WWW.KONF.X-PDF.RU
БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА - Авторефераты, диссертации, конференции
 


Pages:     | 1 || 3 | 4 |   ...   | 7 |

«РАЗРАБОТКА СБОРА НЕЙРОПРОТЕКТИВНОГО И ЭКСТРАКТА СУХОГО НА ЕГО ОСНОВЕ ...»

-- [ Страница 2 ] --

В последние годы проведено изучение химического состава надземной части растения, выделено и идентифицировано около 20 флавоноидных соединений, содержание которых достигает 10% [135]. Основными компонентами являются скутеллареин, 7- глюкурониды апигенина и лютеолина, а также флаваноновые глюкурониды. Установлено, что в 5 популяциях шлемника байкальского, произрастающего в Забайкальском крае, содержание суммы флавоноидов в пересчете на скутеллярин составляет от 15,32 – 27,88%, суммы флавоноидов в пересчете на лютеолин-7-гликозид – 4,38 – 5,77%. [128]. Выявлено наличие кофейной, хлорогеновой, розмариновой, феруловой кислот и апигенина, а также антоциановых соединений (дельфинидин и его гликозиды) - 8,71%.

Углеводный комплекс надземной части шлемника байкальского представлен свободными углеводами (СУ) – 9,36 - 10,88%, водорастворимыми полисахаридами (ВРПС) – 1,28 - 2,15%, пектиновыми веществами (ПВ) – 3,78 гемицеллюлозами А (Гц А) – 3,12 – 5,88%, гемицеллюлозами Б (Гц Б) – 3,79 – 5,57%.

При исследовании азотсодержащих соединений надземной части S.

baicalensis обнаружено 14 свободных аминокислот: аланин, аспарагин, цистеин, глютамин, глутаминовая кислота, глицин, изолейцин, метионин, пролин, серин, треонин, валин, -аминомаслянная кислота и фосфоэтаноламин, доминирующими являются пролин, глицин, аспарагин. Общее содержание свободных аминокислот составляет 0,42 - 0,51%. После гидролиза основной состав аминокислот сохраняется, появляются аспарагиновая кислота, гистидин, лизин, фенилаланин, тирозин. Общее содержание алкалоидов составляет 0,33 - 0,36%.

Выделен комплекс органических кислот: винная, лимонная, яблочная, малоновая, янтарная, фумаровая и их общее содержание в различных популяциях составляет от 9,51 до 12,40%. Определено содержание БАВ в образцах популяций: окисляемых веществ 10,89 – 24,94%, дубильных веществ 2,25 – 2,70%, общих липидов 1,10 – 1,89%, суммы тритерпеновых соединений в пересчете на урсоловую кислоту 0,32 – 0,42%, суммы каротиноидов в пересчете на -каротин 0,41 – 0,90%, хлорофилл а 2,12 – 2,93%, хлорофилл b 1,74 – 4,01%.

1.4.3. Корневища и корни вздутоплодника сибирского Вздутоплодник сибирский – Phlojodicarpus sibiricus (Steph. ex Spreng) K. – Pol. семейства сельдерейные (Apiaceae) – многолетнее травянистое горностепное растение, произрастающее на привершинной части сопок, наиболее характерно для нителистниковых степей. В РФ распространен в Забайкальском крае, Республике Бурятия, в Прибайкалье, встречается в Хакассии и Якутии, а также в Монголии [41, 84, 136].

В народной медицине Забайкалья корневищами и корнями вздутоплодника лечили пневмонии, туберкулез легких, нервные болезни, гастроэнтериты, дифтерию [7, 60, 68, 74]. Бурятские и монгольские ламы часто использовали данное растение как заменитель коктуса прекрасного в сложных лекарственных композициях [77]. Вздутоплодник сибирский популярен в якутской медицине, народное название «боро сиир ото» - «волчья ягода». Его издавна применяли как панацею от 40 болезней, главным образом от желудочно-кишечных, сердечнососудистых заболеваний, ревматизма, туберкулеза легких, заболеваний щитовидной железы, а также для лечения гнойных ран, порезов, панарициев,

–  –  –

Ph. villosus Turcz. [6, 73]. Позже, в 1969 г. Никоновым Г. К. и Вандышевым В. В. в корнях указанных выше 2 видов обнаружен виснадин [73]. В 1970 г. Ладыгиной Е. Я. проведено детальное изучение локализации виснадина и дигидросамидина в подземных органах вздутоплодника сибирского [58]. Автором установлено, что состав кумариновых веществ подземных органов данного вида – корня, гипокотиля и стеблекорня – одинаков и представлен 6 соединениями, из которых в количественном отношении преобладают виснадин и дигидросамидин.

Во всех подземных органах растения кумариновые соединения локализуются в секреторных каналах. Виснадин локализуется в содержимом этих каналов, а дигидросамидин – в их обкладочных (выделительных) клетках.

Кроме того, Пименовым М. Г., Бабилевым Ф. Б. установлено наличие кумаринов в корнях - до 4,5 %, листьях - 0,48 %, плодах - 0,66 %, соцветиях -0,34 % и стеблях - 0,08 % [20]. При дальнейшем исследовании из корневищ и корней растения Антоновой О. К. и Шемерянкиным Б. В. были выделены умбеллиферон и скополетин [3]. По мере накопления данных о химическом составе подземной части растения стали выделять 2 хеморасы вздутоплодника сибирского. К первой хеморасе относили растения из юго-восточных районов Забайкальского края, которые содержат в основном пиранокумарины дигидросамидина и виснадина [16], хиноны [146] и кислоты (уксусная и изовалериановая), а также вздутоплодник из других мест произрастания, содержащий эфиры ксантогалола:

изобутират, изовалерианат, ангелат (ксантогалин), сенеционат (бухтармин) и диэфиры келлактона: диизовалерионат келлактона, птериксин, самидин, изосамидин [60]. Вторая хемораса отличалась значительно большим набором компонентов и большим их разнообразием: суксдорфин, 3'-ацетокси-4'изобутирилокси-3',4'-дигидросеселин, 3'-изовалерилокси-4'-ангелоилокси-3',4'дигидросеселин, 4'-ангелоилокси-4'-изовалерилокси-3',4'-дигидросеселин, аномалин, дельтоин, пранчигмин, изоимператорин [89, 114].

Благодаря проведенным фитохимическим [6, 28, 44, 48, 57, 58, 73, 75, 82, 84, 132] и ресурсоведческим [41, 84] исследованиям на основе корневищ и корней вздутоплодника сибирского были созданы отечественные препараты спазмолитического и коронарорасширяющего действия – димидин и фловерин [47].

Для оценки качества как самого вздутоплодника сибирского, так и препаратов из него, использовались различные методы. В. С. Кабановым В. С. и др. разработан газохроматографический метод количественного определения суммы виснадина и дигидросамидина в корневищах и корнях Ph. sibiricus с использованием стандарта – фловерина [47], а также метод определения соотношения этих компонентов в их смесях [48]. Новосельцевой Н. П. и др.

предложена хроматоспектрофотометрическая методика определения суммы этих веществ, в качестве стандартного образца применяли - димидин [75]. Виснадин и дигидросамидин отличаются между собой строением 4'-ацильной группы: первый ацилирован - метилмасляной, а второй – - метилмасляной кислотами (рисунок 4).

Рисунок 4- Химические структуры дигидросамидина (1) и виснадина (2)

Такая близость в строении сильно уравнивает химические и физические свойства этих веществ, поэтому возникают трудности при разделении веществ как в сырье, так и в препаратах из него [44, 47, 48]. Исследования в данном направлении велись Шейченко В. И., Вандышевым В. В. Они изучили строение виснадина методом Н-ЯМР-спектроскопии и пришли к заключению, что игольчатые кристаллы смеси состоят из четырех молекул виснадина и одной молекулы дигидросамидина, которые, образуют кристаллическую ячейку. С этим явлением и связана трудность получения виснадина в чистом виде [132].

Анализом химического состава надземной части вздутоплодника сибирского занимались Гантимур Д., Сырчина А. И. и Семенов А. А. [20, 21].

Ученые исследовали вздутоплодники Ph. sibiricus, Ph. villosus и Ph. turczaninovii трех популяций – даурской, якутской и окрестностей Улан-Батора. В результате проведенной работы авторами установлено, что состав кумаринов надземной части вздутоплодника сибирского не стабилен и зависит от места его произрастания. Так, основным кумарином растений, произрастающих в окрестностях Улан-Батора, является ломатин. Также обнаружены бухтармин, ксантогалин, умбеллиферон, биозид и флавоноид диосметин-7-О--Dглюкопиранозид. Кумариновый состав даурской популяции (Забайкальский край) представлен простыми и сложными эфирами келлактона: смесь эфиров цискеллактона-саксдорфина и 3-О-ацетил-4(2-метилбутаноата)-цис-келлактона (0,8%), цис- и транс-4 -О-метиловые эфиры келлактона. В растениях якутской популяции присутствуют смеси эфиров цис-келлактона-саксодорфина и 3-Оацетил-4(2-метилбутаноата) цис-келлактона, биозид, умбеллиферон, изоимператорин.

Фитохимические исследования вздутоплодника сибирского продолжаются и в настоящее время. Тараскиным В. В. из корневищ и корней данного вида, произрастающего в Республике Бурятия и Забайкальском крае, были выделены 6 производных кумарина (пеуцинидин, дигидроломатин, дигидросамидин, смесь цис- и транс-келлактонов, метилкеллактон) и определено содержание пироновых соединений - 2,66%. Из основных БАВ обнаружены: эфирные масла (0,5-1,4%), жирные кислоты (общее содержание жирного масла – 6,9%), рутин мкг/г), сахароза (5%), микроэлементы Основными (0,002-0,0032 [114].

составляющими эфирного масла из надземной части растений Ph. sibiricus являются гермакрен D (17,43-17,55%), спатуленол (7,35-7,98%), -терпинен (5,0диметиловый эфир тимогидрохинона (4,12-4,34%), n-цимол (4,04-4,26%).

Эфирное масло из подземной части Ph. sibiricus характеризуется нестабильностью количественного содержания его составляющих, как в пределах одной популяции (в разные годы), так и между популяциями (из разных районов произрастания).

Так, в эфирном масле из корневищ и корней растений, собранных в 2009 г.

основными компонентами являются ионол - 10,99%, диметиловый эфир тимогидрохигнона -10,45%, -кадинен - 0,53%, в 2008 г. - -терпинен - 37,86%, терпинолен - 30,1%, n-цимол - 9,35 %. Жирные кислоты корней и корневищ вздутоплодника сибирского представлены 21 кислотой, среди которых превалирующими являются - C18:0, С18:1n9, C18:2n6, 18:3n3, 20:2n11.

Изучен элементный состав корневищ и корней вздутоплодника сибирского Сu - 2,21-8,48 мг/кг, Zn – 20,30-41,90 мг/кг, Cd – 0, 17-0,29 мг/кг, Pb – 0,30-1,25 мг/кг, Ni - 1,52-5,85%, Mn – 26,90-58,11 мг/кг, Сr – 59,31-64,41 мг/кг.

Изучением состояния ценопопуляций вздутоплодника сибирского в Восточном Забайкалье в настоящее время занимается Гилева М. В. [22, 23, 24].

Ею изучена численность, возрастная и пространственная структура ценопопуляций вида, фенологические особенности в различных типах ассоциаций. Описаны ход онтогенеза, сезонный ритм развития, семенная и сырьевая продуктивность при выращивании в Забайкальском крае [14].

1.5. Сборы и экстракты сухие – оптимальные формы переработки лекарственного растительного сырья Сборы – одна из традиционных форм переработки растительного сырья, используемая человечеством с глубокой древности.

Изучение сборов является перспективным направлением фармацевтической науки в связи с их терапевтической ценностью (эффективность и мягкость действия, отсутствие нежелательных побочных эффектов даже при длительном применении), наличием в РФ достаточной сырьевой базы по многим видам растительного сырья, богатым опытом производства и клинического применения лекарственных средств растительного происхождения.

Обладая многочисленными положительными свойствами сборы тем не менее обладают определенными недостатками: при самостоятельном приготовлении водных извлечений в домашних условиях происходит неполное извлечение БАВ, отсутствует возможность контроля качества подобных препаратов, при хранении сборы расслаиваются, что приводит к нарушению соотношения входящих в него компонентов и, соответственно, дозировки препарата.

В связи с этим перспективным и рациональным подходом является перевод растительных композиций и официальных сборов в суммарные экстракционные препараты, содержащие максимальное количество экстрактивных и биологически активных веществ, необходимых для обеспечения фармакотерапевтического эффекта. Экстракты сухие являются одной из наиболее рациональных форм переработки лекарственного растительного сырья. Они находят широкое применение в фармацевтическом производстве, так как при их получении не нарушается стабильность соотношения и фармакологическая активность БАВ, а также значительно повышается качество переработки лекарственного растительного сырья. Эту лекарственную форму отличает точность дозирования, удобство применения, стойкость к микробной контаминации, достаточно длительный срок годности. Получение сухих экстрактов представляет интерес для разработок ресурсосберегающих технологий производства лекарственных средств растительного происхождения.

Совершенствование технологии получения растительных экстрактов направлено на наиболее полное извлечение из растительного сырья основных БАВ. В настоящее время при производстве экстрактов помимо традиционных методов экстрагирования лекарственного растительного сырья (реперколяция, противоточная и циркуляционная экстракция) все большую популярность приобретают интенсивные методы экстракции, характеризующиеся достижением большого выхода БАВ и ускорением процесса экстрагирования [38, 94].

При вихревой экстракции происходит вихревое перемешивание экстрагента и одновременное измельчение лекарственного растительного сырья с помощью турбинной или лопастной мешалки, вращающейся со скоростью 5000-13000 об/мин. При данном виде экстракции интенсификация массообменных процессов в турбулентном потоке экстрагента достигается за счет резкого уменьшения толщины диффузионного слоя на границе раздела фаз и многократно повторяющихся деформаций частиц растительного сырья. К недостаткам метода относятся повышение температуры при работе мешалок, ведущее к изменению свойств БАВ, улетучиванию экстрагента, и трудности очистки вытяжки от взвеси вследствие интенсивного измельчения лекарственного растительного сырья.

При обработке ЛРС с помощью ультразвука и инфразвука происходит ускорение процесса экстракции за счет следующих факторов: 1) увеличение границы раздела фаз за счет дисперсии частиц ЛРС; 2) частичное разрушение клеток растительного материала; создание максимальной разности 3) концентраций вследствие интенсивного перемешивания и возникновения конвективной диффузии; 4) тепловой эффект.

Основным достоинством метода является малая продолжительность экстракции. К недостаткам метода относятся дороговизна оборудования, высокую агрессивность ультразвука в отношении действующих веществ, т.е. разрушение молекул под действием гидродинамических ударов кавитации.

При электродинамической мацерации высоковольтный импульсный разряд вызывает сверхвысокие гидравлические давления порядка 108 - 1010 атм, и мощные кавитационные процессы. Этот метод перспективен, хотя и не лишен таких недостатков, как возможность разрушения молекул, создание высокого уровня шума за счет гидравлических ударов, высокая себестоимость продукта.

Центробежную экстракцию осуществляют с помощью фильтрующей центрифуги. За счет центробежных сил первичный сок удаляется из клеточного материала, на его место подается свежий экстрагент, который вновь удаляется из материала. Экстрагент циркулирует до насыщения, а затем заменяется новым.

Экстракция с воздействием электромагнитного поля повышает десорбцию веществ за счет снижения степени гидратации сольватации) молекул БАВ, вследствие чего происходит увеличение коэффициента свободной диффузии дегидратированных молекул и ускорение прохождения молекул через клеточные оболочки.

При экстракции под воздействием электрического тока ускоряется экстракция веществ, относящихся к электролитам.

При экстракции с электроимпульсным воздействием интенсификация массопереноса достигается с помощью высоковольтного разряда, образующегося в результате аккумулирования электрической энергии и ее выделения в короткие промежутки времени. Электрические разряды ускоряют течение внутриклеточной диффузии за счет возникновения конвективной диффузии и частичного 41 разрушения клеточных оболочек.

Магнитоимпульсные аппараты имеют электропроводную мембрану, которая колеблется с частотой колебания магнитного поля и передает импульсное движение среде [37].

Экстракция сжиженными газами - один из новейших и перспективных способов экстракции ЛРС, содержащего летучие и неустойчивые вещества, такие как эфирные масла, сердечные гликозиды, фитонциды [94]. Экстрагентами выступают сжиженные газы бутан, азот, аммиак, оксид углерода (ІV), фреон, аргон. Поскольку сжиженные газы имеют температуру кипения ниже комнатной температуры, то окисления, разложения и потери БАВ при выпаривании не происходит. По химическим свойствам сжиженный оксид углерода (ІV) проявляет индифферентность по отношению к сырью, БАВ, материалам аппаратуры, пожаро- и взрывобезопасен. Количественный выход БАВ при экстрагировании сжиженными газами достигает 88-98%, что выше, чем у известных способов экстрагирования [61].

Выводы к главе 1

1. В настоящее время для лечения и профилактики цереброваскулярных заболеваний используют нейропротективные средства разнообразной химической структуры и происхождения. Растительные нейропротекторы, выгодно отличаясь от нейропротекторов синтетического происхождения отсутствием побочных эффектов, применяют чаще всего для уменьшения выраженности последствий отдаленной ишемии головного мозга.

2. Корни астрагала перепончатого, корни шлемника байкальского, корневища и корни вздутоплодника сибирского являются перспективными растениями для разработки на их основе эффективных нейропротекторов за счет их комплексного фармакологического действия.

3. Сухие экстракты являются оптимальной формой переработки растительного сырья и сборов, обеспечивающие необходимый фармакотерапевтический эффект.

42

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ

ГЛАВА 2 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Материалы исследования Объектами исследования служили образцы опытных партий сбора нейропротективного, экстракта сухого (условно названного «Брэйн-профит»), полученного на основе сбора, а также корни астрагала перепончатого, корни шлемника байкальского – ФС 42-453-91, корневища и корни вздутоплодника сибирского – ФС 42-2667-89. Сырье приобретено в ГАУЗ РКБ ВЛ «Центр Восточной Медицины», ПТ «Даурская заготовительная компания». Корни астрагала перепончатого собраны в различных районах Республики Бурятия и Забайкальском крае с 2008 по 2012 годы.

2. 2. Методы исследования Сборы готовили в соответствии с требованиями статьи «Сборы», ГФ XI изд., вып.1, с. 266 [26]. Измельчение воздушно-сухого сырья проводили согласно ГФ XI изд., вып.1, с. 285; отбор средней и аналитической проб – ГФ XI изд., вып.1, с. 273; изучение внешних признаков – ГФ XI изд., вып.1, с. 266-267;

изучение анатомических признаков – ГФ ХI изд., вып. 1, с. 277. Для экстракции БАВ и приготовления хроматографических систем растворителей использовали реактивы марок «ч», «хч», «чда».

Определение экстрактивных веществ в сырье проводили по ГФ XI изд., вып. 1, с. 295; определение золы общей - по ГФ XII изд., ч. 1, с. 115 [27], золы, не растворимой в 10% растворе хлористоводородной кислоты - по ГФ XI изд., вып. 2, с.

24; определение тяжелых металлов в экстракте сухом - по ГФ XI изд., вып. 1, с. 160;

определение плотности отгона осуществляли по методу ГФ XI изд., вып. 1, с. 24.

Элементный состав определяли на масс-спектрометре с индуктивной плазмой «Elan 9000» (Perkin Elmer, США) согласно МУК 4.1.1483-03.

Количественное определение азота общего проводили фотоколориметрическим методом [67].

Качественный состав и количественное содержание аминокислот определяли на аминокислотном анализаторе ААА - 339 (Microtechina, Чехия).

Содержание аминокислот рассчитывали в нмоль/г и мг/г абсолютно сухого сырья/экстракта.

Методика пробоподготовки для анализа свободных аминокислот. Около 1 г (точная навеска) воздушно-сухого сырья/экстракта экстрагировали 80% спиртом при температуре кипения водяной бани в течение 30 минут. Экстракцию повторяли в течение 20 минут. Далее полученный супернатант упаривали до сухого состояния, растворяли в литий-цитратном буфере (рН 2,2) в объеме, определенном в зависимости от концентрации аминокислот.

Приготовление литий-цитратного буфера (рН 2,2): 14,1 г лития цитрата, 13,0 мл кислоты хлористоводородной концентрированной, 1,15 мл тиодигликоля, 0,05 мл каприловой кислоты растворяли в небольшом количестве воды и доводили водой объем раствора до 500 мл.

Методика пробоподготовки для анализа связанных аминокислот.

Связанные аминокислоты определяли после кислотного гидролиза 6 М хлористоводородной кислотой при температуре 110С в течение 24 часов в ампуле. После ампулу вскрывали, соляную кислоту упаривали на роторном испарителе, остаток растворяли в натрий - цитратном буферном растворе (рН 2,2).

Приготовление натрий-цитратного буфера (рН 2,2): 9,8 г натрия цитрата (дигидрата), 15,5 мл кислоты хлористоводородной концентрированной, 2,5 мл тиодигликоля, 1 мл раствора детергента Brij-35(50 г/ 100 мл), 0,05 мл каприловой кислоты растворяли в небольшом количестве воды и доводили водой объем раствора до 500 мл.

Бумажная и тонкослойная хроматография Хроматографическое изучение веществ проводили методами восходящей хроматографии на бумаге марки FN-12 и FN-16 «Filtrak» и тонкослойной хроматографии на пластинах ПТСХ-П-А-УФ-254 «Sorbfil» и «Silufol UV254».

Очистку пластин «Silufol UV254» выполняли с помощью ацетона. Подготовку платин ПТСХ-П-А-УФ-254 «Sorbfil» проводили путем прогревания пластин при температуре 110°С в течение 1 часа. В качестве подвижных фаз использовали следующие системы растворителей:

15 % кислота уксусная;

1.

н-бутанол-уксусная кислота-вода (4:1:2);

2.

этилацетат-ледяная уксусная кислота (80:20);

3.

этанол-уксусная кислота: вода (90:9:1);

4.

гексан- бензол-метанол (5:4:1);

5.

хлороформ-этанолол (9:1);

6.

бензол-этилацетат (2:1);

7.

хлороформ-метанол (60:40);

8.

н-бутанол-95% спирт-раствор аммиака (7:2:5).

9.

Хроматографирование выполняли в соответствующих системах растворителей при температуре 19-23oС в закрытых стеклянных камерах. Все величины Rf обнаруженных соединений являются средними из пяти измерений.

При проведении методик качественного и количественного определения биологически активных веществ использованы хроматографически чистые вещества и стандарты: ГСО рутина – ФС 42-2508-87, ВИЛАР ТУ 9369-141– 048668244-02; ГСО гиперозида – ФС 42-0106-03; ГСО кверцетина – ФС 42-290ВИЛАР ТУ 9369-128-04868244-03; ГСО лютеолина – ФС 42-3130-95;

мирицетин («свидетель, ч.»); гесперидин – Sigma, кат. № H5254; ГСО лютеолингликозида – ФС 42-3130-95; байкалин – Sigma, кат. № 572667, кислота кофейная

– Sigma, кат. № C0625; хлорогеновая кислота – Sigma, кат. № C3878; феруловая кислота СО – ТУ 9369-143-0486244-01, апигенин - Fluka, кат. №10748, галловая кислота – Fluka, кат. №48630; кислота коричная – ГОСТ 15057-79; кислота яблочная – ТУ 6-09-4058-75; ГСО кислоты аскорбиновой - ФС 42-2668-95;

кислота лимонная – ГОС 3652-89; ГСО глюкозы (ФС 42-2419-86), скополетин Sigma, кат. № S2500, умбеллиферон - Sigma, кат. № H24003, ГСО фловерина ФС 42-2532-88, олеаноловая кислота - Sigma, кат. № O5504, предоставленные ВИЛАР (г. Москва).

Приготовление растворов стандартных образцов и реактивов для спектрофотометрических и хромато-спектрофотометрических методик количественного определения:

Приготовление раствора РСО байкалина: Около 0,015 г (точная навеска) байкалина помещали в мерную колбу вместимостью 100 мл, растворяли в 2 мл ДМСО, доводили объем раствора до метки 60% спиртом и перемешивали (раствор А). 2 мл раствора А переносили в мерную колбу вместимостью 50 мл, доводили объем раствора до метки 60% спиртом и перемешивали.

Приготовление раствора РСО аргинина: Около 0,025 г (точная навеска) аргинина помещали в мерную колбу вместимостью 100 мл, растворяли в 40-50 мл воды очищенной, доводили объем раствора до метки водой и перемешивали (раствор Б).

Приготовление раствора РСО аспарагина: Около 0,05 г (точная навеска) аспарагина помещали в мерную колбу вместимостью 100 мл, растворяли в 40-50 мл 10% спирта, доводили объем раствора до метки 10% спиртом и перемешивали (раствор Б).

Приготовление раствора РСО аскорбиновой кислоты: Около 0,05 г (точная навеска) кислоты аскорбиновой (ГОСТ 7047-55), высушенной до постоянной массы при температуре 100°С, растворяли в 90 мл воды очищенной в мерной колбе вместимостью 100 мл, доводили объем раствора водой до метки и перемешивали (раствор А). 5 мл раствора А помещали в мерную колбу вместимостью 100 мл, доводили объем водой до метки и перемешивали.

Приготовление фосфорномолибденового реактива для количественного определения аскорбиновой кислоты методом спектрофотометрии: 0,05 г натрия фосфата растворяли в 100 мл воды в мерной колбе 200 мл, после растворения прибавляли 10 мл серной кислоты концентрированной, затем прибавляли 0,8 г аммония молибдата.

Приготовление раствора РСО глюкозы. Около 0,1 г (точная навеска) глюкозы (ФС 42-2419-86), предварительно высушенной при температуре 100С до постоянной массы, растворяли в воде в мерной колбе вместимостью 250 мл, доводили объем раствора водой очищенной до метки и перемешивали.

Приготовление раствора РСО олеаноловой кислоты: Около 0,0025 г (точная навеска) олеаноловой кслоты помещали в мерную колбу вместимостью 25 мл, растворяли в 15 - 20 мл 95% спирта, доводили раствор до метки 95% спиртом, перемешивали.

Приготовление раствора ГСО фловерина: Около 0,05 г (точная навеска) фловерина помещали в мерную колбу вместимостью 50 мл, растворяли в 30-40 мл 95% спирта, доводили раствор 95% спиртом до метки, перемешивали.

Приготовление растворов сравнения для ВЭЖХ-анализа:

Приготовление растворов сравнения для ВЭЖХ-анализа фенольных соединений: по 0,015 рутина, кверцетина, лютеолина, лютеолин-7-гликозида, геспередина, апигенина, гиперозида, дигидрокверцетина, кемпферола, витексина, изовитексина, нарингенина, байкалина, изорамнетина галловой кислоты, кофейной кислоты, хлорогеновой кислоты, цикориевой кислоты, коричной кислоты, феруловой кислоты, эллаговой, о-кумаровой, умбеллиферона, эскулетина, кумарина, метоксикумарина, эпигалокатехингаллата, эпикатехина, даидзеина помещали в мерные колбы вместимостью 100 мл, растворяли в 50 мл 70% спирта, доводили объёмы растворов до меток тем же растворителем и перемешивали. Срок годности растворов - 3 месяца.

Приготовление растворов сравнения для ВЭЖХ-анализа свободных углеводов и органических кислот:

1. По 0,60 г рамнозы, ксилозы, мальтозы, сорбитола, глюкозы, лактозы, арабинозы, сахарозы, фруктозы, галактозы помещали в мерные колбы вместимостью 100 мл, растворяли каждый стандартный образец в 25 мл 0,05 М раствора серной кислоты и доводили тем же растворителем до меток, перемешивали.

2. По 0,025 г аскорбиновой, лимонной, щавелевой, яблочной, янтарной, винной, фумаровой кислот помещали в мерные колбы вместимостью 100 мл, растворяли каждый стандартный образец в 25 мл 0,05 М раствора серной кислоты и доводили тем же растворителем до меток, перемешивали.

Приготовление растворов сравнения для ВЭЖХ-анализа кумаринов: 10 мг стандартного образца (умбеллиферона, скополетина, пеуцинидина, фловерина) растворяли в мерной колбе вместимостью 50 мл в 70% спирте, перемешивали (раствор А с концентрацией 0,2 мг/мл). 2,5 мл раствора А помещали в мерную колбу вместимостью 50 мл и доводили объема раствора до метки 70 % спиртом (раствор Б с концентрацией 0,01 мг/мл).

Приготовление растворов сравнения для ВЭЖХ-анализа углеводов (при исследовании углеводных фракций корней астрагала перепончатого):

По 0,6 г рамнозы, ксилозы, мальтозы, глюкозы, лактозы, арабинозы, сахарозы, фруктозы, галактозы, маннозы и сорбита помещали в мерные колбы вместимостью 100 мл, растворяли каждый стандартный образец в 25 мл воды очищенной и доводили тем же растворителем до меток, перемешивали.

Электронные спектры соединений в УФ- и видимой областях регистрировали на приборах CФ-2000 (АОЗТ «ОКБ СПЕКТР», Россия) и ПЭ-5400 УФ (ООО «Экохим», Россия) в кюветах с толщиной поглощающего слоя 1 см.

Спектрофотометрическое определение БАВ проводили с помощью спектрофотометра CECIL CE 2011 (СECIL INSTRUMENTS, Англия) в кварцевых кюветах с толщиной поглощающего слоя 1 cм.

ВЭЖХ - анализ фенольных соединений проводили на жидкостном хроматографе «GILSTON», модель 305 (GILSTON, Франция), инжектор ручной «Rheodyne», модель 7125 (Rheodyne, США) с последующей компьютерной обработкой результатов исследования программой «Мультихром» для «Windows». Колонка - 250,46 см с октадецилсилил силикагелем (Kromasil C 18), 5 мкм. Подвижная фаза – метанол – вода – фосфорная кислота (концентрированная) (40:60:0,5). Температура колонки - 25С. Скорость потока – 0,8 мл/мин. Детектор - спектрофотометрический «GILSTON» UV/VIS, модель 131, 254 нм. Объем пробы - 50 мкл. Продолжительность анализа 90 минут.

ВЭЖХ - анализ свободных углеводов и органических кислот проводили на жидкостном хроматографе «GILSTON», модель 305 (GILSTON, Франция), инжектор ручной «Rheodyne», модель 7125 (Rheodyne, США) с последующей компьютерной обработкой результатов исследования программой «Мультихром»

для «Windows». Колонка - 300,65 см с сульфированным сополимером стиролдивинилбензола (ALTECH OA-1000 Organic Acids), 9 мкм. Подвижная фаза

– 0,05 М раствор серной кислоты. Температура колонки - 65С. Скорость потока – 0,8 мл/мин. Детектор - спектрофотометрический «GILSTON» UV/VIS, модель 131, 190 нм. Объем пробы - 20 мкл. Продолжительность анализа 30 минут.

Количественное определение кумаринов проводили на высокоэффективном жидкостном хроматографе «Agilent 1200» (Agilent Technologies, США). Колонка см с октадецилсилил силикагелем (Zorbax Eclipse XDB C18), 5 мкм.

Подвижная фаза – А: 0,1% водный раствор муравьиной кислоты, В: 100% ацетонитрил. Элюирование проводили в градиентном режиме (таблица 1).

Таблица 1 – Программа градиентного элюирования для ВЭЖХ-МС-анализа кумаринов

–  –  –

Скорость потока – 1,0 мл/мин. Детектор тандемный массспектрометрический «ионная ловушка» 6330, способ ионизации - электроспрей.

Объем пробы - 10 мкл. Продолжительность анализа - 30 минут. Анализ проводился в режиме регистрации отрицательных ионов, по полному ионному току TIC, по массовым зарядам характеристических (МS) и дочерних (МS2) отрицательных ионов. Режим UltraScan 50-1300 m/z, AutoMS. Количественный и качественный анализ проводили по извлеченным хроматограммам с использованием рабочих стандартных образцов кумаринов - умбеллиферона, скополетина, пеуцинидина, фловерина (суммы дигидросамидина и виснадина).

Состав углеводных фракций после кислотного гидролиза (2 М Н2SO4) определяли на высокоэффективном жидкостном хроматографе WellChrom (Knauer, Германия) с последующей компьютерной обработкой результатов с помощью программы «Мультихром». Колонка - 300,78 см с сульфированным сополимером стиролдивинилбензола в свинцовой форме (Rezex RPM Monosaccharide), 8 мкм. Подвижная фаза - вода. Температура колонки - 80°С.

Скорость потока - 0,6 мл/мин. Детектор – рефрактометрический. Объем пробы мкл.

Количественное определение витаминов группы В и свободных углеводов проводили с использованием методик, разработанных группой компаний «ЛЮМЭКС»:

Методика измерений содержания свободных форм

1) M 04-72-2011.

водорастворимых витаминов в премиксах, витаминных концентрах, смесях и добавках, в том числе жидких, методом капиллярного электрофореза с использованием системы капиллярного электрофореза "КАПЕЛЬ-105/105М".

2) М 04-69-2011. Напитки. Плодоовощная продукция. БАД. Мед. определение фруктозы, глюкозы и сахарозы методом капиллярного электрофореза с использованием системы капиллярного электрофореза "КАПЕЛЬ 105/105М".

Для количественного определения витаминов группы В использовали навески растительных объектов по 0,2 г (степень измельчения 1 мм) и пробоподготовку проводили как для премиксов (ввиду большого содержания аминокислот в объектах), для количественного определения фруктозы, глюкозы и сахарозы - навески по 5,0 г (степень измельчения 1 мм) [53].

Компонентный состав эфирного масла определяли на газовом хроматографе Agilent 6890 (Agilent Technologies, США) с квадрупольным масс-спектрометром (HP MSD 5973N) в качестве детектора. Использовалась 30-метровая кварцевая колонка НР-5MS с внутренним диаметром 0,25 мм (неподвижная фаза фенил-:

диметилполисилоксан 5:95). Газ-носитель – гелий (постоянный поток 1,0 мл/мин).

Температура колонки: 50°С (изотерма 2 мин.), 50-200°С (4°С/мин.), 200-280°С (20°С/мин.), 280°С (изотерма 5 мин.), температура испарителя 250°С. Объём пробы 1 мкл раствора с разделением потока 50:1. Ионизация: электронный удар (70 эВ). Диапазон сканирования 5-550 а.е.м. Процентный состав эфирных масел вычисляли по площадям газо-хроматографических пиков с помощью программы MSD Cem Analize, без учёта корректирующих коэфициентов.

Компонентный состав фракции общих липидов идентифицировали на газовом хроматографе Agilent 6890 (Agilent Technologies, США) с квадрупольным масс-спектрометром (HP MSD 5973N) в качестве детектора. Использовалась колонка НР-5MS с внутренним диаметром 0,25 мм (неподвижная фаза фенил-:

диметилполисилоксан 5:95). Газ-носитель – гелий (постоянный поток 1,0 мл/мин.). Температура колонки: 120°С (изотерма 4 мин.), 120-320°С (4°С/мин.), 165-225°С (изотерма 3 мин.), температура испарителя – 280°С. Объём пробы – 1 мкл раствора с разделением потока 60:1. Ионизация: электронный удар (70 эВ).

Диапазон сканирования 50-550 а.е.м. Качественный анализ основан на сравнении времен удерживания, полных масс-спектров библиотеки хромато-массспектрометрических данных летучих веществ растительного происхождения Процентный состав смеси вычисляли по площадям [116].

газохроматографических пиков без использования корректирующих коэффициентов. Качественный анализ основан на сравнении времен удерживания и полных масс-спектров соответствующих соединений (FAME Supelco 37 comp;

FAME Mix 10 mg/ ml in CH2Cl2).

Для извлечения липидов из растительного сырья применяли модифицированный метод Блайя и Дайэра [199].

Методика. 100 г измельченного сырья просеивали сквозь сито с отверстиями диаметром 5 мм, заливали 300 мл смеси хлороформ-метанол (1:2).

Смесь гомогенизировали в течение 2 минут в гомогенизаторе с ножами.

Гомогенат фильтровали под вакуумом, оставшуюся на фильтре шрот повторно гомогенизировали в смеси 300 мл хлороформ-метанол (1:2) и 80 мл воды.

Гомогенат фильтровали, остаток промывали на фильтре 150 мл смеси хлороформметанол. К объединенному экстракту прибавляли 250 мл хлороформа и 290 мл воды. После расслоения фаз хлороформный слой разбавляли бензолом и концентрировали в вакууме. Остаток растворяли в 25 мл хлороформа и в случае необходимости осветляли центрифугированием.

Получение метиловых эфиров жирных кислот с применением 2 М HCl в метиловом спирте: к аликвоте общих липидов 1 мг добавляли 1 мл раствора 2 М HCl в метиловом спирте. Омыление проводили 2 часа при температуре 90°С.

Полученный раствор, выпаривали током аргона. Далее к реакционной смеси

–  –  –

ГЛАВА 3. ФАРМАКОГНОСТИЧЕСКОЕ ИЗУЧЕНИЕ КОРНЕЙ

АСТРАГАЛА ПЕРЕПОНЧАТОГО

Астрагал перепончатый широко используется в традиционной китайской и японской медицине. В ИОЭБ СО РАН проводилось изучение химического состава надземной части астрагала перепончатого, произрастающего в Республике Бурятия, Тангановой Е. А [113]. Установлено, что содержание суммы флавонодов составляет 1,22±0,06%, дубильных веществ – 1,78±0,07%, суммы аминокислот – 9,27±0,29%, аскорбиновой кислоты – 1,78±0,05%, свободных органических кислот

– 9,81±0,15%, суммы восстанавливающих моносахаров – 0,73±0,02%. Составлен проект ФС на траву астрагала перепончатого. Также имеются данные о сырьевых ресурсах растения [98], но корни данного растения в настоящее время не используются в официнальной медицине РФ, поэтому нами проведено фармакогностическое изучение корней астрагала перепончатого.

3.1. Характеристика морфологических признаков сырья Цельное сырье. Корни стержневые, ветвистые до 4 см толщиной, длиной 30см, расширяющиеся в верхней части, сильно одревесневшие, волокнистые, поверхность продольно-морщинистая, от серовато-желтого до желтоватобежевого цвета. На поперечном срезе видны светлая желтоватая внешняя кора, светло-желтая ксилема в виде сердцевинных лучей в корнях малого размера или в виде трещин в корнях большего размера, а также серовато-коричневый камбий, иногда видна коричневая сердцевина. Запах слабый, специфический. Вкус водного извлечения сладковато - горький.

Измельченное сырье. Кусочки корней различной формы, проходящие сквозь сито диаметром 7 мм. Цвет желтовато-белый, желтовато-серый. Запах слабый, специфический. Вкус водного извлечения сладковато - горький.

Порошкованное сырье. Измельченное сырье, проходящее сквозь сито с диаметром отверстий 0,5 мм. Цвет бежевый. Запах слабый, специфический. Вкус водного извлечения сладковато - горький.

3.2. Характеристика микроскопических признаков сырья При микроскопическом исследовании корней астрагала перепончатого, собранных в различных районах Республики Бурятия и Забайкальском крае, выявлены характерные анатомо-диагностические признаки сырья (поперечный срез корня и порошкованное сырье, рисунки 5 и 6).

Корни имеют вторичное беспучковое строение. На поперечных срезах видна хорошо развитая многорядная пробка, которая совместно с 3 - 5 рядами колленхимы образует феллодерму. Камбиальный пояс сплошной, многорядный, хорошо различим на срезах. Флоэмные лучи часто изогнуты и потрескавшиеся вдоль внешней части с волокнами, находящимися в виде пучков. Сердцевинные лучи 2 - 5-рядные. Просветы сосудов различного диаметра. В корнях присутствуют волокна, бесцветные или оранжевато-желтого цвета, с характерными утолщеными стенками, продольными трещинами и щеткообразными кончиками, расположены группами или одиночно в коровой и древесной частях корня. Каменистые клетки изодиаметрической или вытянутой формы с утолщенными, бороздчатыми стенками и простыми углублениями, встречаются в феллодерме. Клетки коры, древесины и сердцевины содержат простые крахмальные зерна (при обработке микропрепаратов раствором йода крахмальные зерна приобрели фиолетовое окрашивание).

Порошкованное сырье. Для микроскопии порошка корней астрагала перепончатого характерно: обрывки паренхимы, состоящей из округлых или округло-прямоугольных клеток; обилие механических волокон в плотных или расщепленных группах с разной степенью одревеснения, с продольной морщинистостью и редкими, едва заметными порами; обрывки сетчатых сосудов древесины диаметром 7 - 50 мкм, одиночные, в группах или прикрепленные к волокнам, редко - небольшие группы округлых или слегка удлиненных каменистых клеток с разной степенью одревеснения клеточных стенок; обрывки пробки коричневого цвета, состоящей из прямоугольных клеток, крахмальные зерна мелкие, нехарактерные, округлые, одиночные или в группах по 2 - 3.

А Б В Г Д Рисунок 5 - Микроскопическое строение поперечного среза корня астрагала перепончатого (А – увеличение 4х10, Б, В, Г, Д – увеличение 40х10, 1 – клетки пробки, 2 – колленхима, 3 – паренхима коры, 4 - флоэмные лучи, 5 – камбий, 6 – сердцевинные лучи, 7 – сосуды ксилемы, 8 – крахмальные зерна, 9 – механические волокна древесины) Ж Е З И Рисунок 6 - Микроскопическое строение порошка корней астрагала перепончатого (Е – увеличение 4х10, Ж, З, И - увеличение 10х10, 1 – паренхима, 2 – механические волокна,

– клетки пробки, 4 – сетчатые сосуды ксилемы)

–  –  –

В результате проведенного анализа обнаружено, что в различных образцах корней астрагала перепончатого содержание влажности составило от 5,81% до 6,43%, экстрактивных веществ, извлекаемых водой, от 20,98% до 25,12%, золы общей от 3,61% до 9,69%, золы, не растворимой в 10% растворе хлористоводородной кислоты, от 0,90% до 5,07%, органических примесей от 0,25% до 0,39%, минеральных примесей от 0,50% до 0,74%.

На основании полученных данных предложены числовые показатели для корней астрагала перепончатого: влажность не более 8,0%; экстрактивных веществ, извлекаемых водой, не менее 20,0%, золы общей не более 10,0%; золы, не растворимой в 10% растворе хлористоводородной кислоты, не более 6,0%;

органических примесей не более 0,5%; минеральных примесей не более 1,0%.

Золу общую, полученную при проведении товароведческого анализа, использовали для определения элементного состава корней астрагала перепончатого (таблица 3).

Таблица 3 – Элементный состав корней астрагала перепончатого

–  –  –

представлены K – 0,51%, Ca – 0,25%, Р – 0,15%, Mg – 0,11% и Na – 0,005%. Cреди микроэлементов преобладают Fe – 168,90 мг/кг, Mn – 14,70 мг/кг, B – 13,80 мг/кг.

Содержание азота общего, определенного фотоколориметрическим методом, составило 2,30%.

3.4. Фитохимическое изучение корней астрагала перепончатого 3.4.1. Качественный анализ Нами проведено фитохимическое исследование извлечений из корней астрагала перепончатого на присутствие основных групп биологически активных веществ по общепринятым методикам, результаты исследования представлены в таблице 4.

Таблица 4 - Результаты качественного анализа извлечений корней астрагала перепончатого

–  –  –

Качественный анализ извлечений корней астрагала перепончатого показал наличие в сырье аминокислот, флавоноидов, дубильных веществ (конденсированных), кумаринов, тритерпеновых сапонинов, углеводного комплекса, катехинов, белковых веществ и алкалоидов.

3.4.2. Идентификация фенольных соединений методом ВЭЖХ Проведен анализ водно-спиртового извлечения корней астрагала перепончатого методом ВЭЖХ на присутствие веществ фенольной природы.

Методика приготовления 70% спиртового извлечения корней астрагала перепончатого. Аналитическую пробу сырья измельчали до размера частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями диаметром 2 мм.

Около 2 г (точная навеска) измельченного сбора помещали в колбу вместимостью 100 мл, прибавляли 20 мл 70% спирта, присоединяли колбу к обратному холодильнику и нагревали на кипящей водяной бане в течение 1 часа с момента закипания спиртоводной смеси в колбе. После охлаждения смесь фильтровали через бумажный фильтр в мерную колбу вместимостью 25 мл и доводили 70% спиртом до метки (исследуемый раствор).

По 50 мкл исследуемого раствора и растворов сравнения вводили в хроматограф и хроматографировали по выше приведенной методике (глава 2, п. 2.

2, с. 47). Результаты проведенных исследований приведены на рисунке 7 и в таблице 5.

–  –  –

Количественное определение аскорбиновой кислоты, эпигаллокатехин галлата, лютеолин-7-гликозида в корнях астрагала перепончатого методом ВЭЖХ Методика: Около 1,5 г (точная навеска) корней астрагала перепончатого (степень измельчения 2 мм) помещали в плоскодонную колбу вместимостью 250 мл, приливали 50 мл 70% спирта, присоединяли колбу к обратному холодильнику и нагревали на кипящей водяной бане в течение 1 часа с момента закипания спиртоводной смеси в колбе. После охлаждения смесь фильтровали через бумажный фильтр в мерную колбу вместимостью 100 мл и доводили 70% спиртом до метки (исследуемый раствор). Параллельно готовили растворы РСО аскорбиновой кислоты, лютеолин-7-гликозида, эпигаллокатехингаллата в 70% спирте. Для этого около 0,035 г (точная навеска) эпигаллокатехингаллата, 0,13 г аскорбиновой кислоты, 0,32 г лютеолин-7-гликозида помещали в мерные колбы вместимостью 100 мл, прибавляли 25 мл 70% спирта, перемешивали до растворения и доводили объёмы растворов до меток тем же растворителем. 4 мл полученного раствора (для аскорбиновой кислоты) помещали в мерную колбу вместимостью 100 мл и доводили до метки 70% спиртом (РСО). По 50 мкл исследуемого раствора и растворов РСО вводили в хроматограф и хроматографировали по выше приведенной методике (глава 2, п. 2.2, с. 47).

Расчёт количественного содержания аскорбиновой кислоты, лютеолин-7гликозида и эпигаллокатехингаллата производили методом абсолютной калибровки с помощью компьюторной программы «Мультихром» для «Windows»

используя формулу:

S ис Сстандарта100 100 100 С% S стандарта100 а (100 W ) где S ис - площадь пика соответствующего компонента в испытуемом растворе;

Sстандарта –площадь пика РСО аскорбиновой кислоты, лютеолин-7-гликозида, эпигаллокатехингаллата;

С% - концентрация соответствующего компонента, %;

Сстандарта - концентрация РСО аскорбиновой кислоты, лютеолин-7-гликозида, эпигаллокатехингаллата;

а – масса сырья, г;

W – влажность сырья, %.

Результаты проведенного анализа приведены в таблице 6.

Таблица 6 – Содержание БАВ в корнях астрагала перепончатого, определенных методом ВЭЖХ

–  –  –

В результате проведенного исследования в корнях астрагала перепончатого обнаружены флавоноиды лютеолин-7-гликозид, рутин, (дигидрокверцетин, кемпферол, нарингенин, катехин, эпигаллокатехингаллат, эпикатехин), оксикоричные (о-кумаровая, хлорогеновая, кофейная, цикориевая, неохлорогеновая, феруловая, изоферуловая), галловая, коричная, аскорбиновая кислоты, дубильные вещества (таннин) и кумарины (кумарин, о-метоксикумарин).

Количественно определено содержание лютеолин-7-гликозида – 0,006%, эпигаллокатехингаллата – 0,193%, аскорбиновой кислоты – 0,019%.

3.4.3. Обнаружение олеаноловой кислоты методом ТСХ Качественное определение олеаноловой кислоты проводили в системе 12 на пластинах ПТСХ-ПА-УФ «Sorbfil». 0,05 мл 95% спиртового извлечения корней астрагала перепончатого (1:10) наносили микропипеткой на линию старта пластинки и хроматографировали в соответствующй системе параллельно с достоверным образцом олеаноловой кислоты. Хроматограммы высушивали на воздухе, обрабатывали 20% спиртовым раствором фосфорно-вольфрамовой кислоты, нагревали в сушильном шкафу при температуре 100°С в течение 5 - 10 минут и наблюдали розово-красное пятно на белом фоне пластинки на уровне пятна РСО олеаноловой кислоты Rf ~ 0,70 (рисунок 8).

Рисунок 8 - Схема хроматограммы 95% спиртового извлечения (1:10) корней астрагала перепончатого (1) и 95% спиртового раствора олеаноловой кислоты (2) в системе н-бутанол спирт - раствор аммиака (7:2:5) после обработки хроматограммы 20% спиртовым раствором фосфорно-вольфрамовой кислоты

–  –  –

В результате проведенного исследования определены 17 свободных и 19 связанных аминокислот, среди них 9 незаменимых аминокислот (треонин, метионин, изолейцин, лейцин, лизин, гистидин, аргинин, валин, фенилаланин).

Суммарное содержание свободных аминокислот в сырье составляет 7,09 мг/г. В наибольшем количестве присутствуют аспарагин – 31,60%, аргинин – 27,11%, глютамин – 21,27% и глутаминовая кислота – 10,14% (от общего количества аминокислот). Суммарное содержание связанных аминокислот – 47,93 мг/г, среди которых преобладают пролин – 15,75%, глутаминовая кислота – 13,65 %, аспарагиновая кислота – 12,98%, гистидин – 10,68 % и аргинин – 10,22 % (от общего количества аминокислот).

3.4.5. Изучение жирных кислот корней астрагала перепончатого Для выделения общих липидов из корней астрагала перепончатого применяли модифицированный метод Блайя и Дайэра [199]. Анализ метиловых эфиров проводили методом ГХ-МС (рисунок 9).

Рисунок 9 - Хроматограмма метиловых эфиров жирных кислот корней астрагала перепончатого (1 – пальмитиновая кислота, 2 – олеиновая кислота, 3 – линолевая кислота, 4 – -линоленовая кислота) Таблица 8 – Состав жирных кислот корней астрагала перепончатого

–  –  –

Результаты исследования компонентного состава общих липидов, выделенных из корней астрагала перепончатого, и процентное содержание жирных кислот представлены в таблице 8 и на рисунке 9. Обнаружено 11 соединений – насыщенные и ненасыщенные жирные кислоты, их производные.

Выявлено наибольшее содержание ненасыщенных - линолевой, линоленовой, олеиновой и насыщенных - пальмитиновой кислот.

3.4.6. Изучение углеводного комплекса корней астрагала перепончатого Для выделения углеводного комплекса корней астрагала перепончатого выполняли последовательную экстракцию сырья водой очищенной, смесью 0,5% растворов аммония оксалата и щавелевой кислоты и 10% раствором натрия гидроксида и осаждение спиртом [56, 65]. Количественное содержание отдельных углеводных фракций определяли после высушивания гравиметрическим методом.

Для определения состава фракций проводили их предварительный гидролиз серной кислотой (1 моль/л) [10, 112]. Состав полученных гидролизатов (для свободных углеводов использовали водный раствор с концентрацией 20 мг/мл без кислотного гидролиза) определяли методом ВЭЖХ (глава, п. 2.2, с. 48).



Pages:     | 1 || 3 | 4 |   ...   | 7 |
 

Похожие работы:

«СЕРГЕЕВА ЛЮДМИЛА ВАСИЛЬЕВНА ПРИМЕНЕНИЕ БАКТЕРИАЛЬНЫХ ЗАКВАСОК ДЛЯ ОПТИМИЗАЦИИ ФУНКЦИОНАЛЬНО-ТЕХНОЛОГИЧЕСКИХ СВОЙСТВ МЯСНОГО СЫРЬЯ И УЛУЧШЕНИЯ КАЧЕСТВА ПОЛУЧАЕМОЙ ПРОДУКЦИИ Специальность 03.01.06 – биотехнология ( в том числе бионанотехнологии) Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель Доктор биологических наук, профессор Кадималиев Д.А. САРАНСК 2014 ОГЛАВЛЕНИЕ ВВЕДЕНИЕ.....»

«Шемякина Анна Викторовна БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫЕ ВЕЩЕСТВА ДАЛЬНЕВОСТОЧНЫХ ПРЕДСТАВИТЕЛЕЙ РОДА BETULA L. 03.02.14 – Биологические ресурсы Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: доктор биологических наук, профессор Колесникова Р.Д. Хабаровск – 20 СОДЕРЖАНИЕ ВВЕДЕНИЕ.. ГЛАВА 1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ ПО ТЕМЕ ИССЛЕДОВАНИЙ. 1.1 Общие...»

«СЕТДЕКОВ РИНАТ АБДУЛХАКОВИЧ РАЗРАБОТКА НОВЫХ СРЕДСТВ СПЕЦИФИЧЕСКОЙ ПРОФИЛАКТИКИ И ЛЕЧЕНИЯ ЭШЕРИХИОЗОВ ТЕЛЯТ И ПОРОСЯТ 06.02.02 – ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология Диссертация на соискание ученой степени доктора ветеринарных наук Научный консультант: доктор ветеринарных наук, профессор, заслуженный деятель науки РФ и РТ Юсупов...»

«СЕРГЕЕВА ЛЮДМИЛА ВАСИЛЬЕВНА ПРИМЕНЕНИЕ БАКТЕРИАЛЬНЫХ ЗАКВАСОК ДЛЯ ОПТИМИЗАЦИИ ФУНКЦИОНАЛЬНО-ТЕХНОЛОГИЧЕСКИХ СВОЙСТВ МЯСНОГО СЫРЬЯ И УЛУЧШЕНИЯ КАЧЕСТВА ПОЛУЧАЕМОЙ ПРОДУКЦИИ Специальность 03.01.06 – биотехнология ( в том числе бионанотехнологии) Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель Доктор биологических наук, профессор Кадималиев Д.А. САРАНСК 2014 ОГЛАВЛЕНИЕ ВВЕДЕНИЕ.....»

«Абдуллоев Хушбахт Сатторович ИММУНОБИОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА ВИРУСА ИНФЕКЦИОННОГО БРОНХИТА КУР ГЕНОТИПА QX 06.02.02 «ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология» Диссертация на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук Научный руководитель: доктор биологических наук, профессор Макаров Владимир Владимирович...»

«Брит Владислав Иванович «Эффективность методов вакцинации против ньюкаслской болезни в промышленном птицеводстве» Специальность: 06.02.02 ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени кандидат ветеринарных наук Научный руководитель:...»

«Шинкаренко Андрей Семенович Формирование безопасного и здорового образа жизни школьников на современном этапе развития общества Специальность 13.00.01– общая педагогика, история педагогики и образования Диссертация на соискание ученой степени кандидата педагогических наук Научные...»

«Доронин Максим Игоревич ЭКСПРЕСС-МЕТОДЫ ВЫЯВЛЕНИЯ ВИРУСА ИНФЕКЦИОННОГО НЕКРОЗА ГЕМОПОЭТИЧЕСКОЙ ТКАНИ ЛОСОСЕВЫХ РЫБ 03.02.02 «Вирусология» Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: доктор биологических наук, Мудрак Наталья Станиславовна Владимир 2015 ОГЛАВЛЕНИЕ 1 ВВЕДЕНИЕ 2 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 2.1 Характеристика возбудителя инфекционного...»

«Сафранкова Екатерина Алексеевна КОМПЛЕКСНАЯ ЛИХЕНОИНДИКАЦИЯ ОБЩЕГО СОСТОЯНИЯ АТМОСФЕРЫ УРБОЭКОСИСТЕМ Специальность 03.02.08 – экология (биологические науки) Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: доктор...»

«Хохлова Светлана Викторовна ИНДИВИДУАЛИЗАЦИЯ ЛЕЧЕНИЯ БОЛЬНЫХ РАКОМ ЯИЧНИКОВ 14.01.12-онкология ДИССЕРТАЦИЯ На соискание ученой степени доктора медицинских наук Научный консультант: Доктор медицинских наук, профессор Горбунова В.А Москва 2015 ОГЛАВЛЕНИЕ Введение Глава 1. Обзор литературы 1.1. Общая характеристика рака яичников 1.1.1. Молекулярно-биологические и...»

«НГУЕН ВУ ХОАНГ ФЫОНГ ОЦЕНКА ЭКОЛОГИЧЕСКОЙ СИТУАЦИИ КРУПНЫХ ГОРОДОВ В СОЦИАЛИСТИЧЕСКОЙ РЕСПУБЛИКЕ ВЬЕТНАМ Специальность: 03.02.08экология (биология) Диссертация на соискание учёной степени кандидата биологических наук Научный руководитель: доктор биологических наук, профессор Чернышов В.И. Москва ОГЛАВЛЕНИЕ ГЛАВА 1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА...»

«Ульянова Онега Владимировна МЕТОДОЛОГИЯ ПОВЫШЕНИЯ БЕЗОПАСНОСТИ БАКТЕРИАЛЬНЫХ ВАКЦИН НА МОДЕЛИ ВАКЦИННЫХ ШТАММОВ BRUCELLA ABORTUS 19 BA, FRANCISELLA TULARENSIS 15 НИИЭГ, YERSINIA PESTIS EV НИИЭГ 03.02.03 – микробиология Диссертация на соискание ученой степени доктора биологических наук Научный консультант:...»

«ХАПУГИН Анатолий Александрович РОД ROSA L. В БАССЕЙНЕ РЕКИ МОКША 03.02.01 – ботаника Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель Силаева Татьяна Борисовна д.б.н., профессор САРАНСК ОГЛАВЛЕНИЕ ВВЕДЕНИЕ Глава 1. ИСТОРИЯ ИЗУЧЕНИЯ РОДА ROSA L. В БАССЕЙНЕ МОКШИ. Глава 2. КРАТКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РОДА ROSA L. 2.1. Характеристика рода Rosa L. 2.2. Систематика рода Rosa L. Глава 3....»

«Будилова Елена Вениаминовна Эволюция жизненного цикла человека: анализ глобальных данных и моделирование 03.02.08 – Экология Диссертация на соискание ученой степени доктора биологических наук Научный консультант доктор биологических наук, профессор А.Т. Терехин Москва 2015 Посвящается моим родителям, детям и мужу с любовью. Содержание Введение.. 5 1. Теория эволюции жизненного цикла. 19...»

«Сухарьков Андрей Юрьевич РАЗРАБОТКА МЕТОДОВ ОЦЕНКИ ОРАЛЬНОЙ АНТИРАБИЧЕСКОЙ ВАКЦИНАЦИИ ЖИВОТНЫХ 03.02.02 «Вирусология» Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: кандидат ветеринарных наук, Метлин Артем Евгеньевич Владимир 2014 ОГЛАВЛЕНИЕ 1 ВВЕДЕНИЕ 2 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 2.1 Характеристика возбудителя бешенства 2.2 Эпизоотологические...»

«Радугина Елена Александровна РЕГУЛЯЦИЯ МОРФОГЕНЕЗА РЕГЕНЕРИРУЮЩЕГО ХВОСТА ТРИТОНА В НОРМЕ И В УСЛОВИЯХ ИЗМЕНЕННОЙ ГРАВИТАЦИОННОЙ НАГРУЗКИ 03.03.05 – биология развития, эмбриология Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: Доктор биологических наук Э.Н. Григорян Москва – 2015 Оглавление Введение Обзор литературы 1 Регенерация...»

«Труш Роман Викторович ФАРМАКО-ТОКСИКОЛОГИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ СКАЙ-ФОРСА И ЕГО ЭФФЕКТИВНОСТЬ ПРИ КОЛИБАКТЕРИОЗЕ ЦЫПЛЯТ-БРОЙЛЕРОВ 06.02.03 – ветеринарная фармакология с токсикологией Диссертация на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук Научный руководитель Горшков Григорий Иванович заслуженный деятель науки РФ, доктор биологических наук, профессор Белгород – п. Майский 2015 г. СОДЕРЖАНИЕ...»

«Мансуров Рашид Шамилович Применение препарата Солунат при выращивании бройлеров 06.02.08. – кормопроизводство, кормление сельскохозяйственных животных и технология кормов Диссертация на соискание ученой степени кандидата сельскохозяйственных наук Научный руководитель: доктор биологических наук, профессор, Заслуженный деятель науки Российской...»

«Доронин Максим Игоревич ЭКСПРЕСС-МЕТОДЫ ВЫЯВЛЕНИЯ ВИРУСА ИНФЕКЦИОННОГО НЕКРОЗА ГЕМОПОЭТИЧЕСКОЙ ТКАНИ ЛОСОСЕВЫХ РЫБ 03.02.02 «Вирусология» Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: доктор биологических наук, Мудрак Наталья Станиславовна Владимир 2015 ОГЛАВЛЕНИЕ 1 ВВЕДЕНИЕ 2 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 2.1 Характеристика возбудителя инфекционного...»

«ШИТОВ АЛЕКСАНДР ВИКТОРОВИЧ ВЛИЯНИЕ СЕЙСМИЧНОСТИ И СОПУТСТВУЮЩИХ ГЕОЛОГИЧЕСКИХ ПРОЦЕССОВ НА АБИОТИЧЕСКИЕ И БИОТИЧЕСКИЕ КОМПОНЕНТЫ ЭКОСИСТЕМ (НА ПРИМЕРЕ ЧУЙСКОГО ЗЕМЛЕТРЯСЕНИЯ И ЕГО АФТЕРШОКОВ) 25.00.36 – Геоэкология (науки о Земле) Диссертация на соискание ученой степени доктора геолого-минералогических наук Горно-Алтайск 201...»







 
2016 www.konf.x-pdf.ru - «Бесплатная электронная библиотека - Авторефераты, диссертации, конференции»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.