экстрагент – 1:100, температура проведения анализа – температура кипения водяной бани, кратность и время экстракции – 1 (1час).

Установленные в ходе экспериментов оптимальные параметры легли в основу методики количественного определения суммы флавоноидов в сборе нейропротективном и приведены в описании методики.

Методика 1. Аналитическую пробу сбора измельчают до размера частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями диаметром 1 мм.

Около 1 г (точная навеска) измельченного сбора помещают в колбу со шлифом вместимостью 250 мл, прибавляют 100 мл 60% спирта, взвешивают с погрешностью ± 0,01. Колбу присоединяют к обратному холодильнику и экстрагируют на кипящей водяной бане в течение 1 часа. Колбу с содержимым охлаждают, взвешивают, доводят до первоначальной массы 60% спиртом.

Извлечение фильтруют через бумажный складчатый фильтр «красная лента», отбрасывая первые 10 мл фильтрата (раствор А). 0,5 мл раствора А помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл, доводят объем раствора 60% спиртом до метки и перемешивают (раствор Б).

Измеряют оптическую плотность раствора Б на спектрофотометре при

–  –  –

где D – оптическая плотность испытуемого раствора;

D0 – оптическая плотность раствора РСО байкалина;

m – масса сбора нейропротективного, г;

m0 – масса РСО байкалина, г;

W – влажность сбора нейропротективного, %.

Метрологические характеристики методики количественного определения суммы флавоноидов в сборе нейропротективном приведены в таблице 41.

Таблица 41- Метрологические характеристики методики количественного определения суммы флавоноидов в пересчете на байкалин в сборе нейропротективном

–  –  –

Относительная ошибка единичного определения не превышает 5%.

Установлена норма содержания суммы флавоноидов в пересчете на байкалин в сборе нейропротективном – не менее 6,0% (Приложение 5).

Данные, полученные в результате проведения валидации методики количественного определения суммы флавоноидов в сборе в пересчете на байкалин, позволяют оценить метод положительно по параметрам: линейность, повторяемость, воспроизводимость и правильность (Приложение 4) Разработка методики количественного определения суммы свободных аминокислот в пересчете на аргинин в сборе нейропротективном Многие биологически активные добавки к пище и лекарственные средства, обладающие нейротропной активностью, представляют собой смесь аминокислот [46]. Нами разработана методика количественного определения суммы свободных аминокислот, основанная на нингидриновой реакции, характерной для находящихся в -положении аминогрупп и дающей при нагревании синее или фиолетовое окрашивание. Количественное определение суммы свободных аминокислот в сборе нейропротективном рассчитано по стандартному образцу аргинина, оптическая плотность которого измеряется параллельно с раствором исследуемого образца (рисунок 40).

–  –  –

Рисунок 40 - Спектры поглощения комплексов водного извлечения сбора нейропротективного и раствора РСО аргинина с 0,2% водным раствором нингидрина Выбор этой аминокислоты в качестве стандартного образца основан на спектрах поглощения комплексов аминокислот сбора и аргинина с нингидрином, а также данных ионообменной хроматографии (глава 4, п. 4.7.5.). При разработке

–  –  –

Для интенсификации процесса экстракции и полноты выхода свободных аминокислот из сбора нейропротективного изучено влияние времени и кратности экстракции (таблица 43).

Таблица 43 - Содержание суммы свободных аминокислот в зависимости от времени и кратности экстракции в извлечениях сбора нейропротективного

–  –  –

Установлено, что максимальная оптическая плотность фотометрической реакции достигается при использовании 1 мл извлечения сбора с 1 мл 0,2% водного раствора нингидрина, время нагревания полученной реакционной смеси

–  –  –

Методика 2. Аналитическую пробу сбора измельчают до размера частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями диаметром 1 мм.

Около 1 г (точная навеска) измельченного сбора помещают в плоскодонную колбу вместимостью 250 мл, прибавляют 150 мл воды очищенной, взвешивают с погрешностью ± 0,01 г. Содержимое колбы экстрагируют на водяной бане с обратным холодильником при температуре 90°C в течение 1 часа. Затем колбу с содержимым охлаждают, взвешивают, доводят до первоначальной массы водой очищенной.

Извлечение фильтруют через бумажный складчатый фильтр «красная лента», отбрасывая первые 10 мл фильтрата (раствор А).

В пробирку вместимостью 25 мл помещают 1 мл раствора А, прибавляют к нему 2 мл ацетатного буфера 4,5, 2 мл 0,05% водного раствора аскорбиновой кислоты, 1 мл 0,2 % водного раствора нингидрина и нагревают на кипящей водяной бане в течение 30 минут. После охлаждения раствор количественно переносят в мерную колбу вместимостью 50 мл, доводят объем раствора водой до метки, перемешивают и через 1 ч после начала реакции определяют оптическую плотность на спектрофотометре при длине волны 568±2 нм. В качестве раствора сравнения используют воду.

Параллельно проводят реакцию свежеприготовленного раствора РСО аргинина (1 мл) с 0,2 % водным раствором нингидрина (1 мл) в присутствии ацетатного буфера 4,5 (2 мл), 0,05% водного раствора аскорбиновой кислоты (2 мл) и измеряют оптическую плотность на спектрофотометре при длине волны 568±2 нм. В качестве раствора сравнения используют воду.

Содержание суммы свободных аминокислот в пересчете на аргинин и абсолютно сухое сырье в процентах (Х) вычисляют по формуле:

D 150 50 m0 1 100 D m0 15000

–  –  –

Относительная ошибка единичного определения не превышает 5%.

Установлена норма содержания суммы свободных аминокислот в пересчете на аргинин в сборе нейропротективном – не менее 3,0% (Приложение 5).

Данные, полученные в результате проведения валидации методики количественного определения суммы свободных аминокислот в сборе в пересчете на аргинин, позволяют оценить метод положительно по параметрам: линейность, повторяемость, воспроизводимость и правильность (Приложение 4).

Разработанные показатели качества, установленные при стандартизации сбора, включены в проект ФСП на сбор нейропротективный (Приложение 3).

141 Выводы к главе

1. На основании анализа сведений литературы, фитохимического и фармакологического скрининга обоснован состав и оптимальное соотношение компонентов сбора нейропротективного, включающего лекарственное растительное сырье: корни астрагала перепончатого, корни шлемника байкальского, корневища и корни вздутоплодника сибирского (40:35:25).

2. Разработана технологическая схема получения и определены числовые показатели сбора нейропротективного: экстрактивных веществ, извлекаемых водой, не менее 26,0%; золы общей не более 10,0%; золы, не растворимой в 10% растворе хлористоводородной кислоты, не более 5,0%;

влажность не более 10,0%; частиц, не проходящих сквозь сито с диаметром отверстий 2 мм, не более 3,0%; частиц, проходящих сквозь сито с диаметром отверстий 0,25 мм, не более 5,0%; органической примеси не более 1,5%, минеральной примеси не более 2,0%.

3. Установлены анатомо-диагностические признаки сбора нейропротективного

– сетчатые сосуды древесины и бесцветные механические волокна корней астрагала перепончатого; клетки паренхимы (округлой формы, окрашенные в желтый цвет) и склереиды корней шлемника байкальского; клетки паренхимы (извилистой формы, бесцветные) и сосуды корней и корневищ вздутоплодника сибирского.

4. Качественными реакциями, а также методами БХ, ТСХ и ВЭЖХ подтверждено наличие в сборе флавоноидов (байкалин, дигидрокверцетин, лютеолин-7-гликозид, рутин, кверцетин, эпигаллокатехингаллат, эпикатехин), фенолкарбоновых (галловая, вератровая), оксикоричных (хлорогеновая, кофейная, цикориевая, неохлорогеновая и феруловая кислоты), и органических кислот (янтарная кислота), дубильных веществ (таннин), кумаринов (дикумарин, кумарин), тритерпеновых сапонинов, аминокислот, углеводов (лактоза, сахароза, глюкоза, рамноза), белковых веществ, водорастворимых полисахаридов, эфирных масел, аскорбиновой кислоты и алкалоидов.

5. В сборе нейропротективном обнаружено 15 жирных кислот, наибольшее содержание ненасыщенных – линолевой (42,80%), олеиновой (27,15%), линоленовой (3,07%) и насыщенных - пальмитиновой (9,35%) кислот.

6. В эфирном масле сбора нейропротективного (содержание масла в сырье 0,08%) идентифицировано 74 соединения, из них преобладают лимонен (52,17%), терпинолен (5,21%), -фелландрен (3,84%), эвдесма-3,7(11)-диенон (3,58%), 3-карен (3,39%), -селинен (2,82%), -мирцен (1,96%), ацетофенон (1,72%), п-цимол (1,47%), спатуленол (1,46%), -пинен (1,40%).

В эфирном масле сбора обнаружены 31 компонент, характерные для эфирного масла корневищ и корней вздутоплодника сибирского, а также 5 компонентов, содержащиеся в эфирном масле корней шлемника байкальского.

7. В сборе нейропротективном определены 21 свободная и 19 связанных аминокислот, среди них 9 незаменимых аминокислот (треонин, валин, метионин, изолейцин, лейцин, фенилаланин, лизин, гистидин, аргинин), суммарное содержание свободных аминокислот в сборе составляет 4,71 мг/г, в наибольшем количестве присутствуют аргинин – 41,92%, аспарагин

– 22,15%, глютамин – 9,86% и глутаминовая кислота – 6,47% (от общего количества аминокислот); суммарное содержание связанных аминокислот – 45,54 мг/г, среди которых преобладают аргинин – 15,82%, глутаминовая кислота – 12,41%, аспарагиновая кислота – 11,87%, цистеин – 9,77% (от общего количества аминокислот).

8. Элементный состав сбора нейропротективного представлен макроэлементами К – 0,64%, Са – 0,43%, Mg – 0,26%, P – 0,14%, Na – 0,03%. Микроэлементный состав сбора включает 23 элемента, среди которых преобладают Fe – 244,00 мг/кг, Mn – 26,20 мг/кг, Zn – 17,50 мг/кг и B – 14,70 мг/кг; содержание азота общего - 1,42%.

9. 10. В сборе нейропротективном и его компонентах обнаружены витамины группы В (n*10-2%): в сборе В1 – 0,65, В2 – 4,91, В3 – 12,50, В5 – 152,00, В6 – 5,30, Вс – 2,70; в корнях астрагала перепончатого В2 – 0,20, В5 – 2,60, В6 – 3,88, Вс – 1,19; в корнях шлемника байкальского В1 – 1,79, В2 – 8,98, В3 – 35,85, В5 – 431,31, В6 – 9,43; в корневищах и корнях вздутоплодника сибирского В2 – 6,47, В6 – 1,39, Вс – 4,77.

10.Установлено количественное содержание БАВ в сборе нейропротективном:

органических кислот 1,22±0,05%, дубильных веществ 1,38±0,02%, аскорбиновой кислоты 1,55±0,06%, полисахаридов 4,59±0,20%, тритерпеновых сапонинов 0,06±0,01%, кумаринов 0,80±0,03%.

11. В сборе нейропротективном разработаны методики количественного определения суммы флавоноидов в пересчёте на байкалин и суммы свободных аминокислот в пересчете на аргинин, относительные ошибки методик не превышают 5%; содержание флавоноидов и свободных аминокислот в сборе нейропротективном должно быть не менее 6,0% и 3,0% соответственно.

ГЛАВА 5. РАЗРАБОТКА «БРЭЙН-ПРОФИТ» ЭКСТРАКТА СУХОГО

И ЕГО СТАНДАРТИЗАЦИЯ

Растительные сборы наряду с многочисленными положительными свойствами обладают определенными недостатками: низкая стабильность, неполное извлечение биологически активных веществ, неудобство применения настоя из сбора. Поэтому нами разработан «Брэйн-профит» экстракт сухой – суммарный экстракционный препарат на основе сбора нейропротективного.

5.1. Оптимизация условий экстрагирования сбора нейропротективного При производстве сухих экстрактов первостепенное значение имеет процесс экстрагирования лекарственного растительного сырья.

В нашей работе изучены различные факторы, обеспечивающие наибольшую эффективность данного процесса: состав и природа экстрагента, его соотношение с сырьем, температурный режим, степень измельчения сырья, продолжительность и кратность числа экстракций. Количественная оценка велась по содержанию экстрактивных веществ (извлекаемых 60% спиртом), суммы флавоноидов в пересчете на байкалин и суммы свободных аминокислот в пересчете на аргинин.

Экстрагент, действуя как активный компонент системы, влияет на скорость, полноту и качество экстрагирования биологически активных веществ из растительного материала. В качестве экстрагентов были использованы вода и водно-спиртовые растворы различной концентрации. Результаты приведены в таблице 47.

Как видно из таблицы 47, с увеличением концентрации водно-спиртовых растворов повышается содержание суммы флавоноидов, экстрактивных веществ в извлечениях сбора и при 60% спирте достигает максимальных значений, поэтому в дальнейших исследованиях в качестве экстрагента выбран 60% спирт.

Таблица 47- Содержание экстрактивных веществ, флавоноидов, свободных аминокислот в извлечениях сбора нейропротективного в зависимости от типа экстрагента*

–  –  –

Используя для экстракции 60% спирт в различных соотношениях к количеству сырья 1:5, 1:7, 1:10, 1:12, 1:15, 1:20, получили соответствующие выходы экстрактивных веществ, флавоноидов и свободных аминокислот (таблица 48). Полученные данные свидетельствуют о том, что при соотношении сырья и экстрагента 1:10 и выше количество экстрагируемых веществ примерно одинаково, в этой связи нерационально увеличение объема экстрагента.

Таблица 48 - Содержание экстрактивных веществ, флавоноидов и свободных аминокислот в извлечениях сбора нейропротективного в зависимости от соотношения сырье: экстрагент*

–  –  –

Как известно, степень измельчения растительного материала является важным фактором повышения выхода действующих веществ и интенсификации процесса экстрагирования. На основании экспериментальных данных (таблица

49) для сбора нами выбрана степень измельчения 1 мм, которая обеспечивает максимальный выход суммы экстрактивных веществ.

Таблица 49 – Содержание экстрактивных веществ в извлечениях сбора нейропротективного в зависимости от размера частиц *

–  –  –

Также было исследовано влияние температурного режима на выход суммы экстрактивных веществ и действующих веществ (таблица 50). Полученные результаты свидетельствуют о том, что с увеличением температуры повышается выход БАВ и выбрана оптимальная температура 60°C-70°C.

Таблица 50- Содержание экстрактивных веществ, флавоноидов и свободных аминокислот в извлечениях сбора нейропротективного в зависимости от температурного режима экстракции*

–  –  –

измельченного сбора 60% спиртом на водяной бане при температуре 60°С. Через каждые 15 минут во время четырех контактов фаз отбирали по 25 мл извлечения для определения количества экстрактивных веществ, а также 1,5 мл для определения суммы флавоноидов и суммы свободных аминокислот.

Экспериментальные данные, представленные в таблице 51, свидетельствуют о том, что равновесное состояние во время I контакта фаз наступает через 60 минут, во время II – через 60 минут, во время III – через 60 минут. Как видно из таблицы 56, трехкратная экстракция обеспечивает максимальный выход как действующих, так и экстрактивных веществ.

В результате проведенных исследований установлены оптимальные условия экстрагирования сбора нейропротективного: экстрагент – 60% спирт, его соотношение к количеству сырья – 1:10, температурный режим – 60°С, степень измельчения сбора – 1 мм. Время I экстракции – 1 час, II – 1 час, III – 1 час.

Таблица 51- Содержание экстрактивных веществ, флавоноидов и свободных аминокислот в извлечениях сбора нейропротективного в зависимости от времени экстрагирования и количества экстракций

–  –  –

4.2. Технологическая схема получения «Брэйн-профит» экстракта сухого Технологическая схема получения экстракта сухого отработана с помощью лабораторного оборудования.

На всех стадиях технологического процесса проводили контроль исходного сбора, шрота, осадка балластных веществ после сепарирования, конечного продукта производства по разработанным методикам (на содержание суммы флавоноидов и суммы свободных аминокислот). Схема получения экстракта сухого представлена на рисунке 41.

–  –  –

Рисунок 41- Технологическая схема производства «Брэйн-профит» экстракта сухого

Основные стадии технологического процесса:

ВР 1. Подготовка персонала к работе.

ВР 2. Подготовка производственных помещений.

ВР 3. Подготовка оборудования.

ВР 4. Получение воды очищенной.

ТП 1. Измельчение растительного сырья.

ТП 2. Получение готового продукта.

УМО 1. Фасовка и упаковка «Брэйн-профит» экстракта сухого ТП 1. Измельчение растительного сырья.

Растительное сырье – сбор нейропротективный, состоящий из корней астрагала перепончатого, корней шлемника байкальского, корневищ и корней вздутоплодника сибирского измельчали на мельнице для размола сухих проб МРП-2 до размера частиц не более 1 мм.

После измельчения 1,05 кг сбора нейропротективного, содержащего 0,096 кг флавоноидов в пересчете на байкалин и 0,0318 кг свободных аминокислот в пересчете на аргинин, получили 1,00 кг измельченного сбора, содержащего 0,0917 кг флавоноидов в пересчете на байкалин и 0,0303 кг свободных аминокислот в пересчете на аргинин.

Потери сырья при измельчении составили 0,05 кг или 4,76%.

Выход на стадии – 95,24 %.

Выход от начала технологического процесса – 95,24%.

Измельченный сбор подавали на следующую стадию технологического процесса.

ТП 2.1. Приготовление 60% спирта и экстракция измельченного сбора.

В емкость объемом 50 л заливали 19,29 л 96,4% спирта, плотность 0,8058 г /см3 (18,60 л в 100% исчислении) и 12,66 воды очищенной, перемешивали 10-15 минут, затем брали пробу на анализ полученной водно-спиртовой смеси для определения его крепости.

Получали 31 л 60% спирта плотностью 0,909 г/см3, который использовали для извлечения экстрактивных веществ из измельченного сбора. Уменьшение объема смеси при смешивании спирта и воды составило 0,95 л, т.е. 2,97%. Для извлечения экстрактивных веществ из сбора нейропротективного допустимо использование 59-61% спиртовых растворов (плотность 0,9068 – 0,9112 г/см3).

Для приготовления 60% спирта использовали также отгон спирта, поступающий с операции ТП 2.3.

1,00 кг измельченного сбора, взвешенного на весах, загружали в экстрактор, заливали 12 л 60% спирта (соотношение сырье-экстрагент 1:12 с учетом коэффициента водопоглощения 2). Экстракцию проводили на водяной бане при температуре 60°С, температуру проверяли термометром в течение 60 минут, периодически экстрактор встряхивали для перемешивания.

По окончании экстракции первый водно-спиртовой экстракт в количестве 10 л (плотность 0,915 г/см3) с помощью давления, создаваемого водоструйным насосом фильтровали в колбу Бунзена и направляли на следующую стадию технологического процесса ТП 2.2. В экстрактор со шротом заливали 60% спирт в объеме равном объему слитого экстракта и снова экстрагировали в течение 60 минут. Получили 9,0 л второго экстракта (плотность 0,912 г/см3).

Аналогично проводили третью экстракцию в течение 60 минут. Получили 8,9 л третьего экстракта (плотность 0,912 г/ см3), который аналогично первому и второму экстракту передавали на стадию ТП 2.2.

После трехкратной экстракции в экстракторе остается 3,20 кг шрота с влажностью 74,72%, содержащего 0,00293 кг суммы флавоноидов в пересчете на байкалин и 0,00348 кг суммы аминокислот в пересчете на аргинин, считая на абсолютно сухое вещество. Шрот далее не использовали и направляли его в отвал.

ТП 2.2. Фильтрация экстракта Первый, второй и третий экстракты последовательно, по мере их получения, фильтровали с помощью водоструйного насоса в колбу Бюнзена из толстостенного стекла. Получили: первый экстракт в количестве 9,8 л, плотность 0,915 г/см3, второй экстракт 9,0 л; плотность 0,912 г/ см 3; третий экстракт 8,8 л;

плотность 0,912 г/см3.

ТП 2.3. Концентрирование экстракта После фильтрации на воронке Бюхнера первый, второй и третий водноспиртовые экстракты последовательно, порциями подавали на испаритель ротационный для упарки. Упарку вели при температуре реакционной массы (50±2)°С и давлении 0,01 кгс/см2 (9,81 гПа) приблизительно до 1/5 первоначального объема.

В результате упарки получили 3,94 л водного кубового остатка (плотность 1,040 г/см3) и 21,26 л отгона этилового спирта с содержанием 63,14% (13,42 л 100%), которые помещали в емкость и вновь использовали для приготовления 60% спирта. Водный кубовой остаток, содержащий действующие вещества сливали в сборник.

ТП 2.4. Сепарирование концентрированного экстракта Концентрированный экстракт очищали от балластных веществ сепарированием на сепараторе. Сепаратор промывали 0,2 л водой очищенной.

Получили очищенный экстракт в количестве 4,91 л (плотность 1,039 г/см 3) и осадок балластных веществ в количестве 0,08 кг (влажность 61,05%), который в дальнейшем не использовали. Очищенный экстракт сливали в сборник и передавали на следующую стадию технологического процесса.

ТП 2.5. Доупарка экстракта После очистки на сепараторе водный кубовой остаток помещали в выпарительную чашку на доупарку на водяной бане с температурой реакционной среды 60±2°С приблизительно до 1/3 первоначального объема. В результате доупарки получили 1,4 л концентрированного экстракта (плотность 1,17 г/см3).

Доупаренный водный экстракт, содержащий действующие вещества, сливали в эмалированную кювету и передавали на следующую стадию технологического процесса.

ТП 2.6. Сушка очищенного концентрированного экстракта.

Доупаренный концентрированный экстракт в эмалированной кювете сразу помещали в вакуумный сушильный шкаф, где сушили при температуре 65 - 70°С и давлении минус 0,98 - минус 1кгс/см2(минус 0,098 – минус 0,1 мПа) в течение 8 часов.

Получили экстракт сухой в количестве 0,28 кг.

Выход на стадии – 88,71% (по сумме флавоноидов) и 82,18% (по сумме свободных аминокислот).

Выход от начала технологического процесса – 84,48% (по сумме флавоноидов) и 78,30% (по сумме свободных аминокислот).

ТП 2.7. Измельчение готового продукта.

Высушенный продукт в количестве 0,28 кг измельчали в фарфоровой ступке, после чего измельченный «Брэйн-профит» экстракт сухой просеивали сквозь сито 0,25 мм и упаковывали в банки из темного стекла с навинчивающей крышкой.

Получено на стадии 0,272 кг «Брэйн-профит» экстракта сухого, потеря в массе при высушивании – 4,05%, содержание суммы флавоноидов – 30,28%, содержание суммы свободных аминокислот – 9,26%.

Выход на стадии – 97,11% (по сумме флавоноидов) и 97,19% (по сумме свободных аминокислот).

Выход от начала технологического процесса – 82,04% (по сумме флавоноидов) и 76,10% (по сумме свободных аминокислот).

Полученный готовый продукт – экстракт сухой после его анализа на соответствие ФС (проект ФС – приложение 3) расфасовывали по 0,05 или 0,1 кг в банки оранжевого стекла по ГОСТу.

«Брэйн-профит» экстракт сухой представляет собой аморфный порошок от светло - коричневого до темно - коричневого цвета со специфическим запахом, горьковатого слегка вяжущего вкуса. Гигроскопичен, слегка комкуется.

Растворим в спиртовых растворах (40% - 70%), в горячей воде. Потеря в массе при высушивании не должна превышать 5,0%

5.3. Определение качественного состава и количественного содержания биологически активных веществ «Брэйн-профит» экстракта сухого С целью исследования химического состава полученного экстракта сухого проведен качественный анализ на содержание основных групп БАВ. В качестве объектов исследования использовали 5 серий экстракта сухого, полученных в лабораторных условиях.

Идентификацию БАВ вели по методикам, описанным в главе 3, п. 3.4.1.

Экспериментально подтверждено содержание в экстракте сухом групп БАВ, содержащихся в сборе нейропротективном: флавоноидов, аминокислот, дубильных веществ, сапонинов, кумаринов, углеводов, органических кислот, аскорбиновой кислоты.

5.3.1. Идентификация фенольных соединений методом ВЭЖХ Фенольные соединения являются важными составляющими «Брэйнпрофит» экстракта сухого, которые определяют его фармакологическую активность. Идентификацию фенольных соединений проводили методом ВЭЖХ.

Методика приготовления 70% спиртового извлечения экстракта сухого.

Около 0,5 г (точная навеска) экстракта сухого помещали в колбу вместимостью 100 мл, прибавляли 20 мл 70% спирта, присоединяли колбу к обратному холодильнику и нагревали на кипящей водяной бане в течение 5-10 минут с момента закипания спиртоводной смеси в колбе. После охлаждения смесь фильтровали через бумажный фильтр в мерную колбу вместимостью 25 мл и доводили 70% спиртом до метки (раствор А). 5 мл раствора А помещали в мерную колбу вместимостью 25 мл и доводили тем же растворителем до метки (исследуемый раствор).

По 50 мкл исследуемого раствора и растворов сравнения вводили в хроматограф и хроматографировали по выше приведенной методике (глава 2, п.

2.2, с. 47).

Результаты проведенных исследований приведены в таблице 52 и на рисунке 42.

Рисунок 42 – Хроматограмма 70% спиртового раствора «Брэйн-профит» экстракта сухого (детектирование при длине волны 254 нм) Таблица 52 - Компонентный состав фенольного комплекса «Брэйн-профит» экстракта сухого

–  –  –

Полученные данные (рисунок 42 и таблица 52) свидетельствуют о наличии в экстракте сухом флавоноидов (эпикатехин, эпигаллокатехингаллат, дигидрокверцетин, лютеолин-7-гликозид, рутин, байкалин, кверцетин, лютеолин), фенолкарбоновых (галловая, вератровая), оксикоричных кислот (о-кумаровая, протокатехиновая, хлорогеновая, кофейная, ванилиновая, цикориевая, неохлорогеновая, феруловая, п-анисовая), кумаринов (дикумарин, кумарин, ометоксикумарин).

5.3.2. Определение углеводов Определение содержания свободных углеводов в экстракте сухом проводили с использованием системы капиллярного электрофореза "КАПЕЛЬ 105/105М" (глава 2, п. 2.2, с. 49). Полученные данные представлены на рисунке 43 и в таблице 53.



Pages:     | 1 |   ...   | 2 | 3 || 5 | 6 |   ...   | 7 |
 

Похожие работы:

«БОЛОТОВ ВЛАДИМИР ПЕТРОВИЧ ОЦЕНКА СОДЕРЖАНИЯ И МИГРАЦИЯ ТЯЖЕЛЫХ МЕТАЛЛОВ В ЭКОСИСТЕМАХ ВОЛГОГРАДСКОГО ВОДОХРАНИЛИЩА Специальность: 03.02.08. Экология Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: доктор биологических наук,...»

«НГУЕН ВУ ХОАНГ ФЫОНГ ОЦЕНКА ЭКОЛОГИЧЕСКОЙ СИТУАЦИИ КРУПНЫХ ГОРОДОВ В СОЦИАЛИСТИЧЕСКОЙ РЕСПУБЛИКЕ ВЬЕТНАМ Специальность: 03.02.08экология (биология) Диссертация на соискание учёной степени кандидата биологических наук Научный руководитель: доктор биологических наук, профессор Чернышов В.И. Москва ОГЛАВЛЕНИЕ ГЛАВА 1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА...»

«ШИТОВ АЛЕКСАНДР ВИКТОРОВИЧ ВЛИЯНИЕ СЕЙСМИЧНОСТИ И СОПУТСТВУЮЩИХ ГЕОЛОГИЧЕСКИХ ПРОЦЕССОВ НА АБИОТИЧЕСКИЕ И БИОТИЧЕСКИЕ КОМПОНЕНТЫ ЭКОСИСТЕМ (НА ПРИМЕРЕ ЧУЙСКОГО ЗЕМЛЕТРЯСЕНИЯ И ЕГО АФТЕРШОКОВ) 25.00.36 – Геоэкология (науки о Земле) Диссертация на соискание ученой степени доктора геолого-минералогических наук Горно-Алтайск 201...»

«МИГИНА ЕЛЕНА ИВАНОВНА ФАРМАКОТОКСИКОЛОГИЯ И ЭФФЕКТИВНОСТЬ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ КОРМОВОЙ ДОБАВКИ ТРИЛАКТОСОРБ В МЯСНОМ ПЕРЕПЕЛОВОДСТВЕ 06.02.03 – ветеринарная фармакология с токсикологией Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: доктор биологических наук, профессор Кощаев Андрей...»

«Карачевцев Захар Юрьевич ОЦЕНКА ПИЩЕВЫХ (АКАРИЦИДНЫХ) СВОЙСТВ РЯДА СУБТРОПИЧЕСКИХ И ТРОПИЧЕСКИХ РАСТЕНИЙ В ОТНОШЕНИИ ПАУТИННОГО КЛЕЩА TETRANYCHUS ATLANTICUS MСGREGOR Специальность: 06.01.07 – защита растений Диссертация на соискание учёной степени кандидата биологических наук Научный руководитель: Попов Сергей...»

«Палаткин Илья Владимирович Подготовка студентов вуза к здоровьесберегающей деятельности 13.00.01 общая педагогика, история педагогики и образования Диссертация на соискание ученой степени кандидата педагогических наук Научные руководители: доктор биологических наук, профессор,...»

«Вафула Арнольд Мамати РАЗРАБОТКА ЭЛЕМЕНТОВ ТЕХНОЛОГИИ ВЫРАЩИВАНИЯ ПАПАЙИ ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ ЗДОРОВОГО ПОСАДОЧНОГО МАТЕРИАЛА И ЭКСТРАКТОВ С БИОПЕСТИЦИДНЫМИ СВОЙСТВАМИ ДЛЯ ЗАЩИТЫ ЕЕ ОТ ВРЕДНЫХ ОРГАНИЗМОВ Специальности: 06.01.07 – защита растений 06.01.01 – общее земледелие и растениеводство Диссертация на соискание ученой степени кандидата сельскохозяйственных...»

«Цвиркун Ольга Валентиновна ЭПИДЕМИЧЕСКИЙ ПРОЦЕСС КОРИ В РАЗЛИЧНЫЕ ПЕРИОДЫ ВАКЦИНОПРОФИЛАКТИКИ. 14.02.02 – эпидемиология ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени доктора медицинских наук Научный консультант: заслуженный деятель науки РФ, лауреат Государственной премии СССР профессор, доктор медицинских наук Ющенко Галина Васильевна Москва – 20 Содержание...»

«Баранов Михаил Евгеньевич Экологический эффект биогенных наночастиц ферригидрита при ремедиации нефтезагрязненных почвенных субстратов Специальность (03.02.08) – Экология (биология) Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: кандидат...»

«СЕРГЕЕВА ЛЮДМИЛА ВАСИЛЬЕВНА ПРИМЕНЕНИЕ БАКТЕРИАЛЬНЫХ ЗАКВАСОК ДЛЯ ОПТИМИЗАЦИИ ФУНКЦИОНАЛЬНО-ТЕХНОЛОГИЧЕСКИХ СВОЙСТВ МЯСНОГО СЫРЬЯ И УЛУЧШЕНИЯ КАЧЕСТВА ПОЛУЧАЕМОЙ ПРОДУКЦИИ Специальность 03.01.06 – биотехнология ( в том числе бионанотехнологии) Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель Доктор биологических наук, профессор Кадималиев Д.А. САРАНСК 2014 ОГЛАВЛЕНИЕ ВВЕДЕНИЕ.....»

«АБДУЛЛАЕВ Ренат Абдуллаевич ГЕНЕТИЧЕСКОЕ РАЗНООБРАЗИЕ МЕСТНЫХ ФОРМ ЯЧМЕНЯ ИЗ ДАГЕСТАНА ПО АДАПТИВНО ВАЖНЫМ ПРИЗНАКАМ Шифр и наименование специальности 03.02.07 – генетика 06.01.05 – селекция и семеноводство сельскохозяйственных растений ДИССЕРТАЦИЯ на соискание учёной степени кандидата...»

«Якимова Татьяна Николаевна Эпидемиологический надзор за дифтерией в России в период регистрации единичных случаев заболевания 14.02.02 эпидемиология диссертация на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Научный руководитель: доктор...»

«БРИТАНОВ Николай Григорьевич ГИГИЕНИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ ПЕРЕПРОФИЛИРОВАНИЯ ИЛИ ЛИКВИДАЦИИ ОБЪЕКТОВ ПО ХРАНЕНИЮ И УНИЧТОЖЕНИЮ ХИМИЧЕСКОГО ОРУЖИЯ 14.02.01 Гигиена Диссертация на соискание ученой степени доктора медицинских наук Научный консультант: доктор медицинских наук, профессор...»

«ПИМЕНОВА ЕКАТЕРИНА ВЛАДИМИРОВНА РАЗРАБОТКА МЕТОДА ОЦЕНКИ ЦИТОТОКСИЧНОСТИ АНТИГЕНОВ ВОЗБУДИТЕЛЯ МЕЛИОИДОЗА IN VITRO НА МОДЕЛИ ПЕРЕВИВАЕМЫХ КЛЕТОЧНЫХ КУЛЬТУР 03.02.03 – микробиология Диссертация на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Научный руководитель: доктор...»

«УШАКОВА ЯНА ВЛАДИМИРОВНА ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ТЕХНОЛОГИЙ ДНК-МАРКИРОВАНИЯ В СЕЛЕКЦИОННО-ГЕНЕТИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЯХ ЯБЛОНИ Специальность 06.01.05. – селекция и семеноводство сельскохозяйственных растений ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: кандидат биологических...»

«Кириллин Егор Владимирович ЭКОЛОГИЯ ОВЦЕБЫКА (OVIBOS MOSCHATUS ZIMMERMANN, 1780) В ТУНДРОВОЙ ЗОНЕ ЯКУТИИ 03.02.08 – экология Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: д. б. н., профессор Мордосов И. И. Якутск – 2015 Содержание Введение.. Глава 1. Краткая физико-географическая...»

«АУЖАНОВА АСАРГУЛЬ ДЮСЕМБАЕВНА ОЦЕНКА ДЕЙСТВИЯ АБИОТИЧЕСКИХ ФАКТОРОВ И БИОПРЕПАРАТА РИЗОАГРИН НА МИКРОБИОЛОГИЧЕСКУЮ АКТИВНОСТЬ ПОЧВЫ, АДАПТИВНОСТЬ И ПРОДУКТИВНОСТЬ ЯРОВОЙ МЯГКОЙ ПШЕНИЦЫ 03.02.08 – Экология Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: доктор...»

«ПОДОЛЬНИКОВА ЮЛИЯ АЛЕКСАНДРОВНА ОСОБЕННОСТИ СВОБОДНОРАДИКАЛЬНОГО СТАТУСА МОЛОКА КОРОВ УРБАНИЗИРОВАННОЙ ТЕРРИТОРИИ (НА ПРИМЕРЕ ОМСКОЙ ОБЛАСТИ) Специальность: 03.02.08 – экология ДИССЕРТАЦИЯ на соискание степени кандидата биологических наук Научный руководитель: Заслуженный работник высшей школы РФ доктор...»

«Хохлова Светлана Викторовна ИНДИВИДУАЛИЗАЦИЯ ЛЕЧЕНИЯ БОЛЬНЫХ РАКОМ ЯИЧНИКОВ 14.01.12-онкология ДИССЕРТАЦИЯ На соискание ученой степени доктора медицинских наук Научный консультант: Доктор медицинских наук, профессор Горбунова В.А Москва 2015 ОГЛАВЛЕНИЕ Введение Глава 1. Обзор литературы 1.1. Общая характеристика рака яичников 1.1.1. Молекулярно-биологические и...»

«Доронин Максим Игоревич ЭКСПРЕСС-МЕТОДЫ ВЫЯВЛЕНИЯ ВИРУСА ИНФЕКЦИОННОГО НЕКРОЗА ГЕМОПОЭТИЧЕСКОЙ ТКАНИ ЛОСОСЕВЫХ РЫБ 03.02.02 «Вирусология» Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: доктор биологических наук, Мудрак Наталья Станиславовна Владимир 2015 ОГЛАВЛЕНИЕ 1 ВВЕДЕНИЕ 2 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 2.1 Характеристика возбудителя инфекционного...»







 
2016 www.konf.x-pdf.ru - «Бесплатная электронная библиотека - Авторефераты, диссертации, конференции»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.